Dissertacao

1.
Introdução
Introdução 2
1. INTRODUÇÃO
Em 1753, o botânico sueco Carolus Linnaeus cunhou o termo científico Cannabis
sativa para a maconha (como é popularmente conhecida no Brasil). É uma das plantas mais
antigas de que o homem tem conhecimento, com relatos de uso de mais de 4000 anos, quando
foi mencionada na Farmacopéia Chinesa. A Cannabis se propagou da China à Índia, para o
norte da África, chegando à Europa cerca de 500 anos depois de Cristo e por fim à América
do Norte. As principais utilizações, na América eram como fonte de fibras, empregadas para
confeccionar cordas. Seu óleo era utilizado na fabricação de tintas, enquanto que as sementes
eram usadas como ração para o gado (HANSON; VENTURELLI, 1995; McGUIGAN, 2006).
Documentos históricos mostram que a maconha foi introduzida no Brasil na época das
capitanias, também com a utilização de suas fibras, porém estimava-se que a planta já fosse
conhecida há mais tempo, pelos primeiros escravos, que a utilizavam como hipnótico,
mostrando assim que a droga apresentava propriedades terapêuticas (MOREAU, 2008).
A maconha começou a ser encarada como problema social nos primeiros anos do
século XIX, sendo seu uso proibido na década de 30. Naquela época, era considerada uma
“droga perigosa”, conhecida como a "assassina da juventude”, capaz de induzir
comportamentos violentos (“loucura”) e promíscuos entre os seus usuários. Por conta disso, o
seu uso clínico declinou lentamente, já que os pesquisadores não conseguiram isolar os seus
princípios ativos. Além disso, a deterioração das preparações brutas (extratos) com o tempo e
sob a luz tornava os efeitos clínicos imprevisíveis. Alguns países começaram a relacionar o
abuso da maconha à degeneração psíquica, ao crime e à marginalização do indivíduo. Nas
décadas de 60 e 70, o seu consumo voltou a crescer significativamente, época na qual foi
Introdução 3
isolado e identificado quimicamente o principal componente psicoativo da Cannabis sativa L,
o ∆9-Tetraidrocanabinol (∆9-THC) pelo pesquisador israelense Raphael Mechoulan e por
Yechiel Gaoni (OLIVEIRA, 2006; MOREAU, 2008, MARKEZ et al., 2002).
De acordo com o relatório mundial sobre drogas, promovido em 2008 pela United
Nations Office on Drugs and Crime (UNODC, 2008), a maconha ainda é a droga ilícita mais
consumida em todo o mundo, com quase 165,6 milhões de usuários entre 2006-2007. Um
significativo aumento foi verificado no Brasil entre os anos de 2005 á 2007 provavelmente
devido a uma maior disponibilidade de produtos da Cannabis oriundas do Paraguai
(MOREAU, 2008; UNODC, 2007; UNODC, 2008).
Em se tratando de apreensões da Cannabis sativa, a América do Norte é a região do
globo com maior número de apreensões (61,0 %), seguida pela África (19,0 %), América do
Sul (12,0 %), Ásia (5,0 %), Europa (3,0 %) e Oceania (0,1 %). Analisando as apreensões por
país, o México é o que apresentou maior percentual (36,0 %), seguido dos Estados Unidos
(23,0 %), África do Sul (7,0 %), Brasil (3,0 %) e demais países. Outro dado importante
apresentado no relatório foi que os países da América do Sul apresentaram grande aumento do
consumo da droga, enquanto que países da América do Norte tiveram uma diminuição
significativa quanto ao consumo.
No Brasil, segundo o II Levantamento Domiciliar sobre o uso de Drogas Psicotrópicas
realizado pela UNIFESP em 2005, 8,8 % da população (2,1 % a mais que no ano 2001) fez
uso da maconha, confirmando que, em nosso país, ela é a droga ilícita mais consumida,
resultado semelhante ao de alguns países da Europa, como a Grécia (8,9 %) e Polônia (7,7 %).
Em contrapartida, esse resultado é bem inferior ao de outros países como Estados Unidos
(40,2 %), Reino Unido (30,8 %) e Chile (22,4 %).

Introdução 4
As opiniões sobre os riscos à saúde associados ao uso da Cannabis continuam diversas
e tal assunto ainda é objeto de estudos. Em pesquisa feita por Markez et al., (2002), onde
foram entrevistados alguns usuários de Cannabis a respeito dos perigos em consumir a droga,
42 % dos entrevistados tinham preocupação de se tornarem dependentes e terem efeitos
adversos advindos do uso, 32,1 % problemas familiares, 16,1 % se preocuparam com
possíveis contaminantes presentes na Cannabis (que podem levar a efeitos desagradáveis) e
outras opções em menor porcentagem.
A possibilidade de contaminantes na maconha deve ser minuciosamente analisada,
visto que, com o aumento da produção da droga, o que acarreta em colheitas com tempo
reduzido, alto rendimento, baixo prejuízo e a “re-engenharia” da planta, visando o aumento
das concentrações de canabinóides, é de se supor que contaminantes possam estar sendo
incorporadas durante esse processo de obtenção da “droga de rua”. Problema enfatizado pelo
Diretor Executivo da UNODC, Antonio Maria Costa: “As características mais perigosas da
Cannabis não são mais tão diferentes das outras drogas que vêm de plantas”. Ou seja, deve se
levar em consideração outros aspectos da maconha, como os contaminantes possivelmente
presentes na droga, que podem contribuir para o aumento da toxicidade, fato já caracterizado
em outras drogas provenientes de plantas como a cocaína (UNODC, 2006; FIGUEIREDO,
2002).
Em pesquisa realizada no ano de 2003, DARINI; SOARES e CAZENAVE mostraram
que existe a contaminação da maconha por microrganismos cosmopolitas (fungos), os quais
em sua grande maioria produzem micotoxinas, que são de grande importância toxicológica.
Nesse estudo, foram identificados fungos do gênero: Aspergillus, Penicillium, Fusarium,
Scopulariopsis, Cladosporium, Chysosporium e Acremonium sp. Deve se dar destaque aos

Introdução 5
micotoxigênicos como Aspergillus e Penicillium, que através de seus metabólitos secundários,
podem levar a disfunções renais, hepáticas e neurológicas, gerando quadros de intoxicações
agudas e crônicas, bem como alterações teratogênicas e carcinogênicas (interage na síntese e
replicação de DNA). Podem, ocasionar alergia ocupacional em policiais, toxicologistas
hipersensíveis, e também no próprio usuário por estarem em contato direto através da
dispersão, inalação, e/ou ingestão dos esporos ou hifas na hora da manipulação e do uso
(DARINI; SOARES; CAZENAVE, 2003). Até o presente momento, um óbito foi confirmado
em conseqüência do uso crônico de maconha contaminada por Aspergillus, e que foi devido à
aspergilose pulmonar (HAMADEH et al., 1988).
Relatos da imprensa do Paraguai (principal distribuidor de Cannabis para o Brasil),
demonstraram que grande parte da droga, está sendo comercializada com a presença de
policloroprene (“neoprene”, composição sintética da borracha) (LA NACION, 2006).
Outra contaminação da Cannabis, já relatada, foi pelo herbicida Paraquat (PQ), que
começou a ser aplicado por aviões que sobrevoavam as plantações de maconha do México no
final da década de 70 pelo DEA (Drug Enforcement Administration) em uma ação conhecida
como “Cannabis Eradication Suppression Program,” ou “Plan México” com apoio e
financiamento dos Estados Unidos, posto que era o México o grande distribuidor de maconha
no país. Tal ação gerou grande polêmica em todos os países envolvidos, devido à toxicidade
que o paraquat apresentava para os usuários de maconha e para a população que habitava
próximo das regiões de cultivo e aplicação do herbicida. Essa medida foi alterada na década
de 90, quando o Paraquat (extremamente tóxico) foi substituído pelo Glifosato (GLI) (baixa
toxicidade aguda) que é aplicado até hoje em plantações de maconha, coca e papoula, visando
a erradicação das mesmas em vários países (ARMENTANO, 1998; COGGIOLA, 2005).

Introdução 6
Além dessas aplicações com propósito de erradicação, tais herbicidas que também
possuem propriedades dessecantes, o que possibilita o uso em plantações de Cannabis com
propósito de agilizar o processo de secagem da planta, reduzindo assim o tempo de obtenção
da “droga de rua”. Contaminações acidentais podem ocorrer, uma vez que plantações de
Cannabis são cultivadas em ambientes com outras culturas alimentícias (BÓIAS FRIAS DA
MACONHA, 2008). Tal hipótese mostra-se sustentável, através de pesquisas feitas entre 1999
e 2003 nos EUA, onde foram encontradas amostras de maconha contaminadas pelo paraquat,
mesmo após o herbicida ter sido banido do país e ter sido substituído pelo glifosato no
programa de erradicação (ELSOHLY, 2003). Estes herbicidas podem ser aplicados também
com a finalidade de evitar prejuízos causados por possíveis ervas daninhas em Cannabis,
cultivadas em condições especiais (laboratório) ou normais, sempre em grandes proporções,
como já comprovado o uso em outras culturas de drogas ilícitas (GRANJA, 2001).
A utilização de praguicidas em diversos tipos de culturas alimentícias segue uma
norma estabelecida de boas práticas de produção e um severo controle através do
estabelecimento de doses diárias aceitáveis (DDA) que são referências constantes em
legislações (Decreto nº. 4074 de 04 de Janeiro de 2002, que regulamenta a lei nº 7802 de 11
de julho de 1989) e que refletem benefícios para toda uma população (ANVISA, 2002). Em
plantações de substâncias ilícitas, como a Cannabis sativa, por motivos óbvios, este
procedimento não existe, constituindo um sério problema de saúde pública, inserindo um fator
a mais na problemática relacionada à Saúde Pública que advém do hábito de fumá-la.
O Paraquat, fabricado pela Syngenta® e o Glifosato pela Monsanto®, são os principais
herbicidas utilizados em diversos tipos de plantações em todo mundo. Quanto à sua
classificação toxicológica, o Paraquat é classificado como classe I (extremamente tóxico) e o

Introdução 7
Glifosato como classe IV (pouco tóxico) (ANVISA, 2007). Diversos praguicidas,
principalmente o paraquat, estão sendo apreendidos pela polícia, por serem importados da
China e não possuírem registro na Vigilância Sanitária. São produtos com formulações
clandestinas que entram no país com um preço menor em comparação aos nacionais, atraindo
assim seu uso por alguns produtores. Outro fator importante é que não se sabe quais são os
componentes da formulação e nem o risco que esses produtos podem trazer ao homem e ao
meio ambiente (ADPF, 2006a).
As intoxicações com praguicidas ocorrem com muita freqüência em todo o país. É
difícil estabelecer se a causa é devido ao uso crônico de uma droga de abuso contaminada ou
outra situação exógena. Os levantamentos feitos no Centro de Controle de Intoxicações de
Campinas (CCI) e pelo Centro de Informações Toxicológicas de Santa Catarina (CIT)
mostram que existe essa possibilidade de ocorrer esse tipo de intoxicação, principalmente na
porcentagem de dados desconhecidos (BIGOLIN et al., 2003; VIEIRA et al., 2003).
O CIT de Santa Catarina fez um estudo de 219 casos de intoxicações por paraquat
entre 1984 a 2002 e os resultados mostram que: 170 (77,6 %) foram do sexo masculino. A
faixa etária mais comprometida foi de 20 a 39 anos (52,9 %). Quanto à causa, 43,8% foram
tentativas de suicídio, 40,6 % ocupacionais e 15,6 % desconhecidas. As exposições foram
agudas 84,5 % e crônicas 15,5 % sendo 47,4 % por via oral e 42,9 % por via respiratória. As
manifestações clínicas ocorreram em 97,7 % dos pacientes (BIGOLIN et al., 2003).
O CCI de Campinas apresentou alguns aspectos epidemiológicos das intoxicações por
glifosato, sendo o estudo realizado com fichas de notificação de 1993 a 2002. Foram
atendidos 361 pacientes intoxicados pelo glifosato, sendo 307 do sexo masculino, 48 do
Introdução 8
feminino; 339 eram adultos e 22 crianças (menores de 14 anos). Em relação a via de
exposição, 270 ingeriram o produto, 46 tiveram exposição cutânea, 26 ocular, 15 inalaram o
glifosato e em 4 a exposição foi desconhecida. Quanto às circunstâncias: 148 casos foram por
exposição ocupacional, 129 tentativa de suicídio, 71 exposição acidental, 1 ambiental, 1
tentativa de homicídio e em 11 casos a circunstância foi desconhecida. (VIEIRA et al., 2003).
Face ao exposto, é de extrema importância o desenvolvimento de metodologias
analíticas que possibilitem a identificação e quantificação dos herbicidas paraquat e glifosato,
bem como seu principal metabólito, o ácido aminometilfosfônico (AMPA) em amostras de
Cannabis sativa apreendidas pela polícia para exame pericial. Ferramenta esta imprescindível
para futuros delineamentos e avaliações sobre os possíveis riscos que a Cannabis pode
oferecer através de seus contaminantes.

2. Generalidades
Generalidades 10
2. GENERALIDADES
2.1. Características Botânicas da Cannabis sativa L.
A Cannabis pertence à família Cannabinaceae. É uma dicotiledônea anual, que se
perpetua através de sementes extremamente resistentes, crescendo tanto em solos férteis como
em zonas estéreis e áridas, em regiões tropicais e temperadas, sendo conhecidas mais de 100
espécies. A planta atinge alturas variáveis desde 60 cm até 7 m, dependendo das condições de
cultivo. Nas melhores condições aplicadas, atinge uma altura de 3 m; no Brasil chega cerca de
1,5 a 2 m de altura (STAMBOULI et al., 2005; MARKEZ et al., 2002; FILHO, 1988). A
planta feminina, via de regra, é maior que a masculina e possui maior massa foliar. Trata-se
de espécie vegetal dióica, apresentando, portanto, os órgãos de reprodução masculino
(estame) e o feminino (pistilo) em plantas diferentes. O caule é de cor verde escura, ereto,
oco, apresenta superfície áspera ao tato, ligeiramente quadrangular e possui fibras
industrialmente importantes. É coberto de pêlos pequenos e curvos formado por uma célula
que contém um cistólito em sua base (OLIVEIRA; AKISUE; AKISUE, 1998).
A raiz é longa, perpendicular, lenhosa e branca. As folhas localizadas inferiormente
nos caules têm disposições opostas, ao passo que as folhas da ponta dos ramos são alternas.
São longo pecioladas, palmatissectadas sustentadas por um pecíolo de 5 a 7 cm de
comprimento. Cada folha apresenta de 5 a 7 folíolos verde escuros, que emergem da parte
superior do pecíolo. Os folíolos podem atingir até 25 cm de comprimento, geralmente com
formato semelhante a uma lança e com bordas serrilhadas. Quando em uma mesma folha são
desiguais em tamanho, os mais largos e mais compridos se localizam no centro da palma
sendo recobertos por pêlos que são mais profusos e mais compridos na superfície inferior
(FILHO, 1988; OLIVEIRA; AKISUE; AKISUE, 1998).

Generalidades 11
As características morfológica, biológica e químico-farmacológica dependem das
condições de crescimento, com as variantes de: altitude, temperatura, umidade, luminosidade,
fertilizante utilizado, tipo de solo e principalmente a forma de cultivo. Plantações em países
com clima temperado desenvolvem a planta com concentrações de resina muito baixa e,
consequentemente, menor quantidade de THC. Cultivos especiais (laboratório) podem
produzir espécies com altas concentrações de THC. Como a Cannabis tem capacidade de se
adaptar a todos os climas, esse fenômeno é acompanhado geralmente por modificações,
morfológicas das folhas (STAMBOULI et al., 2005; MARKEZ et al., 2002; REINHARDT,
1993).
As flores femininas são pequenas, aparecem agrupadas (inflorescências) em espigas,
são formadas de um ovário envolvido por um perigônio cupuliforme e encimado por dois
longos estiletes filiformes articulados na base e providos de papilas estigmáticas A
polinização da flor feminina é realizada através do vento. As flores masculinas são pequenas,
com 5 sépalas esverdeadas e 5 estames (inflorescência masculina), que quando abertos
liberam o pólem, conforme Figura 1 (REINHARDT, 1993; OLIVEIRA; AKISUE; AKISUE,
1998).
Os estigmas caem após a polinização, o volume das brácteas aumentam e produzem o
fruto do tipo aquênio, pequeno, elíptico, liso, brilhante de cor verde acastanhada. A semente
contém o embrião que é formado por dois cotilédones, possuindo grande quantidade de óleo
(STAMBOULI et al., 2005; REINHARDT, 1993).
A planta masculina tem vida mais curta, morrendo após o pólem ter sido espalhado e o
ciclo reprodutivo ter se iniciado. A planta feminina sobrevive até ser morta pelas condições
climáticas, ou até que as sementes amadureçam (PARIS & NAHAS; 1984).

Generalidades 12
A Cannabis é uma planta muito resistente que tolera bem as mudanças climáticas,
exceto frio intenso. É suscetível a algumas pragas, sendo necessária a utilização de
praguicidas para erradicação das mesmas (REINHARDT, 1993; CAÑAMO, 2006).
Figura 1. Cannabis sativa- A. planta masculina, B. planta feminina – 1. flor masculina aberta
com tépalas e estames, 2 e 3. antera, 4. pólen, 5. flor feminina (ovário e bráctea), 6. ovário
com estigma, 7. ovário sem estigma, 8. fruto envolto em bráctea, 9 e 10. fruto, 11.embrião
com cotilédones, 12 e 13.fruto (aquênio). Fonte: KHÖLER, 1914; REINHARDT, 1993.

Generalidades 13
2.2. Características químicas
A Cannabis é uma planta complexa que contém aproximadamente 480 substâncias
químicas diferentes distribuídas em dezoito classes químicas (VOTH & SCHWARTZ, 1997;
MARKEZ et al., 2002). Dentre essas substâncias, destacam-se os óleos essenciais,
flavonóides, açúcares, aminoácidos, ácidos graxos, compostos nitrogenados e os
terpenofenóis. A atividade farmacológica da planta está associada à classe terpenofenólica,
que é composta por mais de sessenta canabinóides, e que não são encontrados em outras
espécies vegetais (TAURA et al., 2007; STAMBOULI et al., 2005).
Tais canabinóides, cujas estruturas químicas estão demonstradas na Figura 2,
encontrados nas folhas e nas flores, não são encontrados em raízes, sementes e traços estão
presentes no caule e ramos. Os canabinóides de importância farmacológica são:
∆9-THC - é o principal componente com efeito psicoativo em humanos,
também responsável pela diminuição da pressão intraocular;
∆8-THC - apresenta menor efeito psicoativo em relação ao ∆9-THC;
Canabidiol (CBD) - não apresenta efeito psicoativo, porém apresenta
significante efeito anticonvulsivante e sedativo;
Canabinol (CBN) - apresenta atividade antiinflamatória; seu efeito psicoativo
é observado apenas por via intravenosa;
8 9
Ácido ∆ -THC e ácido ∆ -THC - apresentam atividade psicoativa, sendo que
8 9
o ∆ -THC apresenta somente após ser queimado, é convertido em ∆ -THC;
Canabigerol (CBG) - parece apresentar efeito bacteriológico;
Canabicromeno (CBC), canabiciclol (CBL) e seus ácidos.

Generalidades 14
CH 3 CH3 CH 3
OH OH OH
C3H C CH 3 CH 3
HO C 5H 11 CH 3 O C 5H 11 CH3 O
H2 C
Canabidiol ∆9-Tetrahidrocanabinol (THC) Ácido canabidiólico
CH3 CH 3 CH 3
OH OH OH
COOH COOH
C 3H CH 3 C3 H
C C
HO C 5H 11 CH3 O C5 H11 HO
H 2C H2 C
Ácido ∆9-THC Canabinol ∆8-THC
CH 3 CH3 CH 3
OH OH OH
CH 3 CH 3 CH3
CH 3 O C 5H 11 CH 3 O C 5H 11 CH 3 O
9
∆ -Tetrahidrocanabivarin Canabidivarin Canabivarin
OH
OH
Canabigerol
Figura 2. Principais canabinóides presentes na Cannabis sativa L. Fonte: STAMBOULI et al.,
2005.
Generalidades 15
A concentração do ∆9-THC é utilizada como parâmetro para as avaliações da
psicoatividade (potência) da Cannabis (CHIANG & BARNETT, 1989). Neste sentido,
verifica-se que a Cannabis é hoje uma droga diferente daquela utilizada há 20 anos atrás
(JUNGERMAN; LARANJEIRA; BRESSAN, 2005). Este quadro mudou drasticamente no
final dos anos 70, como resultado da produção “doméstica”, para burlar a repressão policial
exercida nos cultivos ao ar livre. Frente à necessidade de se produzir a Cannabis
clandestinamente, em pequenas áreas, os produtores desenvolveram técnicas de hidroponia,
que resultaram em produtos com elevada potência, podendo chegar a 20 % de ∆9-THC
(ADAMS & MARTIN, 1996; CLARKE, 1981). Outras técnicas laboratoriais tais como
controle de umidade, de temperatura, de nutrientes e de luminosidade. Também são
empregadas técnicas de hidroponia, visando o aumento na concentração de ∆9-THC (5 -10
%), caracterizando assim a “maconha de laboratório” ou Skunk (skank) (OLIVEIRA, 2005).
2.3. Variedades de Cannabis
Tecnicamente, todas as plantas do gênero Cannabis disponíveis, são classificadas
como Cannabis sativa, independentemente da sua origem. Contudo, de acordo com
McPartland, Clarke e Watson, a Cannabis sativa pode ser ainda classificada como: Cannabis
sativa (Cannabis sativa variedade sativa), Cannabis indica (Cannabis sativa variedade
indica), Cannabis ruderalis (Cannabis sativa variedade spondanea), Cannabis afghanica
(Cannabis sativa variedade afghanica). Cada uma das variedades apresenta características
distintas, como: coloração, tamanho, quantidade de folhas e inflorescências, teor de THC e
outros canabinóides (CERVANTES, 2007; STAMBOULI et al., 2005).

Generalidades 16
Uma das variedades que vem ganhando destaque internacional, é a indica, que é
originária da Índia e do Paquistão. É a forma priorizada por alguns produtores de “campo” e
in door, devido a algumas de suas características, como: crescimento rasteiro, sistema
radicular condensado, caules firmes, vasta quantidade de folhas e inflorescências que
proporcionam grande porcentagem de THC (6 – 7 %). A folhagem apresenta coloração verde
escuro, e em algumas variedades apresenta folhas com bordas com coloração que vai do
vermelho à púrpura, com pistilos da mesma coloração (CERVANTES, 2007).
Seu potente efeito está relacionado com as elevadas concentrações de ∆9-THC e CBD
e um dos efeitos descritos por alguns dos usuários é de “uma pedrada na cabeça”. Algumas
das variedades indica, apresentam um odor semelhante ao do skunk e também um cheiro
exótico e adocicado. Outra característica própria dessa variedade é a resistência à ação de
fungos e pragas (CERVANTES, 2007).
As diferentes quantidades de ∆9-THC e outros canabinóides na planta Cannabis sativa
levaram alguns autores a propor uma distinção entre três espécies: a tipo-fibra, a tipo-droga e
a intermediária. Essa variedade depende da biossíntese dos canabinóides, que está ilustrada na
Figura 3. No primeiro estágio, a condensação do geranil pirofosfato com olivetol formam o
CBG, que é um precursor do CBD e do ∆9-THC. Cada etapa da síntese é controlada por uma
ação enzimática específica ligada a fatores biogenéticos, o qual tem influência na biossíntese
dos canabinóides e sua abundância na planta (STAMBOULI et al., 2005).

Generalidades 17
Na planta tipo fibra, a concentração de ∆9-THC é menor que 0,3 %, enquanto a
concentração de CBD é elevada. A planta é cultivada para produção de tipos especiais de
9
papel e fitas têxteis. Na planta tipo-droga, usualmente a concentração de ∆ -THC é maior que
2 %, chegando a concentrações superiores a 10 %; nesse tipo de composição, observa-se que
são cultivadas em zonas climáticas quentes e que são capazes de produzir uma quantidade
elevada de resina. Existem vários produtos a partir destas plantas, cujos nomes diferem de
país para país, conforme pode ser observado na Tabela 1. (SOUBHIA, 1999). E por fim a
intermediária, que apresenta concentrações maiores de 0,5 % para ∆9-THC e (CBD).
Recentemente foi descoberto um novo subtipo, denomidado “Segunda geração do tipo fibra”
cujos valores de (CBD) encontram-se entre, cerca de 0,1 % e 0,0 % de ∆9-THC, diferença em
relação aos demais tipos explicada pelo fato de que durante a síntese dos canabinóides desse
tipo é incompleta, finalizando na etapa da formação do (CBG) (STAMBOULI et al., 2005).

Generalidades 18
OH
OH OH R
O P O P OH +
O O HO [CH 2]4Me
Geranil pirofosfato (I) Olivetol (II)
OH
R OH
R
HO [CH 2]4 Me H
O [CH 2]4 Me
H
Canabigerol (III) Íon Carbonium
OH CH 3
R
OH
O [CH 2] 4 Me
C3 H C
HO C 5H 11
H2 C
Dienone Canabidiol (V)
OH CH 3
R
OH
R
O [CH 2]4 Me
H3 C
O C 5H 11
H 3C
9
Canabicromeno (IV) ∆ -Tetrahidrocanabinol (VI)
Figura 3. Biossíntese dos principais canabinóides. Fonte: STAMBOULI et al., 2005.

Generalidades 19
Tabela 1. Principais produtos obtidos da Cannabis sativa.
Nome do Produto / Localidade Composição % de ∆9-THC
Maconha / Brasil Planta inteira, com proporções

Marijuana, grass / EUA variáveis de folhas, inflorescências, 1a3
Kit / Marrocos caules e frutos.
Dagga (África do Sul)
Hash oil / Marrocos, Índia Produto obtido da extração com 60

solventes orgânicos ou por destilação.
Haxixe / Oriente Médio, África Exsudato resinoso seco, coletado das 1,4 a 18,8
Charas / Índia inflorescências das plantas.
Skunk (Skank) / EUA Planta cultivada em condições 5 a 10

especiais de umidade, temperatura,
luminosidade, nutrientes
Sinsemilla (Seedless marijuana) / Sumidades floridas das plantas 5

EUA femininas que não foram polinizadas
Ganja / Índia Massa resinosa de folhas pequenas e 3

inflorescências de plantas cultivadas.
Bhang / Índia Folhas secas e inflorescências de 1a3

plantas não cultivadas.
Hemp Forma utilizada para produção de < 0,5

fibras utilizadas na indústria têxtil ou
de papel
Fonte: MOREAU, 2008; OLIVEIRA, 2005.

Generalidades 20
2.4. Padrões de consumo
A maconha vem sendo utilizada, cada vez mais de formas variadas daquelas
consumidas há algumas décadas, que se resumiam basicamente no ato de fumar, visando a
busca de novos prazeres e sensações. Tais formas são produzidas através de inúmeras técnicas
descritas pela mídia eletrônica, onde os principais produtos obtidos a partir da Cannabis, já
descritos são: bolos, brigadeiros, macarronadas, pizzas, balas, farinha, bebidas (cerveja,
limonada e licor) e cosméticos (PELLEGRINI et al., 2005; MARCON et al., 2005;
OLIVEIRA, 2005). Tais preparações são muitas vezes utilizadas concomitantemente com a
maconha na forma de cigarros e com outros tipos de drogas, como: álcool, tabaco, êxtase
(MARKEZ et al., 2002). Alguns países, como a Suíça, já relataram os possíveis riscos desses
alimentos preparados a partir da Cannabis, por apresentarem uma concentração elevada de ∆
9-THC. No Brasil, em uma pesquisa feita por Marcon et al., (2005), 20 voluntários foram
questionados sobre o uso dessas preparações a partir da Cannabis e os principais efeitos
relatados foram alterações mentais como prejuízo da memória recente e perda da
discriminação de tempo e de espaço. Quanto ao uso, 90 % dos entrevistados utilizavam em
conjunto, cigarros de maconha antes, durante e depois da ingesta do alimento.
A principal forma utilizada é ainda através da confecção de cigarros, que são
popularmente conhecidos como “fininho”, “baseado”, “gererê”, “boró”, “soró” e “mingote”
ou da utilização de utensílios como “pipa”, “marica” (pequenos cachimbos) ou narguilet para
inalação do produto de pirólise da droga. A concentração de ∆9-THC no cigarro de maconha
varia bastante (0,5 a 5,0 %), sua confecção poderá apresentar variadas proporções de caule,
folhas e inflorescências e, geralmente, possui muito material fibroso. A quantidade do vegetal
usada no cigarro é de aproximadamente 0,2 a 1,0 g (SOUBHIA, 1999; OLIVEIRA, 2005).

Generalidades 21
No Brasil, nota-se que a maioria dos usuários de maconha em todas as faixas etárias é
do sexo masculino (em média, 3 vezes mais que o sexo feminino). O uso ocorre já a partir dos
12-17 anos, em pequena porcentagem, porém a grande maioria está na faixa etária dos 18-24
anos e a partir dos 35 anos em diante uma proporção intermediária (UNIFESP, 2005).
O uso da maconha geralmente é intermitente e limitado; no entanto, estima-se que
10 % dos que experimentaram maconha tornam-se usuários diários e 20 a 30 % a consomem
semanalmente (JUNGERMAN; LARANJEIRA; BRESSAN, 2005). Na Europa, esses dados
variam, e o número de usuários diários jovens é de 3 % e semanais 10 % (BONOMO &
PROIMOS, 2005).
Em um estudo feito por Zvolensky et al., (2007) mostrou os principais motivos que
levam um indivíduo a usar a Cannabis. Foram entrevistados 227 usuários (uso pelo menos
nos últimos 30 dias), e as opções mais condizentes escolhidas pelos entrevistados foram:
• 91 % para compreender as “coisas” de maneira diferente;
• 90 % porque gostam dos efeitos ;
• 89 % para expandir a mente;
• 88 % porque “ajuda” em momentos de depressão ;
• 87 % porque é “legal”;
• 85 % porque transforma reuniões sociais mais legais ;
• 84 % porque melhoram as festas e confraternizações;
• 30 % outras opções de menor afinidade.

