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MICRORGANISMOS DO SOLO
Os microrganismos que podemos encontrar por grama no solo são bactérias, fungos, algas, protozoários e um
grande número de vírus, cuja principal função é limitar as populações bacterianas , visto que se trata
principalmente de vírus do tipo bacteriófago .
O número de bactérias é mais importante, em torno de 10 a 8, até 10 a 9, por outro lado, o número de fungos é
bem menor, mas em RELAÇÃO AOS FUNGOS, ocupam uma parcela menor, devido à diferença de
tamanhos .entre ambos, embora o não. É muito importante que a quantidade envolvida em toda a população
desses organismos seja muito pequena se comparada ao restante dos componentes de um solo.
A superfície do solo (0-20 cm) é o ambiente onde ocorre a maioria dos processos microbianos que
influenciam a nutrição das culturas. A fração viva do solo composta por microrganismos e alguns
organismos maiores, estes estão relacionados ao conjunto total ou massa total de um solo.
No primeiro dos bolos representa a porção marrom que a matéria orgânica do solo pode ocupar, não ultrapassando
2 a 10% da massa total de um solo. O resto são partículas inorgânicas. Agora, se decompormos essa porção da
matéria orgânica, sabemos que existe uma parte que é chamada de fração ativa, é a parte da matéria
orgânica mais suscetível de ser decomposta em curto prazo, e uma fração passiva . Desta fração ativa, apenas
30%, 35% dela é composta por organismos vivos. Se quebrarmos essa parte, aquela porção dos organismos
vivos e analisarmos as frações que cada um desses grupos ocupa, vemos que a fração mais abundante
em tamanho não numerado é composta pelos ONJOS, os olhos em geral constituem 50% do os organismos
vivos no solo, enquanto as bactérias e os Actinomicetos ocupam quase 30%, esses dois grupos ocuparão
praticamente 80% de todos os organismos vivos, todos os outros estão entre a fauna 10% e o restante os outros
10%. Isso é para se ter uma ideia de como os organismos vivos realmente formam uma fração muito pequena do
que é matéria orgânica. Considera-se que a fração viva não ultrapassa 5% da matéria orgânica. Na verdade, os
organismos vivos formam uma fração muito pequena do que é matéria orgânica. Considera-se que a fração viva
não ultrapassa 5% da matéria orgânica.
Os microrganismos são os verdadeiros decompositores dos restos orgânicos, transformando-os

em compostos inorgânicos, fechando o ciclo dos elementos. Constituem cerca de 85% da fração viva do solo. Por
serem microscópicos, muitas vezes é difícil estimar a importância do peso absoluto dos microrganismos num
solo, embora o
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A biomassa individual é muito pequena, o grande número de indivíduos torna a biomassa absoluta muito
grande.
Nos grupos microbianos mais importantes encontramos bactérias e fungos.
Bactérias: Embora sejam numerosas, devido ao seu pequeno tamanho, representam apenas menos da metade
da biomassa microbiana total. As bactérias do solo podem ser agrupadas por grupos funcionais, sendo esta a
forma mais importante do ponto de vista agronômico, em:
• Bactérias amonificantes: decompõem substâncias orgânicas nitrogenadas (N2) e

transformado em amônio ou sais amoniacais.
• Bactérias nitrificantes: oxidam a amônia em nitrato.
• Bactérias fixadoras de nitrogênio: pegue N2 e transforme-o em compostos utilizáveis

para os vegetais.
• Bactérias celulolíticas: degradam a celulose. É o maior grupo porque este composto é o mais
abundante nos resíduos vegetais.
• Bactérias pectinolíticas: degradam a pectina e seus derivados. O gênero mais abundante é
Arthrobacter.
• Actinomicetos: assemelham-se aos fungos por possuírem micélio aéreo ramificado. As colônias
Eles podem ser pulverulentos ou consistentes. Eles estão distribuídos em vários habitats em diferentes
profundidades e são quase tão abundantes quanto o resto das bactérias. São aeróbios e heterotróficos,
entre outras substâncias, utilizam a quitina como fonte de carbono. Solos ricos em matéria orgânica os
beneficiam devido ao carbono aproveitável, bem como à presença de restos vegetais, esterco e derivados
de proteínas.
Não possuem grande capacidade competitiva, por isso são relativamente escassos nas fases iniciais de
decomposição vegetal. Sua densidade e atividade aumentam na fase final de degradação, após a atuação de
fungos e bactérias, quando os nutrientes tornam-se limitantes e a pressão dos concorrentes diminui. O gênero
mais abundante é Streptomyces.
• Cianobactérias: São bactérias capazes de fotossintetizar e fixar N2 (Anabaena, Nostoc, Chrococcus,

Oscillatoria). Eles podem ser de grande importância em arrozais inundados porque fornecem oxigênio e
nitrogênio ao arrozal. Eles também fornecem estimulantes de crescimento. A contribuição de oxigênio da
fotossíntese costuma ser de grande importância devido às necessidades das raízes submersas. Quando o pH
é superior a 6 e o teor de fósforo é elevado, predominam afloramentos de cianofíceas em solos alagados ,
geralmente pertencentes aos gêneros Anabaena, Nostoc, Oscillatoria e Calothrix.
Fungos: embora não sejam os organismos mais importantes do solo, contribuem com uma parte
significativa da biomassa, devido ao seu grande tamanho. Além disso, são os principais agentes de
decomposição em ambientes ácidos. Por serem heterotróficos, dependem da disponibilidade de substratos de
carbono oxidáveis. Ao incorporar substratos de carbono, a comunidade aumenta e a dominância relativa
de gêneros como Aspergillus, Fusarium, Mucor, Penicillum e Trichoderma também varia. Algumas espécies são
abundantes durante o período inicial de decomposição e depois diminuem acentuadamente,
enquanto outras mantêm níveis elevados durante longos períodos de tempo. Em geral são aeróbios por isso
se encontram na camada mais superficial do solo. A sua actividade é também regulada por outros factores: -
alguns géneros estão associados a determinadas comunidades vegetais.Uma relação importante é aquela
que ocorre entre raízes de plantas superiores e fungos micorrízicos (simbiose). Entre os
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Os gêneros de fungos mais abundantes no solo são gêneros como: rhizopus, Penicillum,
fusarium, curvularia.
FUNÇÕES DOS MICRORGANISMOS NO SOLO
Intervenção na génese (formação) do solo
Este desenho mostra os processos de formação do solo, gênese de um solo, da esquerda para a
direita um solo que está se formando seria representado do lado direito um solo já desenvolvido
com a intervenção do homem onde vemos características de desenvolvimento de diferentes
perfis de solo com sucessão de horizontes.
• No início da fase de formação do solo, verifica-se que a rocha mãe sofre processos de ruptura
devido a mudanças de temperatura, ação da água, etc. gerando um material mais fino, mas
ainda inorgânico. Para que se iniciem as etapas de formação da matéria orgânica em um solo,
é necessário que haja uma colonização de organismos vivos.
que são capazes de viver em um ambiente onde nem N nem C ainda estão organicamente
disponíveis, ou seja, aqueles que são capazes de sobreviver às custas do C inorgânico, ou
seja, do CO2, e do N2 presente e abundante no ar. Esses organismos são bactérias do grupo
das cianobactérias porque combinam as capacidades de vida autotrófica e a capacidade de
usar N gasoso.
• Uma vez estabelecidas algumas porções de MO, elas liberarão N para o solo a partir de
forma inorgânica por processos de mineralização e, portanto, estarão disponíveis
para sucessivos desenvolvimentos de seres vivos que já necessitam de N mineralizado
da MO e portanto nestas primeiras etapas de colonização, organismos que sejam
capazes de utilizar C inorgânico e também N gasoso são muito importantes. Também
As associações micorrízicas que as plantas estabelecem com os fungos que permitem a
exploração do solo e a absorção de nutrientes são de grande importância. Os microrganismos
foram os primeiros colonizadores e os que permitiram o desenvolvimento da MO no
processo de formação do solo.
. Aumento da superfície de captura por Micorrizas.

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Provoca uma associação simbiótica chamada micorrizas entre fungos e plantas e o principal para o
crescimento das plantas se dá pelo aumento da superfície ou área de absorção de nutrientes que essa associação
gera.
. Decomposição de restos vegetais, animais e microbianos.
. Síntese de húmus.
Devido ao papel de decompositores que bactérias, fungos e outros microrganismos possuem, eles liberam material
inorgânico para o solo através do processo de mineralização a partir da decomposição da matéria orgânica contida
em restos vegetais, animais e microbianos, pois são os mais simples de serem atacados por microrganismos.
Embora no processo de degradação haja liberação desses componentes inorgânicos, parte dos componentes
orgânicos de plantas, animais e microrganismos, neste processo de degradação eles ressintetizam, fundem ou
geram materiais mais estáveis que compõem o húmus.
O húmus é uma substância formada por produtos orgânicos de natureza coloidal, proveniente da decomposição
de restos orgânicos. É encontrada principalmente nas partes superficiais de solos com atividade orgânica.
Os microrganismos também estão envolvidos na mineralização do húmus. Este húmus é muito mais complexo
e mais difícil de ser atacado por microrganismos; embora seja atacável, nem toda a fração do húmus é facilmente
decomponível.
Sua lenta mineralização (1-2% ao ano) faz dessas substâncias o verdadeiro reservatório de nutrientes do
solo, liberando lentamente íons minerais que podem ser aproveitados pelas plantas.
A importância dos microrganismos e da fauna nos diferentes processos que levam à humificação:
• Mineralização de materiais originais.

• Formação de subunidades estruturais e sua posterior condensação.
Em resumo, a maior parte dos restos vegetais, animais e microbianos constituirão esta fração de compostos
minerais, enquanto uma fração muito pequena do húmus se tornará inorgânica, mas se analisarmos quanto dos
compostos inorgânicos de um solo, vem dos restos e húmus, verificar-se-á que a maior parte, por exemplo, do NH3
virá da mineralização do húmus. Isso ocorre porque em quantidade o húmus representa uma fração muito maior em
termos de peso de uma massa de solo.
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do que aquilo que constitui os restos de uma colheita ou de animais e os microrganismos do solo.
. Solubilização de nutrientes.
Outra função que se destaca é a capacidade dos microrganismos em solubilizar determinados compostos, como o P.
Os compostos insolúveis em P não são absorvíveis pelas plantas e, portanto, não são úteis para o seu crescimento.
Portanto, a importância dessa capacidade de solubilizar o P do solo pode ser aproveitada para gerar certos compostos
insolúveis de P que ficam disponíveis para que as plantas possam absorvê-los. Pelo contrário, a precipitação remove
nutrientes das plantas, como o ferro, da solução do solo. São também processos físico-químicos, mas envolvem etapas
prévias de ação microbiológica. Portanto, o desenvolvimento de microrganismos que sejam capazes de solubilizar P é
de interesse para sua aplicação na agricultura.
. Patógenos de plantas
Os microrganismos também são capazes de gerar algum tipo de ação que prejudica o crescimento das plantas, sendo
eles chamados de microrganismos fitopatogênicos. Por exemplo, fungos que invadem o interior das raízes, produzindo,
entre outras doenças, o Damping off.
Fixação de N atmosférico
Existem organismos que são capazes de utilizar essas fontes de N. Esses organismos fazem parte de diferentes
ambientes, mas são amplamente estudados no solo pela capacidade que lhe conferem de utilizar uma fonte diferente
de N, que é o que normalmente ocorre em a planta. . existir
organismos que estabelecem relações simbióticas com plantas, como microrganismos fixadores de N e nódulos
de leguminosas
Os nódulos são onde vivem as bactérias e desta forma podem utilizar uma fonte de N, e formar ligações que permitem
à planta utilizar esta fonte.
FATORES EDÁFICOS QUE INFLUENCIAM A DISTRIBUIÇÃO DE MICRORGANISMOS
Textura e estrutura do solo: Os diferentes componentes do solo estão associados, conferindo uma textura e estrutura
particulares. Um agregado é um conjunto de partículas minerais ligadas por compostos orgânicos e organismos
vivos. O espaço entre os agregados são os poros do solo, por onde circulam o ar e a solução do solo. A estrutura
refere-se a como essas partículas estão dispostas e determinam a porosidade que
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pode ter esse solo. Textura refere-se à proporção que partículas de diferentes tamanhos
compõem em um solo, como areia , silte, argila, dependendo se o solo é mais rico em teor de
areia, silte ou argila, elas terão uma textura diferente.
O diagrama mostra o desenvolvimento das raízes, das hifas fúngicas que circundam as
partículas maiores, os diferentes componentes da maior fauna do solo (nematóides, ácaros)
estão localizados nos poros maiores, enquanto as bactérias, os actinomicetos e os
componentes menores estão localizados nos poros maiores. pequenos espaços
porosos. A localização das hifas ao redor das partículas, bem como a segregação das gomas
por bactérias e diversos microrganismos do solo, contribuem para estabilizar e manter as
partículas unidas, garantindo que a estrutura seja mantida ao longo do tempo.
Conteúdo de umidade e aeração: o gráfico representa o desenvolvimento da população

microbiana dependendo dos diferentes conteúdos de água. Quando o teor de umidade é
um desenvolvimento microbiano muito baixo não é possível e à medida que o teor de
umidade aumenta o desenvolvimento torna-se cada vez maior, até chegar a um ponto em que
o aumento da umidade faz com que a água ocupe locais onde antes eram ocupados pelo ar,
gerando assim uma falta de aeração, é limita as populações microbianas que necessitam
de oxigênio molecular. Este fator começa a ser o fator limitante porque provoca a queda à
medida que nos movemos para a direita, até chegarmos a um ponto em que a população
que está presente é aquela que se desenvolve anaerobicamente e, portanto, torna-se constante
à medida que nos movemos.
De modo geral, pode-se afirmar que o teor de umidade não é de forma alguma um fator
limitante no desenvolvimento das populações microbianas, mas sim o que as limita é
a disponibilidade de oxigênio.
PMP:Ponto de murcha
permanente
CC: Capacidade de campo

Perto de 60% do teor de água da capacidade de campo é o máximo desenvolvimento microbiano, pois é neste
ponto que se alia a melhor disponibilidade de umidade com a melhor aeração para as populações do solo. Isso
significa que, se se deseja desenvolver microrganismos no solo, que é seco e deve ser colocado em ótimas
condições de umidade, deve-se trazê-lo para 60% do teor de água do CC.
Definições:
• PMP (ponto de murcha permanente): refere-se ao teor de água do solo abaixo do qual as plantas não conseguem
absorver a água do solo e, portanto, provoca o seu murchamento e subsequente morte.
• Capacidade de campo CC: ocorre quando o teor de água do solo está cobrindo todas as macroporosidades do solo,
deixando seus microporos livres, permitindo aeração adequada.
• Alagamento: teor máximo de umidade que o solo pode suportar
pH: Em geral, a faixa ótima em que há maior desenvolvimento microbiano é próxima do pH 7, mas não significa que
quando o pH se afasta deste ponto não haja desenvolvimento de microrganismos e os processos degradativos não
sejam realizados, mas sim que são substituídos por diferentes tipos de microrganismos que toleram pH alto ou
baixo. Por exemplo: em ambientes ácidos os fungos predominam sobre as bactérias, e os processos de
decomposição ficam mais lentos porque esses microrganismos são um pouco menos eficazes na realização
da degradação, então esses processos são realizados, mas em velocidades menores. Em ambientes alcalinos
predominam os actinomicetos. As bactérias em geral estão associadas a solos neutros.
Chão Ph. Bactérias Actinomicetos Fungo
marly cinza 7,8 1,8x104 2,2x106 3,6x104
Argila marrom 7.6 2,5x106 1,7x106 5,9x104
argila vermelha 6.4 1,5x106 2,4x105 7,5x104
solo tropical 4.4 1,2x105 7,5x104 2,5x105
Podzol arenoso 3.8 1,5x104 2,2x104 1,3x105
Temperatura: geralmente a grande maioria dos microrganismos se desenvolve em faixa mesófila, mas há
alguns que necessitam de temperatura mais elevada, principalmente aqueles microrganismos
envolvidos na degradação da matéria orgânica nitrogenada (proteínas, por exemplo), como os processos de
amonificação , que é afetado positivamente pelo aumento da temperatura. Portanto, não se pode afirmar que apenas
a faixa mesofílica favorece o desenvolvimento de microrganismos, mas sim depende do processo de que estamos
falando.
Matéria orgânica: como a maioria dos microrganismos são heterotróficos, dependerão do tipo de substrato em
que podem se desenvolver. Quanto maior o teor de matéria orgânica, pode-se afirmar que haverá maior número de
microrganismos.
O gráfico (análise de regressão linear) relaciona o teor de carbono orgânico ao teor de carbono da biomassa
microbiana do solo (uma forma de medir os microrganismos do solo); onde podemos perceber que,
em sua maioria, um maior teor de matéria orgânica favorece o desenvolvimento da população microbiana.
Porém, a relação não é direta, ou seja, todos esses padrões gerais de distribuição são muito rígidos, pois nem
sempre quando há maior quantidade de MO haverá maior número de microrganismos, mas também há
casos em que menor disponibilidade de MO gerar um maior número de microrganismos. Isso ocorre porque a
distribuição dos microrganismos no solo é muito heterogênea. Mas, em geral, o maior número de
microrganismos são heterotróficos e necessitam de um substrato de carbono, que é fornecido pela matéria orgânica
do solo.
AVALIAÇÃO GLOBAL DE COMUNIDADES MICROBIANAS E GRUPOS FUNCIONAIS
Raramente um ambiente natural conterá apenas um tipo de microrganismo; na maioria dos casos existe uma grande
variedade. Os microrganismos são isolados da natureza em culturas puras para sua identificação e estudo de sua
ecologia. Existem muitas maneiras de avaliar as populações microbianas do solo. Tradicionalmente, era através
do uso da microscopia,
Numa outra etapa , foram desenvolvidos métodos de cultivo e análises químicas. Mais recentemente, foram
incorporados estudos de processos . Cada um deles visa avaliar alguma questão
diferente da população microbiana.
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Microscopia:
• Morfologia: é feita uma suspensão a partir de uma certa quantidade de solo, adicionamos solução
fisiológico ou você pode até trabalhar com água. Em seguida, é agitado e uma porção dessa mistura
pode ser diluída ou levada diretamente para uma lâmina, devidamente corada e observada
ao microscópio. Com esse método, você pode observar a morfologia dos microrganismos,
a presença de fungos, o desenvolvimento de esporos e hifas , ou ainda pode observar bactérias,
protozoários e diversos tipos de microrganismos presentes na amostra de solo.
• As estimativas de biovolume medem a quantidade de massa de microrganismos presentes

naquele solo através de microscopia
Métodos de cultivo, análise química
• Contagem cultivável: Em geral, as contagens são realizadas em meio sólido ou líquido de

microrganismos cultiváveis, capazes de se desenvolver em meio de cultura artificial. Na
realidade, o meio solo é um meio muito rico que apresenta diversas condições e que é muito difícil
de repetir em laboratório. Existe o ágar extrato de solo, que visa replicar as condições do solo, mas
na verdade não consegue isso e apenas uma parcela muito pequena dos microrganismos que estão
presentes no solo conseguem realmente se desenvolver neste meio. A porção de
microrganismos que pode realmente ser cultivada em meio agarizado ou líquido não ultrapassa
1 a 10% do que é a verdadeira população de microrganismos do solo.
Esses métodos consistem em fazer uma suspensão do solo, as correspondentes diluições e semear
em meios adequados, sejam líquidos ou sólidos.
ÿ Nos sólidos, a contagem é feita com base no aparecimento de colônias e, portanto,

uma estimativa de quantos estão na amostra original.
ÿ A contagem em meio líquido consiste na preparação de uma suspensão que é então diluída e
semeada em uma série de tubos, que contêm caldos, ou seja, meios líquidos, que permitem
o desenvolvimento microbiano. Com isso, de acordo com o número de tubos positivos, onde
realmente há desenvolvimento microbiano, a quantidade de microrganismo que a amostra
possuía pode ser estimada através do método do número mais provável.
• Biomassa microbiana do solo: Sem parar para estudar grupos específicos de

organizações, muitas vezes é interessante conhecer a sua atividade globalmente através do uso de
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técnicas que avaliam a atividade da micropopulação como um todo. São técnicas utilizadas para
informar rapidamente o potencial biológico desses ambientes.
Estas técnicas procuram determinar algum componente químico daquela fração viva do solo. O mais comumente
determinado é o teor de carbono da massa microbiana.
Há também determinações do teor de nitrogênio e fósforo , de acordo com o interesse ou estudo que se deseja
realizar.
ÿ Método de fumigação-incubação: É utilizado na determinação de carbono na biomassa microbiana. São
colhidas amostras de solo, algumas das quais se destinam a ser fumigadas e outras são
utilizadas como brancos.
A fumigação das amostras de solo é feita com um agente químico como o clorofórmio que
mata esses microrganismos. Ao desinfetar o solo, a maioria dos microrganismos morre e seus restos
são mineralizados quando reinoculados com solo fresco (ambas as amostras são reinoculadas). Uma
pequena fração da matéria orgânica é rapidamente convertida em CO2 e representa biomassa. Esses
microrganismos encontram carbono orgânico de fácil degradação pertencente aos cadáveres de
microrganismos mortos, por isso estão em um ambiente onde podem se desenvolver adequadamente.
Os picos de CO2 de ambas as amostras (o branco não fumigado e a amostra fumigada) são medidos
após um período de incubação.
Desta forma, a massa microbiana será calculada como a diferença entre a quantidade de CO2
produzida no solo que foi fumigado menos a quantidade de CO2 que normalmente é produzida no
solo que não foi fumigado. Essa diferença será dada pela massa de microrganismos que foram
mortos.
ÿ Método de medição de ATP: Quando as células microbianas são lisadas ou rompidas, o ATP é um dos
componentes celulares mais rapidamente degradados ou liberados. Portanto, sua estimativa está
associada ao que possuía a massa microbiana viva do solo.
Consiste em lisar as paredes celulares dos microrganismos do solo e estimar a quantidade de ATP
através da incorporação de uma enzima chamada luciferase, que na presença de ATP gera luz.
Um equipamento chamado luminômetro mede a quantidade de luz produzida e, portanto, estima a

quantidade de ATP e, consequentemente, a massa do microrganismo.
Métodos de estudo de processos
Os estudos de processos envolvem o conhecimento das atividades das enzimas presentes em um solo, que
em geral estarão relacionadas à atividade dos microrganismos. Esta avaliação permite-nos não
quantificar diretamente o número de microrganismos ou a massa do microrganismo, mas permitirá fazer
estimativas de degradação de compostos de carbono ou atividades de certos tipos de enzimas.
• Uma das atividades mais frequentemente medidas no solo é a respiração. É um método populacional global
porque não distinguimos que tipo de microrganismo realiza a atividade respiratória. É realizada através da
captura do CO2 gerado pelo processo respiratório ou do consumo de O2 que esta atividade implica. O
CO2 é freqüentemente produzido ; ele fica preso em um álcali, como o hidróxido de sódio, e é
quantificado por retrotitulação. Utilizamos a atividade respiratória como meio de população global porque a
maioria dos microrganismos são do tipo quimioheterotrófico, portanto quando degradam o substrato orgânico
através de processos respiratórios e fermentativos, um dos produtos que desprezam será o Co2 .
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• Outras atividades frequentemente medidas em amostras de solo são as atividades de enzimas, que ativam ou
geram o aparecimento de determinados produtos ou atuam na degradação de determinados substratos. Os
métodos podem ser realizados basicamente de duas formas: 1) colocar uma certa quantidade de substratos
em uma amostra de solo e medir o desaparecimento desse substrato após um certo tempo. 2) colocar o
substrato adequado para a enzima a ser avaliada e medir a aparência desse produto.
Ferramentas moleculares aplicadas a avaliações biológicas em solos
Estas ferramentas são aplicações recentes baseadas no desenvolvimento destes métodos moleculares e
geralmente consistem no estudo de ácidos nucleicos extraídos diretamente de amostras de solo. Estes estudos
constituem um avanço no conhecimento dos ecossistemas, fundamentalmente devido ao grande número
de microrganismos que estão presentes no solo, dado o substrato complexo que o habitat do solo implica ou o
local onde os microrganismos se podem desenvolver, e constitui um grande número de microrganismos. não
pode ser cultivado diretamente em laboratório. Estas ferramentas moleculares permitiram reconhecer a presença
de microrganismos que não teriam sido possíveis identificar como presentes naquele habitat com
métodos não moleculares.
UNIDADE 11: Rizosfera
A Rizosfera é a parte do solo onde o sistema radicular induz a proliferação microbiana. É definido como o volume
de solo influenciado pela presença de raízes de uma planta viva, cuja extensão pode variar de acordo com o
tipo de solo, a espécie da planta, sua idade e outros fatores. Consequentemente, é o local físico de interação
entre a planta e o microrganismo, onde os microrganismos influenciam o crescimento da planta e a planta atua no
seu crescimento.
Nesta área distinguimos:

• A endorizosfera (área do tecido cortical onde os microrganismos podem proliferar, ou seja, porção da raiz que
pode ser invadida pelos microrganismos proliferados na área).
• O rizoplano (plano de contato das raízes com o solo ou superfície radicular).

