Oriá, Santana, Fernandes, Ferreira & Brito 425

Investigação Clínica, Laboratorial e Terapêutica / Clinical, Laboratory and Therapeutic Investigation

Estudo das alterações relacionadas com a idade na pele

humana, utilizando métodos de histo-morfometria e
autofluorescência*
Study of age-related changes in human skin using
histomorphometric and autofluorescence approaches*
Reinaldo B. Oriá1 Francisco Valdeci A. Ferreira2 Érika N. Santana3
Mariana R. Fernandes3 Gerly A. C. Brito 1
Resumo: FUNDAMENTOS - O processo de envelhecimento tecidual é evidente nas modificações visíveis na pele, resultando em impor-
tantes implicações psicológicas para o indivíduo e crescente interesse científico.
OBJETIVOS - O presente trabalho objetivou analisar as alterações da pele normal com o envelhecimento mediante estratégias de his-
tomorfometria e autofluorescência.
MÉTODOS - Foram coletadas amostras de pele do abdômen de 18 cadáveres, incluindo cinco indivíduos jovens (menos de 20 anos), sete
indivíduos com idade intermediária (20-60 anos) e seis indivíduos idosos (mais de 60 anos). Foram feitos cortes histológicos em parafi-
na seguidos de coloração pela Hematoxilina-Eosina (H&E ) e pelo tricrômio de Van Gieson-elastina. Avaliaram-se a espessura da epiderme
e derme, e a superfície de contato epidermo-dérmica. Investigaram-se ainda as modificações qualitativas do aparelho colágeno-elástico,
considerando sua disposição espacial na derme. Espécimes corados em H&E também foram utilizados para autofluorescência.
RESULTADOS - A espessura da epiderme e derme do grupo idoso foi significativamente diminuída (p<0,05) em relação aos demais
grupos. Os grupos idoso e intermediário exibiram acentuada redução na superfície de contato epiderme-derme (p<0,05).
Detectaram-se a perda da distribuição em rede das fibras elásticas com sua progressiva fragmentação, alterações da compactação
do colágeno e espessamento da membrana basal com o envelhecimento.
CONCLUSÃO - O envelhecimento leva à redução da espessura da derme e epiderme, bem como ao aplanamento da junção dermo-
epidérmica. As mudanças da pele ao longo da vida nem sempre seguem um perfil linear, mostrando drásticas alterações nas últi-
mas décadas de vida. O método de autofluorescência mostrou-se um instrumento valioso no estudo da complexa relação espacial
das fibras elásticas e colágenas.
Palavras-chave: derme; envelhecimento; envelhecimento da pele; epiderme; pele.

Summary: BACKGROUND - Age-related changes are easily recognized by examining the skin and lead to important psychological
implications, motivating increased scientific interest.
OBJECTIVES - This study aimed to analyze, by histomorphometric and autofluorescence approaches, the aged-related alterations in
normal human skin.
METHODS - Normal abdominal skin samples were taken from eighteen cadavers, including five young subjects (below 20 years old),
seven subjects with intermediate age (20-60 years old) and six elderly subjects (over 60 years old). Paraffin-embedded sections
were prepared and stained by Hematoxylin and Eosin (H&E) and Van Gieson-elastin trichrome. Afterwards, the H&E specimens
were also used for autofluorescence technique.
RESULTS - The thickness of elderly epidermis and dermis was reduced compared to middle-aged and young age groups (p<0.05).
The elderly and middle-aged groups also showed a marked reduction in the epidermal-dermal contact surface (p<0.05) in com-
parison to the young group. In addition, we detected a loss of the distribution in the elastic fiber network in the elderly with pro-
gressive fragmentation, as demonstrated by Weigert's stain for elastin and poor fluorescent contrast.
CONCLUSION - The thickness of the epidermis, dermis, and epidermal-dermal interface contact surface decreased in the aged skin.
The changes throughout life in the normal skin did not follow a continuous linear profile, showing drastic alterations especial-
ly in the last decades. Autofluorescence approach proved to be an important additional tool for studying the complex relation-
ship between the elastic and collagen fibers.
Key-words: dermis; aging; skin aging; epidermis; skin.
Recebido em 27.08.2002. / Received in August, 27th of 2002.
Aprovado pelo Conselho Consultivo e aceito para publicação em 01.04.2003. / Approved by the Consultive Council and accepted for publication in April, 01 st of 2003.
* Trabalho realizado no Departamento de Morfologia da Faculdade de Medicina da Universidade Federal do Ceará. / Work done at Mophology Department of "Faculdade de Medicina da
Universidade Federal do Ceará"

1
Departmento de Morfologia, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, CE, Brasil. / Dept. of Morphology, Federal University of Ceará, Fortaleza, CE, Brazil
2
Departmento de Patologia e Medicina Legal, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, CE, Brasil. / Dept. of Pathology and Legal Medicine, Federal University
of Ceará, Fortaleza, CE, Brazil.
3
Estudantes de Medicina da Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, CE, Brasil. / Medical Students, Federal University of Ceará, Fortaleza, CE, Brazil.

©2003 by Anais Brasileiros de Dermatologia

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426 Oriá, Santana, Fernandes, Ferreira & Brito

