2994-Article Text-8393-1-10-20191028
2994-Article Text-8393-1-10-20191028
2994-Article Text-8393-1-10-20191028
1, April 2019
ABSTRACT
Acetylcholine is the neurotransmitter that plays a role in the regulation of
cognitive functions, especially in encoding of new memories. Excessive hydrolysis
of acetylcholine by the acetylcholinesterase enzyme can interference memory
encoding. Noni is widely available in Indonesia and had been proven to have the
ability of acetylcholinesterase enzyme inhibition. This study aimed to determine
the ability of fractions of ethanol extract of noni fruti to inhibits the enzyme
acetylcholinesterase activity and identification chemical compounds in the active
fraction of the ethanol extract of noni fruit with liquid chromathography-mass
spectrometry analysis. Separation of chemical compounds was done through a
two-stage extraction using maceration method and fractionated using vacuum
liquid chromathography. AChE enzyme inhibition testing conducted by the
Ellman's method (colorimetric method) at concentration of 1000, 500, 250, 125
µg/mL. Identification of chemical compounds was conducted liquid
chromathography-mass spectrometry. IC50 value of the fraction I, fraction II and
fraction III of noni fruit showed respectively at 4882,29, 947,99, 1726,99, 18673,82
µg/mL. Active fraction expected contained linolenic acid linoleic acid, pinoresinol,
methyl linoleate and methyl oleate.
ABSTRAK
Asetilkolin adalah neurotransmitter yang berperan dalam pengaturan fungsi
kognitif terutama pembentukan memori baru. Hidrolisis berlebihan asetilkolin oleh
enzim asetilkolinesterase dapat menyebabkan gangguan pada pembentukan
memori. Mengkudu merupakan tanaman yang banyak terdapat di Indonesia dan
telah teruji memiliki kemampuan penghambatan enzim asetilkolinesterase.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan penghambatan aktivtas
enzim acetylcholinesterase fraksi-fraksi dari ekstrak etanol buah mengkudu dan
identifikasi senyawa yang terkandung dalam fraksi aktif dari ekstrak etanol buah
mengkudu melalui analisis liquid chromathography-mass spectrometry.
Pemisahan senyawa dilakukan melalui dua tahap yaitu ekstraksi menggunakan
metode maserasi dan fraksinasi menggunakan kromatografi cair vakum.
Pengujian penghambatan enzim asetilkolinesterase dilakukan dengan
menggunakan metode Ellman (kolorimetri) pada konsentrasi 1000, 500, 250, 125
µg/mL. Identifikasi senyawa kimia fraksi teraktif dilakukan dengan analisis liquid
chromathography-mass spectrometry. Nilai IC50 ekstrak etanol, fraksi 1, fraksi 2
dan fraksi 3 buah mengkudu secara berturut-turut sebesar 4882,29, 947,99,
1726,99, 18673,82 µg/mL. Fraksi teraktif diduga mengandung asam linolenat,
asam linoleat, pinoresinol, metil linoleat dan metil oleat.
Alamat korespondensi :
Sellapuzi@gmail.com
1
Uji In-Vitro Penghambatan Enzim Asetilkolinesterase .................... (Shela Puzi Dina, dkk)
2
Farmasains Vol. 6 No. 1, April 2019
Tabel 2. Dugaan senyawa pada fraksi I ekstrak etanol buah mengkudu yang memiliki bobot
molekul (setelah penambahan ion positif) yang mirip dengan spektra MS
4
Farmasains Vol. 6 No. 1, April 2019
T4.1 445.3
100 T 3.5
T3.2
90
T 2.2