• O solo rizosférico (porção de solo que está em contato íntimo com a raiz, compreendendo entre 1 - 2 mm
de solo da superfície da raiz).
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A rizosfera é caracterizada pela presença de exsudatos ou escamas radiculares produzidas

pelas plantas à medida que crescem, formadas por compostos de baixo peso molecular como
açúcares, ácidos orgânicos e aminoácidos, mucigel e lisados radiculares liberados a partir da
autólise das células radiculares. Esses compostos possuem efeito estimulante sobre
a biota do solo, porém o estímulo é diferencial já que nem todos os grupos são beneficiados.
Em geral, os microrganismos que mais necessitam de fatores de crescimento são aqueles
que proliferam em maior proporção, etc. Em geral, esta área afeta positivamente a maioria
dos microrganismos neste habitat que são heterotróficos , por ex. bactérias dos
gêneros Pseudomonas sp., Azospirillum sp., Beijerinkia sp.; No entanto, os microrganismos
nesta área do solo mantêm um equilíbrio instável devido, por ex. à introdução de diferentes
espécies de plantas no solo. Ao mesmo tempo, nesta área os microrganismos
beneficiam a planta de diferentes formas, por exemplo mobilizando determinados
nutrientes, produzindo substâncias que promovem o crescimento da planta, actuando como
antagonistas de agentes patogénicos, aumentando a sua superfície de absorção.
As densidades bacterianas e fúngicas presentes nesta zona de troca direta com a planta
podem ser entre 10 e 50 vezes mais abundantes do que em solo não rizosférico.
A presença de microrganismos benéficos ao redor da raiz estabelece e acelera processos
bioquímicos que influenciam o crescimento e desenvolvimento das plantas, o que está
associado ao aumento dos elementos químicos disponíveis e à produção de substâncias
de crescimento ou controle de patógenos. Portanto, a rizosfera é o “ambiente de maior
atividade física, química e principalmente biológica, pois existe um efeito recíproco entre os
dois organismos”.
O efeito da rizosfera sobre um microrganismo é medido através do coeficiente ou quociente

rizosférico (R/S), que representa a quantidade do microrganismo na zona rizosférica (R) em
relação à quantidade no solo não rizosférico (S). . Essa relação pode ser modificada sob a
ação de diversos fatores, que atuam não apenas diretamente, mas principalmente
indiretamente, por meio de suas influências no crescimento das plantas e com a
correspondente transformação na quantidade e qualidade das raízes formadas. Pode-
se deduzir que, se o CR for maior que 1, esses grupos de organismos são estimulados na
zona rizosférica; se for próximo de 1, não há efeito de estimulação porque
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Não há alteração no número, e se CR assumir um valor entre zero e um verá que o microrganismo realmente está
prejudicado naquela área.
Microrganismos Rizoféricos
FUNGOS DE RAIZ: Micorrizas
Constitui uma associação simbiótica entre um fungo e a raiz de uma planta superior da qual ambos se beneficiam.
Nessa associação, a planta fornece ao fungo carboidratos (produto de sua fotossíntese) e um nicho ecológico para
completar seu ciclo de vida; enquanto o fungo, por sua vez, permite à planta uma melhor absorção de água e
nutrientes minerais de baixa disponibilidade no solo (principalmente fósforo).
CLASSIFICAÇÃO DA MICORRIZA
Existem vários tipos de micorrizas descritos, com base nas características da infecção (de acordo com a forma
como o fungo penetra na raiz, nas estruturas características que o fungo desenvolve e nas espécies fúngicas capazes
de infectar a planta hospedeira). que estabelecem a simbiose. Os dois principais tipos de micorrizas
reconhecidos são: ectomicorrizas ou endomicorrizas.
Devido à sua importância agronómica, o estudo incidirá em três tipos de micorrizas: ectomicorrizas,
micorrizas vesiculares arbusculares e micorrizas ericoides.
1) Micorrizas Ectotróficas ou Ectomicorrizas: agrupa aquelas micorrizas que se caracterizam porque o

micélio fúngico não penetra nas células do córtex radicular, mas forma um envelope ao redor das raízes
denominado manto.
As ectomicorrizas são caracterizadas porque as espécies de fungos que formam esse tipo de micorrizas
possuem hifas septadas. O desenvolvimento fúngico forma um manto externo de hifas
ao redor da raiz dando-lhe uma aparência única. Algumas dessas hifas estendem-se para o solo circundante, enquanto
outras hifas penetram na raiz. Estes últimos ocupam os espaços intercelulares do córtex radicular, formando a
chamada rede lesiva. Este desenvolvimento micelial característico não progride além da endoderme.
Raízes colonizadas por ectomicorrizas apresentam alterações morfológicas, como raízes mais curtas e espessas
que as não infectadas, e também apresentam ramificações típicas através de sucessivas bifurcações
dicotômicas. São particularmente abundantes em espécies de interesse florestal.
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2) Micorrizas Endotróficas ou Endomicorrizas: é a associação em que o micélio fúngico

penetra no interior das células do córtex radicular.
Micorrizas vesiculares arbusculares: Caracteriza-se porque o fungo micorrízico penetra entre as

células radiculares e algumas hifas desenvolvem uma estrutura ramificada dentro de seu citoplasma.
característica chamada “arbúsculo”. Portanto, diferentemente dos fungos
ectomicorrízicos, seu desenvolvimento dentro da raiz é intra e intercelular.
Eventualmente, as hifas do fungo formam outras estruturas ovóides chamadas “vesículas”,
que contêm material lipídico. As vesículas são consideradas locais de armazenamento, enquanto
o arbúsculo é considerado o local de maior troca entre a planta e o fungo.
Raízes infectadas com essas micorrizas não apresentam as alterações morfológicas que os
fungos ectomicorrízicos apresentam e, portanto, sua observação requer observação
microscópica da raiz. Isso permite que as hifas, vesículas e arbúsculos sejam vistas.
Muitas destas espécies de plantas hospedeiras incluem plantas herbáceas, árvores e arbustos,
onde as de interesse agronómico incluem gramíneas, leguminosas, culturas hortícolas pobres
em sistemas radiculares, como cebolas, e espécies de árvores, como os citrinos.
Uma diferença importante é que os fungos formadores de MVA não puderam ser cultivados em
laboratório, pelo que parecem ser completamente dependentes da sua planta hospedeira.
para obter suas fontes de carbono, diferentemente das ectomicorrizas. Para estes últimos,
foram desenvolvidos meios de cultura sintéticos , que possibilitaram o desenvolvimento de
inoculantes comerciais.
Diagrama de uma raiz mostrando o desenvolvimento de micorrizas e as estruturas que

formam ectomicorrizas e endomicorrizas
15
Micorrizas ericoides: tipo de associação micorrízica

que apresenta importância agronômica, especialmente
para o cultivo de mirtilo .
Neste tipo de micorrizas, as hifas do fungo não formam

um manto ao redor da raiz. Estes penetram nas células
corticais e enrolam-se em uma alça formando espirais ou
pelotões de diferentes densidades características,
onde penetram na parede, mas não no citoplasma. Foi
demonstrado que a duração desta associação não
excede 11 semanas.
Figura: Micorrizas ericóides. Os pelotões formados pelas hifas do fungo são observados na célula
vegetal
EFEITOS DA MICORRIZA NO CRESCIMENTO DE PLANTAS
• Aumentam a área fisiologicamente ativa da raiz, aumentando a superfície de captura da planta

micorrízica. Desta forma a planta poderá alcançar fontes de nutrientes pouco móveis
(principalmente P) em relação a uma raiz não micorrízica. Na maioria dos solos, grande
parte do P está em baixa disponibilidade, seja porque está na forma insolúvel ou porque está
associado a outros compostos. A fonte de P disponível para as plantas é aquela encontrada
na solução do solo, que é equilibrada a partir da fase sólida do solo. Quando a taxa de
absorção dos íons fósforo pela planta é maior que o seu deslocamento, forma-se uma zona de
esgotamento desse nutriente ao redor da raiz, portanto a planta micorrízica tem a vantagem
de poder explorar locais do solo cujas raízes não conseguiam. alcançar se não fosse
colonizado pelo fungo.
16
• Além disso, as plantas micorrízicas melhoram a absorção de água e outros nutrientes
como Zn, Mg, Mn, N, K e Ca.
• A presença de um manto hifal em plantas infectadas com fungos ectotróficos proporciona uma
proteção física contra o ataque de nematóides e patógenos nas raízes.
Rizobactérias promotoras de crescimento de plantas (PGPR)
São bactérias benéficas que colonizam a rizosfera e que, quando inoculadas nas sementes, induzem o aumento do
crescimento das culturas, traduzindo-se em aumento da produtividade.
Aumentos de rendimento de 5 a 30%, em comparação aos controles que não receberam inoculação.
Algumas das bactérias mais estudadas incluem espécies de Acetobacter, Azospirillum, Azotobacter, Bacillus,
Pseudomonas, Burkholderia, Herbaspirillum, etc.
Mecanismos de promoção do crescimento das plantas:
Nem todas as bactérias são capazes de desenvolver todos os mecanismos descritos abaixo, mas geralmente
terão um principal acompanhado de outro, eles
filho:
• Produção de fitohormônios: hormônios que melhoram o crescimento das partes das plantas.
Ej.: Azospirillum brasilense.
• Fixação assimbiótica de N2 : os PGPR estão localizados na zona da rizosfera, mas não formam uma estrutura
que estabeleça uma verdadeira simbiose com a planta. Portanto, fornece uma quantidade menor de N2 do
que um organismo simbiótico.
• Produção de sideróforos: evita a entrada de patógenos, pois para invadirem as raízes com eficiência, eles
necessitarão de certa quantidade de ferro presente na zona rizosférica. Os sideróforos controlam os
patógenos bloqueando o ferro presente na zona rizosférica, tornando-o menos disponível aos patógenos.
• Síntese de antibióticos, enzimas que degradam a parede celular de fungos e/ou compostos
fungicidas para biocontrole de doenças.
• Diminuição do teor de etileno no ambiente rizosférico através de enzimas:
Quantidades excessivas de etileno no ambiente rizosférico podem causar diminuição no crescimento das plantas.
Possuem enzimas que lhes permitem reduzir a produção de gases naquele ambiente, estimulando assim o
crescimento das plantas.
• Solubilização de fosfatos e outros minerais para poderem ser capturados do

plantas.
Legislação Regulamentadora de Produtos Biológicos (PGPR)
Resolução SENASA 0264/2011
• Concentração mínima para produtos formulados à base de Azospirillum no vencimento de 1*107 UFC/
ml ou gr.
• Os produtos coinoculados com rizóbios e PGPR (promotores de crescimento vegetal) deverão ser testados em
três campanhas em três zonas agroecológicas.
diferente, com avaliação estatística para poder ser cadastrado.
17
Organismos rizosféricos que estimulam o crescimento das raízes:
Azospirillum
• Bactéria PGPR mais comercializada no país.
• Capacidade de aumentar o crescimento das raízes das plantas através da produção de

fitohormônios, e se desenvolve muito bem no ambiente rizosférico.
• Dentro deste gênero existem diversas espécies: Azospirillum brasilense (Cepa Az39):
atualmente mais importante em nosso país em inoculantes e isolada no INTA Castelar. A.
lipoferum. A. amazonense. A. halopraeferens
Principal efeito dos Azospirils nas raízes
Aumento do desenvolvimento radicular: forma um maior número de raízes laterais, formando uma
maior área de absorção.Isso permite à planta, em condições de estresse hídrico ou falta de umidade
no solo, a capacidade de explorar uma área maior de solo e, portanto, portanto, alimente-se melhor.
Nos casos em que não há déficit hídrico, o Azospirillum não produz tantos benefícios, podendo às
vezes até causar alguma lentidão no desempenho.
Secreção de fitorreguladores ou fitohormônios como: Auxinas, Citocininas e Giberelinas
Efeito dos Azospirils no trigo e no milho
No cultivo do milho, devido às necessidades hídricas e ao período de estresse que geralmente ocorre
no verão, o efeito deste microrganismo é particularmente importante.
Com base em ensaios realizados pelo INTA em nosso país, em diferentes zonas agroecológicas a
resposta à aplicação de Azospirillum brasilense é para o trigo um aumento no rendimento de 249 kg/ha,
enquanto para o milho um aumento de 400 kg/ha.
Efeito dos Azospirillos na coinoculação com rizóbios em leguminosas
Verificou-se que quando os rizóbios são coinoculados com Azospirillum, este consegue gerar
pontos maiores através dos quais os rizóbios podem penetrar (para outras células),
chamados de “pontos de infecção”, e, portanto, formarão maior número de nódulos e massa nodular de
uma leguminosa. Isso traz uma vantagem, pois a massa nodular está diretamente relacionada à
quantidade de N2 que é fixada e que pode ser aproveitada pela leguminosa.
Organismos rizosféricos que actúan como solubilizadores de P o biocontroladores:

Pseudomonas.
• Pseudomonas fluorescens: é utilizado como solubilizador de P, pois tem capacidade de

produzir enzimas fosfatase e ácidos orgânicos que aumentam a recuperação do fósforo
nativo do solo e melhoram a absorção do fósforo fornecido pela fertilização. Existe um meio
agarescens do tipo diferencial que revela as Pseudomonas
• Pseudomonas chlororaphis subp. aurantiaca: de tipo biocontroladora, se

mercados na Argentina.
Unidade 12
18
Ciclo Biológico do Carbono
Nos ecossistemas agrícolas , os resíduos culturais, a percolação nas folhagens, raízes e seus produtos de
descamação e exsudação, restos animais e microbianos passam a fazer parte da matéria orgânica do solo e sofrem
uma série de processos de degradação .
Através de processos respiratórios fermentativos, liberam minerais como nitratos, sulfatos, dióxido de carbono, etc.
Mas esses restos também podem ser ressintetizados para formar ácidos húmicos, fúlbicos e outros ácidos que
se tornarão parte do húmus do solo. Depois, através da fotossíntese, pode ser fixado, seja por plantas, seja por
microrganismos fototróficos, e também por microrganismos quimioautotróficos que realizam a quimiossíntese.
Eles garantem assim a continuidade dos ciclos geoquímicos. Os processos degradativos realizados pelos microrganismos
dependerão principalmente do nível de O2
O ciclo consiste em duas etapas:
Primeira etapa do ciclo: fixação de CO2 ou CH4.

A redução de CO2 é realizada por organismos autotróficos: foto e quimiossintéticos. Em primeiro lugar,
plantas, algas, cianobactérias, bactérias fotossintéticas e bactérias quimioautotróficas.
Segunda etapa: mineralização

Os processos microbianos que dominam as transformações do carbono na natureza
filho:
ÿ mineralização-imobilização
ÿ redução de óxido
ÿ Solubilização-precipitação (caso de carbonatos em depósitos em solos e águas).
Papel dos microrganismos nas transformações da matéria orgânica
Biodegradação de moléculas orgânicas
Podemos dividir a matéria orgânica em duas categorias.
Matéria orgânica fresca, composta por contribuições de vegetação, folhas, caules, raízes, exsudatos, células
microbianas mortas e restos de animais. Todos estes componentes, de origem biológica, são submetidos a uma
série de processos que levam à sua biodegradação com a participação de equipas enzimáticas especializadas de
microrganismos. A fauna
Exerce efeito acelerador do processo, reduzindo o tamanho das partículas (ação abrasiva ou retificadora).
19
A matéria orgânica nativa ou húmus, formada por processos de decomposição e ressíntese da
matéria orgânica fresca, possui estrutura diferente da matéria orgânica original. Sua estabilidade
contra a decomposição é maior que os demais componentes orgânicos do solo. As taxas nas quais
os compostos carbonáceos são mineralizados do húmus são inferiores às taxas de mineralização da
matéria orgânica fresca. Porém, a quantidade de húmus no solo é muito maior do que a
quantidade de matéria fresca proveniente dos restos da colheita das lavouras. Portanto, as contribuições
de minerais do húmus são em quantidades maiores do que as da matéria orgânica fresca.
Os resíduos frescos encontrados em maior quantidade nos sistemas agrícolas são aqueles
provenientes de resíduos de culturas.
FATORES QUE CONDICIONAM A VELOCIDADE DE DECOMPOSIÇÃO DO MO
• A mineralização dos restos depende fundamentalmente de vários fatores, tais como: em que
estágios fenológicos a planta se encontra, de que parte da planta estamos falando, pois
esses fatores afetam diretamente a composição química e, portanto, a degradação pelos
microrganismos. Se os restos vegetais corresponderem aos primeiros estágios fenológicos, sua
composição química possui maior proporção de carboidratos solúveis e menos do tipo estrutural,
portanto, a mineralização será mais rápida (e não é a mesma que o caule permanece no solo. de).
um milho do que os restos das folhas).
• O outro factor importante a ter em conta na degradação dos restos carbonáceos é a disponibilidade
de azoto no resto, uma vez que limitará o crescimento de microrganismos.
• Natureza do material vegetal: A composição química média de uma planta é

Formados em maior proporção como células, hemiceluloses e lignina, proteínas e ácidos
nucléicos, lipídeos e cinzas aparecem em menor proporção. Cada um deles possui complexidade
diferente em termos da facilidade de degradação por microrganismos.
20
Os compostos de carbono que podem ser encontrados em restos vegetais em geral são de dois tipos: estruturais
(celulose, hemicelulose, lignina) e de reserva (amido).
CELULOSE
Composto estrutural de carbonato formado por monômeros de glicose, mas a união desses monômeros é
diferente, portanto, sua degradação por microrganismos é diferente. É encontrada nas paredes
celulares e à medida que a célula cresce e amadurece há mais depósitos de celulose e hemicelulose. A
celulose está organizada em fibras e microfibrilas e representa 35 a 50% do peso seco da biomassa vegetal.
Na estrutura da celulose, os monômeros de glicose são unidos por ligações beta 1-4 glicosídicas e, por
sua vez, as cadeias lineares de glicose são unidas por ligações de hidrogênio entre cadeias lineares adjacentes.
Microrganismos responsáveis pela degradação da celulose:
O grupo funcional dos celulolíticos é muito variado e é composto por bactérias actinomicetas,
fungos e protozoários. As bactérias são degradadoras ativas e algumas delas atuam como verdadeiras celulites,
ou seja, atacam a celulose nativa e a degradam até o fim. Os gêneros dessas celulites verdadeiras pertencem
ao gênero Cytophaga e Sporocytophaga.
21
Processo de degradação:
Este polissacarídeo é hidrolisado por um complexo enzimático chamado celulase.
Na degradação da celulose, o primeiro passo tem a ver com a intervenção do complexo enzimático 1. Este
complexo enzimático é pouco caracterizado e só está presente nas chamadas celulíticas verdadeiras. As enzimas
deste complexo enzimático quebram as ligações de hidrogênio entre as cadeias lineares de glicose e a
celulose nativa permanece em um estado denominado celulose ativada.
É então atacado pelo complexo enzimático Cx, que é composto por três enzimas que atuam extracelularmente.
Por serem enzimas extracelulares, atuam fora da célula e podem ser endoenzimas, ou seja, aquelas que
atuam nas regiões internas da molécula cortando e dando fragmentos mais curtos, ou podem atuar como
exoenzimas, ou seja, aquelas que atuam cortando de as extremidades da molécula. A partir disso, são
liberadas celobiose, celotriose e polissacarídeos de cadeia mais curta.
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A última etapa da degradação da celulose é catalisada pela beta glucosidase, que hidrolisa
celobiose, celotriose e outros oligossacarídeos de baixo peso molecular até que os monômeros de glicose
sejam liberados.
De acordo com as condições ecológicas de oxigenação do ambiente, a glicose pode ter duas vias de degradação:
em condições aeróbicas, os microrganismos seguem o metabolismo respiratório e a glicose é degradada em
dióxido de carbono, água, material celular e ácidos.
urônicos, di e trissacarídeos. Este último acabará na piscina de cogumelos. Em condições anaeróbicas
predominam os processos de fermentação e os produtos que podem resultar são dióxido de carbono, hidrogênio,
material celular, etanol e ácidos de cadeia.
curto.
AMIDO
Este composto químico é depositado nas células vegetais na forma de grãos. É composto por amilase e
amilopectina. Os polímeros de glicose são ligados por ligações glicosídicas alfa 1-4 e cada sexto monômero é
ramificado com uma ligação alfa 1-6.
Microrganismos responsáveis pela degradação do amido:
Grupo funcional: grupo de microrganismos que podem ou não estar taxonomicamente ligados,
mas que desempenham a mesma função ou atividade.
Neste caso, o grupo funcional amilolítico é muito diversificado e inclui bactérias, fungos e actinomicetos
(ex.: Bacillus sp.). Em geral, a maioria dos microrganismos possui uma enzima amilase responsável pela
degradação do amido.
As enzimas envolvidas (amilases) são extracelulares e podemos citar:
Nas amilases liberam maltose e glicose, enquanto nas amilopectinas liberam dextrinas de alto peso molecular.
1. Alfa amilase: são endoenzimas (quebram-se dentro da cadeia) e são responsáveis pela quebra das
ligações glicosídicas alfa 1-4,
2. Beta amilase: é uma exoenzima, ou seja, corta das pontas das cadeias e quebra as ligações alfa 1-4
glicosídicas.
23
3. Alfa amil 1-6 glucosidase: quebra as ligações alfa 1-6 onde estão os ramos da amilopectina.
Hemicelulosa ():
Polissacarídeos estruturais como mananas, xilanas e glucanas também são encontrados.

chamada Hemicelulose. Estes estão associados à celulose nas paredes das células vegetais. À medida
que as células crescem, compostos químicos como celulose, pectinas e lignina são depositados.
Composição química da hemicelulose
Em geral, são um conjunto heterogêneo de compostos chamados heteropolissacarídeos.

formada por uma cadeia principal de monômeros de pentoses, hexoses ou ácidos urônicos, que podem apresentar
mais ou menos ramificações na molécula com unidades diferentes da cadeia principal.
As hemiceluloses possuem estruturas ligadas por diferentes tipos de ligações, acetais ou glicosídicas, do tipo alfa
e beta.
Microrganismos responsáveis pela degradação da hemicelulose:
O grupo funcional que ataca a hemicelulose é muito diversificado , assim como as celulites, e são fungos,
bactérias, como por exemplo: Bacillus sp., Clostridium sp e actinomicetos. fungos: Trichoderma sp.,
Penicillum sp., Rhizopus sp.
As enzimas envolvidas são:

24
• xilanases, arabanases (endoenzimas e exoenzimas): xilose, polissacarídeos de 2 a 6
monômeros.
• Glicosidases: monômeros simples de açúcares e ácidos urônicos.
• Mananasas: libera manose
Quando os restos vegetais são incorporados ao solo, a fração de hemicelulose desaparece

inicialmente em alta velocidade, ou seja, aqui vemos que 43,5% da hemicelulose se
degradou após 4 dias. Mas com o passar do tempo, o processo fica mais lento.
Isto pode ser explicado porque os compostos que compõem a hemicelulose não são todos
igualmente lábeis e aqueles que são mais fáceis de degradar desaparecem primeiro e
aqueles que são mais difíceis de atacar permanecem. 1ª cadeias lineares e simples, 2ª ramificações.
A celulose, por outro lado, degrada-se lentamente no início. Aqui observa-se que após quatro dias
apenas 2,3% puderam ser degradados e o grupo de microrganismos que a ataca é denominado
flora zimogênica.Os microrganismos zimogênicos são aqueles que se tornam ativos quando
possuem um substrato alimentar adequado. Assim, o número de celulites aumenta à medida
que encontram mais substrato para atacar. Assim, percebe-se que o percentual é menor, mas com
o passar do tempo o percentual de degradação da celulose aumenta e até começa a ultrapassar
a hemicelulose.
Se fizermos um gráfico desses dados, observamos um gráfico desse tipo e se projetarmos as

curvas observaremos que a degradação da hemicelulose, que é a curva verde, é rápida no
início, depois vai desacelerando, e a da celulose, que é a curva O vermelho é lento no início,
depois ultrapassa a hemicelulose na quantidade degradada.
LIGNINA
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Composto carbonáceo estrutural que se degrada muito lentamente (produto pouco biodegradável) e
constitui entre 20 e 30% dos tecidos lenhosos. É encontrada nas paredes das células vegetais associadas
à celulose e à hemicelulose.
Composição química da lignina
A estrutura básica é aromática com anéis de benzeno e polímeros de unidades de fenilpropano. A

complexidade do composto também está relacionada ao grande número de ligações diferentes que unem
seus monômeros.
Microrganismos responsáveis pela degradação da lignina
Somente os fungos têm a capacidade de degradar completamente a lignina, e são eles que apodrecem a
madeira. É assim que surge a podridão parda, branca e mole , com diferentes graus de degradação.
Enzimas envolvidas:
Uma grande quantidade de enzimas oxidativas extracelulares que despolimerizam a lignina estão presentes na
podridão branca, razão pela qual às vezes é colocado um antifúngico em postes de madeira para prevenir essas
podridões causadas por fungos. Ex.: oxidativas, fenoloxidases (sobre compostos fenólicos), celobiose, quinona
oxidoredutases (sobre celulose e lignina); peroxidases: clivagem oxidativa de ligações éter.
Taxas de desaparecimento de compostos de carbono:
Se compararmos as taxas de decomposição dos compostos de carbono que vimos até agora, vemos um
gráfico deste tipo. Observa-se que primeiro desapareceriam os açúcares simples como o amido,
depois as hemiceluloses, a celulose e por último a lignina.
26
Condições ecológicas para a degradação de compostos de carbono
Temperatura: mesofílica.
Umidade do solo: 60 a 70% CC., para que haja uma combinação ótima de água e oxigenação onde
predomina o processo respiratório, embora também possa ocorrer em ambientes anaeróbios e também
próximo ao ponto de murcha permanente.
pH ideal: neutrófilos.
Tipos de solos: em solos argilosos deve-se levar em consideração que pode ocorrer absorção de enzimas
extracelulares pelas argilas do solo e, portanto, não poderiam atuar sobre os compostos.
Natureza do material vegetal: quantidade de N disponível (relação C/N, por exemplo, trigo (70-100/1)). A
disponibilidade de nitrogênio que a planta possui favorecerá ou não a degradação dos compostos
orgânicos.
UNIDADE 13
Ciclo Biológico do Nitrogênio
O nitrogênio é um dos elementos essenciais e constitui um dos macronutrientes mais importantes para a vida.
O nitrogênio combinado é encontrado em muitos solos em concentrações muito baixas e constitui,
depois da água, o fator limitante para o desenvolvimento dos vegetais, pois do solo as plantas
absorvem N na forma de nitrato e em alguns casos amônio para seu crescimento e produção. Porém,
vivemos imersos em uma atmosfera cujos 3/4 partes são nitrogênio.
Este elemento é de extrema importância, pois a sua disponibilidade está principalmente ligada à matéria
orgânica do solo, ao contrário do que acontece com outros elementos nutrientes, como o fósforo, cuja
disponibilidade depende da rocha-mãe que originou o referido solo.
Insumos líquidos de N para o planeta