Generalidades 22
Markez et al., (2002) buscaram mostrar em uma pesquisa, o que alguns profissionais,
direta ou indiretamente ligados a usuários de Cannabis, acham ou pensam sobre o por quê do
uso da Cannabis e outros aspectos relacionados. Foram entrevistados 81 profissionais, sendo
18 juízes de direito, 8 promotores, 26 advogados, 10 professores e 19 médicos forenses. No
questionamento sobre qual o motivo das pessoas utilizarem a droga, 65,3 % acham que é para
as pessoas se animarem e terem prazer, 60,5 % para facilitar o contato social, 53,1 % passar o
tempo, 41,9 % fugir dos problemas e outros (Figura 4). Sobre os perigos que o consumo da
droga podem gerar, os resultados foram: 42 % apontam para o desenvolvimento de
dependência e de efeitos adversos, 32,1 % problemas familiares, 16,1 %
contaminação/adulteração que mostra que há um importante fator na percepção do risco para
os possíveis contaminantes da maconha (Figura 5).
Figura 4. Representação gráfica sobre os motivos pelos quais as pessoas usam a Cannabis.
Fonte: MARKEZ et al., 2002.

Generalidades 23
Perigo da Cannabis
Contaminação 16,1
Dependência 42
Efeitos adversos 42
Motivo
Problemas econômicos 3,7

Problemas familiares 32,1
Induz a marginalidade 6,2
Outros 1,2
0 10 20 30 40 50
% entrevistado
Figura 5. Representação gráfica sobre os perigos que a Cannabis pode trazer ao usuário.
Fonte: MARKEZ et al., 2002.
Dentre as drogas ilícitas, a Cannabis é a que apresenta maior mercado mundial de
venda e consumo, com aproximadamente 160 milhões de consumidores anuais. O cultivo é
feito atualmente em pelo menos 172 países; seus fatores de produção podem ser
simultaneamente flexível, rudimentar e em pequena escala ou permanente com alta tecnologia
em larga escala (UNODC, 2008).
Segundo o relatório das Nações Unidas, a maioria da Cannabis encontrada no Brasil é
proveniente do Paraguai, como pode ser visto na Figura 6, que também fornece para outros
países sul-americanos como Argentina, Chile e Uruguai. A maconha entra no Brasil por via
terrestre ou aérea pelas fronteiras dos estados do Mato Grosso do Sul e do Paraná.
Especificamente, a droga entra no país pelas cidades de Ciudad del Este/Foz do Iguaçu, Sal
del Guayra/Guaíra, Pedro Juan Caballero/Ponta-Porã ou Fuerte Olimpo/Porto Murtinho.

Generalidades 24
Figura 6. Quantidade apreendida e tendências do tráfico mundial de maconha, biênio 2004-2005. Fonte: UNODC, 2007.
Generalidades 25
Posteriormente, ela é trazida para os mercados consumidores, situados nos estados do
Rio de Janeiro, São Paulo, Espírito Santo, Minas Gerais, Paraná, Santa Catarina, Rio Grande
do Sul, Goiás e Distrito Federal. As vezes, ela chega à região Nordeste (UNODC, 2005).
As outras regiões do país são abastecidas pelo cultivo feito no próprio país, nas regiões
norte (Pará e Amazonas) e nordeste (Bahia, Maranhão e principalmente em Pernambuco, no
conhecido “Polígono da Maconha”, que engloba cerca de dez cidades do Estado) (UNODC,
2005; ADPF, 2006b). A maconha é a droga ilícita mais facilmente encontrada pelos usuários,
de acordo com o II Levantamento Domiciliar sobre o uso de Drogas Psicotrópicas realizada
em 2005 pela UNIFESP, seguido da cocaína e do LSD (dietilamida do ácido lisérgico).
Quanto ao preço da Cannabis no Brasil, o estado de Pernambuco, particularmente,
chama a atenção do governo. Estima-se que um produtor possa ganhar até US$ 150 por mês
(em média) plantando maconha. O preço de 1 kg de maconha para o produtor é inferior a US$
30. Esse mesmo quilo pode ser vendido por aproximadamente US$ 220 nas ruas. No que se
refere à pureza da droga, não há informações disponíveis sobre esse aspecto e não há dados
sobre qualquer pesquisa nessa área (UNODC, 2005).
Como já descrito anteriormente, o Brasil é o 4º país em apreensões de Cannabis,
sendo que em 2005 foram apreendidas mais de 160 toneladas, sendo a região centro-oeste o
local de maior apreensão, seguido da região sul, depois nordeste, sudeste e norte do país
(DPF, 2005) .
Generalidades 26
2.5. Toxicocinética da Cannabis sativa L.
2.5.1. Vias de administração e absorção.
9
As vias de administração do ∆ -THC são diversas, apresesentando diferentes níveis de
absorção e, conseqüentemente, respostas variadas. Os níveis de absorção e plenitude vão
depender principalmente da via utilizada e do tipo de produto da Cannabis empregado
(McGUIGAN, 2006; MARKEZ et al., 2002).
As vias pulmonar e oral são as mais empregadas pelos usuários de maconha, sendo a
pulmonar a mais comumente utilizada para a auto-adminitração para fins recreacionais. A via
pulmonar é a de escolha, pois a via oral pode apresentar efeitos imprevisíveis, como a demora
para início de efeito e efeitos prolongados. A concentração de ∆9-THC é maior quando
fumada, pelo fato de que o ácido ∆9-THC é convertido em ∆9-THC quando é feita a ignição
da droga (MOREAU, 2008; OLIVEIRA, 2005; REINHARDT, 1993).
A via oral também é utilizada recreacionalmente através do uso de alimentos como
bolos, biscoitos e bebidas (extratos ou soluções alcóolicas, usando a semente ou óleo da
planta), preparados a partir da Cannabis e, terapeuticamente, na forma de chá para
proporcionar efeitos antieméticos e orexígenos em pacientes em tratamento de náuseas e
vômitos associados à quimioterapia do câncer (OLIVEIRA, 2005; REINHARDT, 1993;
GROTENHERMEN, 2003).
Generalidades 27
Existem outras vias que também são utilizadas como a parenteral, intravenosa,
intramuscular, retal, oftálmica e dérmica, porém são empregadas em estudos laboratoriais ou
situações isoladas de uso terapêutico (McGUIGAN, 2006; MARKEZ et al., 2002).
2.5.1.1. Via pulmonar-absorção alveolar
A inalação da fumaça contendo ∆9-THC, a partir de cigarros ou de outros utensílios
disponíveis para o ato de fumar resulta em efeitos psicoativos em alguns minutos. Cerca de 10
a 35 % de ∆9-THC torna-se biodisponível durante a inalação e a concentração máxima de
pico (plasmático) ocorre em média em 8 minutos (intervalo: 3–10 min). Os níveis plasmáticos
dependem da dose utilizada; um cigarro de maconha com 1,75 % de ∆9-THC leva a uma
concentração plasmática de aproximadamente 85 ng/mL (McGUIGAN, 2006; MOREAU,
2008). A velocidade de absorção por essa via é muito rápida devido às condições anatômicas
do pulmão (extensa área de superfície alveolar, extensa rede capilar e alto fluxo sanguíneo). O
nível de concentração máximo de ∆9-THC no sangue é atingido tão rapidamente quanto é o
seu declínio, por exemplo, para um cigarro de maconha com 1,75 % de ∆9-THC, após 1 min
de inalação, já se torna possível detectar níveis plasmáticos em média de 7,0 ng/mL e após
seu pico plasmático chega-se a 2,0 ng/mL em 2 horas e permanecem detectáveis até 12 horas
(OLIVEIRA, 2005; SOUBHIA, 1999; MOREAU, 2008).
A biodisponibilidade do ∆9-THC por esta via sofre grandes variações individuais de 1
a 24 %. A dose de Cannabis inalada necessária para produzir os efeitos farmacológicos em
humanos varia de 2 a 22 mg, sendo que a fração de ∆9-THC disponível para ser absorvida
raramente excede 10 a 35 %, o que corresponde à 0,2 a 4,4 mg (ADAMS & MARTIN, 1996).
Generalidades 28
A grande variação na biodisponibilidade do ∆9-THC deve-se a diversos fatores:
perdas significativas do ∆9-THC durante a pirólise (23 a 30 %) e na corrente secundária (40 a
50 %), variações individuais de inalação relacionadas à dinâmica do ato de fumar (como, por
exemplo, número e tempo de duração das tragadas, intervalo de tempo entre as tragadas e
volume da fumaça inalada). Além disso, somente 20 a 27 % de ∆9-THC ficam disponíveis na
corrente primária (fumaça inalada) (O’BRIEN, 1996). Portanto, mesmo quando inalada de
maneira intensa, pouco mais de 50 % do ∆9-THC são absorvidos (REINHARDT, 1993).
2.5.1.2. Via oral - absorção pelo trato gastrintestinal
A ingesta de Cannabis resulta em um imprevisível início de efeitos psicoativos que
varia entre 30 - 90 min, ou seja, sua absorção ocorre de maneira lenta e irregular. Mesmo o
∆9-THC, sendo bem absorvido na porção superior do intestino delgado (90 a 95 %), a
biodisponibilidade oral é muito baixa, 5 - 20 % (média de 6 %, dependendo do tipo de
preparação utilizado), devido à instabilidade do ∆9-THC no ácido gástrico e o efeito de
primeira passagem hepática. A concentração plasmática de pico ocorre entre 2 - 4 horas após
a ingesta, porém existem relatos de retardo de até 6 horas, a duração dos efeitos pode variar
entre 4 - 12 horas. (McGUIGAN, 2006; MOREAU, 2008; GROTENHERMEN, 2003).
Em comparação com a via inalatória para se obter os mesmos efeitos, é necessário
uma dose 3 vezes maior pela via oral, visto que se um cigarro de maconha confeccionado com
500 mg de droga na concentração de 2 % (10 mg) de ∆9-THC, aproximadamente 0,6 mg
estará disponível pela via oral, enquanto que 1,8 mg estará disponível por via inalatória
(MOREAU, 2008).
Generalidades 29
2.5.2 Distribuição do ∆9-THC
Devido à sua grande lipossolubilidade, o ∆9-THC se distribui facilmente pelos tecidos,
apresentando um volume de distribuição do estado de equilíbrio de aproximadamente 2,5 - 3,5
L/kg. Apresenta 98 % de ligação a proteinas plasmáticas, distribuídos entre lipoproteínas
(principalmente LDL) e albumina. Esta é a razão porque somente uma pequena fração alcança
o sistema nervoso central, concentrando-se principalmente no tálamo, amídala, hipocampo e
córtex cerebral. Cerca de 3 a 5 % do ∆9-THC absorvido está livre para exercer atividade
farmacológica (YONAMINE, 2004; McGUIGAN, 2006).
Os canabinóides se acumulam no tecido adiposo em um modelo bifásico. Inicialmente
o ∆9-THC é distribuído para os tecidos altamente vascularizados de maneira rápida (fígado,
rins, coração, músculos) e depois da fase inicial de distribuição, se acumula vagarosamente
em tecidos menos vascularizados e tecido adiposo. Após ser absorvido, seja pela via inalatória
ou intravenosa, o ∆9-THC apresenta meia vida plasmática menor que 10 min (1 fase) e, ao
a
a
sofrer redistribuição da fração seqüestrada para tecidos menos vascularizados (2 fase), em
específico o adiposo, sua meia vida é superior a 20 horas, refletindo a biotransformação e
eliminação gradativa do ∆9-THC. (McGUIGAN, 2006; MOREAU, 2008).
Os canabinóides atravessam a barreira placentária e se depositam no leite materno. A
concentração no soro fetal é equivalente a 10 - 30 % da dose da mãe (McGUIGAN, 2006).

Generalidades 30
Quando acumulado nos tecidos adiposos, o ∆9-THC é liberado lentamente, sendo a
meia vida tecidual de 7 dias, necessitando de 30 dias em média para eliminação completa de
uma dose (MOREAU, 2008).
2.5.3 Biotransformação e excreção do ∆9-THC
Quando ingerida ou fumada a Cannabis, o ∆9-THC e outros canabinóides sofrem
diversos processos de biotransformação, dando origem a produtos hidroxilados e
carboxilados, sendo que até o presente momento mais de 80 produtos já foram identificados
no homem (GROTENHERMEN, 2003; YONAMINE, 2004). O ∆9-THC é quase que
completamente metabolizado pelo fígado através do sistema de oxidases do citocromo P450,
porém também sofrem processo de metabolização em menor intensidade nos pulmões e
cérebro. O primeiro metabólito 11-hidroxi-∆9-THC (derivado do processo de hidroxilação
alílica da posição 11) é ativo e subseqüentemente oxidado formando o metabólito inativo,
ácido 11-nor-∆9-THC carboxílico e, também, o principal metabólito excretado na urina o
ácido 11-nor-∆9-THC carboxílico conjugado com ácido glicurônico (McGUIGAN, 2006;
YONAMINE, 2004. MOREAU, 2008).
Os produtos de biotransformação do ∆9-THC são excretados a partir da via biliar,
fecal e também urinária. Os produtos de biotransformação excretados na bile podem ser
reabsorvidos (por circulação entero-hepática), o que aumenta o tempo de permanência dos
canabinóides no organismo. Nas 72 horas após a ingestão da maconha, aproximadamente
15 % da dose de ∆9-THC é excretada na urina e 50 % nas fezes. Após administração

Generalidades 31
intravenosa, 15 % é excretado na urina e 25 - 35 % nas fezes. Na inalação, se espera
resultados de eliminação semelhantes aos apresentados na via intravenosa. Em 5 dias, 80 -
90 % da dose de ∆9-THC é excretada do corpo (McGUIGAN, 2006; YONAMINE, 2004).
Os metabólitos urinários são constituídos de compostos de caráter ácido e geralmente
9
excretados na forma conjugada com ácido glicurônico, sendo o ácido 11-nor-∆ -THC
carboxílico conjugado com ácido glicurônico o mais abundante, e corresponde a 27 % do total
eliminado. Nas fezes, a presença desse metabólito conjugado é insignificante e os principais
metabólitos encontrados são o 11-hidroxi-∆9-THC e o ácido 11-nor-∆9-THC carboxílico
(MOREAU, 2008; YONAMINE, 2004).
Após a interrupção do uso contínuo, metabólitos podem ser detectados na urina de
usuários crônicos até várias semanas (20 - 60 dias), devido à velocidade de excreção lenta e
alguns fatores como: idade, peso e uso de mais de uma vez ao dia. Em usuários ocasionais,
esse tempo é reduzido, sendo possível a detecção até cerca de 7 dias (McGUIGAN, 2006;
OLIVEIRA, 2005; MOREAU, 2008).
2.6. Efeitos tóxicos da Cannabis.
Apesar da longa história do uso da Cannabis, as investigações científicas mais
objetivas a respeito dos seus efeitos na saúde de usuários somente foram iniciadas no início da
década de 70. Diversas metodologias já foram aplicadas para estimar os efeitos e muito do
que se sabe a respeito da farmacologia da Cannabis vem de experimentos clínicos
controlados. Esses estudos visam simular o uso rotineiro através da administração em

Generalidades 32
humanos de extratos puros de ∆9-THC na forma de cigarros ou por via intravenosa com
concentrações (ao redor de 2 % ou menos) e pureza previamente conhecidas. Outros utilizam
equipamentos para reproduzir o ato de fumar, controlando a inalação da fumaça com auxílio
da informática, também na tentativa de padronizar a dose e reduzir as variações individuais na
maneira de fumar (HUESTIS et al., 1995; MARKEZ et al., 2002).
Alguns experimentos com a planta Cannabis baseiam-se somente na concentração de
∆9-THC contida na planta; as quantidades de CBD e outros canabinóides também variam, e
os estudos não levam em conta que podem ocorrer interações farmacológicas que modificam
os efeitos do ∆9-THC. Relatos sugerem que os efeitos farmacológicos do ∆9-THC isolado,
embora similares, nem sempre são iguais àqueles obtidos com a Cannabis fumada com a
mesma quantidade de ∆9-THC (GRAHAN, 1976).
É preciso considerar que, além dos canabinóides, outros compostos identificados na
planta também podem acarretar efeitos nocivos à saúde, como por exemplo, esteróides,
terpenos, flavonóides, derivados furânicos e alcalóides (REINHARDT, 1993). Além disso, a
fumaça do cigarro de maconha contém, em sua fase gasosa, monóxido de carbono,
acetaldeído, acroleína, tolueno, nitrosaminas e cloreto de vinila. Entre as partículas que
acompanham a fase gasosa, encontram-se fenol, cresol, naftaleno e substâncias cancerígenas
como o benzoantraceno e benzopireno, cujas concentrações chegam a ser duas vezes maior do
que aquela verificada em um cigarro de tabaco com o mesmo peso. Cada cigarro de maconha
produz alcatrão numa quantidade equivalente a 14 ou 16 cigarros de tabaco com filtro
(MOREAU, 2008; INABA & COHEN, 1991). Sabe-se que na fumaça produzida pelo cigarro
Generalidades 33
de maconha, o alcatrão possui 50 % a mais de alguns carcinógenos do que quando comparada
ao cigarro de tabaco sem filtro (MOREAU, 2008).
2.6.1. Toxicidade aguda
A utilização da maconha está associada a efeitos fisiológicos no fluxo sanguíneo
cerebral, no coração, nos pulmões e olhos. Em um estudo, onde foi utilizado ∆9-THC
intravenoso, observou-se que houve um aumento no fluxo sanguíneo cerebral em várias
regiões do cérebro como o córtex frontal e subcortical. Esse aumento ocorreu entre 30 -
60 min após a administração e permaneceu elevado até 120 min. Efeitos semelhantes foram
obtidos durante a utilização da maconha por via inalatória (GROTENHERMEN, 2007;
MATHEW et al., 1997).
No sistema cardiovascular, o ∆9-THC mostrou que é capaz de aumentar a freqüência
cardíaca (de 66 para 89 batimentos por min) e diminuir a resistência vascular, após 15 min do
seu uso por via inalatória. Após a concentração plasmática ser atingida, a freqüência cardíaca
pode chegar até 92 batimentos por minuto, permanecendo tais alterações por um período de 2-
3 horas (JONES, 2002; SIDNEY, 2002).
Nos pulmões, o que se observa inicialmente é broncodilatação, reações inflamatórias
eritema, inchaço, aumento de secreção, perda de células ciliares dentre outras e aumento do
número de macrófagos alveolares aumentando o risco de infecções em usuários de maconha
(LANGE, 2007).
Generalidades 34
Os principais efeitos oculares observados para as vias inalatória, oral e intravenosa
foram alterações na conjuntiva e diminuição na pressão intraocular (JÄRVINEM; PATE;
LAINE, 2002; MIKAWA et al., 1997). Quando aplicados topicamente em olhos de coelho,
resultou-se em hiperemia da conjuntiva após duas horas da aplicação (MIKAWA et al., 1997).
Outros efeitos agudos observados foram: diminuição da coordenação motora, perda de
força muscular, instabilidade nas mãos. Também podem ocorrer letargia, sedação, hipotensão
postural, incapacidade de concentração, e reflexos alterados (McGUIGAN, 2006).
2.6.1.1. Reações adversas agudas
A intoxicação por uso de maconha, pode se manifestar por reações adversas como um
estado de ansiedade aguda. Podem ocorrer também episódios de desconfiança, disforia, medo,
ou reações de pânico e episódios de transtornos psicóticos. As apresentações desses sintomas
são de baixa freqüência e não existem entidades suficientes que justifiquem tal diagnóstico de
psicose como um achado clínico, que não se relacionam com possíveis adulterantes, com
psicopatologia pré-estabelecida ou com associação de outras substâncias psicoativas
(MARKEZ et al., 2002).
Um caso de pancreatite aguda, após um período de uso intenso de maconha foi
relatado, porém a relação causal é inconclusiva. (GRANT & GANDHI, 2004).
Taquicardia ventricular (200 batimentos por min) foi reportada em 6 indivíduos com
morte por problemas cardíacos e foram achados em sangue post-mortem concentrações de
∆9-THC que variaram de 2-22 µg/L. Embora a associação temporal seja clara, a relação
Generalidades 35
causal é obscura, porque 3 dos 6 indivíduos apresentavam patologias cardíacas pré-existentes
(BACHS & MORLAND, 2001). O risco de infarto agudo do miocárdio aumenta 5 vezes o
valor basal após 60 min do uso da maconha, porém decai rapidamente aos valores basais de
baixo risco (MITTLEMAN et al., 2001). Fibrilação atrial com palpitações, náusea e tontura
foram associadas ao evento de uso em 3 usuários de maconha (SINGH, 2000).
2.6.2. Toxicidade Crônica
Muito se sabe sobre os efeitos agudos da maconha, porém os efeitos crônicos, além de
serem inúmeros, continuam incertos; apenas os danos causados no sistema pulmonar e
cardiovascular já estão bem caracterizados (MOREAU, 2008).
a) Efeitos na imunidade
Canabinóides afetam a resistência do usuário, através da modulação da resposta imune
secundária, tornando susceptível a infecções e tumores. No entanto uma alteração
imunológica mais grave não foi descrita até o momento (KLEIN; FRIEDMAN; SPECTER,
1998, MOREAU, 2008).
b) Efeitos no sistema respiratório
Fumar maconha fornece mais partículas para as vias aéreas inferiores do que fumar um
cigarro de tabaco, o que está associado a bronquite e asma que gera um comprometimento da
função e do epitélio pulmonar (LANGE, 2007). Também possui compostos carcinogênicos
mais potentes dos encontrados no cigarro comum. A associação da maconha com o câncer de
Generalidades 36
pulmão se torna uma tarefa difícil, uma vez que a maioria dos usuários também usa tabaco e
álcool, o que gera resultados duvidosos (McGUIGAN, 2006).
c) Efeitos sobre a visão
Os principais efeitos crônicos observados no sistema ocular são: lacrimejamento,
fotofobia e reação lenta das pupilas, diplopia, nistágmo e blefaroespasmo (GREEN, 1998).
d) Efeitos sobre o sistema endócrino
Estudos em humanos se mostram inconsistentes, os efeitos não mostraram respostas
convincentes e a clínica permanece indefinida. Porém, em animais expostos à maconha, foi
observado a supressão de esteróides gonodais, hormônio do crescimento, prolactina e
hormônio da tireóide, além de alterações na atividade do hipotálamo (BROWN & DOBS,
2002).
e) Efeitos no sistema reprodutor
Em usuários crônicos, se observa redução da fertilidade através de oligospermia,
menstruação anormal e ovulação diminuída. A maconha é considerada como classe “C” para
gestantes e leva a alteração no peso e no tamanho da criança, porém não há referências de
causar malformações fetais (BRIGGS et al., 1998; ZUCKERMAN et al.,1989) Essa
classificação de acordo com a FDA (food and drug administration), engloba aquelas
substâncias em que não foram realizados estudos em animais ou mulheres grávidas; ou então
Generalidades 37
os estudos em animais demonstram risco fetal, mas não existem estudos disponíveis
realizados em mulheres grávidas (GEIB et al., 2007).
Estudos epidemiológicos mostram que o uso de maconha durante a gestação pode
levar a um trabalho de parto mais difícil, prolongado ou prematuro, e com dificuldade de
expulsão da placenta (McGUIGAN, 2006).
A relação de efeito nesse caso também é difícil de ser estabelecida, visto que a
maconha geralmente é usada concomitantemente com outras drogas e poucos são os
relatados e documentação destes casos. Além disso, o diagnóstico laboratorial nem sempre é
solicitado e levado em consideração (WITER; NIEBYL, 1990; McGUIGAN, 2006).

3. Praguicidas
Praguicidas 39
3. PRAGUICIDAS, AGROTÓXICOS E OUTRAS DENOMINAÇÕES
Agrotóxicos, defensivos agrícolas, agroquímicos, praguicidas, pesticidas,
desinfestantes, biocidas são denominações dadas às substâncias ou misturas de substâncias,
naturais ou sintéticas, destinadas a repelir ou combater pragas, organismos que podem: a)
consumir ou deteriorar materiais usados pelo homem, incluindo-se aí os alimentos; b) causar
ou transmitir doenças ao homem ou a animais domésticos. Portanto, bactérias, fungos, erva
daninhas, artrópodos, moluscos, roedores e quaisquer formas de vida danosas ao ambiente ou
à saúde e bem-estar do homem (SUCEN, 2001).
A legislação brasileira, através do Decreto nº 98.816 de 11/01/1990 do Ministério da
Agricultura, que regulamentou a Lei nº 7.802 de 11/07/89, aborda o termo “agrotóxicos e
componentes” no Capítulo I, Artigo 2º, inciso XX, XXI respectivamente como:
• (XX) Os produtos químicos destinados ao uso nos setores de produção, no
armazenamento e beneficiamento de produtos agrícolas, nas pastagens, na
proteção de florestas, nativas ou implantadas, e de outros ecossistemas e
também de ambientes urbanos, hídricos e industriais, cuja finalidade seja
alterar a composição da flora e da fauna, a fim de preservá-las da ação danosa
de seres vivos considerados nocivos, bem como substâncias e produtos,
empregados como desfolhantes, dessecantes, estimuladores e inibidores de
crescimento;
Praguicidas 40
• (XXI) Os princípios ativos, os produtos técnicos, suas matérias-primas, os
ingredientes inertes e aditivos usados na fabricação de agrotóxicos e afins.
Mais especificamente para a área da Saúde, o mesmo decreto tem como objeto o termo
“afins”, que é definido no inciso XXII, como:
• (XXII) Os produtos e os agentes de processos físicos e biológicos que tenham a
mesma finalidade dos agrotóxicos, bem como outros produtos químicos, físicos
e biológicos utilizados na defesa fitossanitária, domissanitária e ambiental, não
enquadrados no inciso XX.
A organização para Agricultura e Alimentação das Nações Unidas (FAO) apresenta a
mesma definição usada na legislação brasileira para o termo “agrotóxico”, que substitui o
termo “ defensivo agrícola” e passou a ser utilizado no Brasil, após grande mobilização da
sociedade civil. Mais do que uma simples mudança da terminologia, esse termo coloca em
evidência a toxicidade desses produtos ao ambiente e à saúde. São ainda genericamente
denominados praguicidas ou pesticidas (ALONZO & CORRÊA, 2008; GARCIA, 2005). Essa
definição exclui os fertilizantes e os produtos químicos administrados aos animais para
estimular o crescimento ou modificar o comportamento reprodutivo (ALONZO & CORRÊA,
2008; GARCIA, 2005; SUCEN, 2001).
A denominação “pesticida” (do inglês pesticide), muito difundida entre nós, parece
inadequada à nossa língua. Literalmente, significa “o que mata peste”, e peste, segundo os
dicionários da língua portuguesa, é “ qualquer doença epidêmica grave, de grande mobilidade

Praguicidas 41
e mortalidade” . Portanto, tem o sentido de uma doença e não de uma praga, o que torna o
anglicismo errôneo para o significado que se deseja expressar (ALONZO & CORRÊA, 2008).
Calcula-se que atualmente existam cerca de 1500 substâncias diferentes com ação
praguicida (ingredientes ativos) em todo o mundo, a partir das quais são produzidas inúmeras
formulações. No Brasil, mais de 300 princípios ativos incluídos em mais de 2000 produtos
comerciais diferentes são registrados para o uso agrícola. São classificados quanto à sua
composição química, toxicidade, padrões de uso e quanto ao tipo de praga a ser destruída ou
controlada, sendo os principais descritos abaixo (GARCIA, 2005, ALONZO & CORRÊA,
2008).
• Inseticidas: ação de combate a insetos, larvas e formigas; pertencem a quatro
grupos químicos distintos: organofosforados, carbamatos, organoclorados e
piretróides;
• Fungicidas: ação a uma gama variada de fungos; os principais grupos são:
ditiocarbamatos, hexaclorobenzeno, captan, trifenil estânico;
• Herbicidas: ação contra ervas daninhas (nos últimos 20 anos teve uma ampla
utilização na agricultura); seus principais representantes são: bipiridílos,
pentaclorofenol, derivados da glicina, derivados do ácido fenoxiacético,
triazinas, uréias modificadas, difenil éteres;
• Raticidas: ação contra roedores; dicumarínicos;
• Acaricidas: combate ácaros; benzilatos, tetrazinas, organitinas.

