2016 Leishmaniasis Laboratorio Clínico

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LEISHMANIASIS:
GENERALIDADES Y
DIAGNÓSTICO POR EL
LABORATORIO
DEFINICION

Grupo de enfermedades infecciosas zoonóticas, producidas


por un parásito protozoario intracelular obligado del género
Leishmania que es transmitido al hombre a través de la
picadura de un insecto (vector) perteneciente al género
Lutzomyia en el Nuevo Mundo y Phlebotomus en el viejo
mundo.

http://genome.wustl.edu/image/2/370/370/5/images/misc/sandflycdc.jpg

https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/5/59/Lutzomyia_longipalpis-sandfly.jpg/250px-
Lutzomyia_longipalpis-sandfly.jpg
LEISHMANIA
• Existía cuando el sistema inmune empezó a desarrollarse
con los primeros vertebrados, hace unos 400 millones de
años. Barriga, O. 1999.
• Protozoarios unicelulares. Varias especies.
Parasitan los macrófagos.
• Es una de las formas más evolucionadas entre los
parasitismos. Tiene como ventajas evadir la respuesta
inmune y evitar la acción de defensa por parte del
huésped.
HISTORIA DE LA LEISHMANIASIS

www.andrew.cmu.edu/...
http://www.who.int/emc/diseases /Gallery/ Gallery1/SC212.jpg
/leish/leisdat1.html

http://www.dbbm.fiocruz.br/tropical/leishman/leishext/html/his_rico.htm
LEISHMANIASIS

William Boog LEISHMAN Charles DONOVAN


(1865-1926) (1863-1915)
Distribución mundial

http://www.wehi.edu.au/media/images
PARASITO
Es un parásito intracelular obligatorio de
células del sistema fagocítico
mononuclear y su presencia determina
una supresión reversible y específica de
la inmunidad mediada por células, lo
que facilita la diseminación y
multiplicación incontrolada del parásito.
 
Alrededor de 20 especies del parásito
infectan al humano y causan diferentes
                  
  

espectros y síntomas, desde las úlceras


simples en piel o lugares expuestos a la
picadura del vector hasta los cuadros
graves y mortales en leishmaniasis
visceral pasando por las lesiones
destructivas y mutilantes en mucosas. 
TAXONOMIA
e
Familia : Trypanosomatidae

Género: Leishmania

Leishmania (L) Subgéneros Viannia (V)

Complejos L. braziliensis Complejos


L. chagasi

L. braziliensis
L. donovani L. mexicana L. guyanensis
L. guyanensis
L. mexicana

L. amazonensis L. panamensis
RESERVORIOS
Bradypus griseus (perezoso de tres uñas)
Tamandua tetradactyla (oso hormiguero)
Didelphis marsupialis (chucha o zarigüeya)
Rattus rattus (rata doméstica)
Akodon sp (rata silvestre)
Canis familiaris (Perro).
Equus africanus asinus (Burro).
Felis catus (gato).
VECTORES INCRIMINADOS EN
COLOMBIA
El hombre es infectado a través de la picadura del insecto vector.  Se
caracteriza por su Tamaño pequeño, cuerpo hirsuto, alas erectas, patas
relativamente largas. Tesh et al.1996.Se pueden encontrar en áreas de bosque,
cuevas, piedras, hojarascas, madrigueras de roedores y diferentes animales que
actuan como reservorios.
Lutzomya evansi y Lutzomya longipalpis: L. chagasi
Lutzomya spinicrasa: L. braziliensis
Lutzomya trapidoi : L. panamensis
Lutzomya umbratilis: L. guyanensis
Lutzomya hartmanii: L. colombiensis

