Ministère de l’Enseignemen Supérieur

et de la Recherche Scientifique
Université d’Oran1 Ahmed Benbella
Faculté des Sciences Exactes et Appliquées
Département de Chimie
Ecole Doctorale
Spécialité : Chimie moléculaire et biomoléculaire
Mèmoire de Magister
Présenté par :
Talbi mohammed

Dosage des polyphénols de la plante d’Artemisia

Campestris.L par chromatographie HPLC.Mise en

évidence de l’activité biologique .

Soutenu le :28/06/2015 devant la commission d’examen :

Mme S. Saidi Pr. Université d’Oran 1 Présidente

Mr O. Kharoubi Pr. Université d’Oran 1 Examinateur

Mme S.Bellahouel Pr. Université d’Oran 1 Examinateur

Mme N. Kambouche M.C.A. Université d’Oran 1 Rapporteur

Année Universitaire: 2014-2015

 Remerciements

Avant toute chose, je remercie Dieu, le tout puissant, pour m’avoir donnée la
force et la patience.

Mon travail de magister a été réalisé au laboratoire de Synthèse Organique et

Appliquée

J’exprime ma profonde gratitude à Mme Saidi Salima Professeur de chimie

à l'Université d’Oran 1 d’avoir accepté de présider le jury.

Je tiens aussi à remercier Mme N. Kambouche, Maitre de Conférences A. Université

d’Oran 1. Qui n’a jamais hésité à venir me voir pour faire le point sur l’avancement de mes
travaux, En plus de ses qualités scientifiques, j’ai découvert une personne profondément
humaine qui se bat pour ses idées sans jamais renoncer.

Je tiens à adresser mes vifs remerciements et l’expression de mon profond respect à

Mr Kharoubi Omar, Professeur à l’Université d’Oran 1, pour avoir accepté d’examiner de
ce travail.

Mes vifs et sincères remerciements vont également à Mme Bellahouel Salima,

Professeur à Université d’Oran 1, pour l’honneur qu’il nous a fait d’accepter de faire
partie du jury.

Mes plus vifs remerciements s’adressent à :

-Mes collègues au laboratoire , également Ramli Bakhta , Aidouni Wassila, l’ingénieur

de laboratoire de chimie organique à l’université d’Oran 1. Hidour Hanaa et Saadallah
Ghania , deux techniciennes de laboratoire de chimie organique à l’université d’Oran 1.

-Mes vifs et sincères remerciements vont également à Mme Benhabib.H, de laboratoire de

la sureté d’Oran, pour la réalisation des différentes techniques d’HPLC.
 SOMMAIRE

Liste des tableaux

Liste des figures

Introduction générale

Chapitre I : les composés polyphénols

I.Introduction ………………………………………………………………………………...1

II.biosynthèse des composés phénoliques …………………………………………………..1

II.1.La voie de shikimate …………………………………………………………………….1

II.2.La voie de biosynthèse des flavonoïdes ………………………………………………...3

III.Nomenclature des polyphénols :………………………………………………………….5

IV.Principales classes des composés phénoliques …………………………………………..5
IV.1.Les phénols simples …………………………………………………………………….5
-Drogue à phéno simple ……………………………………………………………………...6
IV.2..Les acides phénoliques simples ……………………………………………………….6

IV.2.1.Acides hydroxybenzoïques ….………………………………………………………..6

IV.2.2.Acides hydroxycinnamiques………………………………………………………….7

-Drogue à acide phénol……………………………………………………………………….9

IV.3.Coumarines ……………………………………………………………………………10

IV.4.Les Tanins……………………………………………………………………………...10

IV.4.1.Définition……………………………………………………………………………..10
IV.4.2.Classification ………………………………………………………………………...10
IV.4.2.1.Les tanins hydrolysables ………………………………………………………….10

IV.4.2.2.Les tanins condensés ……………………………………………………………....11

IV.4.3.Sources végétales des tanins ………………………………………………………...12
-Principales drogues à tanins ……………………………………………………………....12

IV.4.Activité biologique et intérêt pharmacologique ……………………………………..13

IV.5.Les flavonoïdes ………………………………………………………………………...13

IV.5.1.Généralités …………………………………………………………………………...13

IV.5.2.Structure ……………………………………………………………………………..14

IV.5.3.Classification ………………………………………………………………………...15

IV.5.4.Localisation…………………………………………………………………………..17

IV.5.5. Distribution …………………………………………………………………………17

IV.5.6.Propriétés des flavonoides …………………………………………………………..19

IV.5.6.1.Propriétés biologique ……………………………………………………………...19

a.Propriétés antiradicalaires ……………………………………………………………….19
b.Propriétés antibactérienne ……………………………………………………………..20
c.Activité anti-tumorale …………………………………………………………………….20

d.Propriétés pro-oxydantes …………………………………………………………...........21

e.Effets cardiovasculaires …………………………………………………………………..21

IV.5.6.2.Propriétés Physico-Chimiques des flavonoïdes :………………………………...21

IV.5.6.2.1.Solubilité et l’extraction ………………………………………………………...21

IV.5.6.2.2.Dosage ……………………………………………………………………………22

IV.5.7.Consommation des flavonoïdes …………………………………………………….22

IV.5.8.Distribution des flavonoïdes dans les plantes ……………………………………...22

IV.5.9.Roles des flavonoïdes chez les plantes ……………………………………………...23

V. Propriétés physico-chimique,extarction,caratérisation des polyphénols …………….24

VI. Conclusion …………………………………………………………………………........24

Référence bibliographique

Chapitre II : étude phytochimique et dosage des polyphénols de la

plante d’A.Campestris

I.Introduction………………………………………………………………………………..25
II.Présentation de la plante ………………………………………………………………...25
II.1.Présentation de la famille : ASTERACEAE ……………..……………………………25

II.1.1.Présentation du genre : Artemisia……………………………………………………25

II.1.2.Présentation de l’espèce :Campestris………………………………………………...26

II.2.Description botanique…………………………………………………………………..26

II.3.Classification Systématique ………………………………………………………........26

II.4.Répartition géographique et domaine d’utilisation ………………………………….27

II.5.La toxicité de la plante …………………………………………………………………27

II.6.Utilisation de la plante en médecine traditionnelle…………………………………...28

II.7.Quelque travaux antérieur sur le genre Artemisia ……………………………….......28

III.Mise en évidence des phytochImiques………………………………………………….29

III.1.Mise en évidence des anthocyanes……………………………………………………29

III.2.Mise en évidence des flavonoïdes …………………………………………………….29

III.3.Mise en évidence des tanins…………………………………………………………...29

III.4.Mise en évidence des coumarines……………………………………………………..30

III.5.Mise en évidence des saponosides…………………………………………………….30

III.6.Mise en évidence des dérivés anthracéniques………………………………………..30

III.7.Mise en évidence des alcaloïdes……………………………………………………….30

IV.Préparation des extraits ……………………………………………………………….31

IV.1.Préparation du matériel végétal ……………………………………………………...31

IV.2.Extraction des polyphénols de la plante A. campestris:……………………………...31

V.Dosage ds composés phénolique totaux et Les flavonoides……………………….........33

V.1.Dosage par Spectrophotométre (UV)………………………………………………….33

V.1.a.Dosage des composés phénoliques par la méthode de Folin-ciocalteu ……………33

V.1.b.Dosage des flavonoïdes par la méthode de AlCl3 …………………………………...33
V.2.Dosage des polyphénols par HPLC ………………………………………………....33

V.2.1.1.Dosage par HPLC Agilent technologies - 1260 infinIty ………………………….33

V.2.1.2.Principe …………………………………………………………………………….34
V.2.2.Dosage par HPLC Agilent-1100 ……………………………………………………..34
V.2.3.Expression des résultats ……………………………………………………………...34

VI.Resultat …………………………………………………………………………………..34

VI.1.Etude phytochimique …………………………………………………………………35

VI.1.1.La caractérisation phytochimique .……………………………………………….35

VI.2.Dosage des composés phénoliques totaux et des flavonoides ……………………….36

VI.2.a.Dosage des composés polyphénoliques totaux par la méthode

De Follin-ciocalteu……………………………………………………………………….36

VI.2.b.Dosage des flavonoïdes par la méthode de AlCl3 ………………………………….37

VI.2.c.Discution ……………………………………………………………………………..37

VI.3.Dosage des polyphénols par HPLC …………………………………………………..38

VI.3.1.Dosage qualitatif des extraits ……………………………………………………….38
VI.3.2.Dosage quantitatif de l’extrait méthanolique ……………………………………..42
VII.Conclusion ………………………………………………………………………………45

Références bibliographiques
Chapitre III : activité antioxydante et antiradicalaire de la plante

d’A.Campestris

I.Stress antioxydant ………………………………………………………………………...46

1. Introduction ………………………………………………………………………………46

I. 2. Rappel sur le stress oxydant…………………………………………………………..47

I.3. Estimation du pouvoir antiradicalaire par la méthode du DPPH…………………...48

I.3.1.Principe ………………………………………………………………………………...48

I.3.2. Mode opératoire ……………………………………………………………………...50

I.3.2.1. Préparation de la solution de DPPH• ...............................................................50

I.3.2.2. Préparation de la gamme des témoins …………………………………………….50

I.3.2.3. Préparation des extraits végétaux …………………………………………………50

.I.3.2.4. Préparation des essais ……………………………………………………………..50

I.3.2.4.Expression des résultats …………………………………………………………….50

II. Activité antimicrobienne ………………………………………………………………..51

II.1. Effet antimicrobien ……………………………………………………………………51

II.2. Mécanisme d’effet antimicrobien des polyphénols ………………………………….51

II.3. Méthode et matériel …………………………………………………………………...52

II.3.1 Matériel végétal ………………………………………………………………………52

II.3-2 matériel de laboratoire ………………………………………………………………52

II.3-2-1 . les souches bactériennes utilisées ………………………………………………..52

II.3.2.1.1. Staphylococcus aureus …………………………………………………………..52

II.3.2.1.2. Pseudomonas aeruginosa ………………………………………………………..52

II.3.2.1.3. Escherichia coli …………………………………………………………………..53

II.3-2-2. Les souches fongique utilisées ……………………………………………………53

- Candida albicans ……………………………………………………………………53

II.3-2-3.Origine des souches microbiennes testées ………………………………………..53

II.3.2.3.1. Souches bactériennes ……………………………………………………………53

II.3.2.3.2. Souche fongique …………………………………………………………………53

II.4. Test de l’activité antimicrobienne ……………………………………………………59

II.4.1. Milieu de culture……………………………………………………………………..59

II.4.2. Conservation des cultures microbiennes ………………………………………….59

II.4.3 .Milieux pour les cultures bactériennes …………………………………………….59

II.4.4. Préparation des dilutions …………………………………………………………...59

II.4.5. Préparation des précultures microbiennes ………………………………………..60

II.4.6. Teste de l’activité antimicrobienne ………………………………………………...60

II.4.6.1 Recherche de l’activité antibactérienne ………………………………………….60

II.4.6.1.a. Préparation de la suspension bactérienne ……………………………………..60

II.4.6.1.b. Ensemencement du milieu de culture en boîtes de Pétri et dépôt

des disques ……………………………………………………………………………60

III.Résultat et discussion …………………………………………………………………...61

III.1.activité antioxydante ………………………………………………………………….61

III.2.activité antimicrobienne ………………………………………………………………64

IV. Conclusion ………………………………………………………………………………70

 LISTE DES TABLEAUX

Tableau 1 : les phénols simple ……………………………………………………………5

Tableau 2 : les hétérosides phénoliques……………………………………………………6

Tableau 3 : Principaux acides hydroxybenzoïques………………………………………..7

Tableau 4 : Principaux acides hydroxycinnamiques ……………………………………..8

Tableau 5 : les acides rosmarinique et lithospermique……………………………………8

Tableau 6 : quelques acides de drogue Romarin………………………………………….9

Tableau 7 : Principaux types de coumarines……………………………………………..10

Tableau 8: Principales classes des flavonoïdes…………………………………………...15

Tableau 9 : Distribution alimentaire des principales classes de flavonoïdes ………….18

Tabeau10: Teneur en polyphénols, de la partie aérienne d’Artemisia campestris……..28

Tableau 11: Principaux flavonoïdes rencontrés chez l’Artemisia campestris…………..28

Tableau 12 : les rendements des extraits obtenus ………………………...……………..34

Tableau 13 : Le screening phytochimique de la plante A.campestris… … … … . . . . . . . . 3 5

Tableau 14 : Réactiona a la cyanidine sur la plante d’Artemisia campestris ………….36

Tableau 15 :Temps de rétention des flavonoïdes standards…………………………….44

Tableau 16 : Temps de rétention des flavonoïdes présents dans les extrait

d’A.Campestris……………………………………………………………..44

Tableau17 :Teneur en flavonoïdes de l’ extrait methanolique d’A .Campestris………..44

Tableau 18 : Teneur en polyphénols des extraits d’A .Campestris avec un autre

appareillage HPLC agilent Téchnologie-1260 infinity……………..45

Tableau 19 :Principales caractéristiques des souches bactérienne testées ………….54

Tableau 20 :Principales caractéristiques de la souche fongique testée……………...54

Tableau 21: Les différentes concentrations utilisées dans l’activité

antimicrobienne………………………………………………………….59

Tableau 22: Témoins antioxydants……………………………………………………61

Tableau 23 : Les résultats des tests antimicrobiens…………………………………..64

 LISTE DES FIGURES

Figure 1 : La voie de shikimate ………………………………………………………….2

Figure 2 :Squelette de base des flavonoïdes………………………………………………3

Figure 3 : biosynthèse des flavonoides ……………………………………………………4

Figure 4 :Structure de base des flavonoïdes……………………………………………..14

Figure 5 : Photo d’Artemisia Campestris ………………………………………………....27

Figure 6 :Extraction des flavonoïdes par appareil de soxhlet…………………………..32

Figure 7: la courbe d’étalonnage de l’acide gallique……………………………………36

Figure 8:la courbe d’étalonnage de la Rutine…………………………………………….37

Figure 9 : Chromatogramme d’HPLC de l’acide ascorbique présent dans l’extrait

dichlorique de l’Artemisia Campestris enregistré à 254 nm…………………………….38
Figure 10 : Chromatogramme d’HPLC de La rutine présente dans l’extrait
chloroformique de l’Artemisia Campestris enregistré à 254 nm………………………..38
Figure 11 : Chromatogramme d’HPLC de l’acide caféique et la quecétine et
de la rutine présente dans l’extrait méthanolique de l’Artemisia
Campestris enregistré à 254 nm………………………………………………..39
Figure 12 : Chromatogramme d’HPLC de l’acide caféique et quercetine présent
dans l’extrait d’acétate d’éthyle de l’Artemisia Campestris enregistré
à 254 nm ………………………………………………………………………39

Figure 13: Courbe de calibrage de la Rutine par HPLC………………………………..39

Figure 14: Courbe de calibrage de la Quercetine par HPLC…………………………..40
Figure 15: Courbe de calibrage de l’acide caféique par HPLC………………………...40
Figure16 : Spectre UV de la quercetine…………………………………………………..41
Figure 17 : spectre UV de la rutine………………………………………………………..41
Figure 18 : spectre UV du l’acide caféique…………………………………………….....42
Figure 19 : Chromatogramme d’HPLC de La rutine dans l’Artemisia
CampestriS enregistré à 254 nm……………………………………………….42
Figure 20: Chromatogramme d’HPLC de La quercetine dans l’Artemisia
Campestris enregistré à 254 nm……………………………………………43

Figure 21 : Chromatogramme d’HPLC du l’acide caféique dans l’Artemisia

Campestris enregistré à 254 nm……………………………………………43
Figure 22: Staphylococcus aureus ……………………………………………………..55

Figure 23 : Escherichia coli ……………………………………………………………56

Figure 24 : Pseudomonas aeruginasa ………………………………………………….57

Figure 25 : Candida albicans……………………………………………………………58

Figure 26: courbe montre l’absorbance des différentes concentration du l’extrait

Chloroformique .................................................................................................

