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    Dosage de Testo

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    djamila benaissa
    Le document présente les techniques de dosage de la testostérone, une hormone androgène importante. Il décrit la biosynthèse et le rôle de la testostérone, ainsi que les méthodes de dosage comme le radioimmunodosage et le dosage immuno-enzymatique ELISA.

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    dosage de testo

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    Rèpublic Algèrienne Dèmocratique Populaire

    Universitè Ibn Khaldoun Tiaret


    Facultè des Sciences de la Nature et de la Vie
    Dèpartement des Sciences de la Nature et de la Vie

    Master 1 en Reproduction Animale

    Technique de dosage de Testostèrone

     Prèsenter par:
     Khelil Sofiane
     Berouaguia Karim
    Plan de travail:

    1. Introduction
    2. Gènèralitès
    3. Intèret de dosage hormnal
    4. Mèthodes de dosages hormonal
    5. Aventages et incoviniant
    1.INTRODUCTION:
    Nous allons dans cet èxposer nous intéresser
    à une hormone stéroïde puissante et précieuse
    pour le corps: La testostérone. Notre corps
    produit cette hormone qui est responsable
    d'un grand nombre de fonctions : c'est
    l'hormone mâle de référence pour notamment
    l'hypertrophie et la prise de force.
    Adolf Friedrich Johann Butenandt isole la testosterone en 1934
    prix Nobel en1939 steroides sexuels
    2.Gènèralitès:
    La testostérone est une hormone stéroïde
    androgène
     Les hormones stéroïdes sont synthétisés à
    partir du cholestérol dans différents tissus.
    Elle est sécrétée et produite dans les
    testicules grâce aux cellules de Leydig à 95%
    les 5% restant correspondantes aux glandes
    surrénales
    La femelle produit également de la
    testostérone mais en faible quantité dans les
    ovaires et dans les glandes surrénales
    Généralement, l'homme fabrique 50 à 60 fois
    plus de testostérone qu'une femme.
    Axe hypothalamo-hypophysaire chez
    l’homme
    Biosynthèse de testostèrone
    2.1La testostérone énonçons 2 propriétés:
    Elle a un effet androgène :
     masculinisation
     voix plus grave
     accroissement du système pileux corporel et facial
     développement des organes sexuels secondaires mâles
     agressivité, énergie et tonus constant
    comportement sexuel, libido...
    Elle est responsable aussi de la maturation des
    spermatozoïdes.
     C'est grâce à cette hormone que la puberté est
    enclenchée.
    Chez les femmes, la testostérone est
    transformée en estradiol .
    joue un rôle dans le maintien du désir sexuel.
    la fabrication et la croissance des muscles.
     
    2.2.La circulation de la testostérone dans le sang est soumise à 3 variantes:
    La testostérone libre qui est donc sous forme
    libre et qui représente une petite partie, environ
    de 2 à 3% .
    Sous une forme fortement liée à une protéine la
    SHBG ("Sex Hormone Binding Globulin"). Cette
    forme de testostérone représente environ 80%.
    Sous une forme faiblement liée à une protéine,
    l'albumine environ 20%. Cette forme de
    testostérone est dite biodisponible.
    L’intèret de dosage de
    Testostèrone chez l’ètre humain:
    .Le dosage de testostérone permet de confirmer les
    pathologies ci-dessous:
    . Hommes:
    L’hypogonadisme (anomalies testiculaires, atteinte
    cutanée, féminisation…). peut être à l’origine de taux
    faibles de testostérone.
    fortes valeurs en testostérone sont associées aux
    maladies de l’unité hypothalamique pituitaire, aux
    tumeurs testiculaire et au cancer de la prostate.
    •.
    Femmes:
    Une augmentation de production de testostérone
    par les ovaires peut induire un syndrome des ovaires
    polykystiques dont les signes et symptômes sontles
    suivants:
    • Stérilité
    • Règles irrégulières
    • Hirsutisme (excès de poils sur le visage et le corps)
    . Enfants:
    .Un taux anormal de testostérone chez les enfants peut
    être à l’origine de puberté précoce ou retardée.
    4.Mèthode de dosage de
    testostèrone:
    1.mèthode radio immuno dosage
    2.mèthode immuno enzymatique
    Nature du prélèvement :
    Sérum , plasma ,
    Urines (diurèse des 24h)
    Conservation :
    1 à 2 j à T° ambiante
    1 semaine à 4 °C
    Plusieurs mois à -20°C
    Renseignements cliniques
    sur le patient (âge, sexe, stade pubertaire)
     Date des dernières règles
     Traitement en cours
    Connaître la physiologie :
    À quel moment prélever :
    Au cours du cycle,
    Au cours de la journée,