No todos los vectores pueden


desarrollar y transmitir todas
especies de leishmanaisis.
Ciclo de vida
PROMASTIGOTE
• Forma fusiforme.
• Núcleo: redondo
localizado en la parte
central.
• Flagelo: emerge por la
porción anterior.
Motilidad.
• Kinetoplasto: estructura
en forma de barra, rica en
ADN y se localiza a nivel
terminal o subterminal.
Bodgan, C,. 1990
FISIÓN BINARIA

http://www.hhmi.ucla.edu/C168/week5/lecture2.html
www.brainmedia.de/html/ 3/3a/3a1/h_3a1a_t.html
AMASTIGOTE
Forma: redondeado u ovalado.
Tamaño: 1,5 - 5 µm de diámetro
Ubicación: Intracelular.
Núcleo: esférico y compacto, localizado
en la parte central o polar.
Kinetoplasto: forma bacilar.
Sin flagelo visible al microscopio de luz.
www.vet.upenn.edu/.../ 48/foxhounds.html
http://www.socalemi.org/atlas_parasitos.htm
FACTORES DE RIESGO

• AMBIENTALES

• EVENTOS
ECONOMICOS

• EVENTOS SOCIALES
LA LEISHMANIASIS:
UN PROBLEMA DE SALUD
PÚBLICA MUNDIAL
•88 países afectados
•Morbilidad
•Mortalidad
•Coinfección VIH - Leishmania
•Varias especies de parásitos
•Varias especies de vectores
Características de la infección
por Leishmania en Colombia

• Infección persistente
• Infección recurrente
• Reinfecciones
• Enfermedad crónica
• Diseminación metastásica
CICLOS DE TRANSMISION EN
COLOMBIA

• Selvático
• Rural
• Urbano
• Intradomiciliario
RELACION CUADRO CLINICO Y ESPECIES
Cuadro Clínico Especie (s) de Leishmania
Leishmaniasis L.(L) mexicana
Cutánea L. (L) amazonensis

Leishmaniasis L.(V) braziliensis


Cutánea L.(V) guyanensis
L.(V) panamensis
y Leishmaniasis L.(V) colombiensis
Mucosa

Leishmaniasis
Visceral L.(L.) chagasi
FORMAS CLINICAS
Cutánea
 Distribuída en gran parte del
territorio colombiano, por
debajo de los 1.750
m.s.n.m.
 Ecología: Bosque húmedo o
muy húmedo tropical.
 P. Incubación: desde una
semana a muchos meses (2
semanas a 6 meses)
 Pápulas se ulceran
gradualmente.
 Úlcera redondeada , fondo
limpio, de aspecto granular,
bordes hiperémicos y
engrosados.
• Es la forma
Difusa
tegumentaria más
rara y se encuentra
asociada casi
exclusivamente con L.
amazonensis.

• Placas infiltrativas que


no se ulceran, abarcan
casi todo el cuerpo.

• No responde al
tratamiento
convencional.
Mucosa Mucocutánea

B
LEISHMANIOSIS MUCOSA Y
MUCOCUTANEA

 Por extensión directa desde la


piel a la mucosa vecina.

 Compromiso de las mucosas del


tracto respiratorio superior:
septum nasal, faringe, laringe,
paladar, labio.

 Aparecen meses o años después


de una cicatrización de lesión
cutánea.
LEISHMANIASIS
VISCERAL

 Bosque seco tropical, piso


cálido, vegetación escasa, baja
precipitación fluvial: valle alto
del Río Magdalena.
 Zoonosis: ciclo reservorio –
insecto, vector – reservorio.
 Afecta principalmente a la
población infantil menor de 5
años, aunque también se
presenta en adultos y se han
descrito casos en pacientes VIH
positivos.
Parásito en el interior El parásito prolifera y
macrófagos de bazo, se extiende la infección
hígado y médula ósea parasitaria
Destrucción e
hipertrofia

BAZO: aumento MÉDULA ÓSEA:


HÍGADO: aumenta el
tamaño, cápsula se sustitución tejido
volumen, proliferación
engruesa, restricción hematopoyético por
de células Kupffer.
de circulación capilar macrófagos infectados
o no.
CUADRO CLINICO
• FIEBRE DE EVOLUCION VARIABLE.
• ANEMIA
• AUMENTO PERIMETRO ABDOMINAL
• HEPATO-ESPLENOMEGALIA.
• IRRITABILIDAD
• MICROPOLIADENOPATIAS
• ENFERMEDADES INTERCURRENTES:
EDA, IRA, TBC
• ASTENIA Y ANOREXIA
Presentacion clinica de la enfermedad

MANIFESTACION CLINICA LEISHMANIASIS

2%
1%
cutánea
mucosa
visceral

97%
DIAGNOSTICO
DIFERENCIAL
L. CUTANEA
•Lesiones ulcerosas: ulceras traumáticas, vasculares, piógenas,
esporotricosis, paracoccidiomicosis,TB cutánea, ulceras por
micobacterias atípicas, pioderma gangrenoso, tumores malignos
y ulcerados.