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• Ar (N2): 75%
• Choques elétricos: 10%
• Industrial: 15%
Fixação química industrial
É a produção de fertilizantes de amônia e nitrogênio pela indústria a partir do nitrogênio atmosférico molecular do ar.
Neste caso, trata-se de fixação de nitrogênio de forma não biológica porque não há envolvimento de
microrganismos e é uma via industrial.
Atualmente, a grande maioria dos fertilizantes nitrogenados sintetizados industrialmente é fabricada a partir
de amônia. Essa amônia é obtida pela fixação química do nitrogênio atmosférico com hidrogênio gasoso
pelo procedimento Haber-Bosh. Os hidrocarbonetos são usados como fonte de hidrogénio , normalmente o metano
proveniente do gás natural, e depois o azoto e o hidrogénio são combinados a uma temperatura de 500 ºC e a uma
pressão de cerca de 200 atmosferas na presença de um catalisador, obtendo-se o amoníaco. Este processo Haber-
Bosh consome uma grande quantidade de energia.
choques elétricos
Essas reações ocorrem em condições naturais como consequência de descargas elétricas que fornecem
momentaneamente a energia necessária para criar óxidos de nitrogênio e até amônia, a partir do nitrogênio
atmosférico molecular, que eventualmente são levados pela água da chuva para o solo. A acção
sobre a fixação espontânea não é fácil, portanto, só poderemos intervir na fixação industrial e, claro, na
fixação biológica do azoto.
Fixação biológica de nitrogênio
É mediado por microrganismos do solo. A forma mais abundante de nitrogênio na natureza está no ar na forma de
nitrogênio molecular e esta forma não é diretamente utilizável pela maioria dos seres vivos. A fixação biológica
de nitrogênio é a transformação desse nitrogênio molecular em amônia que será então solubilizada em
amônio e envolve a quebra da ligação tripla desse nitrogênio molecular para que um átomo de nitrogênio possa
posteriormente juntar carbono, hidrogênio e oxigênio para finalmente formar compostos orgânicos. Os únicos
microrganismos que podem realizar esse processo são as bactérias procariontes e que possuem uma enzima
chamada nitrogenase, que pode reduzir esse nitrogênio molecular a amônia. Esses microrganismos em geral são
chamados de diazotróficos (também: nitrogênio; di: 2; trophos: “eles gostam”) e podem fazê-lo de forma simbiótica
associada a algumas espécies de plantas ou vegetais, ou podem fazê-lo de forma não -maneira simbiótica.
Perdas ou saídas líquidas
Os caminhos das perdas ou resultados líquidos deste sistema são:
• colheita
• lixiviação ou lavagem
• desnitrificación
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• volatilização
Perdas de colheita
Tem a ver com a quantidade de nitrogênio que vai para o grão e não é reincorporado ao sistema do
solo em nenhum outro lugar.
Perdas por lixiviação ou lavagem
A água da chuva ou do escoamento arrasta os íons nitrato e nitrito (falamos principalmente de nitratos porque há
muito poucos nitritos no solo) para as camadas mais profundas, pois estes, sendo ânions e tendo cargas negativas,
não são retidos ou absorvidos pelas argilas e húmus que tem a mesma cobrança. Não há intervenção microbiana
neste processo, mas sim uma questão química do solo.
Perdas por volatilização
Processo onde também não há intervenção microbiana. A volatilização é uma perda química de nitrogênio na forma
de amônia. Isto ocorre principalmente em solos secos ou com pH elevado onde a amônia produzida pela
amonificação não se solubiliza em água e quando o solo está seco volatiliza na atmosfera.
Perdas devido à desnitrificação
É um processo catabólico associado à respiração anaeróbica onde os microrganismos que o realizam utilizam
nitrato como aceptor final de elétrons na cadeia de transporte de elétrons. Os nitritos também poderiam ser reduzidos,
mas há muito pouca disponibilidade de nitritos no solo. O processo de redução de nitratos a N2 ocorre em
etapas sucessivas catalisadas por diferentes sistemas enzimáticos, surgindo como produtos intermediários
nitritos, óxido nítrico, óxido nitroso, que são gases que vão para a atmosfera. A desnitrificação ocorre quando
não há oxigênio molecular para atuar como aceptor no final dos elétrons e, alternativamente, existem
nitratos que aceitam esses elétrons. Este é um processo de perda de nitrogênio, mas neste caso há intervenção
microbiana.
Imobilização
A imobilização é outro dos processos que podemos observar no ciclo do nitrogênio e é um processo de perda de
nitrogênio, mas tem a característica de não ser uma perda líquida do sistema, mas sim são perdas momentâneas,
ou seja, permanece dentro do sistema do solo.
Sob certas circunstâncias, os microrganismos pegam o nitrato e o amônio que estão no solo e os utilizam para
formar parte de seu protoplasto. Portanto, essas formas deixam de estar disponíveis para as plantas e para o seu
crescimento e passam a fazer parte do protoplasma dos microrganismos sob compostos orgânicos, ou seja,
a imobilização é a passagem de uma forma inorgânica para uma forma orgânica de nitrogênio.
O principal fator que desencadeia esse processo é o tipo de restos vegetais, a qualidade do restante presente.
Quando o teor de nitrogênio em relação ao carbono é muito baixo, ou seja, há altas relações carbono-nitrogênio nos
restos vegetais, os microrganismos precisam suprir a deficiência de nitrogênio que existe nos restos vegetais e
retiram-no do solo. solução, para continuar degradando o resto vegetal.
Transformações do nitrogênio no sistema do solo

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O nitrogênio se move com muita facilidade e se transforma em diversos compostos. Assim, dos restos
vegetais e animais que chegam ao solo, e da matéria orgânica
que se formou, os compostos nitrogenados sofrem mineralização ou degradação por microrganismos
dos quais são obtidos os nitratos, principal forma pela qual as plantas conseguem absorver o nitrogênio da
solução do solo.
Existem algumas plantas, como o arroz , onde o nitrogênio pode ser absorvido na forma de amônio.
ou quando em fase juvenil também possuem a característica de serem capazes de absorver íons de amônio.
Mineralização de nitrogênio
Envolve basicamente dois processos: Amonificação , que consiste na transformação de

compostos orgânicos nitrogenados, como proteínas , ácidos nucléicos, etc.
amônia. É um processo no qual, na presença de água, a amônia é solubilizada em amônio. Se não houver água
(solos secos), a amônia volatiliza na atmosfera.
A nitrificação ocorre a partir do amônio e inclui duas etapas: a primeira consiste na transformação do
amônio em nitrito, chamada nitritação , e a segunda etapa, chamada nitratação, é a transformação do nitrito
em nitrato.
A nitrificação é um processo de oxidação do nitrogênio. Este nitrato produzido pela nitrificação pode ser
absorvido pelas plantas, lixiviado para as camadas mais profundas ou pode ser desnitrificado por alguns
microrganismos em condições anaeróbias.
UNIDADE 14
Mineralização de Nitrogênio
Como vimos anteriormente, no ciclo do nitrogênio observamos que o nitrogênio apresenta diferentes formas no
solo que têm a ver com os diferentes estados de oxidação, e todas as transformações dessas formas químicas
são em sua maioria mediadas por microrganismos. Para começar a desenvolver mais profundamente cada um
dos processos de transformação do nitrogênio, vejamos novamente o ciclo completo, e neste caso desenvolveremos
o processo de mineralização do nitrogênio conforme marcado no diagrama ou no ciclo (que são caixas pretas).
30
Este é um dos processos críticos do ciclo, pois é a conversão das formas orgânicas do nitrogênio
em formas inorgânicas que podem ser absorvidas pelas plantas para o seu crescimento e
desenvolvimento.
A conversão do nitrogênio orgânico em formas minerais como os nitratos (que são a principal
fonte de absorção de nitrogênio pelas plantas) é realizada por microrganismos que liberam ou
mineralizam nutrientes atacando restos vegetais e animais e matéria orgânica para obter energia
e carbono para o crescimento, mas também precisam de nutrientes (especialmente nitrogênio)
para formar proteínas, ácidos nucléicos e outros componentes celulares.
O nitrogênio no solo está nas formas orgânica e inorgânica. As formas orgânicas têm a ver com
compostos orgânicos nitrogenados, como proteínas e ácidos nucléicos, e do nitrogênio total, 98%
corresponde a esse nitrogênio orgânico e os 2% restantes ao nitrogênio inorgânico, que são
basicamente formas minerais desse nitrogênio, como amônio, nitratos, nitritos, etc. O nitrogênio
orgânico é encontrado em restos de plantas, animais e microrganismos, no húmus do solo e na
matéria orgânica.
Lembremos que dos restos que chegam ao solo, parte é mineralizada e ressintetizada para
formar húmus e parte é mineralizada, liberando compostos minerais que vão parar na poça lábil
do solo.
Mineralização de Nitrogênio.
31
AMMONIFICAÇÃO
Amonificação é a passagem do nitrogênio, na forma de compostos orgânicos nitrogenados, para amônia . Vamos
pensar que uma vez que os microrganismos satisfazem a sua necessidade de nitrogénio através da decomposição de
restos vegetais e animais, o resto ou excesso é metabolizado e eliminado como amónia. O primeiro produto que se
forma é a amônia, mas depois se houver presença de água ela se solubiliza em amônio e se não houver presença de
água e for um solo seco, essa amônia não se solubiliza em água, mas se perde para atmosfera, por volatilização.
• Degradação de proteínas: entre os compostos orgânicos nitrogenados aparecem as proteínas , que constituem
um bom substrato para os microrganismos aos quais fornecem a maior parte dos elementos necessários ao seu
crescimento; Eles fornecem carbono, hidrogênio, oxigênio, nitrogênio e enxofre para aqueles que possuem
aminoácidos sulfurados. Eles usam esses elementos para sintetizar seus constituintes. As proteínas são
atacadas por enzimas extracelulares que as degradam em peptonas, polipeptídeos e finalmente em aminoácidos,
dos quais, de acordo com as condições ecológicas, podem surgir duas vias; Se houver um ambiente aeróbio na
presença de oxigênio, os compostos liberados são do tipo mineral, e em um ambiente anaeróbio sem oxigênio,
são liberados alguns minerais como amônia, dióxido de carbono e sulfeto de hidrogênio com forte odor de
podridão. Nestes ambientes anaeróbios também são liberados ácidos orgânicos, neste caso estamos falando
de putrefação, pois estamos falando da decomposição de proteínas, ao contrário do que havíamos falado na
época em que usamos o conceito de fermentação, já que estamos referindo-se a uma degradação de hidratos
de carbono sob condições anaeróbicas.
• Degradação de ácidos nucléicos: outro dos compostos orgânicos nitrogenados que aparecem e que podem
passar pelo processo de amonificação são os ácidos nucléicos, que podem ser facilmente degradados com a
liberação de mononucleotídeos. ADN ou ARN
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Podem liberar mononucleotídeos, depois nucleosídeos, bases e, por fim, entre os elementos
que liberam está a liberação de amônia. Ao final, as bases purinas e pirimídicas e o açúcar
são atacados por uma flora microbiana variada, surgindo no meio amoniacal. Aqui você pode
ver as reações das etapas que ocorrem e em cada uma dessas etapas aparecem diferentes
tipos de enzimas, como nucleases, nucleosidase, nucleotidases e amino hidrolases.
• Degradação da ureia: por último surge a ureia, que geralmente é encontrada em sistemas
naturais, mas em quantidades muito pequenas, mas torna-se importante porque a maioria dos
fertilizantes são deste tipo. Sua degradação é muito rápida e a flora ureolítica é muito variada
e não é uma população limitante no solo, além de suportarem pH elevado no solo devido à
liberação de amônia. Aqui a enzima que aparece é
de uréia.
Condições ecológicas ideais para o processo de amonificação.

O processo de amonificação é muito inespecífico e realizado por um grande número de
microrganismos, como bactérias, algas, actinomicetos, de categoria nutricional quimioheterotróficos,
pois utilizam a energia liberada pela oxidação de compostos orgânicos nitrogenados a amônio.
Em relação à temperatura, os amonificadores situam-se em uma temperatura termofílica ótima,

cujo ótimo está entre 40 e 60°C, porém, a faixa vai de -15°C a -10°C a 75°C é onde a amonificação
pode ocorrer.
Quanto ao pH, o ótimo é neutro, mas também pode ser realizado desde pH muito baixo de 3-3,5
até pH superior a 5. Nos extremos a atividade é retardada, mas, por exemplo, no caso Em muito
baixo pH algumas bactérias podem parar de agir, tornando os fungos mais ativos.
A umidade ideal também é de 60 a 70% da capacidade de campo, mas pode haver amonificação
desde menos que o ponto de murcha permanente até solos alagados.
Esta diversidade de condições ecológicas tem a ver com a variedade de grupos microbianos que
intervêm no processo. Como dissemos antes, existem bactérias, fungos, actinomicetos e muitos
tipos diferentes.
Outro fator que pode influenciar a amonificação é a presença de complexos argilo-húmicos.
Argilas com cargas negativas podem adsorver o húmus presente no solo, tornando-o menos
suscetível ao ataque de microrganismos, diminuindo assim a atividade amonificante. Nossos solos
também têm presença de argilas
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montmorilonitas com alta capacidade de absorção, e quando alguns microrganismos liberam enzimas extracelulares
no meio, estas também podem permanecer adsorvidas nas micelas e portanto a atividade degradativa diminui.
NITRIFICAÇÃO
A segunda etapa da mineralização do nitrogênio é a nitrificação, que é a conversão biológica do nitrogênio de um

estado reduzido, que é o amônio, para um estado mais oxidado, como nitrito e nitrato.
É muito importante nos sistemas agrícolas porque afeta as culturas, pois constitui o principal processo de nutrição das
plantas de onde se origina o nitrato, uma das formas mais importantes pelas quais as plantas absorvem nitrogênio
para o seu crescimento e
desenvolvimento.
Os nitratos são facilmente absorvidos pelos vegetais, em menor grau o amônio e

Os nitritos são tóxicos para eles. Também afeta o meio ambiente, pois os nitritos e nitratos são solúveis e, por meio
da lixiviação, podem ser transportados para fora da área de absorção dos radicais, para camadas mais profundas da
água. A nitrificação também é uma das causas da acidificação de alguns solos porque libera níveis significativos de
íons hidrogênio.
Existem bactérias autotróficas e heterotróficas que realizam esse processo de oxidação, mas a nitrificação
autotrófica aparece como o processo dominante na maioria dos solos. Existem duas etapas na nitrificação: nitritação
e nitração, ambas realizadas por bactérias .
quimioautotróficos e aeróbios estritos.
Na nitrificação, ambos os processos metabólicos (nitritação e nitração) são processos metabólicos geradores de
energia, como observado nas semi-reações, e cuja energia é utilizada para reduzir o CO2 ao material celular.
Lembremos que esses microrganismos são quimioautotróficos, ou seja, utilizam carbono como CO2 e energia de uma
reação química.
Mecanismo de nitração
O primeiro passo é a nitritação; o amônio oxida o nitrito. Este processo envolve, segundo alguns estudos, duas etapas:
primeiro, o amônio é oxidado a um composto intermediário que é a hidroxilamina, e depois esse composto
(hidroxilamina) é oxidado a um intermediário que se decompõe em ácido nitroso, que é um dos ácidos que diminuir
o pH.
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As bactérias relacionadas com a NITRITAÇÃO pertencem à família das Nitrobacteraceae e as espécies mais
representativas são as que aparecem na tabela, mas a Nitrosomonas europaea é a que predomina nos solos por
excelência.
Mecanismo de nitração
Na maioria dos solos, o nitrito produzido no processo de nitração não se acumula no solo, mas é imediatamente
oxidado a nitratos no processo de nitração, onde primeiro é produzido o ácido nítrico , que é o outro ácido que
acidifica muito esses solos. Assim podemos dizer que se forem feitas grandes fertilizações com compostos que são à
base de amônio, haverá muita acidificação, porque depois vem a nitrificação daquele amônio que é incorporado, algo
que não aconteceria se fosse fertilizado com fertilizantes à base de nitritos ou nitratos. Os pHs ácidos tornam os
nutrientes menos disponíveis para as plantas, como o fósforo, à medida que se combinam com os íons de hidrogênio.
Entre as bactérias NITRANTES estão os gêneros que se observam na tabela, que são Nitrobacter, Nitrospira e
Nitrococus, embora a mais representativa que podemos encontrar nos solos seja Nitrobacter winogradsky.
Condições ótimas de nitrificação ecológica:
As condições ecológicas ótimas para a nitrificação autotrófica como um todo são compartilhadas tanto para a
nitração quanto para a nitração, uma vez que ambos os processos são realizados por uma única família de bactérias,
como dissemos antes, que são as
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nitrobacteráceas. Portanto, os intervalos de condições ecológicas para cada um destes processos são muito mais
estreitos do que vimos na altura para a amonificação.
• pH. Em pH ácido a nitrificação é inibida ou torna-se muito lenta, isso basicamente começa a acontecer com pH
menor que 6, por isso é preciso levar em consideração nos solos cultivados quais fertilizantes você vai trabalhar.
Não é a mesma coisa, como dissemos anteriormente, trabalhar com fertilizantes à base de amônio e com aqueles
que possuem nitritos ou nitratos em sua fórmula. Nesse sentido, se houver fortes processos de nitrificação que
acidifiquem o solo, a presença ou incorporação de sais de cálcio, magnésio e potássio pode neutralizar os ácidos
nitroso e nítrico que se formam e, portanto, ajuda a favorecer a nitrificação.
• a oxigenação, que é um fator essencial para ambos os processos, tanto a nitração quanto a nitração, pois as
bactérias que atuam são aeróbias estritas. A oxigenação está intimamente ligada à umidade.
• A umidade ideal está entre 60 e 70% da capacidade de campo, pois é a combinação ideal entre oxigenação e
umidade. Agora, à medida que a umidade aumenta e o solo fica saturado de água e os poros se enchem de água, a
nitrificação diminui. O limite em termos de umidade é o ponto de murchamento permanente (porque é necessária
água para esses microrganismos) e solos alagados.
• a temperatura é o outro fator, e o ótimo está entre 30 e 35°C, ou seja, uma faixa mesófila, e os limites foram
estabelecidos em um mínimo de 5°C e até um máximo de 40°C, em que A nitrificação pode ocorrer, mas sempre
em taxas mais lentas.
De acordo com essas condições ecológicas que vimos, em ambientes alagados ou alagados, como acontece na
agronomia quando se trabalha no cultivo do arroz onde, por exemplo, se o arroz fica alagado até a colheita, só se
observa ou só se produz amonificação (até certo ponto). em menor proporção, mas haverá) e o que não vai ocorrer é
o processo de nitrificação na mineralização do nitrogênio, pois são necessariamente necessárias condições de
oxigenação. Essa inundação é feita para proteger o arroz de ervas daninhas que poderiam roubar nutrientes, espaço
e luz e também atrair pragas.
O cultivo do arroz na província (ER) é feito basicamente alternando períodos de seca com períodos de cheia e, neste
caso, nos períodos de seca ocorreria a nitrificação para produzir nitratos, que podem ser aproveitados. Da mesma
forma, deve-se notar que o arroz tem a capacidade de absorver amônio da solução do solo desde as raízes e, portanto,
esse nitrogênio não é um impedimento à sua nutrição.
Inibidores de nitrificação.
Uma das práticas que podem ser realizadas é a utilização de inibidores de nitrificação.
Para que são usados os inibidores de nitrificação? Em geral, eles são adicionados ao solo quando se deseja
retardar a disponibilidade de nitratos no solo ao longo do tempo, para que as plantas possam absorvê-los exatamente
quando mais precisam deles e esses nitratos não sejam perdidos por processos como lixiviação, desnitrificação,
imobilização , etc. Os inibidores de nitrificação, em geral, podemos dizer que são compostos orgânicos que atuam
como
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germística na flora microbiana do solo. Na verdade, atuam basicamente sobre o gênero Nitrosomonas ,
responsável pela conversão do amônio em nitrito. Assim, esses compostos orgânicos, com o passar do tempo e
estão no solo, são degradados pela ação dos demais microrganismos que se encontram e, uma vez que acabam
de se degradar ou acabam de estar no solo, param de se degradar. sua atividade novamente e oxida o amônio
que estava presente para produzir nitritos e posteriormente surge o Nitrobacter. A intervenção é realizada em
Nitrosomonas porque a oxidação do nitrito a nitrato é muito rápida e seria impossível inibi-la.
Quando podemos usá-lo? Por exemplo, no campo é muito utilizado no cultivo do trigo, sendo aplicado em
conjunto com fertilizantes nitrogenados (como a uréia). O que acontece é que quando a cultura necessita de
maiores quantidades de nitratos durante os períodos de perfilhamento, por exemplo, esse nitrato está disponível
porque a nitrificação foi adiada para mais tarde na cultura.
A transparência mostra alguns exemplos de compostos químicos com o nome comercial dos diferentes tipos de
inibidores que possuem esta ação. No primeiro exemplo do nome comercial N-serve, pode-se dizer que no 14º
dia da aplicação do produto ele ainda possui 82% de ação germística sobre Nitrosomonas, ou seja, está inibindo
82% da população, e este é um dos produtos que se decompõe mais lentamente ou demora mais para se
degradar em relação aos demais onde podemos observar percentagens de 53, 41 e 31% no dia 14.
UNIDADE 15
PERDA DE NITROGÊNIO
As perdas de nitrogênio são diversas, incluindo desnitrificação, imobilização, lixiviação e volatilização.

Vamos nos concentrar naquelas perdas em que os microrganismos são responsáveis pela sua
ocorrência; essas perdas são a desnitrificação e a imobilização .
DESNITRIFICACIÓN
A desnitrificação é a perda de nitrito e nitrato na forma de gases (óxido nitroso e gás nitrogênio).
Consiste em uma forte redução principalmente do nitrato até formar óxido nitroso e nitrogênio molecular,
que são dois gases que se perdem na atmosfera.
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O nitrito também pode ser desnitrificado , embora raramente esteja presente no solo em
quantidades que possam ser significativas.
Para analisar em que consiste esse processo, devemos lembrar em que consiste o metabolismo
microbiano produtor de energia, que chamamos de respiração anaeróbica. A respiração
anaeróbica dos nitratos consistia nos microrganismos, em um ambiente sem
disponibilidade de oxigênio, absorvendo alternadamente algum elemento que pudessem reduzir
e assim poder continuar com seu processo respiratório, mas anaeróbio. Nesse caso o elemento
que é reduzido é o nitrato e nessa redução esses gases são gerados e ocorre essa perda.
Como já apontamos, a desnitrificação é uma perda do sistema, pois o nitrogênio mineral que
se formou até chegar ao nitrato é eliminado do solo, e a importância da eliminação
desse íon é que a planta é nutrida principalmente por esse íon e Sob certas condições esse íon
pode ser perdido e portanto a planta pode sofrer perdas ou falta de nitrogênio.
Por outro lado, devemos ver outro aspecto da desnitrificação, que é a geração de determinados
gases. Falamos que a desnitrificação é uma perda de gases na forma de óxido nitroso
e nitrogênio molecular. Em geral, a perda de nitrogênio molecular não deve nos
preocupar muito do ponto de vista ambiental, pois o nitrogênio molecular constitui 78% da
atmosfera, portanto uma perda deste tipo não geraria grandes alterações na atmosfera. Mas
a geração de óxido nitroso é um elemento nocivo ou negativo para a atmosfera e para a vida no
planeta, já que o óxido nitroso é um dos gases que provocam maior efeito estufa , pois em
concentração menor que o dióxido de carbono pode causar efeitos semelhantes. .
Os microrganismos que realizam a respiração anaeróbica dos nitratos, ou seja, o

que normalmente chamamos de desnitrificação, são todos bactérias verdadeiras. A
maioria deles são heterotróficos, portanto, estão associados a elevados teores de matéria
orgânica. Dentre as quais podemos destacar Pseudomonas aeruginosa e Pseudomona
denitrificans. Também dentro deste grupo encontram-se numerosas espécies de Bacillus,
rhizobium, Azospirillum que, embora não estejam 100% envolvidos na realização da
desnitrificação, pois também podem, por exemplo, fixar nitrogênio, quando estão no
solo e ocorrem condições de anaerobiose, utilizam nitratos para respirar e
atuam como desnitrificantes.Deve-se destacar também que existem bactérias autotróficas,
como Thiobacillus denitrificans.
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Condições ecológicas para desnitrificação:
• Anaerobiose: É essencial que haja anaerobiose. Lembrando o processo de respiração anaeróbica dos nitratos,
dissemos que este era um meio alternativo que os microrganismos tinham para obter energia, pois
possuíam enzimas que lhes permitiam, na presença de oxigênio molecular, recorrer a ele para realizar
a respiração aeróbica completa, mas que, na sua ausência, poderiam recorrer à respiração anaeróbica de
nitratos. Portanto, se houver oxigênio no ambiente, a desnitrificação é eliminada, pois os microrganismos
preferem esse mecanismo porque lhes dá muito mais energia. Qual condição agronômica gera anaerobiose?
Poças são ambientes anaeróbicos. Num sistema de arroz, por exemplo, em que temos o solo encharcado
por um certo tempo, falamos em anaerobiose, mas a planta do arroz possui mecanismos pelos quais capta
oxigênio através das folhas e o expele na zona radicular, portanto, um O ambiente de cultivo do arroz também
não pode ser considerado 100% anaeróbico. De qualquer forma, no arrozal, onde predomina a ausência de
oxigênio, ocorrem grandes perdas por desnitrificação, pelo menos em alguns casos. Outro ambiente anaeróbico
pode
tornam-se solos que perderam estrutura, nos quais há pouca difusão de oxigênio no solo e são gerados
microambientes nos quais falta oxigênio e, portanto, os processos anaeróbios (incluindo a desnitrificação)
tornam-se importantes.
• Disponibilidade de NO3 - : outra condição essencial para o processo de desnitrificação