INTRODUÇÃO INTRODUCTION
Os tecidos gradualmente passam por mudanças de Tissues gradually go through changes in accordance
acordo com a idade, sendo que, na pele, essas alterações são with age, and, in the skin, those alterations are more easily
mais facilmente reconhecidas.1,2 Atrofia, enrugamento, recognized. 1,2 Atrophy, wrinkles, ptosis and looseness repre-
ptose e lassidão representam os sinais mais aparentes de sent the most apparent signs of a senile skin. 3-5
uma pele senil.3-5 Changes in the characteristics of human skin during
Mudanças nas características da pele humana aging are frequently determined by environmental or
durante o envelhecimento são freqüentemente determinadas extrinsic forces, such as ultraviolet radiation, 6,7 as well as
por forças ambientais ou extrínsecas, tais como radiação by intrinsic factors,8-10 some of them related with alterations
ultravioleta,6,7 assim como por fatores intrínsecos,8-10 alguns in the conjunctive tissue of the dermis.11-13 Alterations in the
deles relacionados com alterações no tecido conjuntivo da conjunctive tissue which acts as a structural foundation for
derme.11-13 Alterações no tecido conjuntivo, que atua como the epidermis, delineate these changes in the external
alicerce estrutural para epiderme, delineiam essas mudan- appearance that are reflected in the corneum stratum. 14,15
ças na aparência externa, que são refletidas no estrato cór- The modifications of the collagen-elastic apparatus
neo.14,15 As modificações do aparelho colágeno-elástico ao throughout a lifetime establish a substantial morphological
longo da vida estabelecem uma base morfológica substan- basis from which to understand the biochemical and bio-
cial para compreender as adaptações bioquímicas e bio- mechanical adaptations of the skin with age. 16-19 The thick-
mecânicas da pele com a idade.16-19 A espessura da pele e ness of the skin and its viscoelastic properties do not depend
suas propriedades viscoelásticas não dependem apenas da only on the amount of material present in the dermis, but
quantidade de material presente na derme, mas também de also on its structural organization. 20,21
sua organização estrutural.20,21 To study the mechanisms involved in aging, there-
Para estudar os mecanismos envolvidos no envelhe- fore, it is necessary to understand the structural and func-
cimento, portanto, é necessário compreender melhor as tional changes that occur with the advancement of age,
mudanças estruturais e funcionais que ocorrem com o distinguishing between the alterations that can represent an
avançar da idade, distinguindo as alterações que possam intrinsic process, and those that reflect cumulative patho-
representar um processo intrínseco daquelas que refletem logical effects or external environmental aggressions.22,23 It
efeitos patológicos cumulativos ou agressões ambientais is well to consider that, independent of the individual's age,
externas.22,23 Convém ainda considerar que, independente da the total thickness of the skin, relative thickness of the epi-
idade do indivíduo, a espessura total da pele, espessura rela- dermis compared with the dermis, distribution and pheno-
tiva da epiderme e derme, distribuição e fenótipo da popu- type of the cellular population in the dermis, presence of
lação celular na derme, presença de anexos cutâneos e den- cutaneous enclosures and density of the microvasculature
sidade da microvasculatura e de nervos variam conforme a and of nerves, can all vary according to which area of the
região do corpo.24-26 body is being examined.24-26
Exames histológicos e ultra-estruturais da pele, a Histological and ultra-structural exams of the skin,
partir de espécimes obtidos por autópsia, documentam based on specimens obtained by autopsy, document impor-
importantes alterações estruturais na epiderme, junção tant structural alterations in the epidermis, dermoepider-
epidermo-dérmica, derme e anexos epidérmicos. Com mal interface, dermis and epidermal annexes. With the
intuito de investigar as mudanças cronológicas da pele intention of investigating the chronological changes in
humana, foram utilizados métodos de microscopia de human skin, microscopic fluorescence techniques were
fluorescência, a partir de coloração por H&E e histomor- used, starting from coloration by H&E and histomorphome-
fometria, possibilitando, dessa forma, retratar as modifi - try, making possible, in this way, to portray the tissue modi-
cações teciduais ao longo da vida, no que diz respeito a fications along the course of a lifetime together with their
sua textura e conformação, relacionando com sua mode- implications regarding the changing textures and confor-
lação biomecânica no espaço. mations, related to its spatial biomechanical modeling.

MATERIAIS E MÉTODOS MATERIAL AND METHODS

Amostras de pele foram coletadas de 18 cadáveres, Skin samples were collected from 18 cadavers,
incluindo cinco indivíduos jovens (abaixo dos 20 anos), including five young individuals (below 20 years of age),
sete indivíduos com idade intermediária (20-60 anos) e seis seven individuals of middle-age (20-60 years) and six
indivíduos idosos (com mais de 60 anos). Usaram-se como elderly individuals (more than 60 years of age). The inclu-
critérios de inclusão pacientes de ambos os sexos, sem dis- sion criteria were patients of both sexes, without discrimi-
criminação de raça, cuja causa da morte não incluíssem nation of race, whose cause of the death did not include
doenças que afetam diretamente a pele. Foram excluídos do diseases that affect the skin directly. Excluded from this
trabalho os indivíduos com doença dermatológica ou work were individuals with dermatological disease or with
sistêmicas ligadas diretamente a alterações cutâneas case histories reporting systemic pathologies linked direct-

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Oriá, Santana, Fernandes, Ferreira & Brito 427

relatadas no prontuário. Amostras de pele medindo 1cm 2 ly to cutaneous alterations. Skin samples measuring 1cm2
foram colhidas da região abdominal, 2cm acima da cicatriz were collected from the abdominal areas, 2 cm above the
umbilical. Como indicado por Faria et al.27 e Gonçalves,1 a umbilicus. As was indicated by Faria et al .27 and
pele do abdômen é apropriada para o estudo das alterações Gonçalves1 , the skin of the abdomen is best adapted for the
causadas pelo processo de envelhecimento. Os espécimes study of alterations caused by the aging process. The speci-
foram obtidos durante o procedimento de autópsia realiza- mens were obtained during the autopsy procedure done in
do no Departamento de Patologia e Medicina Legal da the Department of Pathology and Legal Medicine of the
Universidade Federal do Ceará (UFC). O protocolo experi- Federal University of Ceará (UFC). The protocol of the
mental foi previamente aprovado pelo Comitê de Ética e experiment was previously approved by the Committee of
Pesquisa do Hospital Universitário Walter Cantídio/UFC. Ethics and Research of the Walter Cantídio/ UFC Teaching
As amostras de pele foram imediatamente fixadas em Hospital. The skin samples were immediately placed in a
solução de formalina tamponada a 10% por 24h e embe- 10% formalin buffer solution for 24 hours after which they
bidas em parafina. Foram realizadas secções de seis were embedded in paraffin and six micrometers sections
micrômetros de espessura dos blocos de parafina; em segui- were made. The paraffin was then removed and the sam-
da, as peças foram hidratadas após a remoção da parafina, ples were moisturized, dyed and mounted on histological
coradas e montadas em meio de Entelan nas lâminas his - slides. All specimens were dyed with H&E for later analy-
tológicas. Todos os espécimes foram corados em H&E para sis by the autofluorescence method. The Hematoxylin and
posteriormente serem analisados pelo método de autofluo- Eosin and Van Gieson-elastin trichrome methods, as
rescência. O método de Hematoxilina-Eosina e o tricrômio described by Kiernan, 28 were chosen for the study of the
de Van Gieson-elastina, como descritos por Kiernan,28 fo- skin morphology.
ram escolhidos para estudar a morfologia da pele. The histological sections of skin were analyzed
Os cortes histológicos de pele foram analisados using a binocular optical microscope fitted with a mil-
utilizando um microscópio óptico binocular provido de limeter scale (Leitz Wetzlar Germany Periplan, GF x10).
ocular milimetrada (Leitz Wetzlar Germany Periplan, GF The thicknesses of both the epidermis and dermis were
x10). Foram avaliadas a espessura da epiderme e derme, measured, as well as the contact surface between them.
e a superfície de contato entre elas. A epiderme e a The epidermis and the dermis were measured at 10 dif-
derme foram medidas em 10 diferentes locais em cada ferent sites in each sample: five measurements in the
amostra: cinco medidas na papila e cinco nas cristas papillary layer and five in the layer of epidermic ridges
epidérmicas (Gráfico 1). A seguir, para cada corte foi (Graph 1). Following this, for each section a mean value

