COMPUESTOS NITROGENADOS

Entre los compuestos nitrogenados que se encuentran en los

vegetales, los mas importantes por las actividades
farmacolgicas que presentan, son los alcaloides. Nos
ocuparemos de ellos mas adelante, siguiendo el orden
establecido al inicio de estos artculos. En esta ocasin nos
vamos a dedicar al estudio de los prtidos, especialmente de
aminocidos y pptidos y productos derivados directamente de
ellos.
Los aminocidos se pueden encontrar en las plantas en forma
libre, la mayor parte de los cuales corresponden a cidos a-
aminados, cumpliendo una gran variedad de funciones
fsiolgicas como por ejemplo, ser reserva nitrogenada o
defensa frente a depredadores. Sin embargo, es frecuente
encontrarlos formando parte de estructuras mas complejas,
bien conservando su estructura aminoacdica, como es el caso
de protenas estructurales y enzimas o bien modifcados
estructuralmente como precursores biogenticos de una gran
variedad de metabolitos secundarios, como pueden ser
aminas, hetersidos cianogenticos, glucosinolatos, alcaloides
y una vez desaminados, compuestos fenilpropnicos.
I.- Enzimas
A pesar de que en los vegetales existen numerosos compuestos
enzimticos, solo algunos de ellos, enzimas proteolticos, son
de aplicacin a la teraputica. Es el caso de los enzimas
denominados bromelaina, papaina o fcina presentes en los
frutos de pia y papaya y en el ltex de las cortezas de plantas
pertenecientes al gnero Ficus, respectivamente. Desde el
punto de vista de la ftoterapia, sin embargo, solo se utilizan
los dos primeros por lo que nos referiremos exclusivamente a
ellos.

PIA
Se emplean los frutos y tallos de esta planta herbcea, Ananas
comosus (L.) Merr. (Bromeliaceae), originaria de Amrica
central y cultivada en numerosos lugares.
El fruto contiene numerosos enzimas (bromelaina), azcares,
cidos orgnicos, vitaminas, sales minerales, etc. El tallo
posee gran cantidad de fbras e igualmente compuestos
enzimticos. De hecho, el enzima comercial es un extracto
preparado a partir de los tallos, principalmente por
precipitacin acetnica. Este extracto contiene diversas
proteasas y enzimas no proteolticos.
Entre sus acciones farmacolgicas se puede destacar su
actividad digestiva, til en el tratamiento de dispepsias;
antiinfamatoria; antiagregante plaquetario y fbrinoltica.
La bromelaina se ha aplicado en el tratamiento de heridas e
infamaciones del sistema locomotor y de la cavidad bucal,
consiguiendo reducir con efcacia el dolor y la infamacin.
Tambin se emplea en forma de cremas en el tratamiento de la
celulitis ya que debido a su actividad proteoltica es capaz de
despolimerizar parcialmente las fbras proteicas, separando el
tejido celultico y por tanto posibilitando la movilizacin de los
depsitos grasos de los adipocitos.

PAPAYA
Se emplea en teraputica el latex concentrado obtenido del
fruto de la especie Carica papaya L. (Caricaceae), especie
arbrea que presenta un ramillete terminal de hojas lo que
hace que se asemeje a una palmera. Es una planta originaria
de Amrica central. El ltex se obtiene por incisin de los
frutos -bayas de gran tamao- antes de su madurez.
El fruto contiene azcares, vitaminas, carotenos, compuestos
voltiles, glucotropeolina (glucosinolato), etc. El ltex est
constituido por un conjunto de proteasas que se conocen como
papana bruta. A partir de esta papana bruta se obtienen:
papana pura (molcula con 212 aminocidos), quimopapana
y papayaproteinasa W.
Esta mezcla de enzimas se utiliza en problemas digestivos por
su poder proteoltico. La quimopapana es empleada en el
tratamiento de citicas lumbares inyectada directamente en
los espacios intradiscales, ya que hidroliza los proteoglicanos
que se acumulan en los discos intervertebrales y que son
causa de dolor.
