CIENTÍFICAMENTE

COMPROBADO
La Innovación para la
Desinfección y Sanitización
de los Ambientes
 TECNOLOGÍA
ÚNICA
CERTIFICADA A NIVEL
INTERNACIONAL

DESINFECTA
DESCONTAMINA
SANITIZA

Distribuidos con contrato exclusivo para Venezuela Corooracion 99 Vzla , C.A.

EL EQUIPO 99.99M

Difusor, que gasifica la solución antiséptica

formando partículas de 0.2 a 0.5 micrones,
comportándose como un gas seco,
permitiéndole entrar y llegar a cualquier
superficie, ranura u orificio que exista en el
área a desinfectar.

El equipo trabaja a 22.000 revoluciones

por minuto.

La salida del líquido a través del difusor es

de 80m por segundo, lo que le permite
tocar áreas de superficie que son
inaccesibles por la dificultad que presentan.

Fácil de transportar, como si fuera un troller.

ESPECIFICACIONES TÉCNICAS

- Tamaño de gota: <1 µm - Fuente de alimentación

- Volumen máximo tratable: 1000 m³ 230V - 50Hz 1100W
- Tiempo medio de aplicación: 3,9 s / m³ - Peso 10,6 kg
- Consumo medio de solución: 1000 ml / h - Dimensiones (cm) 25 x 42 x 50
- Estructura de acero inoxidable - Voltaje (máximo) 4.5A
- Asa regulable - Fusibles 6.3 A T 250V
- Ruedas traseras antiestáticas - Filtro HEPA
- Inicio de la operación de desinfección - Rango de temperatura de funcionamiento
programable +5 ° C ÷ + 40 ° C
- Interfaz de software de informes - Rango de humedad 20% ÷ 80%
compatible con USB 2.0 - 3.0 - Almacenamiento 0 ° C ÷ + 40 ° C

CUMPLIMIENTO
Directiva 2014/35 / UE
Directiva 2014/30 / UE
Reglamento 2011/65 / UE
Fabricado de acuerdo con ISO 9001
LA SOLUCIÓN ANTISÉPTICA 99.99S

Peróxido de hidrógeno estable al 6% Se recomienda no retirar equipos de las

y sales de plata. áreas a desinfectar, ya que el producto no
daña pantallas, cableados, entre otros.
Su acción bactericida se basa en la
destrucción de las membranas proteicas por Se elimina en el ambiente siguiendo las
inhibición, de todas las bacterias, virus, reglas de desecho habituales.
levaduras, hongos, esporas y biofilms.

Se presenta en envase de plástico, de 1litro

de capacidad, con tapa protectora.

No es tóxico, impacto ambiental mínimo.

No persiste en el tiempo, debido a la acción

bactericida de sales de plata después de
aplicado sobre las superficies hasta 20 días,
de acuerdo al tránsito de cada área y a las
necesidades.

Ó
¿CÓMO FUNCIONA 99.99MT?

APLICACIÓN. La nebulización del líquido

99.99S (a base de peróxido de hidrógeno
estabilizado y compuestos de plata) permite
la distribución uniforme
3
sobre cm del am-
biente, 1 ml es igual a 1 m (metro cúbico).
3

ACCIÓN. El peróxido de hidrógeno destruye

la membrana proteica de los
microorganismos con los cuales entra en
contacto y las sales de plata coadyudan el
proceso.

EFECTOS. Es lo más importante después de

su acción, permite la reutilización de los
ambientes en un tiempo de 12 minutos des-
pués de aplicado, sin riesgos.
 ESTA
TECNOLOGÍA
PUEDE SER
APLICADA EN
MÚLTIPES
ESPACIOS COMO:

¿DÓNDE Quirófanos Ambulancias

APLICAR LA Industrias de alimentos
Restaurantes
TECNOLOGÍA? Salones de conferencias
Transporte
CARACTERÍSTICAS Y FUNCIONES

TIEMPO: Por lo rápido y efectivo que es AHORRO: Permite a través del tiempo ga-
para la aplicación, permite utilizar las áreas nancias por ahorro de dinero en reposos del
en solo 12 minutos después de realizada la personal de trabajo, en antibioticoterapia
desinfección. Ejemplo: Un quirófano de por infecciones nosocomiales.
100m se desinfecta en solo 6 minutos, más
12 minutos de espera, en 18 minutos está DEMOSTRABLE: A través de estudios de
totalmente lista para ser utilizada una sala laboratorio de ambiente y superficies, con
quirúrgica. técnicas de avanzada tecnología.

