6 Fundamentos de Espectrofotometria 8269

Laboratorio de equilibrio y cinética
Agosto de 2008
CONOCIMIENTO DE TÉCNICAS ANALÍTICAS

PARTE I: FUNDAMENTOS DE ESPECTROFOTOMETRÍA
Grupo: ______________ Equipo: ________________ Fecha: ________________________

Nombre(s): __________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
I. OBJETIVO GENERAL
Conocer y aplicar los fundamentos de la espectrofotometría para la determinación de
concentraciones en soluciones.
II. OBJETIVOS PARTICULARES

a. Conocer los fundamentos de la espectrofotometría y las variables involucradas en la ley de
Lambert-Beer-Bourger.
b. Seleccionar la longitud de onda apropiada para las mediciones de absorbancia
c. Construir una curva patrón de soluciones de yodo (serie tipo)
III. PROBLEMA
A partir del espectro de absorción de una solución acuosa de yoduro de potasio seleccionar la
longitud de onda apropiada para determinar el coeficiente de absortividad molar de soluciones
acuosas de yoduro de potasio por medio de una curva patrón
INTRODUCCIÓN.
La espectroscopia UV-Visible estudia el fenómeno de adsorción de la radiación UV-
Visible de moléculas orgánicas e inorgánicas.
La región visible, a la que es sensible el ojo humano, se localiza entre los 380 y 780 nm.
U.V lejano → U.V cercano → Visible
0.6 – 190 nm 190 – 380 nm 380 – 780 nm
La absorción de la radiación ultravioleta o visible por moléculas orgánicas e inorgánicas,

generalmente se produce por la excitación de los electrones de enlace, por lo tanto, la longitud
Minerva Téllez O., Ramiro Domínguez D., Emma González Ch.

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de onda de los máximos de absorción se puede relacionar con los enlaces de las especies
absorbentes.
Los métodos espectroscópicos se basan en la capacidad de las sustancias de absorber

(o emitir) radiación electromagnética. Éstos se pueden emplear para determinar la
concentración de un reactivo o producto durante una reacción.
La figura 1 muestra los componentes básicos de un espectrofotómetro.
El aparato detecta la cantidad de luz transmitida o absorbida a través de la solución en

la celda y la compara con la que se transmite o absorbe a través de una solución de referencia
denominada “blanco”. La lectura en la escala ya está convertida en absorbancia.
La transmitancia de la muestra se define como la relación de la radiación transmitida y la

incidente (T= I/ I0). La disminución de la intensidad de la radiación depende de la concentración
del absorbente y de la longitud del camino recorrido por el haz. Estas relaciones se recogen en
la Ley de Lambert-Beer-Bourger:
A = -log T
A = log ( I / I0 ) = (ε × b) × c
ABSORBANCIA = (ε × b) × c
que establece una relación lineal entre la absorbancia y la concentración, donde:
ε.- es la constante de proporcionalidad llamada coeficiente de absorción molar,
absortividad molar o coeficiente de extinción (M-1 cm-1). Es la característica de una
sustancia que nos dice cuánta luz absorbe a una longitud de onda determinada.
b.- es el paso óptico, anchura de la celda que contiene la muestra (cm).
c.- es la concentración de la especie de la cual estamos midiendo la absorbancia (M).
La ecuación mencionada es el fundamento de la espectrofotometría. La ley de Lambert-
Beer Bourger se cumple para una radiación monocromática que atraviesa una disolución diluida