O que acontece é que existem nitratos no meio ambiente para que possam ser desnitrificados. Deve-
se considerar o seguinte: nem em todos os ambientes pode-se formar nitrato, pois o processo de nitrificação
requer a presença de oxigênio. Então se um ambiente é anaeróbio e permanece permanentemente, por
exemplo, em estado alagado, a formação de nitratos é quase inexistente e portanto,
consequentemente, a desnitrificação quase não existe. Este caso, por exemplo, ocorre em
sistemas de arroz em que o arroz pré-germinado em outro local é plantado e colocado em solos
permanentemente submersos, nessas condições a desnitrificação torna-se praticamente nula.
• Temperatura: as faixas de temperatura vão de 5 a 75°C, com temperaturas ótimas próximas a 65°C. Este é um
mecanismo claramente termofílico. As altas temperaturas favorecem o processo; o que o torna importante em
um ambiente de arroz que é uma cultura de verão onde ocorre claramente a situação de anaerobiose
necessária para que este processo seja cumprido.
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• pH: entre 5 e 8.
• Matéria orgânica: em geral consideramos que a presença de microrganismos do tipo desnitrificante está
associada à presença de matéria orgânica. A maioria desses microrganismos são heterotróficos e, portanto, há
maior abundância desses microrganismos em ambientes onde a disponibilidade de carbono é bastante
elevada, pois deles necessitam. Portanto, uma alta concentração ou boa quantidade de matéria orgânica no solo
favoreceria a desnitrificação das populações. Por outro lado, também, caso haja acumulações devido a
altas concentrações de matéria orgânica ou não se tome cuidado para espalhá-la, então há perdas de tudo o que
está presente como nitrogênio mineral nessa matéria orgânica através da desnitrificação, porque Altas concentrações
de matéria orgânica realmente têm um efeito positivo na anaerobiose. Quando há grande número de
populações microbianas, elas sofrem respiração, gerando locais de anaerobiose e, portanto, favorecendo
também a desnitrificação.
IMOBILIZAÇÃO
A imobilização ocorre quando os microrganismos capturam o nitrogênio mineral do solo, seja na forma de amônio
ou nitrato, de modo que faça parte do corpo ou massa microbiana. Isto ocorre de forma análoga para outros nutrientes
do solo, como enxofre, fósforo, etc. Na realidade, não se trata de uma verdadeira perda, pois quando os
microrganismos morrem são mineralizados e o nitrogênio mineral volta a estar presente no solo. Do ponto
de vista agronômico consideramos isso uma perda, pois durante o desenvolvimento de uma cultura o nitrogênio
mineral não estará disponível para a planta.
O processo de imobilização pode ultrapassar o processo de mineralização, ou seja, a imobilização é tão

grande que pode capturar mais nitrogênio mineral do que o produzido pela mineralização. Neste caso dizemos que
há imobilização líquida, porque a imobilização excede a mineralização.
Isso pode ocorrer em determinadas circunstâncias, como quando resíduos são incorporados ao solo para
decomposição ou mineralização, e que apresentam elevada relação carbono/nitrogênio em seus tecidos (por exemplo,
possuem muito carbono em relação ao teor de nitrogênio) . Por exemplo, se tivermos resíduos de culturas de pasto
em estado fisiológico avançado (restolho de trigo ou palha de milho), em geral encontraremos relações C/N
de 70 partes de carbono para cada parte de nitrogênio, ou atingiremos condições de 120 partes de carbono para
cada parte de nitrogênio.
Na imagem você pode ver um diagrama de um processo de degradação de restos vegetais. Neste processo de
degradação, os microrganismos encontram, neste caso específico, uma grande quantidade de carbono e uma
pequena quantidade de azoto.
Os microrganismos utilizam compostos de carbono, por exemplo, a celulose, para duas formas principais: para
obter energia, geralmente através de um processo respiratório, e também utilizarão esse carbono para formar
parte da massa microbiana. Considera-se que os microrganismos utilizam 60 a 70% do carbono total
para a respiração e apenas 30 a 40% para formar massa microbiana. Por outro lado, os microrganismos necessitam
de nitrogênio para fazer parte da massa microbiana, que possui uma relação C/N muito estreita. Em média,
considera-se que a massa microbiana tem 10 partes para 1 de C/N, ou ainda mais restrito, 8 partes para 1. Isto varia
dependendo se é constituída principalmente por fungos ou bactérias.
40
Se a população for abundante em fungos, a relação C/N aumenta, mas se for maioritariamente bactérias,
esta relação torna-se mais próxima.
Estamos diante de restos vegetais que oferecem 70 partes de carbono para cada parte de nitrogênio.
Se considerarmos que 70% respiram e 30% deixam assimilar, a proporção seria de 21 partes de carbono para
cada parte de nitrogênio para assimilação, mas a massa do microrganismo requer uma proporção
menor (em média 10 para 1) então haveria excesso de carbono. O que a massa microbiana faz para continuar
crescendo e degradando o resto da planta é capturar o reservatório inorgânico do solo, ou seja, nitrato e amônio,
e assim restabelecer a relação necessária para o seu crescimento.
• O que causa o processo de imobilização? A baixa quantidade de nitrogênio no restante faz com que a massa
microbiana encontre carbono disponível para seu crescimento, carece de nitrogênio e, por isso, recorre ao
nitrogênio mineral do solo, capturando-o e imobilizando-o.
• O que acontece se esse nitrogênio mineral não estiver no solo? o processo de

A nitrificação iria parar ou desacelerar porque, na realidade, a massa microbiana não é capaz de crescer e
explodir na presença de um substrato decomponível.
• O que está acontecendo durante todo o processo de decomposição? À medida que esse processo
avança, a massa microbiana também passa a fazer parte do restante, pois quando os microrganismos
morrem, seus restos também ficam sujeitos à mineralização. É por isso que você vê aquela seta que retorna da
biomassa microbiana para o resto da planta e faz com que a relação C/N diminua.
• Por que estreita? na verdade porque ao longo do processo de decomposição parte do carbono é eliminado na
atmosfera pelo processo respiratório (porque é gerado dióxido de carbono), porém, o nitrogênio do ciclo é
disponibilizado novamente aos microrganismos. permanece essencialmente mais constante.
Evolução do N mineral no solo após adição de restolho com elevada relação C/N.
Quando se incorpora um restolho com alta relação C/ N , veríamos que inicialmente há uma certa quantidade de
nitrogênio mineral acumulado naquele solo. Quando o restolho é incorporado esse nitrogênio vai
diminuindo devido ao processo de imobilização e após um certo tempo momento em que o nitrogênio começa
a ficar disponível novamente quando o restolho se torna cada vez mais rico em nitrogênio, uma vez que a massa
microbiana, uma vez que seus microrganismos morrem, torna-se parte dos restos: seu carbono é eliminado pelo
processo de respiração na forma de
41
O CO2 e o nitrogênio permanecem constantes no solo, diminuindo assim sua relação C/N, como
acabamos de descrever.
Equilíbrio entre imobilização – mineralização
Uma relação próxima de 25 partes de carbono para cada parte de nitrogênio é considerada a razão de
equilíbrio, onde a imobilização e a mineralização são equiparadas e, portanto, não há efeito de
depressão no nitrogênio mineral do solo. Encontramos isso, em geral, em leguminosas em estado de
floração (por exemplo, na alfafa em flor poderíamos estar nessas relações C/N).
Por exemplo, para palha de cereais (trigo, milho) as proporções vão de 80/1 até um pouco mais baixas
(30/1). No caso dos fertilizantes verdes (por exemplo, perfilhamento do trigo) a relação C/N é muito
menor porque as células vegetais mudam a sua composição ao longo do seu ciclo ontogénico.
Um caso particular é o da madeira; As relações C/N nas florestas são extremamente altas (400/1 ou 800/1),
o que tenderia a nos fazer pensar que há ali uma forte imobilização, o que na realidade não acontece, e o
fenômeno que ocorre é o seguinte: Na realidade estamos falando de um carbono suscetível de ser
decomposto. Na madeira, a maior parte de sua composição é lignina e a lignina fornece carbono com
praticamente nenhuma ou muito pouca possibilidade de ser substrato para microrganismos,
portanto, apesar de ter uma relação C/N muito elevada, florestas e áreas florestais não geram de
fato imobilização acentuada processos porque o carbono não é carbono disponível e, portanto, não há
grandes necessidades de nitrogênio para o processo de degradação.
Mineralização – imobilização de restos com diferentes relações C/N.
Para compreender plenamente os processos de mineralização e imobilização que podem

prevalecer diante de diferentes restos com diferentes relações C/N, vamos analisar, por um lado, o que
pode acontecer no trigo em estado avançado e na alfafa em estado jovem. estado, o que é isso
42
o que acontece com a imobilização e a mineralização.
No lado esquerdo temos o trigo. Fazemos uma análise em cerca de 5.000 quilos de MS, com 40% de
carbono e 0,5% de nitrogênio, o que seria uma proporção de aproximadamente 80 partes de carbono para
cada parte de nitrogênio, ou seja, estaríamos olhando um restante com uma relação elevada C/N, que pelo
que temos visto favoreceria o processo de imobilização. Vamos analisá-lo em termos de quantidades
de elementos. Dos 5 mil quilos de MS, 2 mil quilos são carbono e 25 quilos são nitrogênio. Os 30% do carbono
que a massa microbiana necessita para ser assimilada equivalem a 600 quilos desses 2.000 quilos
de carbono.
Sabíamos que essa massa microbiana tem uma proporção de 10 partes para 1, se lhe oferecermos
600 quilos de carbono, obviamente o que ela precisa de nitrogênio seria cerca de 60 quilos, mas o trigo oferece
apenas 25 quilos de N, o que significa que neste tipo de restos vegetais está imobilizando aproximadamente
35 quilos de nitrogênio.
No lado direito do slide temos o processo de degradação da alfafa relativamente jovem. Consideremos
também 5.000 quilos de matéria seca de alfafa, com 40% de carbono e grande quantidade de nitrogênio em
sua composição (3% de nitrogênio que o restante contém). Que é uma relação carbono-nitrogênio baixa
(13 partes para 1). A quantidade de carbono (40% de 5.000) ainda é de 2.000 quilos, e os 30%
assimilados geram 600 quilos, o mesmo que vimos para o trigo. Ainda necessita de 60 quilos de nitrogênio
para assimilar e formar massa microbiana. A diferença é que a alfafa, se aplicarmos 3% acima de 5 mil, está
nos dando 150 quilos de N, e dessa quantidade apenas 60 quilos serão assimilados pela massa
microbiana. Isso gera mineralização no processo.
líquido de 90 quilos de nitrogênio.
UNIDADE 16
FIXAÇÃO BIOLÓGICA DE NITROGÊNIO (FBN)
A fixação biológica de nitrogênio (FBN) é realizada por um grupo de procariontes chamados diazotróficos
que possuem a enzima nitrogenase, reduzindo N2 a Nh4. Os microrganismos capazes de fixar nitrogênio
habitam uma variedade de ambientes muito diversos, como solo, ambientes aquáticos, sejam de água
doce ou marinhos, também em
43
ambientes muito diversos, como no intestino dos seres humanos. Esses microrganismos não são tão abundantes em
relação aos demais microrganismos, mas são variados. Vamos tentar nos concentrar nos microrganismos que habitam
o solo
Como os fixadores de N do solo estão relacionados às plantas
Este diagrama nos ajuda a ver a relação entre a planta e o microrganismo que se estabelece na raiz ou zona livre do
solo, e como isso está ligado à disponibilidade de carbono e energia para que ocorra o processo de
fixação.
Simbiose
Uma forma de se relacionar com os vegetais é estabelecer uma relação simbiótica com a planta. Nesse tipo de
relação, formam-se cavidades em verdadeiros órgãos da planta que abrigam os microrganismos e desta forma
estabelecem esse tipo de relação, em que há uma troca de carbono e nitrogênio que o microrganismo fixa. Este
carbono e a energia fornecida pela planta hospedeira fazem com que o microrganismo esteja em condições ótimas
para realizar o processo de fixação e, portanto, as quantidades que esta relação consegue fixar variam de 50
a 400 kg de nitrogênio/ha . Ano.
Associações rizosféricas
São os microrganismos que se localizam na zona da rizosfera, alguns deles capazes de fixar nitrogênio, e
nesta zona a energia e o carbono são fornecidos aos microrganismos através de exsudatos rizosféricos.
Esta área é mais abundante neste fornecimento de carbono e energia aos microrganismos do que o resto do solo,
portanto, nesta área as capacidades de fixação variam de 20 a 30 kg N/ha ano .
Vida livre
Do lado direito, o que encontramos são os microrganismos que estão livres no solo, que são incentivados na zona
da rizosfera e que vivem e habitam obtendo carbono da matéria orgânica (heterótrofos), algo que não é tão
abundante no solo. solo e, portanto, a capacidade de fixação varia de 1 a 2 kg N/ha ano.
Por outro lado, existem outros microrganismos de vida livre que são autótrofos. Estes são capazes de fotossíntese
e, portanto, fornecem seu próprio carbono e energia por meio desse processo de fotossíntese. Sua capacidade
de fixação é um pouco maior, de 10 a 80 kg
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N/ha ano. Dentro do grupo dos autotróficos de vida livre estão as cianobactérias, algumas das quais são
capazes de fixar nitrogênio e fixar carbono, ou seja, realizar a fotossíntese e a fixação de nitrogênio.
Microrganismos fixadores de N2 de vida livre e/ou associados à rizosfera
Se o microrganismo é de vida livre ou está associado à zona da rizosfera não é determinado apenas
pelo microrganismo, mas às vezes também depende de qual planta é, então às vezes organismos de vida livre
típicos em algumas rizosferas podem ser considerados organismos da rizosfera. Portanto, essa limitação
entre esses dois grupos não é tão clara, e eles são estudados em conjunto.
•Quimioheterótrofos:
Azospirillum lipoferumn e Azospirillum brasilense: Microrganismos do gênero Azospirillum, além de

terem capacidade de produzir fitohormônios e aumentar o crescimento das plantas, também são capazes
de fixar nitrogênio na forma de vida livre como nas zonas rizosféricas.
Azotobacter chococcrumm: é um típico microrganismo fixador de vida, livre de nitrogênio. No entanto, este
microrganismo em certos gêneros Paspalum (plantas herbáceas pertencentes às Poaceae) é capaz de habitar a zona
da rizosfera. Portanto, a separação entre o que é um organismo de vida livre e o que está associado à zona rizosférica
não é muito clara.
Beijerinkia indica e Derxia gummosa: não estabelecem associações simbióticas. O primeiro é um

microrganismo amplamente estudado na zona tropical associado, por exemplo, a gramíneas como a cana-de-açúcar.
• Fotoautotrófico:
ÿ Anabaena (associada a Azolla)

ÿ Nostoc
ÿ Oscilatória
Estas são cianobactérias. Anabaena é às vezes conhecida como simbioticamente associada a Azolla, que é uma
samambaia de arroz flutuante. Azolla é na verdade uma samambaia e, embora haja simbiose, não é considerada
um organismo simbiótico porque não se liga simbioticamente ao arroz, mas sim a outro organismo
que é uma samambaia que flutua no arroz.
Este tipo de fotoautotróficos é utilizado em algum tipo de sistema de produção de arroz

Por serem produzidos, gera-se uma certa quantidade de massa com grande quantidade de nitrogênio , e este é
utilizado como fertilizante. Não se sabe, até o momento, se as cianobactérias são utilizadas nos sistemas de cultivo
de arroz na Argentina.
45
Microrganismos simbióticos fixadores de N
• Simbiose entre Rizóbios e Leguminosas
Família: Rhizobiaceae
Gêneros: Rhizobium
Bradirhizobium
Sinorhizobium
Mesorrizóbio
Azorhizobium
Taxonomia de Rhizobiaceae
46
Existe uma especificidade marcante entre certas espécies de rizobiáceas, uma vez que o hospedeiro ou tipo de
leguminosa é capaz de estabelecer simbiose.
• Simbiose entre actinomicetos e não leguminosas (actinorrizas)
Exemplo: Frankia e Casuarina ou Comptonia.
A maior aplicação que o gênero Frankia pode ter (gerando um bom suprimento de nitrogênio através da
fixação) é a recuperação de solos e a fixação de dunas, pois quando um solo perdeu matéria orgânica, um dos
elementos que fundamentalmente falta ao solo. será o nitrogênio, porque este, assim como o enxofre, são
nutrientes do solo associados à matéria orgânica. Portanto, o nitrogênio precisará ser capturado de uma fonte
diferente da matéria orgânica. Então, nesses casos, um microrganismo que seja capaz de se associar a uma
planta que gere um bom volume vegetal para contribuir com a matéria orgânica do solo que
seria reformado ou recuperado, seria uma boa contribuição para esse tipo de recuperação. Nesse tipo
de caso, essa associação de Frankia é utilizada com essas plantas que são árvores e arbustos, portanto,
fornecem uma boa massa para formar matéria orgânica no solo. Pode fixar de 60 a 200 kg de N/ha/ano.
Nitrogenase: enzima que permite a fixação do N2, que se destaca pela marcada sensibilidade à
concentração de oxigênio e está presente em organismos diazotróficos. Tem 2
componentes:
• Componente 1:
ÿ 4 cadeias polipeptídicas
ÿ 28 a 32 átomos de Fe
47
ÿ 2 átomos de molibdênio
• Componente 2:
ÿ 2 cadenas polipeptídicas ÿ 4
átomos de Fe
Fixação biológica de N2
O que acontecerá nesse processo é a redução de uma molécula de nitrogênio molecular e serão formadas duas
moléculas de amônia. Para isso, serão utilizados elétrons, prótons
e também haverá um gasto significativo de energia que é percebido pela quantidade de ATP que é utilizada neste
processo.
Mecanismo bioquímico de fixação
O que possibilita a enzima nitrogenase presente na célula microbiana, com seus dois componentes, é a
realização dessa redução de N2 com gasto energético significativo. Mas, esse processo está sendo feito em
temperaturas e pressões compatíveis com a vida, o que não ocorre em nenhum outro sistema que não seja um
microrganismo procariótico que tenha a presença dessa enzima nitrogenase.
O funcionamento da nitrogenase, ou o que equivale ao mecanismo bioquímico de fixação, consiste em um

transporte de elétrons de um componente para outro, no qual intervém primeiro o componente 2 e depois
o componente 1, para só então entregá-lo ao nitrogênio molecular que pode ser reduzido desta forma.
Na verdade existe um carreador, que neste caso é a Ferredoxina, pode ser também a flavodoxina, e traz
elétrons. Ao entregá-los ao componente 2, a Ferredoxina (que foi reduzida) é oxidada e o componente
2 (que foi oxidado) ao levar os elétrons é reduzido e, desta forma, só será passado para o componente 1. Para que
essa transferência ocorra , é necessário um gasto com ATP.
48
Quando o ferro no componente 2 cede elétrons ao componente 1, o primeiro é oxidado e o
componente 1 é reduzido ao receber os elétrons. Quando forem entregues ao nitrogênio para que
seja reduzido, o componente 1 será oxidado. Essa transferência ou voltas de elétrons são feitas uma a
uma e os portadores desses elétrons são os átomos de ferro.
O sítio ativo da nitrogenase é o molibdênio. Neste local o nitrogênio molecular adere e recebe, um por
vez, os elétrons que lhe são transferidos, primeiro do componente 2 e depois do componente
1, ou os átomos de ferro do componente 1. Desta forma, deve dar menos seis gira para poder
fazer a redução.
De modo geral, deve-se esclarecer que na realidade existe uma certa redução extra que deve ser feita
no processo bioquímico de fixação, pois sempre antes de uma molécula gasosa de nitrogênio ser
reduzida deve haver uma redução de hidrogênio, portanto, há uma redução extra gasto de energia
nessa redução de hidrogênio.
Equação geral de fixação
O processo geral de fixação de nitrogênio consiste na redução do nitrogênio molecular com a

incorporação de 6 elétrons e 6 prótons e com o gasto de 2 ATP para cada elétron incorporado,
portanto, são gastos 12 ATP para formar duas moléculas de amônia e a liberação de ADP mais
Pi. Além disso, o hidrogênio deve ser reduzido antes da incorporação do nitrogênio no local do
molibdênio. Nessa redução do hidrogênio também é gasto ATP, neste caso são 4 ATP para cada
hidrogênio reduzido. Isto nos dá uma equação global que implica que para cada molécula de nitrogênio
reduzida haverá um gasto de 16
ATP.
Em alguns organismos existe uma enzima associada a esse sistema chamada hidrogenase
que permite que o hidrogênio molecular formado seja novamente liberado na forma de prótons e 4 ATP
sejam recuperados, o que torna o sistema um pouco mais eficiente.
Estabelecimento de simbiose entre rizóbios e leguminosas
Há uma especificidade marcante, ou seja, apenas alguns rizóbios nodulam algumas leguminosas
e a possibilidade de erros nesta especificidade é bastante limitada. Portanto, o estudo do que torna um
rizóbio capaz de penetrar ou formar nodulações em uma leguminosa e consequentemente fixar
nitrogênio tem sido objeto de estudo de diversos grupos de pesquisa, pois, se esses códigos
podem ser decifrados ou essas relações entre rizóbios e leguminosas pode ultrapassar a
barreira desta especificidade e fazer com que, por exemplo, plantas como o trigo ou o
milho nodulem com um rizóbio e, portanto, abasteçam estas culturas com azoto gasoso e não a partir de
fertilizante.
Como o nódulo é formado?

49
No ponto A o que se
observa é uma raiz com seu
pêlos absorventes e
com aqueles pequenos
pontos que representam
os rizóbios em desenvolvimento
aquele cabelo absorvente.
Nesta fase em que os

microrganismos (rizóbios)
se desenvolvem
superfície dos cabelos
absorventes, é gerada uma
série de eventos
essenciais para o
estabelecimento do
especificidade entre
rizóbios e leguminosas
A leguminosa secreta uma

série de compostos chamados flavonóides , que são estruturas cíclicas específicas de cada
planta que induzem a produção de compostos no rizóbio que fazem a leguminosa
reconhecer o rizóbio.
Os compostos que os rizóbios começam a produzir quando os flavonóides apropriados

aparecem no meio são chamados de fatores Nod e são oligômeros de N-
acetilglucosamina. A diferença entre os diferentes fatores Nod que podem produzir um
rizóbio de outro está nos radicais (R1, R2, R3, R4). Se houver um rizóbio no ambiente, que é
o que vai conseguir nodular a leguminosa, esse fator Nod causará o enrolamento ou
enrolamento dos pelos da raiz, necessário para que o microrganismo invada ou penetre na
raiz. o rizóbio não é específico, gerará um fator Nod que a leguminosa não será capaz de ler
ou interpretar e não causará a deformação no cabelo radicular necessária para toda
a série de eventos seguintes.
Essa troca de sinais que descrevemos entre flavonóides e fatores Nod gera uma deformação
(curvatura) na ponta do cabelo absorvente que deixa 1 ou 2 rizóbios (que inicialmente estavam
na superfície da raiz do cabelo) presos naquela área deformada. começará a se dividir e
invadir o cabelo absorvente. Assim começa o início da formação do cordão infeccioso ou
cabelo infeccioso. Esse cordão infeccioso avança em direção à base do cabelo até atingir o
córtex da raiz.
Os rizóbios induzem as células a reiniciarem o seu ciclo mitótico, aumentando a sua

divisão e estimulando assim o desenvolvimento anormal das células corticais, que
dão origem a uma protuberância ou tecido nodular diferencial que inicia o primórdio do
nódulo . O cordão infectante avança até atingir a base dos pelos e ramos absorventes e
penetrar nas células do primórdio do nódulo. Quando o cordão atinge uma determinada
célula, os rizóbios são liberados, colonizando o citoplasma das células vegetais. Ao entrar no
citoplasma da célula, o rizóbio é envolto pela membrana citoplasmática agora chamada
de membrana peribacteroidal e formando o que chamamos de simbiossoma. Os rizóbios
continuam a se dividir até começarem a fixar nitrogênio.
50
O simbiossoma é a unidade funcional de fixação, pois o microrganismo, se não tiver formado este
simbiossoma, não realiza processo de fixação. Nessa estrutura o que se observa é uma membrana
peribacteroidal, que é uma membrana citoplasmática da célula vegetal que envolveu o microrganismo.
Podem ser um ou mais microrganismos que se conjugam num único simbiossoma e dentro do
simbiossoma o microrganismo é modificado, tanto na morfologia como na fisiologia, e assume
uma forma que se denomina bacteróide, com certas deformações (em vez de ser um bastonete
curto torna - se ser em forma de clube, em forma de X, em forma de L) assumindo um
tamanho muito maior do que a bactéria original.
Se esmagarmos um nódulo e fizermos um preparo microscópico, observaremos que dentro desse

grupo existem bacteróides e bactérias. Os bacteróides são encontrados dentro dos simbiossomas
(que estão dentro do nódulo), enquanto as bactérias estão na zona merística do nódulo em
divisão celular ativa. Há uma diferença na morfologia, elas possuem formatos diferentes (desde
bastonete curto até X, Y ou clava) e tamanhos (maiores que as bactérias originais).
Apresentam também uma importante diferença fisiológica, pois o bacteróide é aquele que adquire a
capacidade de sintetizar a nitrogenase e ao mesmo tempo ocorre uma alteração no conteúdo celular
de considerável importância. Quando esse bacteróide começa a fixar N, sua divisão cessa.
51
Setores que são gerados em um nódulo maduro
O que vamos observar neste caso é um nódulo de crescimento indeterminado, e seu

zonas: a zona meristemática ou superior onde as células ainda não foram infectadas e
são células meristemáticas que estão se dividindo, outra zona mais rosada que é uma
zona de infecção recente, seguida por uma zona de maturidade onde o microrganismo
está se ligando a uma taxa importante e a área mais distante da ponta do nódulo que é
chamada de zona senescente onde a cor é mais acastanhada à medida que o rizóbio e as
células da leguminosa morrem. Em torno de todo este sistema desenvolvem- se
feixes vasculares que permitem transportar e retirar elementos fixos da área e transportá-los
para o resto da planta. Esta descrição corresponde a um nódulo de crescimento indeterminado,
que são nódulos mais alongados onde o meristema de crescimento está na ponta.
Existe outro tipo de nódulo que tem crescimento determinado, são mais arredondados
onde a principal característica é que a zona senescente fica no meio, ao redor dessa zona
está a zona de fixação ativa e os pontos de crescimento ficam alojados ao longo de toda a
superfície.
Nessas fotos vocês podem ver os dois tipos de nódulos, à esquerda um de crescimento
indeterminado onde você pode ver uma área branca na ponta que é a zona de crescimento, o
52
área no meio do nódulo que é avermelhada e a área senescente que é escura e acastanhada devido às
características das células que pararam de funcionar.
À direita temos um nódulo de soja de crescimento determinado, no qual podemos ver: a zona central que é um
pouco mais acastanhada e é a zona senescente, e ao redor dela está a zona avermelhada, que é a zona de
fixação ativa onde o bactérias Estão produzindo fixação com a cor rosa que caracteriza um nódulo ativo.
A cor avermelhada do nódulo provém da presença de um elemento chamado leghemoglobina,