•Lesiones nodulares: granulomas por picadura de insectos,


hansen, sarcoidosis, psoriasis.

•Lesiones Verrugosas: cromomicosis, TB verrugosa,


histoplasmosis, ca espinoscelulares.
L. MUCOSA
• Perforación banal del tabique
• Ulcera traumática
• Lesiones secundarias a uso de
vaso constrictores
• Aspiración crónica de cocaína
• Lepra lepromatosa
• Paracoccidiomicosis
• Rinoescleroderma
• Histoplasmosis
• Rinosporidiosis
• Esporotricosis
• Brucelosis,
L. VISCERAL
• Salmonelosis,
• Septicemia,
•Síndrome Febril
Prolongado Con • Endocarditis Bacteriana,
Esplenomegalia, • Histoplasmosis
•Malaria, Sistémicas,
•TB Con Compromiso De • Linfomas,
Bazo, • Otras Neoplasias,
•Sífilis Visceral, • Anemias Hemolíticas,
• Enf. De Chagas, • Sarcoidosis.
CLASIFICACIÓN DE CASO
LEISHMANIASIS
TIPO TIPO DE CASO DEFINICIÓN
Caso probable Paciente con lesiones cutáneas procedente de áreas endémicas que cumpla con tres o
más de los siguientes criterios: sin historia de trauma, evolución mayor de dos
semanas, úlcera redonda u ovalada con bordes levantados, lesiones nodulares,
Cutánea lesiones satélites, adenopatía localizada.
Caso confirmado Caso probable en el que se demuestra por métodos parasitológicos, histopatológicos o
genéticos parásitos del género Leishmania.
Caso probable Paciente procedente de área endémica con lesiones en mucosa de nariz u orofaringe
que presente cicatrices o lesiones cutáneas compatibles con leishmaniasis, signos de
acuerdo con los de la descripción clínica y reacción de Montenegro positiva.
Mucosa
Caso confirmado Todo caso probable con prueba de farmacovig positiva, histología con resultado positivo
o compatible con leishmaniasis y/o prueba de inmunofluorescencia con títulos mayores
o iguales a 1:16.
Caso probable Niño que procede de área endémica de 15 años o menos con cuadro
hepatoesplenomegalia, anemia y pérdida de peso con síntomas como fiebre, malestar
general, palidez y hemorragias o adulto infectado con VIH que procede de área
endémica con cuadro compatible con la descripción clínica.
Visceral
Caso confirmado Caso probable confirmado parasitológicamente a partir de aspirado de médula ósea o
bazo y/o prueba de inmunofluorescencia mayor o igual a 1:32.
SEGUIMIENTO
•LC: Evaluación clínica al terminar el tto, 45
días y 6 meses
•LM: Evaluación clínica al terminar el tto, 45
días, 6 meses y luego cada 6 meses
durante 2 años.
•LV: Evaluación clínica al terminar el tto, 45
días, 6 meses y luego cada 6 meses
durante 2 años.
DIAGNOSTICO
REGLA DE ORO

DEMOSTRACIÓN DEL
PARÁSITO
O
DE SUS ANTÍGENOS
TÉCNICAS DE
DETECCIÓN
NO-MOLECULARES

Parasitológicas: Frotis directo, cultivo,


Inoculación animales de Laboratorio y biopsia
de piel.

