B2-Physiologie Bacterienne Diapos

Cours PCEM2
Physiologie bactrienne
Anne-Laure Michon- Laboratoire Bactriologie

Hpital Arnaud de Villeneuve - Montpellier
Objectifs
les principaux lments de la physiologie bactrienne :
les conditions de la croissance bactrienne
la croissance bactrienne proprement dite
nutritionnelles
environnementales
division bactrienne
dynamique de la croissance
leurs implications :
dans la conduite dun examen cytobactriologique
dans le diagnostic dune infection bactrienne
Dfinition
Physiologie
Science des fonctions et des constantes du
fonctionnement normal des organismes vivants,
unicellulaires comme pluricellulaires
(Larousse Mdical)
Science qui traite des fonctions organiques par

lesquelles la vie se manifeste
(Petit Larousse)
Plan
Les principaux lments de
la physiologie bactrienne
Implication lors de lexamen

cytobactriologique
- Besoins nutritifs
- Choix des milieux de culture
- Conditions environnementales
- Choix de T, atmosphre
dincubation
- Division bactrienne
- Dlais de croissance et de
rendu des rsultats
- Dynamique de la croissance
- Dnombrement, identification
antibiogramme
Besoins nutritifs (1)

Bactries : organismes vivants devant trouver dans
lenvironnement les substances ncessaires
leur nergie et leurs synthses cellulaires
1. Source dnergie :
lumineuse : bactrie phototrophe
composs minraux ou organiques : bactrie chimiotrophe
- lment minral : bactrie chimiolithotrophe
- lment organique : bactrie chimioorganotrophe
2. Sources de carbone :
bactrie autotrophe : CO2 exclusivement
bactrie htrotrophe : CO2 ou substances hydrocarbones
(alcool, acide actique, acide lactique, sucres divers,)
Besoins nutritifs (2)

3. Sources dazote et besoins en soufre
4. Besoins inorganiques : phosphore
5. Autres lments :
Sodium, Potassium, Magnsium, Chlore
Oligo-lments : Manganse, Nickel, Zinc, Slnium,
Facteurs de croissance :
- Acides amins : Acide folique, Acide nicotinique,
- Divers : drivs de lhme
Vitamines : B6 (pyridoxine), K et drives, ...
Milieux de culture (1)

Quels sont les composs qui doivent tre inclus dans un milieu
de culture pour permettre la croissance bactrienne ?
Substrats nutritifs :Acides amins, peptides, bases nucliques,
Systme tampon
sucres, etc
Sels minraux
Vitamines
autres facteurs de croissance pour certaines bactries :
Sang, protines, hmoglobine, vitamines supplmentaires

- Composition
synthtiques
semi-synthtiques
Composition dfinie
Ajout dun extrait dorganismes (levures : facteurs
complexes
Ralisation empirique (extraits de viande, de levure,
de croissance)
extraits enzymatiques, protines = peptones)
- Rle
disolement
denrichissement
enrichis
slectifs
( voir en T.P.)
Croissance de plusieurs espces

Croissance d1 espce en faible quantit favorise
Croissance des bactries exigeantes
Croissance dun type bactrien favorise
+ inhibition de celle des autres

- Liquides
bouillons de culture
En tubes
Croissance bactrienne
= trouble du bouillon
En flacons
Ex : bouillons
dhmoculture
Incubation jusqu 15 jours 37 C le plus souvent

- Solides
milieux gloss en botes de ptri
Incubation 24 72 h 37 C le plus souvent

Mise en vidence de colonies bactriennes
(1 bactrie 1 colonie)
Combinaison de plusieurs types de milieux de 2 (ECBU)

9 (Copro)
Plan

cytobactriologique
- Besoins nutritifs
dincubation
rendu des rsultats
antibiogramme
Conditions environnementales
Le pH : bactries
neutrophiles (6- 8)
alcalinophiles (> 8)
acidophiles (< 6)
Escherichia coli
Pseudomonas
Lactobacillus
La pression osmotique : bonne tolrance gnrale

halophiles : ncssitent du NaCl
halotolrants
La pression mcanique / hydrostatique : bonne tolrance
espces barophiles (fonds marins)
La temprature :
bactries msophiles : 10-45C optimum 30-37C,

psychrophiles : -15C 20C (5-10C)
thermophiles (45-70C)
hyperthermophiles (>80C)
Conditions environnementales (2)

Loxygne molculaire = mode respiratoire des bactries
Bactries
2 - micro-arophiles
(Campylobacter)
3 - aro-anarobies facultatives
(Escherichia coli)
4 - anarobies strictes
(Clostridium)
1 - arobies strictes
(Pseudomonas)
Atmosphre normale
Atmosphres particulires
Etuve CO2 (5%)
Sachet
Anarobiose
ou
Microarophilie
Jarres
Plan

cytobactriologique
- Besoins nutritifs
dincubation
rendu des rsultats
antibiogramme
Division bactrienne
=
Accroissement ordonn et coordonn de tous les composants de
la bactrie
du nombre des bactries

appauvrissement du milieu de culture en nutriments
enrichissement du milieu en sous-produits du mtabolisme
Division bactrienne (2)

Bactrie = organisme asexu
Reproduction par division cellulaire :
- Allongement de la bactrie,
- Duplication des constituants