essencial para a fixação de nitrogênio nas simbioses rizóbio-leguminosa porque esse elemento funciona
transportando oxigênio para a nitrogenase em um nível de oxigênio que não a inativa, pois a característica da
nitrogenase é que se trata de uma enzima que é inativada pela presença de alto teor de oxigênio, e portanto, para
que isso funcione, todos os microrganismos que fazem a fixação terão seu próprio mecanismo de proteção dessa
nitrogenase contra o oxigênio. O mecanismo que as leguminosas possuem é o mecanismo da leghemoglobina,
portanto, sem a sua presença não há fixação e a sua presença, ou seja, aquela cor avermelhada, é
um sintoma de que aquele nódulo pode estar fixando ativamente.
Mecanismos de proteção da nitrogenase contra o oxigênio
Respiração ativa
A respiração ativa (que é realizada a uma taxa 10 a 50 vezes maior que a de outros microrganismos) é um
mecanismo exibido por Azotobacter sp e outros microrganismos relacionados. Este mecanismo permite que a
concentração de O2 seja reduzida nas proximidades onde atua a nitrogenase. Porém, o microrganismo
necessita de grande quantidade de carboidratos para fixação. Assim, Azotobacter é capaz de ajustar sua
frequência respiratória em uma ampla faixa de concentração de O2.
Proteção conformacional
É também um mecanismo apresentado por Azotobacter sp. Este mecanismo é acionado quando a proteção
respiratória está saturada ou quando não há fonte de carbono suficiente disponível. A nitrogenase se liga
a outras proteínas que protegem seus sítios ativos
enquanto há oxigenação intensa. Dessa forma, a nitrogenase não consegue atuar, mas quando passa a
condição de excesso de oxigenação, ela é liberada, restabelecendo sua capacidade de fixação.
Exopolosacáridos
Em Derxia gumosa, Azotobacter sp e Beijerinkia sp existe uma forma de proteção relacionada à presença
de exopolissacarídeos. Na Derxia gumosa, por exemplo, o formato de suas colônias, que são redondas, apresentam
abundante quantidade de polissacarídeos extracelulares.
(alginato). A presença desse composto provoca diminuição da concentração de O2 no interior da colônia, o
que permite que a nitrogenase atue sem problemas.
Proteção no rizóbio – simbiose leguminosa
Na simbiose rizóbio – leguminosa existem duas estratégias. Por um lado, existe uma barreira física por parte da
planta à difusão do O2 e, por outro lado, existe uma série de estratégias fisiológicas e bioquímicas da planta e
das bactérias. Os nódulos das raízes das leguminosas são compartimentos especializados nos quais a fixação
de nitrogênio e o consumo de oxigênio pelo microrganismo são fisiologicamente compatíveis. Entre as células do
nódulo
53
Existem poucos espaços intracelulares que constituem uma barreira de difusão (barreira física).
Além disso, a presença da substância leghemoglobina (confinada no citosol da célula invadida pelo rizóbio)
facilita o fluxo de O2 para os bacteróides. A leghemoglobina é um pigmento rosa (hemoproteína) que
permite o transporte de O2 devido à sua alta afinidade com esse gás. Devido à sua combinação reversível
com o O2, transporta este elemento para o rizóbio, fornecendo-lhe a quantidade necessária ao seu
metabolismo respiratório em quantidades que não afetam a atividade da enzima nitrogenase.
heterocistos
Este mecanismo é especial para cianobactérias filamentosas como Anabaena. As cianobactérias

são procariontes fototrópicos, que combinam os mecanismos de fotossíntese e respiração na mesma célula.
Para fixar o nitrogênio, alguns gêneros possuem células especializadas chamadas heterocistos que
regulam o processo de difusão de O2. O heterocisto possui paredes espessas que impedem a entrada
de O2 e ali ocorre a fixação.
O poder redutor do FBN a ser realizado é obtido a partir da matéria orgânica produzida nas células vegetativas
adjacentes. A glutamina é a forma pela qual o nitrogênio fixado é transportado nos heterocistos para as
células vegetativas.
No entanto, nem todas as cianobactérias apresentam heterocistos. Estas espécies resolvem o problema do
FBN de forma alternativa. Em um grupo de cianobactérias filamentosas não heterocísticas e unicelulares,
observa-se a separação temporal do FBN e da fotossíntese. A síntese da nitrogenase ocorre nas primeiras
horas do período escuro e desaparece durante a fase clara. É o caso dos gêneros Gloeothece e
Chroococcus.
Vesículas de Frankia
Frankia é um gênero de bactérias filamentosas fixadoras de nitrogênio que vivem em simbiose com plantas
actinorrízicas. Essas bactérias formam nódulos radiculares em forma de coral. A proteção da nitrogenase
ocorre em vesículas que possuem paredes lipídicas. Neles a difusão do O2 é retardada e aí ocorre a fixação.
Fatores que afetam a nodulação e a fixação de N2
1) Temperatura: a temperatura na qual ocorre a inibição da nodulação é diferente entre os diferentes tipos de
rizóbios e até mesmo, dentro dos rizóbios da mesma espécie, existem diferenças nas cepas. Por
exemplo: Na soja, que é uma leguminosa tropical, Tº > 45ºC inibe a nodulação
Se houver uma combinação de temperatura + seca: enorme diminuição no número de rizóbios na superfície
da semente (até 5 unidades logarítmicas: 100.000 vezes menos microrganismos)
Semeadura direta: evita o aquecimento excessivo do solo e favorece a formação de nódulos e proteção dos
rizóbios. Na nossa região, durante a época de cultivo do milho há uma diferença média ao longo do ciclo de cerca
de 2ºC se se tem solo descoberto do que se se tem semeadura direta, portanto, o efeito é bastante acentuado.
2) Nutrientes:
• O P tem efeito positivo, embora não atue diretamente sobre os rizóbios. As leguminosas
necessitam dele em boas quantidades, portanto, sua disponibilidade
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Favorece o crescimento das plantas e consequentemente melhora o processo simbiótico
e assim facilita a fixação de nitrogênio.
• A deficiência de S gera menos nódulos. O enxofre é um elemento presente na nitrogenase e

os átomos de ferro estão ligados ao enxofre, portanto, quando a planta estabelecer simbiose,
ela demandará uma quantidade maior de enxofre no solo, e se isso for limitante pode ser
causa de problemas de nitrogênio fixação e desenvolvimento da planta.
• Micronutrientes: Fe, Mo (nitrogenase), Mg (ATP). (Cuidado com as transportadoras

adicione-os junto com o inoculante da semente). O ATP utilizado na nitrogenase vem na
forma de sal de magnésio, portanto, sua presença ou falta pode causar algum tipo de
problema. Em geral, esses micronutrientes costumam ser vendidos junto com os
inoculantes como micronutrientes que facilitam o processo de fixação. Na realidade, o
micronutriente em si pode não ser contra-indicado, mas pode ser problemático se os
transportadores adicionados juntamente com o inoculante na semente não forem adequados.
3) Fotossíntese: se a fotossíntese realizada pela planta for comprometida de alguma forma, o

microrganismo tende a não formar nódulos porque, na realidade, a planta será afetada negativamente,
produzirá menos carboidratos e, portanto, irá nutri-la. menos simbiose. Por outro lado, a planta que se
desenvolve quando há ausência de luz suficiente para realizar a fotossíntese elimina o etileno, e o
etileno afeta a formação de nódulos. Portanto, qualquer coisa que afete ou retarde a fotossíntese pode
afetar negativamente a fixação de nitrogênio.
4) Nitrogênio mineral: a presença excessiva de nitrogênio mineral no momento do

estabelecimento da simbiose desempenha um papel negativo no estabelecimento dessa simbiose.
Para que o nitrogênio se transforme em amônia num processo de fixação de nitrogênio, a planta gasta
16 ATP e, por outro lado, para absorver o N mineral presente no solo custa apenas 8 ATP. Diante
disso, serão apresentados mecanismos para anular o processo de invasão de microrganismos
quando houver quantidade suficiente de nitrogênio mineral no solo, pois a planta tentará economizar
essa energia. Consequentemente, a fertilização não é recomendada no plantio de uma leguminosa
porque podemos comprometer o estabelecimento da simbiose. Por exemplo: se plantarmos uma
leguminosa e adicionarmos nitrogênio mineral em forma de adubo, no início do desenvolvimento o
vegetal terá nitrogênio, mas à medida que aquele vegetal for crescendo, o nitrogênio mineral não
permanecerá no solo porque tem muitos formas de perda, e quando a planta exigir em maior
quantidade ele não estará presente, e por não ter formado um sistema de fixação , a planta começará a
sofrer com a escassez de nitrogênio.
Se houver excesso de nitrogênio mineral, ocorrerá uma série de eventos que farão com que os nódulos
não se formem:
• Diminui a produção de flavonóides gerados pela leguminosa.

• Eles abortam canais infecciosos.
• Reduz a formação de pêlos absorventes, por onde entra o rizóbio.
• Diminui a atividade da nitrogenase no caso de o
simbiose
55
5) PH do solo: É um fator que vai depender do tipo de rizóbio, mas em geral podemos dizer que valores
baixos de pH afetam infecção, nodulação e FBN. Solos ácidos podem causar toxicidade de alumínio e manganês
e deficiências de Ca, Mo e P. Por exemplo, rizóbios associados à alfafa requerem pH bastante elevado, e
abaixo de 5 já existem fortes processos de inibição. No caso de instalação de alfafa em área com pH muito
baixo, recomenda-se o uso de limers ou aumentadores de pH , que facilitam e melhoram a formação de nódulos.
6) Salinidade: o rizóbio é uma bactéria muito sensível à presença de sais, portanto, em solos salinos é
bastante difícil sua instalação e o bom funcionamento do sistema de fixação. Se adicionarmos algum
fertilizante contendo sais, ele deverá ser colocado próximo à semente, mas não em contato com ela. O contato
direto entre a semente e o fertilizante pode levar à morte da semente ou à redução da nodulação, e o FBN
será afetado.
7) Teor de água: uma escassez muito grande de água durante o ciclo de uma cultura, por exemplo, a
soja, ou na época da semeadura pode causar certos problemas na formação do nódulo e no processo
de fixação.
Se esse estresse ocorrer na época da semeadura, fará com que as bactérias que ainda não entraram na
planta morram em grande número e, portanto, se formarão menos nódulos.
Se o estresse ocorrer durante o ciclo da cultura, se for extremo haverá abscisão dos nódulos, ou seja, os
nódulos se desprendem e o processo de fixação não funciona adequadamente.
E se for moderado, haverá pelo menos diminuição da atividade da nitrogenase.
8) Antibacterianos: a presença de antimicrobianos no solo pode reduzir ou eliminar o desenvolvimento de

rizóbios na superfície de uma semente de leguminosa. Portanto, a possibilidade de isso ocorrer deve ser
levada em consideração ao associar microrganismos produtores de antimicrobianos e que estes afetem a
cultura da soja. Existem certos Bacillus, por exemplo, que produzem antimicrobianos que podem afetar a
presença de, por exemplo, Bradyrhizobium japonicum próximo à cultura da soja, e se for feita uma combinação
de microrganismos e não for levada em consideração, isso pode ser letal para o desenvolvimento
do sistema fixador.
Inoculação em leguminosas
A inoculação é o processo pelo qual bactérias específicas (neste caso da família Rhizobiaceae) são colocadas em
contato com a semente da leguminosa ou com o solo , como prática alternativa. As cepas bacterianas que
realizam FBN podem não estar em quantidade suficiente no solo, ou podem não ser eficientes em FBN para
atender à demanda da cultura de leguminosas com a qual estão simbioticamente associadas.
O inoculante é um fertilizante biológico de origem industrial que contém bactérias selecionadas

transportadas por um transportador denominado “transportador”. Esse transportador ou suporte pode ser
líquido ou sólido. Geralmente o inoculante é aplicado junto com a semente na hora da semeadura, para que
quando a planta germinar
Permite uma rápida associação entre o microrganismo e as raízes da planta.
Tipos de inoculantes comerciais:

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Os inoculantes que encontramos no mercado são divididos em:
• LÍQUIDOS: foram desenvolvidos mais recentemente. Na Argentina, a maioria dos inoculantes eram sólidos e
principalmente em suporte de turfa. Nos últimos tempos, os líquidos têm sido muito mais adotados
por serem mais fáceis de distribuir e manusear, portanto, têm deslocado multidões. Os suportes líquidos
podem ser:
ÿ Aquoso: alguns possuem turfa em suspensão.

ÿ Oleosos: a maioria dos oleosos está desaparecendo do mercado, mas ainda
há alguns. Não são os mais recomendados porque neste meio a difusão do O2 torna-se mais lenta. •
SÓLIDOS: A dolomite e o
carbonato de cálcio têm sido utilizados como veículos ou como suportes, mas não têm tido o mesmo desempenho
que a turfa . Em geral, a turfa é considerada o melhor veículo para inoculantes, mas é difícil de
manusear.
ÿ Turfa: a que sempre foi utilizada na Argentina é à base de turfa. Em áreas onde
Existem problemas na nodulação, recomenda-se o uso de turfa devido ao seu efeito protetor sobre o rizóbio,
pois possui propriedades (como alta área superficial específica e higroscopicidade) que tornam
um nicho ideal para o microrganismo e capaz de atingir um
população naturalizada e estabilização da sobrevivência (por exemplo, na soja).
ÿ Dolomitas
ÿ Carbonato de Cálcio: não são recomendados porque retiram umidade da matéria orgânica, exigida pelo
rizóbio.
A preparação de um inoculante possui três fases:
Estágio de seleção de cepas
Esta etapa é realizada com o objetivo de detectar os microrganismos com melhor comportamento
nas diferentes áreas da cultura identificados pela sua homogeneidade, localização geográfica e fatores
limitantes como: umidade, temperatura, tipo e classe de solo, presença ou não de flora naturalizada.
Uma cepa selecionada é aquela que tem a capacidade de formar nódulos eficientes no
os hosts para os quais é recomendado, fazendo-o em uma faixa relativamente ampla
das condições agroclimáticas. Eles também devem ter a habilidade
57
formar nódulos em competição com a flora nativa ou naturalizada, capacidade de sobreviver e multiplicar-
se no solo e sobreviver na semente. Estes podem vir de coleções de culturas especializadas ou podem ser
isolados de plantas bem noduladas.
A seleção das cepas segue diferentes etapas.
A primeira etapa é realizada em câmaras de cultivo, nas quais as cepas a serem comparadas são
aplicadas em vasos. Inclui dois tipos de testes: • Testes de infectividade •
Testes de eficácia A etapa final
da seleção é a etapa de campo:
Consiste na realização de testes com as cepas pendentes das etapas anteriores em que são submetidas às
condições para as quais são você deseja selecioná-las, como, por exemplo: condições edafoclimáticas, capacidade
de competir com cepas naturalizadas.
Este tipo de testes deve ser repetido durante pelo menos três anos para ter em conta as variações climáticas.
Para avaliação dos resultados são considerados os parâmetros nodulação, massa seca de nódulos, % de
nitrogênio, produtividade de grãos e massa total de nitrogênio .
Produção industrial de inoculantes
Na decisão da produção de inoculantes a partir de uma cepa selecionada na etapa anterior, leva-se em
consideração não apenas a capacidade biológica de fixação de nitrogênio, mas também características relacionadas
à adaptabilidade industrial (crescimento em cultura líquida e adaptabilidade ao suporte), estabilidade genética. .
Um inoculante eficaz é aquele que atende às seguintes especificações: 1. Contém rizóbios

capazes de produzir nódulos e fixar grandes quantidades de nitrogênio.
2. Devem fornecer grandes quantidades de rizóbios viáveis.
3. Deve ser embalado para proteger o rizóbio até sua utilização pelo Produtor.
4. Deve estar livre de outros microrganismos que possam ser prejudiciais ao rizóbio ou à planta.
5. O rótulo deve conter instruções claras e uma lista das espécies de leguminosas que efetivamente
nodula, bem como a cepa com a qual foi trabalhada.
6. O nome e endereço do fabricante também devem estar impressos no rótulo.
O inoculante é composto pelo rizóbio específico suspenso em um caldo e por um suporte que funciona como
“transportador” do caldo.
A produção do caldo de cultura de rizóbios parte de uma cepa pura que será submetida ao processo de multiplicação
para obtenção de alta densidade populacional. Isso é realizado na planta de fermentação com diferentes tipos de
fermentadores . São compostos por um mecanismo de aeração, que favorece a dissolução do oxigênio.
Duas alternativas podem ser seguidas. Por um lado, a partir da cultura starter pode-se multiplicar em um
enlermeyer de 200 ml, para depois inocular a partir deste um enlermeyer de 2 litros, e finalmente passar
para um fermentador com capacidade variável entre 120 e 200 lt. A segunda opção implica que do enlermeyer de
200 ml passe para um fermentador pequeno e depois para um fermentador grande com capacidade variável entre
600 e 1000 lt. A opção escolhida dependerá da escala de produção da indústria. O importante é que o
número de passos de um fermentador para outro seja o menor possível para efeitos de
evitar contaminação.
O caldo de cultura é considerado bem desenvolvido quando parece viscoso, mas

58
não apresenta espuma.
Durante a multiplicação são realizados controles que incluem coloração de Gram para observar a pureza da cultura,
contagem de UFC para determinar o título do inoculante, medição de pH. Por outro lado, é necessário
preparar o suporte
sobre o qual será aplicado. será transportado o cultivo de rizóbios. Os suportes são de diversos tipos; Eles
podem ser líquidos, oleosos ou aquosos, ou podem ser sólidos. Entre estes últimos, o mais utilizado é a turfa.
Seu processamento inclui secagem, moagem para permitir aderência à semente e ajuste de pH com CO3Ca.
Também pode ser esterilizado com raios ÿ.
Uma vez condicionado o veículo, ele é impregnado com o caldo por pulverização. O inoculante é considerado pronto
quando atinge pH 7,2 e umidade de 45%. Depois pode-se proceder ao acondicionamento em sacos de polietileno
de baixa densidade, que permitem a troca de O2, mas não de umidade.
No caso de fabricação em turfa esterilizada, ela é ensacada após a esterilização, e o caldo é adicionado injetando-
o no saco e deixando-o “amadurecer” (os microrganismos do caldo colonizam e se multiplicam no suporte
por ser estéril e não tem concorrência).
O título que um inoculante deve ter deve ser da ordem de 2.5.109 , para que se alcance 1.106 na semente .
Controle de qualidade do inoculante
Como qualquer produto biológico, os inoculantes para leguminosas podem perder rapidamente a sua qualidade
devido a variações ou mutações nas culturas, perda de viabilidade por não ter o número adequado de rizóbios
durante a produção ou má selecção, ou devido à má conservação do produto uma vez que isso está no
mercado.
No momento da inoculação poderá ser realizado o controle de qualidade, que indicará o número de rizóbios viáveis
por grama de inoculante. Um inoculante é considerado adequado para uso quando contém um mínimo de 108
rizóbios viáveis por grama de inoculante; embora seja considerado de boa qualidade quando contém valores
que variam entre 109 e 1012 rizóbios por grama de inoculante. Para o qual as inoculações e avaliações são
feitas através do uso de plantas nodulantes. Ao mesmo tempo, são feitas culturas em placas de meios diferenciais
para contagem e observação de contaminantes.
Para que a inoculação tenha sucesso é necessário: 1.

Produzir um inoculante de qualidade.
2. Tome as precauções necessárias ao realizar a inoculação.
Quando falamos das cepas que são selecionadas para uso em inoculantes, a fim de melhorar ou promover o
processo de fixação, serão avaliadas duas características importantes das cepas: infectividade e eficácia.
• Testes de infectividade: capacidade de uma cepa formar nódulos na leguminosa

especifica. Neste ensaio é realizada a pré-seleção das melhores cepas com capacidade de nodulação, avaliando
a nodulação. Isso é determinado pela quantidade de nódulos que produzem, localização, tamanho e qualidade
quando cortados. Essas observações são feitas em diferentes momentos do ciclo da cultura, geralmente aos 30 e
60 dias, e estão relacionadas ao seu crescimento e aspecto vegetativo.
59
• Testes de eficácia: capacidade de uma cepa de fixar ativamente o nitrogênio atmosférico
uma vez estabelecida a simbiose. As cepas escolhidas são avaliadas em um ambiente ideal tanto
para o macrossimbionte (planta) e para o microssimbionte (rizóbio na câmara de cultivo), para que desenvolvam toda
a sua potencial capacidade de fixação. As variáveis avaliadas são nodulação, matéria seca, % de nitrogênio, peso
total de nitrogênio, e por diferença com o controle pode-se obter a quantidade aproximada fixada pela cepa .
Diretrizes para avaliar a nodulação de campo correta ou incorreta
O objetivo da inoculação é que a planta estabeleça uma nodulação correta.

Por que insistimos? Uma boa nodulação é condição para a obtenção de uma boa fixação de nitrogênio. Ou seja,
se conseguirmos ter uma massa nodular abundante, as associações
as relações simbióticas estabelecidas entre leguminosas e rizóbios fixarão a quantidade máxima de N
que pode ser obtido nas lavouras.
NODULAÇÃO EM SOJA
Para ver essa parte, primeiro vamos lembrar como vai ser nutrida uma
lavoura de soja. Uma cultura de soja absorverá em parte o nitrogênio
fornecido pelo solo e por outro lado absorverá o nitrogênio que
obtém através da fixação biológica. O solo pode fornecer o
nitrogênio que se acumulou antes do plantio da cultura através da
mineralização ou o que será mineralizado durante o ciclo da
cultura. Por outro lado, temos o que esta planta pode tirar da sua
associação com o rizóbio específico.
Para uma tonelada de grão de soja, o solo ou sistema de fixação precisa

fornecer 80 quilos de nitrogênio. Se não houver outros
tipos de limitações, como a disponibilidade de água, o rendimento de uma cultura de soja dependerá principalmente
da quantidade de nitrogênio que aquela cultura conseguir acumular.
Na cultura da soja, bem precocemente, 3 a 5 dias após a emergência, a simbiose começa a se expressar através
da formação de nódulos, mas estes podem ser observados
mais ou menos claramente entre 10 e 14 dias e a atividade de fixação começa entre 10 e 15 dias após a emergência.
60
No início da fase vegetativa a quantidade de nitrogênio fixada é baixa (de metade a 1 Kg N fixado/ha/dia), e
aumenta rapidamente nas fases reprodutivas quando a cultura exige mais nitrogênio. A taxa máxima de fixação
é dada em R5 – R6 com valores médios de 3 e valores máximos de 5 kg de N fixo/ha/dia. Após esta etapa o processo
cai abruptamente.
Existem também outros tipos de relatórios que vêm de áreas com baixíssimo teor de matéria orgânica (portanto,
há pouca oferta de nitrogênio do solo) nos quais constataram que até 80% do nitrogênio pode vir de fixação
biológica. azoto.
Avaliação de nodulação:
É uma prática geralmente realizada em campo, e são levados em consideração os seguintes parâmetros:
ÿ Localização/distribuição: a área mais adequada para a localização da nodulação é a região do colo da raiz
principal. Isso nos indica que a maioria desses nódulos é proveniente de uma infecção produzida por
microrganismos que estavam no tegumento da semente, consequentemente vieram do inoculante. Os
nódulos encontrados nas raízes secundárias ou nas pontas provêm das estirpes nativas do solo.
Esta localização é importante e estratégica, pois ao mesmo tempo nos garante que, no momento da fixação,
há menos gasto de energia da planta na transferência de nutrientes se os nódulos estiverem localizados na
região do pescoço do que se for necessário fazê-lo. uma translocação de nutrientes de áreas mais distais da raiz.
ÿ Tamanho e abundância: tamanho e abundância andam de mãos dadas. É importante ter muitos nódulos e
grandes porque não é válido ter poucos nódulos grandes ou um grande número de nódulos pequenos, porque na
realidade o que importa para a fixação do nitrogênio é a massa nodular, então uma boa quantidade de nódulo
( embora não excessivo) e um bom tamanho proporcionam o máximo de massa nodular na soja. Portanto, veremos
corretamente a cada momento quantos nódulos devemos encontrar e o tamanho que devem ter.
ter.
ÿ Coloração ao corte: Os nódulos efetivos apresentam coloração rosa intensa a muito vermelha.
marcado em seu interior devido à presença de leghemoglobina, sua presença nos nódulos é importante para que
a nitrogenase fique protegida contra o oxigênio e, portanto, esta presença indica que poderia haver uma boa
fixação e sua ausência indica claramente que não há, pode haver uma boa fixação. Se os nódulos forem verdes ou
brancos, não estão fixando N2 e podem estar crescendo; aqueles nódulos de cor preta são nódulos senescentes.
61
Momentos importantes para avaliar a nodulação na cultura da soja
Primeiramente, próximo à emergência, mais ou menos duas semanas após a emergência poderíamos fazer
uma primeira avaliação na qual seria de esperar encontrar dois a três pequenos nódulos na zona radicular principal.
Isso nos indicaria que o estabelecimento da nodulação está sendo realizado de maneira correta. Poderíamos
prever que esta cultura, se não houvesse algum tipo de inconveniente, alcançaria uma nodulação correta.
Depois, nas fases vegetativas (V4 – V5 por exemplo) poderíamos encontrar cerca de 10 - 12 nódulos por
planta, sempre localizados na zona do pescoço e de tamanho médio mas de acordo com o desenvolvimento
da cultura.
Quando a floração começar (pode ser R2 ou R4-R5, dependendo da região do país) devemos encontrar a
expansão nodular máxima. O correto seria que houvesse 40-50 nódulos muito grandes por planta. Com isto
poderemos ficar muito satisfeitos por termos conseguido uma boa nodulação, localizada na zona do pescoço ou
nas raízes secundárias muito próximas do colo e, se for feito um corte, devemos constatar que os nódulos têm
uma cor clara avermelhada ou rosada .
nodulação ÿÿ
Nas leguminosas plurianuais, como a alfafa, encontraremos duas áreas onde estão localizados os nódulos.
• Na área mais superficial, nos primeiros 40 centímetros, existem nódulos que irão
Dependendo das condições edafoclimáticas, por exemplo, cortes de
alfafa ou problemas de seca farão com que esses nódulos se
desprendam e se regenerem novamente por meio de reinfecção
quando novas raízes desta leguminosa forem emitidas. São esses
nódulos os responsáveis por fixar maior quantidade e dar maior
rendimento na leguminosa.
• Abaixo de aproximadamente 110 centímetros encontraremos

outros tipos de nódulos que não se soltam devido a cortes ou
diferenças nas condições de solo e clima, que são o que permitem a
sobrevivência da espécie, e aqui encontraremos nódulos que são
como agrupamentos de os nódulos que temos na superfície e irão gerar nódulos semelhantes a corais.
FBN (fixação biológica de nitrogênio) em alfafa

62
Seguem abaixo alguns resultados ou algumas questões que foram relatadas como resultado de um
projeto que foi realizado a nível nacional denominado PRONALFA, no qual interveio o INTA, no que
diz respeito ao cultivo de alfafa e no qual deu especial interesse à fixação biológica nesta forragem.
• Entre 43 e 64% das necessidades totais da alfafa provêm da fixação biológica de azoto.
• Em diferentes campos de alfafa foram detectadas fixações que variam de 50 a 740 kg de N/ha/
ano. A fixação média no país é de cerca de 200 kg de N/ha/ano.
• A ampla gama que se pode ter de fixação de N2 é dada por vários fatores:
ÿ Cepa de Rhizobium (interação com genótipo de planta)