Gráfico 1: Diagrama ilustrando o Graph 1: Diagram illustrating

método para análise morfométrica the method used to analyze the
da epiderme, derme e superfície morphometry of the epider-mis,
de contato epidermo-dérmica. Em dermis and dermoepidermal
cada amostra de pele, foram feitas interface. In each skin sample, 10
10 medidas da superfície da epi- measurements were made of the
derme até a junção epiderme- epidermis interface, of which five
derme, sendo cinco medidas na were at the epidermal ridge level
crista epidérmica (posicionando a (positioning the ocular lens with
ocular milimetrada conforme millimetric grid as demonstrated
demonstrado na reta tracejada in the line marked with the letter
mar-cada com a letra a), e cinco a), and five measurements at the
medidas no nível da papila dérmi- papillary dermis level, as demon-
ca (conforme demonstrado com a strated with the letter b). In the
letra b). Da mesma forma, foram same manner, 10 measurements
feitas 10 medidas ao longo da were made along the dermis of
derme em cada amostra de pele, each skin sample, of which five
sendo cinco medidas na papila were at the papillary dermis level
dérmica (conforme demonstrado (as demonstrated with the letter
com a letra A), e cinco medidas no nível da crista epidérmica (con- A), and five measurements at the level of the epidermal ridge (as
forme demonstrado com a letra B) até o limite da derme com a hipo- demonstrated with the letter B) up to the limit of the dermis with the
derme (representada pelo limite inferior da figura). As médias a-rit- hypodermis (represented by the lower limit of the figure). The arith-
méticas das 10 medidas da epiderme ou da derme por amostra foram metic means of the 10 measurements of the epidermis or dermis per
utilizadas para o cál-culo da média de cada grupo. A extensão da super- sample were used to calculate the mean for each group. The exten-
fície de contato epidermo-dérmica foi esti-mada pela soma das medi- sion of the dermoepidermal interface was estimated by the sum of
das realizadas ao longo de 20mm de comprimento de cada prepara-do the measurements taken along the 20mm length of each histological
histológico, pelo posicionamento da ocular milimetrada tangencial- sample, by posi-tioning the ocular scale tangentially to the irregu -
mente às irregularidades da borda epitélio-conjuntiva conforme larities of the conjunctival-epithelial margin, as demonstrated by
demonstrado nas retas marcadas com os algarismos 1 e 2. the lines marked with the algorithms marked 1 and 2.

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428 Oriá, Santana, Fernandes, Ferreira & Brito

calculada uma média das medidas da espessura da epi- was calculated for the measurements of the thicknesses
derme e da derme, utilizada então para obtenção da of the epidermis and dermis. This was then used to
média de cada grupo. A estimativa da junção epidermo- obtain the mean of each group. The estimation of the der-
dérmica foi analisada, medindo-se a extensão da superfí - moepidermal interface was analyzed by measuring the
cie de contato, ao longo de 20mm de comprimento, pela extent of the contact surface, along 20mm of its length,
disposição de linhas retas, seguindo tangencialmente as using straight lines, but following tangentially the irre-
irregularidades da borda epitélio-conjuntiva. Estas medi- gularities of the epithelium-conjunctive junction. These
das (espessura da epiderme, derme e estimativa da measurements (thickness of the epidermis, dermis and
junção epidermo-dérmica) foram realizadas posicionan- estimation of the dermoepidermal interface) were
do a ocular contendo uma reta milimetrada nas posições accomplished by positioning the ocular lens containing a
ilustradas na gráfico 1. scale marked in millimeters, in the positions shown in
As fibras elásticas foram estudadas pela técnica graph 1.
de Van Gieson-elastina, fazendo-se então uma análise Elastic fibers were studied by Van Gieson-elastin
qualitativa do componente elástico reticular nas amostras technique, a qualitative analysis being made of the reticu-
de pele, considerando sua distribuição, disposição e inte- lar elastic component in the skin samples, considering dis-
gridade. tribution, disposition and integrity.
A autofluorescência foi realizada nos cortes cora - Autofluorescence was performed in the sections of
dos em H&E da pele normal do abdômen, utilizando-se the normal skin of the abdomen dyed with H&E. A Leica
um microscópio de fluorescência da marca Leica, fluorescence microscope was used; operated with trans-
operando com luz transmitida. A fluorescência dos mitted light. The fluorescence of the sections dyed with
cortes corados em H&E foi examinada por H&E was examined for excitation/emission of ultraviolet
excitação/emissão de luz ultravioleta e pelo uso de filtros light and with the use of 420/530 barrier filters for green
de barreira 420/530 para fluorescência verde, seleciona- fluorescence. These were selected because of the
dos por causa do aumento na qualidade da resolução, increase in quality of the resolution, as described by
como descrito por Carvalho et al.29 Carvalho et al. 29

Análise Estatística Statistical analysis

Os achados morfométricos foram avaliados utilizan- The morphometric findings were evaluated using the
do o teste de análise de variância ANOVA, seguido pelo variance analysis test ANOVA , followed by the Bonferroni
teste de Bonferroni. O valor de p<0,05 foi considerado de test. A value of p<0.05 was considered the minimum for sta-
significância mínima para todas as análises estudadas. tistical significance in all of the analyses studied.

