Papers by Sandra Bellodi Cação
O objetivo desse trabalho foi caracterizar recursos geneticos de Coffea arabica - acessos selvage... more O objetivo desse trabalho foi caracterizar recursos geneticos de Coffea arabica - acessos selvagens e cultivares - oriundo da Africa visando sua utilizacao no melhoramento. Os acessos provenientes de Camaroes tem dados acumulados de mais de 30 anos. Oito acessos foram introduzidos em 2010 na Guiana Francesa e no Brasil para experimentacao. No Brasil, depois de um periodo de quarentena, foram plantados ensaios no centro Cerrados da Embrapa e no IAPAR, alem da Guiana Francesa Analisamos dados de crescimento, de ramificacao secundaria, de adaptacao fisiologica a seca, para escolher genitores de cruzamentos com cultivares locais. Hibridos F1 estao sendo avaliados para selecionar os com melhor adaptacao a evolucao das condicoes climaticas. (Resume d'auteur)
BBR - Biochemistry and Biotechnology Reports, 2013
O café é uma das principais commodities agrícolas comercializados. A estreita base genética de Co... more O café é uma das principais commodities agrícolas comercializados. A estreita base genética de Coffea arabica tem-se refletido em diferentes formas. Além disso, em C. arabica, o desenvolvimento de novas cultivares é demorado. A utilização de marcadores moleculares como ferramenta para análises da diversidade e seleção de genótipos representa uma importante ferramenta para tentar diminuir tempo e custo de seleção do melhoramento de espécies perenes como C. arabica. Neste trabalho foi realizada identificação e análise in silico de SSR a partir de dados de RNA-seq de C. arabica-Iapar 59 e de sequenciamento de BACs de C. arabica HDT832/2. Para Iapar 59 foram analisados 77 contigs, encontrados 39 SSR's e desenhados 21 primers. Para HDT832/2 foram analisados também 77 contigs, encontrados 35 SSR's e desenhados 29 primers. Os motivos mais frequentes foram di, tri e tetra, sendo AT o mais frequente entre os genótipos. Esta busca de sequências repetitivas é de grande importância para futura validação e aumento desses marcadores para estudos de diversidade genética.
A produção de mapas físicos em plantas tem grande importância para estudos de genética e melhoram... more A produção de mapas físicos em plantas tem grande importância para estudos de genética e melhoramento. O passo inicial para produção destes mapas é a construção de bibliotecas genômicas com largos fragmentos de DNA, em vetores do tipo cromossomo artificial de bactéria (BAC) ou de levedura (YAC). Visando a produção de um mapa físico, o objetivo deste trabalho foi construir uma biblioteca genômica de BAC de café. Fragmentos de DNA de alto peso molecular de C. arabica híbrido de Timor cv. 832/2 foram clonados no vetor pCC1BAC e transformados em E. coli DH10B. Após transformação 57000 clones foram inicialmente obtidos e ordenados manualmente em placas de 96 poços. A biblioteca foi transferida em triplicata para placas de 384 poços, com equipamento Q-BOT, resultando em 55.778 clones em 148 placas. A verificação do tamanho do inserto de 130 clones revelou tamanho médio de 115-120 Kb. A cobertura do genoma haplóide estimada para C.arabica foi de cinco vezes. A validação da biblioteca presença de DNA de cloroplasto e mitocôndria, assim como a seleção inicial com sondas para iniciar o mapeamento físico, está sendo realizada através de hibridização de colônias em membranas contendo 18.462 clones em duplicata. Palavras-chave: BAC, Coffea, mapeamento, clonagem
... Autor(es): Pereira, Luiz Filipe Protasio (Embrapa Café, IAPAR. Lab. ... Verificou-se rápido c... more ... Autor(es): Pereira, Luiz Filipe Protasio (Embrapa Café, IAPAR. Lab. ... Verificou-se rápido crescimento na produção de etileno em frutos verde-cana, após o final da formação do endosperma, com um decréscimo nos frutos-cereja, indicando uma fase climatérica na maturação. ...
The majority of transgenic organisms reported in the literature have been made using constitutive... more The majority of transgenic organisms reported in the literature have been made using constitutive promoters. However, there are economic, environmental and biosecurity related restrictions involving indiscriminate (constitutive) expression of heterologous genes. The usage of tissue-specific and induced promoters can resolve those issues by limiting the expression of a transgene to the necessary tissues and conditions. The promoters currently used at Embrapa are transnational properties, burdening the research and causing technological dependence. Therefore, the objective of this work was to find and characterize tissue and organ specific promoter in Coffea spp. We have used the Coffee genome database in silico tools to find genes preferentially expressed in root, leaf and fruit. In this way we found 72 organ-specific candidates: 18 apparently preferentially expressed on leaves, 14 on roots and 40 on fruits. Some of those candidates were tested in vitro using RT-PCR, semiquantitative PCR, northern blotting and qPCR assays. All four leaf-specific candidates tested (GCFo1, GCFo2, GCFo3 and GCFo4) and at least one of the two fruit-specific candidates tested (GCFr1 e GCFr2) where confirmed to be preferentially expressed on their respective organs. Temporal and spatial expression assays showed that GCFr2 has its expression peak at the endosperm, 180 days after flowering. The highest expressed genes of leaf (GCFo3 and GCFo4) and fruit (GCFr2) were used as probes to isolate its respective promoter through a BAC libraries screening or using the Genome Walker Universal Kit (Clontech). Results concerning gene expression and the molecular characterization of these genes will be presented.
Bibliotecas BAC (Cromossomo Artificial de Bactéria) têm sido muito utilizadas em mapeamento físic... more Bibliotecas BAC (Cromossomo Artificial de Bactéria) têm sido muito utilizadas em mapeamento físico, clonagem posicional, mapeamento comparativo e estudos de evolução de genomas. Visando realizar o mapeamento físico em C. arabica, iniciamos a identificação e caracterização de clones BAC de uma biblioteca de C. arabica hibrido timor 832/2. O híbrido timor, derivado de um cruzamento interespecífico natural provavelmente entre Coffea arabica L. cultivar típica e Coffea canephora, apresenta características de importância agronômica como resistência a diversas raças do fungo biotrófico Hemileia vastatrix. A biblioteca contém 55.000 clones BACs com tamanho médio de 120 Kb. Os clones da biblioteca BAC foram inicialmente agrupados em pools de placa , com 384 clones, e superpools contendo 15 pools de placa o que representa 5760 clones. A identificação de BACs de interesse foi realizada através da seleção por PCR nos superpools e pools, seguida por hibridização em filtros de colônia de bactéria contendo 384 clones. Os superpools e pools de placas submetidos à seleção por PCR utilizaram os primers baseados em AFLPs relacionados com lócus de resistência à ferrugem . O superpool 07 foi positivo para o marcador BA-48 e os superpools 03, 04, 07 e 08 para o marcador BA-124. Estes superpools foram desmembrados em pools de placa e as placas positivas plotadas em membranas para hibridização com sondas específicas. Os BACs selecionados nas hibridizações foram confirmados através de extração individual do clones, seguida por PCR para verificação da marca de interesse. Até o momento foram identificados 68 clones BACs para o marcador BA-48 e 85 clones para o marcador BA-124. Os BACs selecionados estão sendo parcialmente sequenciados para o mapeamento físico da região contendo lócus de resistência à ferrugem.
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