80
70
60 T4.9
% Intensi ty
50
40
30
20
10
0 0
0 2 4 6 8 10
Retention Time (Min)
Keterangan:
Indeks Waktu (menit) Batas bawah Batas Tinggi Area Kelimpahan (%)
atas
1 2,166283 1,467267 2,672000 373 3405,90 25,79123
2 3,177733 2,749617 3,333617 404 2715,86 20,56589
3 3,528067 3,411400 3,839350 435 1996,99 15,12224
4 4,072183 3,916967 4,499633 445 3160,90 23,93597
5 4,888017 4,577416 5,432300 258 1926,00 14,58467
279.4439 414.8
100
ﺀa I آ+
90
80
70
60
%Intensity
50
40
30
295.4474
[M+NH4 ]+ 319.4710
20
557.9112
335.4605
10 235.3425 296.4676
558.8756
242.2991 317.4641
227.3380 395.5209 573.9124 631.9186
181.2344 266.8339 308.5032 352.4693 438.0738 479.6884 523.2531 678.8156
0 0
و ﯾو 281 391 501 611 721
Mass(m/z)
5
Uji In-Vitro Penghambatan Enzim Asetilkolinesterase .................... (Shela Puzi Dina, dkk)
303.4664 443.2
100
90
[M+Na] +
80
70
298.5085
+
[M+NH4 ]
60 353.5449
% Intensi ty
281.4676
50
+
[M+H]
40
331.5429
30
263.4433
20
348.5812
10 561.9445
313.5239
379.5366 599.8946 684.0733
130.7000 225.3629 302.1674 582.3710 686.0049 880.3892 957.4317
0 0
59.0 287.2 515.4 743.6 971.8 1200.0
Mass (m/z)
381.5985 294.7
100
90
359.5965
+
80 [M+Na]
+
[M+H]
70
60
% Intensity
50
376.6416
40
+
[M+NH4 ]
30
360.5878 382.5715
20 283.4765
341.5657
305.4780
10 360.1872 377.6101 413.5938
392.5714
284.4549 300.5155 342.5838 361.1329 376.9814 397.5691
256.4141 271.4849 315.4361 414.4559
0 0
252.0 290.2 328.4 366.6 404.8 443.0
Mass(m/z)
6
Farmasains Vol. 6 No. 1, April 2019
295.4904 43 6.3
10 0
317.4894
+ +
[M+H] [M+Na]
90
312.5368
80
[M+NH4] +
70
60
% Intensi ty
50
40
30
20 263.4436
10
297.5078 272.1
100
90 [M+H]+
80
70
60
% Intensi ty
319.5058
50
[M+Na] +
40
30 559.9058
314.5575
20
[M+NH4] +
10
293.4775 445.6779 561.9256
191.1530 294.9050 415.6077 649.4669 725.8225 891.3118
0 0
59.0 287.2 515.4 743.6 971.8 1200.0
Mass (m/z)
Gambar 3. Spektra MS fraksi 1 ekstrak etanol buah mengkudu a) waktu retensi 2,2 menit,
b) waktu retensi 3,2 menit, c) waktu retensi 3,5 menit, d) waktu retensi 4,1 menit dan
e)waktu retensi 4,9 menit
7
Uji In-Vitro Penghambatan Enzim Asetilkolinesterase .................... (Shela Puzi Dina, dkk)
penambahan ion positif) yang mirip dengan Activities of Flavonoids from the Leaves
spektra MS dapat dilihat pada Tabel 2. of Ginkgo biloba against Brown
Berdasarkan hasil analisis spektra MS, Planthopper. J. Chem. 2013, 14.
diperoleh dua prediksi senyawa pada fraksi I https://doi.org/10.1155/2013/645086
adalah asam asam linolenat, asam linoleat, El-Hassan, A., El-Sayed, M., Hamed, A.,
pinoresinol, metil linoleat dan metil oleat. Ve r p o o r t e , R . , 2 0 0 3 . B i o a c t i v e
Berdasarkan hasil penelitian in silico Srikanth et constituents of Leptadenia arborea.
al. (2017), diperoleh lima senyawa pada ekstrak Fitoterapia 74, 184187.
buah mengkudu yang memiliki afinitas lebih baik https://doi.org/10.1016/S0367-
daripada obat penghambat terhadap enzim 326X(02)00314-3
AChE secara in silico yaitu : (+)-3,3'- Pachauri, S.D., Tota, S., Khandelwal, K., Verma,
bisdemetiltanegool ,3,3'-bisdemetilpinoresinol, (- P.R.., Nath, C., Hanif, K., Shukla, R.,
)-pinoresinol, asam isoamericanoat A, kuersetin. Saxena, J.K., Dwivedi, A.K., 2012.