EFECTIVIDAD: Aún no existen en el ¿POR QUÉ

mercado, productos que logren la 12 MINUTOS?
efectividad garantizada y demostrable
en tan poco tiempo y sin toxicidad. Es el tiempo necesario para la
liberación de radicales libres y
su transformación en aire
CALIDAD DE SERVICIO: Donde se ha ambiente, porque deben existir
menos de 1 parte por millón
aplicado 99.99MT, usted estará seguro de del producto después de este
que su ambiente está libre de bacterias, tiempo, así como está prescrito
hongos, virus, levaduras, esporas y biofilms, en las leyes internacionales.
garantizándole a sus pacientes seguridad
a nivel de desinfección comprobable.
BENEFICIOS

MENOR MAYOR
TIEMPO EFICIENCIA

MENOR MAYOR
COSTO FACILIDAD
NO ES NOCIVO DE EMPLEO
PARA LA SALUD.

GARANTÍA NO ES TÓXICO.
SERVICIO
DE 12 MESES NO ES CORROSIVO. TÉCNICO
ESPECIALIZADO
VENTAJAS INDIRECTAS

Mejora la calidad sanitaria de hospitales

públicos y privados.

Reduce las enfermedades transmisibles

por aire y por contacto.

Reducción de los tiempos, costos y

modalidades de desinfección.

DISEÑADO
PARA
GENERAR
EFICACIA.
EFICACIA COMPROBADA

Un conjunto de pruebas clínicas

apoyan el uso del sistema 99T
como herramienta valiosa para la
desinfección eficaz de superficies
duras y en la lucha contra las
infecciones adquiridas en los
centros de salud.

CAPACIDAD DE REDUCCIÓN
2

DE LA CARGA MICROBIANA

50>
Carga microbiana (UFC/cm >)

45> Monitor
40> Ventilador Pared
35>
30>
25> 42 37
<1 <1
20>
15>
10>
05> Piso Ventilador
Brazo de
00> soporte
33 24
<1 <1

PRE-TRATAMIENTO
POST-TRATAMIENTO
 En la siguiente tabla se reporta la comparación de HDM con las tecnologías de desinfección automatizada mas comunes. Para cada punto de referencia
específico, se ha asignado una puntuación de 1 a 5 estrellas. HDM a obtenido el puntaje más alto resultando en la tecnología de desinfección más competitiva.

COSTO
TECNOLOGÍA EFICACIA EFICIENCIA SEGURIDAD COMPATIBILIDAD USABILIDAD CALIFICACIÓN
EFECTIVIDAD

4,5

Los sistemas aHP se basan en el El rango de tamaño de la Los istemas aHP están clasificados Los istemas aHP generalmente Los sistemas aHP usualmente Generalmente, los sistemas de aHP
aHP uso de H O “menos estructurado” microgota en los sistemas aHP es como irritantes (H O 8%). Sin muestran una buena compatibilidad proveen un tamaño compacto y son son tecnologías de desinfección
( 5% y 8%) con pocos o ninguna alrededor de 8-12 µm, resultando embargo, la adición de con la mayoría de los materiales. relativamente fáciles de usar. asequibles. Sin embargo, ofrecen
capacidad biocida adicional, por lo en un efecto de caída de gota co-formulantes tóxicos como el Sin embargo, el uso en dosis altas una eficacia y eficiencia limitada.
tanto, requieren de mayores
tiempos de exposición y mayores
perceptible, causando
distribución no uniforme del
una ácido peracético, para incrementar
la eficacia del H O , puede provocar
(ml/m) y la adición de algunas
co-formulantes pueden disminuir
3,7
dosis para la erradicación de la desinfectante comparado con un aumento de la toxicidad. dramáticamente su compatibilidad.
catalasa producida por los HDM and vHP. Cuya niebla o vapos
microorganismos (ejm saureus), desinfectante se expande de
que son capaces de convertir el manera más extensa y uniforme.
H O en oxígeno y agua.

vHP El H O vaporizado a mostrado ser El vapor de H O se distribuye Los sistemas de vHP usan 30 a 35% Los procesos de vHP, como Cuando se ejecutan procesos de vHP, Los sistemas de vHP proveen
efectivo elimando esporas, virus, uniformemente en todas las de H O y consecuentemente requieren estas consentraciones de el área a tratar debe sellarse con desinfección de alto nivel, pero son
microbacterias, hongos y bacterias. superficies, sin embargo, teniendo pueden ser muy peligrosos para la HO pueden ser altamente precisión porque las fugas de vapor muy costos, considerando su 3,5
en cuent que los procesos con vHP salud en las personas. Deben corrosivos y dañar fácilmente pueden ser peligrosas para los complejidad y el mantenimiento
se ven muy afectados por las tomarse las medidas de precaución materiales en el área. operadores y otros seres humanos. periódico requerido, además de los
fluctuaciones de la temperatura y adecuadas antes del proceso y Además, se requiere tiempos de costos iniciales de instalación y
humedad, las condiciones reúso del área. contacto extensos y capacitación capacitación.
ambientales deben controlarse adecuada para los operadores.
estrictamente.