Figure 27 : courbe montre l’absorbance des différentes concentration du

l’extrait Méthanolique…………………………………………………...62

Figure 28 : courbe montre l’absorbance des différentes concentration du

l’extrait d’acétate d’éthyle…………………………………………………63

Figure29 : Inhibition de la croissance microbienne de Staphylococcus aureus

ATCC6538 en présence des concentrations C1, C2 et C3, après 24 h

d’incubation à 37°C………………………………………………………..66

Figure 30 :. Inhibition de la croissance microbienne de Pseudomonas aeruginasa

ATCC14028 en présence des concentrations C1, C2 et C3, après 24 h

d’incubation à 37°C………………………………………………………67

Figure 31 : Inhibition de la croissance microbienne de Echerichia coli

ATCC25922 en présence des concentrations C1, C2 et C3, après 24 h

d’incubation à 37°C. ………………………………………………………68

Figure 32 : Inhibition de la croissance microbienne de Candida Albicans

ATCC10231 enprésence des concentrations C1, C2 et C3, après 24 h

d’incubation à 37°C ………………………………………………………69

 Introduction générale

Les plantes sont depuis toujours une source essentielle de médicaments. Aujourd'hui
encore une majorité de la population mondiale, plus particulièrement dans les pays en voie de
développement, se soigne uniquement avec des remèdes traditionnels à base de plantes. De
l'aspirine au taxol, l'industrie pharmaceutique moderne elle-même s'appui encore largement
sur la diversité des métabolites secondaires végétaux pour trouver de nouvelles molécules aux
propriétés biologique inédites telles que les polyphénols, alcaloïdes, terpènes …etc. [1]. Dans
ce but, l'investigation des plantes représente un potentiel inestimable pour la découverte de
nouvelles substances puisque les médicaments à base de plantes donne au consommateur des
garanties de qualité et d’innocuité

Cette source semble inépuisable puisque seule une petite partie des 400'000 espèces
végétales connues ont été étudiées sur les plans phytochimique et pharmacologique [1].

En Algérie, pays avec plus de 3000 espèces dont 15% endémiques [2],
auxquelles la population a recours à la médecine traditionnelle, on commence à entreprendre
des systématiques portant sur des plantes médicinales issues de sa flore.

Les objectifs fixés dans notre laboratoire sont l'inventaire ainsi que l'évaluation
chimique etpharmacologique des plantes médicinales Algériennes, dans le double butde
valoriser et de rationaliser leurs usages traditionnels et d'isoler descomposés d'intérêt
thérapeutique potentiel.

Chez l’homme ,ces molécules traces jouent un rôle importants en agissant directement
sur la qualité nutritionnelle des fruits, légumes et plantes et leur impact sur la santé des
consommateurs, il ont la capacité de moduler l’activité d’un grand nombre d’enzymes et
certains récepteurs cellulaires .En outre ,in vitro, un grand nombre de polyphénols sont
reconnus pour leur propriétés antioxydants, anti-inflammatoires et anticancéreuses [1] [2].

Dans le premier chapitre du manuscrit, nous proposons une étude bibliographique visant
à apporter une étude générale impliquant la structure, classification, les principales drogues,
propriétés et intérêt pharmacologique des composés phénoliques ainsi en présente la plante de
la famille : ASTERACEAE et quelques travaux antérieur consacré à la description botanique
de la plante, aux propriétés biologiques du genre Artemisia ainsi l’utilisation de la plante en
médecine.

Le deuxième chapitre, concerne l’identification des produits actifs de la plante,

l’extraction et le dosage des polyphénols.

Le troisième chapitre résumera l’activité antimicrobienne et antioxydante de l’extrait de

la plante Artemisia Campestris.

A la fin du mémoire nous terminons par une conclusion générale.

Référence bibliographique :
[1].Hostettmann.K., Poterat.O.,Wolfender.J-L.(1998). The potential of higher plants as a

source of drugs.Chimia 52, 10-17

[2].Gaussen .H., Leroy. H. F.(1982). Précis de botanique, végétaux supérieurs, 2éme

Ed.426.
Chapitre 1
I . Introduction

Les composés phénoliques sont des métabolites secondaires végétaux. Ils peuvent être
définis comme des molécules indirectement essentielles à la vie des plantes (d’où la
dénomination de métabolites secondaires). Par opposition aux métabolites primaires qui
alimentent les grandes voies du métabolisme basal, mais ils sont essentiels dans l'interaction
de la plante avec son environnement.
Ces composés ont tous en commun la présence d’un ou de plusieurs cycles
benzéniques portant une ou plusieurs fonctions hydroxyles [1]. La structure des composés
phénoliques naturels varie depuis les molécules simples (acides phénoliques simples) vers les
molécules les plus hautement polymérisées (tanins condensés) [2]. Avec plus de 8000
structures phénoliques identifiées [1]
Les composés phénoliques participent activement aux interactions de la plante avec
son environnement en jouant soit le rôle des signaux de reconnaissance entre les plantes
(Allélopathie), entre les plantes et les symbioses, ou bien lui permettant de résister aux
diverses agressions vis-à-vis des organismes pathogènes. Ils participent de manière très
efficace à la tolérance des végétaux à des stress variés, donc ces composés jouent un rôle
essentiel dans l'équilibre et l’adaptation de la plante au sein de son milieu naturel [2]
Selon [3] les polyphénols peuvent être devisés en au moins en 10 classes différentes
selon leur structure chimique de base ,peuvent s’étendre de molécules simple ,telles que les
acides phénolique ,aux composés fortement polymérisé ,tels que des tannins[4].Les composés
phénolique forment le groupe des composés phytochimiques le plus important des plantes .

II .biosynthèse des composés phénoliques :

II . A -La voie de shikimate :

c’est souvent la voie de biosynthèse des composés aromatiques, elle joue un rôle
critique pour contrôler le métabolisme de la voie de phénylpropanoide [5]
 COH

CHO O OH COOH
PO CHOOH
H H
H OH
+ HO H
H OH
CH2 H OH OH
CH2OP O
H OH
acide OH
C H2 O P
phosphoenol- erythrose 4P
pyruvique Aci de3
( PEP ) acide 3
des oxy Darabi no d é h y d r o q u i n i q ue
(D H Q )
h e p t u l o s i q u e 7 P ( DHAP )

COOH
COOH COOH

O OH
PO OH OH OH
OH
OH OH
acide 3
s h i ki ma t e 3 P a c i d e s h i k i mi q u e d é h y d r o s h i k i m i que
( DHS)
PEP

O COOH

C H2 COOH COOH

C H2 CH2

PO O C H2 O COOH
OH
OH OH
acide c h o r i s m i qu e acide préphénique
5 - En o l p y r u v y l s h i k i ma t e (CA)
3P
( EPSP)
COOH NH2
C O O H NH 2
H
H

OH

L-tyrosine L-p h é n y l alanine

Figure 1 : La voie de shikimate [6]

II .B - La voie de biosynthèse des flavonoïdes :
De nos jours, plus de 4000 flavonoïdes ont été identifiés. Ils ont une origine
biosynthétique commune et par conséquent, possèdent tous un même squelette de base à
quinze atomes de carbone, constitué de deux unités aromatiques,deux cycles en C6 (A et B),
reliés par une chaîne en C3

Figure 2 :Squelette de base des flavonoïdes

Leur biosynthèse (Figure 2) se fait à partir d'un précurseur commun,l

4,2’,4’,6’tétrahydroxychalcone. Cette chalcone de couleur jaune est métabolisée sous l'action
d'enzyme, la chalcone isomérase, en flavanone (1) : naringénine. C'est sur cette dernière
qu'agit ensuite la flavone synthase ou la (2S)-flavanone-3-hydroxylase pour donner la
formation de la flavone (2) : apigénine ou le dihydroflavonol (3) : (2R, 3R)-
dihydrokaempférol, respectivement. Les deux enzymes fonctionnent différemment, la
première introduit la double liaison entre les carbones C-2 et C-3, tandis que la deuxième
catalyse l’ hydroxylation du carbone C-3. Le dihydroflavonol, en présence de la flavonol
synthase ou la dihydroflavonol-4-réductase, se métabolise en flavonol (4) : kaempférol ou en
flavan-3,4-diol (5) : leucoanthocyanidol, respectivement. Ce dernier semble être le précurseur
des flavan-3-ols (6) et anthocyanidols (7) (Figure 2). Cependant, les étapes ultimes de leur
formation ne sont pas encore élucidées. Le pélargonidol (7), sous l'action de la 3-O-
glycosyltransférase, se transforme en anthocyanoside (8) : pélargonidol-3-glucoside (Figure
2). Les composés de chaque sous-classe se distinguent par le nombre, la position et la nature
des substituants (groupements hydroxyles, méthoxyles et autres) sur les deux cycle
aromatiques A et B et la chaîne en C3 intermédiaire.
 A l'état naturel, on trouve très souvent les flavonoïdes sous forme de glycosides. Une ou
plusieurs de leurs fonctions hydroxyles sont alors glycosylées. La partie du flavonoïde autre
que le sucre est appelée aglycone.

4' OH

HO 4 6 OH

2
OH O
2,4,6,4' t e t r a h y d r o x y c h a l c o ne

c h a l c o n e i s o me r a s e

4' OH OH
7 2 1' fl avone
HO O synt hase HO O

OH O OH O
f l a v a n o n e : Na r i n g é n i n e

f l a v o n e : Ap i g é n i n e
(2S) f l a v o n e 3 h y d r o x y l a s e

4' OH
OH
HO O f l avono
synt hase HO O

OH OH
OH O OH O
d i h y d r o f l a v o n o l : ( 2R,3R) d i h y d r o Ka e mp f é r o l
f l a v o n o : Ka e mp f é r o l
di hydr ofl avonol
4 r educt ase

OH
OH
HO O
HO O

OH
OH
OH
OH
OH

fl avan3, 4di ol : l eucoant hocya ni dol f l avan 3ol

4' OH 4' OH

HO 4 6O 3 Og l y c o s y l HO 4 6O
t r ans fer ase

OH OGlu
2 2
OH OH

An t h o c y a n i d o l : p e l a r g o n i d o l An t h o c y a n o s i d e : p e l a r g o n i d o l e 3 Og l y c o s i d e

Figure 3 : biosynthèse des flavonoides ( Bruneton 1999)

III .Nomenclature des polyphénols :

Les polyphénols sont constituent une grande classe de substances naturelles

caractérisées par une grandes diversité de structure. En simplifiant la classification selon leur
source de la structure d’origine, la fonction biologique, et chimique.
Les Acides Phenoliques .Le terme d’acide phénol peut s’appliquer a tous les composés
organiques possédant au moins, une fonction carboxylique et un hydroxyle phénolique.Sont
contenus dans un certains nombre de plantes agricole et medecinales [7].comme exemple on
cite l’acide chlorogénique ,acide cafeique ,acide protocatechique, acide vanillique acide
ferullique acide sinapique acide gallique [8]

IV .Principales classes des composés phénoliques :

IV.1 .Les phénols simples
Ils sont rare dans la nature en site le catéchol le phloroglucinol [9].

Tableau 1 : les phénols simple

nom structure

catéchol OH
OH

phloroglucinol HO OH

OH
- Drogue à phénol simple
La feuille de busserole est une drogue traditionnellement utilisée pour le traitement des
infections des voies urinaires, ces compositions chimique sont des hétérosides phénoliques,
représentés par l’Arbutoside (6-10 %) et l’hydroquinone et en note une grande quantité de
tanins et des flavonoïdes [9].

Tableau 2 : les hétérosides phénoliques

nom structure
OH

Hydroquinone

OH

O- Gl c

Arbutoside

OH

IV.2. Les acides phénoliques simples :

IV.2.1 . Acides hydroxybenzoiques :

Sont des dérivés de l'acide benzoique . Ont une structure générale de base de type (C6-
C1) Existent souvent sous forme d'esters ou de glycosides . Les acides hydroxybenzoiques les
plus abondants sont répertoriés dans le tableau 3 :
Tableau 3: Principaux acides hydroxybenzoïques[10]

structure R1 R2 R3 R4 Acide phénolique

H H H H Acide benzoïque

H H OH H Acide phydroxy
benzoïque
H OH OH H Acide

R1
protocatechique
R2 COOH H OCH3 OH H Acide vanillique

R3 H OH OH OH Acide gallique
R4
H OCH3 OH OCH3 Acide syringique

OH H H H Acide salicylique

OH H H OH Acide gentisique

IV.2.2 .Acides hydroxycinnamiques :

Dérivent de l'acide cinnamique ,Ont une structure générale de base de type (C6-C3)
existent souvent sous forme combinée avec des molécules organiques . Les degrés
d'hydroxylation et de méthylation du cycle benzénique, conduisent à une réactivité chimique
importante de ces molécules, le tableau 4 représente les principaux acides hydroxycinamiques
Tableau 4 : Principaux acides hydroxycinnamiques [10]

Structure R1 R2 R3 Acide
phénolique
H H H Acide
cinnamique
R1 H OH H Acide
R2
p coumarique
R3 COOH OH OH H Acide cafféique

OCH3 OH H Acide férulique

OCH3 OH OCH3 Acide

sinapique

Ces acides sont rarement présents sous formes libres, ils sont en général
combinés à d’autres molécules organiques. Les liaisons se font souvent au niveau des
fonctions carboxyliques, ces acides sont souvent estérifiés en esters de l’acide rosmarinique
et lithospermique. On peut dires que ces acides estérifient fréquemment les hydroxyles de
nombreux métabolites secondaires : flavonoïdes, antocyanosides, saponosides et rarement les
alcaloïdes [9].

Tableau 5 : les acides rosmarinique et lithospermique

nom structure

CO2 H OH
O
Acide rosmarinique HO
O OH

HO
HO

HO
Acide lithospermique CO2 H OH
O
O
O OH

HO
 - Drogue à acide phénol
Drogue à dérivé de l’acide caféique : Romarin, Rosmarinus officinalis L., Lamiaceae

Les acides phénoliques de cette drogue est l’acide rosmarinique [11], l’acide vanillique,
l’acide caféique, l’acide carnosique[12], l’acide gallique, l’acide chlorogénique, l’acide
syringique, l’acide p - coumarique et l’acide férulique[13].

Tableau 6 : quelques acides de drogue Romarin

nom structure
O OH

acide vanillique
CH3
O
OH

OH CH3
HO
acide camosique CO2 H CH3

CH3 CH3

CO2 H
HO
acide chlorogénique O

HO O
OH
OH
OH
IV.3. Coumarines :

Les coumarines dérivent des acides hydroxycinnamiques par cyclisation interne de la

chaîne latérale . Les coumarines ont fréquemment un rôle écologique ou biologique

Tableau 7 : Principaux types de coumarines[2]

structure R6 R7 R8 Acide
phénolique
H OH H Umbelliférol

OH OH H Aescultol
6R

OCH3 OH H Scopolétol
7R O O
R8 OCH3 OH OH Fraxétol

H OH OH Daphnétol

IV.4. Les Tanins :

IV.4.1. Définition :
Historiquement, l’importance des drogues à tannins est liée à leurs propriétés tannantes,
c’est à dire transformée les propriétés de la peau fraiche en un matériau imputrescible : le cuir.
La définition classique des tannins est : « composés phénolique hydrosolubles ayant une
masse moléculaire compris entre 500 et 3000 qui présentent, à coté des réactions classiques
des phénols, la propriété de précipiter les alcaloïdes, la gélatine et d’autre protéines » (bate-
smith et swain ,1962) [9] [14].

IV.4.2. Classification :
On distingue habituellement chez les végétaux supérieurs deux groupes basés sur des
différences structurales : les tanins hydrolysables et les tanins condensés :

IV.4.2.1. Les tanins hydrolysables

Se sont des esters d’un sucre (glucose) et d’un nombre variable de molécules d’acide
phénol ces tanins sont de deux types : Les tanins galliques qui sont les esters d’oses (glucose)
et d’acides galliques. Les tanins ellagiques qui sont des esters d’oses et d’acide
ellagiques[15] [14]
 OH
OH
O
HO O
O
HO
HO
OH

Structure de base des tanins hydrolysables [16]

O G O
OH G
O O

OH O O O
G G
OH G

G (esters de glucose) (A) structure de tanin gallique

(pentagalloyl glucose)[11]

IV.4.2.2. Les tanins condensés

De structure plus complexe, ce sont des polymères de flavan-3oles (catéchine) et de
flavan-3,4-dioles (leucoanthocyanidines), ou un mélange des deux[17].

OH

HO O OH
OH
OH
OH
HO O OH

OH
OH

Structure de base des tanins condensés (Procyanidol)

 OH
OH

HO O

OH
OH
OH OH

HO O
n
OH
OH
OH
OH

HO O

OH
OH

Structure des tanins condensés[37]

IV.4.3 Sources végétales des tanins :

Les tanins sont particulièrement riches chez les conifères, les Fagaceae, les
Rosaceae [18]. On les trouve dans de nombreuses plantes utilisées dans l’alimentation,
notamment les céréales et les légumineuses (orge, haricots secs, petits pois, caroube)
[17].