Praguicidas 42
O Brasil está entre os principais consumidores mundiais de praguicidas. Segundo
dados do Sindicato Nacional da Indústria de Produtos para Defesa Agrícola (SINDAG)
(2003), o Brasil é o 8º país consumidor de praguicidas no mundo, como mostra a Figura 7,
com 3,2 kg por hectare de área cultivada o que corresponde a 4,7 % do consumo mundial. O
estado de São Paulo é o maior consumidor brasileiro de praguicidas, responsável por 20,6 %
do valor comercializado em 2006, seguido por Mato Grosso 17,9 % e Paraná 13,4 %. A maior
utilização dessas substâncias está na agricultura, no combate às mais variadas pragas e como
desfolhantes e dessecantes. Também tem sido altamente utilizado em ambiente domiciliar,
como raticidas e inseticidas. Na saúde pública, para eliminação e controle de vetores
transmissores de doenças endêmicas, no tratamento de madeira para construção e no
armazenamento de grãos e sementes (GARCIA, 2005; SUCEN, 2001). Por conseqüência
deste grande espectro de utilização, está entre os primeiros agentes tóxicos responsáveis por
intoxicações em todo o país (SINITOX, 2005).
Consumo de Praguicidas no Mundo
20 17,5
18
16
14
12 10,7
kg/há
10 7,6
8 6
6 4,4 4,4 3,6
3,2 3,1 2,6
4 2,2 2,2 1,9
2
0
do
Fr a
Be a
lia
Po da
a
Es rgo
am a
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l
no ça
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H
in
Al
ei
R
país
Figura 7. Gráfico mundial de consumo de praguicidas. Fonte: SINDAG, 2003.

Praguicidas 43
3.1. Herbicidas
O uso de herbicidas data de aproximadamente 2 mil anos antes de Cristo, pelos
romanos, que utilizavam lixo orgânico para manter as estradas. A partir do século XVII em
1800, o uso de herbicidas inorgânicos como o sulfato de cobre, sulfato de amônio, arsenito de
sódio e clorato de sódio, foi intensificado na agricultura, pois o cultivo mais especializado de
lavouras, com monoculturas, deu início ao desenvolvimento de pragas. Somente em 1935, foi
desenvolvido o primeiro herbicida orgânico, dinitro-orto-cresol (DNOC), e a partir da década
seguinte, seguiu-se uma crescente diversificação e produção de herbicidas conforme pode ser
observado na Tabela 2 (GARCIA, 2005; JACOMINI, 2002).
Tabela 2. Desenvolvimento dos herbicidas.
ANO HERBICIDA
1935 DNOC (1° Herbicida)
1940 2,4 D ; 2,4,5-T
1950 ureas, amitroles, amidas, tiocarbamatos, bipiridilos
1960 triazinas, dinitroaminas, uracilas, piridinas, cloroacetaminas
1970 glifosato, diclofop-metil
1980 sulfonil ureas, imadazolinonas
1990 bioherbicidas, (culturas tolerantes à herbicidas)
Fonte: JACOMINI, 2002.

Praguicidas 44
São usados na agricultura com o objetivo de eliminar plantas daninhas presentes, nas
quais os efeitos sobre as culturas muitas vezes não são perceptíveis ou não são amplamente
considerados; ou dependendo do tipo de lavoura e herbicida atuam como dessecante. O
principal problema dessas plantas daninhas quando relevantes, é o fato que elas podem
competir em nutrientes, água, luz e espaço com as culturas principais (MOLDES, 2006;
LARINI, 1999). Ao se aplicar herbicida, uma porção deste atinge a cultura presente na área ou
em áreas próximas, interagindo com essas plantas e causando efeitos secundários (HEIFFIG,
2006).
Os herbicidas podem ser classificados de acordo com dois critérios: ação e efeitos.
Com relação à ação, os herbicidas podem ser divididos em dois subgrupos:
Herbicidas não-seletivos (total): atuam contra todas as espécies de plantas.
Herbicidas seletivos: nocivos apenas a algumas espécies de plantas e
seguro para outras; destrói apenas as ervas daninhas e não o cultivo.
Quanto aos efeitos, os herbicidas são divididos em três subgrupos:
Contato: matam as plantas nas quais entram em contato;
Sistêmicos: penetram na planta, distribuindo-se por todo organismo;
Residuais: atuam nos sistemas das raízes das plantas ou na germinação das
sementes, permanece no solo o tempo suficiente de ação contra ervas daninhas.
A modalidade de emprego pode ser:
Pré-plantação: Aplicados após a preparação do solo e antes do cultivo;
Pré-emergente: Aplicados antes da germinação das sementes das ervas daninhas;
Pós-emergente: Aplicados após o cultivo e aparecimento das ervas daninhas
(SOUZA, 2003).
Praguicidas 45
3.2. Paraquat
O paraquat ou 1,1-dimetil-4,4-bipiridil é um herbicida da classe dos bipiridílos. Sua
síntese se deve a Widel e Russo, que em 1882, publicaram seus trabalhos de síntese, porém
não se sabia de suas propriedades herbicidas (SCHMITT et al., 2006). Em 1933, Michaelis no
Instituto Rockfeller produziu o paraquat empregando-o como indicador de óxido-redução,
conhecido como metil-viologeno, pois em sua forma reduzida forma um composto de cor azul
ou violeta (DINIS-OLIVEIRA et al., 2008; SOUZA & MACHADO, 2003). As propriedades
herbicidas, só foram descobertas em 1955 no Jealott´s Hill International Research Center,
Bracknell no Reino Unido e sua introdução no mercado, deu-se início em agosto de 1962 pela
Plant Protection Division Ltd of Imperial Chemical Industries (antiga ICI, atual Syngenta).
Sua primeira aplicação como herbicida ocorreu na Malásia em plantações de seringueiras e a
partir desse fato, seu uso foi generalizado (ISENRING, 2006; SCHMITT et al., 2006; DINIS-
OLIVEIRA et al., 2008).
É um herbicida de contato, não seletivo, utilizado em vários países do mundo, como
mostra a Tabela 3. Atua nas ervas daninhas que podem diminuir o rendimento das culturas,
em gramíneas, para renovação de pastagens, ervas daninhas aquáticas e em ambientes de não
cultivo, como aeroportos, em geradores de eletricidade, ao redor de prédios, vias públicas, etc.
Sua grande utilização se deve ao seu efeito rápido, em baixas concentrações, baixo efeito
acumulativo no solo e pelo seu preço barato em comparação aos demais herbicidas (DINIS-
OLIVEIRA et al., 2008).

Praguicidas 46
É utilizado como semeadura direta em culturas de banana, café, cacau, coco, citros,
soja, pêra, maçã, uva, pêssego óleo de palmeira, milho, batata. Na silvicultura é utilizado
como desfolhante e dessecante nas culturas de algodão, abacaxi, feijão e cana de açúcar. É
aplicado em pré e pós-emergência em diversas culturas como desfolhante e dessecante, porém
no Brasil sua aplicação sofre algumas restrições podendo ser utilizado apenas como
dessecante ou em pós-emergência e seu limite máximo de resíduo (LMR) e intervalo de
segurança para diversas culturas são preconizadas e fiscalizadas pela ANVISA conforme pode
ser observado na Tabela 4 (LARINI, 1999; ISENRING, 2006; BROMILOW, 2003; BRASIL,
2007).
O PQ teve seu uso comprovado a partir da década de 70 para erradicação de culturas
de drogas ilícitas como a Cannabis sativa L, no México e em outros países da América e
também para o cultivo de outras drogas como a Erytroxilum coca, sendo o herbicida mais
utilizado nas plantações de coca da Colômbia (principal produtor de cocaína na América).
Outro dado que mostra a sua utilização em cultivos de Cannabis sativa L sem propósito de
erradicação, é que em uma pesquisa anual desde 1999 até 2003 encomendada pelo NIDA
(Nacional Institute of Drug Abuse) foram encontradas amostras de maconha nos EUA
(provenientes do México) contaminadas pelo PQ, mesmo após o programa de erradicação ter
substituído o PQ pelo glifosato e não ser mais realizado no México e em outros países, devido
a sua alta toxicidade (LIDDLE et al., 1980; GRANJA, 2001; DINIS-OLIVEIRA et al., 2008;
UNODC, 2007; COGGIOLA, 2005; ELSOHLY, 2003).
O Paraquat é vendido sob vários nomes comerciais. A principal linha comercializada é
produzida pela Syngenta (Zeneca), porém existem outros fabricantes como, Sinon, Iharabras,
e os nomes comerciais são: Gramoxone® , Gramocil® , Agroquat® , Gramuron® , Paraquat® ,

Praguicidas 47
Paraquol®, Crisquat®, Esgram®, Paradox®, Pramato®, Dextrone X®, Dexuron®, Pathclear® e
Priglone®, Preeglone®, Weedol® associados com Diquat (outro herbicida da classe dos
bipiridílos) (MOFFAT et al., 2004, ALONZO & CORRÊA, 2008, SINDAG, 2006). Esses
produtos são produzidos com o dicloreto de 1,1-dimetil-4,4-bipiridil e suas formulações
variam de 25 a 44 %, o solvente utilizado geralmente é água, outros adjuvantes, e substâncias
odoríferas e eméticas são utilizadas para formar o produto comercial (ISENRING, 2006;
ALONZO & CORRÊA, 2008).
Muito utilizado na agricultura, merece destaque especial dentro da classe dos
praguicidas devido ao alto índice de intoxicações e fatalidades que lhe são atribuídas, é
responsável por 13 % do total de mortes decorrentes de intoxicações de praguicidas e produtos
químicos. Seu índice de mortalidade é superior a 70 %, principalmente pela falta de um
antídoto eficaz que reverta seus efeitos tóxicos. Sua toxicidade se manifesta em vários órgãos,
incluindo pulmões, fígado, cérebro, rins, coração, adrenais e músculos, mas o principal dano
ocorre nos pulmões, culminando em falência respiratória e morte (SCHMITT et al., 2006;
LANES-ALMEIDA, 2007). Vários países suspenderam ou restringiram severamente seu uso,
além de adotarem medidas, como diminuição da concentração e adição de substâncias
odoríferas, corantes e eméticas nas preparações comerciais (PAN, 2007). Porém, em muitos
países ainda há uso indiscriminado do herbicida, aumentando os índices de morbimortalidade
mundiais (SCHMITT et al., 2006).

Praguicidas 48
No Brasil, o herbicida Paraquat, passará pelo processo de reavaliação dos estudos de
toxicidade, realizados pela ANVISA até o final do ano de 2008, devido à sua elevada
toxicidade aguda (SILVA, 2007). De acordo com as bases de reavaliação, inclusas no decreto
4074/02, art.19, parágrafo único, os seguintes resultados poderão ser observados
manter os registros sem alterações;
manter o registro, mediante a necessária adequação;
propror a mudança da formulação, dose ou método de aplicação;
restringir a comercialização;
proibir, suspender ou restringir a produção ou importação do produto;
proibir, suspender ou restringir o uso;
cancelar ou suspender o registro.

Praguicidas 49
Tabela 3. Principais países com registro de uso para o PQ.
África do Sul Equador Israel Paraguai
Albania El Salvador Itália Peru
Alemanha Espanha Jamaica Polônia
Angola Eslovênia Japão Portugal

Estados República
Argentina Jordânia
Unidos* Dominicana
Austrália França* Líbano República Tcheca
Bahamas Gâmbia Líbia Romênia
Bangladesh Gana Libéria Samoa
Bélgica Grécia Macedônia Senegal

Brasil Guatemala Madagascar Suíça
Bolívia Guiné Malásia Suriname
Camarões Guiana Malta Trinidad & Tobago
Canadá Haiti Marrocos Turquia
Chile Holanda México Taiwan
China Honduras Moçambique Tailândia
Colômbia Índia Nova Zelândia Uruguai
Corea do Sul Indonésia Nicarágua Venezuela
Costa Rica Irã Nigéria Vietnã
Croácia Iraque Paquistão Zâmbia
Cuba Irlanda Panamá Zimbabwe
Fonte: DINIS-OLIVEIRA et al., 2008. (* Banido atualmente)

Praguicidas 50
Tabela 4. Limites e modos de utilização de PQ em culturas.
Modalidade de
Intervalo de
Culturas Emprego LMR (mg/kg)
Segurança
(Aplicação)
Abacate Pós-emergência 0,05 1 dia
Abacaxi
Pós-emergência 0,05 1 dia
Algodão
Dessecante 0,2 7 dias
Algodão
Pós-emergência 0,2 7 dias
Arroz
Arroz
Aspargo
Banana
Batata
Beterraba
Cacau
Café
Cana-de-açúcar
Cana-de-açúcar
Chá
Citros
Coco Pós-emergência 0,05 1 dia
Feijão Pós-emergência 0,05 1 dia
Fonte: ANVISA, 2007.

Praguicidas 51
3.2.1. Propriedades físico-químicas
É um sólido incolor, cristalino e higroscópico cuja fórmula molecular é C12H14N2 com
peso molecular de 186,3. Na forma de dicloreto é representado pela fórmula C12H14N2Cl2,
com peso molecular de 257,2. Não é volátil, explosivo ou inflamável em solução aquosa. É
corrosivo para metais e estável em solução ácida ou neutra, mas se hidrolisa facilmente em
meio alcalino (pH >12). Os seus sais são eletrólitos fortes que, em solução, dissociam-se em
uma grande quantidade de íons positivos e negativos (SCHMITT et al., 2006; LANES-
ALMEIDA, 2007).
É solúvel em água, possui baixa solubilidade em álcoois e é insolúvel em
hidrocarbonetos. As propriedades físico-químicas do PQ ilustrado na Figura 8 estão resumidas
na Tabela 5. O nome paraquat é resultante do posicionamento molecular dos átomos de
nitrogênio quaternários, em posição para (para + quat – ernário) (LARINI, 1999).
Figura 8. Estrutura molecular do herbicida PQ. Fonte: LARINI, 1999.

Praguicidas 52
Tabela 5 - Propriedades físico-químicas do PQ
Densidade (20◦C) 1.240–1.260 g/cm3
Estado Físico Sólido branco (sal puro), amarelo (produto grau técnico)
cristalino, sem odor, higroscópico
Ponto de fusão ~340◦C, com decomposição e formação de vapores tóxicos
~340◦C, formando vapores tóxicos

Ponto de ebulição
Solubilidade em água 700 g/L (20 oC)
pH formulação 6.5–7.5
Pressão de vapor não mensurável
E′0 −0.446 V
Coeficiente de partição
−4.2
octanol/água
Constante de dissociação não se dissocia

(íon)
8.88
Densisade gasosa
relativa
Fonte: DINIS-OLIVEIRA et al., 2008.

Praguicidas 53
3.2.2. Toxicocinética
O PQ apresenta absorção oral rápida, porém incompleta (menos de 30 % da dose
administrada) devido a sua alta hidrossolubilidade. A absorção ocorre predominantemente no
intestino delgado (baixa absorção no estômago), é influenciada por alimentos que podem
reduzir a absorção do herbicida. O transporte ativo facilita a entrada do herbicida em todas as
células da mucosa. Caso a mucosa do trato gastrintestinal fique comprometida, devido ao
poder de corrosão do herbicida, o percentual absorvido é susceptível de ser mais elevado,
devido à absorção por difusão passiva (TOMINACK, 2006; DINIS-OLIVEIRA et al., 2008).
A concentração plasmática de pico ocorre geralmente após 2 horas da ingestão e seu volume
de distribuição é de 1 - 2 L/kg (TOMINACK, 2006).
Outras vias como: dérmica, ocular e respiratória levam à mínima absorção sistêmica,
porém apreciável, apesar do risco de dano tecidual local. Repetidos ou contínuos contatos na
derme, especialmente com uma solução concentrada, pode levar à absorção pela corrente
sanguínea caso a integridade do estrato córneo esteja prejudicada. A absorção de
concentrações capazes de levar à morte foi relatada em exposições ocupacionais crônicas de
PQ (TOMINACK, 2006; LARINI, 1999).
Em 1983, Landrigan et al, em um teste de combustão, comprovaram que 0,2 % de
paraquat disponível em amostras de maconha apreendidas passam para a fumaça que será
inalada durante o uso da droga.
Apesar de numerosos estudos, a distribuição do PQ através dos diferentes tecidos,
ainda não está bem estabelecida. Dey et al., (1990) estudaram a toxicocinética do PQ em ratos
expostos a uma única injeção subcutânea e que foi rapidamente absorvido com um T-máx
Praguicidas 54
(tempo no qual a concentração máxima é atingida) de 20 min. A distribuição foi melhor
caracterizada por um modelo bi-compartimental. A média do t ½ (meia vida de eliminiação)
foi de aproximadamente 40 h. O PQ se distribui rapidamente para a maioria dos tecidos,
apresentando concentrações elevadas nos rins, fígado, cérebro, baço, músculos e pulmões
(principais reservatórios). As concentrações máximas nos rins e nos tecidos pulmonares foram
obtidas em cerca de 40 min. No entanto, a maioria dos autores concorda que a cinética de PQ
no plasma é melhor descrita por um modelo tri-compartimental (DINIS-OLIVEIRA et al.,
2008, LARINI, 1999).
Apenas uma pequena fração do PQ administrada oralmente é metabolizada, sendo que
a maior parte é excretada inalterada pela urina (LANES-ALMEIDA, 2007).
Mais de 90 % da dose absorvida é eliminada pelos rins na forma inalterada nas
primeiras 12 - 24 horas após a ingesta. A redistribuição dos pulmões e músculos, para corrente
sanguínea é lenta, com meia-vida de aproximadamente 24 horas, apresentando período de
detecção de baixas concentrações de paraquat na urina por vários dias após sua administração
(TOMINACK, 2006).
3.2.3. Toxicodinâmica
Vários trabalhos já foram realizados para elucidação sobre mecanismos da
toxicodinâmica do PQ, porém o real mecanismo de ação ainda está incerto. O que a maioria
dos autores concorda, é que após a sua entrada na célula, o PQ sofre processos de redução e
oxidação contínuas que são conhecidos como ciclo redox, desencadeando a formação de
radicais livres e espécies reativas de oxigênio, entre eles o radical superóxido (O2-), o peróxido
Praguicidas 55
de hidrogênio (H2O2) e o radical hidroxila (OH), os quais são instáveis e reagem rapidamente
com ácidos graxos, provocando lesão nas membranas, proteínas e DNA. (DINIS-OLIVEIRA
et al., 2008; SCHMITT et al., 2006).
O PQ reage com uma substância doadora de elétrons, o fosfato de nicotinamida
adenina dinucleotídeo (NADPH), sofrendo redução por ação da enzima NADPH-citocromo
P450 redutase, o que resulta na geração de um radical paraquat. O radical formado é altamente
instável e transfere um elétron para o oxigênio molecular, formando o radical ânion
superóxido, que é uma espécie altamente reativa. Desta forma se inicia o ciclo redox
(ALONZO & CORRÊA, 2008).
O O2- que se forma pode ser detoxificado pela ação da enzima superóxido dismutase
(SOD), produzindo o peróxido de hidrogênio. Esse produto formado é removido através da
enzima catalase. Entretanto, a SOD pode ser suprimida pela grande quantidade de superóxido
que vai sendo produzida quando há altas doses de paraquat. Dessa forma, os ânions
superóxido sofrem uma reação de dismutação não-enzimática, formando o oxigênio singlet,
que ataca os lipídios insaturados das membranas celulares, dando origem a radicais livres
lipídicos que, espontaneamente, geram radicais peroxil lipídicos. Esses podem reagir com
outros ácidos graxos poliinsaturados, produzindo um hidroperóxido lipídico e mais radicais
livres lipídicos, propagando o processo continuamente como uma reação em cadeia chamada
peroxidação lipídica (LARINI, 1999; ALONZO & CORRÊA, 2008; SCHMITT et al., 2006).
A morte celular ocorre quando as funções são alteradas pela reação das espécies
reativas de oxigênio com o DNA, as proteínas e as membranas celulares. O balanço entre a
geração de radicais de oxigênio e sua dissipação pelos sistemas celulares antioxidantes (SOD,
Praguicidas 56
catalase, glutationa-peroxidase e vitaminas C e E esses sistemas que requerem um período de
tempo para sua adaptação e equilíbrio) é alterado, possibilitando que espécies reativas
ataquem as biomoléculas tendo como conseqüência o dano tecidual. Tal mecanismo descrito
pode explicar as lesões nos principais órgãos-alvo (ALONZO & CORRÊA, 2008; SCHMITT
et al., 2006; TOMINACK, 2006).
3.2.4. Efeitos agudos
As manifestações clínicas comumente presentes nas intoxicações agudas por PQ estão
resumidas por tipo de sistema na Tabela 6.
Tabela 6. Manifestações clínicas agudas do PQ por sistema.
Cardiovascular Genitourinário
necrose tubular aguda, disfunção tubular
hipovolemia, choque, disritmia
proximal, oligúria
Sistema Nervoso Central Hematopoético
coma, convulsões e edema cerebral Leucocitose precoce, anemia tardia
Dermatológico Respiratório
tosse, afonia, pneumotórax,

corrosão da: pele, córnea, conjuntiva e
hemorragia,fibrose,mediastinite, alteração
mucosa nasal
faríngea (membrana)
Endócrino Gastrointestinal
ulceração e corrosão orofaríngea, náusea,
insuficiência adrenal, causada pela necrose vômito, diarréia, disfagia, perfuração do
adrenal (falência múltipla dos órgãos) esôfago, pancreatite, necrose hepática,
colestase
Fonte: TOMINACK, 2006.

Praguicidas 57
3.2.5. Efeitos crônicos
As constantes revisões de literatura mostram que efeitos crônicos, devido a exposições
contínuas ao PQ, são raros (ISENRING, 2006). Isso é explicado, muitas vezes, pela falta de
profissionais qualificados para o diagnóstico dessas intoxicações, ocorrendo assim uma
subnotificação dessas intoxicações por PQ (ISENRING, 2006). A exposição a doses
relativamente baixas em um longo período de tempo pode afetar os pulmões, sistema nervoso
central, pele, além de causar efeitos na reprodução (GUO et al., 1996). São reportados os
seguintes efeito tóxicos crônicos, por sistema-alvo:
a) Sistema respiratório
Estudos com animais, utilizando doses baixas e repetidas de PQ por via oral e dérmica,
mostraram que o mesmo pode causar fibrose pulmonar. No caso de exposição direta no
pulmão, utilizando o PQ em forma de spray, foram observadas lesões (BISMUTH et al.,
1995). Efeitos irritantes nas vias aéreas superiores são comumente encontrados (HALL &
BECKER, 1995).
Existem estudos sobre efeitos causados pela exposição a longo prazo, porém alguns
desses estudos apresentam resultados contraditórios entre si e não se mostram conclusivos até
o presente momento. Em dois estudos com seres humanos, observou-se que não houve relação
entre a exposição de PQ e efeitos pulmonares, porém em outros três, foi observada uma
relação causal entre a exposição do herbicida com pequenas alterações nas trocas gasosas
(CASTRO-GUTIÉRREZ et al., 1997; SCHENKER et al., 2004).

Praguicidas 58
No estudo feito por Schenker et al., (2004), além das alterações já descritas, observou-
se que exposições continuas ao PQ aumentaram o risco relativo de tosse crônica, falta de ar, e
dificuldade em respirar. Outros resultados mostraram que teve um aumento na dessaturação
de oxigênio (5 % ou mais), apresentando um risco relativo ao indivíduo exposto. Tais
resultados sugerem que a exposição a longo prazo ao PQ esteja associada com anormalidades
nas trocas gasosas feitas pelo pulmão (DALVIE et al., 2005).
Diversas outras pesquisas relataram, inúmeras manifestações, dentre elas as mais
importantes são:
diminuição da difusão do monóxido de carbono nos pulmões;
disfunção pulmonar de aproximadamente 27 % de insuficiência respiratória em
indivíduos asmáticos;
expectoração, dispnéia, bradipnéia, secreção nasal aumentada;
risco três vezes maior de ocorrer obstrução pulmonar crônica;
apresenta associação significante com tabaco, indicando efeitos combinados, como
a bronquite crônica, que foi mais prevalente em indivíduos fumantes do que em
não fumantes, ambos expostos ao paraquat (HOPPIN et al., 2002; LEVIN et al.,
1979).
b) Sistema nervoso
Cada vez mais, o uso crônico de PQ vem sendo associado com efeitos em nível de
Sistema Nervoso Central. Em pesquisa realizada em Taiwan, os fazendeiros que utilizavam
PQ e outros herbicidas continuamente apresentaram maior risco de ter Mal de Parkinson, do

Praguicidas 59
que outros fazendeiros que trabalham com outros herbicidas, mas não com o PQ (LIOU et al.,
1997). Hertzmann et al., (1990) também descreveram essa relação entre exposição ao PQ e
Mal de Parkinson. Estudos realizados por Firestone et al., (2005) mostram que a relação PQ X
Mal de Parkinson é baixa, porém o mesmo relata a dificuldade de se obter esse dado devido à
utilização de PQ em associação com vários outros praguicidas, impedindo a obtenção de
resultados fidedignos sobre os efeitos individuais dos mesmos.
Parkinsonismo tem sido associado à insuficiência de níveis de dopamina no cérebro.
Foi descoberto em estudos com animais que o PQ apresenta toxicidade para as células
produtoras de dopamina causando porém tremores, insônia, ansiedade, dentre outros efeitos
(BONNEH-BARKAY et al., 2005).
c) Efeitos na reprodução
O PQ pode afetar a reprodução, resultando em má conformação congênita. A
exposição ocupacional a PQ e diquat foi associada à um risco relativo de má conformação
congênita e de outros problemas com o desenvolvimento da criança (GARCIA et al., 1998).
Experiementos com animais mostraram que o PQ afeta diretamente o desenvolvimento
embrionário (HAUSBURG et al., 2005).
d) Mutagenicidade e Carcinogenicidade
Quanto à mutagenicidade, alguns testes realizados com PQ foram positivos em células
pulmonares e linfócitos humanos. Evidências indicam que o oxigênio reativo produzido pelo
PQ é responsável pela genotoxicidade, a qual não oferece risco ao homem uma vez que, em
Praguicidas 60
doses baixas, o sistema antioxidante de defesa evita que efeitos genotóxicos apareçam (FAO,
2003).
Em linfócitos humanos o PQ induziu um ligeiro aumento nas trocas das cromátides, o
que acarreta em danos aos cromossomos, levando a um aumento da susceptibilidade a tumores
malignos (RIBAS et al., 1998; SEGEN, 1992).
Paraquat já foi classificado pelo EPA (U.S. Environmental Protection Agency) em
1993 como categoria “C” (possível carcinogênico), porém a partir de 1997 ele foi classificado
pelo mesmo órgão como categoria “E” (improvável de ser carcinogênico) (ISENRING, 2006).
O 4,4-bipiridil é um precursor utilizado na síntese do PQ e é encontrado como
inpureza no PQ, muitas vezes na concentração de 0,2 % (AMBRUS et al., 2003). Tem sido
relacionado a ele, um aumento na incidência de lesões de pele relacionado à doença de Bowen
(forma de carcinoma epidermóide na região perianal) e câncer de pele (HALL & BECKER,
1995).
Praguicidas 61
3.3. Glifosato
O glifosato (GLI) ou sal isopropilamina de [N (fosfonometil) glicina] foi descoberto
em 1971 por J.E.Franz e em 1974 foi introduzido no mercado Europeu como herbicida. É o
herbicida mais vendido e consumido em todo o mundo (PRATA, 2002; COX 2004).
É registrado para uso em mais de 130 países, sendo seu primeiro e principal produtor a
Monsanto, porém outros fabricantes como Syngenta, Cheminova, Agripec, Helm, Atanor,
Nortox, Sinon, Milenia também produzem o glifosato. É encontrado comercialmente com os
seguintes nomes: Roundup®, Glifosato®, Agrisato®, Glifogan®, Glifonox®, Rodeo®, Rondo®,
Bronco®, Weedoff®, Pasor®, Radar®, Polaris®, Scout®, Trop®, Zapp QI®, Sting®. Sua
formulação original contém o sal de isopropilamina (41 %), um surfactante de
polioxietileneamina (15,4 %) e água (COX, 2004; ALONZO & CORRÊA, 2008, SINDAG,
2006). Essas formulações acima descritas podem variar a concentração, tipo de surfactante e o
tipo de sal utilizado, sendo encontrados os sais de mono-amônio, di-amônio, sesqui-sódio,
potássio, trimetil-sulfonil (trimesium), dentre outros sais de que aparentemente apresentam
toxicidades diferentes, enquanto o principal surfactante utilizado é o polioxietileneamina
(TOMINACK, 2006; ALONZO & CORRÊA, 2008).
Um fato interessante que vem ocorrendo no país, que é de extrema importância
toxicológica, é a relação entre o uso de GLI com a soja transgênica. A cultura da soja (Glycine
max) ocupa atualmente, no Brasil, uma área de 18,4 milhões de hectares, sendo a espécie com
maior extensão de cultivo, tendo relevante importância econômica no país. O cultivo de
lavouras de soja geneticamente modificada está em expansão no Brasil e já foram concedidos
certificados de proteção para 23 cultivares de soja tolerantes ao herbicida glifosato (fato

Praguicidas 62
presente nesses cultivos transgênicos) (FUNGUETTO, 2004). Tal situação levou a questões
judiciais levantadas pelo IDEC (Instituto Brasileiro de Defesa do Consumidor) para ANVISA
sobre: os resultados de todos os testes de resíduos de glifosato e do seu metabólito AMPA em
soja transgênica; o número de testes realizados; os locais de produção das amostras analisadas
(estados e municípios); a época de aplicação do glifosato na soja analisada nos testes; o
número de aplicações de glifosato na soja analisada; quais laboratórios realizaram os testes; os
estudos toxicológicos sobre o glifosato e o AMPA. Também solicitou as justificativas de
LMR (Limite Máximo de Resíduos) para soja convencional de 0,2 mg/kg e para a soja
transgênica de 10 mg/kg e para o prazo de carência de 56 dias e quanto, efetivamente, a
empresa Monsanto teria pedido de aumento no LMR (YASUNAGA, 2004).
Segundo opinião pessoal de Sezifredo Paz, coordenador executivo do Idec (já que o
parecer da ANVISA ainda não foi liberado) “Essa postura da Agência prejudica a participação
da sociedade em uma decisão de grande relevância para a proteção dos consumidores. Afinal,
por causa da soja transgênica teremos 50 vezes mais resíduos de um agrotóxico e não sabemos
quanto do seu metabólito na nossa comida” (YASUNAGA, 2004).
O glifosato é um herbicida sistêmico, de amplo espectro, não seletivo e de pós-
emergência, muito utilizado na agricultura e em outras áreas não cultivadas para o controle de
ervas daninhas anuais e perenes (ARAÚJO, 2002). No Brasil, tem sido amplamente utilizado
na agricultura, principalmente como dessecante, maturador, aplicado pós-emergência em
cultivos sob plantio direto, nas entrelinhas de culturas e na eliminação de plantas daninhas em
ambientes aquáticos (PRATA, 2002; ANVISA, 2007). Os tipos de culturas empregadas,
modos de emprego, limites e intervalo de segurança estão resumidos na Tabela 7.