ÿ Condições ambientais (pH, conteúdo de P e K no solo, disponibilidade de água,
radiação, temperatura, etc.).
Resultados das avaliações de produtos principalmente para cultivo de soja em ensaios

realizados pela presidência
Uma série de ensaios de campo foram realizados em culturas com e sem soja previamente aplicada
nesses lotes, foram avaliados e os seguintes resultados foram obtidos com a aplicação da
inoculação.
ÿ Resposta à inoculação em solos previamente cultivados com soja (com população

naturalizado de rizóbio). Esta imagem mostra o quanto a produtividade aumentou quando a cultura
foi inoculada versus uma não inoculada, quando foram implantadas em solos onde já havia cultivo
de soja, portanto, há uma população naturalizada de rizóbios. Neste caso, foi constatado um
aumento de aproximadamente 400 quilos, o que significa um aumento bastante significativo. A
média nacional para este tipo de ensaios é de 200 quilos, mas nestes ensaios considerou-se que,
como os lotes não tinham um histórico de soja muito longo, os maiores aumentos estão de
acordo com esta situação.
ÿ Resposta à inoculação em solos não cultivados anteriormente com soja (sem população
nativa de rizóbios). Nos ensaios realizados em lotes que não haviam sido cultivados
anteriormente com soja, foram constatados aumentos de até 850 quilos, muito próximos da
média nacional, que é um aumento de 800 quilos.
63
ÿ O que queremos mostrar com estes ensaios é que a prática da inoculação é sempre lucrativa, portanto, é
muito importante continuar com esta prática e não interrompê-la por
difícil pode ser ao fazer a aplicação.
Efeito da ausência de FBN na cultura
Quando há ausência de fixação biológica de nitrogénio nas culturas, há sempre diminuições nos
rendimentos. Às vezes, este efeito acentuado não é observado, mas sempre encontramos reduções nos rendimentos.
Também pode ser observado amarelecimento da cultura.
Procedimentos associados à inoculação
Alguns procedimentos costumam acompanhar o processo de inoculação.
• Pelotização: A pelotização é um revestimento das sementes com diferentes elementos como

carbonato ou hiperfosfato de cálcio, fora do inoculante aplicado. A aplicação da peletização tem como objetivo
uniformizar as sementes (especialmente utilizadas para sementes forrageiras) e protegê-las dos raios ultravioleta.
Isso faz sentido se a semente forrageira for exposta ao sol, onde os raios ultravioleta podem prejudicar a presença
do rizóbio. Caso isso não ocorra, a peletização não teria sentido de aplicação e poderia trazer poucos benefícios por
afetar a disponibilidade de água. No caso da alfafa, por exemplo, que é plantada em solos com pH baixo, o uso
de CaCO3 poderia ser benéfico, de forma a gerar um ambiente com pH um pouco mais alcalino naquele meio. A
aplicação de hiperfosfato poderia aumentar a disponibilidade de fósforo, embora este aumento seja insignificante.
• Protetores para pré-inoculação: os protetores foram desenvolvidos para adiantar o processo de aplicação
de rizóbios e conseguir manter esses rizóbios colocados na semente por mais tempo, pois aderem as
bactérias às sementes. Sua função é proteger os rizóbios da dessecação e da ação negativa dos fungicidas. A
proteção dura cerca de 20 dias. Atualmente a pré-inoculação antecipada é muito pouco utilizada devido
à curta duração do efeito protetor, porém são tecnologias que estão em desenvolvimento.
• Dupla inoculação: Recomenda-se a prática da dupla inoculação para garantir um suprimento adequado de
rizóbios para estabelecer a nodulação. Pode ser mais conveniente usar um inoculante de muito boa
qualidade, que por si só tenha um bom
64
carga de rizóbios (por exemplo, 1x108 UFC/ml), e não aplicar uma inoculação dupla
que leva ao dobro do custo.
• Inoculação no solo: a prática da inoculação no solo é uma alternativa diferente para

Aplique o rizóbio no tegumento. Falamos de uma “alternativa” e não de outro tipo de
inoculação porque na realidade é necessária em determinadas circunstâncias. A prática da
inoculação no solo requer de 6 a 10 vezes mais inoculantes do que quando se aplica
diretamente nas sementes, portanto, se não houver impedimento, é mais conveniente realizar
a inoculação das sementes diretamente. Mas há certas circunstâncias em que, por
exemplo, é necessário aplicar no tegumento algum elemento muito prejudicial aos rizóbios,
então, inoculando diretamente o solo pode-se estar protegendo os rizóbios porque ao
colocá-los no solo eles têm mais pontos de contato mais protegidos do que quando colocado
no tegumento da semente. Isto é feito com máquinas ou com acessórios nas semeadoras.
Outras circunstâncias em que a inoculação no solo pode ser necessária é quando nesse
solo existe um grande número de cepas nativas ou naturalizadas que podem ter grande
infectividade, e assim impedir que se estabeleça nodulação com as cepas que
encontramos. maior quantidade de N).
• Fungicidas (nunca mercuriais): geralmente é recomendada a aplicação de fungicidas

ao semear, por exemplo, soja ou outros tipos de leguminosas. Os fungicidas até hoje
conhecidos têm efeito letal sobre os rizóbios e, dependendo do tipo, diferentes graus de
agressividade. Os fungicidas mercuriais não são recomendados, pois são muito poderosos
e destroem completamente os rizóbios. Mesmo utilizando aqueles fungicidas que são
chamados de “compatíveis” com o rizóbio, é difícil que eles coexistam por muito tempo
na semente, por isso não são recomendados inoculantes que já vêm no mesmo frasco
junto com o fungicida. Conseguimos compatibilizar as práticas de inoculação e aplicação
de fungicidas, tornando a exposição dos rizóbios junto aos fungicidas o mais curta possível
(deve-se aplicar os rizóbios e os fungicidas imediatamente antes da semeadura e fazê-lo à
medida que o tempo avança no local em que se está semeando, em de tal forma que este
tempo seja extremamente curto).
Efeitos da aplicação de fungicidas nas contagens de rizóbios em sementes de soja
Os ensaios consistiram basicamente em aplicar o inoculante na semente sozinho ou com

adição de fungicida, em diferentes concentrações e verificar quantos rizóbios sobreviviam no
tegumento da semente, e então, com o mesmo trabalho, foi feito um ensaio de campo e
observado alguns impacto na nodulação e nos rendimentos. O primeiro gráfico
representa quantos rizóbios sobrevivem quando se aplica o inoculante à semente. Parece
que há um grande número de mortes. A cor verde representa a proporção de rizóbios que
morreram ao aplicar apenas o inoculante junto com a semente, o que significa
65
que o momento em que seca aquele inoculante ou aquela suspensão de bactérias, porque
é absorvido pela soja, isso já provoca uma mortalidade muito elevada, mas é uma morte
considerada e já tida em conta e por isso as formulações contêm uma carga tão elevada
de rizóbios. No segundo gráfico está a aplicação de dois fungicidas (Thiram + Carbendazim,
que são aplicados a 15%) junto com o inoculante, e vemos que a sobrevivência é um
pouco menor que no primeiro caso, mas que ainda há uma boa proporção de rizóbios
sobreviventes. Se a concentração de fungicidas for aumentada para 25% vemos que o número
de rizóbios que sobrevivem é praticamente insignificante. Portanto, devemos levar em
consideração não só o tipo de fungicida, mas também a concentração em que esse
fungicida é formulado.
Ao levar para campo o primeiro e o terceiro tratamentos, observou-se o seguinte:
Ao levá-lo para o campo foram feitas contagens de nódulos e pesados os nódulos, e o que
vemos é que nas duas etapas (V4 e R2) houve de fato uma aplicação contundente de
fungicida (lembre-se que esse fungicida é um produto muito alto dose e que praticamente
não deixou rizóbios na semente) e que o número de nódulos e o peso nessas fases
diminuíram drasticamente.
Efeito da aplicação de fungicidas (Thiram + Carbendazim a 25%) na produtividade em

parcela sem histórico de soja:
O que temos na imagem são barras que representam os

rendimentos, onde está o tratamento em que não foram
aplicados fungicidas, o tratamento em que foi aplicado
fungicida em altas doses e uma testemunha não inoculada
(ou seja, não houve rizóbios). . No tratamento
sem fungicida a produtividade da soja foi bastante boa.
Por outro lado, quando foi aplicado fungicida,
embora os dois tratamentos difiram estatisticamente,
o rendimento foi reduzido em vários quintais, quase
chegando ao que rendeu o controle, ou seja,
colocar rizóbios e não aplicá-los ou aplicá-los
com fungicida e matar aqueles rizóbios do Aplicar o fungicida em dose alta nos deu
praticamente o mesmo, só decidiu por 200 quilos.
Inoculantes comerciais
Cepas utilizadas em nosso país para cultivo de soja
A maioria das empresas formula seu inoculante com base em uma cepa recomendada pelo
INTA Castelar com base em seus anos de estudos, que é uma cepa de Bradyrhizobium
japonicum, denominada Cepa E 109.
Inoculantes na Argentina. Legislação vigente

66
Resolução SENASA 0246/2011.
• Concentração mínima para produtos formulados à base de Rhizobium e Bradyrhizobium de 1x108

UFC/ml ou gr no vencimento e percentual mínimo de nodulação igual a OITENTA POR CENTO
(80%).
• O prazo de validade dos produtos será de seis a dezoito meses, definido pela empresa.
• Aqueles produtos cujo suporte seja estéril deverão comprovar esta condição por meio de um
Certificado.
• Aqueles produtos cujo suporte não seja estéril deverão incluir esta especificação em seu
trabalhar
• Certificado de fornecimento da Cepa.
• A embalagem ou etiqueta deverá conter: prazo de validade, data de fabricação e número do produto.
lote.
Qualidade dos produtos comerciais. Resultados da análise de inoculação realizada pelo

Departamento de Microbiologia (7 anos de avaliação).
São apresentados alguns resultados de avaliações de qualidade

de inoculantes comerciais realizadas em laboratório .
Microbiologia da faculdade, em avaliações realizadas durante 7
anos com produtos comerciais disponíveis na província de
Entre Ríos e na província de Santa Fé. O gráfico mostra uma
proporção de produtos que atendem a determinados
números. A primeira barra corresponde a produtos que
possuem contagens inferiores a 1x108
, a barra do meio corresponde a
produtos que possuem contagens entre 1x108 e 1x109 , e a
barra à direita são produtos com contagem superior a 1x109
, isto é, bom conta quando se avalia o número de rizóbios
por mililitro ou por grama. O que se observou é que a quantidade ou proporção de inoculantes que
estavam de acordo com a legislação é de 76%, o que é bom comparado ao que foi visto em outros
trabalhos anteriores para o nosso país.
O que é avaliado neste gráfico circular é a presença de contaminantes. Quando falamos

em legislação, vimos que existiam produtos estéreis e não estéreis. Hoje em dia
praticamente não existem produtos estéreis no mercado, mas mesmo que não sejam
estéreis, as contagens de outros organismos que não sejam rizóbios devem ser
praticamente nulas ou muito baixas para que não haja competição com os rizóbios.
Portanto, avaliar a presença ou ausência de contaminantes é uma ferramenta útil
na avaliação da qualidade, e o que foi apurado nas análises realizadas pela cadeira é
que 30% dos produtos apresentavam presença de contaminantes, o que não era
adequado para comercialização o produto. O problema que a presença de
contaminantes pode trazer é justamente que, se coexistirem por muito tempo, esses
contaminantes são competidores muito bons e podem fazer com que o número de rizóbios diminua,
pois a maioria dos microrganismos são melhores competidores que os rizóbios, e, portanto , sua
presença em inoculantes não é desejável.
67
Unidade 17
INTERVENÇÃO NO CICLO DOS ELEMENTOS
Nesta unidade veremos a intervenção de microrganismos em outros elementos químicos além do nitrogênio e
do carbono.
a) Ciclo biológico do enxofre
para. Mineralização.
b. Oxidação.
c. Redução.
b) Intervenção microbiana no processo de solubilização do fósforo.
Ciclo do enxofre
O principal íon que as plantas usam para crescer é o íon sulfato. Neste ciclo, a maior oferta de nutrientes para as
plantas é dada pela mineralização a partir de compostos orgânicos.
Mineralização
É feito de restos vegetais, animais ou microbianos, e também de substâncias

húmicos que contêm enxofre. Em restos vegetais, animais ou microbianos, as formas orgânicas do enxofre
são geralmente compostos proteicos (existem aminoácidos que contêm boa proporção de enxofre como metionina,
cistina, cisteína), compostos com pontes de enxofre (dissulfetos), também sulfatos orgânicos, ésteres, enxofre e
algumas vitaminas do complexo B (timina, biotina), etc. Esses compostos orgânicos devem ser “atacados” por
microrganismos através de suas atividades enzimáticas para que compostos mais simples sejam liberados e íons
de enxofre sejam disponibilizados para a nutrição das plantas. De acordo
diferentes íons podem ser liberados para o ambiente (aeróbico ou anaeróbico) em que ocorre o processo
de mineralização: em ambiente aeróbio (Mineralização
-2
aeróbico) o íon produzido é o íon SO4 (Sulfato), e em ambientes anaeróbicos
Eles irão gerar íons S-2 (sulfeto) ou mesmo íons H2S (sulfeto de hidrogênio).
A imobilização ocorre, também como no ciclo do nitrogênio, porque os microrganismos para realizar seus processos
de crescimento capturam íons inorgânicos para constituir parte
68
da sua massa microbiana. Ao contrário do nitrogênio, onde pode ocorrer imobilização “líquida”, neste processo (ciclo
S) a imobilização “líquida” é rara de encontrar, pois é raro que o íon sulfato (SO4) não esteja disponível.
-2
) do pool inorgânico e comprometer o crescimento de
vegetais (portanto, na agronomia não é um processo muito importante comparado ao do nitrogênio).
Reações de oxidação e redução (de acordo com condições de aerobiose e anaerobiose)
Certos microrganismos podem causar alterações químicas na forma inorgânica do enxofre.
Sulfoxidação
Oxidação de enxofre [ocorre na aerobiose]
-2 0
Neste processo são utilizadas as formas mais reduzidas de enxofre (sulfetos - S , enxofre elementar - S ) filho
levado a compostos de enxofre mais oxidados, como o sulfato (SO4-2 ), através do processo de respiração de alguns
grupos microbianos.
Este processo é comparável à nitrificação, por exemplo, a maioria dos microrganismos que
realizam a sulfoxidação são do grupo autotrófico. E este processo de oxidação fornece-lhes energia suficiente
para poderem utilizar o CO2 para a sua atividade autotrófica. Este processo de oxidação é importante no
solo e ocorre quando o solo apresenta acúmulo de íons sulfetos (S-2 ) ou é adicionado enxofre em pó . E
em condições de oxigenação, os microrganismos formam H2SO4, que é um ácido muito forte que provoca queda no
pH.
Este processo é utilizado para combater microrganismos que gostam de habitar ambientes alcalinos, por ex.
doença da batata que causa a sarna por Streptomyces, que ocorre na alcalinidade, e para controlá-la aplica-se
enxofre em pó e os microrganismos realizam a sulfoxidação e desta forma o pH diminui devido ao H2SO4 produzido.
Os microrganismos autotróficos são principalmente do grupo Thiobacillus sp . e existem alguns heterótrofos
como Pseudomonas sp. e Bacillus sp.
A produção de H2SO4 tem relação com a disponibilidade de fósforo, o que será detalhado quando observarmos o
mecanismo de solubilização do fósforo.
Redução de sulfato
Redução de enxofre [é dada na anaerobiose].
É “análogo” em certo sentido ao processo de desnitrificação que ocorre no solo: utilizam o sulfato como
aceptor final de elétrons na degradação da matéria orgânica, processo denominado redução do sulfato, que resulta
na produção de H2S .
Na redução de sulfato, são microrganismos que, ao contrário do que acontece com os desnitrificadores ,
que são anaeróbios facultativos, realizam a redução de sulfato .
São anaeróbios estritos (Desulfovirio sp e Desulfomaculum sp) e utilizam apenas SO4 -2 para realizar sua respiração
anaeróbica.
Microrganismos envolvidos nestes processos:

69
Ciclo do fósforo:
Mecanismos de solubilização de P:
1) Produção de quelantes: Ácidos Orgânicos (Oxálico, Cítrico, Láctico)
2) Produção de ácidos fortes (nítrico e sulfúrico)
3) Produção de sulfeto de hidrogênio.
-2
Íons HPO4 (fosfato ácido) e H2PO4 - (fosfato diácido) são o que as plantas podem
absorver, portanto, sua disponibilidade pode ser aumentada ou diminuída de acordo com a qual compostos
insolúveis de fósforo podem ser transformados por ação microbiana e liberados nas referidas formas.
1) Produção de quelantes:
Existem certos microrganismos que são capazes de produzir ácidos orgânicos, como os ácidos oxálico, cítrico
e láctico, produtos do seu metabolismo. Esses ácidos atuam no meio quelando íons que insolubilizam fosfatos
inorgânicos, por exemplo, os íons insolúveis de AlPO4, CaHPO4.
Esses ácidos orgânicos “capturam ou prendem” Ca+2 ou Al+3 , liberando compostos solúveis de fósforo e
aumentando assim a disponibilidade para a planta. Este é um mecanismo típico de Pseudomonas sp. (vimos
isso na unidade dos organismos rizosféricos como promotor de crescimento ou PGPR, pois Pseudomonas
fluorescens produz ácidos orgânicos que possuem essa propriedade).
2) Produção de ácidos fortes (nítrico e sulfúrico):
-2 . Esses
A produção de HNO3 libera H+ e NO3 - , H2SO4 também libera íons H+ e sulfato SO4
Mecanismos de produção de H2SO4 ou HNO3 são utilizados para aumentar a disponibilidade de fósforo,
principalmente para pastagens. É comercializado um produto que consiste na aplicação de uma rocha fosfática
misturada com enxofre e uma cultura de Thiobacillus. Esses Thiobacillus oxidam o S elementar, transformando-
o em ácido sulfúrico. Este ácido sulfúrico liberará íons fosfato (HPO4) da rocha fosfática.
-2
e H2PO4 - ) que estarão disponíveis para o
absorção pelas culturas.
3) Produção de H2S [sulfeto de hidrogênio]:
O sulfeto de hidrogênio é produzido em condições anaeróbicas, podendo combinar-se com o ferro (Fe) ligado ao
fosfato insolúvel por essa ligação, liberando o fosfato e solubilizando-o.
70
Este mecanismo está presente, por exemplo, na cultura do arroz, uma vez que se encontra em condições
anaeróbias devido ao alagamento do solo. E também deixa o fósforo solúvel disponível para culturas
subsequentes.
UNIDADE 18
Composição química do leite em relação ao crescimento microbiano
O leite é definido como todo o produto ordenhado de uma fêmea leiteira saudável, descansada e
bem alimentada, coletado higienicamente e sem colostro. É uma substância complexa do ponto de vista
físico. Quanto aos seus componentes, é composto maioritariamente por água e em menores quantidades,
mas não menos importantes são:
1) A lactose é o carboidrato predominante no leite, embora possa haver

glicose, galactose e sacarose em menor proporção. É encontrado em solução como os minerais e tem a
propriedade de ser fermentado sob a ação de enzimas de alguns microrganismos presentes no
leite.Essas fermentações podem ser lácticas, propiônicas, alcoólicas e butíricas, gerando assim ácido
lático, ácido propiônico , etc. Estes produtos da fermentação influenciam as características
“organolépticas” (percebidas com os sentidos) do leite e dos seus produtos.
2) As proteínas são encontradas em 2 fases diferentes: uma fase micelar (instável formada por partículas sólidas
em suspensão que são micelas de caseína) e uma fase solúvel estável constituída por vários polímeros
proteicos hidrofílicos que correspondem a proteínas solúveis ou proteínas do soro. Inclui diferentes frações:
caseína (proteína mais abundante no leite) e proteínas do solo (globulinas e lactoalbuminas).
As micelas de caseína são complexos orgânicos formados por proteínas desnaturadas, dentro destas
podemos distinguir caseínas do tipo ÿ, ÿ, ÿ, etc. Todos de tamanhos diferentes e com carga elétrica líquida
negativa devido à maior presença de aminoácidos ácidos e grupos hidrofílicos, isso determina que se
repelam. As caseínas representam 80% do nitrogênio total.
3) A gordura do leite encontra-se em emulsão, na forma de glóbulos de gordura.

Consistindo de pequenas gotículas de gorduras, principalmente triacilglicerídeos de baixo ponto de fusão, que
são líquidas à temperatura ambiente e rodeadas por uma membrana
71
lipoproteína carregada negativamente, que estabiliza a emulsão evitando que os glóbulos de gordura se
aglutinem e protegendo seus constituintes das enzimas de oxidação.
4) E finalmente contém minerais.
Portanto, devido à sua composição, o leite é um meio de cultura ideal para microrganismos e é
utilizado para tentar transformar o leite em seus diversos derivados (como queijo, iogurte, etc.), favorecendo
atividade microbiana específica dependendo do caso ou da percepção. objetivo.
Principais grupos de microrganismos presentes no leite
Dentre os microrganismos BENÉFICOS para o leite, temos:
Temos as bactérias pertencentes ao gênero:
Lactobacillus sp:
• Lactobacillus delbrueckii: participa da produção de iogurte junto com

Streptococcus salivarius subsp. termofílico
• Lactobacillus acidophilus e Lactobacillus casei também estão envolvidos na produção
de leite cultivado.
• Lactobacillus helveticus está envolvido na produção de queijo.

Estreptococo sp:
• Streptococcus salivarius subsp. thermophilus no leite [já nomeado em lactobacillus]

• Streptococcus cremoris e Streptococcus lactis, ambos participantes na produção de
queijos.
Leuconostoc sp.:
• Leuconostoc cremoris e Leuconostoc citrovorum dão aromas a certos produtos

láctico como manteiga.
Propionibacteriumsp:
• Propionibacterium shermani que produz fermentações propiônicas, que atuam na fase de maturação do
queijo.
Microrganismos PATOGÊNICOS presentes no leite e/ou seus derivados:
O leite cru pode transportar patógenos que podem ser eliminados através do processo de pasteurização.
Bactérias patogênicas mais importantes:
1) Mycobacterium tuberculosis: Causa a doença pulmonar chamada tuberculose, que já causou milhões
de mortes.
2) Gêneros de Brucella sp: todos produzem a doença conhecida como brucelose.

Estas espécies são diferenciadas pela especificidade do hospedeiro (do animal que infectam). Em
todos os casos produzindo abortos espontâneos.
a) Brucella abortus: afeta bovinos
(b) Brucella melitensis: afeta caprinos e ovinos.
c) Brucella suis: cerdo.

72
Tanto o Mycobacterium tuberculosis quanto as espécies do gênero Brucella sp. Produzem

doenças consideradas zoonoses (que são transmitidas de animais para humanos)
3) Coliformes (Enterobactérias): São encontrados no trato digestivo dos mamíferos.