RESULTADOS RESULTS
Análise Histomorfométrica Histomorphometric Analysis
No presente estudo detectou-se que a espessura da In the present study it was found that the thickness of
epiderme no grupo idoso (0,059 ± 0,006mm) foi estatistica- the epidermis in the elderly group (0.059 ± 0.006mm) was sta-
mente inferior (p<0,05) à espessura da epiderme dos grupos tistically less (p<0.05) than the thickness of the epidermis of
jovem (0,094 ± 0,003mm) e intermediário (0,080 ± the two other groups: young (0.094 ± 0.003mm) and middle-
0,006mm) (Gráfico 2A). De forma semelhante, a espessura aged: (0.080 ± 0.006mm) (Graph 2A). Likewise, the thickness
da derme no grupo idoso (1,798 ± 0,306mm) foi estatistica- of the dermis in the elderly group (1.798 ± 0.306mm) was sta-
mente inferior (p<0,05) à dos grupos jovem (2,716 ± tistically inferior (p <0.05) to that of the young (2.716 ±
0,217mm) e intermediário (2,687 ± 0,112mm) (Gráfico 0.217mm) and middle-aged (2.687 ± 0.112mm) (Graph 2B).
2B). Os grupos idoso (22 ± 0,6mm) e intermediário (30,2 ± The elderly (22 ± 0.6mm) and middle-aged (30.2 ± 2mm)
2mm) exibiram uma redução significativa (p<0,05) da groups exhibited a significant reduction (p <0.05) of the sur-
superfície de contato epidermo-dérmica em comparação ao face of the dermoepidermal interface in comparison with the
grupo jovem (41,4 ± 2,46mm) (Gráfico 3). Não houve dife- young group (41.4 ± 2.46mm) (Graph 3). There was no sta-
rença estatística entre os grupos jovem e intermediário nas tistical difference between the young and middle-aged groups
medidas morfométricas, com exceção da avaliação da in morphometric measurements, except for the evaluation of
superficie de contato epidermo-dérmica. the surface of the dermoepidermal interface.

Métodos de Coloração e Análise por Autofluo- Methods of Coloration and Analysis by Autofluo-
rescência rescence
Epiderme e Junção Epidermo-Dérmica Epidermis and Dermoepidermal Interface
A avaliação qualitativa dos preparados histológicos The qualitative evaluation of the histological prepa-
demonstrou acentuada redução da espessura da epiderme na rations demonstrated marked reduction of the thickness of

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* p<0.05

Gráfico 2: Efeito do processo de envelhecimento na espessura da epiderme e derme no grupo jovem (até 20 anos), grupo intermediário
(20-60 anos) e no grupo idoso (acima de 60 anos). As medidas foram feitas em 10 diferentes locais, cinco nas papilas dérmicas, e cinco
nas cristas epidérmicas, utilizando-se uma ocular histométrica (Leitz Wetzlar Ger-many Periplan GF x10) e uma objetiva de ampliação x10
para a derme e de ampliação x40 para epiderme. As barras representam média ± erro padrão da espessura (mm) nos grupos estudados
em relação à epiderme (A) e derme (B) pelo teste ANOVA Bonferroni. / Graph 2: Effect of the aging process on the thickness of the epi-
dermis and dermis in the young group (up to 20 yrs), Middle-aged group (20-60 yrs) and in the Elderly group (over 60 yrs). The meas-
urements were taken at ten different sites, of which five at the level of the pap-illary dermis and five at the epidermal ridge level, using
a histometric ocular lens (Leitz Wetzlar Germany Periplan GF x10) and a 10X objective lens and 40x amplification for the epidermis.
The bars represent the mean and ± standard error of the thickness (mm) in the groups in relation to the epidermis (A) and dermis (B)
using the ANOVA Bonferroni test.

pele senil e ausência do arranjo compacto dos queratinóci- the epidermis in senile skin and an absence of a compact
tos, especialmente ao longo dos estratos de Malpighi. Além arrangement of keratinocytes, especially along the
disso, observaram-se um arranjo desorganizado e achata- Malpighian strata. Also a disorganized arrangement and a
mento das células basais, com menor acúmulo de flattening of the basal cells were observed, with a lessened
melanosomas e menor densidade de melanócitos no grupo accumulation of melanosomes and a lower density of
senil (Figuras 1B e 3B) quando comparado com o grupo melanocytes in the senile group (Figures 1B and 3B) when
jovem (Figuras 1A e 3A) ou intermediário (dado não compared with the young group (Figures 1A and 3A) or the
mostrado). Detectou-se ainda redução da sinuosidade do middle-aged (data not shown). Furthermore, a reduction was
trajeto da epiderme ao longo do comprimento da superfície detected in the sinuosity of the area covered by the epidermis
dérmica, ilustrado por uma disposição grosseiramente lin- along the length of the dermic surface, revealing a coarse li-
ear da junção epidermo-dérmica (Figuras 1B e 2B) quando near disposition of the dermoepidermal interface (Figures
comparado com o grupo jovem (Figuras 1A e 2A). A mem- 1B and 2B) when compared with that of the young group
brana basal apareceu mais bem definida na pele senil, con- (Figures 1A and 2A). The basal cell membrane appeared to

Gráfico 3: Medida estimada da Graph 3: Estimated size of

superfície de contato epidermo- the dermoepidermal interface
dérmica do grupo jovem (até in the young group (up to 20
20 anos), grupo intermediário yrs), middle-aged group (20-
(20-60 anos) e do grupo idoso 60 yrs) and elderly group
(acima dos 60 anos). As medi- (over 60 yrs). The measure-
das foram feitas em 20mm de ments were taken along the
comprimento ao longo do 20mm length of the histologi-
campo histológico, pela dis- cal field, using the straight
posição de linhas retas seguin- lines tangentially following
do tangencialmente às irregu- the irregularities of the con-
laridades da borda epitélio-con- junctive-epithelial margin.
juntiva. As bar-ras representam The bars represent the mean
a média ± erro padrão da and ± standard error of the
superfície de contato epidermo- dermoepidermal interface
dérmica (mm) pelo teste de (mm) using the Bonferroni
ANOVA Bonferroni. ANOVA test.
* p<0.05