- Sparation
1 cellule mre
2 cellules filles identiques
= reproduction binaire
= scissiparit
Etc, 1 colonie
Dlais de croissance
Temps de division et dlais de croissance dpendent :
- de la bactrie
- des conditions du milieu extrieur (favorables/dfavorables)
Temps de gnration de quelques espces bactriennes
Bactrie
Escherichia coli
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa
Mycobacterium tuberculosis
In vitro (min)
20-40
In vivo (h)
5
40
3-5
40
120-240
24-48
Conditionne le dlai de lanalyse et donc du rendu des rsultats
Plan

cytobactriologique
- Besoins nutritifs
dincubation
rendu des rsultats
antibiogramme
Dynamique de la croissance
Courbe de croissance = tude en milieu liquide : 6 phases
Log du
nombre
bactries
Temps
dincubation
1. Latence
3. Exponentielle
5. Stationnaire
2. Acclration 4. Ralentissement
6. Dclin
Dynamique de la croissance (2)

Courbe de croissance = tude en milieu liquide : 6 phases
(milieu adapt non renouvel)
- Phase de latence : Croissance 0

Accoutumance des bactries lenvironnement
- Phase dacclration : vitesse de croissance
- Croissance exponentielle :Taux de croissance maximal

- Phase de ralentissement : vitesse de croissance, puisement du
milieu, accumulation des dchets
- Phase stationnaire : arrt de la reproduction (facteur limitant)
taux de croissance nul (division = autolyse)
- Phase de dclin : ressources puises, le nombre de bactries
Applications
1/ Application au dnombrement des bactries par unit de
volume dchantillon analys
Dnombrement aprs culture (bactries viables) :

ensemencement dun volume dfini dchantillon sur milieu de culture
glos UFC/ml (Units Formant Colonie/ml)
Ex : 100 ml de LBA 70 colonies bactriennes

700 UFC/ml (seuil significatif : 104 UFC/ml)
autres : lames immerges (Uricult) pour lECBU
bactriurie
Applications (2)
Ex: ECBU Bactriurie
- Ensemencement volume dfini durine + dnombrement des colonies
bactriennes
- Lame immerge :
Milieu bacilles Gram ngatif
Bactries ou UFC/ml
103
104
Milieu tous germes
- Seuils significatifs (UFC) / ml
Cystite aigu : 103 Escherichia coli, 105 autres bactries

Pylonphrites et prostatites 104
ITU nosocomiales 103
105
106
107
Applications (3)
2/ Application lidentification bactrienne
Etude de la croissance en prsence de divers substrats =
tude du mtabolisme bactrien
Escherichia
coli
Exemple
Etude du
mtabolisme
glucidique
avec galerie
miniaturise
Klebsiella
pneumoniae
Inositol
Saccharose Arabinose
Applications (4)
3/ Application la ralisation de lantibiogramme
Etude de la croissance en prsence de divers
antibiotiques
Disque
dantibiotique
Croissance
(souche rsistante)
Inhibition de la
croissance
(souche sensible)
Applications (5)
4/Conduite dun examen cytobactriologique (Ex : ECBU)
J0 Examen direct (GB, GR, bactries, ) et mise en culture

J1 1 type de colonies Plusieurs types de Plusieurs types de
isoles
colonies isoles colonies non isoles
Numration
Identification(s)
Antibiogramme(s) ventuel(s)
J2
J3
Rsultat
Risolement
Identification et
antibiogramme ventuel
Rsultat
Conclusion
- Intrt de ltude de la croissance bactrienne : multiple
Lors dune maladie infectieuse :
- isolement, dnombrement et identification de la ou des bactries
en cause
- dtermination de la sensibilit aux antibiotiques
Ralisation de contrle de strilit ou de densit microbienne dans

certains locaux (air des blocs opratoires, surfaces, )
Contrle de la qualit microbiologique
Aliments, eaux, mdicaments, produits cosmtiques,
Importance de connatre la physiologie bactrienne
+++
Importance des conditions de ralisation de la culture bactrienne

(besoins nutritifs et conditions environnementales respects)
Pour en savoir plus ...

2 sites Internet
http://www.phem.fr/bio
puis Les bactries
Campus de microbiologie mdicale :
http://www.microbes-edu.org
avec
http://www.microbes-edu.org/etudiant/etudiants.html

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Science qui traite des fonctions organiques par

Implication lors de lexamen

- Choix des milieux de culture

Besoins nutritifs (1)

Besoins nutritifs (2)

Vitamines : B6 (pyridoxine), K et drives, ...

Milieux de culture (1)

Milieux de culture (2)

Ralisation empirique (extraits de viande, de levure,

extraits enzymatiques, protines = peptones)

Croissance de plusieurs espces

Milieux de culture (3)

Incubation jusqu 15 jours 37 C le plus souvent

Milieux de culture (4)

milieux gloss en botes de ptri

Incubation 24 72 h 37 C le plus souvent

Combinaison de plusieurs types de milieux de 2 (ECBU)

Implication lors de lexamen

- Choix des milieux de culture

La pression osmotique : bonne tolrance gnrale

bactries msophiles : 10-45C optimum 30-37C,

Conditions environnementales (2)

Etuve CO2 (5%)

Implication lors de lexamen

- Choix des milieux de culture

du nombre des bactries

Division bactrienne (2)

- Duplication des constituants

Conditionne le dlai de lanalyse et donc du rendu des rsultats

Implication lors de lexamen

- Choix des milieux de culture

Dynamique de la croissance (2)

- Phase de latence : Croissance 0

- Croissance exponentielle :Taux de croissance maximal

Dnombrement aprs culture (bactries viables) :

Ex : 100 ml de LBA 70 colonies bactriennes

Milieu tous germes

- Seuils significatifs (UFC) / ml

Cystite aigu : 103 Escherichia coli, 105 autres bactries

J0 Examen direct (GB, GR, bactries, ) et mise en culture

Ralisation de contrle de strilit ou de densit microbienne dans

Importance de connatre la physiologie bactrienne

Importance des conditions de ralisation de la culture bactrienne

Pour en savoir plus ...

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