- Principales drogues à tanins :

Hamamelis, hamamelis virginiana L., Hamamelidaceae

Les feuilles de cette drogue renferment 10% de tanins : acide gallique,

hamamélitanin,proanthocyanidols.

OH
O OH
HO O
OH2C OH
CH2 O
HO
O OH
OH
H
OHOH
Structure de hamamélitanin
IV.4.4 Activité biologique et intérêt pharmacologique
Les tanins peuvent former des complexes avec les macromolécules, en particulier les
protéines. Par voie interne, elles exercent un effet antidiarrhéique, par voie externe, elles
imperméabilisent les couches les plus externes de la peau (brulure, exéma) [9].
Ils ont des grandes capacités antioxydantes dues à leurs noyaux phénol, Ils sont 15 à 30
fois plus efficaces que les phénols simples [19] [17].
Les tanins ont une action vasoconstrictrice sur les petits vaisseaux ; cette propriété
explique leur emploi dans les hémorroïdes et les blessures superficielles [14].
Des études menées en nouvelle -Zélande ont montré que la consommation de plantes à
tanins pouvait affecter la biologie de certaines espèces de parasites intestinaux en diminuant la
production des œufs. De nombreuses études ont montré l’effet antimicrobien des tanins sur
différents bactéries, virus et champignons [20].
Les tanins peuvent également former des complexes avec d’autres polymères naturels
comme les acides nucléiques et les polysaccharides [17].

IV.5. Les flavonoïdes :

IV.5.1. Généralités:

Le nom flavonoïde proviendrait du terme flavedo, désignant la couche externe des

écorces d'orange [21], cependant d'autres auteurs supposaient que le terme flavonoïde a été
plutôt prêté du flavus (flavus=jaune) [22][23]. L'intérêt nutritionnel pour les flavonoïdes date
de la découverte de la vitamine C, à la suite des travaux de Szent Gyorgyi en 1938. Le scorbut
expérimental cède à l'ingestion de jus d’agrumes mais résiste à la seule administration d'acide
ascorbique. Plus pratiquement, les symptômes hémorragiques du scorbut liés à la fragilité des
vaisseaux sont guéris par des extraits de Paprika et du jus de citron alors que l'acide
ascorbique seul est inefficace.

Les analyses chimiques ont montré que la fraction active était de nature flavonoique
.Cette action des flavonoïdes sur la perméabilité vasculaire a été appelée propriété
vitaminique P (P étant la première lettre du mot perméabilité). Cette notion de vitamine P
n’existe plus à l’heure actuelle puisqu'elle ne correspond pas à la définition classique des
vitamines.
 Les flavonoïdes sont considérés comme des micronutriments importants puisqu’ils
peuvent jouer des rôles antioxydants ou posséder des propriétés biologiques diverses [24][25].
Les travaux relatifs aux flavonoïdes sont multiples depuis la découverte du célèbre
"french paradox" correspondant à un bas taux de mortalité cardiovasculaire observé chez les
habitants des régions méditerranéennes, associant une consommation de vin rouge à une prise
importante de graisses saturées [26][23]. Prés de 4000 flavonoïdes ont été décrits [27]

IV.5.2. Structure :

Les flavonoïdes ont tous la même structure chimique de base, ils possèdent un squelette
carboné de quinze atomes de carbones constitué de deux cycles aromatiques (A) et (B) qui
sont reliés entre eux par une chaîne en C3 en formant ainsi l'hétérocycle (C)(figure 4)[28].
Généralement, la structure des flavonoïdes est représentée selon le système C6-C3-C6 [27]
formant une structure de type diphényle propane dont des groupements hydroxyles,
oxygènes, méthyles, ou des sucres peuvent être attachés sur les noyaux de cette molécule
[30][23]

3'
2' 4'
1
8 2 1' B
7 O 5'
A C 6'
6 3
5 4

Figure 4 :Structure de base des flavonoïdes

 IV.5.3. Classification :

Tableau 8: Principales classes des flavonoïdes [30][28]

classe Structure chimique R3’ R4’ R5’ exemple

H OH H Apigénine

R 3' OH OH H Lutéoline
R4''

HO O
R 5'
OH OCH3 H Diosmétine
flavones
OH O

H OH H Kaempférol

OH OH H Quercétine
Flavonols
R 3'
R4''

HO O
R 5'
OH OH OH Myrecétine
OH
OH O

OH OH H Catéchine

R 3'
R4''
flavanols
HO O
R 5'

OH
OH
 H OH H Naringénine

R 3' OH OH H Eriodictyol
R4''
flavanones
HO O
R 5'

OH O

H OH H Pelargonidine

Anthocyanidines R 3'
OH OH H Cyanidine
R4''

HO O+
R 5'
OH OH OH Delphénidine
OH
OH

R5 R7 R4’

isoflavones 7R O OH
OH OH OH Genisteine

R5 O
R4' H O-Glu OH Daidezine
IV.5.4. Localisation:

Les flavonoïdes sont impliqués dans de nombreuses interactions des plantes avec les
conditions biotiques et abiotiques de leur environnement, ces substances sont accumulées
dans différentes parties cellulaires et tissulaires de la plante durant l'organogénèse et sous
l'influence de plusieurs facteurs stimulants [31]
Sur le plan cellulaire, les flavonoïdes sont synthétisés dans les chloroplastes puis
migrent etse dissolvent dans les vacuoles [21], la répartition de ces composés montre des
accumulations très localisées, généralement en relation avec une fonction physiologique ou
avec l’interaction de la plante avec son environnement. Ainsi, les flavonoïdes qui ont une
localisation épidermique ont un rôle d'écran vis-à-vis des rayonnements solaires, tandis que
ceux qui sont impliqués dans les mécanismes de défense ont plutôt une localisation sous
épidermique[32]

IV.5.5 .Distribution :
Les flavonoïdes sont présents dans toutes les parties des végétaux supérieurs : racines
,tiges, feuilles, fruits, graines, bois, pollens [33], ils peuvent aussi être rencontrés dans certains
boissons et chez certains fourrages (ex: trèfle) [1]
Certaines classes de flavonoïdes sont présentes exclusivement chez certains végétaux,
on trouvera par exemple, les flavanones dans les agrumes, les isoflavones dans le soja, les
anthocyanes et les flavonols ont eux une large distribution dans les fruits et les légumes tandis
que les chalcones se retrouvent plus fréquemment dans les pétales des fleurs, sont considérés
comme des pigments naturels au même titre que les chlorophylles et les caroténoïdes[35][21]
Le monde animal est très concerné par les flavonoïdes dont Besle et al, 2004 ont isolé
respectivement quinze et seize composés aromatiques à partir du lait de vache avec
respectivement 6 et 5 composés importants dus principalement à la consommation des plantes
par les herbivores[35].
On trouve aussi la chrysine, la quercétine, de la galangine dans les propolis ; sécrétion
des bourgeons de nombreux arbres (le bouleau, le sapin, le saule…) récoltés par les abeilles,
ces insectes les fabriquent en modifiant la propolis par leurs enzymes salivaires. Les abeilles
mettent en oeuvre les propriétés antifongiques et antibactériennes des polyphénols pour
aseptiser leurs ruches [34]. Le tableau 9 représente la distribution des principaux flavonoides
dans certains aliments :
 Tableau 9 : Distribution alimentaire des principales classes de flavonoïdes [28]

Flavonoides exemples aliment Caractéristiques

Falvonols Oignon, poireau, Le groupe le plus abondant
brocolis, pommes, des composés phénoliques
R 3' Quercétine chou frisé, vin
R4''
rouge, thé.
HO O
R 5'

OH
OH O
Kaempférol

Flavones Lutéoline Persil, céleri. Le groupe le plus abondant

Apigénine des composés phénoliques,
R 3' les flavones se diffèrent des
R4''
flavonols seulement par le
HO O
R 5' manque d'un OH libre en
C3,ce qui affecte ainsi leur
OH O
absorption aux UV, mobilité
hromatographique et les
réactions de coloration
Flavanone Naringénine Fruits du genre Sont caractérisés par
Eriodictyol Citrus. l'absence de la double
R 3' liaison C2-C3, le flavanone
R4''
le plus abondant est la
HO O
R 5' naringénine, isolée pour la
première fois à partir des
OH O
écorces de citrus.
 Isoflavones Genisteine Graines de soja et Caractérisés par leur
Daidzeine produits qui en variabilité structurale dont
7R O OH dérivent. l'attachement du cycle B se
fait en C3. Ils sont présents
R5 O dans les plantes sous forme
R4'
libre ou glycosylée.
Flavan 3- ols Catéchine Vin rouge, thé Flavan 3ols ainsi que
Epicatéchine noire, thé vert, Flavan 3,4diols sont tout les
Epigallocatéc cacao, chocolat. deux impliqués dans
R 3' -hine Biosynthèse de
R4''
proanthocyanidines (tanins
HO O
R 5' condensés) par des
OH condensations enzymatiques
OH
et chimiques
Anthocyanidines Cyanidine Raisins,vin Représentent le groupe le
Delphénidine rouge,certaines plus important des
R 3' variétés de substances colorées, ces
R4''
céréales. pigments hydrosolubles
HO O+
R 5' contribuent à la coloration
OH des angiospermes.
OH

IV.5.6. Propriétés des flavonoides :

IV.5.6.1 Propriétés biologique :
a-Propriétés antiradicalaires :
Les flavonoides sont capables de piéger les radicaux libres en formant des radicaux
flavoxyles moins réactifs, cette capacité peut être expliquée par leur propriété de donation
d'un atome d'hydrogène à partir de leur groupement hydroxyle selon la réaction représentée
ci-dessous :

FLOH + R• ―> FLO• + RH (réaction de piégeage)

 Cette réaction de piégeage donne une molécule stable (RH) et un radical flavoxyle
(FLO•) ce dernier va subir un changement de structure par résonance ; redistribution des
électrons impaires sur le noyau aromatique pour donner des molécules de faible réactivité par
rapport aux R•; en outre les radicaux flavoxyles peuvent interagir entre eux pour former des
composés non réactifs [36].

FLO• + R• ―> FLO-R (réaction de couplage radical-radical)

FLO• + FLO• ―> FLO-OFL (réaction de couplage radical-radical)

b- Propriétés antibactériennes :
La thérapeutique des infections bactériennes se base principalement sur l’usage des
antibiotiques. La prescription à grande échelle et parfois inappropriée de ces agents a entraîné
la sélection de souches multi résistantes d’où l’importance d’orienter les recherches vers la
découverte de nouvelles voies qui constituent une source d’inspiration de nouveaux
médicaments à base des plantes, sous forme de métabolites secondaires dont les composés
phénoliques, sont toujours utilisés dans l’industrie alimentaire et cosmétique et comme agents
antimicrobiens en médecine populaire.
Les polyphénols notamment les flavonoïdes et les tannins sont reconnus par leur toxicité
vis- à -vis des microorganismes. Le mécanisme de toxicité peut être lié à l'inhibition des
enzymes hydrolytiques (les protéases et les carbohydrolases) ou d'autres interactions pour
inactiver les adhesines microbiens, les protéines de transport et d'enveloppe cellulaire [37]

c-Activité anti-tumorale :
La plupart des flavonoïdes sont in vitro, antimutagènes ; a contrario, quelques
flavonols sont sur les mêmes modèles mutagènes et un petit nombre d'entre eux sont
anticancérogènes et inhibiteurs de la croissance des cellules tumorales in vitro [38]. Les effets
anti-carcinogènes de la quercetine et d'autres flavonoïdes deviennent de plus en plus évidents
[39].
Tieppo et al [40] ont démontré que la quercetine n’était pas génotoxique et en revanche,
elle a augmenté la stabilité génomique chez les rats ayant une cirrhose biliaire induit par la
ligature cholagogue
d- Propriétés pro-oxydantes :
Nous avons décrit précédemment les propriétés anti-oxydantes des flavonoïdes mais il
ne faut pas négliger leurs propriétés pro-oxydantes. Parfois les flavonoïdes jouent un rôle de
pro-oxydants. En effet, plusieurs d'entre eux ont été décrits comme responsables d'auto
oxydation et de la génération de radicaux oxygénés actifs, comme le peroxyde d'hydrogène.
En définitive, certains flavonoïdes pourraient accélérer la survenue de l'atteinte oxydative de
l'ADN, des protéines et des glucides in vitro. Alors, le potentiel pro-oxydant de ces composés
ne doit pas être négligé dans le mécanisme d'action des flavonoïdes [25].

e- Effets cardiovasculaires :
Récemment, beaucoup d'études se sont concentrées sur les effets cardiovasculaires des
flavonoïdes. Les rapports épidémiologiques ont démontré que les gens peuvent avoir une
incidence plus limitée en maladies du coeur, s'ils ont une ingestion diététique élevée en
flavonoïdes[41].Parmi les 17 flavonoïdes examinés par [41], les agents de relaxation
vasculaires les plus efficaces sont l’apigénine, lutéoline, kaempferol et la génisteine. Cette
relaxation est attribuée à l'action directe des flavonoïdes sur le muscle lisse vasculaire.

IV.5.6.2. Propriétés Physico-Chimiques des flavonoïdes :

IV.5.6.2.1. Solubilité et l’extraction :
Les génines sont pour la plupart, solubles dans les solvants organiques apolaires. Les
hétérosides peuvent être extraits, le plus souvent à chaud, par de l'acétone ou par des alcools
additionnés d'eau. Il est possible de procéder ensuite à une évaporation sous vide et lorsque le
milieu ne contient plus que de l'eau, de mettre en oeuvre une série d'extractions liquide-
liquide par des solvants non miscibles à l'eau [38]. Si les aglycones sont les cibles, une
hydrolyse chimique est habituellement effectuée avec de l'acide chlorhydrique ou l’acide
formique à des températures élevées, l'hydrolyse enzymatique est également employée. Si
l'intérêt des flavonoides-glycosylés intacts, l'hydrolyse devrait naturellement être empêchée
[42].
IV.5.6.2.2. Dosage :
Les méthodes de dosage classiques sont le plus souvent, colorimétriques ou
spectrophotométriques. L’ HPLC offre maintenant la possibilité d'une estimation rapide et
précise de tous les flavonoïdes [38].

IV.5.6.3. Autres propriétés des flavonoïdes :

- Protection des plantes contre les radiations UV
- Sont impliqués dans les processus de défense de la plante contre les infections bactériennes
et virales
- Agissent comme des pigments ou des co-pigments
-Modulation de la distribution d'auxine
- Fonctionnent comme des signaux moléculaires de reconnaissance entre les bactéries
symbiotiques et les légumineuses afin de faciliter la fixation de l’azote moléculaire
- Régulation de l'élongation des tiges
-Interviennent dans la maturité des fruits
- Sont à l'origine des goûts amers et astringents afin de repousser les animaux
herbivores [43]

IV.5.7. Consommation des flavonoïdes :

La prise moyenne quotidienne des flavonoïdes est 14.4 mg dont (35.2%) viennent des
fruits, (19.1%) des légumes, (16.9%) du vin et (16.0%) du thé [44]. La quercetine est
régulièrement consommée par l’homme car c'est le flavonoïde principal trouvé dans le régime
alimentaire [40].
Leur ingestion diététique est tout à fait haute, comparé à d'autres antioxydants diététiques
comme les vitamines C et E [44].

IV.5.8. Distribution des flavonoïdes dans les plantes :

A de rares exceptions près, seules les plantes ont la capacité de biosynthétiser des
flavonoides. Les flavonoïdes peuvent être présents dans toutes les parties des plantes. Dans la
majorité des cas, les flavonoïdes sont présents sous forme glycosylée dans les plantes car la
glycosylation a pour effet de les rendre moins réactifs et plus hydrosolubles permettant alors
leur stockage dans les vacuoles des cellules épidermiques des fleurs, de l’épiderme et du
mésophylle des feuilles, des parenchymes des tiges et racines. Les génines seules sont
présentes dans les exsudats farineux de certaines plantes, dans les cuticules des feuilles,
écorces et bourgeons ou sous forme de cristaux dans les cellules de certaines Cactaceae et
plantes de régions arides [46]. On les trouve en abondance dans les familles suivantes :
Polygonacées; Apiacées , Rutacées , Astéracées , Légumineuses [25].
Le monde animal est lui aussi concerné par les flavonoïdes. On trouve par exemple de
La chrysine, la quercétine, et de la galangine dans la propolis des abeilles [47]. Il est à noter
que les flavanones et les flavones ont été isolés d’un corail marin et d’un petit nombre de
champignons [46].