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430 Oriá, Santana, Fernandes, Ferreira & Brito

Figura 1: Espécimes de Figure 1: Skin specimens

pele dos grupos jovem (A) A B from the young (A) and
e idoso (B) corados pelo elderly groups (B) using
tricrômio de Van Gieson- Van Gieson-elastin
elastina, x200, em que as trichrome stain, x200, in
fibras elásticas são obser- which the elastic fibers are
vadas em preto. Note-se a visualized in black. Note
clara fragmentação das the clear fragmentation of
fibras elásticas ao longo da the elastic fibers along the
derme com o envelheci- dermis with aging. In the
mento. Na derme superfi- superficial dermis, the
cial, o aparelho elástico elastic apparatus has
perdeu quase completa- almost completely lost its
mente sua disposição verti- vertical disposition in the
cal na pele senil aged skin.

forme observação pelo acúmulo de fluorescência be better defined in senile skin, judging by the visibility of the
(Figura 3B - seta). accumulation of fluorescence (Figure 3B - arrow).

Derme (aparelho colágeno-elástico) Dermis (elastic-collagen apparatus)

Em toda extensão da derme do grupo senil foi detecta- Throughout the extension of the dermis in the senile
da fragmentação acentuada das fibras elásticas coradas em group marked fragmentation of the elastic fibers was detected;
negro pela coloração de fucsina-resorcina de Weigert (Figura these were dyed black by Weigert's stain for elastin (fuchsin and
1B), em contraste com o aspecto contínuo das fibras elásticas resorcin) (Figure 1B). This was in contrast with the continuous
dos espécimes do grupo jovem (Figura 1A). As fibras elásticas, aspect of the elastic fibers of the specimens from the young
nos preparados de pele do grupo dos idosos, apresentavam-se group (Figure 1A). Elastic fibers, in the preparations of skin of
mais frouxamente dispersas e com uma diminuição no the elderly group, were more loosely dispersed and less inter-
entrançamento em relação às fibras colágenas, conforme laced in relation to collagen fibers, as was demonstrated by a
demonstração pelo contraste fluorescente diminuído (Figura reduced fluorescent contrast (Figure 3B). Besides this, it was
3B). Além disso, ao longo das rasas papilas dérmicas, foi con- found that among the shallow dermal papillae there was a defi-
firmada a deficiência do mecanismo de ancoragem em ângulo ciency in the anchorage mechanism. This was confirmed by the
reto das fibras elásticas, ao longo do contorno em campânula right angle of the elastic fibers along the outline of the papillar
do ápice papilar nos preparados dos indivíduos idosos (Figuras apex in the preparations from elderly individuals (Figures 1B
1B e 3B) em contraste com o arranjo das fibras elásticas dos and 3B) in contrast with the arrangement of elastic fibers of
espécimes do grupo jovem (Figura 1A). No grupo senil, os specimens from the young group (Figure 1A). In the senile
feixes colágenos estavam menos compactados e ondulados na group, collagen bundles were undulated and less compacted in
região média da derme (Figuras 1B* e 3B*), e o aparelho the area in the middle of the dermis (Figures 1B* and 3B*), and
colágeno-elástico reticular mostrou-se mais susceptível à dis- the collagen-elastic reticular apparatus was shown to be more
persão. Contudo, um arranjo mais compacto e espesso do apar- susceptible to dispersion. Nevertheless, a more compact and

A B

Figura 2: Espécimes de Figure 2: Skin specimens

pele corados por H&E, stained with H&E, showing
mostrando autofluorescên - autofluorescence at the level
cia na derme superficial e of the superficial and middle
média nos grupos jovem dermis in the young (A) and
(A) e idoso (B), x200. elderly (B) groups, x200.
Notem-se a redução con- Note the con-siderable
siderável do contraste
fluorescente na derme
* reduction of the fluorescent
contrast in the middle
média (asterisco) e um dermis (asterisk) and a
componente fluorescente fluores-cent component more
mais evidente no sítio da evident in the site of the
membrana basal na p basement membrane in aged
ele senil (seta) skin (arrow)

An bras Dermatol, Rio de Janeiro, 78(4):425-434, jul./ago. 2003.

Oriá, Santana, Fernandes, Ferreira & Brito 431

Figura 3: Espécimes de Figure 3: Skin specimens

pele dos grupos jovem A B from the young (A) and eld-
(A) e idoso (B) corados erly (B) groups, stained with
por H&E, x100. No-tem- H&E, x100. Note the progres-
se o achatamento pro- sive flattening of the
gressivo da junção epider- dermoepidermal interface
mo-dérmica com o envel- with aging and the
hecimento e a redução da re-duction of the acidophil-
acidofilia na derme média ia in the middle dermis
(asterisco), refletindo a (asterisk), reflecting the
redução da densidade de reduction in the den-sity of
fibras colágenas. the collagen fibers.

elho colágeno pode ser visto na derme profunda do grupo thick arrangement of the collagen apparatus was seen in the
senil, ilustrado pela crescente coloração acidofílica (Figura deep dermis of the senile group, as illustrated by the increased
2B). No grupo senil, a derme superficial exibiu redução em acidophilic coloration (Figure 2B). In the elderly group, the
sua celularidade e extensão em alça da microvasculatura papi- superficial dermis presented a reduction in its cellularity and
lar, revelada pelo discreto declínio da fluorescência local extension of the papillar microvasculature, as revealed by the
(Figura 3B). discreet decline of local fluorescence (Figure 3B).