Inmunológicas: Serología.
Frotis Directo

Prueba Montenegro

Biopsia

IFI

Cultivos

Inoculación
REACCION DE
MONTENEGRO
• NO es un método de
diagnóstico.
• Es una PRUEBA
COMPLEMENTARIA.
• Es una HERRAMIENTA ÚTIL
• No puede distinguir
infecciones previas de
infecciones actuales
www.lung.ca/.../ 100_tuberculin_needle.jpg
Inyección intradérmica de antígeno
preparado de cultivo de promastigotes
 Reacción de Montenegro: Mayor o Igual a 5 mM POSITIVA
 Evidencia los casos con enfermedad activa mayor de cuatro semanas de
evolución.
 Altamente específica
MONTENEGRO EN L.
VISCERAL

Se encuentra SIEMPRE (-) durante la fase


activa de la enfermedad y generalmente se
positiviza entre 3-6 meses después de
terminado el tto.
Util para el seguimiento del paciente.
Se recomienda aplicarla tanto antes de
iniciar el tratamiento como en el
seguimiento posterior.
PRUEBA DE MONTENEGRO

VENTAJAS DESVENTAJAS
Baja complejidad Solo indica exposición
Bajo costo
Prueba auxiliar
EXAMEN DIRECTO

Rápido
Fácil de
realizar
Económico
Sensible
CARACTERISTICAS DEL EXTENDIDO

PARA UN OPTIMO EXAMEN DIRECTO

(nombre del Tres Làminas


paciente)
(identificación de la Tres Aposiciones
lesión)
(fecha)

COLORANTE

TIEMPO DE COLORACIÓN
EXAMEN DIRECTO

Seleccionar la lesión más reciente.

Tomar muestra del borde activo y del centro.

SE DEBE OBSERVAR TODO


EL EXTENDIDO EN
DETALLE !!!
La sensibilidad varía de acuerdo con el
tiempo de evolución de la lesión.
85-95%.

Depende de la técnica de la toma,


de la coloración y de la
capacitación del personal que
realiza la lectura.
POSITIVO: Se observan formas
amastigotas de Leishmania s.p. en
la muestra examinada

NEGATIVO: No se observan formas


amastigotas de Leishmania s.p en
la muestra examinada
Un directo Positivo
Confirma el Diagnostico,
pero uno Negativo NO
DESCARTA UNA
LEISMANIASIS
FROTIS DIRECTO

Ventajas Desventajas
Baja Sensibilidad
complejidad variable
Rapidez Especificidad en
funcion de
Bajo costo
experiencia
ASPIRADO
BIOPSIA CON AGUJA FINA
(BACAF)

• Seleccionar la lesión más reciente


 Realizar un aspirado del borde
de la lesión.
 Requiere de experticia por
parte del profesional de la
salud.
BIOPSIA
• Se realiza con relativa facilidad.
• Se puede remitir desde cualquier lugar
• VENTAJAS:
 Establece un diagnóstico concluyente.
 Sugiere el Dx aún si los microorganismos no
son demostrables. Casos sospechosos donde
no se encuentran amastigotes.
CULTIVOS

Ventajas Desventajas
Alta Alta complejidad
especificidad Alto costo
Permite Riesgo de
caracterizar contaminacion
los parásitos
Dx. DE LEISHMANIASIS
VISCERAL

Aspirado Medular

Aspirado Esplénico
ASPIRADO MEDULAR
ASPIRADO MEDULAR
ASPIRADO MEDULAR
ASPIRADO MEDULAR
CARACTERISTICAS DE UN OPTIMO
EXTENDIDO
A PARTIR DE ASPIRADO ESPLENICO
O ASPIRADO DE MEDULA OSEA

(fecha)
de la lesión)
(identificación
paciente)
(nombre del
PUNCION ESPLENICA
PUNCION ESPLENICA
CUARTO PASO
PRUEBAS SEROLOGICAS

Inmunofluorescencia Indirecta (IFI)


ELISA

Poseen una alta sensibilidad y


especificidad para el Diagnóstico.
El antígeno se prepara con cepas de
referencia, colombianas, aisladas,
mantenidas e identificadas en el INS
INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA IFI

http://www.calvomackenna.cl/webhlcm/IMAGENES/NEW-2.jpg

LM: Títulos iguales http://www.mc.uky.edu/mcpr/news/1998/Sep/merit.htm

o mayores 1/16

LV: Títulos iguales


o mayores a 1/32
SEROLOGIAS

VENTAJAS DESVENTAJAS
Permite Sensibilidad
procesar alto variable
numero de Especificidad en
muestras funcion de
 Bajo costo experiencia
Gracias
FUENTE Y
AGRADECIMIENTOS
- INS

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