OZONO El Ozono es un potente germicida Cuando se aplica como neblina, El ozono es extremadamente El ozono puede ser corrosivo en Considerando todos los factores que El precio de los generadores de ozono
fectivo con bacterias, levaduras, factores como la temperatura, pH, peligroso ya que puede causar superficies, dependiendo del tiempo pueden afectar la concentración de varía considerablemente según las
virus y protozoos. Su efectividad tipo de superficie y calidad del irritación respiratoria e inflamación de exposición y la concentración ozono, todos los parámetros del características proporcionadas. Sin
biocida decrece cuando es usado
de forma gaseosa, requiriendo
generador de ozono, pueden
impactar considerablemente en la
a partir de concentraciones muy
bajas (TLV es 0.1ppm). Teniendo en
aplicada. Además, su interacción
con materiales oxidables puede
proceso deben adaptarse
constantemente a los escenarios de
embargo, la mayoría de ellos no
puede garantizar una desinfección
2,5
largos tiempos de exposición y concentración final que alcanzan cuenta que su vida media en fase disminuir significativamente su uso, realizando pruebas de efectiva y eficiente, porque
altas concentraciones. las superficies. gaseosa puede alcanzar hasta 12 eficacia biocida. seguridad, distribución, demasiados factores ambientales
horas, los procesos deben concentración, y homogeneidad. pueden afectar el proceso.
controlarse para evitar la exposición
humana.

La irradación UV-C (100-280mm) La eficacia de la luz ultravioleta La exposición accidental a la luz Los rayos UV-C provocan un efecto Los sistemas UV son fáciles de usar y Los sistemas UV son particularmente
UV-C puede matar bacterias, virus, disminuye drásticamente en áreas ultravioleta es extremadamente fotoquímico en los materiales no requieren capacitación especial costosos y requieren limpieza regular
hongos, esporas (después de la sombreadas y, por lo tanto no es peligrosa para la salud humana, ya poliméricos y pueden dañar para operadores. No obstante, la y reemplazo periódico de las 2,7
exposición prolongada) y células adecuada para espacios con que puede dañar gravemente la gravemente los materiales plásticos mayoría de ellos tienen un gran lámparas. Además, no son adecuados
animales. Sin embargo, su eficacia geometría compleja. piel ylos ojos. Además, es y de goma. tamaño y peso, excepto cuando se para todos los entornos debido a sus
depende del microorganismo, la cancerígeno ya que aumenta el instalan en los techos de las limitaciones de eficiencia.
geometría de la habitación, las riesgo de desarrollar cáncer de piel. habitaciones.
dosis de irradación, la longitud de
onda, el tiempo de exposición, y el
tiempo de uso de la lámpara.
MICROORGANISMOS ANALIZADOS
-Acinetobacter baumannii
-Adenovirus 5
-Aspergillus niger
-Bacillus cereus
-Bacillus subtilis
-Candida albicans
-Clostridium difficile
-Enterococcus faecium VRE
-Enterococcus hirae
-Escherichia coli
-Carbapenem-resistant
-Klebsiella pneumoniae (CR-KP)
-Listeria monocytogenes
-Legionella pneumophila
-Murine norovirus (MNV)
-Mycobacterium avium
-Mycobacterium terrae
-Poliovirus 1 lsc-2ab
-Pseudomonas aeruginosa
-Salmonella typhimurium
-Staphylococcus aureus
-Staphylococs aureus MRSA
PROYECTO
"Cuantificación de la actividad antiviral in vitro
de los desinfectantes sobre SARS-CoV-2".

EXPERIMENTO REALIZADO POR LA

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA,
COLOMBIA

Concluye que:

“El sistema de desinfección 99T, du-

rante un tiempo de contacto de
35 minutos con el virus en solución,
inactivó el 99,75% del virus infeccioso
del SARS-CoV-2
infeccioso”.

FACULTAD DE MEDICINA
Grupo Inmunovirología

Universidad de Antioquia. Calle 62 # 52-59, torre 2,

laboratorio 532. Medellín.Colombia.
CERTIFICACIONES

Registrado en el MPPS bajo el

N° PMP 27.866 y EMP.- 2.136.

Patentado en Italia (Bologna), con un

respaldo científico de 12 años de
investigación.