DISCUSSÃO DISCUSSION
O presente estudo documentou as alterações histoló- The present study, using the skin of cadavers, docu-
gicas da pele de cadáveres durante o processo de envelhe- mented the histological alterations occurring during the
cimento, mediante estratégias de histomorfometria e auto- aging process. Techniques of histomorphometry and auto-
fluorescência. Observou-se redução significativa da espes- fluorescence were utilized.
sura da epiderme e derme na pele de idosos, ilustrada pelos A significant reduction of the thickness of the epi-
resultados histomorfométricos e análise qualitativa dos dermis and dermis was observed in the skin of the elderly,
preparados corados por diversos métodos. Esse achado foi as shown by the results of histomorphometry and qualita-
similar ao encontrado por outros autores. 30,31 É importante tive analysis applied to preparations dyed by several me-
considerar que algumas alterações estruturais da pele são thods. This finding was similar to that reported by other
inerentes ao envelhecimento, enquanto outras estão rela- authors.30,31 It is important to consider that some structural
cionadas à exposição ao sol, influências ambientais, grau alterations of the skin are inherent to the aging process,
de nutrição ou alterações do estado de saúde, como doenças while others are related to sun exposure, environmental
endócrinas. Cabe também levar em conta as diferenças influences, levels of nutrition or alterations in the state of
relacionadas à região do corpo estudada, especialmente no health, such as endocrinal diseases. It is also necessary to
que diz respeito à espessura da pele. Os resultados obtidos take into account the differences related to the area of the
pelos autores, em relação à pele do abdômen no grupo body studied, especially regarding the thickness of the skin.
jovem, foram semelhantes aos descritos por Shuster et al.30 The results obtained by the authors, in relation to the skin
Esses autores, utilizando pele do antebraço, também detec- of the abdomen in the young group, were similar to those
taram diminuição na espessura da pele com o avançar da described by Shuster et al.30 These authors, using skin of the
idade. Os resultados do presente trabalho mostram que a forearm, also detected a decrease in thickness of the skin
redução da espessura da epiderme e derme foi uma carac- with advancement of age. The results of the present work
terística das últimas décadas de vida, evidência demons- show that the reduction of the thickness of the epidermis
trada pela ausência de diferença estatística entre os valores and dermis are a characteristic of the last decades of life,
morfométricos na pele de indivíduos jovens e de idade demonstrated by an evident absence of statistical differen-
intermediária. Achados semelhantes foram encontrados por ce between the morphometric values in the skin of young
Shuster et al. 30 para indivíduos do sexo feminino. individuals and that of the middle-aged. Similar findings
De forma diversa, o aplanamento da derme papilar were reported by Shuster et al.30 for female individuals.
parece ocorrer progressivamente ao longo da vida, con- In several ways, the flattening of the papillar dermis
forme observação qualitativa dos preparados histológicos seems to occur progressively throughout life, according to
estudados neste trabalho (dados não mostrados para o qualitative observation of the histological preparations
grupo intermediário), bem como pela redução já estatisti- studied in this work (data not shown for the middle-aged
camente significante entre os grupos jovem e inter- group). In addition, there is a reduction that is statistically

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mediário, da estimativa da superfície epidermo-dérmica. O significant between the young and middle-aged groups, seen
grupo dos indivíduos de idade intermediária e idosos apre- in the estimation of the dermoepidermal surface. Individuals
sentou redução acentuada da superfície de contato epider- of the middle-aged group and the elderly presented accentu-
mo-dérmica em relação ao grupo dos jovens, o que signifi- ated reduction of the dermoepidermal contact surface in
ca que a pele de indivíduos jovens apresenta maior quanti- relation to the young group, which means that the skin of
dade de papilas dérmicas, com saliências e reentrâncias, young individuals presents a larger amount of dermal
comparativamente à pele de indivíduos idosos e inter- papillae, with protuberances and cavities, compared to the
mediários. Isso pode ser explicado, de acordo com Tsuji & skin of elderly and middle-aged individuals. This can be
Hamada,13 pela presença de um arranjo vertical de fibras nas explained, according to Tsuji & Hamada, 13 by the presence
papilas dérmicas que prendem a epiderme à derme dos indi- of a vertical arrangement of fibers in the dermal papillas
víduos jovens, que é perdido nos idosos, fazendo com que that secures the epidermis to the dermis in young individu-
a junção dermo-epidérmica se torne mais achatada e frágil. als. This is lost in the elderly, causing the dermoepidermal
Essa alteração do arranjo das fibras elásticas foi claramente interface to become flatter and more fragile. Alteration of
confirmada nos achados apresentados aqui, que mostram o the arrangement of the elastic fibers was clearly confirmed
desaparecimento do arranjo axial-vertical das fibras elásti- in the findings presented here, which show that in the der-
cas na derme dos indivíduos idosos, juntamente com acen- mis of elderly individuals there is a disappearance of the
tuada e evidente fragmentação dessas fibras. Esses resulta- axial-vertical arrangement of the elastic fibers, as well as
dos foram similares ao de outros autores 20,31,32 que relataram having accentuated and evident fragmentation of these
um contínuo colapso das propriedades elásticas na pele fibers. Again these results were similar to those of other
senil, pela falha da disposição em um padrão reticular, ape- authors20,31,32 that reported a continuous collapsing of the
sar da maior compactação dessas fibras, vista particular- elastic properties in senile skin, due, in spite of the greater
mente na derme profunda. De acordo com Imayama & compacting of those fibers, to a failure to achieve disposi-
Braverman,32 o arranjo tridimensional do aparato elástico, tion in a reticular pattern; this is seen particularly in the
analisado por microscopia eletrônica de varredura, exibe deeper dermis. According to Imayama & Braverman, 32 the
fibras elásticas mais fragmentadas e porosas com a idade, three-dimensional arrangement of the elastic apparatus,
conseqüentemente comprometendo a elasticidade da pele analyzed by scanning electron microscopic, presents elastic
normal. O processo de fragmentação das fibras elásticas e fibers more and more fragmented and porous with age, con-
de redução da espessura da epiderme e derme foi acelerado sequently compromising the elasticity of normal skin. The
nas últimas décadas de vida, fato que foi evidenciado pela process of fragmentation of the elastic fibers and reduction
ausência de diferença estatística entre os valores mor- of the thickness of the epidermis and dermis is accelerated
fométricos na pele de indivíduos jovens e de idade inter- in the last decades of life, a fact that was evidenced by the
mediária. Entretanto, as forças biomecânicas envolvidas no absence of statistical difference between the morphometric
aplanamento da derme papilar parecem atuar progressiva- values in the skin of young individuals and the middle-aged.
mente ao longo da vida, tendo em vista o contínuo declínio However, the biomechanical forces involved in the flatten-
da superfície de contato epidermo-dérmica. ing of the papillar dermis seem to act progressively along
A coloração por H&E associada à microscopia de the course of life, keeping in mind the continuous decline of
fluorescência, como descrito por Carvalho et al.,29 ajudaram the dermoepidermal contact surface.
a esclarecer a complexa disposição da rede elástica e sua The coloration with H&E associated with fluorescent
relação espacial com o colágeno. O entrançamento dos microscopy, as described by Carvalho et al.29 helped to explain
ramos das fibras elásticas em torno dos feixes de colágeno the complex disposition of the elastic network and its spacial
visto na pele jovem, a partir da autofluorescência, corrobo- relationship with collagen. The interlacing of the bundles of
ra esses dados, sugerindo que ambos os componentes elastic fibers around the bundles of collagen seen in young
fibrosos estão incluídos num único sistema biomecânico, skin, revealed by autofluorescence, corroborates these data,
atuando conjuntamente. A compactação aumentada do suggesting that both fibrous components are included in a sin-
colágeno, observada na derme profunda, em relação ao gle biomechanical system, acting jointly. The increasing com-
nível médio da derme, poderia ser explicada pelo maior pacting of collagen with aging observed in the deeper dermis,
número de ligações intermoleculares cruzadas, interagindo in relation to that in the medium level of the dermis, could be
ao longo da matriz colagênica26,33,34 e, portanto, lentificando explained by the larger number of crossed intermolecular con-
o turn over do colágeno nessa área, com o envelhecimento. nections, interacting along the collagen matrix26,33,34 and, there-
Essa modificação durante a vida pode ser regionalmente fore, slowing the turn over of collagen in that area. This modi-
específica. O padrão sinuoso dos feixes de colágeno parece fication during a lifetime may be regionally specific. The sinu-
ser mantido pela conexão com as fibras elásticas ao longo ous pattern of the bundles of collagen seems to be maintained
de suas concavidades;15 portanto, a aparência ondulada do by the connection with the elastic fibers along their concavi-
colágeno poderia ser afetada pelo colapso do aparelho elás- ties;15 therefore, the undulated appearance of the collagen
tico através da derme reticular em função da idade, levando could be altered by the collapse of the elastic apparatus with-