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(≤ 0.01M), cuando la especie absorbente no participa en un equilibrio que dependa de su

concentración.
Instrumentación:
Todo espectrofotómetro cuenta con los siguientes elementos:
Fuente de luz → selector de longitud de onda (monocromador) → Celda → detector →

escala de medida.
• Fuente de luz: un filamento de tungsteno que funciona mediante una fuente de alimentación
estabilizada proporcionando una radiación de intensidad constante el tiempo suficiente para
asegurar una buena reproducibilidad de las lecturas de absorbancia.
• Selector de longitud de onda: se trata de una sencilla red de difracción, que permite
separar la longitud de onda.
Tras seleccionar la longitud de onda la radiación pasa a través de un controlador de luz,
que consiste en una abertura en forma de V que se introduce o saca del haz para controlar la
intensidad de luz que incide en la fotocelda.
• Celda: Que contiene a la solución generalmente hecha de un material transparente que no
absorbe la luz. Su longitud y capacidad varía según el equipo y diseño. Las hay de paredes
cilíndricas o planas.
• Detector: a éste llega la radiación tras pasar por un filtro y por la muestra. Se trata de un foto-
tubo de medida. Se basa en el efecto fotoeléctrico de los metales que al irradiarlos generan
electrones.
• Escala de medida: La señal eléctrica del detector una vez amplificada se registra bien en una
escala analógica o en una pantalla digital que proporcionan los valores de Transmitancia y/o
Absorbancia.
A1. CUESTIONARIO PREVIO

1.- ¿Cómo se determina el espectro de absorción de una solución colorida?
2.- ¿Cómo se selecciona la longitud de onda apropiada en un espectro para la aplicación en la
determinación de concentraciones por espectrofotometría?
3.- ¿Qué establece la ley de Lambert-Beer-Bourger?
4.- ¿Qué es, para qué sirve y cómo se construye una curva patrón?

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A2. PROPUESTA DEL DISEÑO EXPERIMENTAL

Llevar a cabo una discusión grupal, identificar las variables involucradas y plantear la hipótesis
para proponer el diseño del experimento que pueda conducir a la resolución del problema
planteado (considerar que en el laboratorio se dispone del material indicado en el punto A3).
Anotar la propuesta en el Cuadro 1.
Cuadro 1. Variables, hipótesis y propuesta del diseño de experimento.
1.- Espectro de absorción
2.- Curva patrón
A3. REACTIVOS Y MATERIALES

I2 –KI (0.002M - 0.2M) 1 Espectrofotómetro
H2O destilada 2 celdas espectrofotométricas
4 vasos de precipitados de 50 ml
6 tubos de ensayo (15 mL)
1 pipeta graduada de 10 mL
1 pipeta graduada de 1 mL
1 propipeta (o jeringa con tubo latex)
Nota: Usar siempre las mismas celdas y el mismo espectrofotómetro

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A4. METODOLOGÍA EMPLEADA.

Describir detalladamente en el cuadro 2 la metodología empleada después de haber realizado
el experimento.
Cuadro 2. Metodología empleada.
Calibración del espectrofotómetro y barrido del espectro de absorción

1. Encender el espectrofotómetro
2. Esperar 15 minutos
3. Calibración: oprimir la tecla MODE, hasta que la luz roja se encuentre en A (absorbancia)
4. Seleccionar la longitud de onda girando la perilla
5. Introducir la celda con el blanco (con un volumen por arriba de la mitad; nunca llena) en la
porta-celda, oprime la tecla Λ (0A/100 %T) y esperar a que se ponga en ceros la
absorbancia
6. Tomar la lectura de absorbancia de la solución propuesta a una longitud de onda baja (λ
nm). utilizar como blanco agua destilada.
7. Repetir el procedimiento desde el punto 4 dando incrementos regulares a la longitud de
onda. Registrar los datos en la tabla 1
Curva patrón
8. Preparar soluciones de distinta concentración a partir de la solución de referencia
I2 –KI (0.0002M - 0.2M) (Serie tipo)
9. Seleccionar una longitud de onda adecuada para hacer las lecturas de Absorbancia para
las soluciones de la serie tipo. (Se sugiere 460 nm)
10. Introducir la celda con el blanco(agua destilada), con un volumen por arriba de la mitad;
nunca llena, en la porta-celda, oprimir la tecla Λ (0A/100 %T) y esperar a que se ponga en
ceros la absorbancia
11. Tomar la lectura de absorbancia de las soluciones propuestas para la serie tipo, a la
longitud de onda seleccionada (λ nm).
Registrar las lecturas de absorbancia y concentración de la serie tipo en la tabla 2