Praguicidas 63
Tabela 7. Limites e modos de utilização de Glifosato em culturas.
Modalidade de
Intervalo de
Culturas Emprego LMR (mg/kg)
Segurança
(Aplicação)
Algodão
Pós-emergência 3,0 ND
Ameixa
Arroz
Aveia preta
Azevém
0,02
Banana Pós-emergência 30 dias
30 dias
Cacau Pós-emergência 0,1
15 dias
Café Pós-emergência 1,0
30 dias
Cana-de-açúcar Maturador 1,0
Cana-de-açúcar
30 dias
Citros Pós-emergência 0,2
Coco Pós-emergência 0,1 15 dias
Feijão Pós-emergência 0,05 ND
UNA UNA
Fumo Pós-emergência
0,2
Maçã Pós-emergência 15 dias
Soja
Soja
Fonte: ANVISA, 2007. (ND: não disponível; UNA: uso não alimentar)
Praguicidas 64
No uso não agrícola, é empregado em margens de rodovias e ferrovias, áreas sob a
rede de transmissão elétrica, pátios industriais, oleodutos e aceiros, para fins de se erradicar
plantações rasteiras que crescem naturalmente e podem comprometer o funcionamento desses
locais/objetos e também é empregado como domissanitário na jardinagem amadora
(ANVISA, 2007).
Após a constatação da toxicidade e pôlemica relacionada ao PQ, na década de 70,
quando era aplicado com propósito de erradicação nas culturas de substâncias ilícitas, como a
Cannabis sativa, houve a substituição do mesmo pelo GLI, que é até hoje utilizado com
propósito de erradicação das culturas de Cannabis sativa L, Erytoxilum coca e Papaver
somniferum em alguns países da América Latina, principalmente na Colômbia, em uma ação
governamental conhecida como “Plano Colômbia” e popularmente como “War of Drugs”. O
GLI é o segundo herbicida, após o PQ, mais utilizado para cultivos ilícitos da Erytoxilum coca
na Colômbia (ARMENTANO, 1998; GRANJA, 2001; COGGIOLA, 2005).
O GLI é um clássico exemplo de ingrediente ativo de baixa toxicidade para humanos,
animais, insetos e microrganismos, denominado como “virtualmente não tóxico”, porém é
formulado com diversos ingredientes, denominados de “inertes” que são responsáveis por
inúmeros efeitos agudos e crônicos (COX, 2004; TOMINACK, 2006). As principais
substâncias inertes presentes nas formulações de glifosato são: 5-Cloro-2 metil-3(2H)-
isotiazolone, FD&C azul Nº 1, glicerina, 3-Iodo-2 propinil butil carbamato, destilados de
petróleo, metil p-hidroxibenzoato, propilenoglicol, sulfito de sódio, benzoato de sódio, ácido
sórbico, fenilfenol (COX, 2004).

Praguicidas 65
O grande sucesso nas vendas do GLI se deve à elevada eficiência na eliminação de
ervas daninhas, com a vantagem adicional de ser de baixa toxicidade aos que o manipulam, à
comunidade e ao ambiente. Apesar do herbicida ser citado como pouco tóxico, há evidências
de efeitos deletérios em seres humanos devido à toxicidade ambiental, causando danos
indiretos e também levando à resistência de algumas espécies de ervas que se adaptam após o
uso prolongado do herbicida (AMARANTE JR et al., 2002).
No Brasil, o herbicida GLI, irá passar pelo processo de reavaliação realizado pela
ANVISA até o final de 2008. Tal processo será realizado, devido a seu uso intenso, impurezas
presentes e ingestão diária aceitável. Antes de esse processo ser iniciado, a consulta pública
n.77 de 24 agosto de 2007, publicada no Diário Oficial da União no dia 27 de agosto de 2007
foi realizada para críticas e sugestões presentes na monografia disponível pela ANVISA
(SILVA, 2007; BRASIL, 2007).
3.3.1. Propriedades físico químicas
O GLI é um organofosforado, pertence ao grupo químico dos aminoácidos fosfonados
e tal como o seu precursor, a glicina, apresenta um comportamento zwiteriônico. Aminoácidos
e derivados apresentam comportamento zwiteriônico, ou seja, em sua estrutura o grupo
carboxílico apresenta caráter mais fortemente ácido que o grupo amônio (COUTINHO &
MAZO, 2005).
No caso do GLI, os grupos fosfato e carboxílico têm maior caráter ácido que o amônio.
Em pH abaixo de 0,8 a maior parte do glifosato se apresenta com uma protonação no sítio da
amina. Em pH 0,8, valor da primeira constante de dissociação, tem-se 50 % das moléculas

Praguicidas 66
possuindo esta protonação e as demais moléculas com uma dissociação no grupo fosfato. A
partir deste valor até pH 2,2, tem-se predominância da forma molecular, com uma dissociação
(PO2H) e uma protonação (NH2+), sendo que, em pH 2,2, 50 % do composto já possuirá duas
dissociações, embora mantenha a protonação no grupamento amina. Entre pH 2,2 e 5,4, o
herbicida se mostra com predominância da forma com duas dissociações, tendo, do mesmo
modo, 50% das moléculas com três dissociações em pH 5,5. A partir de pH 5,5 até 10,2, têm-
se três dissociações. Neste pH ocorrem as formas com três e quatro dissociações e, então, o
glifosato se apresenta totalmente dissociado acima de pH 11. Os valores da constante de
dissociação (pKa) encontrados na literatura para o glifosato são: pKa1 = 0,8; pKa2 = 2,16;
pKa3 = 5,46; pKa4 = 10,14. (AMARANTE JR, et al., 2002; COUTINHO & MAZO, 2005).
O GLI apresenta fórmula molecular C3H8NO5P (m.m. = 169,1 g/mol) e, na forma de
sal de isopropilamônio, apresenta-se acrescido do grupo (CH3)2CHNH3+ (m.m. = 228,2
g/mol)3. Em condições ambientais, tanto GLI quanto seus sais são sólidos cristalinos, muito
solúveis em água (12 g/L a 25° C, para glifosato) e quase insolúveis em solventes orgânicos
comuns, tais como acetona e etanol, entre outros. Se funde a 230° C, possui densidade
aparente de 0,5 g/cm3 e se apresenta bastante estável em presença de luz, inclusive em
temperaturas superiores a 60° C. Não apresenta grupos cromóforos e fluoróforos, impedindo a
sua detecção por detectores convencionais (absorção UV/VIS e detectores de fluorescência)
(AMARANTE JR, et al., 2002; CIKALO; GOODALL; MATTHEWS, 1996). As
propriedades físico-químicas do glifosato estão resumidas na Tabela 8 e sua estrutura
molecular, equilíbrios e constantes de dissociação estão ilustrados na Figura 9.

Praguicidas 67
O
H
HOOC N P OH
OH
Glifosato
OH H O OH H O
N+ P OH N+ P O- + H+
O pKa < 2 O
H OH H OH
OH H O O- H O
N+ P O- N+ P O- + H+
O pKa = 2,6 O
H OH H OH
O- H O O- H O
N+ P O- N+ P O- + H+
O pKa = 5,6 O
H OH H O-
O- H O O- O
N+ P O- N P O- + H+
O pKa = 10,6 O
H O- H O-
Figura 9. Estrutura, equilíbrios e constantes de dissociação do herbicida glifosato.
Fonte: AMARANTE JR, et al., 2002.
Microrganismos degradam o herbicida GLI em ácido aminometilfosfônico (AMPA),
principal metabólito e produto de degradação no ambiente, comumente encontrado por um
período de tempo maior em amostras de solo, água e outras matrizes. Níveis de AMPA
encontrados representam em média cerca de 10 % do GLI presente (dependendo do tipo de
matriz aplicada). Alguns países não consideram o AMPA de importância toxicológica, por
isso não se tem estabelecido LMR em culturas onde o glifosato é aplicado. Porém, em outros
países, como Canadá, já se tem estabelecido tais limites para o AMPA, pois atua como um
Praguicidas 68
marcador de exposição ao glifosato, principalmente nas culturas tolerantes ao glifosato
(WILLIAMS; KROES; MUNRO, 2000). Suas propriedades físico-químicas são semelhantes
ao GLI, e sua toxicidade aguda comparada ao composto original é menor para os mamíferos,
porém maior para seres aquáticos (DL50 oral e dérmica em ratos, maior que 5000 mg/kg para o
GLI e 8300 mg/kg para AMPA) (ARAÚJO, 2002; TOMINACK, 2006; WILLIAMS;
KROES; MUNRO, 2000; ECH, 2002). Sua estrutura molecular, equilibrios e constantes de
dissociação estão ilustrados na Figura 10.
O
H2N P OH
OH
AMPA
H O H O
H N+ P OH H N+ P O- + H+
pKa = 1,8/2,4
H OH H OH
H O H O
H N+ P O- H N+ P O- + H+
pKa = 5,4/5,9
H OH H O-
H O H O
H N+ P O- N P O- + H+
H O- pKa = 10,0/10,8 H O-
Figura 10. Estrutura, equilíbrios e constantes de dissoçiação do AMPA.
Fonte: CIKALO; GOODALL; MATTHEWS, 1996.

Praguicidas 69
Tabela 8. Propriedades físico-químicas do Glifosato.
Densidade 0,5 g/cm3
230° C
Ponto de fusão
Ponto de ebulição 199° C decomposição
Pressão de Vapor 7,50 X 10-6 mmHg a 20° C
Estado físico cristais cristalinos
Volatilidade não volátil
Flamabilidade não inflamável
Solubilidade em água 12 g/L (25° C)
acetona: 0.078 g/L
diclorometano:0.233 g/L
acetate de etila: 0.012 g/L
Solubilidade em hexano: 0.026 g/L

solventes orgânicos
metanol: 0.231 g/L
n-octanol: 0.020 g/L
propanol: 0.020 g/L
tolueno: 0.036 g/L
Fonte: ECH, 2002; AMARANTE JR, et al., 2002.

Praguicidas 70
3.3.2. Toxicocinética
Os estudos de cinética para o GLI e seu principal metabólito (AMPA) tem sido
extensos. Ambos os compostos apresentam em sua estrutura, ácido fosfônico cujos valores de
pKa são baixos, portanto são absorvidos no pH encontrado no lúmen intestinal. Somente 15 -
36 % da dose oral administrada repetidamente ou únicamente é absorvida principalmente no
intestino delgado, demonstrando assim que o GLI e AMPA são mal absorvidos mesmo apesar
das condições ácidas favoráveis (WILLIAMS; KROES; MUNRO, 2000).
Após a absorção, são distribuídos no organismo, sendo encontrados principalmente nos
intestinos, nos ossos, no cólon e nos rins. A concentração plasmática de pico é observada 2
horas após a administração oral em humanos e 6,3 horas em outras espécies animais. A
biotransformação para o GLI em mamíferos é mínima, em torno de 0,5 – 1 % convertida pelo
metabolismo bacteriano para o AMPA, que não é metabolizado pelo organismo (WILLIAMS;
KROES; MUNRO, 2000; ALONZO & CORRÊA, 2008; TOMINACK, 2006).
Como esperado para as substâncias que não são bem absorvidas pelo trato
gastrointestinal, as fezes constituem a principal via de eliminação. As pequenas frações
absorvidas de GLI e AMPA são rapidamente excretadas pela urina, quase que exclusivamente
na forma inalterada. Em intoxicações, a meia-vida de eliminação é de 2 - 3 horas,
apresentando função renal normal, caso essa esteja comprometida, a meia vida será maior,
dependendo da quantidade exposta (WILLIAMS; KROES; MUNRO, 2000; TOMINACK,
2006).
Praguicidas 71
Resultados de múltiplos estudos sobre eliminação, após doses orais repetidas de GLI e
AMPA, mostraram não ter efeitos significantes na eliminação (comparados com aquela
observada após uma única dose) e que não apresenta acumulação. A demora na eliminação
dos ossos é explicável devido à interação reversível entre o ácido fosfônico presente no GLI e
AMPA com os íons cálcio (mesmo mecanismo de acumulação no ambiente, variando apenas
os tipos de matrizes) (WILLIAMS; KROES; MUNRO, 2000).
Em estudos in vivo utilizando macacos rhezus e in vitro utilizando tecidos humanos, a
absorção por via cutânea apresentou valores menores que 2 %. Portanto conclui-se que o
potencial para se ter efeitos sistêmicos é limitado pela combinação da baixa absorção e rápida
excreção do GLI ou AMPA após exposição oral ou cutânea (WILLIAMS; KROES; MUNRO,
2000, ALONZO & CORRÊA, 2008).
3.3.3. Toxicodinâmica
O mecanismo de ação do GLI e dos produtos comerciais com glifosato ainda é
questionado e seu estudo torna se complicado, devido a duas situações distintas. A primeira é
devido à grande variedade de sais de glifosato e a segunda deve-se à grande variedade de
surfactantes, produtos inertes e concentrações presentes nos diversos produtos comerciais,
dificultando assim o esclarecimento do mecanismo de ação (RICHARD et al., 2005). Nas
plantas, o herbicida inibe a enzima enolpiruvil shikimato-3-fosfato sintase (EPSP) e como não
há enzima equivalente em mamíferos, a toxicidade do glifosato não decorre deste mecanismo
de ação (ARAÚJO, 2002).

Praguicidas 72
Apesar de ser um herbicida organofosforado, o GLI não é um inibidor da enzima
acetilcolinesterase, não apresentando os efeitos decorrentes do acúmulo de acetilcolina no
espaço intersináptico (ALONZO & CORRÊA, 2008). O GLI aumenta o consumo de oxigênio,
da atividade ATP-ase, interrompe a atividade da enzima aromatase (responsável pela síntese
de estrógenos), alteração dos níveis de RNAm e reduz os níveis hepáticos do citocromo P450.
Devido à redução dos níveis de citocromo P450, ocorre interferência no metabolismo de
alguns fármacos, podendo originar uma predisposição para porfirias (GRANJA, 2001).
Em estudos utilizando mitocôndrias isoladas do fígado de ratos, constatou que o GLI
age desacoplando a fosforilação oxidativa e interferindo na reação trans-hidrogenase
dependente de energia (GRANJA, 2001; ALONZO & CORRÊA, 2008).
3.3.4. Efeitos agudos
As manifestações clínicas comumente presentes nas intoxicações agudas por GLI estão
resumidas por tipo de sistema na Tabela 9.

Praguicidas 73
Tabela 9. Manifestações clínicas agudas do Glifosato por sistema.
Cardiovascular
Genitourinário
choque, disritmia, taquicardia, palpitações,
arritmia ventricular, hipotensão, bradicardia e necrose tubular aguda, insuficiência renal
parada cardíaca hematúria, oligúria, anúria
Sistema Nervoso Central

Hematopoético
alteração da consciência e estado mental,
leucocitose
letargia
Respiratório
Dermatológico
hipóxia, lesão pulmonar aguda, irritação,
erosão das mucosas do trato respiratório,
irritação, piloereção, eritema, dermatite de
sensibilidade na via respiratória superior,
contato
broncoespamo (raro)
Endócrino
Gastrointestinal
acidose metabólica, hipertermia; elevação da
náuseas, vômitos, hiperemia da mucosa,
amilase sérica, bilirrubina e desidrogenase
odinofagia, disfonia, aumento da salivação,
láctica; hiperpotassemia
erosão, ulceração, esofagite, gastrite
Ocular
conjuntivite, edema periorbitário
Fonte: TOMINACK, 2006; ALONZO & CORRÊA, 2008.
3.3.5. Efeitos crônicos
Embora a toxicidade aguda do GLI e AMPA sejam consideradas baixas (DL50 oral e
dérmica em ratos, maior que 5000 mg/kg para o GLI e 8300 mg/kg para AMPA), alguns
autores têm sugerido que o herbicida pode apresentar diversos efeitos em animais quando
expostos ao herbicida por um período longo de tempo. A dose diária aceitável por massa
Praguicidas 74
corpórea do glifosato é relativamente baixa (DDA = 0,05 mg/kg) (COX, 2000; WILLIAMS;
KROES; MUNRO, 2000; AMARANTE JR, et al., 2002).
A toxicidade crônica do GLI foi estudada em ratos expostos oralmente ao herbicida
com concentrações que variaram de 0 a 30,000 mg/kg por 24 meses. Os resultados de três
estudos (dois realizados com ratos e um com camundongos) mostraram que 8,000 mg/kg ou
409 mg/kg/dia foi estabelecido como nível de NOAEL (níveis onde não são observados
efeitos adversos) para toxicidade crônica (GRANJA, 2001). Os valores encontrados de
NOAEL em etudos de toxicidade crônica para o AMPA foram menores em comparação com
o GLI, tendo sido estabelecido NOEL de 2,8 mg/kg/dia (WILLIAMS; KROES; MUNRO,
2000). Com esses estudos, a classificação para o glifosato segundo o EPA está como categoria
“E” (não apresenta evidências de carcinogecididade em humanos) (GRANJA, 2001).
Porém quatro estudos recentes e distintos mostram não concordância com os dados
apresentados acima. A relação observada em três estudos, foi entre a exposição do GLI com o
aumento da incidência do linfoma não Hodgkin´s, um tipo de câncer. Já o outro estudo não
observou essa relação com o linfoma não Hodgkin´s, porém descreveu uma relação com outro
tipo de câncer, o mieloma (COX, 2004). Vários mecanismos pelos quais a exposição do
herbicida GLI poderia causar o câncer foram recentemente identificados. Pesquisadores da
Universidade de Minnesota constataram que tanto o GLI como o produto formulado Roundup
Original®, causaram um rápido aumento na divisão celular de células mamárias, levando ao
câncer de mama. Além disso, pesquisadores franceses mostraram que cinco tipos de
formulações contendo GLI, acarretaram em pertubações na divisão celular de embriões
comumente utilizados para modelo de estudo de divisão celular (COX, 2004).

Praguicidas 75
Estudos in vitro demonstraram que o glifosato reduz a produção de progesterona em
células de mamíferos, e afeta a mortalidade de células placentárias. Estes estudos permitem
classificar o glifosato como disruptor endócrino (ROMANO, 2007).
a) Mutagenicidade
Embora uma série de estudos mostra que tal herbicida não provoca danos genéticos,
outros estudos têm demonstrado que tanto o GLI como os produtos que o têm como
ingrediente ativo, são mais potencialmente mutagênico do que o herbicida isolado (COX,
2000).
Quatro pesquisas publicadas no final da década de 90 demonstraram a habilidade do
GLI e seus produtos em causar danos genéticos. Dois estudos foram realizados na Itália, sendo
um realizado em ratos e outro em células sanguíneas humanas. O primeiro estudo feito em
ratos mostrou que tanto GLI, como seus produtos causaram lesões no DNA das células do
fígado e rins. Outro tipo de dano genético foi observado em células da medula óseea. (COX,
2004). No segundo estudo, realizado em células sanguíneas humanas, também foi observado
danos genéticos para ambas as substâncias analisadas (COX, 2004).
Outros dois estudos realizados também na Itália, utilizando células sanguíneas de
humanos e de vacas, mostraram que houve um aumento significante no número anormal de
cromossomos. Um recente estudo feito em 2004 na Alemanha mostrou que danos no DNA
ocorreram em células teciduais humanas quando foram expostas concomitantemente ao GLI e
peróxido de hidrogênio (substância comumente exposta ao homem) (COX, 2004).

Praguicidas 76
b) Efeitos na reprodução
Efeitos na reprodução devido ao uso crônico de GLI ainda é questionável pois de
acordo com a WHO (World Health Organization), o valor de NOAEL (glifosato) para efeitos
na reprodução é de 175 mg/kg/dia, com base no aumento de mortalidade e de vários sinais
clínicos de toxicidade nas doses previamente analisadas. Já a EPA, considera esse valor de
175 mg/kg/dia sendo o NOEL (níveis onde não são observados efeitos). Para o AMPA,
determinou o NOAEL para efeitos na reprodução de 4,2 mg/kg/dia. (WILLIAMS; KROES;
MUNRO, 2000).
A exposição ao GLI foi associada a problemas reprodutivos nos seres humanos. Um
estudo realizado no Canadá detectou que o uso de herbicida pelos pais acarretou em aumento
no número de abortos e nascimentos prematuros nas famílias rurais. Além disso, um relatório
da Universidade da Califórnia discutiu o caso de uma atleta que apresentava redução dos
intervalos menstruais sempre que competia com raias tratadas com GLI (COX, 2000).
Estudos laboratoriais também demonstraram inúmeros efeitos do herbicida sobre a
reprodução. Em ratos, o GLI reduziu a população espermática sob as duas concentrações
maiores utilizadas; já em coelhos, o herbicida em concentrações diluídas entre dez e cem
vezes o valor da DL50, aumentou a incidência de espermatozóides anormais e mortos; em
coelhas o herbicida provocou redução do peso do feto em todos os grupos tratados
(WILLIAMS; KROES; MUNRO, 2000; COX, 2004).

4. Aspectos analíticos
Aspectos analíticos 78
4. ASPECTOS ANALÍTICOS
Para a análise dos herbicidas PQ, GLI e AMPA existem inúmeras técnicas analíticas e
métodos desenvolvidos descritos e que utilizam diferentes matrizes, conforme pode ser
observado nas Tabelas 10.1 e 10.2, mormente enfocando análises residuais para fins
regulatórios ou em material biológico com finalidade de diagnóstico. Porém quando se
emprega a maconha como matriz, por seu caráter ilícito o número de referências a respeito, é
reduzido e quando ocorrem são relativamente antigas. Mais especificamente, só existem
relatos de metodologias para determinação de PQ em amostras de maconha, provenientes no
final da década de 70, época onde se deu início às controversas pulverizações de PQ nas
culturas de maconha no México. Análises encomendadas pelo NIDA no período de 1999 até
2003, mostraram a contaminação pelo PQ, porém a metodologia aplicada, não está disponível
na literatura; apenas o número de amostras analisadas e contaminadas (LIDDLE et al., 1980;
ELSOHLY, 2003). Referências de análise de GLI e AMPA em amostras de maconha, sequer
foram encontradas, não existindo, portanto dados na literatura sobre os possíveis métodos
e/ou achados.
A seleção da técnica de extração a ser utilizada, bem como o tipo de equipamento
empregado na identificação e quantificação deve levar em consideração, além da finalidade a
que se destina a análise e, portanto, da sensibilidade requerida, o tipo de equipamento
disponível para a execução dos trabalhos. Em análises forenses, deve-se buscar sempre a
elaboração de métodos sensíveis, seletivos e específicos que permitam ao analista a emissão
de resultados inquestionáveis e irrefutáveis, uma vez que tais resultados com freqüência são
utilizados como parte de processos judiciais, que poderão culminar com a condenação ou
absolvição de um réu (CHASIN, 2001; COSTA, 2004)

Aspectos
Tabela 10.1. Métodos analíticos utilizados nas análises de paraquat.
Recuperação LOD* Coluna ou Eletrólito

Matriz Analitos Extração Técnica analítica Referência
(%)*
5% phenyl-
102,5 methylpolysiloxane Posecion, Ostrea,
Mecônio Paraquat LLE CG/MS 0,015 µg/g
Bielawski, 2007
_ 26,5 µg/L Eletrodo de grafite
Água Paraquat X Voltametria Lopes et al., 2007
SPE (troca 99 50 ng/mL C-18 fase reversa
Soro Paraquat, diquat HPLC/DAD Hara et al., 2007
iônica)
Drogas e
herbicidas
Sangue total SPE LC/MS/MS Ariffin, Anderson, 2006
derivados de 85 3,6 ng/mL C-18
amônio quaternário
88 20 ng/L X
Água Paraquat SPE Imunoensaio Bacigalupo et al., 2005
Tampão Ácido
Paraquat, diquat,
95 0,5 mg/L fórmico/formato de Núñez, Moyano,
Água difenzoquat, SPE CE/MS
amônia pH 3,0 com Galceran, 2002
mepiquat
50% de metanol
Sangue, urina Paraquat, diquat LLE CE/DAD 71,4 5 pg/mL Tampão fosfato pH 2,5 Vinner et al., 2001
Solo Paraquat, glifosato LLE TLC 82,5 X Metanol-água Ravanel et al., 1999
Kesari, Rai, Gupta,

Plantas Paraquat LLE Espectrofotométrico X 0,1 mg/L X
1997
Sementes de 93 5 ng/mL C-18 fase reversa
Paraquat SPE HPLC/UV Paschal et al., 1979
girassol
97 % 2 ng/mL C-18/ pareamento
Maconha Paraquat SPE HPLC/UV Needham et al., 1979
iônico
Legenda: Vide Tabela 10.2 (* valores apenas para PQ)
Aspectos
Tabela 10.2. Métodos analíticos utilizados nas análises de glifosato e AMPA.
Técnica Recuperação LOD* Coluna ou

Matriz Analitos Extração Referência
analítica (%)* Eletrólito
Plantas, arroz,
algodão, Glifosato, AMPA SPE LC/MS/MS 90,5 0,05 mg/kg C-18 Li et al., 2007
frutas, carne
Glifosato, AMPA, 84,6 (GLI) Ácido
Sangue total SPE CE/UV Ishiwata et al., 2007
glufosinato, MPPA 76,8 (AMPA) 0,07 mmol L-1 trifluoracético
Frutas, tomate Glifosato, AMPA SPE HPLC/FD 80 (GLI) 0,01 mg/kg C-18 Hérnandez et al., 2000
97 (AMPA)
Khrolenko, Wieckzoreck,
Frutas Glifosato, AMPA SPE HPLC/UV 93,6 (GLI) 0,025 mg/L C-18
2005
81,7 (AMPA)
C-18,
Glifosato, AMPA,
Água, solo SPE LC/MS 89 (GLI) 5 ng/L derivatização Ibânez et al., 2005
glufosinato
97 (AMPA) com FMOC
Glifosato, AMPA,
Soja SPE CE/FD 93,1 0,025 µg/L Indocianina Orejuela, Silva, 2005
glufosinato
com ACN
Glifosato, AMPA, SPE (troca 81 0,02 mg/L DB-608
Árroz, soja CG/PFPD megabore Tseng et al., 2004
glufosinato, MPPA iônica)
X X 1 mmol L-1
Herbicidas, Glifosato, AMPA,
ELL CE/FD fluoresceína Chang, Liao, 2002
água glufosinato, MPPA
pH 9,0
LLE= extração líquido-líquido; SPE= extração em fase sólida; HPLC/FD= cromatografia líquida de alta performance com detector de
fluorescência; LC/MS = cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas; CE/MS= eletroforese capilar acoplada a espectrometria de
massas; HPLC/UV= cromatografia líquida de alta performance com detector ultra violeta; CE/FD= eletroforese capilar com detector de
fluorescência; CG/PFPD= cromatografia gasosa com detector fotométrico de ionização por pulso; MPPA= ácido metilfosfinicopropiônico,
TLC= cromatografia em camada delgada; CG/MS= cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas. (*valores apenas para o GLI e
AMPA).
As técnicas mais empregadas para análise de resíduos de praguicidas, revisadas na
literatura são: cromatografia gasosa, cromatografia líquida e eletroforese capilar. Todas são
extremamente úteis para as análises propostas e naturalmente apresentam vantagens,
desvantagens e soluções para suas limitações, conforme mostra a Tabela 11. O papel do
analista é saber utilizar da melhor maneira o instrumento que lhe é disponível e desenvolver
métodos confiáveis (PICÓ; RODRIGUEZ; MANEZ, 2003).
Tabela 11. Estudo comparativo de diferentes técnicas analíticas para determinação de resíduos
de praguicidas.
Técnica Vantagens Desvantagens Soluções analíticas
Alta sensibilidade e seletividade; Inadequado para substâncias

Alto poder de separação de analitos; polares, termo-lábeis e de
CG Existência de bibliotecas de baixa volatilidade; Derivatização
espectrometria de massas para Alto consumo de gases de alta
identificação de amostras pureza e de elevado custo
desconhecidas
Grande variedade de fases móveis e

Eficiência e seletividade
estacionárias;
insuficiente; Desenvolvimento de
Capacidade de automação e
LC Uso demasiado de diversos colunas mais eficientes e
miniaturização (tecnologia microchip);
solventes de elevado custo e seletivas
Aplicação para qualquer solução
toxicidade como fase móvel
orgânica, idependetemente da sua
volatilidade e estabilidade térmica
Pré-concentração da
Alta resolução dos picos e poder de
amostra (SPE, “stacking”)
separação;
Inadequados limites de Desenvolvimento de
CE Baixo consumo de solventes tóxicos e
detecção métodos com combinação
de elevado custo;
de detectores de alta
Capacidade de automação e
seletividade.
miniaturização (tecnologia microchip)
CG= cromatografia gasosa; LC= cromatografia líquida; CE= eletroforese capilar
Fonte: PICÓ; RODRIGUEZ; MAÑEZ, 2003.

