AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE LARVICIDA DE EXTRATOS AQUOSOS E DO

HIDROLATO OBTIDOS DAS FOLHAS DE Croton argyrophyllus SOBRE O

Aedes aegypti

Rômulo Carlos Dantas da Cruz1 Karine da Silva Carvalho1, Sandra Lúcia da

Cunha e Silva2, Simone Andrade Gualberto2
1
Discentes do Programa de Pós-Graduação em Ciências Ambientais –
PPGCA/UESB (romulo.carlos@hotmail.com) Itapetinga-Brasil
2
Laboratório de Pesquisa de Inseticidas Naturais (LAPIN)/Núcleo de Pesquisa em
Química Aplicada/Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia – Praça Primavera,
40, Bairro Primavera, Itapetinga, Bahia. Cep: 45700-000, Brasil.

Recebido em: 31/03/2015 – Aprovado em: 15/05/2015 – Publicado em: 01/06/2015

RESUMO
As plantas são compostas de substâncias bioativas com propriedade inseticidas e
tem sido alvo de estudos visando o controle de insetos vetores, a exemplo do Aedes
aegypti. Dessa forma, buscou-se avaliar o potencial dos extratos aquosos e do
hidrolato obtido das folhas secas e frescas de Croton argyrophyllus, no que diz
respeito a sua atividade larvicida sobre o Ae. aegypti. Foram avaliados os extratos
obtidos por maceração e infusão, e o hidrolato, subproduto do processo de extração
do óleo essencial por hidrodestilação, assim como o resíduo aquoso resultante,
também, desse processo de extração. Para a realização dos bioensaios foram
utilizadas 30 larvas de terceiro e quarto instar por repetição, as quais foram expostas
a concentração de 100% (v/v) dos extratos. Em cada repetição foi utilizado 30 mL
dos diferentes extratos e as larvas foram colocadas em contato com esses extratos
por um período de 24 horas O resíduo aquoso e o hidrolato, obtidos das folhas
secas, com 24 horas de exposição ocasionaram 53,3% e 52,5% de mortalidade das
larvas de Ae. aegypti, respectivamente, sendo significativamente mais ativos quando
comparados aos demais extratos aquosos. Os dados obtidos demonstraram que o
hidrolato e o resíduo aquoso, obtido das folhas secas de C. argyrophyllus, teve efeito
tóxico sobre as larvas de Ae. aegypti, o que não ocorreu com os diferentes extratos
obtidos a partir das folhas frescas.
PALAVRAS-CHAVE: dengue, inseticidas botânicos, plantas bioativas

ASSESSMENT ACTIVITY LARVICIDE OF THE LEAVES AQUEOUS EXTRACTS

AND HIDROLACT OF Croton argyrophyllus ON Aedes aegypti

ABSTRACT
The plants are composed of bioactive substances with insecticides property and has
been the target of studies for the control of insect vectors, such as the Aedes aegypti.
Thus, we sought to evaluate the potential of aqueous extracts and hidrolact obtained
from dried and fresh leaves of Croton argyrophyllus, as regards its larvicide activity
on the Ae. aegypti. The extracts were evaluated by maceration and infusion, and
hidrolact, byproduct of the process of extracting the essential oil by hydrodistillation
and the resulting aqueous residue also that extraction process. For the bioassays

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were used 30 third and fourth instar larvae per replicate, which were exposed to a
concentration of 100% (v/v) of the extracts. In each repetition was used 30 mL of
each extract and larvae were placed in contact with these extracts for a period of 24
hours.The aqueous residue and the hidrolact obtained from the dried leaves, with 24
hours of exposure caused 53.3% and 52.5% mortality of larvae of Ae. aegypti,
respectively, being significantly more active when compared to other aqueous
extracts. The data obtained show that the hidrolact and the aqueous residue
obtained from the dried leaves of C. argyrophyllus has a toxic effect on Ae. aegypti
larvae, which did not occur with different extracts obtained from the fresh leaves.
KEYWORDS: dengue, botanical insecticides, bioactive plants