IV.5.9. Rôles des flavonoïdes chez les plantes :

Les flavonoïdes sont des pigments quasiment universels des végétaux. Ils sont
responsables de la coloration des fleurs, des fruits et parfois feuilles. Quand ils ne sont pas
directement visibles, ils contribuent à la coloration par leur rôle de co-pigments.
Dans certains cas, la zone d'absorption de la molécule est située dans le proche
ultraviolet : la coloration n'est alors perçue que par les insectes qui sont ainsi efficacement
attirés et guidés vers le nectar et donc contraints à assurer le transport du pollen [9]. On peut
également noter que les flavonoïdes, en repoussant certains insectes par leur goût désagréable,
peuvent jouer un rôle dans la protection des plantes.
Les flavonoïdes montrent d’autres propriétés intéressantes dans le contrôle de la
croissance et du développement des plantes en interagissant d’une manière complexe avec
diverses hormones végétales de croissance. Certains d’ entre eux jouent également un rôle de
phytoalexines, c’est-à-dire des métabolites que la plante synthétise en grande quantité pour
lutter contre une infection causée par des champignons ou par des bactéries [47].
De plus ils sont impliqués dans la photosensibilisation, la morphogenèse, la
détermination sexuelle, la photosynthèse et la régulation des hormones de croissance des
plantes [46].
V. Propriétés physico-chimiques, extraction, caractérisation des polyphénols

Les polyphénols son solubles dans les solvants organique polaires et en les caractérises
dans les solutions d’hydroxydes de sodium(Na OH) et de carbonate de sodium (NaCO 3).Les
flavonoïdes peuvent être directement extraits par des solvants polaires tels que le
dichlorométhane et l’éther. L’extraction des tanins est réalisée par un mélange d’eau et
d’acétone. Les tanins galliques Avec les sels ferriques donnent des colorations et des
précipités bleu-noir, et avec l’iodate de potassium donnent une coloration rose et les tanins
ellagiques donnent avec les sels ferriques les même caractéristique des tanins galliques, et
avec l’acide nitreux en milieu acétique donnent une coloration d’abord rose après elle vire au
rouge puis au bleu.

L’analyse des composées phénoliques d’un végétal est couramment réalisée en CCM,
en CPG et en HPLC [7].

VI. Conclusion :

Les polyphénols constituent une famille de molécules organiques largement présente

dans le règne végétal, prennent une importance croissante, notamment grâce à leurs effets
bénéfiques sur la santé

Tous les flavonoides ont une origine biosynthétique commune et de ce fait possèdent le
même élément structural de base. Ils peuvent être regroupés en différentes classes. Ces
composés sont les produits du métabolisme secondaire des plantes.
Références bibliographique :

[1].Urquiaga .I et Leighton .F. (2000). Plant polyphenol antioxidants and oxidative stress.
Biological Research., 33 (2) : 55-64.
[2].Macheix .J. J., Fleuriet .A et Jay–Allemand C. (2005). Les composés phénoliques des
végétaux : un exemple de métabolites secondaires d'importance économique. Ed Presses
polytechnologiques et universitaires romandes. P 4-5.
[3].Harbrone .J.B. (1989 ) Methods in plant biochemistry , I :Plant phenolics . Academic
press , London –UK

[4].Lugasi .A.,Houari .J.,Sagi .K.V et Biro L . (2003) The role of antioxidant phytonutrients
in the prevention of diseases .Acta biologica Szegchiensis. 47 (1-4) .119-125

[5].Kening .Y., Vincenzo .D. L. et Normand B. (1995). Creation of a metabolic sink for
tryptophan alters the phenylpropanoid pathway and the subsceptibility of potato to
Phytophtora infestans. The plant cell., 7 : 1787-1799.

[6].Floss .H. G.(1997). Natural products derived from unusual variants of the shikimate
pathway. Natural Product Reports., 14 : 433-434.
[7].Psotva .J .,Lasovsky .F et Vicar .J .(2003) Metal –chelating properties . Electrochemical
Behavior .Scavenging And cytoprotective actevities of six natural phenolics .Biomed papers
147 (2) .147 -153

[8]. HAL .A .L.(2003).screening potato genotypes for antioxidants activity ,identification of

for responsible compounds, compounds,and diffenrentiating russet norkotah strains using
aflp and microsatellite marker analysis .Office Of graduate studies of texas A&M
university.Genetics. 260p.
[9]. Bruneton .J. (1993).Pharmacognosie, phytochimie des plantes médicinales. 2eme edition
Tec et Doc (Ed). Paris, 210-338p.

[10].Sarni-Manchado .P et Cheynier .V. (2006). Les polyphénols en agroalimentaire. Ed

Lavoisier. p2- 10.

[11].Rasooli .I., Fakoor .M.H., Yadegarinia .D., Gachkar .L., Allameh .A., Rezaei
.M.B. (2008).Antimycotoxigenic characteristics of Rosmarinusofficinalis and
Trachyspermum copticum L.essential oils. International J of Food Microbiology.122:135-139.
[12].Luis .J.C., Martin Perez 0R., Valdes Gonzalez .F.(2007). UV-B radiation e.ects on
foliar concentrations of rosmarinic and carnosic acids in rosemary plants. Food Chem.
101:1211-1215.
[13].Kivilompolo .M., Hyotylainen .T.(2007). Comprehensive two-dimensional liquid
chromatography in analysis of Lamiaceae herbs: Characterisation and quantification
of antioxidant phenolic acids. J Chromatography A. 1145: 155-164.
[14].Atefeibu .E.S.I.(2002).Contribution a l’étude des tanins et de l’activité
antibacterienne d’Acacia Nilotica Var Andesonii .Thèse de Doctorat, université cheikh
Anta Diop de Dakar.33p .

[15].Asres .K., Seyoum .A., Veereshan .C., Bucar .F., Gibbons S.(2005). Naturally derived
anti HIV agents. Phytother. Res, 19:557-581.

[16].Hartzfeld .P.W., Forkner R., Hunter .M .D., Hagerman .A .E.(2002). Determination

of Hydrolyzable Tannins (Gallotannins and Ellagitannins) after Reaction with Potassium
Iodate. J.Agric. Food Chem. 50, 1785-1790.
[17].Peronny S.(2005) La perception gustative et la consommation des tannins chez le maki
(Lemur catta). Thèse de doctorat, 151p.
[18].Ghestem .A., Segun .E ., Paris .M ., Orecchioni A.M.(2001). Le préparateur en
pharmacie : Botanique-Pharmacognosie Phytotherapie - Homéopathie. Lavoisier Tec et Doc,
Paris ,273p

[19].Perret .C.(2001). Analyse de tannins inhibiteurs de la stilbene oxydase produite pour

Botrytis cinerea Pers : Fr. Thèse de doctorat, 173p.

[20].Backous .N., Delporte .C., Andrad .C.(1997).Phytochemical and biological study of

Radallomatiahirsuta (Proteaceae). Journal of Enthnopharmacology, 57: 81-83.

[21].Piquemal .G.(2008).Lesflavonoïdes(enligne)http://www.detoursante.com/index.php?
Option=com_content & view=article & id=166 & Itemid=215'
[22].Karaali .A., Boyacioălu .D., Gϋnez .G. etŎzçelik B .(2004). Flavonoids in fruit and
vegetables : their impact on food quality, nutrition and health–STREP or CA.
European commision’s the 6th framework programme for research. Istanbul technical
University Turkey.
[23]. Malešev D. etKuntić V. (2007). Investigation of metal-flavonoid chelates and
the determination of flavonoids via metal-flavonoid complexing reactions.
Journal of theserbian chemical society., 72 (10) : 921-939
[24]. Nijveldt R. J., Van Nood .E., Van Hoorn .D. E. C., Boelens P. G., Van Norren K., et
VanLeeuwen .P. A. M. (2001). Flavonoids : a review of probable mechanisms of action and
potential applications. American journal of clinical nutrition.,74 : 418-425.
[25].Milane .H. (2004). La quercétine et ses dérivés: molécules à caractère pro-oxydant ou
capteurs de radicaux libres; études et applications thérapeutiques. Thèse de doctorat.
Strasbourg
[26].Ghedira .k. (2005). Les flavonoïdes : structure, propriétés biologiques, rôle
prophylactique et emplois en thérapeutique. Phytothérapie., 3 (4) : 162-169.
[27].Medić-Šarić .M., Jasprica .I., Smolćić-Bubalo .A. et Monar .A.( 2004). Optimisation
of chromatography of flavonoids and phenolic acids. CROATICA CHEMICA ACTA
CCACAA.,77 (1-2) : 361-366
[28].W –Erdman .J., Balentine .J. D., Arab .L., Beecher .G., Dwyer .J. T., Folts .J.,
Harnly.,Hollman .J. P., L –Keen .C.,.Mazza .G., Messina .M., Scalbert .A., Vita .J.,
Williamson .G.,et Burrowes J. (2007). Flavonoids and heart health : Proceeding of the ILSI
North America flavonoids workshop, may 31-june 1, 2005, Washington. Journal of
Nutrition.,137 (3 supp1) : 718 s-737 s.
[29]. Emerenciano .V. P., Barbosa .K. O., Scotti .M. T. et Ferriro .M. J. P. (2007). Self
organisating maps in chemotaxonomic studies of Asteraceae : a classification of tribes using
flavonoid data. Journal of brazilian chemical society.,18 (5) : 891-899.
[30].Narayana .K. R., Reddy M. S., Chaluvadi .M. R. et Krishna .D. R.(2001).
Bioflavonoids classification, pharmacological, biochemical effects and therapeutic potential.
Indian journal of pharmacology., 33 : 2-16.
[31].Hutzler .P., Fishbach .R., Heller .W., Jungblut .T. P., Reuber .S., Schmitz .R., Veit
.M.,Weissenböck .G. et Schnitzler .J. P. (1998). Tissue localisation of phenolic compounds
in plants by confocal laser scaning microscopy. Journal of experimental botany.,49 (323) :
953-965.
[32].Boudet .A. M .(2000). L'usine chimique. 9èmeconférence de l'université de tous les
savoirs.France. p1-16.
[33].Verhoeyen .M. E., Bovy .A., Collins .G., Muir .S., Robinson .S., De Vos .C. H. R. et
Colliver S. (2002). Increasing antioxidant levels in tomatoes through modification of the
flavonoid biosynthesis pathway. Journal of experimental botany.,53 (377) : 209 -210.
[34].Lahouel M. (2005). Interaction flavonoides-mitochondrie et rôle de la propolis dans
laprévention de l'apoptose induite par certains medicaments anticancéreux. Thèse
de doctorat de l'université Mentouri de Constantine.
[35] Besle .J. M., Lamaison .J. L., Pradel .P., Fraisse .D., Viala .D., et Martin .B. (2004).
Les flavonoïdes des fourrages au lait. Rencontres Recherches Ruminants., 11 : 67-70.
[36]. Amić .D., Davidović-Amić .D., Bešlo .D. et Trinajstić .N. (2003). Structure–Radical
scavenging activity relasionships of flavonoids. CROATICA CHEMICA ACTA CCACAA.,
76(1) : 55-61.
[37].Cowan.M.M.(1999).Plant products as antimicrobial agents.Clinical microbially
reviews., 12 (4) : 564-570.
[38].Bruneton .J. (1999). Pharmacognosie, phytochimie, plantes médicinales. 3ème Edition.
Tec & Doc (Ed).Paris, 575p.
[39].Hollman .P.C.H., Hertog .M.G.L., Katanc .M.B. (1996). Analysis and health effects of
flavonoids. Food chem. 51: 43-46.
[40].Tieppo .J., Vercelino .R., Dias .A.S., Silva Vaz .M.F., Silveira .T.R., Marroni, C.A.,
Marroni, N.P., Henriques, J.A.P., Picada, J.N. (2007). Evaluation of the protective effects
of quercetin in the hepatopulmonary syndrome. Food and Chemical Toxicology. 45: 1140-
1146
[41].Xu .Y.C., Leung .S.W.S., Yeung .D.K.Y., Hu .L.H., Chen .G.H., Che .C.M., Man
.R.Y.K.(2007). Structure- activity relationships of flavonoids for vascular relaxation in
porcine coronary artery. Phytochemistry.68: 1179-1188.
[42].DeRijke .E., Out .P., Niessen .W.M.A., Ariese .F., Gooijer .C., Brinkman .U.A.T.
(2006).Analytical separation and detection methods for flavonoids.J Chromatography A.1112:
31-63.
[43].Yang .R. Y., Lin .S., et Kuo G. (2008). Content and distribution of flavonoids among 91
edibles plant species. Asia of pacific journal of clinical nutrition., 17 (S1) : 275-279.96
[44].Ramassamy .C. (2006). Emerging role of polyphenolic compounds in treatment of
neurodegenerative diseases: A review of their intracellular targets. European J
Pharmacology.545: 51-64.
[45].Fiorentino .A., D’Abrosca .B., Pacifico .S., Golino .A., Mastellone .C., Oriano .P.,
Monaco .P. (2007). Reactive Oxygen Species Scavenging Activity of Flavone Glycosides
from Melilotus neapolitana. Molecules. 12: 263-270.
[46].Lhuillier .A. (2007). Contribution a l’étude phytochimique de quatre plantes malgaches :
Agauria salicifolia Hook.f ex Oliver, Agauria polyphylla Baker (Ericaceae), Tambourissa
Trichophylla Baker (Monimiaceae) et Embelia concinna Baker (Myrsinaceae). Thèse de
doctorat. Toulouse.
[47].Marfak .A.(2003).Radiolyse gamma des flavonoïdes. Etude de Leur reactivite avec les
radicaux issus des Alcools: formation de depsides. Thèse de doctorat. Limoges.
Chapitre 2
I. Introduction
L’usage en médecine humaine des plantes médicinales réputées pour des activités
thérapeutiques ou préventives dans certaines maladies nécessite des études scientifiques avec
une mise à l’épreuve des plantes recensées pour ces effets. Dans ce chapitre, il est fait appel
d’étudier La phytochimie et le dosage des polyphénols qui permet d’isoler et d’identifier les
composés actifs de la plante.

II. Présentation de la plante

Les plantes aromatiques de la famille Asteraceae (Composées) constituent de loin la
famille la plus importante de notre territoire. Le genre Artemisia est un des plus importants de
la famille des Asteraceae : il comporte plusieurs certaines d’espèces en grande partie utilisées
pour leurs diverses propriétés médicinales par les pharmacopées locales [1].

Cette plante est très répondues dans toutes les régions présahariennes de l’Algérie, elle
est utilisée dans notre région comme antiseptique, anti-inflammatoire, antirhumatismale,
antimicrobienne, maladie d’estomac et pour soulager les douleurs………etc.

L’intérêt que nous portons est le dosage des polyphénols à savoir : les flavonoïdes,
tanins,…..etc.

II.1 Présentation de la famille : ASTERACEAE (Composées)

Les Asteraceae Renferment 408 espèces de plante et arbustes reparties en 109 genres
[2]. Les Astéracées ont la caractéristique commune d'avoir des fleurs réunies en capitules,
c'est à dire serrées les unes à côté des autres, sans pédoncules, placées sur l'extrémité d'un
rameau ou d'une tige et entourée d'une structure formée par des bractées florales[3].

II.1.1 Présentation du genre : Artemisia

Le genre Artemisia est généralement aromatiques, densément toment eux ,Leurs feuilles
sont pennées (rarement palmées) [3], comprend environ 200 à 400 espèces de plantes et
arbustes [4].Plusieurs espèces, notamment Artemisia lactiflora, demandent un sol assez
humide, les armoises alpine s’exigent un sol parfaitement draine.
II.1.2. Présentation de l’espèce : Campestris

La définition de l’espèce Artemisia campestris,

 Capitules très petits, limités (1 à 1,5mm), ovales, à involucre scarieux, ne contenant

que 3 à 8 fleurs; feuilles à divisions longues, étroites et séparées.
 Feuilles lisses, d'un vert foncé; rameaux rougeâtres; capitules coniques [1].

II.2. Description botanique

Artemisia campestris Fleurons du disque stérile (ovaire avorté). Plante de 30-150 cm, d’un
rameau large, Tige ligneux à base striée. Feuilles vert foncées ; les essentielles pétiolées et
auriculées, les autres sessiles. Cette espèce très appétant en été et en automne, plus rares dans
la région prés aharienne, manque au Sahara septentrional, reparaît dans les montagnes du
Sahara central [1].