N° 880.6890 SISTEMI DI GESTIONE

CERTIFICATI

0546
DM /07/13/ S
ISO 13485:2003

N° C-446 ELDO 2010

 FOR PROMPT RELEASE

INFECTION PREVENTION THROUGH THE USE OF 99T DISINFECTION SYSTEMS

THE EFFICACY OF THE 99TECHNOLOGIES (99T) DISINFECTION SYSTEMS AS PART OF

EFFECTIVE PREVENTIVE MEASURES AGAINST THE NOVEL CORONAVIRUS

The capability of the 99T environmental disinfection technology to eradicate the Novel Coronavirus from inanimate
surfaces is the result of its wide-spectrum virucidal activity verified through the EN 14476 international standard.
In light of the impossibility to carry out direct efficacy test on Novel Coronavirus, it is crucial to highlight the ability
of the 99T systems to remove from surfaces strains of viruses, used in the EN14476 testing procedure, which are
significantly much more resistant to the inactivating effect of disinfectants than the Novel Coronavirus.

The 2019 Novel Coronavirus, also known as 2019-nCoV, is • WHO (World Health Organization) suggests to ensure
a virus which has been identified as the cause of an that environmental cleaning and disinfection
outbreak of respiratory illness first detected in the city of procedures are followed consistently and correctly.
Wuhan (China) at the end of December 2019. The Regarding disinfection, commonly used hospital level
outbreak is still ongoing, and it is generating a high level disinfectant should be used (as it is the case for the
of concern among local and international health 99S disinfectant solution). Moreover, WHO suggests
authorities [1]. to clean and disinfect carefully all the equipment that
2019-nCoV belongs to the family of coronaviruses, which needs to be shared among patients, and to routinely
are enveloped viruses that can infect both humans and clean and disinfect surfaces which the patient is in
animals. Since 2002 two other strictly related contact with, in order to minimize the risk of exposure
coronaviruses infecting animals (SARS-CoV in 2002 and to the virus [5].
MERS-CoV in 2012) have evolved and caused outbreaks in • CDC (the US Center for Disease Control and
humans, that have led to a high mortality rate (10% for Prevention) recommends to clean and disinfect
SARS and 35% for MERS) [2]. frequently touched objects and surfaces [1].
Common signs of 2019-nCoV infection include respiratory • ECDC (European Centre for Disease and Prevention
symptoms, fever, cough, shortness of breath and and Control) considers that the potential impact of
breathing difficulties. In more severe cases, infection can 2019-nCoV outbreak is high and for this reason
cause pneumonia, severe acute respiratory syndrome, suggests adopting appropriate infection prevention
kidney failure and even death [3]. and control practices, particularly in health care
Considering that investigations are still ongoing, it is not settings and during aerosol-generating procedures
fully known how the virus spreads: the events initially [2].
suggested animal-to-person spread, and nowadays it has
been confirmed that person-to-person spread can occur The 99S solution, used in the 99T’s bio-decontamination
as well. The most probable transmission routes of human procedures, is certified to have virucidal activity according
coronaviruses are represented by respiratory droplets to the international standard EN 14476. The virus strains
coming from sneezes and coughs of infected people, close tested in order to be compliant with the norm are the
personal contact (such as touching and shaking hands) Poliovirus type 1 LSc-2ab, the Adenovirus type 5 and
and contaminated objects and surfaces [1]. Although murine Norovirus, which are non-enveloped viruses and
enveloped viruses are usually susceptible to are considered highly resistant to disinfection.
environmental stresses, it has been demonstrated the Coronaviruses are, by and large, significantly more
ability of human coronaviruses to survive and remain susceptible to the destructive action of 99T’s systems
infectious for at least 5 days on many common touch when found on surfaces because they are enveloped
surfaces, including polytetrafluoroethylene (Teflon; PTFE), viruses which are known to be less resistant to
polyvinyl chloride (PVC), ceramic tiles, glass, silicone disinfectants than non-enveloped viruses.
rubber, and stainless steel [4]. In fact, the structure of the enveloped viruses includes a
The most effective form of prevention is represented by lipid envelope easily compromised by effective
avoiding being exposed to the virus [1] because there is disinfection: once the lipid envelope is dissolved, the core
currently no vaccine available. is exposed, and it becomes vulnerable to termination.
For this reason, the relevant health authorities have On the contrary, non-enveloped viruses, such as Poliovirus
released recommendations and guidelines, which are type 1 LSc-2ab and the Adenovirus type 5, are rather
inclusive of measures intended to assure adequate resistant to most disinfectants. Indeed, despite the lack of
environmental infection prevention and control during a lipid envelope, these organisms have a stable viral capsid
2019-nCoV outbreak: made up of protein [6]. As a consequence, the elevated

99 Technologies S.A.
Via al Chioso 8 - 6900 Lugano – Switzerland
info@99technologies.ch
1
Virucidal Efficacy on_2019-nCoV _99MS_rev00_28JAN20
presentado en varios congresos internacionales (consulte los posters enviados a través del enlace a
continuación).