Todos capazes de gerar gastroenterites de gravidade diferente dependendo da espécie em questão e da
idade do paciente:
o Shigella disenteriae.
o Salmonella typhi.
o Salmonella paratyphi.
o Yersinia enterocólica.
o Escherichia coli: É considerada um indicador de contaminação fecal no leite cru e algumas cepas de E.
coli podem causar diarreia muito grave e síndrome hemolítico-urêmica.
4) Staphylococcus aureus: que pode causar intoxicação gastrointestinal de

evolução rápida. Esta bactéria não sobrevive às temperaturas de pasteurização, mas produz toxinas
resistentes ao calor que causam envenenamento. Este patógeno é um habitante normal da pele, portanto,
em certos casos, pode causar mastite.
e inflamação nos úberes de vacas leiteiras.
Contaminação microbiana no leite cru:
Independentemente dos microrganismos que estão presentes no leite, ou seja, se são patogênicos ou não. Os
microrganismos entram no leite ordenhado por diferentes rotas.
Pode haver 2 rotas ou origens de contaminação microbiana no leite cru:
- Aquelas contaminações provenientes do tecido mamário da vaca.
- Aqueles de origem externa.
No caso de contaminação de origem mamária ou interna, aquelas que

filho:
- Endógenas: Infecções no úbere (glândula mamária) que passam para o leite ordenhado quando
as vacas não são tratadas corretamente.
73
- Do bico: Seja pela proliferação microbiana que ocorre no bico pela exposição ao meio ambiente,
seja pela má ou incorreta limpeza dos bicos antes da ordenha da vaca e vedação após o término
da ordenha.
Em qualquer um destes 2 casos de contaminação, o tratamento sanitário do rebanho e a limpeza realizada no

momento da ordenha são necessários ou imprescindíveis .
No caso de contaminação de origem externa, aquelas que sejam provenientes de:
Ambiente: Onde ocorre o rebanho leiteiro, por ex. as pastagens, o curral de espera antes da ordenha, etc.
Esses ambientes podem influenciar a carga microbiana que pode contaminar o leite.
Sujeira do animal: Animais sujos com extremidades enlameadas, com esterco, contribuirão para parte da
contaminação que pode atingir o leite cru.
Má higiene nas instalações: Instalações ao nível da sala de ordenha e dos equipamentos (máquinas de
ordenha e frigoríficos).
Água de má qualidade: o ponto anterior tem a ver com a água utilizada para limpeza desses equipamentos e
geladeiras, se for água de má qualidade e com alto teor de bactérias coliformes, contribuirá para a
contaminação do leite.
Máquinas de ordenha e refrigeradores: mencionados anteriormente
Transporte: Outro aspecto a ter em conta é o transporte do leite até à unidade de processamento e a
contaminação que pode ocorrer na própria unidade de processamento.
Planta de processamento: mencionada anteriormente.
Alterações ou transformações no leite devido à atividade microbiana

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Algumas das diferentes atividades microbianas que produzem alterações no leite são desejadas, tais como:
• Fermentação láctica que transforma o leite em iogurte, queijo, etc. • Noutros casos, a
actividade microbiana produz efeitos indesejáveis no leite, por ex. a
acidificação excessiva resultante de um elevado número de microrganismos.
• Fermentações indesejáveis como a fermentação butírica, que produz mau cheiro e mau gosto, e fermentações alcoólicas.
que prejudicam a qualidade dos produtos lácteos.
• Temos também a lipólise que causa ranço (alteração dos lipídios), por exemplo. no
manteiga, produzindo um sabor desagradável.
• Ou aqueles que têm a ver com proteólise (degradação de proteínas como a caseína) produzindo coagulação
sem acidificação ao longo do tratamento do leite, o que reduz o desempenho na fabricação de queijos e
também sabores amargos e pútridos.
Parâmetros utilizados para pagar o leite cru pela qualidade:
O leite cru transportado para as unidades de processamento deve conter:
A produção de leite de boa qualidade higiénica numa fábrica de lacticínios significa que a carga
bacteriana inicial é mínima, uma vez que nem o arrefecimento nem a pasteurização subsequente irão melhorar
este aspecto da qualidade.
QUALIDADE DO LEITE
A qualidade do leite tem impacto direto na saúde, nos processos de transformação

leite, bem como a sua conservação, sendo também uma das diretrizes de pagamento deste produto aos produtores
de leite.
O conceito de “qualidade do leite” inclui dois aspectos:
• A qualidade físico-química: está relacionada à presença e quantidade dos componentes

produtos químicos (gordura butírica, proteínas, lactose, etc.)
• Qualidade higiênico-sanitária: tem a ver com o grau de contaminação com bactérias ou
outros elementos estranhos, tais como:
a) o número excessivo de microrganismos banais ou contaminação por germes patogênicos (aspecto
relacionado à qualidade microbiológica do leite).
b) a presença de substâncias químicas estranhas como resíduos de agroquímicos, desinfetantes,
detergentes, antibióticos, etc.
c) o conteúdo de células somáticas superior ao normal, indicador do estado de saúde do úbere.
Métodos que permitem avaliar a qualidade do leite.
Os métodos de contagem de microrganismos são precisos e significativos, mas exigem que sejam realizados
em laboratórios bem equipados. Diferentes grupos podem ser contados
75
microbianas, que têm importância diferente do ponto de vista higiênico e técnico: bactérias aeróbias mesófilas,
coliformes, bactérias resistentes ao calor, esporuladas, psicrofílicas, ácido lácticas, etc.
No leite cru, a contagem de bactérias mesófilas aeróbias totais (MAT) permite estimar a população bacteriana
total, que indica o nível de medidas higiênicas adotadas durante a produção e os cuidados tomados no manuseio do
produto até sua entrega na indústria.
Para realizar a contagem são semeadas diluições, pois o número de microrganismos por mL de leite costuma ser
elevado, utilizando como meio de cultura o Plate Count Agar (PCA). Este meio é de tipo geral, rico em fatores de
crescimento.
As bactérias coliformes são importantes do ponto de vista higiênico, porque diversas das espécies causam doenças
infecciosas e, do ponto de vista tecnológico, porque são capazes de fermentar açúcares, produzindo gases e
ácidos. Os gêneros mais significativos são Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Salmonella, Shigella,
etc. Para contagem deste grupo, utiliza-se o meio de cultura seletivo Violet Red Bile Agar (VRBA).
Pasteurização
Nas plantas de processamento, métodos de higienização são aplicados ao leite com o objetivo de reduzir a carga
microbiana presente no leite cru. Um exemplo é a pasteurização.
A pasteurização é o método de higienização em que temperaturas e tempo são combinados

de exposição, de forma a atingir os seguintes objectivos:
Nesse sentido, distinguem-se 2 tipos de pasteurização:
- Baixa pasteurização: Combinar 62°c por 30min.
- Alta pasteurização: combinar 75°c por 15 segundos.
Atualmente, a baixa pasteurização tornou-se obsoleta e utiliza-se a combinação de tempo e temperatura

estabelecida para alta pasteurização.
Para estabelecer as combinações ótimas de temperatura e tempo e atingir os objetivos da pasteurização, utilizou-se
como indicador a temperatura de morte do microrganismo Mycobacterium tuberculosis por ser este o
microrganismo patogênico que resiste às temperaturas mais elevadas . Então a linha de pasteurização
deveria estar localizada acima da linha de morte do referido microrganismo, ou seja, cada linha dessa curva é dada
pelas diferentes combinações de temperaturas e tempo, obviamente não poderia ultrapassar uma determinada
combinação temperatura-tempo . desnaturaria as proteínas e alteraria a qualidade do leite. Então a linha de
pasteurização fica entre a linha de morte do Mycobacterium tuberculosis e a linha do creme (considera-se que
passar por esta linha do creme alteraria as condições organolépticas do leite). Portanto, de acordo
com os padrões fixos de pasteurização, pode-se dizer que os germes patogênicos para o homem são destruídos,
mas ao mesmo tempo a qualidade nutricional do leite é mantida.
76
Após a pasteurização, o leite ainda pode conter bactérias termodúricas (resistentes a altas temperaturas) e esporos.
Ambos podem impactar diretamente nos produtos manufaturados e influenciar na conservação do leite
pasteurizado. As bactérias lácticas não resistem à pasteurização.
O processo de pasteurização pode ser avaliado através da sua eficiência. Varia entre 95 e 99% na contagem
de MAT e também a contagem de coliformes não deve ser verificada.
Esterilização
A esterilização envolve a eliminação de qualquer forma de vida. Neste caso, o leite é submetido a altas
temperaturas da ordem de 140°C por frações de segundo e depois ocorre um resfriamento rápido em torno de
25°C, com isso é possível eliminar todos os microrganismos contidos no leite e não alterar sua qualidade nutricional,
um exemplo de leite submetido à esterilização é o leite longa vida.
UNIDADE 19
APLICAÇÃO DA FERMENTAÇÃO LÁTICA À CONSERVAÇÃO DE FORRAGEM
A silagem é uma técnica de conservação de forragem úmida que permite o desenvolvimento de um grupo complexo
de microrganismos em um ambiente livre de oxigênio. O objetivo da silagem
preservar o valor nutricional da planta verde através de diferentes processos químicos biológicos que
ocorrem no material da silagem. Esta preservação é conseguida através da fermentação láctica em condições
anaeróbicas.
São produzidos em épocas como outono, verão e primavera, quando a produção é alta, para tê-los disponíveis
em épocas de baixa produção, como o inverno.
As bactérias lácticas ( BAC) sob condições anaeróbicas fermentam carboidratos solúveis (CHS) e são gerados
ácidos (preferencialmente ácido láctico) que baixam o pH do material a um nível que inibe a presença de qualquer
microrganismo que possa degradar e induzir ao apodrecimento do forragem.
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A qualidade final da silagem depende da fermentação predominante, e os parâmetros que geralmente
são avaliados em relação a uma boa fermentação são: concentração de ácidos orgânicos, nitrogênio
amoniacal e o pH alcançado. Forragem fresca de culturas como milho, gramíneas, legumes, trigo
e alfafa ou outras pode ser preservada através de silagem.
Etapas del ensilado
A silagem pode ser dividida basicamente em duas etapas: uma fase aeróbia e uma fase anaeróbia.
fase aeróbica
Na fase aeróbia, nas primeiras etapas de confecção do silo, registra-se o desenvolvimento de

bactérias mais ativas associadas ao metabolismo respiratório . Após o corte e
compactação do material, o oxigênio presente na massa vegetal diminui rapidamente devido à
respiração dos materiais vegetais e dos microrganismos aeróbios e anaeróbios facultativos.
Durante esta etapa, grande parte dos carboidratos não estruturais, principalmente o amido, são
transformados em açúcares simples (glicose e frutose), que são utilizados pelos microrganismos
encontrados na superfície do vegetal (por exemplo, bactérias, leveduras). ácidos graxos (AGV),
outros compostos orgânicos e gases. Quanto mais rápido o oxigênio é eliminado, menor é a
redução de carboidratos solúveis e a produção de calor, e menos tempo decorre até que
sejam geradas condições favoráveis para o desenvolvimento de microrganismos anaeróbios que
promovam a fermentação homolática, que é a procurada para a conservação. de forragem.
Caso contrário, a atividade respiratória provoca a decomposição do material vegetal, dando

origem a dióxido de carbono, água e calor, que, se os tempos desta fase aumentam, a temperatura
do silo aumenta e aparecem o que observamos como silos acastanhados (ou o que é dito queimado
ou emperrado), isso causa perdas significativas de açúcares
juntamente com a deterioração da qualidade final da silagem. Geralmente veremos isso com a
presença de microrganismos indesejáveis, como os clostrídios.
Uma das práticas que podem melhorar e acelerar o período aeróbio e de eliminação de ar na
primeira etapa do silo é o picador do material, isso favorece a rápida compactação e reduz o tempo
de respiração dos microrganismos.
Fase anaeróbica
A fase anaeróbica é alcançada com a eliminação de O2. Assim, após cerca de 24-48 horas. Uma
vez iniciada a fase anaeróbica, começam a aparecer sucessões microbianas relacionadas a
diferentes tipos de fermentações. Esta etapa tem duração variável de dias a semanas dependendo das
características do material ensilado e das condições no momento da ensilagem.
1. A princípio podem aparecer microrganismos como os Coliformes que causam

fermentações ácidas mistas que produzem ácido láctico, CO2, ácido acético e/ou etanol.
Esta etapa é relativamente curta e provoca o início da diminuição lenta do pH que promove o
próximo grupo microbiano.
2. Aparece então o grupo de bactérias lácticas chamadas cocos lácticos (por exemplo, Streptococcus
sp. e Pediococcus sp.) que resistem a pH ligeiramente mais elevado e realizam fermentações.
78
heterolático. Este grupo atua em um período relativamente curto e provoca quedas lentas no pH.
3. À medida que as concentrações de ácido láctico se tornam mais abundantes, estas bactérias diminuem enquanto
surge outro grupo de microrganismos homoláticos que produzem mais de 85% de ácido láctico. Se a
fermentação prosseguir com sucesso, a atividade das bactérias lácticas proliferará e se tornará a
população predominante.
Nesta fase aparecem os bacilos lácticos (por exemplo, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus curvatus).
Isso ocorre na terceira ou quarta semana, e como o ácido láctico é gerado principalmente, o pH do material
da silagem diminui para valores de 3 ou 4 no caso de silos de sorgo e milho, e valores de pH de 5 para
leguminosas (alfafa e soja). ),
Esses pH inibem a presença de outros microrganismos e ao manter o ambiente sem ar ocorrem poucas
alterações e, portanto, a fase final, que é a fase de estabilização, surge 30 a 45 dias após o início do preparo.
Fase de abertura e utilização.
Com a abertura do silo e a exposição da forragem ao ar, surge novamente a fase aeróbica (em contato com
O2), o que pode causar perdas de forragem nas laterais expostas do silo. Isto é inevitável quando a silagem deve
ser extraída e distribuída, mas também podem ocorrer perdas de forragem devido a danos na cobertura no caso de
silos de saco (por exemplo, por animais, roedores, pássaros ou granizo, etc.). Nesta fase pode ocorrer aumento
do pH e/ou temperatura e da atividade de microrganismos que deterioram a silagem.
Evolução de um silo
Este gráfico mostra a concentração de ácido láctico e oxigénio que o silo possui nas diferentes fases, a temperatura
que atinge em cada uma das fases, o pH e a quantidade de hidratos de carbono solúveis ou hidratos de
carbono solúveis também em cada uma das fases.
Fase anaeróbica: Fermentação
Se olharmos o gráfico vemos que na fase de fermentação a quantidade de ácido láctico começa a aumentar, o
pH diminui gradativamente à medida que há mais ácido láctico
e a temperatura se estabiliza porque a fase aeróbia já passou por onde o ar que estava
79
poderia produzir respiração e aumentar a temperatura, e os carboidratos solúveis diminuem devido à sua degradação.
Fase anaeróbica: Estabilização
Na fase de estabilização são atingidas altas proporções de ácido láctico, os níveis mínimos de pH de 3 a 4 se for
feito um bom silo, o que inibe a presença de outros microrganismos e, portanto, a forragem é
preservada até a sua utilização. Por outro lado, a temperatura já está estabilizada, e a proporção de
carboidratos solúveis diminui até se estabilizar porque não está mais degradado. O oxigênio também não
existe nesta fase.
Características de um silo de boa qualidade
As características da silagem relacionadas aos processos fermentativos são pH, teores de ácido lático,
ácido butírico, ácido propiônico e nitrogênio amoniacal (N-NH3).
• Uma silagem bem feita possui maior proporção de ácido lático, que constituirá 1 a 2% da massa do silo, pouco
ácido acético e propiônico; e quase nenhum ácido butírico.
• pH ideal de 3 a 4
• A forragem adquire uma cor verde-amarelada, enquanto que se houver ácido butírico apresenta uma cor
acastanhada e um odor desagradável, o que afecta a palatabilidade ou o sabor da forragem.
• Além disso, deve apresentar baixa proporção de N na forma amoniacal, o que significa que a atividade proteolítica
(degradação proteica) dos organismos foi mínima e as proteínas contidas na silagem foram
preservadas, mantendo seu valor nutricional. Caso contrário, o seu valor nutricional será afetado.
Que suas sucessões microbianas aparecem num silo?
Os microrganismos que aparecem em cada uma das etapas têm a ver com as condições que prevalecem
no ambiente.
Numa primeira fase surgem os heterofermentadores facultativos ou heterofermentadores obrigatórios e

posteriormente os homofermentadores. Os heterofermentadores produzem principalmente ácido láctico, mas
também podem produzir ácido acético, etanol e dióxido de carbono.
carbono. Enquanto os homofermentadores produzem mais de 85% de ácido láctico.
Em geral, podemos ver três sucessões basicamente microbianas:
• Enterobactérias ou coliformes (fermentação ácida mista): não proliferam em ambientes com baixos valores
de pH. Portanto, aparecem nas fases iniciais da construção de silos e podem ser desenvolvidos com ou
sem ar. Geralmente são indesejáveis porque competem com as bactérias do ácido láctico pelos açúcares
disponíveis e os decompõem em ácido acético, álcool e dióxido de carbono.
• Cocos lácticos e bacilos lácticos: bactérias produtoras de ácido láctico que são
associados ao processo de silagem pertencem aos grupos dos cocos lácticos e dos bacilos lácticos.
Dentre os cocos lácticos podemos citar gêneros como Leuconostoc sp., Streptococcus sp. e Pediococcus
sp. como um dos mais importantes. Entre os bacilos lácticos estão Lactobacillus plantarum e
80
Lactobacillus curvatus. A maioria deles são mesófilos, ou seja, podem crescer em uma faixa
de temperatura que varia entre 5 e 50ºC, com ótimo entre 25 e 40ºC. São capazes de
deixar o pH do silo em valores de 4 e 5 dependendo da espécie e tipo de forragem.
Que microrganismos indesejáveis podem aparecer?
Muitos dos microrganismos indesejáveis não só reduzem o valor nutricional da silagem, mas também
podem afetar a saúde dos animais ou alterar a qualidade do leite ou ambos.
Nas fases iniciais, quando a diminuição do pH é lenta e há temperaturas mais elevadas

devido à respiração ou ao prolongamento do período ou fase aeróbia da preparação dos silos:
Clostrídios são bactérias anaeróbias que formam endósporos e podem estar presentes no solo e
serem introduzidas no silo no momento do preparo; especialmente naquelas forragens que requerem
corte e enleiramento (colocação da forragem cortada em fileiras), como no caso da alfafa e da aveia.
Os clostrídios podem fermentar carboidratos , reduzindo assim o valor nutricional da silagem e

dificultando assim a atividade das bactérias lácticas. As fermentações butíricas por Clostridium
(Clostridium butiricum) liberam ácido butírico, CO2 e hidrogênio (silagem preta e cheiro rançoso). O
CO2 e o gás hidrogênio representam perda de matéria seca digestível e energia; e amônia e
ácido. butírico, elevam o pH do material da silagem e conferem odor desagradável à forragem que
prejudica sua palatabilidade e consequentemente reduz o consumo voluntário dos animais. Além
disso, seus esporos sobrevivem após passarem pelo trato digestivo e são encontrados nas fezes.
Isto pode resultar na contaminação do leite, seja diretamente ou através de úberes mal
lavados.
Enterobacteriaceae são organismos anaeróbios facultativos e aqueles presentes na silagem não

são patogênicos . Apesar disso, seu desenvolvimento é prejudicial porque competem pelos
açúcares disponíveis, podendo também degradar proteínas.
O outro grupo que pode aparecer são as leveduras. São microrganismos eucarióticos,
anaeróbios facultativos e heterotróficos. Em todas as silagens, a atividade de leveduras é
indesejável. Sob condições anaeróbicas, as leveduras fermentam açúcares produzindo etanol e
dióxido de carbono. A produção de etanol não apenas diminui o açúcar disponível para a produção
de ácido láctico, mas também produz um gosto ruim no leite quando a silagem é consumida.
Sob condições aeróbicas, muitas espécies de leveduras decompõem o ácido láctico em dióxido de
carbono e água. A degradação do ácido láctico aumenta o valor do pH da silagem, o que por sua
vez permite o desenvolvimento de outros organismos indesejáveis.
As populações de leveduras podem atingir até 107 UFC/g durante as primeiras semanas do
processo de ensilagem. Um período de armazenamento prolongado reduz gradualmente a sua
presença. A sobrevivência das leveduras durante o armazenamento depende da gravidade da
anaerobiose e da concentração de ácidos orgânicos. A presença de oxigênio facilita a
sobrevivência e o desenvolvimento das leveduras durante o armazenamento, o que é observado
quando os silos são abertos para alimentação dos animais.
81
Aqui observamos as curvas relacionadas aos principais microrganismos que podem aparecer no silo.
Coliformes ou enterobactérias aparecem quando o pH ainda está alto e,
Portanto, a produção de ácido acético aumenta e à medida que diminui, o ácido láctico torna-se o produto
dominante. Aí aparecem os cocos lácticos, o Streptococcus é o citado aqui, que são os primeiros
a aparecer durante a fermentação e como as concentrações de ácido láctico são mais abundantes, provocam
quedas lentas do pH e essas bactérias vão diminuindo, enquanto aparecem
bacilos lácticos, como neste caso Lactobacillus, que formam ácido láctico em grandes quantidades.
Processo de silagem de forragem verde
O processo de ensilagem consiste em diferentes etapas pelas quais a forragem deve passar antes de ser ensilada.
No processo de ensilagem de forragem verde as etapas são as seguintes: primeiro é feito o corte da
forragem , depois seu transporte e acúmulo , aumento de temperatura, depois entram em ação as bactérias ,
ocorre uma acidificação do material ensilado e uma estabilidade do produto ser ensilado.
ÿ Corte de forragem: É feito basicamente com máquinas de corte-corte.

Dependendo do material a ser picado, estes podem ser de corte direto, caso o corte seja feito diretamente
pela mesma máquina que corta a planta em pé que procede ao corte do material, ou quando temos que cortar
aveia, azevém ou alfafa em
onde este material é primeiro cortado através de cortadores onde o material cortado é então recolhido com
os picadores.
Devido aos efeitos do corte e picagem, a perda de umidade da forragem ocorre basicamente pela
transpiração. O corte fino da forragem permite uma melhor acomodação do material no
silo, o que facilitará a compactação e a expulsão do ar, principalmente se estivermos fazendo um silo tipo
ponte, e portanto melhor fermentação pelos microrganismos.
ÿ Transporte do material e acúmulo no silo: Nesta etapa o

a perda de umidade através da transpiração, respiração e o subsequente aumento da temperatura também
continuam, e na silagem o objetivo é interromper a respiração no menor tempo possível. Portanto, a forma
como o faremos vai depender do tipo de silo de que estamos falando: se estamos fazendo um silo de ponte,
para parar de respirar
82
O que fazemos é compactar a forragem com tratores ou máquinas para comprimir a massa
vegetal e eliminar o oxigênio e se estivermos fazendo um silo de sacos, a mesma ensacadora
ensaca sob pressão e é responsável por eliminar o oxigênio que permanece contido.
ÿ Aumento de temperatura: uma vez depositada a forragem no local onde será feito o silo, o
tecido vegetal continua a ser respirado pelos microrganismos, provocando um aumento de
temperatura proporcional à quantidade de ar no silo. . A temperatura deve ser mantida o mais
baixa possível, e isso é conseguido expelindo o ar da massa do silo por compactação. ÿ
Ação das bactérias lácticas: Terminada a produção do
silo, o
ação das bactérias lácticas que começarão a diminuir o pH do silo e terá início a próxima
etapa, que é a acidificação.
ÿ Acidificação: é um processo químico biológico onde o produto final desse processo é o ácido
láctico, ou seja, uma fermentação homolática. O pH começa a diminuir na massa do silo,
inibindo o desenvolvimento de outros microrganismos indesejáveis até estabilizar em
valores próximos de 3 ou 4 para silos de milho e sorgo. Por outro lado, num silo de
leguminosas como alfafa ou soja, o pH de um silo estabilizado é um pouco mais elevado,
atingindo valores de aproximadamente 5. Além disso, a fermentação láctica é a mais eficiente,
já conseguimos uma redução do nível de pH com custos energéticos muito baixos e, portanto,
a energia disponível no silo (na forma de proteínas, ácidos orgânicos, etc.) ficará para
ser utilizado pelo gado e não para utilização integral por microrganismos.
Tipos mais comuns de silos de forragem
• Silo ponte: é colocada uma fileira de rolos e outra fileira a uma certa distância, deixando uma
espaço no meio. Após o corte da forragem no campo, ela é depositada naquele espaço e
compactada com sucessivas passagens de tratores para eliminar o oxigênio presente
nela, o que é feito cada vez que a forragem é depositada. Depois de constatarmos que esta
está compactada o suficiente para que todo o oxigênio ou grande parte do oxigênio que está
contido na forragem seja eliminado, procedemos à retirada dos rolos que ficam nas paredes dos
silos (na lateral), e Em muitos casos, para haver menores perdas nas laterais da forragem que
ficam expostas às superfícies ou ao meio ambiente, ela é coberta com uma lona que é adquirida
exclusivamente para cobrir esses tipos de silos de ponte.
• Silo de sacos: o processo de corte é exatamente igual ao de um silo ponte. O carro
O dumper coloca a forragem dentro da ensacadora, que a compacta por pressão
e assim cria o silo.
• Embalagem silo: a forragem a ser ensilada é enrolada da mesma forma que quando vamos
fazer rolos secos. A única diferença é que neste caso, após o corte da forragem a ser ensilada,
ela é deixada algumas horas em pré-oleação (secagem ao sol para diminuir a umidade) e a
ensilagem é realizada com umidade entre 40 e 50 %. Uma vez confeccionados esses
rolos, eles são acondicionados em um saco para eliminar e excluir o oxigênio que este material
possui para ensilagem.
Fatores que afetam a fermentação no silo
Teor de carboidratos solúveis: Um dos fatores que influencia na construção de silos é a

composição química da forragem. Como os carboidratos não estruturais (ou facilmente
fermentáveis) da planta constituem o substrato fundamental dos microrganismos
fermentativos, quando o teor de açúcar da forragem é maior, o
83
Os microrganismos têm mais substrato para degradar, dando origem à sua proliferação,
gerando uma melhor fermentação láctica, o que baixará ainda mais os valores de pH. Isso
tornará o processo de ensilagem mais rápido. Entre as plantas forrageiras, os cereais e as
gramíneas (milho, sorgo, etc.), são as espécies mais indicadas para a confecção de silagens
devido ao seu alto teor de carboidratos facilmente fermentáveis onde se atinge baixo pH. Por
outro lado, as leguminosas (por exemplo, soja, alfafa, etc.) são pobres em açúcares, o que
torna muito difícil baixar o pH.
Capacidade tampão da forragem: em forragens com maior capacidade tampão torna ainda
mais difícil baixar o pH, por isso leguminosas como alfafa e soja apresentam maior capacidade
tampão e este fator, junto com o teor de carboidratos solúveis, faz com que é mais difícil baixar
o pH, que são causados, por exemplo, em gramíneas como o sorgo ou o milho.
Teor de umidade: Não é bom picar com a massa vegetal muito verde, nem muito seca. Se
ensilarmos um material vegetal muito verde e com muita água em sua composição, no silo ele
irá fermentar e todo o ácido ficará estacionado no fundo do silo (porque a água vai varrê-lo),
então a parte O a parte superior terá má fermentação e a parte inferior será bem
fermentada, devido ao efeito de que os ácidos, tendo uma composição de alta umidade, serão
depositados no fundo do silo. Geralmente, para espécies forrageiras, como alfafa, azevém,
aveia, o que normalmente se faz é o pré-oreo, ou seja, corta-se a forragem, deixa-se algumas
horas para fazer o pré-oreo e depois é feito o silo. Essas horas de pré-secagem têm como
objetivo tentar secar um pouco a forragem e perder um pouco de umidade do material.
Por sua vez, se a massa vegetal contiver muito pouca umidade, a fermentação não ocorrerá.
O primeiro problema que surgirá é que será uma forragem muito difícil de compactar, pois ao
tentar compactar o material seco irá gerar um efeito esponjoso, portanto nunca será
possível eliminar completamente o oxigênio e, portanto, se eles não conseguir eliminar o
oxigênio, não haverá desenvolvimento do microrganismo desejável e não predominará um
processo de fermentação e portanto a forragem também não poderá ser preservada.
Tamanho do picado: com um picado fino do material haverá melhor acoplamento das partículas,
portanto, haverá maior compactação e eliminação de ar. Por outro lado, num chop grosso a
acomodação das partículas é um pouco mais difícil e aí a eliminação do oxigênio não será tão
boa.
Tipo predominante de baterias: na primeira etapa haverá predomínio de bactérias coliformes

que produzirão ácido propiônico, e isso promoverá menor quantidade de fungos dentro do
silo.
Contaminação com solo: geralmente ocorre quando estamos fazendo um silo de ponte,
onde geralmente descem os tratores ou o maquinário que usamos para compactar para dar a
volta e depois sobem novamente até o silo, ou o trator que está trazendo o material picado
do campo, então sempre carregamos sujeira ou contaminamos o silo com sujeira, o que também
é um problema real e um fator que pode afetar a fermentação do silo.
84
Uso de aditivos em silos
Aditivo é qualquer substância que possamos adicionar a um silo para melhorar o processo de
fermentação, pois garante uma rápida estabilização do material, como resultado de um nível adequado
de ácido láctico com a consequente melhoria da qualidade nutricional ou da qualidade final do
um silo. Para a utilização dos aditivos leva-se em consideração a sua eficácia, o tipo de
forragem a que se vai aplicar, a facilidade de manuseamento e aplicação e o preço e disponibilidade na
zona.
• Uso de inoculantes: Os inoculantes atuam conseguindo uma fermentação mais rápida e eficaz e
fornecendo bactérias desejáveis para o processo de fermentação (Lactobacillus plantarum,
Lactobacillus brevis, Lactobacillus buchneri, Pediococcus sp.). É de extrema importância a
utilização de inoculantes com alta carga microbiana para fornecer um número de bactérias que
possam dominar o processo de fermentação: 1.105 bactérias por grama de forragem verde. Esses
inoculantes promovem a rápida fermentação láctica para inibir a atividade de outros microrganismos
indesejáveis. Em geral, começam a agir quando o pH está abaixo de 6.
Geralmente a ensacadora já inclui um sistema dosador com tanque onde é preparado o caldo com o
inoculante, e uma bomba centrífuga que fornecerá a pressão para inocular a forragem conforme ela
entra na ensacadora. Hoje em dia os picadores já possuem um sistema de dosagem de inoculante
no tubo de descarga, o que facilita muito porque garantimos que toda a forragem que vai passar pelo
tubo já estará inoculada.
No caso de fazermos um silo ponte, pela forma como é feito o processo de inoculação, fica difícil,
pois é complexo tentar espalhar um volume de caldo
85
homogêneo em todo o silo. Geralmente, um sistema de dosagem com bomba é adicionado à barra
dos tratores que nela pisam. No caso do milho ou do sorgo, o uso de inoculantes não é tão utilizado
no meio ambiente, mas é benéfico no caso de leguminosas como a alfafa ou a soja.
• Açúcares: para melhorar o processo de fermentação, são adicionados a forragens com pouco açúcar
em sua composição (leguminosas como soja, alfafa) e que impedem que atinjam rapidamente
fermentações homoláticas e reduzam o pH da massa ensilada. Por ex. melaço, batata, resíduos
de beterraba, polpa cítrica e outros resíduos da agroindústria, sorgo em grão ou milho moído, etc.
Esses aditivos podem ser adicionados diretamente na forragem durante a confecção do silo.
• Ácidos (sulfúrico, clorídrico): sua finalidade é acelerar a acidificação do meio e assim obter um
melhor desenvolvimento das bactérias lácticas para baixar o pH rapidamente (embora sejam
difíceis de obter comercialmente).
• Uso de inibidores de fungos e leveduras: Principalmente nas laterais expostas da forragem.

ao ambiente dos silos ponte ou nos casos em que o consumo dos silos é lento, ocorre deterioração
da silagem depois de aberta, o que gera perdas de qualidade. Esta deterioração é causada
principalmente por fungos e leveduras. Inibidores desses microrganismos foram testados, mas foram
observados alguns efeitos negativos nas bactérias do ácido láctico. Outros, por outro lado,
atuam inibindo fermentações secundárias (por exemplo, Clostridium sp.) que prejudicarão a qualidade
final da silagem.
Dentre os inibidores podemos citar o ácido fórmico, que favorece a diminuição do pH e inibe bactérias
que promovem fermentações secundárias que afetarão a qualidade final da silagem. Outros produtos
como formalina, metabissulfito de sódio, etc., atuam diretamente sobre bactérias indesejáveis.
• Uso de enzimas: Os inoculantes também contêm enzimas que degradam açúcares que formam
estruturas mais complexas nas forragens, ou seja, carboidratos estruturais insolúveis, e os
convertem em compostos solúveis que são mais facilmente utilizados pelas bactérias. O que as
enzimas fazem é cortar esses carboidratos para deixá-los como oligossacarídeos ou monossacarídeos
e acelerar a fermentação microbiana dos microrganismos no silo.
• Amônio (para silo de milho)
Principales cultivos para ensilar
Tempo ideal de corte para silagem de milho

86
Nesta imagem você pode ver, no caso do milho, o momento ideal de corte, que é a linha média do leite.
Observa-se que, se ensilarmos milho muito verde com aproximadamente 70% de umidade, temos perdas por
efluentes, ou seja, porque a cultura está imatura. A faixa ideal é entre um quarto e meia linha de leite, e se
deixarmos muito seco há perda de lote devido à menor compactação do milho.
UNIDADE 20
COMPONENTES DO LEITE
Em relação aos constituintes que o leite possui, ele é considerado uma mistura complexa e heterogênea,
composta por um sistema coloidal que, conforme a forma como os constituintes estão organizados, pode
ser considerada uma solução trifásica: solução, emulsão e suspensão.
MICRORGANISMOS PRESENTES NO LEITE
No leite existe um grande número de microrganismos que podemos considerar

como:
ÿ Flora banal: que não apresenta nenhum risco à saúde humana.

