Roteiro Aula Prática de Coliformes

Escola de Ciências da Saúde
Curso de Graduação: Nutrição

Unidade Curricular: Controle Higiênico e Sanitário dos Alimentos
Docente:
NÚMERO MAIS PROVÁVEL DE COLIFORMES EM ÁGUA E ALIMENTOS
 MATERIAL:
11 erlenmeyers ou balões de 100 ou 200 mL estéril e vazios

24 tubos contendo 09 mL de água peptonada 0,1%
12 balão contendo 90mL de água peptonada 0,1%
70 Tubos contendo 10mL de Caldo Lauril Sulfato Triptose com tubos de Duhan
ivertidos
20 Tubos contendo 10 mL de Caldo lactose Bile Verde Brilhante com tubos de
Duhan ivertidos
20 Tubos contendo 10 mL de Caldo EC com tubos de Duhan ivertidos
uma placas de EMB
20 pipetas de 02 ou 05 ml estéreis
Álcool a 70%
Canetas para identificar
Estufa B.O.D 35°C e a 45°C
galerias
 PROCEDIMENTO:
1 Preparo da amostra
Antes de abrir a embalagem contendo o alimento a ser analisado, descontaminar a

área externa com etanol a 70%, para remoção de contaminantes presentes.
2 Preparo das diluições seriadas
Retirar assepticamente porções de 10g ou 10 mL da amostra, colocando-se em

frascos estéreis ou em sacos plásticos apropriados, ou diretamente nos copos dos
homogeneizadores esterilizados;
Adicionar 90 mL do diluente escolhido;
Homogeneizar a mistura por alguns minutos. Esta diluição corresponde a uma

proporcionalidade de 1:10 ou 10-1;
Escola de Ciências da Saúde
Curso de Graduação: Nutrição
Unidade Curricular: Controle Higiênico e Sanitário dos Alimentos
Docente:
3 Testes presuntivo e confirmativos de coliformes
A partir da diluição inicial, a diluição 1:100 ou 10 -2 é feita retirando-se 1ml da

diluição inicial para 9,0 mL do diluent As diluições subsequentes são obtidas de
maneira similar, transferindo-se 1,0 mL da diluição anterior para 9,0 de diluente,
que deverá ser o mesmo do início da diluição.
Teste presuntivo: Pipetar 1mL de cada diluição em 03 tubos contendo 10mL de

Caldo LST para diluição 10-1, Pipetar 1mL de cada diluição em 03 tubos contendo
10mL de Caldo LST para diluição 10-2, Pipetar 1mL de cada diluição em 03 tubos
contendo 10mL de Caldo LST para diluição 10-3;
Incubar, em estufa bacteriológica, à 35C /24 a 48 horas. Após este período, nos
tubos onde ocorrer a fermentação da lactose, com aparecimento de gás (no
interior do tubo de Durhan), prosseguir a análise. 2.1.2 –
Teste confirmativo Se houver formação de gás nos tubos de fermentação,

transferir cada tubo com crescimento - através de alça de platina - para o Caldo
Lactose Bile Verde brilhante (VB) e Caldo E.C. (EC), incubando-os respectivamente
a 35ºC/24 a 48 horas e 45ºC em banho-maria por 24 a 48 horas.
Resultado O resultado é obtido contando-se o número de tubos positivos e

comparando –se com a tabela de Número Mais Provável (NMP). No Caldo Verde
Brilhante confirma-se Coliformes Totais e no Caldo EC confirma-se Coliformes
termotolerantes.

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11 erlenmeyers ou balões de 100 ou 200 mL estéril e vazios

Antes de abrir a embalagem contendo o alimento a ser analisado, descontaminar a

2 Preparo das diluições seriadas

Retirar assepticamente porções de 10g ou 10 mL da amostra, colocando-se em

Adicionar 90 mL do diluente escolhido;

Homogeneizar a mistura por alguns minutos. Esta diluição corresponde a uma

3 Testes presuntivo e confirmativos de coliformes

A partir da diluição inicial, a diluição 1:100 ou 10 -2 é feita retirando-se 1ml da

Teste presuntivo: Pipetar 1mL de cada diluição em 03 tubos contendo 10mL de

Teste confirmativo Se houver formação de gás nos tubos de fermentação,

Resultado O resultado é obtido contando-se o número de tubos positivos e

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