Eficacia del 99S contra el SARS-CoV-2

La solución 99S, además de ser un eficaz desinfectante virucida aprobado según las normas europeas
pertinentes EN 14476 y EN 16777, ha sido probada in vivo contra el SARS-CoV-2: la prueba se realizó sobre
el SARS-CoV-2 en un laboratorio de la Universidad de Antioquia en condiciones particularmente drásticas ya
que las muestras fueron colocadas por razones de seguridad dentro de una cabina de bioseguridad (ver foto
3) en un Laboratorio BSL-3, con el flujo de aire constantemente encendido, aún bajo estas condiciones, el
sistema HDM ha demostrado ser extremadamente eficaz.

Por favor, eche un vistazo a:

• Áreas de aplicación del 99T: es una colección de fotografías que representan algunos de los
muchos escenarios en los que se ha utilizado el sistema 99T en todo el mundo, también en este
contexto COVID-19.

• Comparación de tecnologías de desinfección 99T: es un folleto técnico sobre la comparación de

99T HDM® con las tecnologías de desinfección más comunes de la competencia. En particular, este
documento incluye una comparación con HP aerosolizado, HP vaporizado, ozono y UV-C y evalúa
los parámetros más significativos (eficacia, eficiencia, compatibilidad, seguridad, usabilidad y
rentabilidad).

• Características técnicas del Sistema 99T

• Presentación de tecnología

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VAT n./ CHE 142.730.665 IVA
 Proprietary Name: 99.99F; 99.99S; 99F; 99PH; 99S;
99T
DISINFECTANT, MEDICAL
Classification Name:
DEVICES
Product Code: LRJ
Device Class: 1
Regulation Number: 880.6890
Medical Specialty: General Hospital
Registered Establishment
99 TECHNOLOGIES S.A.
Name:
Owner/Operator: 99 TECHNOLOGIES S.A.
Owner/Operator Number: 10043007
Establishment Operations: Foreign Exporter; Repackager/Relabeler

Reference:

The information reported on this page is downloaded directly from the Food and Drug Administration
website at: http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cdrh/cfdocs/cfRL/LDetails.cfm?LID=358256

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 Technical Data Sheet

99S Bactericidal, Fungicidal, Virucidal, Sporicidal Disinfectant used to

decontaminate and disinfect non-invasive medical devices.

Composition
Stabilized hydrogen peroxide >5% <8%; Silver Salt Complexes; Water F.U.

Mechanism of action
Hydrogen peroxide (H2O2), promptly converts into hydroxyl radicals (OH•) that react instantly with the essential biomolecules
(i.e. proteins, lipids, nucleic acids, etc.) inactivating them.

Method of use
Ready to use solution to be used with the dedicated accessory Modulator Micro-Nebulizer 99M.

Effectiveness
Tested in accordance with the norms:
EN 1040, EN 1276, EN 13697, EN 1275, EN 1650, EN 13704, EN 14476, EN 13623, EN14348, EN 13727, EN 13624,
EN 16777 and EN 17126.
Against the microorganisms*:

Pseudomonas aeruginosa Poliovirus 1LSc-2ab Salmonella thyphimurium

Staphylococcus aureus Adenovirus 5 Listeria monocytogenes

Escherichia coli Murine Norovirus Klebsiella pneumoniae KPC

Enterococcus hirae Acinetobacter baumannii Mycobacterium Avium

Candida albicans Clostridium difficile Mycobacterium Terrae

Aspergillus niger Staphylococcus aureus MRSA Legionella pneumophila

Bacillus Subtilis Enterococcus faecium VRE Bacillus Cereus

* selected list of a wider number of microorganisms tested

Conformity of the airborne disinfection of surfaces

Tested in accordance with the norm:
Afnor NF T72-281.

Compliance
Directive 93/42/EEC - Medical Device Class IIa.

Packaging
1L bottle (pack of six).

Shelf life
99S is valid for 36 months from the date of production if stored in its original package, at a temperature not lower than 5 °C
nor higher than 30 °C and out of direct sunlight exposure.