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a uma predominante horizontalização, seguindo uma in the reticular dermis as a function of aging, leading to a
tendência linear. 19 O comprometimento do colágeno super- predominant horizontalization, following a linear tendency. 19
ficial e intermediário e da estrutura do tecido elástico pode- The compromising of the superficial and intermediate colla-
ria contribuir, dessa forma, com os quadros de ptose e de gen and of the structure of elastic tissue could thereby con-
enrugamento tão bem caracterizados na velhice. De acordo tribute to the picture of ptosis and of wrinkling that charac-
com dados anteriores,35 no presente trabalho foi também terizes old age so well. In agreement with previous works,35
identificado o aumento da autofluorescência na membrana this research also identified the increase of autofluorescence
basal epidermo-dérmica da pele senil, o que poderia ser in the basal dermoepidermal membrane of senile skin, which
explicado pelo crescente depósito de um componente fluo- could be explained by the growing deposit of a fluorescent
rescente e pelo aumento de sua espessura total com a idade, component and by the increase of its thickness with age. All
o que reforça ainda mais a premissa do turn over deficiente of which further reinforces the premise of a deficiency in the
do colágeno.34 turn over of collagen.34

CONCLUSÃO CONCLUSION
Utilizando técnicas morfométricas e análise qualita- Using morphometric techniques and qualitative
tivas de preparados histológicos corados por diferentes analysis of histological preparations stained by the various
métodos associados a técnicas de autofluorescência, o pre- methods associated with autofluorescence techniques, the
sente estudo mostrou: 1) redução significativa da espessura present study showed: 1) significant reduction of the thick-
da epiderme e derme de indivíduos após os 60 anos de ness of the epidermis and dermis in individuals over 60 years
idade, sugerindo que esses parâmetros não decrescem de of age, suggesting that these parameters do not decrease in a
forma contínua, mas decrescem consideravelmente nas últi- continuous way, but decrease considerably in the last
mas décadas de vida; 2) redução progressiva da superfície decades of life; 2) progressive reduction of the der-moepi-
de contato epiderme-derme ao longo da vida, associada à dermal contact surface throughout life, associated with the
perda da distribuição em rede das fibras elásticas com sua loss of distribution in the elastic fiber network and its pro -
progressiva fragmentação; 3) que a estratégia da autofluo- gressive fragmentation; 3) that autofluorescence is a useful
rescência, para análise das mudanças ultra-estruturais em method for analysis of the ultra-structural changes in rela-
relação ao envelhecimento, é importante ferramenta para o tion to aging, because it is an important tool for the detailed
estudo detalhado da complexa disposição da rede elástica e study of the complex disposition of the elastic network and its
sua relação espacial com o colágeno, mostrando redução do spatial relationship with collagen. It clearly reveals the
entrançamento dos ramos das fibras elásticas em torno dos reduction of the interlacing of the branches of elastic fibers
feixes de colágeno, alterações regionalmente específicas da around bundles of collagen, specific regional alterations of
compactação e da disposição do colágeno e espessamento compacting and the disposition of collagen in the basal
da membrana basal com o envelhecimento. q membrane and its thickening during the aging process. q