Em análises realizadas no final da década de 70, em amostras de maconha
contaminadas pelo herbicida PQ pela técnica de cromatografa líquida e de espectrofotometria
(NEEDHAM et al., 1979; TURNER et al., 1978), os valores encontrados variaram de 2,0 até
2264 mg/kg. Valores de GLI e AMPA, não foram reportados devido à ausência de estudos
nessa matriz.
Os trabalhos de então utilizavam a extração líquido-líquido como técnica de extração,
utilizando várias misturas de solventes de alta polaridade e inúmeras etapas eram necessárias
na obtenção de índices de recuperação satisfatórios, com conseqüente consumo excessivo de
tempo (TURNER et al., 1978). Hoje em dia tem-se no mercado diversos tipos de composição
de cartuchos de extração para SPE, que podem ser empregados nessas análises, acarretando
melhor eficiência no processo de extração, porém ocasionando elevação do custo final da
análise (PICÓ; RODRIGUEZ; MAÑEZ, 2003).
Os detectores de ultravioleta e arranjo de diodos são os mais utilizados em HPLC e CE
para análise de paraquat, sendo monitorados em comprimentos de onda que variam de 195 a
290 nm, permitindo também com o DAD, um espectro de absorção, aumentando a eficiência
no processo de caracterização do composto. O GLI e o AMPA são detectados indiretamente
pelo detector ultravioleta, desde que seja adicionado um cromóforo ou por fluorescência
quando adicionado um fluoróforo (PICÓ; RODRIGUEZ; MAÑEZ, 2003; OREJUELA &
SILVA, 2005; VINNER et al., 2001).

A eletroforese capilar em solução livre com detecção por arranjo de diodos e UV/vis, é
um dos modos de separação eletroforética, dentre vários existentes, mais utilizados na prática,
provavelmente em razão da facilidade de sua implementação e otimização das condições
experiementais (TAVARES, 1997). De acordo com as diversas referências citadas nas tabelas
10.1 e 10.2 as técnicas modernas atualmente mais empregadas para a análise de resíduos de
praguicidas, junto com HPLC e CG é a CE.

5. Eletroforese Capilar
Eletroforese Capilar 85
5. ELETROFORESE CAPILAR
Em termos de instrumentação analítica, a ciência das separações vem apresentando nas
últimas décadas grandes avanços tecnológicos. A década de 50 foi caracterizada pela
cromatografia gasosa, na década de 70 surgiu a cromatografia líquida e na década de 80 a
terceira técnica instrumental de separação, a eletroforese capilar (TAVARES, 1997).
A eletroforese capilar (CE) é uma técnica de separação baseada na migração
diferenciada de compostos neutros, iônicos ou ionizáveis, através de uma solução de eletrólito
contida no interior de um tubo capilar, mediante a aplicação de um campo elétrico
(TAVARES, 1997; DE OLIVEIRA, 2003; ZANOLLI-FILHO, 2007).
A eletroforese foi introduzida pelo químico Arne Tiselius, no início da década de 30,
através do método da fronteira móvel. Por este trabalho pioneiro, no qual a separação parcial
de algumas proteínas constituintes do soro sangüíneo foi demonstrada, concedeu-se a ele o
prêmio Nobel de 1948. Contudo, a partir da década de 80, em função do avanço tecnológico
que propiciou a implementação das técnicas capilares, a eletroforese passou de um formato de
manipulação intensiva para um formato totalmente automatizado, ganhando status de técnica
analítica de rotina (DE OLIVEIRA, 2003; SANTOS, 2000). A primeira análise realizada por
eletroforese capilar foi publicada em 1979 por Everaerts e logo em seguida por Jogenson e
Lukacs em 1981. Após esse marco, sua aplicação começou a se diversificar nas mais diversas
áreas como toxicologia clínica, forense, alimentos, ambiental e farmacêutica (ZANOLLI-
FILHO, 2007).
Em eletroforese capilar, as separações são conduzidas em tubos de dimensões
capilares, com 15 a 100 µm de diâmetro interno, e 30 a 150 cm de comprimento, preenchidos
com um eletrólito condutor, e submetidos à ação de um campo elétrico. A utilização de
capilares de sílica fundida oferece muitas vantagens sobre os outros meios utilizados para
eletroforese (placa de gel, papel). Devido a fatores geométricos, a relação entre a área
superficial interna e volume é apreciavelmente grande, sendo assim um capilar possibilita a
dissipação eficiente do calor, gerado pela passagem da corrente elétrica através do meio
condutor (efeito Joule). A alta resistência elétrica do capilar possibilita o estabelecimento de
campos elétricos elevados (100 a 500 V.cm-1), resultando em separações de alta eficiência
geralmente excedendo 105 pratos teóricos, resolução inigualável e tempos de análise
apreciavelmente curtos. Outras vantagens da eletroforese capilar são: pequena demanda de
amostra, com volumes tipicamente da ordem de 1 a 10 nL e a possibilidade de injeção e
detecção em fluxo (MICKE, 2004; ZANOLLI-FILHO, 2007) .
O grande impacto da eletroforese capilar não é devido apenas à simplicidade
instrumental e características de desempenho, mas principalmente pela grande variedade de
modos de separação que podem ser aplicados utilizando-se um único tipo de capilar. A
eletroforese capilar agrupa um grande número de separações eletrodirigidas utilizando
diferentes mecanismos de separação. O intervalo de aplicações da eletroforese capilar varia
desde a análise de moléculas pequenas até moléculas de milhares de Daltons (MICKE, 2004).
5.1. Equipamento de eletroforese capilar
O sistema simplificado empregado é um aspecto muito importante da eletroforese
capilar e consiste de: uma fonte de alta tensão, capilares (sílica fundida é o material mais
comumente empregado), eletrodos (geralmente de platina), um detector apropriado e um
computador para o tratamento dos dados comforme mostra a Figura 11 (ZANOLLI-FILHO,
2007; DE OLIVEIRA, 2003).
dados
detecção
capilar
amostra
tampão
Fonte de tensão
Figura 11. Representação esquemática de um equipamento de eletroforese capilar.
Fonte: ZANOLLI-FILHO, 2007.
Uma fonte regulada, de alta tensão, é usada para estabelecer um campo elétrico ao
longo do capilar. Tais fontes podem, em geral, ser operadas a tensão constante e/ou corrente
constante, com valores típicos de tensão no intervalo de 0 - 50 kV e corrente de 0 - 200 µA. A
fonte de alta tensão é conectada, através de eletrodos de platina, a dois reservatórios da
solução para completar o circuito elétrico. Para minimizar efeitos térmicos, o capilar deve ser
mantido à temperatura constante. Há várias possibilidades para termostatização do sistema,
incluindo circulação de um líquido ou ar através de um cartucho contendo o capilar, além do
uso de ventiladores e fornos. Os comandos para controle do equipamento e aquisição de dados
são feitos mediante interface com computador (DE OLIVEIRA, 2003; TAVARES, 1997).
5.1.1. Detectores em eletroforese capilar
Uma das grandes versatilidades da eletroforese capilar é a possibilidade da utilização
de uma ampla gama de detectores. Na eletroforese capilar estão disponíveis detectores que
são, basicamente, a adaptação dos detectores utilizados nos equipamentos de cromatografia
em meio líquido para o formato capilar, e correspondente tempo rápido de resposta. Tais
detectores podem ser: de absorção no UV/vis, fluorescência, fluorescência induzida por laser,
espectrometria de massas, condutividade, amperometria, radioatividade, índice de refração,
dicroísmo circular e Raman. Cabe ao analista escolher o tipo de detector a ser utilizado de
acordo com as propriedades do soluto em análise e da faixa de concentração contemplada
(SANTOS, 2000).
5.1.1.1. Amostras que absorvem radiação no UV/vis – Detecção direta
A detecção direta é utilizada quando as espécies a serem determinadas apresentam
absorção no UV/vis, nesse caso normalmente são utilizados como eletrólito de corrida
compostos que não apresentam absorção nessa região. Assim sendo, o tamanho do sinal
gerado é apenas dependente da lei de Lambert-Beer, quando são desconsiderados efeitos
dispersivos (MICKE, 2004).

5.1.1.2. Amostras que não absorvem radiação no UV/vis – Detecção indireta
A detecção indireta é aplicada com sucesso em eletroforese capilar para analitos que
não apresentam absorção na região do UV/vis. Em geral, as separações são conduzidas em
soluções aquosas de eletrólitos, contendo substâncias cromóforas, normalmente o co-íon
(componente do eletrólito que apresenta mesma carga que os analitos). Desta forma, a
detecção é efetuada indiretamente, pela diminuição momentânea do sinal do eletrólito, devido
ao deslocamento do cromóforo (co-íon) pelo ânion ou cátion do analito, durante sua passagem
pelo detector. Os compostos que são normalmente analisados utilizando esse tipo de detecção
são: cátions e ânions inorgânicos, ácidos carboxílicos, aminoácidos e aminas de cadeia curta
(MICKE, 2004).
5.2. Modos de separação
Vários modos de separação, com mecanismos singulares e seletividade característica
são possíveis em eletroforese capilar, dentre eles se destacam: eletroforese capilar em zona ou
em solução livre (free solution capillary electrophoresis, FSCE ou capillary zone
electrophoresis, CZE), cromatografia eletrocinética micelar (micellar electrokinetic
chromatography, MEKC), eletroforese capilar em gel CGE (capillary
electrochromatography, CEC), isotacoforese (capillary isotachophoresis, CITP) e focalização
isoelétrica (capillary isoeletric focusing, CIEF). No presente trabalho optou-se por discutir
apenas a eletroforese de zona, uma vez que este foi o modo utilizado (ZANOLLI-FILHO,
2007; DE OLIVEIRA, 2003).

5.2.1. Eletroforese capilar em zona (CZE)
A CZE é a técnica de separação efetuada em capilares e baseada somente nas
diferenças entre as mobilidades de espécies carregadas (analitos), em eletrólitos que podem
ser aquosos ou orgânicos. Estes podem ser aditivos ou adicionados como ciclodextrinas,
complexantes ou ligantes, que interagem com os analitos e alteram suas mobilidades
eletroforéticas (ZANOLLI-FILHO, 2007).
Como já descrito, é um dos modos de separação em eletroforese mais usados na
prática, em razão da facilidade de sua implementação e otimização das condições
experimentais. Em CZE, o tubo capilar é simplesmente preenchido com um eletrólito,
geralmente com características tamponantes. A separação ocorre como resultado de duas
estratégias: maximizar as diferenças entre as mobilidades efetivas dos solutos e minimizar as
causas de alargamento das zonas (DE OLIVEIRA, 2003; TAVARES, 1997).
Há equações tradicionais que descrevem resolução (RS), eficiência (N) e tempo de
migração (ti) em CZE, as quais incorporam o fenômeno de difusão como única causa de
alargamento das zonas e são descritas a seguir.

Onde µ i e µ i + 1 são as mobilidades aparentes de dois solutos eluindo em posições
adjacentes, µ média é a mobilidade média dos solutos, µ ef é a mobilidade eletroforética efetiva
do soluto i, µ osm é a mobilidade do fluxo eletrosmótico (movimento unilateral de íons em
direção ao eletrodo de carga oposta), V é a diferença de potencial aplicada, D é a média dos
coeficientes de difusão dos dois solutos, Ltot é o comprimento do capilar e Ldet é a distância do
ponto de injeção à posição do detector (ZANOLLI-FILHO, 2007, TAVARES, 1997).
As equações [A] e [C] indicam que o uso de tensões elevadas é vantajoso, pois implica
em um ganho de resolução e eficiência, assim como na diminuição do tempo de análise.
Outra observação pertinente é que, em separações difíceis, a resolução de pares de solutos
eluindo muito próximos pode ser melhorada pelo ajuste da magnitude do fluxo eletrosmótico.
Quando a mobilidade eletrosmótica for aproximadamente igual, mas de sinal oposto a
mobilidade do soluto, um ganho de resolução é alcançado (equação [A]). As penalidades para
este tipo de estratégia, no entanto, são: perda de eficiência (equação [B]) e aumento
considerável do tempo da análise (equação [C]) (DE OLIVEIRA, 2003; TAVARES, 1997;
ZANOLLI-FILHO, 2007).
6. Objetivo e Plano de Trabalho
.
Objetivo e Plano de Trabalho 93
6. OBJETIVO E PLANO DE TRABALHO
O presente trabalho tem por objetivo o desenvolvimento de metodologias analíticas
adequadas utilizando-se a técnica eletroforese capilar, para determinação dos herbicidas
paraquat e glifosato, bem como seu principal metabólito o ácido aminometilfosfônico
(AMPA) em amostras de Cannabis sativa apreendidas pela polícia para exame pericial. Para
cumprir tal objetivo, foi elaborado o seguinte plano de trabalho:
Otimização e validação de método para identificação e quantificação de Paraquat,
por eletroforese capilar com detecção por arranjo de diodos em amostras de
Cannabis encaminhadas para exame pericial;
Aplicação do método desenvolvido para determinação de paraquat em amostras
provenientes do Laboratório de Toxicologia Forense de Campinas, apreendidas no
ano de 2007, adotando-se como critério de inclusão a positividade para maconha
em análise prévia realizada pela instituição;
Otimização e validação de método para identificação e quantificação de glifosato e
AMPA, por eletroforese capilar com detecção por UV/vis em amostras de Cannabis
encaminhadas para exame pericial;
Aplicação do método desenvolvido para determinação de glifosato e AMPA em
amostras provenientes do Laboratório de Toxicologia Forense de Campinas,
apreendidas no ano de 2007, adotando-se como critério de inclusão a positividade
para maconha em análise prévia realizada pela instituição.

7. Material e Métodos
Material e Métodos 95
7. MATERIAL E MÉTODOS
7.1. Material
7.1.1. Equipamentos, vidrarias e acessórios
equipamento de eletroforese capilar Hewlett Packard modelo HP3DCE, Agilent
Technologies, Palo Alto, CA, EUA, composto por sistema de refrigeração do
capilar por ar forçado, detector de arranjo de diodos – DAD e controlado através do
software HP ChemStation, ver 08.03;
equipamento de eletroforese capilar Beckman Coulter Instruments, Fullerton, CA,
EUA, modelo P/ACE 5510, composto por sistema de refrigeração do capilar por
circulação de líquido refrigerante, sistema de detecção UV/VIS e controlado através
do software Beckman P/ACE System GOLD;
capilar de sílica fundida (Polymicro Technologies, Phoenix, AZ, EUA), revestidos
externamente com poliimida, com 75 µm de diâmetro interno, 48,5 cm de
comprimento total e 40 cm até o detector;
capilar de sílica fundida (Polymicro Technologies, Phoenix, AZ, EUA), revestidos
externamente com poliimida, com 75 µm de diâmetro interno, 37 cm de
comprimento total e 30 cm até o detector;
sistema de purificação de água Milli-Q Plus, Millipore (Milipore, Bedford, MA,
EUA);
banho de ultra-som 8991, Cole Parmer;
peagâmetro digital DM-21, Digimed;
mixer vertical, Black & Decker SB40;

filtros Millex em polietileno com membrana Durapore, poro de 0,45 µm, 33 mm
de diâmetro, não estéril, Millipore;
pipetas automáticas Finpipette, Labsystems, Genex, com diferentes capacidades
volumétricas;
balança analítica Deltarange Mettler AE166;
agitador mecânico tipo vortex Phoenix AT56;
estufa de secagem FANEM 315- SE
vials de polipropileno, com tampa de borracha, com capacidade para 1 ml;
vials de vidro, com tampa de borracha, com capacidade para 2,5 ml;
balões volumétricos de 5, 10, 25, 50 e 100 ml;
frascos de vidro do tipo “penicilina” com tampa de borracha e anel metálico;
lacrador metálico;
frascos de plástico com capacidade para 50 ml com tampa plástica;
suporte universal, garra e argola;
funis analíticos;
papel de filtro Reagen R-42, com 11 cm de diâmetro.
7.1.2. Reagentes
ácido acético glacial 100 % - Merck
ácido clorídrico 37 % - Merck
ácido orto-fosfórico 85 % - Merck
diidrogenofosfato de sódio - Merck
ácido gálico - Spectrum
tris-hidroximetilaminometano – Pharmacia Biotech

7.1.3. Soluções-Padrão
Soluções-padrão (estoque) de dicloreto de paraquat, dibrometo de etilparaquat (padrão
interno para análise de paraquat) foram preparados na concentração de 1000 µg mL-1 em água
ultra pura. As soluções-padrão de glifosato e do ácido aminometilfosfônico (AMPA) foram
preparadas na concentração de 4000 µg mL-1 e o ácido glutâmico (padrão interno para análise
de glifosato e AMPA) foi preparado na concentração de 1000 µg mL-1, em água.
Os padrões do dicloreto de paraquat, dibrometo de etilparaquat e AMPA foram
obtidos da Sigma-Aldrich (Milwaukee, EUA), sendo o glifosato (ASW-01705-01A),
fornecido gentilmente pelo CATI (Coordenadoria de Assistência Técnica Integral) e o ácido
glutâmico da Merck.
Foram preparadas soluções de trabalho de dicloreto de paraquat, glifosato e AMPA, a
partir de diluições das soluções-padrão (estoque), obtendo-se concentrações finais de 5; 10;
25; 50; 100; 300; 400; 500; 600; 800 e 1000 µg mL-1 (para realização das análises em
maconha). Todas as soluções-padrão (estoque) foram preparadas do mesmo lote, com
validade em solução de um ano armazenadas em congelador (-20º C).
A partir das soluções-padrão (estoque) de dibrometo de etilparaquat e ácido glutâmico
(padrão interno), foram preparadas soluções de trabalho de 500 µg mL-1 em água ultra pura .
Solução padrão (estoque) de dicloreto de diquat da Sigma-Aldrich (Milwaukee, EUA)
na concentração de 1000 µg mL-1 em água foi cedida gentilmente pelo Laboratório de
Análises Toxicológicas-LAT da Universidade de São Paulo e foi utilizado na pesquisa para

identificação de possível interferente, pois o mesmo é encontrado em associação com o
paraquat em formulações comerciais (Weedol®) (MOFFAT et al., 2004). Para a verificação de
possíveis interferentes na análise de glifosato e AMPA foi utilizado uma solução estoque na
concentração de 1000 µg mL-1 do produto comercial Trop® (que contém o princípio ativo
glifosato e outros excipientes) fabricado pela Milenia®, sendo esse gentilmente
disponibilizado pelo Laboratório de Cromatografia e Eletroforese Capilar do Instituto de
Química da Universidade de São Paulo.
Todas as soluções preparadas (estoque e trabalho) foram armazenadas em frasco de
plástico de polipropileno com tampa e mantidas em congelador (-20º C).
7.1.4. Amostras de Cannabis sativa L
7.1.4.1. Amostras de Cannabis referência negativa
Amostras de maconha apreendidas pela polícia de Campinas-SP e região no ano de
2007, encaminhadas para exame pericial no Laboratório de Toxicologia Forense do Instituto
de Criminalística de Campinas (LTC/IC) foram misturadas e pulverizadas com mixer, e
tratadas com ácido acético glacial 5 mmol L-1, água deionizada (purificada através de sistema
Milli-Q) abundante, escorrendo em peneira e deixadas em estufa à 100º C por 1 hora para que
ficassem completamente secas. Feito isso, foi analisada por eletroforese capilar para
comprovar a ausência de interferentes, inclusive a possível presença do PQ, GLI e AMPA que
pudessem estar contaminado a droga. Desta forma puderam ser empregadas para realização
dos estudos de validação.

7.1.4.2. Amostras de Cannabis selecionadas para análise
Foram selecionadas para análise amostras, sob a forma de fragmentos vegetais e frutos
secos, compactadas em blocos ou em invólucros (“trouxinha”), ou ainda soltos, provenientes
de diversas apreensões policiais em Campinas e região do ano de 2007. As amostras foram
selecionadas após terem sido analisadas e constatadas a positividade para maconha através de
testes preliminares como o teste de Duquenóis, Fast Blue e após direcionamento para a
análise confirmatória por cromatografia em camada delgada em dois sistemas solventes
diferentes e dois reveladores específicos, sempre comparados com padrões autênticos e
certificados. Esta sistemática é a de rotina no referido Laboratório e embasa a positividade das
análises que integram os laudos emitidos pela Instituição.
7.2. Métodos
7.2.1. Método para determinação de paraquat em amostras de Cannabis
Por se tratar de um sal de amônio quaternário, o PQ apresenta dois grupamentos amina
carregados positivamente em uma ampla faixa de pH, como mostra a Figura 8, além de
possuir em sua estrutura grupamentos cromóforos que absorvem a luz na região do
ultravioleta. Em função destas caracteristicas estruturais o modo de separação utilizado por
CE foi a CZE (Eletroforese Capilar em Solução Livre) com detecção direta, que permite a
separação de compostos ionizáveis, através da aplicação de um campo elétrico. O etilparaquat
foi utilizado como padrão interno.
7.2.1.1. Procedimentos de extração

7.2.1.1.1. Técnica proposta para análise de paraquat em maconha
Em frasco de vidro foi colocado 1 g da droga apreendida e pulverizada, (obtendo-se
um pó homogêneo, onde não era possível distinguir pedaços de caule, raiz, semente ou folha)
e adicionado 1 mL de solução de trabalho de etilparaquat de forma a se obter concentração
final de 50 µg mL-1 e homogeneização em agitador mecânico resultando em pó seco. Foram
adicionados 10 mL de ácido acético glacial 5 mmol L-1, fechando-se o frasco com tampa
plástica. O sistema foi submetido à agitação intermitente em dispositivo mecânico por 5 min.
Feito isso a amostra permanecia em repouso por 1 hora. Após esse período, era novamente
agitado por 5 min e filtrado sob papel de filtro, quando então era acondicionada em frasco do
tipo penicilina. Do filtrado, eram recolhidos 500 µL em vial de polipropileno que foram
injetados no equipamento de eletroforese capilar.
7.2.1.1.2. Otimização do procedimento de extração
Estudo de diferentes soluções extratoras
A fim de se obter um processo de extração simples, com reagentes de baixo custo,
baixa toxicidade, com recuperações satisfatórias e que não sofresse interferência na corrida
eletroforética, foram testadas diferentes soluções extratoras, em concentrações variadas.
Foram analisados: ácido acético glacial nas concentrações de 5, 10 e 20 mmol L-1; ácido
clorídrico nas mesmas concentrações e água deionizada. As análises foram avaliadas em
triplicata, pela adição de 10 mL das diferentes soluções extratoras em amostras referência
negativas enriquecidas com o analito e padrão interno de forma a se obter concentração final
de 50 µg mL-1. A verificação se deu em relação a haver ou não diferença entre a média das
áreas relativas dos picos obtidos. O modo de agitação empregado foi o mesmo descrito no
item 7.2.1.1.1.
Estudo da influência do tempo de agitação para extração
Foram avaliadas diferentes maneiras de agitação para verificação de interferência na
recuperação do analito. Para tanto foram analisados da seguinte maneira:
a) agitação inicial por 5 min, filtração e injeção;
b) agitação inicial por 10 min, filtração e injeção;
c) agitação inicial por 5 min, repouso de 1 hora, agitação pós repouso por 5 min,
filtração e injeção;
d) agitação inicial por 10 min, repouso de 1 hora, agitação pós repouso por 10 min,
e) agitação inicial por 5 min, repouso de 24 horas, agitação pós repouso por 5 min,
filtração e injeção.
As análises foram avaliadas em triplicata, pela adição de 10 mL de ácido acético
glacial 5 mmol L-1 em amostras referência negativa enriquecidas com o analito e padrão
interno de forma a se obter concentração final de 50 µg mL-1. A verificação se deu em relação
a haver ou não diferença entre a média das áreas relativas dos picos obtidos.
7.2.1.2. Condições eletroforéticas
7.2.1.2.1. Estudo do eletrólito de corrida
Testes inciais foram realizados utilizando-se soluções tampão de diidrogenofosfato de
sódio em diferentes concentrações (10 – 50 mmol L-1), com pH = 2,5 (ajustado com ácido
fosfórico). Os eletrólitos foram testados em amostras referência negativa enriquecidas com o
analito e padrão interno na concentração final de 50 µg mL-1.
7.2.1.2.2. Equipamento, condicionamento do capilar e condições eletroforéticas
Os experimentos foram conduzidos em um sistema de eletroforese capilar (modelo
HP3DCE, Agilent Technologies, Palo Alto, CA, EUA), equipado com detector de arranjo de
diodos e software (HP ChemStation, ver A.08.03) para tratamento e aquisição de dados e
sistema de refrigeração do capilar por circulação de ar forçado.
O capilar utilizado foi capilar de sílica fundida (Polymicro Technologies, Phoenix,
AZ, EUA), revestidos externamente com poliimida, com 75 µm de diâmetro interno, 48,5 cm
de comprimento total e 40 cm até o detector.
No início da análise o capilar foi condicionado por pressão de aproximadamente
940 mbar, com passagem de hidróxido de sódio 1 mol L-1 por 5 minutos, seguidos de 5
minutos de água deionizada e 10 minutos de eletrólito de corrida diidrogenofosfato de sódio
40 mmol L-1, pH = 2,5. No intervalo entre as corridas o capilar foi recondicionado com
lavagens de 1 minuto de eletrólito e, no término das análises, 5 minutos de hidróxido de sódio
1 mol L-1 e 5 minutos de água deionizada, para a limpeza.
O modo de injeção foi assim denominado hidrodinâmica e foi realizado durante 10 s,
aplicando-se pressão de 50 mbar. A temperatura do capilar foi de 21º C, a tensão aplicada 21
kV e o comprimento de onda monitorado para quantificação foi, λ = 195 nm.

7.2.1.3. Preparo das amostras de controles-QCs
Amostras de maconha referência negativa, foram adicionadas de PQ, de forma a se
obter concentrações de 5, 40 e 80 µg mL-1, respectivamente QC1 (baixo), QC2 (médio) e QC3
(alto). Esse procedimento foi realizado por outro profissional do LTF/IC a partir de outra
solução-padrão (estoque) na mesma concentração de 1000 µg mL-1.
7.2.1.4. Estudo da interferência da matriz
A interferência da matriz de estudo foi realizada através da comparação de curvas de
calibração dos analítos preparadas tanto em água, como em amostras de maconha referência
negativa, de forma a se obter concentrações finais de 0,5; 2,5; 10; 30; 60 e 100 µg mL-1. O
padrão interno foi utilizado na concentração final de 50 µg mL-1.
7.2.1.5. Validação do método proposto
A validação do método foi realizada estabelecendo-se os valores de recuperação,
linearidade, especificidade/seletividade, precisão intra e interensaio, exatidão, limite de
detecção e de quantificação e estabilidade da amostra (BRASIL, 2003). Todos os cálculos
foram realizados através do programa Microsoft Excel 2003 para sistema operacional
Windows XP-Professional.
7.2.1.5.1. Especificidade/Seletividade
Este parâmetro foi avaliado através das análises de amostras de maconha referência
negativa de diferentes apreensões, misturadas (pool). Uma alíquota de amostra referência
negativa foi enriquecida com o PQ, diquat e padrão interno de forma a se obter concentração
final de 50 µg mL-1. Esta amostra enriquecida foi então submetida aos procedimentos
analíticos propostos no item 7.2.1.1.1. em triplicata e avaliados pelo tempo de migração
absoluto, tempo de migração relativo e espectro DAD dos respectivos picos.
7.2.1.5.2. Curva analítica (Linearidade)
A curva analítica para o método proposto foi feita através da análise de amostras de
maconha referência negativa às quais foram adicionadas soluções de trabalho dos analitos de
interesse a fim de se obter calibradores nas concentrações de 0,5; 2,5; 10; 30; 60 e
100 µg mL-1 (n=5 para cada um dos calibradores). Os calibradores foram submetidos aos
procedimentos descritos no item 7.2.1.1.1. A curva analítica foi obtida pela projeção das
concentrações do analito (µg mL-1) no eixo das abscissas e das relações entre a área do analito
e do padrão interno (etilparaquat) no eixo das ordenadas, utilizando-se a regressão linear pelo
método dos mínimos quadrados para a obtenção da equação da reta, após a constatação de que
o método apresentava homocedasticidade, avaliada pelo teste F. Para verificar que o método
possui condição de uniformidade no valor da média das variâncias, utiliza-se o Teste F, para
verificação se este é homocedástico ou heterocedástico. Para esse teste a variância dos
desvios-padrão do menor e do maior ponto da curva de calibração foram utilizados. A
linearidade, definida como a capacidade do método gerar resultados proporcionais da espécie

em estudo, foi avaliada através do coeficiente de determinação (r2) da curva (RIBANI, et al.,
2004; CHASIN et al., 1998).
7.2.1.5.3. Limite de detecção (LOD) e limite de quantificação (LOQ)
Para determinação do LOD e LOQ, foi empregado o método empírico que consistiu
em analisar diversas amostras de maconha referência negativa adicionados de quantidades
decrescentes do analito em questão (AMBRUSTER; TILLMAN; HUBBS, 1994). O limite de
detecção foi considerado como sendo a menor concentração que apresentou um coeficiente de
variação (n= 5) que não excedeu 20 % e o limite de quantificação a menor concentração que
apresentou um coeficiente de variação que não excedeu 10 % (AMBRUSTER; TILLMAN;
HUBBS, 1994).
7.2.1.5.4. Precisão intra-ensaio e interensaio
Ambos os estudos de precisão intra e interensaio foram conduzidos indiretamente pelo
cálculo de imprecisão através da determinação do coeficiente de variação (CV) das áreas
relativas (razão entre área absoluta do analito e a área absoluta do padrão interno). Este
parâmetro avalia a proximidade entre várias medidas efetuadas em uma mesma amostra
(CAUSON, 1997; GOLDBERGER; HUESTIS; WILKINS, 1997) A precisão intra-ensaio
(repetibilidade), foi determinada através da análise, em um mesmo dia, de cinco replicatas de
amostras de maconha enriquecidas e adicionadas de padrão interno nas concentrações dos
controles QC1, QC2 e QC3 citados no item 7.2.1.3. Para determinação da precisão interensaio
foram analisadas, em cinco dias diferentes, três replicatas de amostras de maconha
enriquecidas e adicionadas de padrão interno nas concentrações dos controles QC1, QC2 e
QC3 citados no item 7.2.1.3.