99 Technologies S.A. - Via al Chioso, 8 - 6900 Lugano - Switzerland I: +41 91 970 29 29 e-mail: info@99technologies.ch www.99technologies.ch

TDS_99S_eng_rev_04_210216
 FACULTAD DE MEDICINA
Grupo Inmunovirología

Final report

Project "Quantification of the in vitro antiviral activity of disinfectants on

SARS-CoV-2"

Submission date: August 24, 2020

1. BACKGROUND

The company 99Technologies S.A. from Switzerland requested the

evaluation of the 99T DISINFECTION SYSTEM which uses a 99MB
micronebulizer machine with a 99S disinfectant solution (Hydrogen peroxide
(H2O2): ~ 6.6%, 0.006% silver cations and coformulants. The technology uses a
micronebulization system that generates microdroplets loaded with the
disinfectant. The system was transferred to the BSL-3 laboratory of the
Immunovirology Group of the Universidad de Antioquia, and it was used to
determine the antiviral potential against the SARS-CoV-2 Virus, isolated at the
University of Antioquia.

1. METHODOLOGY
Materials and reagents
The antiviral activity of the 99T DISINFECTION SYSTEM (Photo 1) was analyzed;
For this analysis, the SARS-CoV-2 virus isolated in the Immunovirology Group of the
Universidad de Antioquia in the VERO E6 cell line was used. The VERO E6 cells
were kept in DMEM culture medium, supplemented with 5% FBS (Fetal bovine
serum), in a 5% CO2 atmosphere and at a temperature of 37ºC. The titer of the
SARS-CoV-2 virus isolated in the laboratory was determined using the plaque assay
and TCID50 (Tissue Culture Infectious Doses 50) in VERO E6 cells, following a
protocol previously described in the literature (1). The titer obtained was 4.21x106
PFU (plaque-forming units) / mL.
Conmutador: 2196000 Fax:2630253 Nit: 890980040-8 Apartado: 1226
Correo electrónico: facultad@medicina.udea.edu.co http://medicina.udea.edu.co. Medellín, Colombia
Correo del grupo: Inmunovirologia@siu.udea.edu.co Teléfono: 219 64 82
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 FACULTAD DE MEDICINA
Grupo Inmunovirología

1. Fan H.H., et al., Repurposing of clinically approved drugs for treatment of

coronavirus disease 2019 in a 2019 - novel coronavirus (2019-nCoV) related
coronavirus model. Chin. Med. J. 2020;6. doi: 10. 1097/CM9. 0000000000000797.

Virucidal Activity Assay

On the day of the assay, 100uL of the SARS-CoV-2 virus with a viral titer of 4.21x106
PFU / mL was added to a well of a 6-well plate. In parallel, the 99T DISINFECTION
SYSTEM was located on the floor of the BSL3 laboratory and by means of a laser,
the outlet nozzle of the equipment containing the disinfectant was directed into the
biosafety cabin where the virus was found (2 meters away) (Photo 2). Chemical
indicators were placed inside the biosafety cabin, in order to control and confirm the
entry of the micro drops to the interior of the cabin; these indicators change color on
contact with the disinfectant components (Photo 3). The spray time of the equipment
was 19 minutes and the post contact time was 35 minutes. In parallel, a virus control
was included, which contained culture medium and virus, without exposure to the
99T DISINFECTION SYSTEM. In addition, a cytotoxicity control was included,
which consists of culture medium only, exposed to the 99T DISINFECTION
SYSTEM, without virus; this control allows to determine the cytotoxicity produced
by the disinfectant on the cell culture. Subsequently, the virus exposed or not to the
99T DISINFECTION SYSTEM was titrated, using the TCID50 technique and plaque
assay (1).

The TCID50 was determined by a cell viability analysis using the MTT assay, which
is based on the metabolic reduction of 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-
diphenyltetrazole bromide performed by the succinate dehydrogenase mitochondrial
enzyme in a blue colored compound (formazan), allowing to determine the
mitochondrial functionality of treated cells. This method has been widely used to
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measure survival, cell proliferation, and antiviral activity; thus, the amount of
formazan is directly proportional to cell viability (2). Initially, cells were seeded at a
density of 1x105 cells / well in a 96-well plate in 200 µL of DMEM with 10% FBS and
cultured for 24 hours at 37°C with 5% CO2, prior to the antiviral experiment. Then,
cells were infected with base 10 dilutions of the virus obtained in the previous step,
in triplicate and for 1 hour. At the end of this time, the remaining virus that failed to
enter the cell was discarded and fresh DMEM culture medium with 5% FBS was
added. Forty-eight hours after infection, the supernatant was removed and the MTT
solution (0.5 mg / mL) was added. After 2 hours of incubation, 130 µL/well of DMSO
were added. The plates were left in agitation for 15 minutes and were finally read on
a spectrophotometer at 550nm. Each experimental condition was evaluated in
triplicate in 2 independent experiments (n=6). The calculation of the virus titer is
obtained by the Reed and Muench method (3).