Noms français : Armoise champêtre

Armoise des champs
Armoise rouge.
Noms anglais : Field Sagenort
Field southernwood
Field Sagewort
Field Wormwood
Nom vernaculaire : Dgouft ou tgouft , Alala

II.3. Classification Systématique :

Selon [5], la plante Artemisia campestris est classée dans:

Règne: Plantae
Sous règne: Tracheobionta
Embranchement: Spermatophyta
Sous embranchement: Magnoliophyta
Classe: Magnoliopsida
Sous classe: Asteridae
Ordre: Asterales
Famille: Asteraceae
Sous famille: Asteroideae
Tribu: Anthemideae
Sous Tribu: Artemisiinae
Genre: Artemisia
Espèce: Artemisia campestrisL.

Sous-espèce : artemisia campestris L.ssp.campestris

Figure 5 : Photo d’Artemisia Campestris

II.4. Répartition géographique et domaine d’utilisation :

L’espèce Artemisia est distribuée dans l’hémisphère nord, en particulier sur la côte
méditerranéenne de l’Europe, sud-ouest de l’Asie et de l’Afrique [6], Certaines en Afrique du
Sud et dans l’Ouest de l’Amérique du Sud [7]. Dans le nord-ouest de l’Italie, cette espèce
utilisée dans des boissons alcoolisées en parfumerie et dans une gamme d'applications
alimentaires [8].

II.5. La toxicité de la plante :

Les toxines sont répartis à travers toute la plante ,mais les feuilles et les tiges en contiennent
les concentrations les plus élevées la plante compte 0.04 % d’huiles essentielles .Elle est
contient 58-65% de α-Pinene et 30% de β-Pinene [9], d’autre résultat obtenu lors du test
réalise sur des rats wistars albinos et des souris de laboratoire, malgré d’une dose très élevé «
20 ml/kg » aucun mortalité n’a été enregistrée après 23 jours d’administrations [10].
II. 6. Utilisation de la plante en médecine traditionnelle

Depuis 150 ans, les plantes médicinales ont fourni à la pharmacie des médicaments.
Aujourd’hui, les plantes utilisées en médecine traditionnelle et qui ont été testées, sont
souvent d 'une part, des plantes efficaces dans les modèles pharmacologiques et d'autre part
seraient quasiment pauvres de toxicité [11].

L’utilisation de la plante A campestrisL.ssp.campestris varis d’un pays à l’autre, elle est

utilisée, Sèche, en onction, en friction, comme huile essentielle en infusion ou en décoction.

II.7. Quelque travaux antérieur sur le genre Artemisia [12] :

Tabeau10 : Teneur en polyphénols, de la partie aérienne d’Artemisia campestris [12]

Plante Phénols totaux a Flavonoides b Dérivés hydrox Dérivés hydrox

cinnamiques c benzoiques d
Artemisia
campestris 103.4 05 95 0

a: mg EAG/g ps, b : EQ(m/m), c : EAC (m/m), d : EAG (m/m).

Tableau 11: Principaux flavonoïdes rencontrés chez l’Artemisia campestris

Flavonoids Référence
- Flavanone: 5, 8, 4’-trihydroxyflavanone. - Rauter et al .,1989.
- Acétophénone: 3-acetyl-4-hydroxyacétophénone. - Hurabielle et al .,1982.
- Flavones: 5, 7-dihydroxy-3, 4’-dimethoxyflavone. - Ferchichietal2006.
- Flavonol: Kaempférol-7méthyl. -Valant-V et al.,2003.
- Dihydroflavonol: 7-methyl aromadendrin - Hurabielle et al.,1982.
III. Mise en évidence des phytochimiques
L’étude phytochimique sur la plante d’Artemisia campestris de la famille Astéracées est
basée sur de tests ou des méthodes très simples : réaction chimique et des analyses [13] [14]

la solution à analyser est un infusé aqeux a 5% obtenu en versant 5g de poudre

médicinale dans 100ml d’eau distillé bouillante .filtrer après 15 mn et rincer avec un peu
d’eau chaude de manière à obtenir 100ml de filtrat .

III.1 Mise en évidence des anthocyanes

La mise en évidence d’anthocyanes repose sur l’apparition d’une colorât bleu-violacée

en milieu alcalin et on rouge en milieu acide .On réalisé une ébullition de 1 g de la drogue
avec l’eau distillé (infusé, en laisse refroidir et en filtre .En ajoutant quelques gouttes d’acide
sulfurique dilué (2N) puis 5 ml d’ammoniaque NH4OH. si la coloration s’accentuer par
acidification puis vire au bleu-violacée en milieu basique ,il y a présence d’anthocyane .[15].

III.2 Mise en évidence des flavonoïdes

Réaction à la cyanidine : a 5 ml de l’infusé ajouter 3 ml d’alcool chlorhydrique,

(MeOH +HCl concentré a parties égales en volume ),1 ml d’acide amylique puis quelques
copeaux de magnésium; les flavones donnent une coloration orangée, les flavonols une
coloration rouge et les flavanones une coloration violacée [15].

III.3 Mise en évidence des tanins

5 ml de de l’infusé sont ajouté 2 à 3 gouttes de solution de FeCl3 à 5%. La couleur

vire au bleu noir en présence de tanins [15].

Pour différencier les tanins catéchique et gallique ,on a la réaction de STIASNY.

30 ml d’infusé , ajouter 15 ml de réactif de Stiasny 10 ml de méthanol + 5 ml de HCL

concentré ; le tout est chauffé au bain marie à 90 c pendant 15 mn ,l’apparition de précipités
montre la présence du tanins catéchique .

Pour révéler les tanins galliques , filtrer le mélange précédemment chauffé ;prélever 10
ml et sature avec l’acétate de sodium pulvérisé puis ajouter 1 ml d’une solution de FeCl 3à 1
%.Le développement d’une teinte bleu-noire indique la présence de tanin gallique non
précipité par le réactif de Siasny
III.4.Mise en évidence des coumarines

La solution à analyser est obtenu après une macération de 24 heures de 1g de poudre

médicinale dans 20 ml d’éther. Le macéré est ensuite complété à 20 ml

Evaporer à sec 5 ml du filtrat et ajouter au résidu 2 ml d’eau distillée chaude .partager

la solution entre 2 tubes à essai .Au contenu de l’un des tubes ,ajouter 0,5 ml de NH4OH à
25% .On dépose quelques gouttes de cet extrait sur une plaque de gel de silice, en utilisant
comme éluant un mélange de toluène – acétate d’éthyle (8:1).

Des fluorescences vertes et jaunes sont observés au visible et d’autres brunes et bleues à
366 nm, ce qui conforme la présence de furano et Pyranocoumarines [15].

III.5. Mise en évidence des saponosides

L’indice de mousse se traduit par la mousse qui persiste et se forme à la surface de

certains liquides après Il permet de détecter la présence de saponosides au niveau de la
plante.

On introduit 1 g de plante broyée dans une fiole de 500 ml, renfermant 100 ml d’eau
bouillante. On maintient une ébullition modérée pendant 30 mn, après refroidissement on
filtre et on ajuste à 100 ml.

Dans une série de 10 tubes à essai on verse dans le premier tube 10 ml de décocté en
enlève 1ml en le mais dans le 2eme tube et on ajuste le volume à 10 ml avec de l’eau distillée,
en répète cette opération jusqu’au le 10 tube. Chaque tube est agité pendant 15 secondes. On
laisse reposer 15 mn et on mesure la hauteur de la mousse dans chaque tube [15].

III.6. Mise en évidence des dérivés anthracéniques

On réalise une ébullition au bain-marie de 1 g de la poudre végétale avec 10 ml de

chloroforme .chauffer au bain-marie pendant 3 mn, filtrer à chaud et compléter à 10 ml si
nécessaire. A 1 ml du filtrat ,ajouter 1 ml d’ammoniaque à 9 M .la coloration plus ou moins
rouge indique la présence d’anthraquinone libres [15].

III.7. Mise en évidence des alcaloïdes

On prépare un mélange de 1 g de la poudre végétale avec 10 ml d’acide sulfurique dilué

à 10 % pendant 1. Après une macération de 24 heures. Le macéré obtenu est ensuite complété
à 50 ml avec de l’eau distillé .introduire le macéré en 2 tubes ,on ajoute quelque goutte de
réactif de Valser Meyer pour le tube n 1. La formation d’un précipité rouge révèle la présence
des alcaloïdes. En réalise un autre essai avec le tube n 2 avec le réactif de Dragondorff ce
dernier donne une apparition du précipité dans la présence des alcaloïdes [15].

IV .Préparation des extraits :

IV.1.Préparation du matériel végétal :

La plante récoltée, est lavée puis séchée sous à l'ombre et dans un endroit bien aéré à l'abri de
l’humidité et à température ambiante. Après séchage, les partis aériennes (feuille, tiges) a
été broyée à l’aide d’un mortier sous forme d'une poudre fine qui a servi pour la
préparation des extraits.

IV.2. Extraction des polyphénols de la plante A. campestris:

L’extraction à l’aide d’un appareil de type Soxhlet et une technique couramment

utilisée pour isoler des composés actifs d’origine végétale sans les dégradés.

Des extractions successives par cinq solvants organiques: l’hexane, le dichlorométhane,

chloroforme, méthanol et l’acétate d’éthyle ont été réalisés. Ses solvant sont du moins polaires
au plus polaires [16], les trois solvants les moins polaires (l’hexane, dichlorométhane et
chloroforme) permettent d’extraire les impuretés et la chlorophylle de la plante.

On introduits 100g de la poudre végétale dans une cartouche filtrante ajustée à la

dimension de l’appareillage. Le ballon contient 1000 ml du solvant, chaque solvant est porté à
une extraction durant 48 heures.

Les cinq extraits obtenus par le Soxhlet sont concentrés à l’aide d’un évaporateur rotatif.
Les extrait est conservé dans un lieu sec et à l’obscurité.

Le résumé de l’extraction est schématisé dans l’organigramme suivant :(voir le schéma

d’extraction
 Matériel végétal sec
broyé 100g
(Extraction Soxhet)

Extraction par l’hexane

Concentration à T=40

Résidu végétal sec Filtrat 1 Extrait hexanique

Extraction par dichlorométhane m =1,43 g

Concentration à T=40 °C

Résidu végétal sec Filtat 2 Extrait dichlorométhanique /m=14,175

g
Extraction par chloroforme

Concentration à T=40 °C

Résidu végétal sec Filtrat3 Extrait chloroformique/m=4,117 g

Extraction par methanol

Concentration à T=40 °C

Résidu végétal sec Filtrat 4 Extrait méthanolique /m=17,771 g

Extraction par acétate d’éthyle

Concentration à T=40 °C
Résidu végétal sec Filtrat 5
Extrait d’acétate d’éthyle /m=3,214 g

Plante épuisée

Figure 6 :Extraction des flavonoïdes par appareil de soxhlet

V .Dosage des composés phénolique totaux et Les flavonoides

V. 1.Dosage par Spectrophotomètre (UV)

V.1.a. Dosage des composés phénoliques par la méthode de Folin-ciocalteu :

Le contenu des composés phénoliques de notre extrait est estimé par la méthode de
Folin-ciocalteu[17] .
1ml d'extrait de l'échantillon .5ml du réactif de Folin-ciocalteu (dilué dix fois). 4ml d'une
solution de bicarbonate de sodium (0.7M) .Agiter vigoureusement et puis incuber pendant
2heures à une température ambiante .Lire l'absorbance à 765 nm .
La concentration des polyphénols totaux a été calculée à partir de l’équation de régression
de la courbe d’étalonnage de l’acide gallique (0-200 µg/ml )et exprimée en milligramme
équivalents d’acide gallique par gramme du poids d’extrait (mg EQ/g E ).

V.1.b Dosage des flavonoïdes par la méthode de AlCl3 :

Les flavonoïdes contenus dans l’extrait de la plante d’Artemesia Campestris estimés

par la méthode d'AlCl3 [18] .
1ml d'une solution éthanolique d'AlCl3 (2%) est rajouté à 1ml de l'extrait de la plante
(solution aqueux )
Après 30 minutes d'incubation à une température ambiante, l'absorbance du mélange est lue à
430 nm, la rutine est utilisée comme un standard, la quantité des flavonoïdes est estimée en
mg EQ/g d'extrait sec de la plante. (0-20 µg/ml.Chacune a été préparée dans le méthanol et
exprimée (mg) équivalents de rutine par gramme du poids d’extrait (mg EQ/g E) .

V.2 Dosage des polyphénols par HPLC :

Cette analyse était réalisée par deux appareilles :

V.2.1.1. Dosage par HPLC Agilent technologies - 1260 infinity

L’analyse est réalisée par un HPLC (Agilent Technologies - 1260 infinity) au niveau du
laboratoire de synthèse organique ( Université d’Oran 1).Le besoin de savoir les profils et
d'identifier les composés individuels dans les échantillons exige le remplacement des
méthodes traditionnelles par des techniques séparatives. L’HPLC est sans doute la technique
analytique la plus utile pour caractériser les composés polyphénoliques [19].
V.2.1.2. Principe :
20 μl de chaque extrait ont été injectés sur une colonne de type phase inverse C18, de
dimensions égales à 125 x 4.6 mm. La phase mobile est constituée de trois éluants : l’eau
distillée, méthanol et l’acide acétique (v/v/v/) (50/47/2.5). Le gradient d’élution appliqué est
de type isocratique étalé sur 10 min. Le débit est de 1 ml / min [20]. La détection a été
effectuée par un détecteur UV-Vis à une longueur d’onde égale 254 nm.

V.2.2. Dosage par HPLC Agilent – 1100 ( laboratoire de sureté d’Oran ) :

50μl de chaque extrait ont été injectés sur une colonne de type HBDS HYESIL C18, de
dimensions égales 4.6 mm et porosité de 60%, diamètre de particule égale 5µm .La phase
mobile est constituée de deux éluants : l’eau distillée et méthanol (v/v) (80/20). La détection
a été effectuée par un détecteur a barette de diode variable à une longueur d’onde égale 254
nm.
V.2.3.Expression des résultats :
Les flavonoïdes contenus dans chaque extrait analysé ont été identifiés par la
comparaison des temps de rétention obtenus par ceux des témoins.
VI .Résultât :

Chaque extrait de solvant a été pesé nous avons obtenus les masses suivantes (voir
tableau 12) :

Tableau 12 : les rendements des extraits obtenus .

La masse du filtrat Rendement ( % )

(g)
Flitrat 1 1,43 1,43%

Flitrat 2 14,175 14,17%

Flitrat 3 4,117 4,12%

17.771 17,80%
Flitrat 4
Flitrat 5 3,214 3,21%
VI. 1.Etude phytochimique :

VI.1.1.La caractérisation phytochimique :

Les Résultats des études phytochimiques effectuées sur la plante d' A.campestris sèche
de la région de Djelfa, ont donné les résultats présentés dans le tableau si dessous.

Tableau 13 : Le screening phytochimique de la plante A.campestris.

composé Résultats obtenus

Les Saponosides Apparition d'une mousse qui

persiste. (+)

Formation d'un précipité bleu noir

Les tanins confirmant la présence de tanins galliques
(+)
Une coloration orange ou rouge indique
Les flavonoides la présence de flavones aglycones (+)

Test négatif (-)

Les Anthocyanes
Les dérivés Une coloration rouge indique la présence
anthracéniques d’ anthraquinone libre (+)

Les alcaloides
(-)
Les coumarines
(-)

(+) : test positif , (-) :test négatif

 Selon les résultats , le Screening phytochimique de la plante nous a permis de connaitre les
composants majoritaires présents: les flavonoïdes, les tanins et le dérivé anthracénique et
les saponosides.

