UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA

LABORATORIO DE HEMATOLOGIA

PRCTICA 8
FRAGILIDAD OSMTICA DE LOS ERITROCITOS

FUNDAMENTO:
Examen de la fragilidad osmtica.
Es un examen de sangre para detectar si hay mayor probabilidad de que los glbulos
rojos se descompongan
Razones por las que se realiza el examen
Este examen se realiza para detectar la esferocitosis hereditaria y la talasemia. La
esferocitosis hereditaria hace que los glbulos rojos sean ms frgiles de lo normal.
Con la talasemia, los glbulos rojos son ms frgiles de lo normal, pero un gran nmero
de ellos es menos frgil de lo habitual.
Fragilidad de los eritrocitos se refiere a la propensin de los eritrocitos a hemolisis
bajo estrs. Puede ser pensado como el grado o porcentaje de hemlisis que se
produce cuando una muestra de las clulas rojas de la sangre se someten a estrs.
Dependiendo de la aplicacin, as como el tipo de fragilidad implicado, la cantidad de
tensin aplicada y/o el significado de la hemlisis resultante pueden variar.
Cuando mltiples niveles de estrs se aplican a una determinada poblacin/muestra de
clulas, un perfil de fragilidad se puede obtener mediante la medicin de la medida
relativa o absoluta de hemlisis existente en cada uno de dichos niveles, adems de
encontrar uno o ms ndices de nmeros individuales asociados con particulares
respectivos niveles de hemlisis y/o el estrs correspondiente.
Fragilidad pruebas puede ser til para evaluar la capacidad de las clulas para resistir
el estrs sostenida o repetida. Por otra parte, se puede utilizar para evaluar la forma
en s fragilidad vara bajo diferentes o cambiantes condiciones ambientales o de
estrs, durante o antes de la induccin de la hemlisis. Bajo fragilidad a menudo se
denomina "estabilidad", aunque tcnicamente la estabilidad se refiere a resistencia de
las clulas tanto lisis inducida por el estrs y espontnea auto-lisis.
GENERALIDADES:
Fragilidad osmtica eritrocitaria
Fragilidad osmtica se refiere al grado o porcentaje de hemlisis que se produce
cuando una muestra de las clulas rojas de la sangre se somete a estrs osmtico por
ser colocado en una solucin hipotnica. Fragilidad osmtica se ve afectada por varios
factores, incluyendo la composicin de la membrana y la integridad, as como el tamao
de las clulas o la superficie de la zona a relaciones de volumen.
La prueba de fragilidad osmtica es comn en hematologa, y a menudo se lleva a cabo
para ayudar con el diagnstico de enfermedades asociadas con anormalidades de la
membrana de rbc. Algunas enfermedades relacionadas con el aumento de de son la
esferocitosis hereditaria y hypernatermia, mientras que algunos vinculados a la
disminucin de de son la enfermedad crnica del hgado, anemia por deficiencia de
hierro, la talasemia, la hiponatremia, la policitemia vera y la anemia de clulas
falciformes despus de la esplenectoma.
Nuevos enfoques para probar de estn en desarrollo para facilitar mejor su uso en el
diagnstico de enfermedades y la deteccin, tal como mediante la utilizacin de
dispositivos de microfluidos, junto con el recuento de clulas.
Valores normales
Un examen negativo es normal.
Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes
laboratorios. Algunos laboratorios utilizan diferentes mediciones o analizan muestras
diferentes. Hable con el mdico acerca del significado de los resultados especficos
de su examen.
Significado de los resultados anormales
Talasemia
Esferocitosis hereditaria