Efek penghambatan mungkin berhubungan Protective effect of fruits of Morinda
dengan efek kumulatif dari ikatan kuat H 2 , citrifolia l. on scopolamine induced
interaksi cationin-π-π-π dan interaksi hidrofobik memory impairment in mice: a
terhadap enzim (Srikanth et al., 2017). behavioral, biochemical and cerebral
Pengujian yang dilakukan oleh El-Hasan blood flow study. J. Ethnopharmacol.
et al. (2003) menunjukkan bahwa syringaresinol 1 3 9 , 3 4 4 1 .
memiliki daya hambat signifikan terhadap https://doi.org/10.1016/j.jep.2011.09.057
aktivitas enzim AChE dengan nilai IC50 200 µg/ml Pitt, J.J., 2009. Principles and applications of
sedangkan pinoresinol, leucanthemitol dan E- liquid chromatography-mass
ferulaldehid menghambat aktivitas enzim AChE spectrometry in clinical biochemistry.
dengan rentang sebesar 20–35% pada Clin. Biochem. Rev. 30, 1934.
konsentrasi lebih tinggi (El-Hassan et al., 2003). Purves, D., Augustine, G.J., Fitzpatrick, D., Hall,
Berdasarkan penelitian lain, pinoresinol dapat W.C., LaMantia, A.-S., White, L.E.,
memperbaiki kerusakan memori pada mencit Mooney, R.D., Platt, M.L., 2012.
yang diinduksi dengan penghambat kolinergik, Neurosciene 5 th edition. Sinauer
memfasilitasi induksi potensiasi jangka panjang Associates, USA.
hipokampus, memblokir enzin AChE serta Rhee, I.K., van de Meent, M., Ingkaninan, K.,
memfasilitasi masuknya kalsium ke dalam sel Verpoorte, R., 2001. Screening for
neuro 2a (Yu et al., 2019). acetylcholinesterase inhibitors from
Amaryllidaceae using silica gel thin-layer
KESIMPULAN chromatography in combination with
Berdasarkan hasil penelitian diperoleh bioactivity staining. J. Chromatogr. A 915,
nilai IC50 ekstrak etanol, fraksi 1, fraksi 2 dan fraksi 217223. https://doi.org/10.1016/S0021-
3 buah mengkudu secara berturut-turut sebesar 9673(01)00624-0
4882,29, 947,99, 1726,99, 18673,82 ppm. Fraksi Srikanth, J., Kavimani, S., Reddy, C.U.M., Chitra,
teraktif dalam pengujian penghambatan aktivtas K., 2017. Comparative Molecular
enzim AChE diduga mengandung senyawa asam Docking Study of Phytoconstituents
linolenat, asam linoleat, pinoresinol, metil linoleat Identified in Morinda Citrifolia Linn on
dan metil oleat. Acetylcholinesterase and
Butyrylcholinesterase. J. Chem. Pharm.
UCAPAN TERIMA KASIH Res. 9(4), 121125.
Selama penulisan karya tulis ini Tjay, T.H., Rahardja, K., 2015. Obat-obat Penting
berlangsung, tidak lepas dari bimbingan serta Khasiat, Penggunaan dan Efek-efek
dukungan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, Sampingnya, 7th ed. PT Elex Media
penulis mengucapkan terima kasih kepada Komputindo Kelompok Gramedia,
semua pihak atas dukungan, bantuan serta kerja Jakarta.
samanya hingga terselesaikannya karya tulis ini. West, B.J., Su, C.X., Jensen, C.J., 2009a.
Hepatotoxicity and subchronic toxicity
DAFTAR PUSTAKA test of Morinda citrifolia (noni) fruit. J.
Bostrom, N., Sandberg, A., 2009. Cognitive To x i c o l . S c i . 3 4 , 5 8 3 5 8 5 .
Enhancement: Methods, Ethics, https://doi.org/10.2131/jts.34.581
Regulatory Challenges. Sci. Eng. Ethics West, B.J., White, L.D., Jensen, C.J., Palu, Afa
1 5 , 3 1 1 3 4 1 . K., 2009b. A Double-Blind Clinical Safety
https://doi.org/10.1007/s11948-009- Study of Noni Fruit Juice. Pac. Health
9142-5 Dialog 15, 2132.
Ding, X., Ouyang, M.-A., Liu, X., Wang, R.-Z., Yu, J., Kwon, H., Cho, E., Jeon, J., Kang, R.H.,
2013. Acetylcholinesterase Inhibitory Youn, K., Jun, M., Lee, Y.C., Ryu, J.H.,
8
Farmasains Vol. 6 No. 1, April 2019
K i m , D . H . , 2 0 1 9 . T h e e ff e c t s o f
pinoresinol on cholinergic dysfunction-
induced memory impairments and
synaptic plasticity in mice. Food Chem.
To x i c o l . 1 2 5 , 3 7 6 3 8 2 .
https://doi.org/10.1016/j.fct.2019.01.017