ÿ Flora Patogênica: afeta a saúde do homem.
87
Mas existe também uma flora microbiana útil, que são microrganismos selecionados pelo homem de acordo
com o produto a ser feito a partir do leite, como o queijo e o iogurte. Eles são chamados de starters,
fermentos ou starters.
Queijos
Os queijos são produtos frescos ou curados, sólidos ou semissólidos, obtidos a partir da coagulação do
leite e sua posterior separação do soro. Como consequência, o queijo perde algumas proteínas e
vitaminas através do soro, mas ainda retém todas as gorduras do leite, ¾ do cálcio e quase todas as
vitaminas.
Recepção de leite
O leite recebido na leiteria deve obedecer a: Padrões de higiene e qualidade: deve ser de boa qualidade
com baixo teor de bactérias mesófilas totais, com alto teor de sólidos, principalmente proteínas e
gorduras normalizadas, esta composição química depende do tipo de queijo que queremos comer.
Outro fator importante na qualidade do leite é que ele seja livre de substâncias inibidoras como antibióticos,
ou seja, não deve ser proveniente de vacas com doenças como mastite ou em tratamento.
88
Padronização e homogeneização
Aqui são controlados cor, sabor, cheiro, proteínas, pH e matéria gorda, desta forma é selecionado o leite
adequado ao tipo de queijo a ser elaborado.
A padronização consiste em ajustar ou controlar seu teor de gordura. A composição química do leite determinará
para que tipo de queijo será utilizado, principalmente o % de gordura.
Geralmente, os leites com maior teor de gordura destinam-se à produção de queijos cremosos ou de quarto
com maior teor de água, enquanto os com menor teor de gordura destinam-se à produção de queijos sardos
duros ou semiduros, com menor teor de água. água.
Na homogeneização, o leite é submetido a uma grande pressão para que flua por minúsculos orifícios com
o objetivo de reduzir o tamanho dos glóbulos de gordura para que não se separem do líquido. O que se busca é
homogeneizar o tamanho dos glóbulos de gordura presentes.
Pasteurização
É um método de higienização do leite que visa eliminar patógenos do mesmo e é conseguido elevando a
temperatura para 72° por 15s e depois resfriando-o, diminuindo para 38-
40° para posterior coagulação.
O que pode ser adicionado ao leite?
Depois que o leite esfria, algumas coisas podem ser adicionadas, são plantadas bactérias lácticas, fermentos ou
fermentos, cuja função é a produção de ácido láctico a partir da lactose. O ácido láctico promoverá a formação
e drenagem da coalhada.
Também podem ser adicionados aditivos estipulados no código alimentar , que dependerão do tipo de queijo a ser
elaborado, como corantes, estabilizantes, conservantes, aromatizantes e CaCl2, etc. Este último é
sempre adicionado, pois o teor de leite é variável em função da alimentação, época do ano, lactação, etc. O
CaCl2 contribui para uma coagulação mais rápida e uma coalhada mais firme, levando à formação de
uma rede proteica que retém os glóbulos de gordura e aumenta o teor de cálcio no leite.
Coalhada de leite
É a desestabilização da caseína na solução coloidal. Ocorre uma aglomeração das micelas de caseína, que se
separa do restante dos componentes do leite. Podem ser separados por ação enzimática, por ação de microrganismos
ou mistos.
A caseína é a proteína mais importante do leite, onde parte pode ser solubilizada e outra parte formando
micelas em suspensão, normalmente associadas ao cálcio ou fosfato de cálcio.
89
A figura mostra como a caseína é encontrada no leite.
A coagulação da caseína consiste em uma série de modificações físico-químicas da mesma.
A coagulação láctica é produzida por bactérias lácticas agregadas que transformam a

lactose em ácido láctico, baixando o pH (ÿÿ4,6), o que produz uma alteração na caseína até a
formação de um coágulo ácido.
A coagulação enzimática é baseada na atividade das enzimas do coalho quando adicionadas

ordenhar. As micelas de caseína são constituídas por caseína kappa, que é uma proteína que
possui carga negativa em sua extremidade e gera repulsão entre as micelas, mantendo-
as em suspensão. O coalho corta essa extremidade, permitindo a união entre as micelas e
levando à formação de um gel que retém a maioria dos componentes sólidos do leite. Este gel
se contrai aos poucos auxiliado pela prévia acidificação do leite pelas bactérias lácticas, isso é
chamado de coagulação mista.
Como a caseína é desestabilizada?

90
Pela coagulação láctica que reduz o pH para 4,6 ou pela coagulação enzimática que acidifica o leite, a proteína é
desestabilizada e coagula. A firmeza e a textura da coalhada formada dependerão principalmente
da quantidade de coalho utilizada, da temperatura (a temperatura onde a taxa de formação da coagulação
é máxima é de 30 – 35°C, onde a concentração de Ca é suficiente) e da acidez do leite.
Desuerado
Consiste em separar o soro que impregna o coágulo, obtendo assim a parte sólida que constitui a coalhada e o
futuro queijo.
Em gel láctico:
• A drenagem é espontânea
No gel enzimático, para permitir a liberação do soro retido no coágulo, são realizadas atividades
complementares como:
• Corte da coalhada.
• Agitação mais temperatura.
• Acidificação.
• Pressionado.
Cortar ou fatiar a coalhada (lirado)
Consiste em dividir o coágulo com o objetivo de aumentar a superfície de drenagem e assim favorecer a expulsão
do soro. É feito com lâminas ou fios chamados lira até atingir o tamanho de grão desejado. O corte da coalhada deve
ser feito lentamente para não romper o coágulo, caso contrário formar-se-ão grãos irregulares e de difícil
escoamento. O tamanho do grão dependerá do tipo de queijo a ser feito:
Agitação, aquecimento e acidificação.
• A agitação é realizada com agitadores e tem como objetivo acelerar a drenagem e evitar
a aderência dos grãos, além de permitir um aquecimento uniforme.
• A elevação do T nesta agitação permite reduzir o grau de hidratação da coalhada, favorecendo a contração e o
escoamento. As altas temperaturas, entre 51°C e 53°C, originam uma coalhada seca e dura, adequada para uma
maturação lenta e longa, o que é necessário para os queijos duros. Para queijos semiduros a temperatura seria de
45°C e para queijos moles de 38°C.
• Para obter uma coalhada adequada juntamente com agitação e temperatura, é também necessária a intervenção de
um processo biológico, a acidificação . As bactérias lácticas permanecem maioritariamente retidas nos grãos de
coalho, o seu crescimento e, portanto, a sua actividade acidificante favorecem a expulsão da humidade.
Moldado e prensado
91
A coalhada é colocada numa forma cuja forma e tamanho dependem do tipo de queijo. Por sua vez, a prensagem
é efectuada em prensas de fábricas de queijo, através das quais é exercida pressão sobre a coalhada.As condições
de prensagem são diferentes para cada tipo de queijo, variando a pressão e a duração da pressão. Por
exemplo: nos queijos de pasta mole a coalhada vai diretamente para as formas sem pressão, o queijo molda-se à
forma. Este processo acaba por dar forma ao queijo, favorece a formação da crosta e continua a eliminar o soro,
ligando com muita firmeza os grãos da coalhada.
Salado
Seu objetivo é controlar o desenvolvimento microbiano, tanto pela supressão de bactérias indesejáveis
quanto pelo controle do crescimento de agentes de maturação. Intervém no sabor e aroma dos queijos, ajuda a
drenar e manter a acidez, a formar a casca e a conservá-la por mais tempo inibindo as bactérias proteolíticas. Pode
ser seco: o sal é espalhado na superfície do queijo ou incorporado diretamente na coalhada ou por imersão em
banho de salmoura por 6 a 62 horas, virando periodicamente.
Maturação
É o processo pelo qual as características organolépticas e físico-químicas são modificadas.

dos componentes do queijo, intensificando o aroma, sabor, cor e textura do queijo. Nesta fase, a lactose termina de
fermentar e não resta mais nada no queijo. No caso dos queijos frescos ou de pasta mole, a produção é
interrompida nesta fase.
Durante a fase de maturação, ocorrem mudanças relacionadas à atividade microbiana.

como são:
• A fermentação da lactose em ácido láctico, pequenas quantidades de ácido propiónico e acético e dióxido
de carbono: é realizada principalmente por bactérias ácido lácticas.
Começa durante a coagulação e drenagem e continua até o desaparecimento da lactose. Também o ácido
láctico combinado com sais como o cálcio pode produzir lactato , que é a base de algumas substâncias que
podem produzir aroma e sabor.
• Proteólise: degradação parcial das proteínas, é um dos processos mais importantes que, além do sabor, está
relacionado à aparência e textura. Este nem sempre é um processo uniforme, pois pode ser mais intenso na
superfície do que no interior . Nos queijos de pasta mole amadurecem superficialmente.
• Lipólise: A hidrólise das gorduras, devido à ação das lipases, afeta uma pequena proporção
isto, porém, os ácidos graxos liberados e os produtos de sua transformação, embora
aparecem em pequenas quantidades e influenciam o aroma e o sabor do queijo. Os ácidos graxos aumentam a
acidez e diminuem a tensão superficial, pois alteram as propriedades organolépticas, conferindo-lhe muitas
vezes um certo ranço ou sabor cetônico.
Agentes envolvidos na maturação

ÿ Enzimas lácteas: contêm proteases e lipases como outros sistemas enzimáticos, o seu papel é limitado porque a
sua concentração é baixa e em alguns casos são termossensíveis, e têm um pH óptimo de actividade longe do
pH do coalho.
ÿ Enzimas de coalho: O coalho é uma enzima proteolítica que intervém na sua evolução
posteriormente, além da formação de coágulos.
ÿ Os microrganismos intervêm na maturação libertando enzimas, a flora microbiana está em constante evolução,
com diferentes grupos microbianos a sucederem-se, o que
92
São influenciados pelas propriedades físicas e químicas do ambiente (temperatura, aeração,
umidade, salinidade, pH). A população microbiana excede 1x109 microrganismos por grama
de queijo.
Fatores físico-químicos que participam da maturação:
ÿ Arejamento: condiciona o desenvolvimento da flora microbiana aeróbia e anaeróbia facultativa,

assegura as necessidades de oxigénio da flora superficial dos queijos com bolores,
leveduras, etc.
ÿ Umidade: favorece o desenvolvimento microbiano. Quanto maior o teor de umidade, mais
rapidamente a coalhada amadurece, enquanto nas altamente desidratadas esse período é
prolongado.
ÿ Temperatura: regula o desenvolvimento microbiano e a atividade enzimática. A produção
máxima de enzimas ocorre a uma temperatura abaixo da ideal para o desenvolvimento
e atividades microbianas e é máxima entre 35 e 45°C. Na prática industrial, a maturação
ocorre a uma temperatura inferior à ideal: entre 4 e 20°C dependendo do tipo
de queijo. ÿ Teor de sal: regula a atividade da água e, portanto, a flora microbiana do solo.
ÿ pH: condiciona o desenvolvimento microbiano, os valores de pH variam entre 4,7 e 5,5 no
na maioria dos queijos e entre 4,9 e mais de 7 em queijos curados com mofo. Está
determinado pelas primeiras fases de fabricação.
Microrganismos envolvidos na fabricação de queijo
Bactérias propiônicas como Propionibacterium shermanii realizam fermentação propiônica

onde são produzidos ácido propiônico, succínico, acético e dióxido de carbono,
responsáveis pela formação dos olhos. Por exemplo, nos queijos Gruyere e Emmental.
Neste caso, a área superficial é aumentada em relação à massa do queijo, são armazenados
em locais com umidade de até 90% para conseguir sua proliferação. Alguns
desenvolvem-se na massa do queijo e outros na sua superfície.
Microorganismos indesejáveis
93
Bactérias psicrotróficas, como Pseudomonas alcaligenes, desenvolvem-se em baixas temperaturas
e realizam lipólise ou degradação de gorduras, secretando substâncias que deixam sabor amargo e pútrido. Além
disso, degradam a caseína, causando perda na produção de leite e aumento de nitrogênio no soro.
Clostrídios como Clostridium butiricum são anaeróbios e realizam fermentação butírica; são microrganismos
provenientes de pastagens secas e silos de má qualidade na alimentação animal, que é transferida para o leite.
Produz inchaço tardio nos queijos duros ou cozidos e estes acabam por rachar.
Os coliformes aparecem no leite mal pasteurizado. A fermentação ácida mista que realizam pode originar queijos
de mil olhos, que se caracterizam por muitos olhos pequenos do tamanho de uma cabeça de alfinete.
LEITES FERMENTADOS
Iogurte, Kefir e leite cultivado são produtos fermentados pela ação de microrganismos específicos como
consequência da acidificação produzida pelas bactérias lácticas, as proteínas do leite coagulam e
precipitam, podendo então se dissociar em aminoácidos, por isso os Leites Fermentados possuem maior
digestibilidade do que os leites fluidos.
Recepção de leite
Isso controla sua qualidade higiênico-sanitária , sendo os leites com maior teor de proteínas os mais adequados
para sua produção. Pode ser feito com leite integral ou desnatado.
estandardização
Consiste na padronização do leite quanto ao teor de gordura, buscando uma alta proporção de sólidos, isso é
conseguido por evaporação ou adição de leite em pó (3%).
Homogeneização
94
Seu objetivo é reduzir o tamanho do glóbulo de gordura, para isso o leite passa sob pressão por orifícios menores
que o tamanho normal dos glóbulos de gordura. Através da homogeneização do leite obtém-se uma emulsão
mais estável e consequentemente o coágulo do iogurte fica mais macio.
Pasteurização
Seu objetivo é reduzir o número de germes banais e eliminar patógenos, processo essencial para a obtenção de um
produto adequado ao consumo. Neste processo, o
leite a 84°C por alguns segundos, depois é necessário resfriá-lo a 45°C para iniciar a inoculação.
Inoculação
Consiste na adição de fermento na proporção de 3%, que contém os microrganismos específicos para a
produção de iogurte.
Ação microbiana na produção de iogurte
O que é um fermento?
Fermento é entendido como o cultivo de uma ou mais espécies de microrganismos úteis, utilizados com
o objetivo de iniciar uma fermentação para produzir um produto natural, seja ele cru ou pasteurizado. Existem
fermentos naturais que podem ser obtidos a partir do leite ou do soro de leite e também existem alguns selecionados.
A sua adição visa acidificar o leite para produzir a floculação da caseína e desta forma conservar o alimento por
mais tempo e reduzir o desenvolvimento de bactérias nocivas. Isso ocorre devido à fermentação da lactose que
é transformada em ácido láctico.
O fermento utilizado para a produção do iogurte é composto por Streptococcus salivarum subsp. Termophilus
e Lactobacillus delbrueki subsp. bulgaricum. As bactérias utilizadas para fermentar o iogurte atuam
sinergicamente, ou seja, produzem um efeito maior agindo em conjunto do que separadamente. Neste caso,
ambas acidificam o leite separadamente, mas juntas o fazem mais rápido. O Streptococcus atua primeiro
iniciando a acidificação, isso provoca uma diminuição do pH que favorece o desenvolvimento do
Lactobacillus, este último
Realiza a proteólise da caseína, liberando Valina, que é um aminoácido que estimula o crescimento do
Streptococcus. Ambos os microrganismos agindo juntos conseguem uma diminuição
pH rápido até atingir o ponto isoelétrico da caseína (4.6), neste ponto as cargas se equalizam e ocorre a floculação.
Resfriamento e incubação
Uma vez adicionado o fermento, inicia-se a fase de incubação,

que se realiza em grandes cubas ou cubas de incubação. A incubação leva
algumas horas. Quando o pH atinge um valor de 4,6 (incubação) o leite é
arrefecido a menos de 10°C para evitar acidificação excessiva.
O iogurte necessita de um tempo de refrigeração aproximado de 10 horas

a 5°C antes de ser comercializado, nesta fase adquire seu aroma
característico. O tratamento após a incubação varia de acordo com o tipo
de iogurte.
95
KEFIR
É uma bebida ácida, alcoólica e gaseificada de origem europeia,

que consiste na fermentação de água ou leite através de um
complexo de leveduras específicas. Uma levedura
chamada kefir Saccharomyces e três espécies bacterianas
estão envolvidas na produção de kefir : Streptococcus cremoris,
Streptococcus lactis e Lactobacillus caucassicus.
Bactérias realizam fermentação homolática

fermentação da lactose com produção de ácido láctico. A
levedura produz a fermentação da galactose e da glicose com
a produção de álcool e dióxido de carbono, obtendo-se assim
um coágulo granular, que é utilizado no preparo da bebida. 2%
desses grânulos de kefir são adicionados ao leite e incubados
por 24 horas para obter o kefir.
LEITES CULTIVOS
Neste caso o fermento é composto por bactérias do gênero Lactobacillus, principalmente acidophilus e casei,
outras também podem ser Bifidobacterium sp e Streptococcus salivarius subsp. Termófilo. Difere do iogurte porque:
• Requerem um tempo de incubação de cerca de 24 horas.

• Eles também requerem uma proporção maior de fermento adicionado (microrganismos), razão pela qual
por isso seu tempo de conservação é menor que o do iogurte.
Em resumo, podemos dizer que as bactérias lácticas são um grupo de bactérias de diferentes gêneros, amplamente
distribuídas na natureza. São formadores de textura e ajudam a estabelecer as condições para a produção de
determinados laticínios. Devido à acidez produzida pela fermentação da lactose, o leite pode coagular graças à
coalescência das caseínas ao atingir o pH isoelétrico, o que é desejável na produção de iogurte e queijo.
Algumas espécies produzem polissacarídeos, que aumentam a viscosidade do leite alterando sua textura (S.
thermophilus, Lb. bulgacricus, Lc. cremoris).
Proporcionam sabor e aroma, pois como parte de seu metabolismo fermentativo ocorre a produção de
acetaldeído, diacetil, acetoína, acetona, lactonas, ácidos voláteis, álcool e gases. Além disso, a produção de enzimas
está envolvida no refinamento dos queijos através da degradação de proteínas e gorduras que afetam significativamente
as suas características organolépticas. Exercem um efeito biopreservativo que se manifesta no prolongamento da vida
útil dos produtos elaborados a partir de suas colheitas. Certas espécies produzem proteínas que se comportam
como antibióticos e inibem o crescimento de algumas bactérias. Com a produção de ácido e redução
do pH, consegue-se a inibição de outras espécies bacterianas e a preservação dos alimentos; Este efeito
biopreservativo também é cumprido graças à competição por nutrientes que ocorre entre as diversas espécies
bacterianas.
96

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Os microrganismos são os verdadeiros decompositores dos restos orgânicos, transformando-os

Nos grupos microbianos mais importantes encontramos bactérias e fungos.

• Bactérias amonificantes: decompõem substâncias orgânicas nitrogenadas (N2) e

• Bactérias fixadoras de nitrogênio: pegue N2 e transforme-o em compostos utilizáveis

• Cianobactérias: São bactérias capazes de fotossintetizar e fixar N2 (Anabaena, Nostoc, Chrococcus,

FUNÇÕES DOS MICRORGANISMOS NO SOLO

Intervenção na génese (formação) do solo

. Aumento da superfície de captura por Micorrizas.

. Decomposição de restos vegetais, animais e microbianos.

• Mineralização de materiais originais.

FATORES EDÁFICOS QUE INFLUENCIAM A DISTRIBUIÇÃO DE MICRORGANISMOS

Conteúdo de umidade e aeração: o gráfico representa o desenvolvimento da população

CC: Capacidade de campo

• Alagamento: teor máximo de umidade que o solo pode suportar

Chão Ph. Bactérias Actinomicetos Fungo

marly cinza 7,8 1,8x104 2,2x106 3,6x104

Argila marrom 7.6 2,5x106 1,7x106 5,9x104

argila vermelha 6.4 1,5x106 2,4x105 7,5x104

solo tropical 4.4 1,2x105 7,5x104 2,5x105

Podzol arenoso 3.8 1,5x104 2,2x104 1,3x105

AVALIAÇÃO GLOBAL DE COMUNIDADES MICROBIANAS E GRUPOS FUNCIONAIS

• As estimativas de biovolume medem a quantidade de massa de microrganismos presentes

Métodos de cultivo, análise química

• Contagem cultivável: Em geral, as contagens são realizadas em meio sólido ou líquido de

ÿ Nos sólidos, a contagem é feita com base no aparecimento de colônias e, portanto,

• Biomassa microbiana do solo: Sem parar para estudar grupos específicos de

Um equipamento chamado luminômetro mede a quantidade de luz produzida e, portanto, estima a

Métodos de estudo de processos

Ferramentas moleculares aplicadas a avaliações biológicas em solos

UNIDADE 11: Rizosfera

Nesta área distinguimos:

• O rizoplano (plano de contato das raízes com o solo ou superfície radicular).

A rizosfera é caracterizada pela presença de exsudatos ou escamas radiculares produzidas

O efeito da rizosfera sobre um microrganismo é medido através do coeficiente ou quociente

FUNGOS DE RAIZ: Micorrizas

1) Micorrizas Ectotróficas ou Ectomicorrizas: agrupa aquelas micorrizas que se caracterizam porque o

2) Micorrizas Endotróficas ou Endomicorrizas: é a associação em que o micélio fúngico

Micorrizas vesiculares arbusculares: Caracteriza-se porque o fungo micorrízico penetra entre as

Diagrama de uma raiz mostrando o desenvolvimento de micorrizas e as estruturas que

Micorrizas ericoides: tipo de associação micorrízica

Neste tipo de micorrizas, as hifas do fungo não formam

EFEITOS DA MICORRIZA NO CRESCIMENTO DE PLANTAS

• Aumentam a área fisiologicamente ativa da raiz, aumentando a superfície de captura da planta

Rizobactérias promotoras de crescimento de plantas (PGPR)

Mecanismos de promoção do crescimento das plantas:

• Diminuição do teor de etileno no ambiente rizosférico através de enzimas:

• Solubilização de fosfatos e outros minerais para poderem ser capturados do

Legislação Regulamentadora de Produtos Biológicos (PGPR)

Resolução SENASA 0264/2011

• Bactéria PGPR mais comercializada no país.

• Capacidade de aumentar o crescimento das raízes das plantas através da produção de

Principal efeito dos Azospirils nas raízes

Secreção de fitorreguladores ou fitohormônios como: Auxinas, Citocininas e Giberelinas

Efeito dos Azospirils no trigo e no milho

Efeito dos Azospirillos na coinoculação com rizóbios em leguminosas

Organismos rizosféricos que actúan como solubilizadores de P o biocontroladores:

• Pseudomonas fluorescens: é utilizado como solubilizador de P, pois tem capacidade de

• Pseudomonas chlororaphis subp. aurantiaca: de tipo biocontroladora, se