INTRODUÇÃO
O desenvolvimento de inseticidas botânicos permite a utilização de vegetais
como uma fonte alternativa viável para o controle de insetos, pois os compostos
bioativos produzidos pelas plantas possibilitam que as mesmas possam se proteger
contra o ataque de insetos herbívoros. Entre os insetos passíveis de serem
controlados a partir desses compostos encontram-se os vetores de doenças, a
exemplo do Aedes aegypti (LIMA et al., 2006, POHLIT et al., 2011).
O A. aegypti é um mosquito cosmopolita e vive principalmente em locais de
clima quente e úmido. Sua distribuição é limitada pela altitude, sendo geralmente
abaixo de 1.000 m, todavia, já foi encontrado a 2.200 m acima do nível do mar na
Colômbia e Índia. Acredita-se que esse mosquito seja originário do continente
africano, sendo introduzido nas Américas no início das explorações e da
colonização, apresentando posteriormente, uma ampla dispersão urbana, nos
países tropicais e subtropicais (WHO, 2009, LIMA et al., 2009, DUARTE et al.,
2013).
Esse vetor caracteriza-se por exibir um hábito estritamente antropofílico, e
apresentar grande importância do ponto de vista epidemiológico, sendo o
transmissor do vírus causador da febre amarela, da febre da chikungunya e,
principalmente, do vírus da dengue (BARRETO & TEIXEIRA, 2008,
VASCONCELOS, 2014).
A estratégia de controle desse vetor baseia-se, principalmente, no controle
entomológico, através do uso de inseticidas sintéticos. No entanto, o uso contínuo e
indiscriminado desses produtos, tem ocasionado desequilíbrio ambiental, toxicidade
a mamíferos, bem como a seleção de populações de insetos resistentes (BARRETO,
2005, GARCEZ et al., 2013).
HORTA et al., (2011) ao analisarem a susceptibilidade das larvas do A.
aegypti ao inseticida sintético temefós, no estado de Minas Gerais, verificaram uma
média de mortalidade larval muito baixa (2,78%), comparada a da linhagem
Rockefeller (99,0%), evidenciando assim, um elevado nível de resistência para essa
população. LUNA et al., (2004) também verificaram que o inseticida cipermetrina,
não apresentou-se tóxico às larvas do A. aegypti, e assim, tais autores,
recomendaram a suspensão do uso desse inseticida, bem como a sua substituição.
Nesse sentido, cresce o interesse por plantas que apresentem potencial
inseticida. Todavia, tais inseticidas de origem botânica, também devem visar a
redução do impacto sobre a biodiversidade, mediante a baixa ou nenhuma ação
tóxica sobre organismos não-alvo, assim como ao meio ambiente (OLIVEIRA et al.,
2014). Desse modo, a formulação de inseticidas a partir de vegetais, poderá
contribuir com programas de manejo integrado, para o controle de insetos vetores.

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 Diversas pesquisas voltadas para o potencial da flora têm sido realizadas,
apresentando resultados promissores em relação ao controle do A. aegypti (LUNA et
al., 2005, LIMA et al., 2006, FARIAS et al., 2010, SILVA et al., 2014). Para CORREA
& SALGADO (2011) e GARCEZ et al., (2013) os inseticidas botânicos podem reduzir
os riscos do aparecimento de populações de insetos resistentes, em virtude da sua
complexidade molecular, bem como minimizar os riscos à saúde humana e ao
ambiente.
LIMA et al., (2006) verificaram que hidrolatos, soluções aquosas do óleo
essencial, obtidos de caules e folhas de Croton zehntneri, Croton nepetaefolius e
Croton argyrophyloides (Euphorbiaceae), espécies endêmicas da caatinga,
ocasionaram 100% de mortalidade de larvas do Ae. aegypti, o que demonstra o
potencial inseticida desse gênero. Dentro desse contexto, buscou-se avaliar o
potencial dos extratos aquosos e do hidrolato das folhas secas e frescas de Croton
argyrophyllus, no que diz respeito a sua atividade larvicida sobre o A. aegypti.

MATERIAL E MÉTODOS
As etapas de coleta e identificação de Croton argyrophyllus (Kunth)
(Euphorbiaceae), foram supervisionadas por um especialista botânico, e as
exsicatas depositadas no herbário da Universidade Estadual de Feira de Santana,
sob voucher HUEFS 4662 (S13º55.25’ W041º06.88’). A planta foi coletada na
Floresta Nacional Contendas do Sincorá, no mês de maio/2014.
Posteriormente, as folhas foram pesadas e, em seguida, divididas em duas
porções de pesos idênticos, sendo uma imediatamente triturada para iniciar o
processo de extração (material fresco), e a outra foi encaminhada para a estufa de
circulação de ar, onde permaneceu por um período 12 horas sob a temperatura de
40 °C. Posteriormente, as folhas pré-secas também f oram trituradas e submetidas
ao processo de extração.
Foram avaliados os extratos aquosos do material vegetal seco e fresco
obtidos pelos processos de maceração e infusão. Avaliaram-se também o hidrolato,
subproduto do processo de extração do óleo essencial por hidrodestilação, assim
como o resíduo aquoso também resultante do processo de extração do óleo. Para
cada extração utilizou-se 100,0 g de folhas secas e frescas, as quais foram
submersas em 1,5 L de água deionizada, a temperatura ambiente (26 ± 1 °C), por
três horas (maceração), em ebulição (100 °C), duran te 30 minutos (infusão) e,
durante o processo de extração do óleo essencial, em fervura sob refluxo (100 °C)
durante três horas, originando o hidrolato, e ao final do processo o resíduo aquoso.
Para a realização dos bioensaios foram utilizadas larvas de terceiro e quarto
ínstar do A. aegypti, oriundas de uma colônia estabelecida no Laboratório de
Pesquisa de Inseticidas Naturais, da Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia, a
partir de ovos da linhagem Rockefeller, cedidos pelo Laboratório de Fisiologia e
Controle de Artrópodes e Vetores (LAFICAVE), da Fundação Oswaldo Cruz, do Rio
de Janeiro.
Para a realização dos ensaios larvicidas foram utilizados os extratos aquosos,
assim como o hidrolato e resíduo aquoso, na concentração de 100% (v/v), com
quatro repetições por tratamento. Foram utilizadas 120 larvas por tratamento, com
30 larvas por repetição e o grupo controle, no qual utilizou-se água deionizada. Em
cada repetição foi utilizado 30 mL dos diferentes extratos e as larvas foram
colocadas em contato com esses extratos por um período de 24 horas.
As observações foram realizadas após 1, 4, 8, 16 e 24 horas, a partir do início

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do experimento. Os bioensaios foram conduzidos em câmara climatizada regulada a
27 °C e 12 horas de fotofase. Os percentuais de mor talidade das larvas foram
submetidos ao teste de Tukey, em nível de 5% de probabilidade.