7.2.1.5.5. Exatidão
Representa o grau de concordância entre os resultados individuais encontrados em um
determinado ensaio e um valor de referência aceito como verdadeiro (RIBANI et al., 2004).
Neste estudo, a exatidão foi determinada através do cálculo das concentrações médias
dos QCs (1,2 e 3) em triplicata. Os valores de área relativa foram convertidos em valores de
concentração de analito, através das respectivas equações de regressão linear obtidas das
curvas analíticas.
Considerou-se a exatidão como a porcentagem do erro sistemático, expresso pela
tendenciosidade (diferença entre o valor real e o valor obtido) (CHASIN et al., 1998).
7.2.1.5.6. Recuperação
A eficiência dos procedimentos de extração foi avaliada através da recuperação. Para o
estudo da recuperação do método, dois grupos de amostra de maconha contendo diferentes
concentrações foram analisados. No primeiro grupo, consistindo de três concentrações da
solução de trabalho de PQ (QC1, QC2 e QC3) e padrão interno adicionados às amostras de
maconha referência negativa e submetidas à extração conforme o item 7.2.1.1.1. em cinco
replicatas para cada concentração. No segundo grupo, também constituído de cinco replicatas
para cada concentração (QC1, QC2 e QC3) de paraquat, foram adicionados somente após a
extração; somente o padrão interno foi adicionado antes da extração em todos os controles. A
recuperação absoluta foi avaliada pela área relativa média obtida no primeiro grupo (resposta
do analito adicionado à matriz) em relação à área relativa média obtida no segundo (resposta
do analito do padrão puro), expressos em porcentagem.

7.2.1.5.7. Estudo da estabilidade
Estabilidade dos analitos na matriz estudada
A estabilidade dos analitos foi determinada através do enriquecimento de amostras
referência negativa obtendo-se concentração final igual a 100 µg mL-1 de PQ. A estabilidade
na matriz de estudo foi avaliada das seguintes maneiras:
(a) Estabilidade após ciclos de congelamento e descongelamento
Amostras de maconha (n=5) referência negativa foram enriquecidas e analisadas
através dos procedimentos descritos no item 7.2.1.1.1. (estes resultados foram considerados
como as concentrações do tempo zero do experimento), sendo então congeladas e
armazenadas em freezer a –20º C. Estas amostras foram descongeladas e alíquotas foram
analisadas 7, 21 e 91 dias após seu preparo, sendo os resultados comparados com os obtidos
nas análises relativas ao tempo zero.
(b) Estabilidade após armazenamento sob refrigeração
como as concentrações do tempo zero do experimento de estabilidade), sendo então
armazenadas sob refrigeração (aproximadamente 4º C). Estas amostras foram alíquotadas e
analisadas 1, 7 e 14 dias após seu preparo, sendo os resultados comparados com os obtidos
nas análises relativas ao tempo zero.

(c) Estabilidade após armazenamento à temperatura ambiente (estabilidade de
bancada)
Amostras de maconha (n=10) referência negativa foram enriquecidas e separadas em
dois grupos. O primeiro grupo (n=5) foi armazenado em frasco de vidro com tampa e o
segundo grupo (n=5) foi armazenado em frasco de vidro sem tampa. Ambos os grupos foram
deixados sobre a bancada durante 91 dias, em contato direto com o sol por pelo menos 6 horas
por dia, após o que foram analisadas através dos procedimentos descritos no item 7.2.1.1.1.
Estas amostras foram alíquotadas e analisadas 7, 21, 91 dias após seu preparo, sendo os
resultados comparados com os obtidos nas análises relativas ao tempo zero.
(d) Estabilidade após armazenamento em estufa de secagem
como sendo as concentrações do tempo zero do experimento de estabilidade). As amostras
foram então armazenadas em estufa (aproximadamente 100º C). Estas amostras foram
alíquotadas e analisadas 1, 3 e 6 horas após seu preparo, sendo os resultados comparados com
os obtidos nas análises relativas ao tempo zero.
7.2.2. Método para determinação de glifosato e AMPA em amostras de maconha
O modo de separação utilizado por CE foi a CZE (Eletroforese Capilar em Solução
Livre), que permite a separação de compostos ionizáveis, através da aplicação de um campo
elétrico. A detecção nesse caso foi indireta, pois GLI e AMPA, não absorvem luz no UV,
então um dos componentes do eletrólito necessariamente deve ser um cromóforo, que nesse
caso foi o ácido gálico. O ácido glutâmico foi utilizado como padrão interno na concentração
de 50 µg mL-1.
7.2.2.1. Procedimentos de extração
7.2.2.1.1. Técnica proposta para análise de glifosato e AMPA em maconha
Em frasco de vidro foi colocado 1 g da droga apreendida e pulverizada, (obtendo-se
um pó homogêneo, onde não era possível distinguir pedaços de caule, raiz, semente, folha) e
adicionado 1 mL de solução de trabalho de ácido glutâmico (500 µg mL-1) de forma a se obter
concentração final de 50 µg mL-1 e homogeneização em agitador mecânico resultando em um
pó seco. Foram adicionados 10 mL de ácido clorídrico 5 mmol L-1 e após o fechamento do
frasco com tampa de plástico, procedeu-se à agitação intermitente em agitador mecânico por
5 min. Feito isso a amostra permanecia em repouso por 1 hora. Após esse período, era
novamente agitado por 5 min e filtrado através de filtro do tipo Millex® 33 mm com
acondicionamento em frasco do tipo “penicilina”. Do filtrado, doram recolhidos 200 µL em
vial de vidro que foram injetados no equipamento de eletroforese capilar.
7.2.2.1.2. Otimização do Procedimento de extração

Estudo de diferentes soluções extratoras
A fim de se obter um processo de extração simples, com reagentes de baixo custo,
baixa toxicidade, com recuperações satisfatórias e que não sofresse interferência na corrida
eletroforética, foram testadas diferentes soluções extratoras, em concentrações variadas.
Foram analisados: ácido acético glacial nas concentrações de 5, 10 e 20 mmol L-1, ácido
clorídrico nas mesmas concentrações e água deionizada. As análises foram avaliadas em
triplicata, pela adição de 10 mL das diferentes soluções extratoras em amostras referência
negativas enriquecidas com os analitos e padrão interno de forma a se obter concentração
final de 50 µg mL-1. A verificação se deu em relação a haver ou não diferença entre a média
das áreas relativas dos picos. O modo de agitação empregado foi o mesmo descrito no item
7.2.2.1.1.
Estudo da influência do tempo de agitação para extração
Foram avaliadas, diferentes maneiras de agitação, para verificação de interferência na
recuperação do analito. Foram analisados:
a) agitação inicial por 5 min, filtração e injeção;
b) agitação inicial por 10 min, filtração e injeção;
c) agitação inicial por 5 min, repouso de 1 hora, agitação pós repouso por 5 min,
d) agitação inicial por 10 min, repouso de 1 hora, agitação pós repouso por 10 min,
e) agitação inicial por 5 min, repouso de 24 horas, agitação pós repouso por 5 min,
filtração e injeção.
As análises foram avaliadas pela adição de 10 mL de ácido clorídrico 5 mmol L-1 em
amostras referência negativa enriquecidas com o analito e padrão interno de forma a se obter
concentração final de 50 µg mL-1. A verificação se deu em relação a haver ou não diferença
entre a média das áreas relativas dos picos.
7.2.2.2. Condições eletroforéticas
7.2.2.2.1. Estudo do eletrólito de corrida
Testes inciais foram realizados utilizando-se alguns eletrólitos como o formado por 10
mmol L-1 ácido gálico, 6 mmol.L-1 TRIS e 0,1 mmol.L-1 de CTAB (pH = 4,7), também o
formado por 10 mmol L-1 de DNB (ácido 3,5 dinitrobenzóico), 0,1 mmol L-1 de CTAB (pH =
4,0) e o formado por 10 mmol L-1 biftalato de potássio e 0,5 mmol L-1 TTAB (pH = 7,5). Os
eletrólitos foram testados em amostras referência negativa enriquecidas com o analito e
padrão interno na concentração final de 50 µg mL-1.
7.2.2.2.2. Equipamento, condicionamento do capilar e condições eletroforéticas
Os experimentos foram conduzidos em um sistema de eletroforese capilar Beckman
Coulter Instruments, Fullerton, CA, EUA, modelo P/ACE 5510, composto por sistema de
refrigeração do capilar por circulação de líquido refrigerante, sistema de detecção UV/VIS,
controlado através do software Beckman P/ACE System GOLD;

O capilar utilizado foi o de sílica fundida (Polymicro Technologies, Phoenix, AZ,
EUA), revestidos externamente com poliimida, com 75 µm de diâmetro interno, 37 cm de
comprimento total e 30 cm até o detector.
No início da análise o capilar foi condicionado por pressão de aproximadamente 20
psi, com passagem de hidróxido de sódio 1 mol L-1 por 5 minutos, seguidos de 5 minutos de
água deionizada e 10 min de eletrólito de corrida 10 mmol L-1 ácido gálico, 6 mmol.L-1 TRIS
e 0,1 mmol L-1 de CTAB (pH=4,7). No intervalo entre as corridas o capilar foi
recondicionado com lavagens de 1 min de eletrólito e, no término das análises, 5 min de
hidróxido de sódio 1 mol L-1 e 5 min de água deionizada, para a limpeza do capilar.
O modo de injeção utilizado foi o de hidrodinâmica, aplicando pressão de 3 psi, por 5
s. A temperatura do capilar foi de 25º C, a tensão aplicada -20 kV e o comprimento de onda
monitorado foi, λ = 254 nm (detecção indireta).
7.2.2.3. Preparo de amostras de controles-QCs
Amostras de maconha referência negativa, foram adicionadas de GLI e AMPA, de
forma a se obter concentrações de 5, 40 e 80 µg mL-1, respectivamente QC1 (baixo), QC2
(médio) e QC3 (alto). Esse procedimento foi realizado por outro profissional do LTF/IC a
partir de outra solução-padrão (estoque) na mesma concentração de 4000 µg mL-1.

7.2.2.4. Estudo da interferência da matriz
A interferência da matriz de estudo foi realizada através da comparação de curvas de
calibração dos analítos preparadas tanto em água, como em amostras de maconha referência
negativa, de forma a se obter concentrações finais de 1,0; 2,5; 10; 30; 60 e 100 µg mL-1. O
padrão interno foi utilizado na concentração final de 50 µg mL-1.
7.2.2.5.Validação do método proposto
7.2.2.5.1. Especificidade/Seletividade
Este parâmetro foi avaliado através das análises de amostras de maconha referência
negativa de diferentes apreensões, misturadas (pool). Uma alíquota de amostra referência
negativa foi enriquecida com o PQ, diquat, GLI, AMPA, e Trop® (formulação comercial
contendo glifosato e outros excipientes) Esta amostra enriquecida foi então submetida aos
procedimentos analíticos propostos no item 7.2.2.1.1. em triplicata e avaliado pelo tempo de
migração absoluto e relativo.
7.2.2.5.2. Curva analítica (Linearidade)
Para esse estudo, foi adotado o mesmo procedimento realizado no item 7.2.1.5.2.,
sendo as soluções de trabalho utilizadas, a fim de se obter calibradores nas concentrações de
1,0; 2,5; 10; 30; 60 e 100 µg mL-1 (n=5 para cada um dos calibradores).
7.2.2.5.3. Limite de detecção (LOD) e limite de quantificação (LOQ)
Para determinação do LOD e LOQ deste método, foi empregado o método empírico,
conforme já descrito no item 7.2.1.5.3.
7.2.2.5.4. Precisão intra-ensaio e interensaio
Tais parâmetros foram realizados para esse método de acordo com o item 7.2.1.5.4.
7.2.2.5.5. Exatidão
Tais parâmetros foram realizados para esse método de acordo com o item 7.2.1.5.5.
7.2.2.5.6. Recuperação
A eficiência dos procedimentos de extração para esse método foi avaliada através da
recuperação, de acordo com o procedimento já descrito no item 7.2.1.5.6.
7.2.2.5.7. Estudo da estabilidade
Estabilidade dos analitos na matriz estudada
A estabilidade dos analitos foi determinada através do enriquecimento de amostras
referência negativa obtendo-se concentração final igual a 100 µg mL-1 de GLI para cada
amostra, bem como a mesma concentração para o AMPA. A estabilidade na matriz de estudo
foi avaliada através dos seguintes métodos.

(a) Estabilidade após ciclos de congelamento e descongelamento
Amostras de maconha (n=10 (5 contendo apenas GLI e 5 somente o AMPA))
referência negativa foram enriquecidas e analisadas através dos procedimentos descritos no
item 7.2.2.1.1. (estes resultados foram considerados como as concentrações do tempo zero do
experimento), sendo então congeladas e armazenadas em freezer a –20º C. Estas amostras
foram descongeladas e alíquotas foram analisadas 7, 21 e 91 dias após seu preparo, sendo os
(b) Estabilidade após armazenamento sob refrigeração
item 7.2.2.1.1. (estes resultados foram considerados como as concentrações do tempo zero do
experimento de estabilidade), sendo então armazenadas sob refrigeração (aproximadamente 4º
C). Estas amostras foram alíquotadas e analisadas 1, 7 e 14 dias após seu preparo, sendo os
(c) Estabilidade após armazenamento à temperatura ambiente (estabilidade de
bancada)
Amostras de maconha (n= 20) referência negativa foram enriquecidas e separadas em
dois grupos. O primeiro grupo (n=10 (5 contendo apenas GLI e 5 somente o AMPA)) foi
armazenado em frasco de vidro com tampa e o segundo grupo (n=10 (5 contendo apenas GLI
e 5 somente o AMPA)) foi armazenado em frasco de vidro sem tampa. Ambos os grupos
foram deixados sobre a bancada durante 91 dias, em contato direto com o sol por pelo menos
6 horas por dia. As amostras foram então analisadas através dos procedimentos descritos no
item 7.2.2.1.1.(logo ao término do preparo das amostras, estes resultados foram considerados
como sendo as concentrações do tempo zero do experimento de estabilidade e posteriormente
analisadas até o 91º dia). Estas amostras foram alíquotadas e analisadas 7, 21, 91 dias após
seu preparo, sendo os resultados comparados com os obtidos nas análises relativas ao tempo
zero.
(d) Estabilidade após armazenamento em estufa de secagem
item 7.2.2.1.1. (estes resultados foram considerados como sendo as concentrações do tempo
zero do experimento de estabilidade), sendo então armazenadas em estufa (aproximadamente
100º C). Estas amostras foram alíquotadas e analisadas 1, 3 e 6 horas após seu preparo, sendo
os resultados comparados com os obtidos nas análises relativas ao tempo zero.
7.3. Aplicação dos métodos para determinação de Paraquat, Glifosato e AMPA
em amostras encaminhadas para exame pericial
Cem amostras de maconha, apreendidas durante o ano de 2007 em Campinas e região
após serem periciadas pelo LTF, foram disponibilizadas para determinação de PQ, GLI e
AMPA pelos métodos aqui descritos. Dados relativos à apreensão, tais como: quantidade total
apreendida, cidade, forma de acondicionamento e circunstância policial foram coletados a
partir das fichas de requisição.
Os critérios para as amostras que eventualmente fornecessem concentrações fora do
intervalo dinâmico da curva analítica seria o de diluir com solução extratora (até se enquadrar
no intervalo dinâmico do método) e proceder a re-análise (CAUSON, 1997).

8. Resultados
Resultados 118
8. RESULTADOS
8.1. Resultados do método para determinação de Paraquat
8.1.1. Amostras de Cannabis referência negativa e eletroferograma característico
de análise de paraquat
Após o tratamento da mistura de amostras de maconha com ácido acético glacial
5 mmol L-1, água deionizada, deixadas em estufa à 100º C por 1 hora, e adição de padrão
interno obtendo concentração final de 50 µg mL-1, foi submetido ao procedimento 7.2.1.1.1.
que comprovou a ausência de qualquer substância interferente, ilustrado na Figura 12,
inclusive o PQ, que pode ser visto na Figura 13 após o enriquecimento em amostra de
maconha referência negativa na concentração de 10 µg mL-1 e submetido ao procedimento
descrito no item 7.2.1.1.1. Além do tempo de migração, o espectro DAD também foi utilizado
para caracterização do PQ, demonstrado na Figura 14.
Figura 12. Eletroferograma de amostra de maconha referência negativa enriquecida com

padrão interno etilparaquat (1) na concentração de 50 µg mL-1. Eletrólito: tampão fosfato
40 mmol L-1 pH 2,5. Injeção hidrodinâmica (50 mbar, 10 s), T = 21º C, 21 kV, λ = 195 nm.
Resultados 119
Figura 13. Eletroferograma de amostra de maconha referência negativa enriquecida com PQ

(1) na concentração de 10 µg mL-1 e padrão interno etilparaquat (2) na concentração de 50 µg
mL-1. Condições eletroforéticas vide Figura 12.
Figura 14. Espectro DAD do PQ de amostra de maconha referência negativa, enriquecida com
analito.
Resultados 120
8.1.2. Procedimentos de extração
8.1.2.1. Resultados do estudo de diferentes soluções extratoras
Na Figura 15 pode-se observar que a melhor recuperação para o PQ se deu com a
solução de 5 mmol L-1 de ácido acético (Hac) com 99 % de recuperação. Observou-se
também que ao se reduzir a concentração da solução extratora, a eficiência no processo de
extração melhorou, tanto para o HCl, como Hac. A água apresentou baixa eficiência no
processo de extração. A melhor recuperação, baixa toxicidade e custo orientaram a escolha; a
solução extratora composta pelo Hac 5 mmol L-1.
100
Recuperação (%)
75
50
25
0
água HCl 5 mmol HCl 10 mmol HCl 20 mmol Hac 5 mmol Hac 10 mmol Hac 20 mmol
solução extratora
Figura 15. Porcentagem de recuperação de PQ com as diferentes soluções extratoras

estudadas.
8.1.2.2. Resultados do estudo da influência do tempo de agitação para extração
A Figura 16 evidência que a melhor condição de contato da solução extratora em
contato com a amostra, foi de pelo menos 1 hora, possibilitando assim uma melhor eficiência
na extração do PQ (98 %). Não houve diferença na recuperação quando deixados por um
Resultados 121
período de tempo maior (24 h) em descanso, ou quando agitados por tempo maior (10 min) e
deixados em descanso (1 hora). O modo escolhido foi o demonstrado no gráfico pela letra “C”
que se refere à situação de agitação inicial por 5 min, repouso de 1 hora, agitação pós repouso
por 5 min, filtração e injeção.
100
Recuperação (%)
75
50
25
0
A B C D E
solução extratora
Figura 16. Porcentagem de recuperação de PQ com diferentes modos de agitação aplicados
(A= agitação inicial por 5 min, filtração e injeção; B= agitação inicial por 10 min, filtração e
injeção; C= agitação inicial por 5 min, repouso de 1 hora, agitação pós repouso por 5 min,
filtração e injeção; D= agitação inicial por 10 min, repouso de 1 hora, agitação pós repouso
por 10 min, filtração e injeção; E= agitação inicial por 5 min, repouso de 24 horas, agitação
pós repouso por 5 min, filtração e injeção).
8.1.3. Condições eletroforéticas
8.1.3.1. Resultados do estudo do eletrólito de corrida
Com base nos testes realizados e que constam no item 7.2.1.2.1., escolheu-se como
eletrólito de corrida uma solução de 40 mmol L-1 de diidrogenofosfato de sódio, pH =2,5
ajustado com ácido fosfórico, e que permitiu a análise do PQ em menos de 2,5 min.
Resultados 122
8.1.4. Resultados do estudo de interferência de matriz
Após realização das curvas de calibração em água e em matriz de estudo referência
negativa nas concentrações de 0,5 a 100 µg mL-1, observou-se que elas se sobrepõem (Figura
17), não apresentando, portanto, interferência de matriz, sendo assim possível a utilização de
calibradores preparados em água.
Figura 17. Representação das curvas analíticas feitas em água e em maconha para a
determinação de PQ nas concentrações de 0,5 a 100 µg mL-1.
8.1.5. Validação do método proposto
8.1.5.1. Resultado do estudo de especificidade/seletividade
Após aplicação do procedimento analítico proposto, para mistura de amostras
referência negativa (pool), não houve interferente nas análises e o herbicida diquat, aqui
analisado como um possível interferente pode ser diferenciado dos demais compostos, PQ e
etilparaquat pelo tempo de migração absoluto (2.1895 min PQ e 2.2178 min diquat), tempo de
Resultados 123
migação relativo (0.9075 min PQ e 0.9190 min diquat) e espectro DAD, ilustrado nas Figuras
18 e 19.
Figura 18. Eletroferograma de amostra de maconha referência negativa enriquecida com PQ

(1) na concentração de 50 µg mL-1, diquat (2) 50 µg mL-1 e padrão interno etilparaquat (3) na
concentração de 50 µg mL-1. Condições eletroforéticas idem Figura 12.
Figura 19. Espectro DAD do diquat de amostra de maconha referência negativa, enriquecida
com analito.
Resultados 124
8.1.5.2. Curva analítica (Linearidade)
A constatação de que o método é homocedástico indica que a concentração da amostra
apresenta-se em condição uniforme de variância, isto é, a variância é a mesma para todas as
faixas de concentração. Essa é verificada quando a distribuição dos erros entre as médias está
dentro do fator F. Quando esse valor do teste F estiver acima do aceitável, é confirmada a
heterocedasticidade, havendo a necessidade de se utilizar a regressão linear ponderada. No
presente trabalho, foi verificado que a média das variâncias estava abaixo do fator F,
confirmando assim a homocedasticidade, podendo, portanto, ser utilizada a regressão linear
estabelecida pelo método dos mínimos quadrados.
As curvas analíticas demonstrada na Figura 20 foram obtidas através dos dados
apresentados na Tabela 12.
Tabela 12. Áreas relativas obtidas para a elaboração da curva analítica do PQ em maconha e
respectivos coeficientes de variação (% CV).
µg mL-1)
Concentração (µ Área relativa dos analitos
Paraquat
CV (%)
(n=5)
0,5 0,0142 9,8
2,5 0,0573 7,7
10 0,2187 1,1
30 0,6397 3,1
60 1,2531 0,5
100 2,0374 0,9
Resultados 125
2,5 y = 0,0204x + 0,0141

R2 = 0,9997
área relativa 2
1,5
0,5
0
0 20 40 60 80 100 120
concentração de paraquat (ug/ml)
Figura 20. Representação da curva analítica para determinação de PQ em maconha nas

concentrações de 0,5 a 100 µg mL-1.
O coeficiente de determinação (r2) obtido na curva analítica do paraquat foi de 0,9997
e o intervalo dinâmico foi de 0,5 a 100 µg mL-1, conforme representação na Figura 20.
8.1.5.3. Limite de detecção (LOD) e limite de quantificação (LOQ)
Os limites de detecção (LOD) e quantificação (LOQ) para a determinação de paraquat
em amostras de maconha para o método aqui descrito foram respectivamente de 0,08 µg mL-1
e 0,5 µg mL-1.
8.1.5.4. Precisão intra-ensaio e interensaio
Os coeficientes de variação obtidos nas análises dos QCs (1, 2 e 3) estão relacionados
na Tabela 13.
Resultados 126
Tabela 13. Coeficientes de variação das concentrações dos QCs de PQ em amostras de
maconha obtidos nos ensaios de precisão intra e interensaio.
QC Imprecisão intra-ensaio CV (%) Imprecisão interensaio CV (%)
1 4,8 8,2
2 1,9 5,2
3 1,6 2,1
QC 1= 5 µg mL-1; QC 2= 40 µg mL-1; QC 3= 80 µg mL-1
8.1.5.5. Exatidão
A exatidão obtidas nas análises dos QCs (1,2 e 3) estão relacionados na Tabela 14.
8.1.5.6. Recuperação
A recuperação dos QCs (1,2 e 3) estão relacionados na Tabela 14.
Tabela 14. Exatidão e recuperação do método proposto para análise dos QCs de PQ em
amostras de maconha.
QC Inexatidão (Tendenciosidade %) Recuperação (%)
1 9,8 92,1
2 2,2 96,5
3 1,5 97,7

Resultados 127
8.1.5.7. Estabilidade
As Figuras 21, 22, 23 e 24 ilustram os resultados obtidos durante o estudo de
estabilidade do analito em amostras de maconha sob diferentes condições de armazenamento.
103
102
101
100
99
98
97
0 7 21 91
dias
Figura 21. Representação gráfica dos resultados obtidos nos estudos de estabilidade após
ciclos de congelamento/descongelamento de amostras de maconha enriquecidas com PQ.
103
102
101
100
99
98
97
0 1 7 14
dias
armazenamento sob refrigeração (4ºC) de amostras de maconha enriquecidas com PQ.

Resultados 128
concentração de paraquat (ug/ml) 100
90
80
70
60
50
40
30
20
0 7 21 91
dias
Series1 Series2
armazenamento em temperatura ambiente de amostras de maconha enriquecidas com PQ
(Séries 1= frascos vedados com tampa, Séries 2= frascos sem tampa).
103
102
101
100
99
98
97
0 1 3 6
horas
Figura 24. Representação gráfica dos resultados obtidos no estudo de estabilidade após
armazenamento em estufa de secagem à 100ºC de amostras de maconha enriquecida com PQ

Resultados 129
Durante esse período de estudo de estabilidade em diversas condições de
armazenamento, não foram observadas variações da média das concentrações maiores que
10 % nos estudos em freezer, geladeira e estufa. Já no estudo de bancada, separado em dois
grupos, o primeiro não apresentou variação na média das concentrações maior do que 10 %,
sendo que o segundo apresentou variação maior do que 60 %, visto que a principal diferença
observada entre os grupos, durante o estudo, foi que o grupo dois, apresentou contaminação
fúngica (constatação visual) e o grupo 1 por estar devidamente vedado não apresentou essa
contaminação (segundo a constatação visual).
8.2. Resultados do método para determinação de glifosato e AMPA
8.2.1. Amostras de Cannabis referência negativa e eletroferograma característico
de análise de glifosato e AMPA
Após o tratamento da mistura de amostras de maconha com ácido acético glacial
5 mmol L-1, água deionizada, deixadas em estufa à 100º C por 1 hora, e adição de padrão
interno (50 µg mL-1) foi submetido ao procedimento 7.2.2.1.1. que comprovou a ausência de
qualquer substância interferente, conforme mostra a Figura 25, inclusive o GLI e AMPA, que
podem ser vistos na Figura 26 após serem enriquecidos em amostras de maconha referência
negativa na concentração de 50 µg mL-1 e submetido ao procedimento 7.2.2.1.1. O tempo de
migração foi utilizado para caracterizar os analitos.

Resultados 130
Figura 25. Eletroferograma de amostra de maconha referência negativa, enriquecida com

padrão interno ácido glutâmico (1) 50 µg mL-1 extraída com HCl 5 mmol L-1, detecção
indireta λ = 254 nm. Eletrólito: ácido gálico 10 mmol L-1, TRIS 6 mmol L-1 e CTAB 0,1
mmol.L-1 pH 4.6. Injeção hidrodinâmica (3 psi / 5 s), T = 25o C, -20 kV.
Figura 26. Eletroferograma de amostra de maconha referência negativa enriquecida com GLI
(1) na concentração de 50 µg mL-1, padrão interno ácido glutâmico (2) 50 µg mL-1 e AMPA
(3) 50 µg m L-1.Condições eletroforéticas idem Figura 25.
Resultados 131
8.2.2. Procedimentos de extração
8.2.2.1. Resultados do estudo de diferentes soluções extratoras
Os estudos realizados mostraram que a melhor solução extratora nesse estudo foi o
HCl 5 mmol L-1 com recuperação de 90 e 92 % respectivamente para o GLI e AMPA. As
demais soluções apresentaram muita interferência no eletroferograma em detecção indireta e
baixa recuperação tanto para água (30 % para GLI e 27 % para o AMPA) e Hac (42 % para
GLI e 48 % para o AMPA). Observou-se também que ao se reduzir a concentração da solução
extratora, a eficiência no processo de extração melhorou. As melhores recuperações e
resolução eletroforética indicaram a solução extratora HCl 5 mmol L-1 como a de escolha.
8.2.2.2. Resultados do estudo da influência do tempo de agitação para extração
O resultado obtido nesse estudo foi semelhante ao realizado para a extração de PQ,
descrito no item 8.1.2.2. sendo que a condição de agitação com melhor eficiência para
extração de GLI e AMPA (90 e 92 % respectivamente) foi a representada pela letra “C” que
se refere a situação de agitação inicial por 5 min, repouso de 1 hora, agitação pós repouso por
5 min, filtração e injeção.
8.2.3. Condições eletroforéticas

Resultados 132
8.2.3.1. Resultados do estudo do eletrólito de corrida
O eletrólito de escolha, frente às melhores condições de otimização eletroforética foi o
composto por ácido gálico 10 mmol L-1, TRIS 6 mmol L-1 e CTAB 0,1 mmol L-1 pH 4.6.
8.2.4. Resultados do estudo de interferência de matriz
Após realização das curvas de calibração em água e em matriz de estudo referência
negativa nas concentrações de 1,0 a 100 µg mL-1, observou-se que elas não se sobrepõem
(Figuras 27 e 28), apresentando, portanto, interferência de matriz, sendo assim não foram
utilizados de calibradores preparados em água.
curva água e maconha sobrepostas maconha
2,5 y = 0,0181x + 0,0487

R2 = 0,9996
2
área relativa
maconha
1,5
água
1 Linear (água)
Linear (maconha)
0,5
água
0
0 20 40 60 80 100 120 y = 0,0209x + 0,0959
R2 = 0,9983
concentração de glifosato (ug/mL)
Figura 27. Representação das curvas analíticas feitas em água e maconha para a determinação
de GLI nas concentrações de 1,0 a 100 µg mL-1.