2. Shen L., et al. High-throughput screening and identification of potent broad

spectrum inhibitors of coronaviruses. J. Virol. 2019;93(12).

3. Reed,L.J.; Muench, H. A simple method of estimating fifty percent endpoints.

Am. J. Hyg. 1938, 27, 493–497.

Additionally, the highest dilution in which a difference of more than 20% in cell
viability was observed comparing the virus exposed to the disinfectant versus the
control virus, and in which the cytotoxicity of the disinfectant was less than 20%,
was used to determine the virus titer in a plaque assay.

The plaque assay is a technique considered as a gold standard to determine the

viral titer; therefore, it is the technique of choice to efficiently check the reduction in
the viral titer caused by the disinfectant in this type of experiments.
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Grupo Inmunovirología

Finally, the statistical analyzes for all the tests are shown as the average with the
respective standard deviation in each dilution. Parametric or non-parametric
statistical tests were performed, as appropriate, to find differences between the
conditions of each experiment. A value of p <0.05 was considered statistically
significant.

3. RESULTS

Figure 1 shows the percentage of live cells after being infected with SARS-CoV-2
exposed to the 99T DISINFECTION SYSTEM or without exposure to the
disinfectant (Virus Control). The use of the disinfectant succeeded in reducing the
cytotoxicity of the virus, producing an increase in the percentage of cell viability from
the 10-3 dilution, with an average of 58%; cell viability remained above 99.5% in
subsequent dilutions (Figure 1). In contrast, in the control virus, the percentage of
cell viability was 31%, 35%, 46% and 63%, in the dilutions 10-1, 10-2, 10-3 and 10-4,
respectively; with statistically significant differences between the virus control and
Virus+Disinfectant, at the 10-4 dilution (p<0.05). Therefore, it is clear that cell viability
measured by MTT technique, was superior when cells were infected with SARS-
CoV-2 virus previously exposed to the disinfectant; suggesting a virucidal effect,
which becomes evident with the decrease of the cytopathic effect of the virus.

Additionally, it can be observed that cell viability, at 10-4 and higher dilutions, is on
average 91% in the cytotoxicity control. This suggests that the cytotoxicity of the
disinfectant is not affecting the reading or interpretation of the results observed in
the cells infected with the virus and exposed to the disinfectant.

Subsequently, from the data of the cell viability assay measured by MTT, it is
possible to calculate the titer of the virus as TCID50. It was found that the control
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virus had a viral titer of 10-3,956 (Figure 2); while, for the virus exposed to the 99T
DISINFECTION SYSTEM, the titer of the virus was 10-2,99 (Figure 2); suggesting a
decrease in the titer of the virus exposed to the disinfectant. .

To confirm this reduction, the plaque assay was performed, starting from the
supernatant of the 10-4 dilution of the previous test; dilution chosen according to the
criteria mentioned in the methodology section of this report.

When the 10-4 dilution was used, it can be observed that in the control virus (cells
infected with virus, none exposed to the disinfectant) the calculation of the viral titer
by plaque forming units (PFU)/mL was in average 1.5x108. In contrast, the titer of
the virus in the condition of Virus+Disinfectant (cells infected with virus exposed to
the disinfectant), was 3.75x105, indicating a reduction of 99.75% in the viral titer
(Figure 3); in other words, the 99T DISINFECTION SYSTEM inactivated 99.75% of
the SARS-CoV-2 infectious viral particles under the conditions described above.

4. CONCLUSION
We can conclude that the 99T Disinfection System, during a contact time of
35 minutes with the virus in solution, inactivated 99.75% of the SARS-CoV-2
infectious virus.

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Photograph 1.
99T DISINFECTION SYSTEM; which uses a 99MB micronebulizer machine with a
99S disinfectant solution (Hydrogen peroxide (H2O2): ~ 6.6%, 0.006% silver cations
and coformulants.

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A.

C.

B.
Photograph 2.
Location of the 99T DISINFECTION SYSTEM.

The position of the micronebuilization equipment is observed at the BSL3 biosafety

room (A); in addition, the red dot of the laser is observed inside the biosafety booth,
indicating the direction in which the nozzle of the micronebuilization equipment was
directed (B and C).
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Photograph 3.

Chemical indicators located inside the biosafety cabinet; before (left) and after (right)
the spraying with the 99T DISINFECTION SYSTEM. The color change is observed
due to contact with the disinfectant 99S.

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Effect of the disinfectant on SARS-CoV-2

120
* *

100

80
Control virus

60 Virus+Disinfectant
Cytotoxicity control

40

20

0
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6

Viral Dilution

Figure 1.

