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    Extração de Dna

    Enviado por

    Ana Lobato
    O documento descreve os conceitos e etapas do processo de extração de DNA, incluindo a lise da amostra, purificação, precipitação e reidratação. É apresentado um protocolo de extração de DNA utilizando o kit Mini Spin Plus, com etapas como lise da amostra, ligação do DNA genômico, lavagens e eluição. A extração de DNA é essencial em diversas áreas como genética, medicina e biotecnologia.

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    Extração de Dna

    Enviado por

    Ana Lobato
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    O documento descreve os conceitos e etapas do processo de extração de DNA, incluindo a lise da amostra, purificação, precipitação e reidratação. É apresentado um protocolo de extração de DNA utilizando o kit Mini Spin Plus, com etapas como lise da amostra, ligação do DNA genômico, lavagens e eluição. A extração de DNA é essencial em diversas áreas como genética, medicina e biotecnologia.

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    Extração de Dna (1)

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    O documento descreve os conceitos e etapas do processo de extração de DNA, incluindo a lise da amostra, purificação, precipitação e reidratação. É apresentado um protocolo de extração de DNA utilizando o kit Mini Spin Plus, com etapas como lise da amostra, ligação do DNA genômico, lavagens e eluição. A extração de DNA é essencial em diversas áreas como genética, medicina e biotecnologia.

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    Extração de Dna

    Enviado por

    Ana Lobato
    O documento descreve os conceitos e etapas do processo de extração de DNA, incluindo a lise da amostra, purificação, precipitação e reidratação. É apresentado um protocolo de extração de DNA utilizando o kit Mini Spin Plus, com etapas como lise da amostra, ligação do DNA genômico, lavagens e eluição. A extração de DNA é essencial em diversas áreas como genética, medicina e biotecnologia.

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    UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHÃO

    ESTÁGIO EM ATIVIDADES FARMACÊUTICAS

    Ana Carolina de Sousa Lobato

    Supervisora: Wellyandra
    São Luís – MA
    2023
    CONCEITOS
    • Ácido Desoxirribonucleico;
    • Armazenar e transmitir as informações genéticas;
    • Formada por nucleotídeos, que consistem em:
    1. Base Nitrogenada;
    Adenina, Timina, Citosina e Guanina
    2. Grupamento Fosfato;
    3. Açucar Desoxirribose;

    Fonte: JUSTINIANO et al., 2006


    É uma técnina utilizada para isolar e coletar o DNA.

    APLICAÇÕES
    • Biologia Molecular e Genética;
    FONTES DA AMOSTRA
    PCR; Tipagem; Clonagem.
    • Sangue total
    • Medicina Forense;
    • Creme Leucocitário (buffy coat)
    • Diagnóstico de Doenças Genéticas;
    • Fluido Cerebroespinhal (CSF)
    • Arqueologia e Antropologia;
    • Medula Óssea;
    • Biotecnologia;
    • Tecido ou Fluido;
    • Pesquisa em Biomedicina.
    • Ossos;
    • Tecidos Vegetais.
    ETAPAS

    1 12 3 4
    Lise das
    Purificação Precipitação Reidratação
    Membranas:
    Proteinase K ou NaCl2 Etanol ou isopropanol Agua ou solução
    Detergentes
    Tampão
    (SDS ou CTBAB)

    OBS. Tiocianato de guanidina.


    Fonte: GOUVEIA & REGITANO, 2007.
    LISE DA AMOSTRA REAGENTES EM KITS
    • Centrífuga para microtubos;
    • Tampão de Lise A
    • Termomixer (56°C);
    • Proteinase K
    • Micropipetas
    • Tampão de Ligação B6
    • Ponteiras com filtro;
    • Tampão de Lavagem I
    • Vortex;
    • Tampão de Lavagem II
    • Microtubos de 1,5 mL extras;
    • Tampão de Eluição
    • Etanol PA;
    • Água (ultrapura ou de injeção);
    ETAPAS PRÉ-EXTRAÇÃO
    1. Pre-aquecer 100µL o Tampão de eluição a 56 ºC
    2. Adicionar Etanol nos tampões de Lavagem I e II
    3. Adicionar 1050 de agua (purificada ou de
    injeção) na proteinase K e armazenar a -20 ºC

    Fonte: BIOPUR, 2013.


    BIOPUR KIT EXTRAÇÃO MINI SPIN PLUS

    LISE DA AMOSTRA LIGAÇÃO DO DNA GENÔMICO


    20µL de Proteinase K
    400µL de Tampão B6 de ligação
    200 µL de Tampão de Lise A
    200 µL de sangue total
    Homogeneizar no Vortex
    Homogeneizar no Vortex

    Fonte: BIOPUR, 2013.


    LIGAÇÃO DO DNA

    Transferir 700µL da mistura para o tubo amarelo


    c/filtro conjugado s/filtro

    Incubar por 1 min

    Centrifugar 14.000 rpm por 3 min


    Descartar filtrado
    trocando para um outro tubo s/filtro
    Fonte: BIOPUR, 2013.
    LAVAGEM:
    REMOÇÃO DOS CONTAMINANTES RESIDUAIS

    500µL de Tampão de Lavagem I 800µL de Tampão de Lavagem II

    Centrifugar 14.000 rpm por 2 min Centrifugar 14.000 rpm por 2 min
    Descartar filtrado Descartar o filtrado
    Centrifugar 14.000 rpm por 4 min
    Descartar o filtrado
    Fonte: BIOPUR, 2013.
    ELUIÇÃO

    Colocar o tubo c/filtro no tubo de eluição


    Transferir 100µL Tampão de Eluição pré-aquecido

    Incubar por 1 min

    Centrifugar 14.000 rpm por 1min


    Descartar o tubo amarelo c/filtro
    Armazenar o DNA
    Fonte: BIOPUR, 2013.
    A extração de DNA é um procedimento fundamental na
    biologia molecular e genética, sendo uma técnica essencial
    em diversas áreas da pesquisa científica, diagnóstico
    médico, e até mesmo em aplicações forenses. Ao longo das
    décadas, diferentes métodos foram desenvolvidos para
    extrair material genético de células e organismos, buscando
    eficiência, pureza e rapidez.
    GOUVEIA, JJ de S,; REGITANO, LC de A. Extração de DNA, 2007.

    JUSTINIANO, Silvia Cássia Brandão et al. Genética revisando e fixando


    conceitos. Genética na escola, v. 1, n. 2, p. 50-53, 2006.

    BIOPUR. Kit de Extração Mini Spin Plus. Rev. 02 – Out/2013.

    OLIVEIRA, MC de S. et al. Fundamentos teóricos-práticos e protocolos de


    extração e de amplificação de DNA por meio da técnica de reação em cadeia
    de polimerase. 2007.

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