    ½ vie de l’hormone :
    Ne pas répéter des dosages inutilement

    Variations physiologiques :
    Puberté,

    Ménopause,

    Grossesse
    Tèchnique immuno
    enzymatique
    ELISA
    ELISA

    Enzyme
    ELISA

    Enzyme Linked
    ELISA

    Enzyme Linked ImmunoSorbent


    ELISA

    Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay


    PRINCIPE DU TEST:
    Le test immuno-enzymatique sur phase solide (ELISA) est basé sur
    le principe de compétition.
    La quantité inconnue d’antigènes présents dans l’échantillon et
    une quantité fixe d’antigènes conjugués à une enzyme entrent en
    compétition pour les sites de fixation des anticorps coatés dans
    les puits.
     Après incubation, les puits sont lavés pour arrêter la réaction de
    compétition.
    L’intensité de la couleur développée suivant la réaction substrat
    est inversement proportionnelle à la quantité d’antigène présente
    dans l’échantillon.
     Les résultats des échantillons peuvent être déterminés
    directement à partir de la courbe étalon.
    ELISA

    Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay

    E
    E
    Anticorps Antigène
    Principe du test ELISA (1)
    Coating de l ’Ag ou de l’Ac

    Support
    Tampon de coating

    Lavages

    Saturation

    Saturation

    Lavages
    Principe du test ELISA (2)
    Addition du ligand marqué avec l’enzyme

    E
    E
    Enzymes

    E E

    Lavages: PBS-Tween

    Addition du substrat de l ’enzyme


    E

    Substrat incolore Substrats

    E
    Produit coloré
    Les différents types d’ELISA

    - Phase homogène

    - Phase hétérogène

    - ELISA direct

    - ELISA indirect

    - ELISA Sandwich

    - ELISA par compétition


    Les ELISA en phase homogène

    Antigène absent de l’échantillon

    E
    S P
    Antigène présent dans l’échantillon

    S
    E

    P
    Les ELISA en phase hétérogène (2)

    ELISA sandwich (1)

    Sandwich direct
    S
    -Symétrique
    E -Asymétrique

    Sandwich indirect

    S
    E

    P
    Les ELISA en phase hétérogène (3)

    ELISA sandwich (2)

    Immunocapture : détection d’anticorps spécifiques

    P
    Les ELISA en phase hétérogène (4)

    ELISA non compétitif

    DO Phase plateau

    Zone linéaire

    [antigène ou anticorps]
    Limite de détection
    Les ELISA en phase hétérogène (5)

    ELISA par compétition (1)


    Compétition au niveau de l’anticorps

    S
    E

    Anticorps à doser
    P

    Compétition au niveau de l’antigène

    S
    E E

    P
    Élimination par lavage
    Antigène à doser
    Les ELISA en phase hétérogène (6)

    ELISA par compétition (2)

    DO

    [antigène ou anticorps]
    1. Pipettes (Multipette Eppendorf ou matériel similaire, CV
    < 3 %) Volumes: 25; 100; 200 μL
    2. Vortex
    3. Micropipette à 8-canaux avec réservoirs pour réactifs
    4. Bouteille pour lavage, système automatique ou semi-
    automatique pour le lavage de microplaque
    5. Lecteur de microplaque capable de lire l’absorbance à
    450 nm (longueur d’onde de référence 600-650 nm)
    6. Eau bidistillée ou désionisée
    7. Papier absorbant, embouts de pipette et chronomètre
    ELISA
    Avantages de la technique:
    L'utilisation d'anticorps monoclonaux rend la
    détection spécifique.
    Possibilité de quantifier grâce à la réalisation d'une
    gamme en parallèle.
    L'utilisation d'anticorps secondaires rend la
    technique sensible.
    technique accessible à tous les biologistes.
    La détection du signal ne nécessite pas la présence
    d'appareillage spécialisé.
    Inconvénients de la technique:
    La limite de détection est moins bonne que la
    technique RIA(radio immuno essays).
    La réaction enzymatique rend cette technique
    dépendante de la température, du pH et de
    l'éclairement
    Mèrci pour votre attention

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