La quimopapaina y la papaina, compuestos con escasa
toxicidad, se han empleado tpicamente en el tratamiento de
quemaduras en nios y lceras plantares recurrentes en
enfermos con lepra, obteniendo muy buenos resultados ya que
estos enzimas previenen la infeccin y aceleran el proceso de
la cicatrizacin.
El ltex obtenido de este fruto ha mostrado tambin un
importante efecto antihelmntico sobre nematodos intestinales
de mamferos.
II.- Compuestos nitrogenados derivados de aminocidos
En este grupo incluimos aquellos principios activos de plantas
medicinales que derivan directamente de aminocidos, son los
hetersidos cianogenticos y los glucosinolatos.
ENZIMAS PROTEOLTICAS
Descripcin:
Solucin con enzimas proteolticas, que destruyen protenas y materias orgnicas
adheridas al instrumental.
Detergente suave que se esparce por todos los conductos, alcanzando los lugares
ms difciles, sin rallar ni deteriorar los instrumentos delicados.
Remoja y lava evitando el tener que lavar, enjuagar y sumergir luego en la
solucin!.
"ccin inmediata.
#cil de enjuagar.
"roma agrada$le.
%fectivo a temperatura am$iente.
&rae dosificador una onza por galn de agua!.
Naclens Enzimas
Comprimidos para la limpieza enzimtica de todo tipo de lentes de contacto
El comprimido Naclens enzimas contiene como principio activo Subtilisina. Esta enzima digiere los depsitos de
protena que se han adherido a la superficie de la lente y que proceden del metabolismo corneal y de la lgrima. El
mecanismo consiste en la hidrlisis de los enlaces peptdicos del depsito de protena la cual al quedar fragmentada
tiene mayor tendencia a dispersarse o solubilizarse en la solucin.
Naclens enzimas garantiza una accin frente a los depsitos de la protena lisozima y ciertos mucopolisacridos
presentes en la lgrima.
!as enzimas son protenas que presentan en su mol"cula un centro activo capaz de desencadenar una reaccin
qumica especfica a gran velocidad. #s por e$emplo la Subtilisina es una proteasa y rompe las uniones peptdicas
entre aminocido y aminocido en las protenas fragmentando el depsito proteico en porciones que se solubilizan
fcilmente %ver figura &'.
!os comprimidos Naclens enzimas son completamente solubles y su modo de empleo con soluciones (nicas y
per)ido es muy sencilla*
Con soluciones (nicas se a+ade el comprimido enzimtico sobre la solucin antes de introducir las lentes.
Con per)ido de hidrgeno ,- se a+ade el comprimido enzimtico a la vez que el comprimido neutralizador
y despu"s se introducen las lentes.
!a incorporacin de Naclens enzimas en soluciones de per)ido de hidrgeno y soluciones (nicas %que
contengan polihe)ametilenbiguanida' no inhibe o reduce la capacidad desinfectante de las soluciones.
!os comprimidos Naclens enzimas tambi"n pueden utilizarse con solucin salina.
Naclens enzimas es compatible con todo tipo de lentes de contacto blandas desechables y permeables al
gas.
.igura &. /ecanismo de accin de Naclens enzimas
Extraccin Enzimtica de Arsnico
en Muestras de Orgen Vegetal
Ayala, Javier - Garro, Oscar A. - Gimenez, Mara C.
Facultad de Agroindustrias. UNNE.
Cnte. Fernndez 755 - (3700) Senz e!a - C"aco - Argentina.
#el.$Fa%& '5( (0373)) ()0*37 - E-+ail& cgi+enez,-ai.unne.edu.ar
FUNDAMENTACIN
El arsnico se concentra en los organismos que estn expuestos a este elemento y se acumula a lo largo de la
cadena trfica. Esto nos indica que si se desea evaluar el impacto ambiental que ocasiona este contaminante,
es necesario realizar un estudio de aquellos organismos vivos que de una manera u otra estn en contacto
con el elemento.