Tableau 14 : Réactiona a la cyanidine sur la plante d’Artemisia campestris

plante Observation Couleur Flavonoides

Artémisiacampèstris
( poudre ) (+) Rose-orangée flavones

VI.2 . Dosage des composés phénoliques totaux et des flavonoides :

VI.2.a. Dosage des composés polyphénoliques totaux par la méthode de Follin-ciocalteu :

Les résultats obtenus respectivement par les méthodes de Follin-ciocalteu et AlCl3 sont
illustrés par des graphes 7 et 8

1,2

1 y = 0,004x + 0,025
R² = 0,997

0,8
absorbance

0,6

0,4

0,2

0
0 50 100 150 200 250
concentration d'acide galique en µg/ml

figure 7: la courbe d’étalonnage de l’acide gallique

VI.2.b. Dosage des flavonoides par la méthode de AlCl3 :

0,45
y = 0,019x + 0,02
0,4
R² = 0,997
0,35
0,3
absorbance

0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0 5 10 15 20 25
concentration de rutine en µg/ml

Figure 8:la courbe d’étalonnage de la Rutine

VI.2.c discussion :

Les deux courbes d’étalonnage de l’acide gallique ( y =0.004x +0.025 ;R2= 0.997 )
ainsi que la rutine (y =0.019x +0.02 ; R2 = 0.997 ) prouve que la relation entre la
concentration et l’absorbance est proportionnelle ,donc la loi de Beer Lambert est vérifiée
dans la gamme des concentrations utilisées

Le dosage des composé phénoliques totaux ,selon la méthode décrite par (Adesegun
et al, 2007) montre que la plante A.compestris contient 27.37 mg EQ/g. exprimé en mg
équivalent de l’acide gallique par gramme de poudre sec de la plante .tandis que la quantité
des flavonoides déterminée par la méthode de (Adesegun et al, 2007) est estimée à 4.6 mg
EQ/g ,exprimé en mg équivalent de rutine par gramme de poudre sec de la plante
VI.3. Dosage des polyphénols par HPLC agilent 1100 :
Les chromatogrammes d’HPLC des standards et de l’extrait sont représentés ci-dessous.
VI.3.1.Dosage qualitatif des extraits :

Figure 9 : Chromatogramme d’HPLC de l’acide ascorbique présent dans l’extrait

dichlorique de l’Artemisia Campestris enregistré à 254 nm

Figure 10 : Chromatogramme d’HPLC de la rutine présente dans l’extrait

chloroformique de l’Artemisia Campestris enregistré à 254 nm

Figure 11 : Chromatogramme d’HPLC de l’acide caféique et la quecétine et de la rutine
présente dans l’extrait méthanolique de l’Artemisia Campestris enregistré à 254 nm

Figure 12 :Chromatogramme d’HPLC de l’acide caféique et la quecétine présente dans

l’extrait d’acétate d’éthyle de l’Artemisia Campestris enregistré à 254nm

 Figure 13: Courbe de calibrage de la Rutine par HPLC

figure 14: Courbe de calibrage de la Quercetine par HPLC

figure 15: Courbe de calibrage de l’acide caféique par HPLC

* D A D 1 , 2 7 .0 8 9 (1 .2 m A U ,A p x ) R e f = 2 6 . 9 7 0 &
* q u e r c e t in e 0 . 0 4
N o rm

0 .8

0 .6

0 .4

0 .2

0
200 400 600 800 nm

Figure16 : Spectre UV de la quercetine

 * D A D 1 , 1 5 . 7 9 0 (9 1 . 3 m A U , - ) R e f = 1 5 . 6 3 6 &
* ru t1
N o rm

80

60

40

20

0
200 400 600 800 nm

Figure 17: spectre UV de la rutine

*DAD1, 3.090 (479 mAU, - ) Ref =3.056 & 3.150 of ECH00127.D

*A caf f
Norm

400

300

200

100

200 300 400 500 600 700 800 900 nm

Figure 18 : spectre UV du l’acide caféique

VI.3.2. Dosage quantitatif de l’extrait méthanolique :

Figure 19 : Chromatogramme d’HPLC de La rutine dans l’Artemisia Campestris

enregistré à 254 nm

Figure 20: Chromatogramme d’HPLC de La quercetine dans l’Artemisia Campestris

enregistré à 254 nm
Figure 21: Chromatogramme d’HPLC du l’acide caféique dans l’Artemisia Campestris
enregistré à 254 nm
La comparaison des temps de rétention (Tableau15) des standards avec ceux enregistrés
dans le chromatogramme (Tableau 16) a permet l'identification probable de certains
flavonoïdes dans l’extrait [21].

Tableau 15 :Temps de rétention des flavonoïdes standards.

Temps de rétention (min) Le flavonoïde Standard

25.11 Quercetine
14.27 Rutine
3.54 Acide gallique
8.53 Acide cafeique
Tableau 16 : Temps de rétention des flavonoïdes présents dans les extrait d’A.Campestris

Temps de rétention (min) Le flavonoïde probable

25.11 Quercetine
14.27 Rutine

8.53 Acide caféique

Tableau17 :Teneur en flavonoïdes de l’ extrait methanolique d’A .Campestris

Teneur en polyphénols dans l’extrait méthanolique (mg/ml)

Quercetine 3,48 .10-5
Rutine 1,2 . 10-2
Acide gallique (-)
Acide (-)
ascorbique
Acide cafeique 0.27

Les résultats montrent la présence de la Quercétine, la Rutine et l’acide caféique dans

l’extrait méthanolique d’A.Campestris et la présence de l’acide caféique .
L’analyse quantitative des extraits chloroformique et dichloriqueet l’extrait d’acétate
d’éthyle montre la présence de la quercetine ,l’acide ascorbique, l’acide caféique et la rutine
(tableau 18). Les chromatogrammes sont donnés en annexe.
A la lumière ces résultats nous constatons que l’extrait méthanolique est le plus riche
en produits phénoliques par rapport aux autres extraits.
Tableau 18 : Teneur en polyphénols des extraits d’A .Campestris avec un autre appareillage

HPLC agilent technologie -1260 infinity (voir annexe) tropt

Acide
ascorbique Acide caféique La quercétine La rutine

Extrait
dichlorique 1,16 .10-2 _ _ _
mg/ml
Extrait
chloroformique _ _ _ 6,33 .10-4
mg/ml
Extrait
d’acétate _ 2,04 .10-2 1,41. 10-1 _
D’éthyle mg/ml mg/ml

VII. Conclusion

Le dosage quantitatif des polyphénols totaux, par le réactif de Folin-Ciocalteu a révélé

que l’A. Campestris est riche en polyphénols .
Le dosage quantitatif des flavonoïdes par la méthode d’AlCl3 a révélé que l’A.
Campestris est riche aussi en flavonoides.
L’analyse qualitative et quantitative par HPLC a montré la présence de la rutine.la
quercetine , l’acide caféique et l’acide ascorbique dans les extraits de la plante d’Artemisia
campestris.
Références bibliographique:

[1].Ozanda.(1977). « Flore du Sahara ». Edition du centre national de la recherche

scientifique. Paris.

[2].Quezel et Santa.(1963).« Nouvelle flore de l’Algérie, et des régions désertique

méridionales». Tome II, Edition du centre national de la recherche scientifique. Paris.
[3].Anonyme. Artemisia« Atemisia plante,un article de wekipedia.org» http://Fr.
wekipedia.org/wiki/Artemisia (plante).

[4].Caratini .R. (1971). Bordas encyclopedie.DE Bodas.Belgique.23: 137-195

[5].kim .J.H.,Kim .H.K.,Jeon .S.B et al.(2002).newsesquiterpene-

monoterpenelactone,artemisolide isolated from Artemisia argyi ,tetahedronlett 42:6205-6208.

[6].ferchichi .L .,merza .J.,landream .A., le ray am., legseir .B.,seraphin .

D.(2006).richomme p Occurrence of isocoumarinic and phenolic derivatives

inartemisiacampestrisl.subsp.campestris.biochemsystecol34 :829-832. (2006).

[7].Mamy. (2008). « Plants medicinal », Tout surl’armoise (16-04-2008).

[8].Mucciarelli .M., Caramiello .R., Maffei .M.(1995).«Essential Oils from Some Artemisia
Species Growing Spontaneously in North-West Italy ».Flavour and Fragrance Journal, Vol.
10, 25-32.

[9].Elbahri et al.(1997). Artemisia campestris L : a poisonous plant of north africa.

Vethumantoxicol 39.

[10].Moussaoui .Bilal.(2010).étude de l’effet de l’extrait de la plante médicinale Artemisia

campestris sur les cellules tumorales et son rôle dans la protection du stress oxydatif induit par
le cisplatin. laboratoire de biologie et environnement ; Université de Constantine .

[11].Gurib-Fakim.A.(2006).« Medicinal plants: Traditions of yesterday and drugs of

tomorrow ». Molecular Aspects of Medicine 27, 1-93.
[12].Djeridane .A.,Yousfi .M., Nadjemi .B., Boutassouna .D., Stocker .P., Vidal N. (2006).
Antioxidant activity of some algerian medicinal plants extracts containing phenolic
compounds. J. Food Chem. 97: 654–660.
[13].Wagner .H., Bladt .S.(1996).plant drug analysis. A thin layer chromatography
atlas.2eme édition.Springer- verlag, berlin.

[14].Dubois-Lacaille.M-A.(1983).Les C-Glycosyl flavones de Cerastium arvense

L.(caryophyllacées). Etude chimique et approche pharmacologique.Thèse doct.Es-

Sci.,Université de Dijon.

[15].Karumi .Y, Onyeyile .P.A, Ogugbuaja .VO.(2004). Identification of active principles

of M.balsamina (Balsam Apple) leaf extract.J Med Sci. ; 4(3) : 179-182.

[16].M.D. Luque de Castro, F.Priego-Capote..(2009).Soxhlet extraction: past and present

panacea. J. Chromatography. 1217: 2383-2389.

[17].Adesegun .S. A., Fajana .A., Orabueze .C. I. et Coker .H. A. B. (2007). Evaluation of
antioxidant propreties of Phaulopsis fascisepala C B Cl (Acanthaceae). Evidence based
complementary and alternative medecine., 6 (2) : 227-231

[18].Ayoola .G. A., Ipav .S. S., Solidiya .M. O., Adepoju-Bello .A. A., Coker .H. A. B. et

Odugbemi T. O. (2008). Phytochemical screening and free radical scavenging activities of

the fruits and leaves of Allanblackia floribunda oliv (Guttiferae). International journal of
health research.,1(2) : 81-93.
[19].Gomez-Caravaca .A.M., Gomez-Romero .M., Arraez-Roman .D., Segura-Carretero
.A.,Fernandez-Gutierrez .A. (2006) Advances in the analysis of phenolic compounds in
products derived from bees. J Pharmaceutical and Biomedical Analysis.41: 1220-1234.

[20].Amarowicz .R., Troszynska .A., Shahidi .F. (2005) Antioxidant activity of almond
seed extract and its fractions. J food lipids.12: 344-358
[21].Merken .H.M., Beecher .G.R.(2000).Liquid chromatographic method for the separation
and quantification of prominent flavonoid aglycones.J Chromatography A. 897: 177-184.
Chapitre 3
I.Stress antioxydant :

1. Introduction :

Le terme antioxydant regroupe un très grand nombre de molécules, qui ont la propriété
commune de devenir la cible des radicaux libres, protégeant ainsi nos cellules lors d’une
attaque radicalaire (Mahrour et al ,1998).

Il nous paraît donc important de rechercher des substances et des molécules d’origines
végétales présentant un pouvoir protecteur vis-à-vis du niveau oxydatif cellulaire. En effet, de
nombreuses études ont porté sur les effets cytoprotecteurs de certains composés végétaux
(Bouayed , 2007).

Il a été rapporté que certains antioxydants alimentaires tels que la vitamine C, la

vitamine E et les caroténoïdes fortifient le système de détoxication des granulocytes
(Splettstoesser et Schuff-Werner , 2002 ).

D’autres travaux ont révélé qu’une déficience dans le système redox des granulocytes
contribue fortement dans le dysfonctionnement de leurs propriétés phagocytaires et
bactéricides (Splettstoesser et Schuff-Werner , 2002 ).

La prévention du stress oxydant permet donc un fonctionnement optimal des

granulocytes, et protège ainsi l’organisme contre l’invasion des agents pathogènes et
l’inflammation.

En effet, les granulocytes sont les leucocytes les plus représentatifs des cellules
immunitaires, et ce sont les premières cellules recrutées en cas d’infection (Kowalska et al
2003 ) ( Rinaldiet al, 2007 ). Le dysfonctionnement des granulocytes prédispose le sujet aux
infections et aux inflammations chroniques (Kowalska et al ,2003 ).De nombreuses études
ont relevé que le stress oxydant des granulocytes du sang serait en lien avec des maladies
telles que certaines maladies infantiles, le diabète et l’hypertension (Kowalska et al , 2003 )
(Pitozzi et al ,2003)(Hand et al , 2007)

L’Algérie possède un riche patrimoine de plantes médicinales qui sont prescrites par les
guérisseurs traditionnels pour traiter plusieurs maladies, cardio-vasculaires (Bellakhdar et

al ,1991)(Ziyyatet al,1997)(Eddouks et al ,2002 ).

I. 2. Rappel sur le stress oxydant :

L’oxygène moléculaire dans son état le plus stable est un biradical libre en raison de ses
deux électrons célibataires, de spins parallèles, sur son orbitale externe. La réduction de
l’oxygène se fait préférentiellement par addition d’un seul électron. Dans la cellule, c’est la
voie de réduction univalente de l’oxygène qui existe. Les espèces partiellement réduites de
l’oxygène sont essentiellement d’origine enzymatique et découlent de plusieurs sources,
notamment des réactions d’oxydoréductions enzymatiques le long de la chaîne de transfert
des électrons des mitochondries. En effet, compte tenu de l’intense activité de la chaîne
respiratoire mitochondriale (où 85% de l’oxygène sont métabolisés) la fuite des électrons
d’origine mitochondriale semble être la source majoritaire des espèces dérivées de l’oxygène
devançant les autres sources telles que la NADPH oxydase membranaire (hormis lors de
l’explosion oxydative des cellules phagocytaires activées) et la xanthine oxydase. Les espèces
dérivées de l’oxygène sont beaucoup plus réactives que l’oxygène qui leur a donné naissance
et sont appelées par conséquent les espèces réactives de l’oxygène (ERO). Les ERO
comprennent aussi bien les espèces radicalaires libres (les oxyradicaux) que les espèces non
radicalaires, toutes deux dérivées de l’oxygène.

NADPH
+ • +
NADPH + O2 NADP + 2 O2  + H
oxydase

Les oxyradicaux sont des radicaux libres « centrés » sur l’oxygène, c'est-à-dire des
espèces radicalaires possédant un électron célibataire sur un atome d’oxygène. La tendance
naturelle des électrons non appariés (célibataires) à interagir avec les électrons de molécules
ou d’atomes voisins, pour reformer des liaisons chimiques covalentes, confère respectivement
aux radicaux libres une très grande instabilité et une extrême réactivité chimique.

Les espèces non radicalaires ne possèdent pas d’électrons célibataires, c’est le cas de
l’oxygène singulet1O2qui est très instable et extrêmement réactif, ou d’autres molécules telles
que le peroxyde d’hydrogène H2O2 et l’acide hypochloreux HOCl qui peuvent devenir
toxiques via d’autres réactions chimiques ( Gomes et al , 2005) .

L’oxygène est essentiel à la survie des cellules aérobies, paradoxalement cette

molécule peut présenter des effets toxiques via ces dérivés partiellement réduits. En faible
concentration, les ERO ne sont pas toxiques et sont essentielles à la vie cellulaire en
intervenant positivement dans plusieurs processus physiologiques tels que la signalisation
cellulaire, la régulation cellulaire, la régulation de la réponse immunitaire et la défense contre
les agents infectieux ( Gomes et al , 2005)( Tezel G;2006)( Valko et al , 2007 ). La cellule
dispose de mécanismes protecteurs capables de contrer l’action oxydante des ERO, cependant
lorsque leurs productions excèdent les capacités de détoxication cellulaires, le déséquilibre de
la balance entre la production des ERO et la capacité antioxydante de la cellule à empêcher
les lésions oxydatives provoque un stress cellulaire appelé stress oxydant ou stress oxydatif.
Les ERO possèdent donc un double effet qui relève de leurs taux de production. Au cours des
réactions d’oxydoréductions du stress oxydant, les oxyradicaux attaquent les biomolécules
(ADN, protéines, lipides, sucres) et provoquent des dommages cellulaires parfois
irréversibles. Plusieurs auteurs rapportent que les lésions oxydatives sont impliquées dans
plusieurs maladies aiguës ou chroniques telles que le cancer, le diabète, les maladies
neurodégénératives, l’athérosclérose, etc… Selon le type de stress oxydant impliqué, les
maladies peuvent être divisées en 2 groupes: le premier groupe implique les maladies
caractérisées par le stress oxydant d’origine mitochondriale telles que le cancer et le diabète.
Le second groupe comprend les maladies caractérisées par les conditions oxydatives
inflammatoires et une activité plus accrue soit de la NAD(P)H oxydase (entraînant
l’athérosclérose et l’inflammation chronique), soit de la xanthine oxydase impliquée dans
l’ischémie( Hong H, Liu GQ , 2004) ,(Judge et al ; 2005),( Katalinic et al ,2006) ,( Pak et
al ,2006) ,(Valko et al ,2007 ) .