PREGUNTAS GUA:
1. Qu es la fragilidad osmtica de los eritrocitos?
La fragilidad osmtica eritrocitaria es a menudo realizada en los estudios de posibles
casos de esferocitosis hereditaria. Esta prueba no ayuda a diferenciar los esferocitos
de la esferocitosis hereditaria de la anemia hemoltica autoinmune adquirida; este
test solo indica que una proporcin de clulas rojas tiene una disminucin de la
relacin de la superficie y el volmen y son ms susceptibles a la lsis en las soluciones
hipo-osmticas.
2. Cules pueden ser las principales fuentes de error en esta determinacin?
En pacientes con hemlisis aguda, un test de fragilidad osmtica de las clulas rojas
normales no excluye una anormalidad en la fragilidad osmtica debido a que las clulas
pueden ser hemolisadas y no estar presentes. Este test se recomienda durante un
estado de homeostsis prologada con hematocrito estable.
3. Por qu en la esferocitosis hereditaria hay un aumento de la fragilidad
osmtica?
Los esferocitos son raros en la sangre normal. Cuando se sospecha una esferocitsis
sobre la base de una hemoglobina corpuscular media elevadao sobre el anlisis de un
extendido de sangre perifrica, la fragilidad osmtica se utiliza para la presencia de
esferocitos. Los pacientes con esferocitosis hereditaria quienes experimentan
elevaciones significativas en los reticulocitos no caen dentro del rango normal. Las
clulas con aumento en la relacin volmen/superficie, tal como ocurre en las
talasemias y en la deficiencia de hierro, puede mostrar disminucin de la fragilidad
osmtica.
4. Explica que significa que los eritrocitos tengan una fragilidad osmtica
disminuida
La forma y el volumen de los eritrocitos cambian cuando vara la cantidad de
agua contenida en su interior, pudiendo tomar una forma estrellada o irregular al
ocurrir prdida de volumen (fenmeno de crenacin) o bien aumentar su volumen hasta
adquirir la forma de una esfera. Cuando la clula no puede resistir la carga de agua
que recibe, la membrana se rompe (fenmeno de hemlisis) y se libera la hemoglobina
la cual puede ser cuantificada por mtodos espectrofotomtricos.
DIAGRAMA DE TRABAJO:

Tubo No. mL de solucin
salina al 1%
tamponada
mL de agua
destilada
Concentracin
de la solucin
(%)
1 4.5 0.5 4.5
2 3.8 1.2 3.8
3 3.6 1.4 3.6
4 3.4 1.6 3.4
5 3.2 1.8 3.2
6 3.0 2.0 3.0
7 2.8 2.2 2.8
8 2.6 2.4 2.6
9 2.4 2.6 2.4
10 2.2 2.8 2.2
11 2.0 3.0 2.0
12 1.8 3.2 1.8
13 1.6 3.4 1.6
14 1.4 3.6 1.4
15 1.2 3.8 1.2
16 1.0 4.0 1.0
17 0.8 4.2 0.8
18 0.0 5.0 0.0

Extraer 2ml de
sangre en un
tubo con
aticoagulante
Colocar 18 tubos
de ensayo y
colocarlos segn
la tabla
especificada
Mezclar y
agregar 50
microlitros de
sangre
Reposar a
temperatura
ambiente
durante 30
minutos
Transcurrido el
tiempo, centrifugar
a 2000 rpm por 5
minutos.
Proceder a leer
absorbancias de cada
tubo en el
espectrofotmetro a
540 nm
Para leer se debe
extraer con
cuidado el
sobrenadante
Determinar el
porcentaje de
hemlisis
OBSERVACIONES:





















Imagen 1. Tubos con solucin
salina al 1% tamponada, agua
destilada y muestra de sangre.
Imagen 2. Tubo 18 con
hemlisis completa.
Imagen 3. Tubos despus de la
centrifugacin.
RESULTADOS:
Despus de leer los resultados se deben calcular el % de hemlisis de cada tubo con la
siguiente frmula:




D.O. del tubo 18: 2.339nm
Tubo No. Densidad ptica % de hemlisis
1 0.106 5
2 0.129 6
3 0.134 7
4 0.149 7
5 0.418 20
6 0.241 10
7 0.181 9
8 0.516 25
9 1.141 56
10 1.598 64
11 1.519 78
12 2.026 86
13 2.148 92
14 2.210 94
15 2.227 95
16 2.280 97
17 2.290 98
18 2.339 100



CONCLUSION:
A menor concentracin de NaCl se incrementa el porcentaje de hemolisis, debido a
que ingresa agua al eritrocito liberando hemoglobina. La variacin del porcentaje de
hemolisis influye directamente con la lectura de las absorbancias. En un ambiente
salino se produce mayor cantidad de hemolisis comparado con un ambiente normal. La
temperatura del hielo obtiene la menor hemolisis debido a que conserva a los
eritrocitos sin ningn cambio y por consiguiente no hay liberacin de hemoglobina.
BIBLIOGRAFIA:
- Hematologa: fundamentos y aplicaciones clnicas Bernadette F. Rodak Ed.
Mdica Panamericana, 2005 - 838 pginas.
- Source: Conteo de glbulos rojos | University of Maryland Medical Center
http://umm.edu/health/medical/spanishency/articles/conteo-de-globulos-
rojos#ixzz3Dslyqpwe University of Maryland Medical Center
- http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003489.html
0
20
40
60
80
100
120
4.5 3.8 3.6 3.4 3.2 3 2.8 2.6 2.4 2.2 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 0
P
o
r
c
e
n
t
a
j
e

d
e

h
e
m

l
i
s
i
s

Concentracin de la solucin
Fragilidad osmtica de los eritrocitos