REFERÊNCIAS / REFERENCES
1. Gonçalves AP. Envelhecimento cutâneo cronológico. An Bras Ferguson MW. Topical estrogen accelerates cutaneous wound
Dermatol 1991;66:4S-6S. healing in aged humans associated with an altered inflammatory
2. Trelles MA, Rigau J, Mellor TK, Garcia L. A clinical and his- response. Am J Pathol 1999;155(4):1137-46.
tological comparison of flashscanning versus pulsed technology 9. Bischoff JE, Arruda EM, Grosh K. Finite element modeling of
in carbon dioxide laser facial skin resurfacing. Dermatol Surg human skin using an isotropic, nonlinear elastic constitutive
1998;24(1):43-9. model. J Biomech 2000;33(6):645-52.
3. Lavker RM, Zheng PS, Dong G. Morphology of aged skin. Clin 10. Castelo-Branco C, Pons F, Gratacos E, Fortuny A, Vanrell JA,
Geriatr Med 1989;5(1): 53-67. Gonzalez-Merlo J. Relationship between skin collagen and bone
4. Pagnano PMG. Envelhecimento da pele e conseqüências. J changes during aging. Maturitas 1994;18(3):199-206.
Bras Psiq 1990;39(1):37-41. 11. Cruzzi-Maya T, Piñeiro-Maceira J. Dermatopatologia: Bases
5. Tsuji T, Yorifuji T, Hayashi Y, Hamada T. Light and scanning para o Diagnóstico Morfológico. São Paulo: Roca, 2001.
electron microscopic studies on wrinkles in aged persons' skin. Br 12. Pinkus H, Mehregan AH, Staricco RG. Elastic globes in
J Dermatol 1986;114(3):329-35. human skin. J Invest Dermatol 1965;45(2):81-5.
6. Bernstein EF, Chen YQ, Kopp JB et al. Long-term sun expo- 13. Tsuji T, Hamada T. Age-related changes in human dermal
sure alters the collagen of the papillary dermis. Comparison of elastic fibres. Br J Dermatol 1981;105(1):57-63.
sun-protected and photoaged skin by northern analysis, immuno- 14. Blair C. Morphology and thickness of the human stratum
histochemical staining, and confocal laser scanning microscopy. J corneum. Br J Dermatol 1968; 80(7):430-6.
Am Acad Dermatol 1996;34:209-18. 15. Lapière CM. The ageing dermis: the main cause for the
7. Margelin D, Fourtanier A, Thevenin T, Medaisko C, Breton M, appearance of 'old' skin. Br J Dermatol 1990;122 Suppl 35:5-11
Picard J. Alterations of proteoglycans in ultraviolet-irradiated 16. Kono T, Tanii T, Furukawa M et al. Correlation between age-
skin. Photochem Photobiol 1993;58(2):211-8. ing and collagen gel contractility of human fibroblasts. Acta
8. Ashcroft GS, Greenwell-Wild T, Horan MA, Wahl SM, Derm Venereol 1990;70(3):241-4.

An bras Dermatol, Rio de Janeiro, 78(4):425-434, jul./ago. 2003.

434 Oriá, Santana, Fernandes, Ferreira & Brito

17. Martin M, el Nabout R, Lafuma C, Crechet F, Remy J. São Paulo 1995;50 Suppl:39-43.
Fibronectin and collagen gene expression during in vitro ageing of 28. Kiernan JA. Histological & Histochemical Methods. 3rd ed.
pig skin fibroblasts. Exp Cell Res 1990;191(1):8-13. New York: Oxford University Press, 2001.
18. Maurel E, Bouissou H, Pieraggi MT, Julian M. Age dependent 29. Carvalho HF, Taboga SB, Felisbino SL. Fluorescence and con-
biochemical changes in dermal connective tissue. Relationship to focal laser scanning microscopy of H&E stained sections for the
histological and ultrastructural observations. Connect Tissue Res study of elastic fibers in skin and in some skin disorders. Braz J
1980;8(1):33-9. Morphol Sci 1999;16(1):97-103.
19. Moragas A, Garcia-Bonafe M, Sans M, Toran N, Huguet P, 30. Shuster S, Black MM, McVitie E. The influence of age and sex
Martin-Plata C. Image analysis of dermal collagen changes during on skin thickness, skin collagen and density. Br J Dermatol
skin aging. Anal Quant Cytol Histol 1998;20(6): 493-9. 1975;93(6):639-43.
20. Leveque JL, Corcuff P, De Rigal J, Agache P. In vivo studies 31. Smith L. Histopathologic characteristics and ultrastructure of
of the evolution of physical properties of the human skin with age. aging skin. Cutis 1989; 43(5):414-24.
Int J Dermatol 1984;23(5):322-9. 32. Imayama S, Braverman IM. A hypothetical explanation for the
21. Vitellaro-Zuccarello L, Cappelletti S, Dal Pozzo Rossi V, Sari- aging of skin. Chronologic alteration of the three-dimensional
Gorla M. Stereological analysis of collagen and elastic fibers in arrangement of collagen and elastic fibers in connective tissue.
the normal human dermis: variability with age, sex, and body Am J Pathol 1989;134(5):1019-25.
region. Anat Rec 1994;238(2):153-62. 33. Yamauchi M, Prisayanh P, Haque Z, Woodley DT. Collagen
22. Hill MW. Influence of age on the morphology and transit time cross-linking in sun-exposed and unexposed sites of aged human
of murine stratified squamous epithelia. Arch Oral Biol skin. J Invest Dermatol 1991;97(5):938-41.
1988;33(4):221-9. 34. Yamauchi M, Woodley DT, Mechanic GL. Aging and cross-
23. Seidenari S, Giusti G, Bertoni L, Magnoni C, Pellacani G. linking of skin collagen. Biochem Biophys Res Commun
Thickness and echogenicity of the skin in children as assessed by 1988;152(2):898-903.
20-MHz ultrasound. Dermatology 2000;201(3):218-22. Vazquez F, Palacios S, Aleman N, Guerrero F. Changes of the
24. Pienta KJ, Getzenberg RH, Coffey DS. Characterization of basement membrane and type IV collagen in human skin during
nuclear morphology and nuclear matrices in ageing human fibrob- aging. Maturitas 1996;25(3):209-15.
lasts. Mech Ageing Dev 1992;62(1):13-24.
25. Smith GJ, Davidson EA, Mitchell W et al. Alterations in
human dermal connective tissue with age and chronic sun damage.
J Invest Dermatol 1962;39(4):347-50. ENDEREÇO PARA CORRESPONDÊNCIA: / MAILING ADDRESS :
26. Takeda K, Gosiewska A, Peterkofsky B. Similar, but not iden- Gerly Anne de Castro Brito
tical, modulation of expression of extracellular matrix components
during in vitro and in vivo aging of human skin fibroblasts. J Cell Rua Cel. Nunes de Melo, 1127
Physiol 1992;153(3):450-9. Fortaleza CE 60430-970
27. De Faria JC, Tuma Júnior P, Costa MP, Quagliano AP, Ferreira Tel/Fax: (85) 288-8349 / 288-8333
MC. Envelhecimento da pele e colágeno. Rev Hosp Clin Fac Med E-mail: gerlybrito@hotmail.com

An bras Dermatol, Rio de Janeiro, 78(4):425-434, jul./ago. 2003.