Previo a cualquier mtodo de deteminacin de arsnico a partir de muestras biolgicas, se debe llevar a
cabo la separacin o extraccin de dicho elemento desde la matrz en que se encuentra. !a extraccin es
una etapa crtica ya que es preciso que el analito sea separado de esta matrz de elementos interferentes con
la mayor eficacia , evitando la prdida o la contaminacin.
En la determinacin de arsnico como en la de otros tantos elementos, la utilizacin de cidos o bases
minerales fuertes es muy frecuente "#in. of $gr. %ish. and food, &'(&) *imnez de +las y col.,&'',)
$.-.$.., &''/0. 1ambin, se han utilizado disolventes orgnicos "fundamentalmente cloroformo o metanol
0 combinados en distintas proporciones entre s. $ pesar de que la extraccin con metanol y agua funciona
bastante bien en plantas, el procedimiento resulta largo y traba2oso, de difcil aplicacin en el anlisis de
rutina en el laboratorio "+yrne y col.,&'',0.
Esto ha llevado a algunos investigadores ha intentar desarrollar un mtodo alternativo ms sencillo, basado
en la extraccin con Enzimas "Ebdon y col., &''3) #ndez $lonso, &''4 0. 5e ah que se pensara en la
posibilidad de utilizar esta metodologa para la extraccin de arsnico en material biolgico como
metodologa factible de ser utilizada en anlisis de rutina.
Existen estudios realizados que muestran que los resultados obtenidos con tri.sina en pescados y crustceos
no de2a lugar a dudas sobre su eficacia para la extraccin de arsnico en este tipo de materiales con alto
contenido proteico. 1ambien se demostr que su presencia en las muestras no causaba problemas en la
posterior determinacin pero, no posee la misma eficacia en materiales de tipo vegetal fueran estos
acuticos o terrestres " Ebdon y col., &''30. 5el mismo modo, las enzimas celulasa y .ancreatina han
demostrado su eficacia en la extraccin de arsnico en material vegetal como ser, algas marinas, donde la
tripsina no resulta 6til.
!a celulasa es la enzima que se encarga de la descomposicin de la celulosa de las plantas. En cuanto a la
.ancreatina, es una combinacin de enzimas, contiene amilasa, tripsina, lipasa, ribonucleasa y proteasa, y si
bien tiene gran inters para el metabolismo de materiales proteicos con alto contenido en grasas, puesto que
la tri.sina ataca protenas y la li.asa, lpidos, la presencia de a+ilasa ha demostrado su eficacia en matrices
vegetales "#nedez $lonso, &''40.
El grupo de traba2o de 7umica $naltica 8eneral viene traba2ando tratando de realizar una evaluacin del
impacto ambiental que el arsnico ocasiona en la regin central de la provincia del .haco, de ah que se
pensara en la posibilidad de utilizar esta metodologa para la extraccin de arsnico en material biolgico
como metodologa factible de ser utilizada en anlisis de rutina.
El ob2etivo general del presente traba2o es investigar un mtodo alternativo basado en la extraccin con
enzimas para la determinacin de arsnico total en material vegetal, comparando la eficacia de dicha
extraccin con las observadas utilizando cidos minerales y mezclas metanol9agua..
MATERIALES Y MTODOS
1- Tratamiento de las muestras: En todos los casos se traba2 con plantas 2venes de Sorghum halepense
"!.0 Pers. :;orgo de alepo: "gramineae0, las que fueron de2adas durante </ das en agua con una
concentracin de </ mg !9& de arsnico. Posteriormente fueron secadas a estufa durante 3( hs "a &/// .0 y
molidas con molinillo malla </. En todos los casos se traba2 con /,4 g de muestra
2- Mtodos de extraccin seleccionados:
Extraccin cida: ;e seleccion el mtodo de digestin por va h6meda por medio del ataque de la muestra
con mezcla de dos cidos fuertes "=>-? y =.l-30 seg6n metodologa empleada por " #in. of $gr. %ish. and
%ood, &'(& y #enndez $lonso, &''40.