Resultados 133
curva água e maconha sobrepostas
maconha
3,5
3 y = 0,0277x + 0,0728
2
R = 0,9995
2,5
área relativa
2 maconha
água
1,5
Linear (água)
1 Linear (maconha)
0,5 água
0
y = 0,0291x + 0,1227
0 20 40 60 80 100 120 2
R = 0,9992
concentração de AMPA (ug/mL)
Figura 28. Representação das curvas analíticas feitas em água e maconha para a determinação
de AMPA nas concentrações de 1,0 a 100 µg mL-1.
8.2.5. Validação do método proposto
8.2.5.1. Resultado do estudo de especificidade/seletividade
Após aplicação do procedimento analítico proposto, para mistura de amostras
referência negativa (pool), não houve interferência nas análises contendo os herbicidas PQ,
Diquat, e a formulação comercial do GLI (Trop®). O GLI e o AMPA foram diferenciados dos
demais picos interferentes pelo tempo de migração absoluto (3.875 min GLI e 7.723 min
AMPA) e tempo de migração relativo (0.7779 min GLI e 1.550 min AMPA).
Resultados 134
8.2.5.2. Curva analítica (Linearidade)
As curvas analíticas (Figuras 29 e 30) foram obtidas através dos dados apresentados na
Tabela 15. A equação de regressão linear foi estabelecida pelo método dos mínimos
quadrados, uma vez que no presente trabalho, foi verificado que a média das variâncias estava
abaixo do fator F, confirmando assim a homocedasticidade. A curva analítica, assim obtida
foi a utilizada na quantificação de GLI e AMPA nas amostras de maconha selecionadas para
análise.
Tabela 15. Áreas relativas obtidas para a elaboração da curva analítica do GLI e AMPA em
maconha e respectivos coeficientes de variação (% CV).
µg mL-1)
Concentração (µ Área relativa dos analitos
Glifosato AMPA
CV (%) CV (%)
(n=5) (n=5)
1,0 0,0597 4,6 0,0813 3,1
2,5 0,1141 2,1 0,1508 2,7
10 0,2274 0,6 0,3888 1,1
30 0,5724 0,2 0,8704 2,1
60 1,1449 0,9 1,7326 1,7
100 1,8613 1,1 2,8509 2,0

Resultados 135
2
1,8
1,6
1,4
área relativa
1,2
1
y = 0,0181x + 0,0487
0,8
0,6 R2 = 0,9996
0,4
0,2
0
0 20 40 60 80 100 120
concentração de glifosato (ug/mL)
Figura 29. Representação da curva analítica para determinação de GLI em maconha nas
2,5
2
área relativa
y = 0,0277x + 0,0728
1,5 R2 = 0,9995
0,5
0
0 20 40 60 80 100 120
concentração de AMPA (ug/mL)
Figura 30. Representação da curva analítica para determinação de AMPA em maconha nas
Os coeficientes de determinação (r2) obtido nas curvas analíticas do glifosato e AMPA
foram respectivamente de 0,9996 e 0,9995 e o intervalo dinâmico foi de 1,0 a 100 µg mL-1, e
estão representados nas Figuras 29 e 30.

Resultados 136
8.2.5.3. Limite de detecção (LOD) e limite de quantificação (LOQ)
Os limites de detecção para o GLI e AMPA foram ambos de 0,8 µg mL-1 e os limites
de quantificação para os dois analitos foi de 1,0 µg mL-1.
8.2.5.4. Precisão intra-ensaio e interensaio
Os coeficientes de variação obtidos nas análises dos QCs (1, 2 e 3) estão relacionados
na Tabela 16.
Tabela 16. Coeficientes de variação das concentrações dos QCs de GLI e AMPA em amostras
de maconha obtidos nos ensaios de precisão intra e interensaio.
Controles
QC1 QC2 QC3
Imprecisão intra-ensaio CV (%)
Glifosato 2,7 0,9 1,1
AMPA 5,5 1,2 1,9
Imprecisão interensaio CV (%)
AMPA 7,9 4,3 6,8

Resultados 137
8.2.5.5. Exatidão
A exatidão obtida nas análises dos QCs (1,2 e 3) está expressa na Tabela 17.
8.2.5.6. Recuperação
A recuperação dos QCs (1, 2 e 3) está expressa na Tabela 17.
Tabela 17. Exatidão e recuperação do método proposto para análise dos QCs de GLI e AMPA
em amostras de maconha.
Controles
QC1 QC2 QC3
Inexatidão (tendenciosidade %)
AMPA 9,2 7,6 5,1
Recuperação (%)
Glifosato 89,4 92,1 93,7
AMPA 91,3 93,5 92,9

Resultados 138
8.2.5.7. Estabilidade
As Figuras 31, 32, 33 e 34 ilustram os resultados obtidos durante o estudo de
estabilidade do analito em amostras de maconha sob diferentes condições de armazenamento.
102
concentração (ug/mL)
100
98
96
94
92
90
0 7 21 91
dias
glifosato AMPA
ciclos de congelamento/descongelamento em amostras enriquecidas com GLI e AMPA.
102
concentração (ug/mL)
100
98
96
94
92
90
0 1 7 14
dias
glifosato AMPA
armazenamento sob refrigeração (4ºC) em amostras enriquecidas com GLI e AMPA.

Resultados 139
101
co n cen tração (u g /m L )
81
61
41
21
1
0 7 21 91
dias
glifosato com tampa AMPA com tampa
glifosato sem tampa AMPA sem tampa
armazenamento em temperatura ambiente de amostras enriquecidas com GLI e AMPA.
100
co n cen tração (u g /m L )
95
90
85
80
0 1 3 6
horas
glifosato AMPA
armazenamento em estufa de secagem à 100º C em amostras enriquecidas com GLI e AMPA.

Resultados 140
Durante esse período de estudo de estabilidade em diversas condições de
armazenamento, não foram observadas variações da média das concentrações maiores que
5 % nos estudos em freezer e geladeira. Já no estudo de bancada onde foi separado em dois
grupos (com tampa e outro sem tampa), o primeiro apresentou grande variação na média das
concentrações, sendo maior para o GLI (30 %) e menor para o AMPA (12 %) nos primeiros 7
dias de estudo. No decorrer do estudo a variação apresentada pelos dois analitos permaneceu
elevada até o 91° dia, sendo não mais possível detectar o GLI nesse tempo. Já o segundo
grupo apresentou variações bem elevadas em comparação ao primeiro grupo, sendo também
maior para o GLI (52 %) e menor para o AMPA (30 %) nos primeiros 7 dias de estudo. Em
relação ao período restante do estudo, a variação permaneceu elevada para os dois analitos,
sendo que no 91° dia não era mais possível de se detectar o GLI. A principal diferença
observada entre os grupos durante o estudo foi que o segundo grupo, apresentou
contaminação fúngica (constatação visual) e o primeiro grupo por estar devidamente vedado
não apresentou essa contaminação (segundo a constatação visual) até o último dia de estudo.
A estabilidade observada para o GLI e AMPA durante o tempo de aquecimento em
estufa, mostrou-se estável durante a primeira hora de análise, com variações de 2 % para o
GLI e 1 % para o AMPA. No decorrer do estudo durante a terceira hora de análise, houve um
aumento dessa variação apenas para o GLI (4,5 %) e na sexta hora, ocorreu variação para
ambos os analítos, sendo mais intenso para o GLI (12,4 %) e AMPA (9,7 %).
8.3. Aplicação dos métodos para determinação de paraquat, glifosato e AMPA em
amostras encaminhadas para exame pericial

Resultados 141
8.3.1. Aplicação do método de determinação de paraquat em amostras
encaminhadas para exame pericial
Foram analisadas cem amostras de maconha apreendidas pela policia de Campinas e
região no ano de 2007. Todas as amostras já haviam sido periciadas e encontravam-se
acondicionadas em saco plástico fechado, anexadas ao número do laudo, localidade da
apreensão e armazenadas no centro de custódia de provas do LTF/IC. Das cem amostras
analisadas, 12 % apresentaram contaminação pelo herbicida paraquat em concentrações
diversas, que variou desde 0,010 a 25,1 mg de paraquat/g de maconha, com média de 2,8170
mg/g de maconha. As Figuras 35, 36 e 37 mostram os eletroferogramas e espectro DAD
respectivamente de amostras reais submetida à metodologia que mostrou contaminação pelo
paraquat.
Figura 35. Eletroferograma de amostra autêntica submetida ao método proposto, mostrando
PQ (1) na concentração de 2,7 µg mL-1 e padrão interno etilparaquat (2). Condições
eletroforéticas idem Figura 12.

Resultados 142
PQ (1) na concentração de 112,7 µg mL-1 e padrão interno etilparaquat (2). Condições
eletroforeticas idem Figura 12.
Figura 37. Espectro DAD do paraquat de amostra autêntica submetida ao método proposto.
Os resultados das doze amostras contaminadas com o herbicida paraquat e as
características de apreensão de cada amostra estão apresentados na Tabela 18.

Resultados 143
Tabela 18. Concentrações do PQ determinado em amostras autênticas de maconha e

informações referentes às amostras apreendidas.
Dados da apreensão Concentração final

Quantidade Paraquat
Paraquat Quantidade
total Forma de Circunstância na droga
Amostra Cidade no extrato analisada
apreendida apreensão policial (mg/g de
µg mL-1 )
(µ (g)
* droga)
Bloco
1 1 kg Sumaré Uso** 39,3 1,025 0,383
prensado
Blocos
2 2 ton Campinas Tráfico 112,7 1,067 1,056
prensados
3 12 g Hortolândia Trouxinhas Uso 2,7 1,101 0,024
4 5g Campinas Cigarros*** Uso 15,2 1,035 0,146

Blocos
5 47 kg Americana Tráfico 2526,4 1,005 25,138
prensados
Tráfico em
6 12 g Hortolândia Saco plástico 351,4 1,012 3,472
presídio
7 25 g Valinhos Trouxinhas Tráfico 67,5 1,005 0,671
Blocos
8 3 ton Campinas Tráfico 240,9 1,065 2,261
prensados
9 70 g Campinas Trouxinhas Tráfico 16,1 1,045 0,154
Mogi
10 4g Trouxinhas Uso 4,6 1,032 0,044
Mirim
Blocos
11 12 kg Sumaré Tráfico 1,1 1,078 0,010
prensados
12 7g Vinhedo Cigarros Uso 46,1 1,032 0,446
* Valor aproximado
** Apreensão feita enquanto o indivíduo utilizava a droga ou constatada para uso do próprio
indiciado.
*** Também apresentava mistura de cocaína, constatada em perícia.
Ton = tonelada
Resultados 144
8.3.2. Aplicação do método de determinação de GLI e AMPA em amostras
encaminhadas para exame pericial.
Foram analisadas as cem amostras de maconha também submetidas ao método
descrito no item 8.3.1. apreendidas pela policia de Campinas e região no ano de 2007. Todas
as amostras já haviam sido periciadas e encontravam-se acondicionadas em saco plástico
fechado, anexadas ao número do laudo, localidade da apreensão e armazenadas no centro de
custódia de provas do LTF/IC. Em nenhuma das amostras analisadas foi possível detectar a
presença de GLI ou seu principal metabólito AMPA (LOD= 0,8 µg mL-1). O Laboratório de
Toxicologia Forense do Instituto de Criminalística de Campinas disponibilizou ainda trinta
amostras de maconha apreendidas recentemente no ano de 2008, que foram submetidas ao
método para determinação de GLI e AMPA. Das trinta amostras analisadas, três apresentaram
contaminação pelo herbicida GLI em concentrações de 0,146, 0,745 e 0,545 mg de glifosato/g
de maconha. Em relação às três amostras contaminadas por glifosato, apenas uma, apresentou
a contaminação concomitante de seu metabólito AMPA na concentração de 0,358 mg de
AMPA/g de maconha. As figuras 38 e 39 mostram os eletroferogramas de amostras reais
submetida à metodologia que mostrou contaminação pelo GLI e AMPA.
Os resultados das três amostras contaminadas por GLI e AMPA e as características de
apreensão de cada amostra estão apresentados nas Tabelas 19 e 20.

Resultados 145
GLI (1) na concentração de 55,8 µg mL-1 e padrão interno (2) e AMPA na concentração de
38,3 µg mL-1. Condições eletroforéticas idem Figura 25.
GLI (1) na concentração de 15,8 µg mL-1 e padrão interno, ácido glutâmico (2). Condições
eletroforéticas idem Figura 25.

Resultados 146
Tabela 19. Concentrações de GLI determinado em amostras autênticas de maconha e


Quantidade Glifosato
Glifosato Quantidade
total Forma de Circunstância na droga
Amostra Cidade no extrato analisada
µg mL-1)
(µ (g)
* droga)
Bloco
13 1 kg Campinas Tráfico 15,8 1,078 0,146
prensado
Blocos
14 5 kg Campinas Tráfico 75,4 1,011 0,745
prensados
15 10 kg Campinas Vaso Uso 55,8 1,022 0,545
* Valor aproximado
Tabela 20. Concentrações de AMPA determinado em amostras autênticas de maconha e


Quantidade AMPA na
AMPA no Quantidade
total Forma de Circunstância droga
Amostra Cidade extrato analisada
µg mL-1)
(µ (g)
* droga)
15 10 kg Campinas Vaso Uso 38,3 1,067 0,358
* Valor aproximado
9. Discussão
Discussão 148
9. DISCUSSÃO
Como já descrito anteriormente, a maconha ainda é a droga ilícita mais consumida
(165 milhões de usuários) e apreendida pela polícia em todo o mundo (UNODC, 2008). O
Brasil ocupa o quarto lugar em número de apreensões (3,0 % do total apreendido) e quanto ao
uso, cerca de 8,8 % da população já fez uso da droga. Outro dado importante, é que tanto o
consumo, quanto o número de apreensões de maconha em países da América do Sul, tem
aumentado nos últimos anos (UNIFESP, 2005; UNODC, 2008).
A relevância deste trabalho reside no fato de que, conforme mostrado no relatório
elaborado pela Organização das Nações Unidas (ONU), ainda não existe no Brasil qualquer
informação sobre contaminantes na maconha (UNODC, 2005) e como mostrado em pesquisa
realizada por Markez et al., 2002, existe uma preocupação de diversas pessoas, incluindo
usuários de maconha e autoridades médicas e judiciais em saber dos possíveis contaminantes
presentes na maconha. Ao contrário de outras drogas como a cocaína e o êxtase, nas quais
rotineiramente são identificadas substâncias que as contaminam (diluentes e adulterantes),
com vistas a, além de estabelecer relações de risco ao usuário, fazer a caracterização da droga,
podendo assim, por exemplo, estabelecer a relação com as diversas rotas de tráfico existentes.
A diminuição no tempo de produção da droga forjada pelo narcotráfico; fatores
intrínsecos e extrínsecos que diferentes culturas de maconha podem apresentar; o aumento no
número de apreensões de maconha e de praguicidas contrabandeados sem registros na
ANVISA, pela polícia no estado de São Paulo e Federal, ainda não apresentam dados de
corelação, porém são de suma importância para verificação da possível relação entre as
mesmas como por exemplo, a constatação das apreensões de praguicidas contrabandeados do
Paraguai e a possível aplicação em culturas de maconha que aparece com várias hipóteses.
Discussão 149
Também pela aplicação a outras culturas de alimentos que possam estar sendo plantadas nas
mesmas regiões do cultivo da droga e consequentemente a relação com a determinação dos
resíduos desses praguicidas na droga apreendida e nos alimentos advindos de tais culturas.
Segundo levantamentos realizados pelo CIT (Santa Catarina) e CCI (Campinas), sobre
intoxicações por paraquat e glifosato, existem casos de intoxicações por esses herbicidas, que
ainda são uma incógnita para o corpo clínico desses Centros de Intoxicações, havendo assim
inúmeras hipóteses para tais intoxicações. O que se percebe é que dentre as causas
desconhecidas, os intoxicados eram do sexo masculino, numa faixa etárea de 20 a 39 anos e
as manifestações observadas eram de uso crônico do herbicida (BIGOLIN et al., 2003;
VIEIRA et al., 2003); tal fato pode ser comparado ao perfil do usuário de maconha, traçado
pela UNIFESP (2005), que também, na sua grande maioria é do sexo masculino e de mesma
faixa etárea àquela que apresentou as intoxicações pelos herbicidas acima citadas. Tal fato,
embora aqui descrito e comparado constitui apenas uma hipótese e a relação entre uso de
maconha possivelmente contaminada por herbicidas e quadros de intoxicação, nunca foi
relacionada, quer por falta de estudos que comprovem tal contaminação, ou, por um outro
lado, sob diversas condições aplicadas e estudadas essa relação pode não provocar quadro de
intoxicação.
Conseqüentemente todos esses fatores podem levar a uma anamnese com menos
parâmetros avaliados onde também, muitas vezes o paciente avaliado clinicamente sente
medo ou desconforto em informar que faz ou fez uso de drogas. O próprio corpo clínico
muitas vezes trata os casos de intoxicação por maconha e herbicidas (paraquat, glifosato)
isoladamente e não uma relação entre as duas situações, devido à ausência de dados
confirmatórios que pudessem levar à suspeição.

Discussão 150
A decisão de realizar este estudo perpassou essa reflexão e ainda constituiu forma de
ensejar que tais estudos sejam conduzidos em outras partes do Brasil e da América Latina
para que possamos, à semelhança de outros países/continentes poder ter um diagnóstico de tal
situação.
Para não comprometer a exeqüibilidade da análise, os critérios utilizados na escolha da
metodologia a ser testada, após revisão da literatura científica, procuraram na medida do
possível se adequar às condições técnicas, a serem disponibilizadas nos laboratórios de
toxicologia forense do país, o qual são responsáveis por essas análises de uma forma geral,
devendo assim respeitar as normas vigentes desses órgãos responsáveis por esse aspecto,
como por exemplo, o TIAFT (Associação Internacional de Toxicologistas Forense) e não
órgãos ambientais como por exemplo o EPA.
A eletroforese capilar vem despontando nas análises toxicológicas com finalidade
forense e representa técnica de eleição para substâncias que, à semelhança do PQ, GLI e
AMPA, que dispõe de várias propriedades que os tornam apropriados para essa técnica, dentre
elas a presença de cargas em sua estrutura molecular ou mesmo a possibilidade de ionização
frente às alterações de pH e que assim possibilitam desenvolver um processo simples de
implementação e otimização.
No presente trabalho, um método utilizando eletroforese capilar em solução livre com
detecção direta por DAD, foi desenvolvido visando à determinação do herbicida PQ em
amostras de Cannabis sativa L encaminhadas pela policia para exame pericial. Como o PQ
apresenta dois grupamentos amina carregados positivamente em uma ampla faixa de pH, o
mesmo se torna totalmente apropriado para ser analisado pela técnica acima citada.
Discussão 151
Para escolha do eletrólito de corrida, foram utilizados dois artifícios: primeiramente a
busca em literatura dos principais eletrólitos utilizados em análises de PQ por eletroforese
capilar e após esse procedimento foi utilizado uma ferramenta muito importante em
eletroforese, o software PeakMaster®, disponível gratuitamente na internet, onde o mesmo
apresenta propriedades de simular corridas eletroforéticas (ZANOLLI-FILHO, 2007). Foram
então utilizados alguns eletrólitos, como o dihidrogenofosfato de sódio e citrato, sendo o
dihidrogenofosfato de sódio foi o de escolha frente à ótima resposta observada no
equipamento e ainda a não deformação no pico, fato presente no outro tampão analisado.
Após a escolha do tampão, foi feito um estudo da concentração do eletrólito. Durante as
otimizações verificou-se que o eletrólito com concentrações superiores a 50 mmol L-1
apresentava corrente superior a 100 µA, não permitindo uma dissipação efetiva do calor
gerado pela passagem de corrente elétrica (Efeito Joule), o que prejudicaria a análise. Por
outro lado concentrações inferiores a 40 mmol L-1, ocasionavam um alargamento no pico
ocasionado pela diminuição da força iônica do eletrólito de separação (TAVARES, 1997;
ZANOLLI-FILHO, 2007).
Após otimizar o eletrólito de corrida e as condições eletroforéticas, iniciaram estudos
para extração do PQ em amostras de maconha, para posterior validação do método. Os
parâmetros avaliados foram: tipo de solução extratora, concentração de solução e tempo,
modo de agitação empregado.
Devido à elevada polaridade do PQ e pelo fato de que a eletroforese tem
características que possibilitam a simplificação de métodos, foram utilizadas soluções de alta
polaridade como HCl, Hac nas concentrações de 5, 10 e 20 mmol L-1 e água deionizada
(purificada através de sistema Milli-Q) Como pode ser visto na Figura 15, a solução que
Discussão 152
apresentou melhor eficiência no processo de extração foi Hac, seguido do HCl. Isso pode ser
explicado, devido ao favorecimento do PQ em meio ácido e a instabilidade em valores de pH
mais elevados. Em pH > 7, as soluções extratoras não apresentaram resultados satisfatórios, o
que deve ter ocorrido devido à instabilidade do PQ em soluções básicas. Percebeu-se também
que quanto mais diluídas as soluções de ácido, melhor era o rendimento na extração,
mostrando assim a alta relação de solubilidade com substâncias de maior polaridade conforme
o demonstrado por Dinis-Oliveira et al. (2008).
Durante a avaliação da influência do tempo e modo de agitação para extração, como
pode ser visto na Figura 16, quanto maior era o tempo que a amostra era submetida à agitação
intermitente, maior era rendimento na extração. Estudo semelhante desenvolvido por Araújo
(2002) em diferentes tipos de solo demonstram que o tempo de agitação é um fator importante
para uma extração mais eficiente, pois tempos maiores de exposição da amostra com os
extratores promovem uma recuperação mais eficiente. No caso estudado, percebeu-se que não
existe diferença na recuperação entre tempo de repouso variando uma hora ou vinte e quatro
horas, pois todas apresentavam quase 100 % de rendimento. Por este motivo optou-se pelo
menor tempo empregado.
Todo o processo de manipulação e extração do PQ na maconha foi realizado no
Laboratório de Toxicologia Forense de Campinas (LTF), supervisionado por peritos criminais
e as amostras, após extraídas foram analisadas por eletroforese capilar no Laboratório de
Cromatografia e Eletroforese Capilar do Instituto de Química da USP. Frente à necessidade
de se obter calibradores em concentrações variadas e a disponibilidade de análise ser limitada
por questões de tempo, foram feitos estudos de interferência de matriz, comparando
calibradores feitos em água e calibradores feitos a partir da matriz de estudo (a maconha).

Discussão 153
Como pode ser visto na Figura 17, não houve interferência de matriz quando comparadas,
podendo assim ser utilizados no cotidiano, calibradores feitos em água, facilitando assim todo
o processo analítico e não interferindo nas análises em SP por problemas de falta de
calibradores.
Como não existem amostras certificadas de PQ, o preparo de controles, para avaliação
de alguns parâmetros de validação, foi realizado por outro profissional idôneo do LTF-
Campinas, a partir de diferentes soluções padrão. Desta maneira introduz-se mais “erros” aos
adicionados o que minimiza a diferença entre amostra assim preparadas e as possíveis
“certificadas”.
Após a definição das condições eletroforéticas e questões relacionadas aos controles e
calibradores, a validação do método analítico pôde ser iniciada. Os parâmetros analisados
foram: seletividade/especificidade, linearidade, limite de detecção (LOD) e quantificação
(LOQ), precisão interensaio e intra-ensaio, exatidão, recuperação e estabilidade.
A seletividade de um método instrumental de separação é a capacidade de avaliar, de
forma inequívoca, as substâncias em exame na presença de componentes que podem interferir
com a sua determinação em uma amostra complexa. A seletividade avalia o grau de
interferência de espécies como outro ingrediente ativo, excipientes, impurezas e produtos de
degradação, bem como outros compostos de propriedades similares que possam estar,
porventura, presentes. A seletividade garante que o pico de resposta seja exclusivamente do
composto de interesse. Se a seletividade não for assegurada, a linearidade, a exatidão e a
precisão estarão seriamente comprometidas (RIBANI, et al., 2004; CHASIN et al., 1998). De
acordo com os parâmetros eletroforéticos e de extração otimizados, o número de interferentes

Discussão 154
possíveis, são poucos, sendo o interferente mais provável, seria o herbicida bipiridilo diquat,
que também é vendido em associação com o PQ.
A metodologia proposta neste trabalho apresentou seletividade adequada para
aplicação em toxicologia forense, uma vez que o possível interferente foi diferenciado dos
demais analitos (PQ e padrão interno) pelo tempo de migração e respectivo espectro DAD,
conforme mostra as Figuras 18 e 19. Nenhuma amostra analisada apresentou contaminação
pelo herbicida Diquat.
Para o estudo de linearidade, uma ampla faixa de concentração foi avaliada (0,5 a 100
µg mL-1). Esta faixa, que se mostrou dentro do intervalo dinâmico do método, foi estabelecida
com base nas concentrações encontradas em amostras de maconha contaminadas na década de
70 (NEEDHAM et al., 1979; TURNER et al., 1978). Essas concentrações, entretanto, foram
encontradas quando o propósito de aplicação era de erradicar as culturas. Como atualmente
não existem mais programas de erradicação utilizando o PQ, o propósito de utilização do
herbicida é uma incógnita, podendo ser para melhorar as condições de cultivo da Cannabis,
ou para atuar no processo de secagem da droga, ou para retirar possíveis ervas daninhas que
por ventura prejudiquem o cultivo da Cannabis ou simplesmente contaminação do solo que
anteriormente era utilizado com outras culturas. O método proposto apresentou excelente
linearidade dentro do intervalo dinâmico da curva analítica, com valores coeficiente de
determinação sempre superiores a 0,99. Também foi avaliada a condição de uniformidade no
valor da média das variâncias. Verificou-se que a variância é uniforme, apresentando o
fenômeno de homocedasticidade, podendo assim ser empregada a regressão linear ordinária,
sem que ocorram grandes erros nos cálculos das concentrações.

Discussão 155
Os valores de limite de detecção e quantificação obtidos neste estudo podem ser
considerados satisfatórios quando se leva em consideração a técnica de extração, a faixa de
concentração que se preze e o sistema de detecção empregados, sendo que os valores obtidos
foram ainda menores dos relatados por outros autores (TURNER et al., 1978; LIDDLE et al.,
1980).
A precisão interensaio e intra-ensaio, calculada como coeficiente de variação,
apresentou resultados adequados. Sempre inferiores a 10 %, para os dois estudos. A utilização
de padrão interno adequado, etilparaquat, que é estruturalmente muito semelhante ao PQ, o
que possibilita a sua participação em todas as etapas analíticas do método desenvolvido
contribuiu, além de outros fatores para obtenção desses valores.
Sempre que disponível, a exatidão de um método analítico deve ser avaliada utilizando
amostras cuja concentração dos analitos no material é garantida por instituições
normatizadoras ou responsáveis por programas de garantia da qualidade laboratorial
(amostras certificadas). Quando este tipo de material não é disponível, é aceitável que a
exatidão do método bioanalítico seja avaliada através do enriquecimento de amostras
referência negativa, comparando os valores encontrados com a concentração nominal
adicionada (CAUSON, 1997; GOLDBERGER; HUESTIS; WILKINS, 1997; CHASIN et al.,
1998). Causon (1997) refere que a exatidão do método analítico deve estar entre ±85 %
(inexatidão de ±15 %) do valor dito como real para todas as concentrações avaliadas.
Seguindo este preceito, a metodologia desenvolvida neste trabalho apresenta exatidão
adequada, uma vez que nenhuma concentração avaliada apresentou inexatidão superior à ± 15
%.
Discussão 156
A recuperação é definida como a proporção da quantidade da substância de interesse,
presente ou adicionada na porção analítica do material teste, que é extraída e passível de ser
quantificada. Os intervalos aceitáveis de recuperação para análise de resíduos geralmente
estão entre 70 e 120 %, com precisão de até ± 20 %. Porém, dependendo da complexidade
analítica e da amostra, este valor pode ser de 50 a 120 %, com precisão de até ± 15 %
(RIBANI et al., 2004). Os valores de recuperação obtidos nesse trabalho mostraram estar
dentro dos valores aceitáveis, sempre maiores do que 90 % , como pode ser visto na Tabela
17.
Para gerar resultados confiáveis e reprodutíveis, as amostras, os padrões e reagentes
usados devem ser estáveis por um período razoável (por ex. um dia, uma semana, um mês,
dependendo da necessidade). Em certos tipos de amostras, faz-se necessário avaliar a
estabilidade da substância para determinar o tempo de estocagem das amostras (RIBANI et
al., 2004). Em análises toxicológicas com finalidade forense, a determinação da estabilidade,
dentre os parâmetros de validação, é extremamente importante porque embasa a pertinência
de eventual contraprova ou realização da prova depois de transcorrido determinado tempo. No
presente trabalho, os estudos de estabilidade, visaram determinar, caso amostras de maconha
estejam contaminadas por PQ, quais condições impostas e sofridas com a maconha na pré e
pós, colheita, secagem e até mesmo armazenamento pelo usuário, degradam o PQ, que está
contaminando a droga, e ainda, as condições de armazenamento nos laboratórios também
podem ser elocubradas. Durante o estudo de ciclos de congelamento/descongelamento e de
estabilidade em geladeira, a variação obtida entre a concentração do analito do período
estudado não excedeu valores de 10 %. Com isso, prova-se que usuários que costumam
armazenar a droga (contaminada por PQ) em geladeira por um período de até quinze dias
(prática normalmente realizada), estão susceptíveis a utilizar a droga contaminada. Na
estabilidade de bancada, procurou-se simular as condições sofridas pela maconha em sol

Discussão 157
intenso. No grupo 1 as amostras foram expostas a sol intenso e isentas de oxigênio (fechadas
com tampa), os resultados mostraram que uma vez contaminada com PQ a droga permaneceu
contaminada, sem sofrer degradação do herbicida por pelo menos noventa e um dias. Porém,
quando comparada com o grupo 2 , onde as amostras sofreram as mesmas condições impostas
pelo grupo 1, porém estavam em contato direto com oxigênio (sem tampa), os resultados
mostraram que: houve contaminação fúngica (constatação visual) e que devido a essa
contaminação, provavelmente os níveis de PQ decresceram rapidamente (visto que a única
diferença em relação o grupo 1 foi a presença de fungos). Tal fato é descrito por Smith; Lyon;
Sahid, (1976) que descreveram a degradação do PQ em solos por diferentes tipos de fungo.
De acordo com os pesquisadores os principais fungos responsáveis por essa degradação são os
do gênero Aspergillus e Penicillium, que de acordo com Darini; Soares; Cazenave, (2003) são
os gêneros mais encontrados, contaminando a maconha.
Na avaliação da estabilidade em estufa de secagem, tentou-se reproduzir nesse
trabalho as condições que a planta sofre pós-colheita quando é submetida à secagem em
fornos, com temperaturas elevadas. Uma vez contaminada com PQ durante o cultivo, mesmo
após ter sido submetida a temperaturas em torno de 100° C, por um período de até seis horas,
o herbicida não sofreu degradação maior que 10 %.
As condições eletroforéticas empregadas foram adequadas, possibilitando uma boa
separação e resolução satisfatória dos picos de interesse e sem a presença de interferentes. O
tempo empregado para cada análise foi de 2,5 min. O método desenvolvido demonstrou ser
prático, preciso, exato e se encaixa nas condições condizentes dos Laboratórios de
Toxicologia Forense do país.

