Scribd Logo
Cargar

¡Te damos la bienvenida a Scribd!

  • 852 vistas

    Método Patrón Externo

    Cargado por

    Pedro M VS R
    Este documento describe el método del patrón externo para cuantificar compuestos mediante cromatografía. Primero, se preparan patrones de concentraciones crecientes del analito y se obtienen sus cromatogramas. Luego, con los datos de área de los picos de los patrones y la muestra, se construye una recta de calibrado cuya ecuación permite calcular la concentración del analito en la muestra.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    Método Patrón Externo

    Cargado por

    Pedro M VS R
    852 vistas6 páginas
    Este documento describe el método del patrón externo para cuantificar compuestos mediante cromatografía. Primero, se preparan patrones de concentraciones crecientes del analito y se obtienen sus cromatogramas. Luego, con los datos de área de los picos de los patrones y la muestra, se construye una recta de calibrado cuya ecuación permite calcular la concentración del analito en la muestra.

    Descripción original:

    quimica

    Derechos de autor

    © © All Rights Reserved

    Formatos disponibles

    PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    ¿Le pareció útil este documento?

    ¿Este contenido es inapropiado?

    Este documento describe el método del patrón externo para cuantificar compuestos mediante cromatografía. Primero, se preparan patrones de concentraciones crecientes del analito y se obtienen sus cromatogramas. Luego, con los datos de área de los picos de los patrones y la muestra, se construye una recta de calibrado cuya ecuación permite calcular la concentración del analito en la muestra.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    852 vistas6 páginas

    Método Patrón Externo

    Cargado por

    Pedro M VS R
    Este documento describe el método del patrón externo para cuantificar compuestos mediante cromatografía. Primero, se preparan patrones de concentraciones crecientes del analito y se obtienen sus cromatogramas. Luego, con los datos de área de los picos de los patrones y la muestra, se construye una recta de calibrado cuya ecuación permite calcular la concentración del analito en la muestra.

    Copyright:

    © All Rights Reserved
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    Está en la página 1de 6

    Cuantificacin de compuestos por

    cromatografa: Mtodo del Patrn


    Externo

    Apellidos, nombre

    Fernndez Segovia, Isabel (isferse1@tal.upv.es)


    Garca Martnez, Eva (evgarmar@tal.upv.es)

    Departamento

    Departamento de Tecnologa de Alimentos

    Centro

    ETSIAMN - Universitat Politcnica de Valncia

    1 Resumen de las ideas clave


    Dos de las tcnicas con ms potencial en el campo del anlisis de alimentos son la
    cromatografa de gases y la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC). En
    este artculo se va a presentar una de las metodologas empleadas
    em
    para
    cuantificar compuestos por cromatografa en columna. La tcnica que se va a
    desarrollar es el mtodo del patrn externo. La cuantificacin a travs de este
    procedimiento es aplicable tanto a cromatografa de gases como a HPLC.

    2 Introduccin
    Cuando se lleva a cabo un anlisis en un cromatgrafo lquido o de gases, el
    detector responde a la presencia de los distintos analitos que salen separados de
    la columna. La representacin de la seal del detector frente al tiempo da una
    serie de picos que corresponden a cada uno de los analitos. Al grfico resultante
    se le conoce como cromatograma y se emplea para llevar a cabo el anlisis
    cualitativo y el cuantitativo. En la Figura
    igura 1 se puede observar a modo de ejemplo
    un cromatograma de una muestra, donde
    donde aparece representado en el eje de
    abcisas el tiempo de retencin en minutos y en el eje de ordenadas la seal del
    detector de UV-Vis.

    muestra obtenido por HPLC.


    Figura 1. Cromatograma de una muestra,

    Los equipos cromatogrficos que se emplean en la actualidad disponen de


    integradores electrnicos, los cuales integran los picos de los cromatogramas,
    pudindose obtener la altura y el rea de cada pico. Ambos parmetros se
    pueden utilizar para cuantificar los distintos compuestos, siendo el rea del pico el
    ms utilizado y el que se va a emplear en este artculo. En la Tabla 1 se muestran a
    modo de ejemplo los datos de cada uno de los picos del cromatograma de la
    Figura 1.

    N de
    pico

    Tiempo de retencin
    (tR) (min)

    rea
    (mAUmin)

    7,053

    0,04217

    14,892

    0,01623

    21,452

    0,01053

    Tabla 1. Tiempo de retencin y rea de los picos del cromatograma de la Figura 1.

    3 Objetivos
    Los objetivos de este artculo son que el alumno sea capaz de:
    

    Disear el procedimiento a seguir para cuantificar compuestos por


    cromatografa en columna mediante el mtodo del patrn externo.

    Cuantificar un compuesto presente en una muestra a partir de los


    cromatogramas de los patrones y de la muestra.