Extraccin alcolica: ;e emple la tcnica que utiliza la mezcla metanol@agua, seg6n "#enndez $lonso,
&''40.
Extraccin enzimtica: Para el presente traba2o se procedi seg6n lo establece #enndez $lonso, &''4) el
esquema del procedimiento tpico de una extraccin con enzimas se muestra en la !igura 1.
.on la finalidad de optimizar el procedimiento de extraccin se analizaron distintos parmetros que se crea
podan influir en el proceso, siendo seleccionado para este traba2o p=, temperatura, agitacin y cantidad de
enzima agregada.
muestra" #"$g
2$g de enzima 1$ m% &solucin 'u((er)
Tu'o de omogeneizar
&mezclar)
*a+o con agitacin a ,-# .
durante 12 s/
A 0olumen en matraces de $# m%
.on disolucin tam1n
Anlisis de las muestras
Figura1 rocedi+iento t/.ico .ara la e%tracci0n de ars1nico con enzi+as.
,- Anlisis de las muestras: !a determinacin de $s en las digestiones se realiz por el mtodo de Aasac 9
;edivec "&'430, la tcnica a utilizar se fundamenta en la reduccin a arsina y la posterior determinacin por
espectrofotometra visible a partir del 5ietilditiocarbamato de Plata en Efedrina@.loroformo recomendado
por "$P=$ $BB$ #P.%, &'@') +artoretti y 5alzo, &'CC y modificada por 8imnez y col., &''C0.
1odos los resultados de las muestras analizadas se realizaron por triplicado, obtenindose en todos los casos
un coeficiente de variacin menor al 4D.
RESULTADOS Y DISCUSIN
.on el fin de establecer las me2ores condiciones de extraccin se estudiaron diferentes parmetros cuyos
resultados son analizadosE
.antidad de enzima utilizada : se analizaron distintas concentraciones para cada una de las enzimas
estudiadas, siendo la concentracin de /,<4 g la ptima para el proceso, en todos los casos, tal lo muestra la
!igura 2/
12: El p= es un importante parmetro a analizar. Para estudiar la influencia que ste tiene sobre la eficacia
de la extraccin se analizaron muestras por duplicado. !os resultados se muestran en la !igura ,, donde se
observa que un p= 4 es el ms indicado para la accin extractante de la enzima celulasa, mientras que a p=
(, tanto con la enzima tripsina como con la pancreatina se alcanz la me2or extraccin.
Tem1eratura 3 agitacin: !os resultados se presentan en la (igura 4, donde se observa que las muestras
mantenidas a una temperatura constante de ?C/ . y con agitacin presentaron un mayor rendimiento de
extraccin en todos los casos, mientras que aquellas mantenidas a ?C/. pero sin ser agitadas, vieron su
rendimiento de extraccin reducido entre un &<D a un <&D seg6n la enzima) estos valores se vieron
reducidos en un ?< a ?4D cuando fueron mantenidas a temperatura ambiente y sin agitacin.
.oncentracin Arsnico en &ug g-1)
.E%5%A6A 7A8.9EAT:8A T9:76:8A
.on agitacin ;
a ,-# . 4,&C 3,'/ 3,??
6in agitacin ;
a ,-# . 3,// 3,&3 ?,C(
Tem1/ am'iente ; sin
agitacin ?,?? ?,?/ <,(3
Figura ! 2esultados del e-ecto de la te+.eratura 3 la agitaci0n en el .roceso de e%tracci0n.