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A5. DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS

Temperatura: _____________
1. Registrar los datos experimentales del espectro de absorción de yodo (2*10-4M) en la
tabla 1.
Tabla 1. Absorbancia de la solución de I2 a diferentes longitudes de onda.
Evento λ (nm) Absorbancia Evento λ (nm) Absorbancia
1 10
2 11
3 12
4 13
5 14
6 15
7 16
8 17
9 18
2.- Registrar los datos experimentales de la curva patrón en la tabla 2.
3. Algoritmo de cálculo
Determinar la concentración del I2 en las mezclas de la tabla anterior
TABLA 2. Absorbancia a diferentes concentraciones molares de I2

Mezcla I2 (0.002 M)/(mL) H2O/(mL) I2 mol/L Abs
1 10 0
2 8 2
3 6 4
4 4 6
5 2 8

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A6. ELABORACIÓN DE GRÁFICOS

1) Trazar la gráfica Absorbancia vs. λ (Espectro de la solución de yodo)
2) Trazar la gráfica Absorbancia vs. Concentración (Curva patrón)
A7. ANÁLISIS DE RESULTADOS.

1.- ¿A qué longitud de onda se localiza el máximo de absorbancia de la solución de yodo?
2*10-4 M?
2.- ¿Qué longitud de onda empleaste para construir la curva patrón y por qué?
3.- ¿Qué representa la pendiente de la gráfica de la curva patrón?
4. ¿Qué relación presenta la absorbancia con la concentración en la curva patrón?

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A8. CONCLUSIONES.
A9. MANEJO DE RESIDUOS
A10. BIBLIOGRAFÍA
Conceptos de física, Hewitt P. G., Limusa, 1997
Fisicoquímica, Castellan G. W., Addison Wesley Longman, 2ª Edición, 1987.
Fisicoquímica, Keith J. Laidler, John H. Meiser, CECSA, 1a. Edición, 1997.
Fisicoquímica, Ira N. Levine, Mc Graw Hill, 4ª edición, 1996.

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II. OBJETIVOS PARTICULARES

U.V lejano → U.V cercano → Visible

0.6 – 190 nm 190 – 380 nm 380 – 780 nm

La absorción de la radiación ultravioleta o visible por moléculas orgánicas e inorgánicas,

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Los métodos espectroscópicos se basan en la capacidad de las sustancias de absorber

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El aparato detecta la cantidad de luz transmitida o absorbida a través de la solución en

La transmitancia de la muestra se define como la relación de la radiación transmitida y la

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(≤ 0.01M), cuando la especie absorbente no participa en un equilibrio que dependa de su

Fuente de luz → selector de longitud de onda (monocromador) → Celda → detector →

A1. CUESTIONARIO PREVIO

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A2. PROPUESTA DEL DISEÑO EXPERIMENTAL

Cuadro 1. Variables, hipótesis y propuesta del diseño de experimento.

1.- Espectro de absorción

2.- Curva patrón

A3. REACTIVOS Y MATERIALES

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A4. METODOLOGÍA EMPLEADA.

Cuadro 2. Metodología empleada.

Calibración del espectrofotómetro y barrido del espectro de absorción

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A5. DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS

2.- Registrar los datos experimentales de la curva patrón en la tabla 2.

TABLA 2. Absorbancia a diferentes concentraciones molares de I2

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A6. ELABORACIÓN DE GRÁFICOS

A7. ANÁLISIS DE RESULTADOS.

3.- ¿Qué representa la pendiente de la gráfica de la curva patrón?

4. ¿Qué relación presenta la absorbancia con la concentración en la curva patrón?

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A9. MANEJO DE RESIDUOS

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