    4 Desarrollo
    El campo de aplicacin de la cromatografa de gases y HPLC ha experimentado
    un aumento vertiginoso en las ltimas dcadas, debido fundamentalmente al gran
    desarrollo en el campo de la electrnica. Por ello, en el momento actual son dos
    de las tcnicas ms potentes en el anlisis de todo tipo de compuestos en
    alimentos (nutrientes, compuestos bioactivos, aditivos, contaminantes orgnicos,
    residuos de medicamentos, etc.). Por todo ello, es necesario saber disear
    procedimientos adecuados para la cuantificacin de compuestos analizados por
    estas tcnicas.

    4.1 Preparacin de
    cromatogramas

    patrones

    obtencin

    de

    los

    Cuando se quiere cuantificar un compuesto presente en una muestra por el


    mtodo del patrn externo, los pasos a seguir son los siguientes:
    1. Preparar una serie de disoluciones de concentraciones crecientes, del
    patrn correspondiente al compuesto a cuantificar. El intervalo de
    concentraciones ha de ser similar a la concentracin del analito en la
    muestra problema.
    2. Inyectar el mismo volumen de cada una de las disoluciones patrn en el
    cromatgrafo, as como del extracto de la muestra. De esta forma
    tendremos los distintos cromatogramas de los patrones (un cromatograma
    para cada disolucin patrn) y el cromatograma de la muestra.

    Ejemplo 1: Si se quiere determinar un analito cuya concentracin en el extracto de


    la muestra, se espera que est comprendida en un margen de 120 a 180 mg/L, se
    podran preparar e inyectar en el cromatgrafo 5 disoluciones patrn con las
    siguientes concentraciones:

    Patrn 1: 100 mg/L


    Patrn 2: 125 mg/L
    Patrn 3: 150 mg/L
    Patrn 4: 175 mg/L
    Patrn 5: 200 mg/L

    4.2 Interpretacin del cromatograma y cuantificacin del


    analito
    En el cromatograma de cada disolucin patrn y en el cromatograma de la
    muestra saldr el pico correspondiente al analito. El tiempo de retencin del pico
    del analito ser el mismo en todos los cromatogramas; sin embargo, el rea ser
    diferente dependiendo de la concentracin de analito.
    Cmo se puede cuantificar el analito en la muestra con los datos del
    cromatograma?

    Lo primero que habr que hacer es una tabla con la concentracin de


    analito y el rea correspondiente a cada concentracin.
    Con estos datos se construir la recta de calibrado, mediante la
    representacin del rea del pico frente a la concentracin del compuesto.
    Con la ecuacin de la recta podemos calcular la concentracin de analito
    sustituyendo y por el rea del pico del analito en el cromatograma de la
    muestra y despejando x que corresponde a la concentracin de analito.
    Vemoslo con un ejemplo.

    Continuacin Ejemplo 1: Siguiendo con el ejemplo anterior, supongamos que las


    reas obtenidas han sido las que se muestran en la Tabla 2.

    Concentracin
    (mg/L)

    rea

    Patrn 1

    100

    245,8

    Patrn 2

    125

    325,6

    Patrn 3

    150

    382,5

    Patrn 4

    175

    450,3

    Patrn 5

    200

    501,2

    Muestra

    398,7

    Tabla 2. reas de los picos del analito obtenidas en los cromatogramas de los patrones
    y en el de la muestra.
    Representando las reas obtenidas frente a la concentracin de los patrones y
    aadiendo el punto (0,0) se obtiene la recta de calibrado que se muestra en la
    Figura 2.

    600
    y = 2,5409x - 0,0458
    R = 0,9987

    500

    rea

    400
    300
    200
    100
    0
    0

    50

    100

    150

    200

    250

    Concentracin (mg/L)
    Figura 2. Recta de calibrado obtenida con los datos de la Tabla 2.
    Para calcular la concentracin en el extracto de la muestra, en la ecuacin de la
    recta de calibrado se sustituye y por el rea obtenida en el cromatograma de la
    muestra (398,7) y se despeja x que es la concentracin del analito en el extracto
    de la muestra:
    x = (398,7+0,0458)/2,5409 = 156,9 mg/L
    Concentracin de analito en el extracto de la muestra = 156,9 mg/L

    5 Cierre
    A lo largo de este objeto de aprendizaje hemos visto cmo preparar una serie de
    patrones para cuantificar un compuesto por cromatografa de gases o por HPLC,
    utilizando el mtodo del patrn externo. Asimismo, se ha detallado qu parmetro
    del cromatograma se utiliza para cuantificar y cules son los pasos a seguir en la
    determinacin de la concentracin de analito en una muestra.

    6 Bibliografa
    [1] Nielsen, S.S: Food Analysis, Ed. Kluwer Academic / Plenum Publishers, New York,
    2003, pg. 437460.

    [2] Skoog, D.A.; Leary, J.J: Anlisis Instrumental, Ed. McGraw Hill / Interamericana
    de Espaa, Madrid, 1994, pg. 674703.

    [3] Valcrcel, M.; Gmez, A: Tcnicas Analticas de Separacin, Ed. Revert,


    Barcelona, 1994, pg. 655676.

    También podría gustarte