Discussão 158
A outra etapa desse trabalho foi realizada objetivando a determinação de GLI e AMPA
em amostras de Cannabis sativa L encaminhadas para exame pericial, utilizando eletroforese
capilar em solução livre com detecção indireta por UV/vis. Como o GLI e o AMPA
apresentam comportamento zwiteriônico, eles apresentam diversos grupamentos possíveis de
ionização, onde suas cargas e consequentemente suas mobilidades podem ser alteradas em
função do pH empregado. Em pH 4,6 o GLI apresenta uma carga positiva e duas negativas, já
o AMPA apresenta uma carga positiva e outra negativa o que os tornam totalmente
apropriados para serem analisados pela técnica acima citada, como mostra a Figura 26.
Para escolha do eletrólito de corrida, foi feita, primeiramente uma busca em literatura
dos principais eletrólitos utilizados em análises de GLI e AMPA por eletroforese capilar e
após esse procedimento foi utilizado o software PeakMaster®, para simular as corridas
eletroforéticas (ZANOLLI-FILHO, 2007). Foram então avaliados alguns eletrólitos, como o
DNB (ácido 3,5 dinitrobenzóico), biftalato de potássio e o ácido gálico, onde o eletrólito
composto de ácido gálico 10 mmol L-1, TRIS 6 mmol L-1 e CTAB (brometo de N-cetil N-N-N
trimetilamônio) 0,1 mmol L-1 foi o de escolha frente à ótima resposta no equipamento e a não
deformação dos picos, fato presente nos outros tampões analisados.
Após a escolha do tampão, foi feito um estudo das diferentes soluções extratoras, cuja
solução de HCl 5 mmol L-1, apresentou recuperações satisfatórias para os dois analitos,
também apresentou eletroferogramas com poucos interferentes e ótima resolução dos picos de
interesse, em comparação com as demais soluções extratoras, já que se trata de detecção
indireta e a amostra sofre poucos processos de purificação. Esses índices satisfatórios de
recuperação, se devem segundo Araújo (2002), ao fato do pH ácido favorecer a extração do
GLI e AMPA, devido à alteração no número de cargas (comportamento zwiteriônico)

Discussão 159
favorecendo o desprendimento dos analitos (uma vez que podem formar diversos complexos
com a matriz, inclusive quelatos com íons metálicos e sítios de sorção) da matriz estudada,
além da solução apresentar alta polaridade.
Durante a avaliação da influência do tempo e modo de agitação para extração, os
resultados foram semelhantes aos apresentados pelo método desenvolvido para análise do
herbicida PQ, mesmo sendo compostos estruturalmente diferentes, porém uma característica
em comum, a alta polaridade. O resultado mostrou que quanto maior era o tempo submetido à
amostra a agitação intermitente, maior foi o rendimento na extração. Estudo semelhante
desenvolvido por Araújo (2002) em diferentes tipos de solo, para extração de GLI e AMPA
demonstra que além dos diversos tipos de solo, o tempo de agitação é um fator importante
para uma extração mais eficiente, pois tempos maiores de exposição da amostra com os
extratores promovem uma recuperação mais eficiente.
Todo o processo de manipulação e extração do GLI e AMPA na maconha foi realizado
no Laboratório de Toxicologia Forense de Campinas (LTF), idem ao já descrito para o PQ e
após extraidas foram analisados por eletroforese capilar no Laboratório de Cromatografia e
Eletroforese Capilar do Instituto de Química da USP. Frente à necessidade de se obter
calibradores em concentrações variadas e a disponibilidade de análise ser limitada por
questões de tempo, foram feitos estudos de interferência de matriz, comparando calibradores
feitos em água e calibradores feitos a partir da matriz de estudo (maconha). Como pode ser
visto nas Figuras 27 e 28, houve interferência de matriz quando comparadas, não podendo
assim ser utilizados no cotidiano calibradores feitos em água, dificultando um pouco todo o
desenvolver do processo analítico.

Discussão 160
À semelhança do que foi descrito para o PQ, como não existem amostras certificadas
de GLI e AMPA, o preparo de controles, para avaliação de alguns parâmetros de validação,
foi realizado por outro profissional idôneo do LTF-Campinas, a partir de diferentes soluções
padrão (estoque).
Após a definição das condições eletroforéticas e questões relacionadas aos controles e
calibradores, a validação do método analítico pôde ser iniciada. Os parâmetros analisados
foram: especificidade/seletividade, linearidade, limite de detecção (LOD) e quantificação
(LOQ), precisão interensaio e intra-ensaio, exatidão, recuperação e estabilidade.
De acordo com os parâmetros eletroforéticos e de extração otimizados, o número de
interferentes possíveis são poucos, os interferentes mais prováveis, seriam alguns
componentes presentes na formulação comercial do GLI e outros herbicidas como paraquat e
diquat que podem estar sendo utilizados em associação. Assim, a metodologia proposta neste
trabalho apresentou seletividade adequada para aplicação em toxicologia forense, uma vez
que os possíveis interferentes não foram detectados na corrida eletroforética.
Uma ampla faixa de trabalho foi avaliada (1,0 a 100 µg mL-1) no estudo de linearidade
para o GLI e AMPA. Esta faixa, que se mostrou dentro do intervalo dinâmico do método, foi
estabelecida com base nas condições de aplicação do GLI em diversas culturas e os achados
residuais em diversos tipos de solo (ARAÚJO, 2002). Essas concentrações, entretanto, para
aplicações em substâncias ilícitas que não possuem cuidados quanto ao seu uso, se tornam
uma incógnita, uma vez que a pesquisa de outros herbicidas como o glifosato ainda não
tinham sido realizadas. O método proposto apresentou excelente linearidade dentro do
intervalo dinâmico da curva analítica, com valores coeficiente de determinação sempre

Discussão 161
superiores a 0,99. Também foi avaliada a condição de uniformidade no valor da média das
variâncias. Verificou-se que a variância é uniforme, apresentando o fenômeno de
homocedasticidade, podendo assim ser empregada a regressão linear ordinária, sem que
ocorram grandes erros nos cálculos das concentrações.
Os valores de limite de detecção e quantificação obtidos neste estudo podem ser
considerados satisfatórios quando se leva em consideração a técnica de extração, a faixa de
concentração que se preze , o sistema de detecção empregados e o fato dessa pesquisa ser
inédita.
A precisão interensaio e intra-ensaio, calculada como coeficiente de variação
apresentaram resultados adequados para os dois analitos. Sempre inferiores a 10 % para os
dois estudos. A utilização de padrão interno adequado, ácido glutâmico, que é estruturalmente
muito semelhante ao GLI e o AMPA, o que possibilita a sua participação em todas as etapas
analíticas do método desenvolvido contribuiu, além de outros fatores para obtenção desses
valores.
Na avaliação da exatidão, mesmo não sendo disponível amostras certificadas por
instituições normatizadoras, foi realizado o estudo a partir de calibradores preparados por
outro profissional a partir de difrentes soluções-padrão (estoque), visando assim diminuir a
tendenciosidade. Os resultados, que foram avaliados a partir da inexatidão, mostraram estar
dentro do limite aceitável, onde os valores devem estar entre ± 85 % (inexatidão de ± 15 %)
do valor dito como real para todas as concentrações avaliadas.

Discussão 162
Os valores de recuperação obtidos nesse trabalho mostraram estar dentro dos valores
aceitáveis, sempre maiores do que 85 % como podem ser visto na Tabela 17. Uma das
possibilidades do alto rendimento de extração deve-se aos estudos realizados visando escolher
a melhor solução extratora e modo de agitação para extração, uma vez que entre diferentes
soluções e meios a variância foi significativa.
O método aqui desenvolvido, hipoteticamente poderia também ser aplicado para
avaliação do limite máximo de resíduos (LMR) por órgãos fiscalizadores em algumas culturas
alimentícias como, por exemplo, a soja, que é uma das principais culturas que utilizam o GLI,
tanto para ação dessecante como em pós emergência, com valores de LMR de 10 mg/kg, a
aveia preta e o azevém (ANVISA, 2007). Tal aplicação hipotética pode ser feita, com base
nos valores de LOD e LOQ de GLI que permitem respectivamente detectar até 8 mg/kg e
quantificar até 10 mg/kg. São suposições hipotéticas, pois diferentes culturas (matrizes),
possuem características próprias e deve se avaliar quais são elas e quais são suas influências
no método proposto.
No presente trabalho, os estudos de estabilidade, visaram determinar, caso amostras de
maconha estejam contaminadas por GLI e AMPA, quais condições impostas e sofridas com a
maconha na pré e pós, colheita, secagem e até mesmo armazenamento pelo usuário, degradam
o GLI e AMPA, que podem estar contaminando a droga. Durante o estudo de ciclos de
congelamento/descongelamento e de estabilidade em geladeira, a variação obtida entre a
concentração dos analitos do período estudado não excedeu valores de 10 %. Com isso
usuários que costumam armazenar a droga (contaminada por GLI e AMPA) em geladeira por
um período de até quinze dias, estão susceptíveis a utilizar a droga contaminada. Durante todo
Discussão 163
o período de estudo em freezer e em geladeira, na análise dos calibradores de GLI, não foi
possível observar a formação do AMPA (LD= 0,8 µg mL-1).
Na estabilidade de bancada, procurou-se simular as condições sofridas pela maconha
em sol intenso. No grupo 1 as amostras foram expostas a sol intenso e isentas de oxigênio
(fechadas com tampa), os resultados mostraram que uma vez contaminada com GLI e AMPA,
ocorreu grande degradação, sendo maior para o GLI (30 %) e menor para o AMPA (12 %)
nos primeiros 7 dias de estudo. No decorrer do estudo a variação apresentada pelos dois
analitos permaneceu elevada até o 91° dia, sendo não mais possível detectar o GLI no final do
estudo. Durante todo o período de estudo em bancada para o grupo 1, na análise dos
calibradores de GLI, foi possível observar a formação do AMPA a partir do 7º dia de estudo à
uma concentração de 8,7 µg mL-1, sendo essa formação elevada até o 91º dia de estudo à uma
concentração de 32,4 µg mL-1. Já o grupo 2 apresentou variações bem elevadas em
comparação ao grupo 1, sendo também maior para o GLI (52 %) e menor para o AMPA (30
%) nos primeiros 7 dias de estudo. Em relação ao período restante do estudo, a variação
permaneceu elevada para os dois analitos, sendo que no 91° dia não era mais possível de se
detectar o GLI. Em relação à formação do metabólito AMPA nos calibradores de GLI, foi
possível observar a formação do AMPA a partir do 7º dia de estudo à uma concentração de
12,6 µg mL-1, sendo essa formação elevada até o 91º dia de estudo à uma concentração de
40,3 µg mL-1. A principal diferença entre os grupos, foi que no grupo 2, houve grande
contaminação fúngica (constatação visual) e isso possívelmente está relacionado com a
degradação e a formação de AMPA mais acentuada em comparação ao grupo 1 .
Na avaliação da estabilidade em estufa de secagem, tentou-se reproduzir nesse
trabalho as condições que a planta sofre pós-colheita quando é submetida à secagem em

Discussão 164
fornos, com temperaturas elevadas. A estabilidade observada para o GLI e AMPA durante o
tempo de aquecimento em estufa, mostrou-se estável durante a primeira hora de análise, com
variações de 2 % para o GLI e 1 % para o AMPA. No decorrer do estudo durante a terceira
hora de análise, houve um aumento dessa variação apenas para o GLI (4,5 %) e na sexta hora,
ocorreu variação para ambos os analítos, sendo mais intenso para o GLI (12,4 %) e AMPA
(9,7 %). Em relação à formação do metabólito AMPA nos calibradores de GLI, foi possível
observar a formação do AMPA apenas a partir da sexta hora de estudo à uma concentração de
5,1 µg mL-1.
O estudo de estabilidade permitiu também a inferência de que nas condições em
temperatura ambiente, a meia vida média do GLI é de aproximadamente 7 dias e do AMPA
de 14 dias, sendo que o AMPA, cuja formação se dá a partir da ação microbiológica atuante
sob o GLI, é possível de detectar sua formação aproximadamente a partir do sétimo dia de
exposição da droga ao GLI, sendo assim útil como um indicador de contaminação por GLI
(mesmo após todo o GLI ter sido degradado).
As condições eletroforéticas empregadas foram adequadas, possibilitando uma boa
separação e resolução satisfatória dos picos de interesse e sem a presença de interferentes. O
tempo empregado para cada análise foi de 9,0 min. O método desenvolvido demonstrou ser
prático, preciso, exato e se encaixa nas condições condizentes dos Laboratórios de
Toxicologia Forense do país.
As amostras reais submetidas ao método desenvolvido (n=100) representaram mais de
seis ton de Cannabis sativa L apreendidas pela polícia na região de Campinas-SP em 2007.
Segundo estatística do LTF-Campinas, no ano de 2007, foram apreendidas aproximadamente

Discussão 165
doze ton de maconha. Dessas cem amostras analisadas, doze apresentaram contaminação pelo
herbicida PQ, o que corresponde a mais de cinco ton de Cannabis sativa L contaminadas por
PQ. Das doze amostras positivas para o PQ, quatro eram provenientes de Campinas,
totalizando mais de cinco ton de maconha, as demais amostras foram oriundas de apreensões
em Hortolândia, Sumaré, Americana, Valinhos, Vinhedo e juntas somaram mais de sessenta
kg de maconha. As formas em que as maconhas foram apreendidas variaram desde “cigarros”,
sacolas com a droga solta, “trouxinhas” e blocos prensados. A análise da circunstância
policial mostrou que essas drogas contaminadas são originárias da apreensão de traficantes
com elevadas quantidades da droga, de usuários detidos em flagrante consumindo a droga ou
constatadas que era de uso próprio e fiscalização em presídio. Uma das amostras contaminada
com PQ foi confirmada em perícia que possuía cocaína juntamente com a maconha, e
armazenada na forma de cigarrros.
As concentrações encontradas variaram de 0,010 a 25,13 mg de PQ/g de maconha,
observando que quando comparado a valores de LMR de culturas de alimentos, que sofrem
rigorosos controles, estão em níveis bem elevados. Por motivos óbvios, não existe uma
finalidade de controle de utilização de praguicidas em culturas de substâncias ilícitas, porém
deve-se levar em consideração que os valores determinados por órgãos regulamentadores,
visam a segurança no consumo dos alimentos e nesse caso, como não se tem controle no uso
de praguicidas, pode tornar a utilização da maconha um risco para o usuário.
Especial atenção deve ser prestada nos teores encontrados na amostra de nº 5 (Tabela
18) que apresentou mais de mil vezes o valor de LMR de algumas culturas alimentícias que
são de 0,05 mg/kg e representa amostra oriunda de 47 Kg de maconha sob condição de

Discussão 166
apreensão de tráfico, mostrando que a prática de utilização do herbicida foi adotada na cultura
ou pós-coleta, corroborando o achado em estudos conduzidos em outros países.
Desde a época em que foi descoberta a contaminação de PQ na maconha, alguns
estudos foram realizados, porém o que se observou, foram dados inconclusivos e
contraditórios. Não foi dada continuidade nesses trabalhos e existem poucos estudos que
relacionam os efeitos causados pelo PQ quando inalados a partir do uso de maconha. Estudos
realizados por Landrigan et al., (1983) mostraram que do valor total encontrado na maconha,
cerca de 0.2 % de paraquat passa inalterado para o pulmão quando fumado e que dependendo
da forma de exposição e do grau de contaminação da droga, no final de um ano, irá se ter uma
inalação de 500 microgramas ou mais de PQ, o que é uma dose considerada de risco para
saúde do homem. Tal situação pode não apresentar efeitos sistêmicos e agudos, porém pode
apresentar efeitos como tosse, hemorragia no aparelho respiratório, caracterizada por
hemoptise com tosse e expectoração e irritação da boca (DASTA, 1978). Considerando que a
via oral de introdução, tem sido cada vez mais utilizada para o consumo de maconha, os
riscos que esses usuários irão ter, podem ser maiores quando comparados com a via inalatória,
uma vez que a quantidade de PQ absorvida vai ser bem maior em relação àquela que ocorre
pela via inalatória, pois grande parte do PQ é degradada durante a pirólise.
Para comprovar a toxicidade da quantidade de PQ inalada durante o uso de maconha
contaminada, Zavala & Rhodes, (1978) realizaram experiementos com coelhos, onde através
de um catéter intrabronquial seletivo, instilaram doses de 0,1 mg a 1,0 pg de PQ. Os
resultados mostraram que os coelhos sofreram hemorragia local, dilatação e obstrução dos
capilares, aparecimento de macrófagos intra-aoveolares, espessamento alveolar com aumento
de número de células, lesão pulmonar de 1,0 mm e fibrose.

Discussão 167
Beutler et al., (1979) realizaram estudo, visando identificar os produtos de pirólise da
maconha contaminada com PQ por cromatografia gasosa acoplada a infravermelho.
Utilizaram duas amostras autênticas, sendo uma contendo 12,5 mg/kg e a outra 99,5 mg/kg.
Os resultados, identificaram dois produtos em abundância, ao chegar nos 610° C (ponto de
fusão do PQ = 340° C, com formação de vapores tóxicos) sendo o primeiro o 4,4-bipiridil
que é um precursor utilizado na síntese do PQ e é encontrado como impureza do PQ e o outro
produto identificado é o clorometano. De acordo com os pesquisadores deste trabalho, a
temperatura encontrada na porção que está em brasa no cigarro, chega a 900° C para mais. O
4,4-bipiridil como já descrito tem sido relacionado com alguns tipos de carcinomas, como
doença de Bowen e câncer de pele (HALL & BECKER, 1995). Já o clorometano, também
conhecido como cloreto de metila, pertencente à família dos hidrocarbonetos halogenados,
que é um gás incolor extremamente inflamável com um odor levemente doce, caso seja
inalado pode levar a náuseas, vômitos, diarréia, dor de cabeça, dificuldade em respirar, parada
respiratória, danos cerebrais, além de ser potencialmente cancerígeno (BEUTLER et al.,
1979).
Em relação à análise de GLI e AMPA, das cem amostras apreendidas no ano de 2007,
também submetidas ao método para determinação de PQ, não foi possível de se detectar a
presença de GLI e AMPA, uma vez em que o período de análise das amostras ultrapassou
cerca de quatro meses desde a aplicação do método para determinação de PQ, uma vez que o
método se encontrava em fase de validação. O fato que pode ter ocorrido, e que ficou
evidenciado pelo estudo de estabilidade realizado nesse trabalho e pelo grande período de
tempo decorrido, o processo de degradação culminou com a possível presença de GLI e
AMPA a níveis extremamente baixos, não sendo possível de se determinar os toxicantes. De
acordo com essa intercorrência, foram disponibilizadas trinta amostras de maconha

Discussão 168
apreendidas em 2008, após terem sido periciadas e constatadas da positividade para Cannabis
sativa L. Dessas trinta amostras analisadas, apenas três apresentaram contaminação pelo
herbicida GLI, sendo que em uma delas evidenciou-se, concomitante o AMPA o que
corresponde a aproximadamente quinze kg de Cannabis sativa L contaminadas por GLI.
Todas essas amostras eram provenientes de Campinas. As formas em que as maconhas foram
apreendidas foram: blocos prensados e vaso com a planta “in natura”. A circunstância
policial mostrou que essas drogas contaminadas são originárias da apreensão de traficantes e
de usuários que a plantavam para consumo próprio na própria residência.
As concentrações encontradas foram de 0,146, 0,745 e 0,545 mg de GLI/g de maconha
e 0,358 mg de AMPA/g de maconha.Com esses resultados, percebe-se que duas amostras com
a presença de glifosato, provavelmente tinham sido expostas ao herbicida a pouco tempo, uma
vez que a presença do AMPA não foi possível de se detectar, em contrapartida uma das
amostras tinha sido exposta ao GLI, por um período de tempo maior, visto que foi possível de
se detectar a presença de seu principal metabólito. Em relação à toxicidade do glifosato e
AMPA frente ao uso recreativo da droga contaminada em seus diversos padrões de uso, não
se tem informações nem estudos que mostrem seus reais efeitos, fazendo-se assim necessário
que se conduzam estudos experiementais para que se saiba realmente o risco a que os diversos
tipos de usuários de maconha estão expostos. O que pode ser levado em consideração é que o
ponto de fusão do GLI é de 230° C e que quando submetido à pirólise onde se tem
temperaturas de aproximadamente 900° C, todo o GLI pode sofrer degradação, porém os seus
possíveis produtos de degradação ainda são uma incógnita que deve ser melhor avaliada.
10. Conclusões
Conclusões 170
10. CONCLUSÕES
De acordo com os resultados obtidos, pode se concluir que:
- Os métodos padronizados e validados mostraram-se simples, rápido e exeqüíveis em
laboratórios de toxicologia forense de médio porte;
- A linearidade, o intervalo dinâmico, o LOD e o LOQ determinados no processo de
validação para a determinação de PQ, são compatíveis com os valores já disponíveis
em literatura. Para a metodologia proposta para determinação de GLI e AMPA em
amostras de maconha, não existem dados comparativos, porém os obtidos nesse
trabalho se mostraram satisfatórios, quando comparados aos valores considerados
residuais disponíveis em culturas alimentícias (limites máximos permitidos);
- A especificidade, recuperação, precisão e exatidão de ambos os métodos foram
adequados à finalidade proposta;
- Parte da Cannabis sativa L apreendida na região de Campinas (12 %), encontrada
com traficantes e usuários apresenta contaminação pelo herbicida PQ em
concentrações variadas e que não mostraram degradação sob as influências impostas
durante a pós-colheita e armazenamento;

Conclusões 171
- A contaminação por GLI e AMPA em amostras de Cannabis sativa L não foi
demonstrada nas amostras previamente eleitas para análise, uma vez que ambos os
analitos sofrem degradação intensa sob influências durante a pós-colheita e
armazenamento em temperatura ambiente. Porém foi detectado em três amostras das
trinta adicionadas ao estudo para determinação de GLI e AMPA, com baixas e
variadas concentrações.
- Fazem-se necessários estudos experiementais para avaliar o real risco que essas
diversas concentrações de PQ, GLI e AMPA encontradas em amostras de maconha,
podem trazer aos diversos tipos de usuários sob as diversas formas possíveis de uso da
droga.
11. Referências Bibliográficas
Referências Bibliográficas 173
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1.

Em 1753, o botânico sueco Carolus Linnaeus cunhou o termo científico Cannabis

foi mencionada na Farmacopéia Chinesa. A Cannabis se propagou da China à Índia, para o

mostrando assim que a droga apresentava propriedades terapêuticas (MOREAU, 2008).

“droga perigosa”, conhecida como a "assassina da juventude”, capaz de induzir

abuso da maconha à degeneração psíquica, ao crime e à marginalização do indivíduo. Nas

isolado e identificado quimicamente o principal componente psicoativo da Cannabis sativa L,

o ∆9-Tetraidrocanabinol (∆9-THC) pelo pesquisador israelense Raphael Mechoulan e por

Yechiel Gaoni (OLIVEIRA, 2006; MOREAU, 2008, MARKEZ et al., 2002).

devido a uma maior disponibilidade de produtos da Cannabis oriundas do Paraguai

(MOREAU, 2008; UNODC, 2007; UNODC, 2008).

Em se tratando de apreensões da Cannabis sativa, a América do Norte é a região do

significativa quanto ao consumo.

No Brasil, segundo o II Levantamento Domiciliar sobre o uso de Drogas Psicotrópicas

(40,2 %), Reino Unido (30,8 %) e Chile (22,4 %).

As opiniões sobre os riscos à saúde associados ao uso da Cannabis continuam diversas

42 % dos entrevistados tinham preocupação de se tornarem dependentes e terem efeitos

adversos advindos do uso, 32,1 % problemas familiares, 16,1 % se preocuparam com

possíveis contaminantes presentes na Cannabis (que podem levar a efeitos desagradáveis) e

outras opções em menor porcentagem.

A possibilidade de contaminantes na maconha deve ser minuciosamente analisada,

reduzido, alto rendimento, baixo prejuízo e a “re-engenharia” da planta, visando o aumento

das concentrações de canabinóides, é de se supor que contaminantes possam estar sendo

levar em consideração outros aspectos da maconha, como os contaminantes possivelmente

em outras drogas provenientes de plantas como a cocaína (UNODC, 2006; FIGUEIREDO,

Em pesquisa realizada no ano de 2003, DARINI; SOARES e CAZENAVE mostraram

que existe a contaminação da maconha por microrganismos cosmopolitas (fungos), os quais

Nesse estudo, foram identificados fungos do gênero: Aspergillus, Penicillium, Fusarium,

Scopulariopsis, Cladosporium, Chysosporium e Acremonium sp. Deve se dar destaque aos

micotoxigênicos como Aspergillus e Penicillium, que através de seus metabólitos secundários,

podem levar a disfunções renais, hepáticas e neurológicas, gerando quadros de intoxicações

agudas e crônicas, bem como alterações teratogênicas e carcinogênicas (interage na síntese e

replicação de DNA). Podem, ocasionar alergia ocupacional em policiais, toxicologistas

hipersensíveis, e também no próprio usuário por estarem em contato direto através da

aspergilose pulmonar (HAMADEH et al., 1988).

Relatos da imprensa do Paraguai (principal distribuidor de Cannabis para o Brasil),

policloroprene (“neoprene”, composição sintética da borracha) (LA NACION, 2006).

como “Cannabis Eradication Suppression Program,” ou “Plan México” com apoio e

a erradicação das mesmas em vários países (ARMENTANO, 1998; COGGIOLA, 2005).

possuem propriedades dessecantes, o que possibilita o uso em plantações de Cannabis com

propósito de agilizar o processo de secagem da planta, reduzindo assim o tempo de obtenção

cultivadas em condições especiais (laboratório) ou normais, sempre em grandes proporções,

como já comprovado o uso em outras culturas de drogas ilícitas (GRANJA, 2001).

A utilização de praguicidas em diversos tipos de culturas alimentícias segue uma

norma estabelecida de boas práticas de produção e um severo controle através do

estabelecimento de doses diárias aceitáveis (DDA) que são referências constantes em

a mais na problemática relacionada à Saúde Pública que advém do hábito de fumá-la.

O Paraquat, fabricado pela Syngenta® e o Glifosato pela Monsanto®, são os principais

herbicidas utilizados em diversos tipos de plantações em todo mundo. Quanto à sua

classificação toxicológica, o Paraquat é classificado como classe I (extremamente tóxico) e o

Glifosato como classe IV (pouco tóxico) (ANVISA, 2007). Diversos praguicidas,

meio ambiente (ADPF, 2006a).

As intoxicações com praguicidas ocorrem com muita freqüência em todo o país. É

outra situação exógena. Os levantamentos feitos no Centro de Controle de Intoxicações de

Campinas (CCI) e pelo Centro de Informações Toxicológicas de Santa Catarina (CIT)

porcentagem de dados desconhecidos (BIGOLIN et al., 2003; VIEIRA et al., 2003).

tentativas de suicídio, 40,6 % ocupacionais e 15,6 % desconhecidas. As exposições foram

manifestações clínicas ocorreram em 97,7 % dos pacientes (BIGOLIN et al., 2003).