Cell viability test showing the percentage of live cells, after 48 hours of infection with
SARS-CoV-2 virus dilutions, previously exposed or not to the 99T DISINFECTION
SYSTEM. A cytotoxicity control was included in the experiment, which contained
only culture medium exposed to the disinfectant. The graph shows the average of
each measurement and the standard deviation. Two experiments were carried out
with 4 replicates each. *Statistically significant difference (p<0.05) between the
Virus+Disinfectant, the cytotoxicity control and Virus control.

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Titration of SARS-CoV-2 virus exposed to the disinfectant

120
Control virus
100 Virus+Disinfectant
80

60

40

20

0
100 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
Viral Dilution

Figure 2.

Cellular viability assay from which the TCDI50 virus titer is obtained. The graph
shows the percentage of live cells and the different viral dilutions that allow to define
the TCID50 for each condition. The curve of the viral titer is observed in the condition
of the virus control and Virus+disinfectant.

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Virus +
Disinfectant

Control Virus

Figure 3.

Plaque assay in which the plaque formed by SARS-CoV2 obtained from the
supernatant of the virus control and the virus exposed to the 99T Disinfection
System in the anti-viral test are shown. Dilutions from 10-3 to 10-7 are observed in
the condition of Virus+Disinfectant and in the Virus Control. The result is expressed
in plate-forming units (PFU)/mL. CC: control of cells without infection and without
exposure to disinfectant.

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Report prepared and reviewed by: Wildeman Zapata Builes. Associated Researcher.

Report reviewed by: Juan Carlos Hernández López. Associated Researcher.

Report reviewed by: María Teresa Rugeles López. Coordinator of the

Immunovirology Group.

Contact information: Immunovirology Group.

Universidad de Antioquia. Calle 62 # 52-59, torre 2, laboratorio 532. Medellín.

Colombia.

Tel: 2196482. E-mail: maria.rugeles@udea.edu.co.

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CONCLUSIONES DERIVADAS
DEL ANÁLISIS DEL PROYECTO
“QUANTIFICATION OF THE IN VITRO ANTIVIRAL ACTIVITY CONCLUSIONES:
OF DESINFECTANTS OF SARS CoV-2”
1 - DEL ANÁLISIS SE DESPRENDE QUE CON UNA DILUSIÓN DE 10
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA, COLOMBIA. 4 (P< 0.05) DEL COMPLEJO CULTIVO VIRAL + DESINFECTANTE SE
AGOSTO 24 / 2020. PRODUJO UNA REDUCCIÓN DE UNIDADES FORMADORAS DE
PLAQUETAS (COLONIAS) COMO SE EXPRESA EN EL AXIOMA:
EQUIPO:
5 5
MICRONEBULIZADOR = 99MB. REDUCCIÓN ( UFP) : DESDE 15 X 10 3.75 X 10
DESINFECTANTE = 99S. (ESTADISTICAMENTE SIGNIFICATIVO).
H2O2 = ~ 6,6%P/V (~ 6,6 grs / 100ML)
+ 2 - LO QUE SE CORRESPONDE CON UN PORCENTAJE DE
CATIONES DE PLATA = ~0,006%P/V (`~ 0,006 grs / 100ML) REDUCIÓN EN LA TITULACIÓN DEL VIRUS POSTERIOR A LA
EXPOSICIÓN AL DESINFECTANTE: % REDUCCION
TAMAÑO DE LA GOTA: 1 um (MICRA) ( TITULACIÓN VIRAL) = 99,75%.
TAMAÑO DEL VIRUS: 115 – 480 um (MICRAS)
EXPOSICIÓN: 35 minutos 3 - TODO LO ANTERIOR CON UNA EXPOSICIÓN DEL
DILUSIÓN: 10 - 4 CULTIVO VIRAL AL DESINFECTANTE DE 35 MIN.
8 5
REDUCCIÓN (UFP): 1,5 X 10 3.75 x 10 4 - CON UNA VIABILIDAD CELULAR DEL 91% Y SUPERIOR
ALCANZADO MEDIANTE ESTUDIOS DE CONTROL DE
% REDUCCIÓN CITOTOXICIDAD.
(TITULACIÓN VIRAL): 99.75 %
5 - LO QUE SUGIERE QUE LA TOXICIDAD DEL DESINFECTANTE SE
HACE DESPRECIABLE A PARTIR DEL MINUTO 35 POSTERIOR A LA
EXPOSICIÓN DE SUPERFICIES Y AMBIENTES.

Dr. ELLANS J. FERRERO P.

C.I: 9.563.327 MPS 46313.
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