!a validacin de la tcnica analtica se realiz por el mtodo de adicin estndar, con el fin de contrarrestar
los efectos de matiz. !as curvas resultantes se muestran en la !igura $.
Figura 2: Concn!raci"n # A$ %!ra&#o 'arian#o (a
can!i#a# # n)i*a agrga#a+
','
(,'
),'
*,'
+,'
,,'
-,'
.,'
/,'
0,'
(','
' ',', ',( ',(, ',) ',), ',* ',*, ',+
En)i*a agrga#a ,g-
Concn!raci"n A$ ,ug.g-
celulasa
pancreatina
tripsina
/ci#a
a(co0"(ica
c(u(a$a
1ancra!ina
!ri1$ina
,'
-'
.'
/'
0'
(''
(('
2 # rcu1raci"n
Ti1o # % !racci"n
Figura 3: Porcn!a4$ # rcu1raci"n # (o$
#i$!in!o$ * 5!o#o$ # %!racci"n+
Figura 6: In7(uncia #( 18 n ( 1roc$o #
%!racci"n+
.
.,,
/
/,,
0
0,,
('
* + , - . / 0 (' 18
concn!raci"n A$ ,ug.g-
celulasa
pancreatina
tripsina
Figura 9: cur'a$ # ca(i:raci"n 1ara (a$ #i$!in!a$
n)i*a$
y 1 ),*-(*2 3 ',)'(/
R) 1 ',00,,
y 1 ),*0-)2 3 ',))++
R) 1 ',00(*
y 1 ),*0'.2 3 ',)'0)
R) 1 ',00*,
;
;<2
;<=
;<3
;<>
?
?<2
?<=
?<3
; ;<? ;<2 ;<6 ;<= ;<9 ;<3
concn!raci"n A$ *g.L
a:$or:ancia
celulasa
pancreatina
tripsina
!os porcenta2es de recuperacin obtenidos en el anlisis de las muestras sometidas a extraccin con las
enzimas celulasa, pancreatina y tripsina, y los encontrados con los otros dos mtodos estudiados 9 extraccin
cida y alcohlica 9 se resumen en la !igura <. .omo se observa en la grfica, las enzimas celulasa y
pancreatina han demostrado funcionar con un rendimiento del '3 D mientras que la enzima tripsina lo hizo
con un porcenta2e de recuperacin del '? D.
CONCLUSIONES
!os resultados muestran que las enzimas celulasa, pancreatina y tripsina pueden utilizarse para la
extraccin de arsnico de una matrz vegetal, logrndose un alto rendimiento en la extraccin siempre que
estn garantizadas las condiciones de p=, temperatura, agitacin y cantidad de enzima agregada. El
procedimiento es simple, factible de ser utilizado en anlisis de rutina.
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""" 4R5675458
"7&598
1ro#uc!o4ancreatina 4"
1ro1i#a#$%nzima pancretica. :a pancreolipasa y la pancreatina son
e2tractos pancreticos o$tenidos a partir del pncreas $ovino o
porcino. 4or ser de naturaleza proteica, la pancreatina slo de$e
administrarse en comprimidos o cpsulas gastrorresistentes o
con co$ertura ent;rica para poder actuar en el nivel intestinal,
ya que la secrecin cido<p;ptica gstrica la inactiva. %n la
insuficiencia pancretica, el uso de estas enzimas puede
disminuir la esteatorrea y normalizar el equili$rio del nitrgeno al
corregir la p;rdida proteica por mala digestin.
co*1o$icion4ancreatina
in#icacion$5nsuficiencia enzimtica pancretica. Dispepsia. 4ancreatitis.
%steatorrea.
1o$o(ogia:a dosis usual es de +''mg cada - horas. %n caso de
necesidad, la dosis puede llegar a - a / gramos por da.
con!rain#icacion$6o presenta.
1rcaucion$6o presenta.
raccion$@a#'r$a$6o presenta.
in!raccion$4ancreatina, 6o presenta.