INSTITUT DES TECHNICIENS SPECIALISES EN AGRICLTURE

SIDI HAMMADI
Compte rendu de TP de TECHNIQUE DES ANALYSES microbiologie
 Sommaire

1. Introduction...................................................................................

2. Préparation de matériels et produits........................................................

3. La manipulation ...............................................................................

4. Conclusion......................................................................................

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 I. Introduction :

Nous avons effectué des travaux pratique au sien des laboratoires du l'unité
bien sur après avoir les cours théoriques sur certaines analyses
microbiologiques .
On a réalisé un ensemble des analyse parmi :
• les coliformes totaux
• les coliformes fécaux
• FMAT
L'objectif de ce TP est d'avoir l'aptitude de réaliser la manipulation des
analyses facilement à l'échelle réelle.
LES BPH :

 Port d'une blouse en coton fermée.

 Nettoyage des paillasses et du matériel éventuellement contaminé.
 Jeter chewing-gum ou autre aliment en cours de consommation
 Déposer les vêtements de ville dans le vestiaire, ou à l’écart des zones à risque
(éteindre téléphone portable)
 Attacher les cheveux longs vers l’arrière
 Ôter les bijoux des doigts et poigne
 Fermer les portes et les fenêtres
 Nettoyer et désinfecter la paillasse avec l’eau de Javel (1/3 Javel et 2/3 Eau)
 Se laver les mains à l’aide d’un désinfectant
Préparation de matériels et produits :
La verrerie :
Les boites pétries, les pipettes, les tubes à essai, pipettes pasteur, portoirs, les flacons. LES TUBES A ESSEI. FLACONS.

Boite de pétrie

On a utilisé la verrerie qui comprend la boite de pétri, le tube à

essai, pipette, pipette pasteur et lame on les fait entourer par un
papier aluminium puis in les fait
stériliser via l’étuve à 150 C° pendant 15 minutes

Le matériel :

BALANCE
PLAQUE CHAUFANTE
AUTOCLOVE
Appareil de comptage

Étuve
LA HAUTE
Préparation des produits chimiques :
L’eau physiologique :

Préparer le diluant (l'eau physiologique) et répartir dans les tubes à essais à raison de 9 ml par tube puis stériliser par
autoclavage à 120°C pendant 20 min.
Le milieu de culture :
Préparer le milieu de culture PCA puis stériliser par autoclavage à 121°C pendant 15 à 20 min.
À propos de milieu de culture EMB on ajoute …

ALORS QUE LES DEUX MILIEUX DE CULTURE On a effectué une agitation manuelle.

À l’aide du barreau magnétique et d’agitateur donc on a pu mélanger et éblouir la solution sur la plaque chauffante et le
rendre homogène.
Après l’agitation on stérilisé le milieu de culture dans l’autoclave à une température de 121°C pendant 20min.
La manipulation :
Avant la manipulation :
Nettoyage et désinfection de paillasse.
Stérilisation de la haute.
On organise le paillasse de haute par suite :
À gauche : tubes à essai, boite de pétrie, l’eau physiologique, échantillon
À droite : pipettes, bécher d’eau de javel, vortex, milieu de culture

Pendant la manipulation :
LES coliformes fécaux et totaux :
Pour pouvoir effectuer la dilution on a utilisé 3 tubes à essai (le premier tube de solution mère) et 12 boites de pétris. On
a pris de l’eau physiologique déjà préparé (9 ml de « Na Cl » mélanger avec 1 litre d’eau distillé) on a rempli les 2 tubes
par 9 ml de l’eau physiologiques puis on a pris 1 ml de lait ultra haute température. On l’a ajouté juste dans le premier
tube à essai ensuite ont changé la pipette après chaque dilution. On a ajouté 1 ml de l’échantillon précédant puis on le
rajoute à l’échantillon suivant et cette méthode est présentée ci-dessous :

1. Les FMAT :

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Ensemencement :
Les coliformes fécaux et totaux :
Après la dilution on fond le milieu gélosé par chauffage, A l'aide d'une pipette stérile, ensemencer les boîtes de Pétri à
partir des dilutions en transférant 1 ml de chaque dilution. - Ajouter 15 ml, environ, du milieu EMB fondu et ramené à
une température d'environ 48°C. - Agiter immédiatement après l'addition du milieu en faisant décrire à la boîte de
Pétri, 5 à 10 fois, un cercle sur la paillasse ou dans l'air pour bien homogénéiser. Il faut veiller à ce que l'homogénéisation
soit faite de la même façon pour toutes les boîtes (même nombre de cercles ayant à peu près le même diamètre). -
Laisser solidifier sur la paillasse en gardant les boîtes entrouvertes à côté du bec bunsen. - Après solidification, ajouter
une couche de 2 à 3 mm (environ 5 ml) du même milieu maintenu en surfusion à 48°C. Laisser solidifier
La lecture :
Compter les colonies violettes-rouges ayant un diamètre de 2 à 3 mm, une couleur violette foncée et entourées d'une
zone rougeâtre de précipitation d'acides biliaires.
Enlevé les boite et faire la lecture des boites pétrie .on déterminer les boites comptables (30˃NB˂300)

Les FMAT :

Préparer des dilutions décimales dans de l'eau physiologique à partir de l'échantillon à analyser - Fondre le
milieu gélosé par chauffage. - Laisser refroidir jusqu'à environ 48°C de préférence dans un bain-marie réglé à
cette température. - Prélever 1 ml de chaque dilution à l'aide d'une pipette stérile de 1 ml et le déposer dans une
boîte de Pétri stérile en commençant par la dilution la plus forte (la moins concentrée en microorganismes). -
Couler la gélose préalablement fondue et ramenée à une température d'environ 48°C. - Laisser refroidir sur la
paillasse à proximité du bec Bunsen jusqu'à la solidification du milieu gélosé, de préférence en laissant les boîtes
de Pétri entrouvertes pour éviter la formation de condensats à la surface du milieu.

L’incubation   :

Après ensemencement et solidifi cation du milieu de culture, placer les boîtes de Pétri à l'envers
(couvercle en bas) dans un incubateur à 37°C (±2) pendant 72 heures.

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 Les résultats

Pour le FMAT : nous avons pas Our les résultat sa vous dire que on se trouve un tapie des bactéries
a cause de contamination de l’environnement

Les causes :
quelque personne ne pas laver les mains
Ne pas fermer la porte de laboratoire
Ne pas travailler dans la zone stérile
Utiliser une pipette plusieurs fois
Les paroles en cours de manupilation

Pour les coliformes

 
N de colonnes et 61 
   
Donc UFC : 61.*1000
           1

UFC :  61 000

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 II. Conclusion :

En fin je veux remercie mon encadrent pour ses efforts pour aider
nous à apprendre la méthode correcte des analyses
microbiologiques; et je trouve que j'ai maitriser et appliquer les
analyse microbiologiques de lait .

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