RESULTADOS E DISCUSSÃO
O hidrolato das folhas secas de C. argyrophyllus, ocasionou, a partir de uma
hora de exposição das larvas, um percentual de mortalidade de 6,6%, foi
significativamente mais eficaz (p<0,05), quando comparado aos demais extratos
(Tabela 1). A partir de quatro horas de exposição, o hidrolato, junto ao resíduo
aquoso, foram significativamente mais tóxicos (p<0,01). Com 24 horas de exposição
tanto o hidrolato (52,5%) quanto o resíduo aquoso (53,3%) continuaram sendo mais
tóxicos (p<0,01) quando comparados aos demais extratos, que não apresentaram
toxicidade sobre as larvas do A. aegypti (Tabela 1).

TABELA 1. Percentual de mortalidade de larvas de Aedes aegypti, em relação ao

tempo de exposição aos diferentes extratos aquosos obtidos a partir das
folhas secas de Croton argyrophyllus.
Métodos de extração Mortalidade (%)1
1h 4h 8h 16 h 24 h
Hidrolato 6,6a 24,2ª 33,3a 41,7ª 52,5ª
Resíduo aquoso 0,0b 10,8ªb 33,3a 46,7ª 53,3ª
b b
Infusão 0,0 0,0 0,0b 0,0b 0,0b
Maceração 0,0b 0,0b 0,0b 0,0b 0,0b
b b b b
Controle 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0b
1
Médias seguidas pela mesma letra nas colunas, não diferem significativamente pelo teste de Tukey,
ao nível de 5% de probabilidade.

Hidrolatos representam soluções aquosas de óleos essenciais e apresentam,

geralmente, compostos voláteis hidrossolúveis, ricos em princípios ativos (BASER &
BUCHBAUER, 2012). LIMA et al., (2006) verificaram a atividade larvicida de
hidrolatos obtidos das folhas e caules de espécies pertencentes ao gênero Croton
sobre o A. aegypti, e sugeriram que substâncias secundárias presentes no óleo
essencial dos respectivos hidrolatos, foram os responsáveis pela ação inseticida,
tais como fenilpropanóides, monoterpenos e sesquiterpenos.
A eficácia do resíduo aquoso obtido das folhas secas, quando comparado aos
demais extratos aquosos (maceração e infusão), também obtidos a partir das folhas
secas, pode ter ocorrido em função do método utilizado para a obtenção do óleo
essencial, a hidrodestilação, ou seja, as folhas ficaram em contato direto com a água
em ebulição por três horas, o que pode ter favorecido a liberação de substâncias
bioativas nesse resíduo aquoso.
O hidrolato e os extratos aquosos obtidos das folhas frescas de C.
argyrophyllus, não apresentaram toxicidade sobre as larvas do A. aegypti,
diferentemente do observado com os extratos e com o hidrolato obtido a partir das
folhas secas. A diferença do potencial larvicida entre os hidrolatos, obtidos a partir
das folhas secas e frescas, de C. argyrophyllus pode ter ocorrido em função do
processo de secagem, visto que a redução do teor de água nas folhas, ocasionado
pela secagem, tende a aumentar o percentual do óleo essencial em relação à massa

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total, aumentando, também, o percentual de componentes bioativos e aromáticos e,
consequentemente, a presença destes no hidrolato.
Segundo BLANK et al., (2007) a pré-secagem de um órgão vegetal, com
vistas à extração de óleos voláteis, aumenta consideravelmente o teor e o
rendimento dos mesmos, pelo fato da temperatura afetar a resistência da membrana
celular favorecendo assim, maior liberação do óleo essencial durante a
hidrodestilação. Diversos trabalhos têm demonstrado diferença em termos
quantitativos da composição química de seus óleos quando obtidos a partir de folhas
frescas e secas, tendo com essa última, verificado um aumento no percentual dos
seus constituintes (BLANK et al., 2005, BARBOSA et al., 2006, BLANK et al., 2007).

CONCLUSÃO
O hidrolato e o resíduo aquoso obtidos das folhas secas de C. argyrophyllus
apresentam maior toxicidade sobre as larvas do A. aegypti, quando comparados aos
demais extratos. Contudo, os diferentes extratos obtidos a partir da folhas frescas de
C. argyrophyllus, não se mostram tóxicos para o A. aegypti.

AGRADECIMENTOS
À Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado da Bahia (FAPESB).

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