Les radicaux libres qui interviennent dans le stress oxydant ont la particularité d’avoir
un électron célibataire sur un atome d’oxygène. La dégradation oxydative des substrats
biologiques par ces oxyradicaux est à l’origine à de nouveaux radicaux libre dits secondaires.

Ces radicaux libres secondaires qui se forment lors des réactions en chaînes peuvent aussi
bien être des oxyradicaux (RO2· et RO·).

Un système biologique sain dépend de l’équilibre entre l’oxydation et l’antioxydation

appelé l’homéostasie redox. Dans les organismes vivants, l’homéostasie est maintenue par des
mécanismes appelés « régulateurs redox » qui contrôlent le statut redox in vivo et protègent
ainsi les organismes vivants contre le stress oxydant ( Valko et al , 2007 ) ,(Droge W , 2002)

Le système cellulaire de défense contre les effets délétères des ERO est composé de
protecteurs endogènes et exogènes. Le mécanisme endogène implique des antioxydants
enzymatiques et non enzymatiques qui constituent la lignée de protection propre à la cellule
contre les composantes nocives du stress oxydant. Les antioxydants d’origines exogènes sont
essentiellement apportés au corps humain par l’alimentation. Les antioxydants naturels
originaires de plantes alimentaires ou médicinales présentent de nos jours un intérêt sanitaire
grandissant. Plusieurs études épidémiologiques et de nombreuses recherches scientifiques ont
mis en évidence le pouvoir préventif d’antioxydants naturels contre l’apparition et l’évolution
de certaines maladies liées au stress oxydant. Les antioxydants naturels doivent leur
importance à leur efficacité par rapport à leurs homologues synthétiques et surtout à leur
origine naturelle contrairement aux antioxydants synthétiques qui sont potentiellement
dangereux pour la santé humaine (Ratnam et al , 2006 ) (Sivapriya et Srinivas , 2007)
( Wong et al ,2006 ) .

Un défaut d’équilibre entre la production des radicaux libres et les mécanismes de

défense constitue un stress oxydant. Le stress oxydatif a été mis en cause dans la pathogenèse
de nombreuses maladies humaines, l'utilisation des antioxydants en pharmacologie est donc
beaucoup étudiée pour traiter notamment les accidents vasculaires cérébraux et les maladies
neurodégénératives tel que la maladie d’Alzheimer, la sclérose latérale amyotrophique (SLA)
et la maladie de Parkinson (Desport et Couratier , 2002 )

I.3. Estimation du pouvoir antiradicalaire par la méthode du DPPH

I.3.1.Principe:
Le DPPH est un radical libre stable violet en solution, il présente une absorbance
caractéristique dans un intervalle compris entre 512 et 517 nm, cette couleur diaprait
rapidement lorsque le DPPH est réduit en diphényle picryl hydrazine par un composé à
propriété antiradicalaire, entrainant ainsi une décoloration. L’intensité de la couleur est
proportionnelle à la capacité des antioxydants présents dans le milieu à donner des protons
(Sanchez-Moreno, 2002).
On peut résumer la réaction sous la forme de l’équation de DPPH :

D P P H* + ( A H ) n DP P H- H + ( A* )n

Où: (AH) représente un composé capable de céder un hydrogène au radical DPPH (violet)
pour le transformer en diphényle picryl hydrazine (jaune) (Brand-William et al,1995).
I.3.2. Mode opératoire :
I.3.2.1. Préparation de la solution de DPPH• : Préparation d’une solution à 0,040 mg/ml.

I.3.2.2. Préparation de la gamme des témoins :

Les témoins suivants ont été testés : acide ascorbique, acide gallique, quercétine,
isoquercetine .Gamme de concentration variant de 0,20 à 10 µg/ml de méthanol

I.3.2.3. Préparation des extraits végétaux :

Gamme de concentration variant de 0,2 à 20 µg/ml de méthanol.

I.3.2.4. Préparation des essais :

Chaque essai est réalisé en double à l'abri de la lumière. Dans chaque tube à

Hémolyse , introduire dans l'ordre :

- 500 µl de chaque essai

- 2500 µl ml de solution de DPPH•

Un contrôle est effectué en introduisant 500 µl de méthanol avec 2500 µl de DPPH•.

Incubation pendant 1h à température ambiante et à l’abri de la lumière.

Lecture des absorbances se fait au spectrophotomètre à 517 nm.

I.3.2.4.Expression des résultats :

 L'activité anti-radicalaire est exprimée en pourcentage d'inhibition selon l'expression

suivante :

′ ô −
% = ×
ô

Abs contrôle = Absorbance DPPH• + méthanol

Abs essai = Absorbance DPPH•+ essai

 Calcul de la CI50 : La CI50 est calculée à partir de la courbe donnant l'activité anti-
radicalaire en % d'inhibition en fonction de la concentration en µg/ml.
II. Activité antimicrobienne :

II.1. Effet antimicrobien :

Ces dernières années, il y a eu un grand intérêt pour la découverte de nouveaux agents
antimicrobiens, due à une augmentation alarmante du taux des infections avec les
microorganismes résistant aux antibiotiques .Une des approches courantes pour la recherche
des substances biologiquement actives est le criblage systématique des micro-organismes ou
les plantes, qui sont des sources de beaucoup d'agents thérapeutiques utiles.
Il a été rapporté que les extraits de plantes et beaucoup d’autres préparations
phytochimiques riches en flavonoïdes ont possédé une activité antimicrobienne (Tim et
al,2005). Grâce à leur structure caractérisée par la présence de groupe phénolique, et d’autres
fonctions chimiques, les flavonoïdes sont considérés de très bons agents antimicrobiens
(Harborne et Williams , 2000). De nombreuses études ont rapporté les activités
antimicrobiennes des flavonoïdes. (Haraguchiet al ,1998 ) (Iinuma et al,1994) (Iniesta et
al ,1990). L’activité antifongique des flavonoïdes est aussi établie, une étude faite sur
Dianthus caryophyllusa montré l’efficacité de flavonoïde glycoside, sur des souches
fongiques (Galeotti et al , 2008).

II.2. Mécanisme d’effet antimicrobien des polyphénols :

Il est sans doute très complexe, peut impliquer multiples modes d'actions tels que :
l'inhibition des enzymes extracellulaires microbiennes, la séquestration de substrat nécessaire
à la croissance microbienne ou la chélation de métaux tels que le fer, l’inhibition du
métabolisme microbien (Daglia M , 2011), dégradation de la paroi cellulaire, perturbation de
la membrane cytoplasmique, se qui cause une fuite des composants cellulaires, l’influence de
la synthèse de l'ADN et l'ARN (Zhang et al,2009), des protéines des lipides, et la fonction
mitochondriale (Balentine et al,2006), ainsi que la formation des complexes avec la paroi
(Gangoué piéboji , 2007).
Ces mécanismes ne sont pas des cibles séparées, certains peuvent être comme
conséquence d'un autre mécanisme. Le mode d'action des agents antimicrobiens dépend
également du type de micro-organismes et à l'arrangement de la membrane externe (Shan et
al , 2007).
II.3. Méthode et matériel

II.3.1 Matériel végétal :

La plante récoltée, est lavée puis séchée sous à l'ombre et dans un endroit bien aéré à
l'abri de l’humidité et à température ambiante. Après séchage, les partis aériennes (feuille,
tiges) a été broyée à l’aide d’un mortier sous forme d'une poudre fine qui a servi pour la
préparation des extraits

II.3-2 matériel de laboratoire :

II.3-2-1 . les souches bactériennes utilisées :

II.3.2.1.1. Staphylococcus aureus :

Les staphylocoques sont des cocci à gram positif qui tendent à se grouper en amas
(Nauciel et Vildé , 2005) irrégulier à la façon d’une grappe de raisin (Avril, 2000).
Staphylococcus aureus est un germe aérobie - anaérobie facultatif (Avril, 2000), doit son non
d’espèce à l’aspect pigmenté de ses colonies. Il tient une place très importante dans les
infections communautaires et nosocomiales, possède une coagulase, ce qui le distingue de la
plupart des autres espèces de staphylocoques. La bactérie est très répandue chez l’homme et
dans de nombreuses espèces animales. Chez l’homme, environ un tiers des sujets sont des
porteurs sains qui hébergent la bactérie au niveau des muqueuses et des zones cutanées
humides. Il développe rapidement des résistances aux antibiotiques et les souches
hospitalières ne sont souvent sensibles qu’aux glycopeptides (Nauciel et Vildé ,2005).

II.3.2.1.2. Pseudomonas aeruginosa:

Le genre pseudomonas est fait de bacilles mobiles aérobies stricts, se cultive facilement
sur les milieux usuels. Pseudomonsa aeruginosa (ou bacille pyocyanique) se caractérise par la
pigmentation bleu-vert de ses colonies. (Nauciel et Vildé ,2005). C’est une bactérie ubiquiste
qui vit normalement à l’état de saprophyte dans l’eau et le sol humide ou sur les végétaux.
Cette bactérie peut vivre en commensale dans le tube digestif de l’homme et des divers
animaux. Considéré comme une bactérie pathogène opportuniste c’est le germe-type des
infections hospitalières ou nosocomiales (Avril, 2000).
II.3.2.1.3. Escherichia coli :

C’est l’espèce dominante de la flore aérobie du tube digestif. Escherichia coli est
habituellement une bactérie commensale. Elle peut devenir pathogène si les défenses de l’hôte
se trouvent affaiblies ou si elle acquiert des facteurs de virulence particuliers (Nauciel et
Vildé , 2005). Le groupe Klebsiella, Enterobacter, Serratia, dit K.E.S, sont rassemblés des
enterobacteriaceae qui ont en commun les caractères suivants :
La réaction de Voges-Proskauer (VP) est généralement positive
Ce sont des bactéries pathogènes
Ces espèces sont souvent multi-résistantes aux antibiotiques (Avril, 2000).

II.3-2-2. Les souches fongique utilisées :

- Candida albicans :

Levure non pigmentée, non capsulée, à bourgeonnement multiple et formant un pseudo

mycélium et du mycélium vrai. Saprophyte endogène de la lumière intestinale humaine et des
cavités génitales par contiguïté (femme). (Duarte et al., 2005)

II.3-2-3.Origine des souches microbiennes testées :

II.3.2.3.1. Souches bactériennes :

Nous avons testé l’activité antibactérienne des trois concentrations de l’extrait

méthanol/eau d’Artemisia campestris avec trois souches bactériennes :

 Staphylococcus aureus ATCC6538

 Pseudomonas aeruginosa ATCC14028
 Escherichia coli ATCC25922

Les caractéristiques de différentes espèces bactériennes sont résumées dans le tableau 18

II.3.2.3.2. Souche fongique

Candida albicans ATCC10231, est une espèce de levure. La caractéristique de cette espèce
est résumée dans le tableau 19.
Tableau 19 :Principales caractéristiques des souches bactérienne testées (Fauchère et Avril

2002).

Famille Micrococcaceae Enterobacteriaceae Pseudomonadaceae

Genres et espèces Staphylococcus Echerichia coli Pseudomonas
aureus aeruginasa
Origine ATCC6538 ATCC25922 ATCC14028
Gram + - -
Formes et mobilité Cocci Immobile Bacille Mobille Bacille Mobille
Caractères Aérobie facultatif Aérobie facultatif Aérobie strict oxydase+
biologiques catalase+, oxydase- oxydase-, lactose+,
coagulase+ indole+
Habitat Peau et muqueuses. Tube digestif. Commensale des
téguments et des
muqueuses de l’homme
et des animaux.
Pouvoir Infection pyogènes Infections urinaires et Infections nosocomiales.
pathogène graves. des gastro-entérites
infantiles.

. Tableau 20 :Principales caractéristiques de la souche fongique testée

Genres et espèces Candida albicans

Origine ATCC10231
Morphologie Levures ovoides ou rondes (3 à 6m sur 6 à 10m) à bourgeonnement
multilatérale.
Colonie blanche, crémeuse, lisse.
Habitat Tube digestif de l’homme, des mammifères et des oiseaux.
Pouvoir pathogène Candidoses superficielles.

ATCC : American Type Culture Collection

Figure 22 :Staphylococcus aureus
Figure 23 : Escherichia coli
Figure 24 : Pseudomonas aeruginasa
Figure 25 : Candida albicans
II.4. Test de l’activité antimicrobienne :

II.4.1. Milieu de culture:

Nous avons utilisé le milieu de culture gélose de Mueller-Hinton pour contrôler la

pureté des souches.

II.4.2. Conservation des cultures microbiennes :

Les trois souches bactériennes sont conservées dans des tubes de gélose nutritive inclinée
à une température de 4°C. Elles sont repiquées sur un nouveau milieu tous les trois mois.

L’espèce levure forme est conservée dans des tubes de PDA gélosé incliné ou bien sur
milieu Sabouraud , à une température de 4°C.

II.4.3 .Milieux pour les cultures bactériennes :

Les bactéries ont besoin pour se développer d’un milieu nutritif plus on mois
spécifique et comportant les éléments suivants : carbone, azote organique, minéraux et des
facteurs de croissance.

N. B: Tous les milieux sont stérilisés par autoclavage à 120°C pendant 30 minutes.

II.4.4. Préparation des dilutions :

Une solution mère extraite de la plante d’Artemisia campestris est préparée en

introduisant 0,5 g de l’extrait dans 10 ml de méthanol. Les différentes concentrations utilisées
sont dans le tableau suivant :

Tableau 21: Les différentes concentrations utilisées dans l’activité antimicrobienne

Concentrations (mg/ml)
C1 50
C2 25
C3 12.5
II.4.5. Préparation des précultures microbiennes :

Les souches bactériennes conservées ont été ensemencées dans des tubes à essai
contenant du bouillon nutritif puis incubées à 37°C pendant 24 heures, afin de stimuler leur
développement. Après croissance bactérienne, ces souches ont été repiquées sur une gélose
nutritive coulée en boîte de Pétri puis incubées à 37°C pendant 24 heures

(Neggaz .S. 2010 )

II.4.6. Teste de l’activité antimicrobienne :

L’activité antimicrobienne des trois concentrations de l’extrait méthanolique

d’Artemisia campestris est testée sur trois souches bactériennes et une souche fongique par la
méthode de diffusion en milieu gélosé ( Neggaz .S, 2010 )

II.4.6.1 Recherche de l’activité antibactérienne :

II.4.6.1.a. Préparation de la suspension bactérienne :

Chaque espèce bactérienne est ensemencée sur une gélose nutritive en boîte de Pétri.
Après 24h d’incubation à 37°C, 3 à 4 colonies bien isolées sont prélevées et émulsionnées
dans 10 ml de bouillon nutritif ( Neggaz .S, 2010 )

II.4.6.1.b. Ensemencement du milieu de culture en boîtes de Pétri et dépôt des disques :

On coulés dans des boîtes de Pétri de 90 mm de diamètre, 9 ml de gélose Muller

Hilton en surfusion à 45°C.L’épaisseur du milieu doit être de 4mm car une couche plus
fine augmente la taille de la zone d’inhibition ce qui peut donner un faux résultat.

1ml d’inoculum bactérien standardisé est aseptiquement déposé et étalé sur la surface
du milieu de Muller Hilton à l’aide d’un étaloir. Un mouvement circulaire en forme de
huit permet de bien répartir la suspension bactérienne sur toute la surface du milieu. Le
liquide en excès est aspiré avec une pipette Pasteur stérile ( Neggaz .S, 2010 )

A l’aide d’une pince stérile, 3 disques de 6mm de diamètre, imprégnés de 10l des
trois concentrations de l’extrait méthanolique d’Artemisia campestris à tester, sont
aseptiquement déposé sur la surface du milieu ensemencé (03 boîtes pour chaque espèce
bactérienne).
 Les disques déposés dans les cultures témoins (03 boîtes) sont imprégnés
uniquement du solvant (méthanol). Les boîtes sont incubées à 37°C pendant 24h
( Neggaz .S, 2010 )

III.Résultat et discussion :

III.1 activité antioxydante :

Le test se fais sur l’extrait méthanolique, l’extrait d’acétate d’éthyle et

chloroformique .

tableau 22 : Témoins antioxydants

Témoins CI50 en µg/ml

Acide ascorbique 3,11

Acide gallique 1,15

Quercétine 1,85

Isoquercétine 3,08
 20
y = 0,645x + 5,614
18
R² = 0,975
16

14
inhibition en %

12

10

0
0 5 10 15 20 25
concentration d'extrait chloroformique en µg/ml

Figure 26: courbe montre l’absorbance des différentes concentration du l’extrait

chloroformique

100
y = 9,278x + 0,613
90
R² = 0,980
80
70
inhibition en %

60
50
40
30
20
10
0
0 2 4 6 8 10 12
concentration d'extrait methanolique en µg/ml

Figure 27 : courbe montre l’absorbance des différentes concentration du l’extrait

méthanolique
 12

10 y = 2,25x - 3,666
R² = 0,980

8
inhibition en %

0
0 1 2 3 4 5 6 7
concentration d'extrait d'acetate d'ethyle en µg/ml

Figure 28 :courbe montre l’absorbance des différentes concentration du l’extrait

D’acétate d’éthyle

Les résultats de l’activité antiradicalaire des étalons sont regroupés dans le tableau
21.Les figures 25, 26, 27, présentent la courbe d’étalonnage des extraits
L’extrait methanolique a une forte activité radicalaire dont la valeur de la concentration à
50% d’inhibition est de CI50 = 5.3 µg/ml, cependant la vitamine C présente un CI50 = 3.11
µg/ml ce résultat est aussi proche à l’isoquercetine (3,08).
Par ailleurs ; l’extrait d’acétate d’éthyle a une faible activité antiradicalaire CI50 =

23.85µg/ml, l’extrait chlooformique possède aussi une très faible activité antiradicalaire ,CI50
= 92,6 µg/ml par rapport aux étalons.
III.2. activité antimicrobienne :

La lecture des résultats est effectuée en fonction de l’existence ou non des zones
d’inhibition. La sensibilité des espèces est estimée par la mesure du diamètre de zone
d’inhibition autour des disques imprégné de différentes concentrations d’extrait méthanolique
de la plante (Bonnet et al , 2011) Trois cas sont possibles :

Les résultats des tests antimicrobiens sont regroupés dans le tableau 23 et illustrés par les
figures 28,29,30,31

Souche sensible : la dimension du diamètre de zone inhibition supérieur ou égale à 10 mm

Souche limite : la dimension du diamètre de zone inferieur à 10 mm

Souche résistante : absence d’inhibition

Tableau 23 : Les résultats des tests antimicrobiens

Concentrations C1 C2 C3

souche 50 mg/ml 25 mg/ml 12,5 mg/ml Témoin

Staphylococcus aureus 15 mm 8 mm 8 mm 6 mm

Echerichia coli 10 mm 10 mm 10 mm 6 mm

Pseudomonas 6 mm 6 mm 6 mm 6 mm
aeruginasa

Candida albicans 10 mm 6 mm 8 mm 6 mm

Le résultat des tests d’activités antibactériennes montre que Staphylococcus aureus est
sensibles à l’extrait méthanolique de la plante avec une zone d’inhibition de 15 mm. Par
contre pour Escherichia coli et Candida albicans la zone d’inhibition est 10 mm pour
chacune ; tandis que Pseudomonas aeruginasa a montré une résistance a cet extrait. Le
témoin (méthanol) n’a exercé aucune activité inhibitrice, les colonies se développent
normalement en sa présence, donc c’est un bon diluant pour cet extrait.
 On resume que l’extrait méthanolique est actif contre Staphylococcus aureus
,moyennement actif contre Escherichia coli et Candida albicans ,et aucune inhibition contre
Pseudomonas aeruginasa
C1 Témoin

C2 Témoin

C3 Témoin

Figure 29 : Inhibition de la croissance microbienne de Staphylococcus aureus ATCC6538 en

présence des concentrations C1, C2 et C3, après 24 h d’incubation à 37°C.
 C1 Témoin

C2 Témoin

C3 Témoin

Figure 30 :. Inhibition de la croissance microbienne de Pseudomonas aeruginasa

ATCC14028 en présence des concentrations C1, C2 et C3, après 24 h d’incubation à 37°C.
C1 Témoin

C2
Témoin

C3
Témoin

Figure 31 : Inhibition de la croissance microbienne de Echerichia coli ATCC25922 en

présence des concentrations C1, C2 et C3, après 24 h d’incubation à 37°C.
C1 Témoin

C2 Témoin

C3 Témoin

Figure 32 : Inhibition de la croissance microbienne de Candida Albicans ATCC10231 en

présence des concentrations C1, C2 et C3, après 24 h d’incubation à 37°C
IV. Conclusion :

Les résultats du test au DPPH ont montré que le extrait méthanolique a une activité anti-
radicalaire forte que l’ extrait d’acétate d’éthyle et l’extrait chloroformique .
L’activité antimicrobienne a été évaluée sur trois souches bactériennes et une souche
fongiques, par la méthode de diffusion sur milieu gélosé. Les résultats biologiques obtenus
tout au long de ce test ont montré que l’ extraits méthanolique de la plante d’A.Campestris a
une activité antibactérienne importante contre Staphylococcus aureus, et moyennement actif
contre Escherichia coli et Candida albican,et aucune inhibition contre Pseudomonas
aeruginasa
Références bibliographiques :

Avril, J.L., Dabernat, H., Denis, F., Monteil, H. (2000) Bactériologie clinique. 3ème édition
Ellipses (Ed) Paris, 602 p

Balentine, C.W., Crandall, P.G., O’Bryan, C.A., Duong, D.Q., Pohlman, F.W.(2006). The
preand post-grinding application of rosemary and its effects on lipid oxidation and color
during storage of ground beef. Meat Science, 73: 413-421.

Bellakhdar J, Claisse R, Fleurentin J et al.(1991).Repertory of standard herbal drugs in the

Moroccan pharmacopoeia.J of Ethnopharmacol 35: 123-143.

Bonnet.R, Caron.F, Cavallo.J.D., Chardon.H., Chidia.C., Courvalin.P., Drugeon.H.,

Dubreuil.L., Jarlier .V., Jehl.F., Lambert.T., Leclercq.R., Nicolas-chanoine.M.H.,
Plesiat.P., Ploy.M.C., Quentin.C., Soussy.C.J., Varon.E., .Weber.P . (2011). Revue
Francophone des Laboratoires . 434: 45-56

Bouayed , J.(2007) Etude de la corrélation anxiété / statut oxydatif des granulocytes chez la
souris et évaluation des effets antioxydants / neuroactifs des polyphénols extraits de Prunus
domesticaL. Thèse de Doctorat. Université Paul Verlaine-Metz.

Brand-Williams W., Cuvelier M.E., and Berset .C. (1995). Use of free radical method to
evaluate antioxidant activity. Lebensm.Wiss. Technol. 28: 25-30.

Daglia M.( 2011). Polyphenols as antimicrobial agents.Current Opinion in Biotechnology.

23: 1-8.

Desport, J.C., Couratier, P.(2002)Stress oxydant et maladies neurodégénératives. Nutrition

cliniqueet métabolisme16, pp 253-259.

Droge W. (2002).Free radicals in the physiological control of cell function. Physiol. Rev.;82,
47–95.

Duarte, M. C.T., Figureueira, G.M., Sartoratto, A., Rehder, V.L.G, Delarmelina, C.

(2005) Anti-Candida activity of Brazilian medicinal plants. J Ethnopharmacology. 97 : 305–
311.
Eddouks M., Maghrani M., Lemhadri A et al .(2002).Ethnopharmacological survey of
medicinal plants used for the treatment of diabetes mellitus, hypertension and cardiac diseases
in the south-east region of Morocco (Tafilalet).J of Ethnopharmacol82: 97–103.

Fauchère., Avril.J.L . (2002). Bactériologie générale et médicale. Ed. Ellipses, Paris. P

365
Galeotti F., Barille E., Curir P., Dolci M., and Lanzotti V. (2008). Flavonoids from
carnation(Dianthus caryophyllus) and their antifungal activity. Phytochemistry.letters. 1: 44-
48.
Gangoué piéboji, J. (2007) caractérisation des beta-lactamases et leur inhibition par les
extraits de plantes médicinales. Thèse de doctorat. Liège

Gomes A, Fernandes E, Lima JLFC.(2005).Fluorescence probes used for detection of

reactive oxygen species.J. Biochem. Biophys. Methods,;65:45–80.

Hand WL., Hand DL., Vasquez Y. (2007). Increased polymorphonuclear leukocyte

respiratory burst function in type 2 diabetes. DiabetesRes. Clin. Pr.;76:44–50.

Haraguchi H., Tanimoto K., Tamura Y., MizutaniK.,andKinoshito T. (1998). Mode of

antibacterial action of retrochalcones from Glycyrrhizainflata. Phytochemistry.48: 125-129.

HarborneJ.B., and Williams C.A. (2000). Advances in flavonoid research since 1992
Phytochemistry.55: 481-504
Hong H ., Liu GQ.(2004).Protection against hydrogen peroxide-induced cytotoxicity in
PC12 cells by scutellarin. Life Sci.;74:2959–2973.

Iniesta-Sanmartin E., Barberan F.A.T., Guirado .A., and Lorents F.T.(1990).

Antibacterial flavonoids from Helichrysumpicardii and H. italicum. Planta Medica. 56: 648-
649.
Judge S., Jang YM., Smith A., Hagen T., leeuwenburgh C.(2005). Age-associated
increases in oxidative stress and antioxidant enzyme activities in cardiac
interfibrillarmitochondria: implications for the mitochondrial theory of aging. Faseb
J.;2622–2642.

Katalinic V, Milos M, Kulisic T, Jukic M .(2006). Screening of 70 medicinal plant extracts

for antioxidant capacity and total phenols. Food Chem ; 94:550–557.
Kowalska MG., Kowalska H., Zawadzka-Glos L., Debska M., Szerszen´ E., Chmielik
M., WasikM.(2003)Dysfunction of peripheral blood granulocyte oxidative metabolism in
children with recurrent upper respiratory tract infections. International Journal of
PediatricOtorhinolaryngol.;67:365–371.

Iinuma M., Tsuchiya H., Sato M., Yokoyama J., Ohyama M., Ohkawa Y., Tanaka T.,
Fujiwara S., and Fujii T. (1994). Flavanones with antibacterial activity against
Staphylococcus aureus.J. Pharm. Pharmacol. 46: 892-895

Mahrour, A., Lacroix, M., Nketsa-Tabiri, j., Calderon, N. 1"3, R., Gagnon, M.,
(1998).antioxydant proprieties of Natural substancesinirradiatedfreshpoultry. Radiation
Physics and Chemistry, Volume 52, pp 77-80.

Neggaz .S., thèse magister. (2010). Université D’Oran .Analyse chromatographiques et

spectroscopiques des composés antimicrobiens d’une espèce de terfèze : tirmaniapinoyi
(maire).46-106

Nauciel. C., and Vildé J.L. (2005). Bactériologie médicale, 2èmeEd. Masson . Paris. pp: 5-
10.

Pak .J.H., Kim .T., Kim .M.J., Kim .J.Y., Choi .H, Kim . S.A., Tchah .H . (2006).Reduced
expression of 1-cysperoxiredoxin in oxidative stress-induced cataracts. Exp. Eye
Res.;82:899–906.

Pitozzi .V., Giovannelli . L., Bardini G., Rotella .C.M., Dolara .P.(2003). Oxidative DNA
damage inperipheral blood cells in type 2 diabetes mellitus: higher vulnerability of
polymorphonuclear leukocytes. Mutation Research.;529:129–133.

Ratnam.D.V., Ankola .D.D., Bhardwaj. V., Sahana .D.K., Kumar .M.N.V.R .(2006). Role
of antioxidants inprophylaxis and therapy: A pharmaceutical perspective. Journal of
Controlled Release.;113:189–207.

Robert- Dernet .S .(1995) .« Antibiotique et antibiogrammes » .Ed. Vigot. Paris. P 233

Rinaldi .M., Moroni .P., Paape . M.J., Bannerman .D.D .(2007). Evaluation of assays for
the measurement of bovine neutrophil reactive oxygen species. Vet.
Immunol.Immunopathol.;115:107–125.
sanchez-Moreno C. (2002). Methods used to evaluate the free radical scavenging activity in
foods and biological systems. Int. J. of FoodsSci. Tech. 8: 121-137

Shan .B .,Cai ye .Z. ,Broks . J.D .,Corke .H .(2007). Antibacterial activity of dietary spice
and medicinal herb extracts .international food microbiology. 117 : 112-119

Sivapriya .M., Srinivas .L .(2007). Isolation and purification of a novel antioxidant protein
from the water extract of Sundakai (Solanumtorvum) seeds. Food Chem;104:510–517.

Splettstoesser .W.D., Schuff-Werner .P .(2002). Oxidative stress in phagocytes-“The enemy

within”. Microscopy research and technique.;57:441–445.

Tezel .G .(2006). Oxidative stress in glaucomatous neurodegeneration: Mechanisms and

consequences. Progress in Retinal and Eye Research.;25:490–513.

Tim .C.T.P., and Andrew J. L . (2005). Antimicrobial activity of flavonoids.Int. J.

Antimicrob.Ag.26:343–356

Valko .M., Leibfritz .D., Moncol .J., Cronin .M.T.D., Mazur .M., Telser .J .(2007). Free
radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease. The
International Journal of Biochemistry & Cell Biology.;39:44–84.

Wong .C., Li .H., Cheng .K., Chen .F. (2006).A systematic survey of antioxidant activity of
30 Chinese medicinal plants using the ferric reducing antioxidant power assay. Food
Chem.;97:705–711.

Zhang .Y., et al .(2009) Intrinsic histone-DNA interactions are not the major determinant of
nucleosome positions in vivo. Nat StructMolBiol16(8):847-52
Ziyyat .A., Legssyer .H., Mekhfi .H et al .(1997). Phytotherapy of hypertension and diabetes
in oriental Morocco.J of Ethnopharmacol 58: 45–54.
 Conclusion Générale et Perspective

L’idée directrice de notre étude a consisté à extraire les différents produits actifs
d’Artemesia campestris provenant de la région de Djelfa à déterminer ses propriétés physico-
chimiques, à doser par chromatographie HPLC et spectroscopie et à évaluer in
vitrosespropriétés antimicrobiennes vis-à-vis de différentes espèces microbiennes, ainsi que
son activité anti-oxydante.
De l’analyse bibliographique, il ressort que cette plante, appartenant à la famille des
Asteraceae (Composées) porte de nombreux synonymes végétaux.

Un screening phytochimique de la plante nous a permis de connaitre les composés

majoritaires de type flavonoïdes.

L’extraction de ces derniers par la méthode croissante de polarité des solvants

(hexane_ acétate d’éthyle) nous un permis une bonne séparation des produits de type
flavonols et flavones isolés pour la première fois à partir de cette espèce.

En effet les résultats de l’analyse qualitative et quantitative obtenus à l’aide de

l’application conjointe des techniques chromatographiques ;Méthode spectroscopique et
HPLC révèlent que l’extrait méthanolique étudié est le plus riche en composés phénoliques :
contient de la quercetine, acide caféique, et la rutine.

Le dosage des composé phénoliques totaux selon spectroscopique (UV) de la plante

A.compestris contient 27,37 mg EQ/g. exprimé en mg équivalent de l’acide gallique par
gramme de poudre sec de la plante.tandis que la quantité des flavonoides est estimée à 4,6 mg
EQ/g ,exprimé en mg équivalent de rutine par gramme de poudre sec de la plante.

Les tests d’activité biologique, réalisés in vitro, ont permis d’évaluer l’action de
l’extrait méthanolique à différentes concentrations sur trois espèces bactériennes et une
levure par la méthode de diffusion en milieu solide. La présence de zones d’inhibition
obtenues indique que ces polyphénols ont une activité biologique sur tous les micro-
organismes testés et leur pouvoir antimicrobien varie selon sa concentration.

Ces expériences révèlent une grande sensibilité de Staphylococcus aureus

ATCC6538 et de Escherichia coli ATCC25922 vis-à-vis des produits phénoliques par rapport
aux autres germes.

En outre, les résultats de l’évaluation de l’activité anti-oxydante des extraits par ajout
de doses croissantes de l’extrait méthanolique de la plante A. campestriset en utilisant la
méthode de DPPH révèlent que les extraits phénoliques possèdent un pouvoir anti-oxydant
élevé.

En fin, les antioxydants naturelles des espèces végétales peuvent être très utiles pour
renforcer l’organisme dans le cas de situation de stress oxydatif et de prévenir les différentes
pathologies survenues suite à une attaque radicalaire. Par ailleurs, Il serait nécessaire :

(1) d’isoler et de caractériser la ou les molécules potentiellement antioxydantes des fractions

les plus actives

(2) de déterminer la toxicité et de préciser les doses LD50 sur des modèles animaux.