LIMITACIONES DE LA PRUEBA DEL ADN

Las tcnicas de identificacin gentica como cualquier otra actividad humana

No estn exentas de limitaciones o errores cuya incidencia habr
Que ponderar de forma particular en cada proceso.
Los estudios de validacin realizados sobre las mismas muestras
Forenses entre diversos grupos de estandarizacin de gentica forense
(FEP-ISEPG,GEDNAP, ENFSI,) han desvelado que se trata de una tecnologia
Que ofrece una alta reproducibilidad y fiabilidad, pero tambin
Se han puesto de manifiesto la existencia de determinadas excepciones a
Las leyes genticas (mutacion, inestabilidad somtica) que es necesario tener en
Cuenta para una correcta interpretacin de algunos casos
Se detecta adems en este tipo de ejercicios inter laboratorio un bajo
ndice de resultados discrepantes (errores) debido a cuestiones metodolgicas, a
Errores de custodia y a errores de transcripcin de distinta
Influencia en la interpretacin final del supuesto practico y cuya influencia
En la prericia es difcil de diagnosticar.
Una de las limitaciones de los anlisis de ADN es la contaminacin biolgica
humana
La preservacin del indicio biolgico de la contaminacin de ADN
Exgeno desde su recogida y durante el analiss en el laboratorio

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Autor Antonio Alonso Alonso

obligados, adems de desarrollar medidas para evitar al mximo laposibilidad

de una contaminacin, a analizar de forma sistemtica unaserie de controles
negativos para monitorizar la posible influencia de lacontaminacin durante
el anlisis de cada muestra pericial. Determinados indicios biolgicos
invisibles al ojo humano en los queni siquiera es posible determinar su
naturaleza biolgica (tipo de fluidoo tipo de clulas) hoy son susceptibles de

ser analizadas mediante ADN.Hay que tener en cuenta, por tanto, .

CONCEPTOS BSICOS DE ADN FORENSE Antonio Alonso Alonso Instituto
Nacional de Toxicologa y Ciencias Forenses. Servicio de Biologa. Madrid.
SUMARIO: 1. INTRODUCCIN.2. ALGUNOS PRINCIPIOS BSICOS EN IDENTIFICACIN GENTICA.3. LOS GENOMAS HUMANOS Y LOS TIPOS DE
HERENCIA: 3.1 El ADN nuclear: la herencia compartida de los padres. 3.2 El
ADN mitoconsrial: la herencia materna. 3.3 El cromosoma y: la herencia
paterna de los varones.4. LA OBTENCIN DE LAS MUESTRAS DE ADN.5. EL
PODER IDENTIFICATIVO DE LOS ADNS FORENSES.6. EL ADN NO CODIFICANTE
Y LA INTIMIDAD PERSONAL.7. EL ANLISIS GENTICO COM- PARATIVO EN
BASES DE DATOS.8. LIMITACIONES DE LA PRUEBA DEL ADN

.1. INTRODUCCIN La presente ponencia que inaugura este curso (Nuevas

Tcnicas deInvestigacin del Delito: Intervenciones Corporales y ADN. CEJ
21-23/06/2004) tiene por objeto presentar algunos de los principios bsicos
enlos que se asientan las tcnicas de identificacin gentica humana
conespecial referencia a la aplicacin del ADN en la investigacin del
delito.Se pretende abordar de forma divulgativa algunos principios biolgicos
ygenticos que nos permitan entender determinados aspectos prcticos dela
utilizacin del ADN en las distintas fases del proceso penal, incluyen-do: la
toma de muestras de la escena o del cuerpo de la victima, la tomade
muestras de referencia de los imputados, la realizacin de las distin-tas
pruebas de ADN y la utilizacin de la informacin gentica obtenidadel
anlisis del ADN, incluido el uso de bases de datos de ADN para
lacomparacin de distintas causas penales. Todos estos aspectos del proceso
sern tratados de forma ms deteni-da en sucesivas ponencias de este curso.
En esta ponencia introductoriaintentaremos, pues, ofrecer al lector algunas
respuestas sencillas a lossiguientes interrogantes generales:

De donde puede obtenerse el ADN?

,En que consiste un anlisis de ADN?,
Por qu el anlisis de ADN ha deser comparativo?,
Cuntos tipos de ADN se utilizan en el campo forenPAG 1860.

CONCEPTOS BSICOS DE ADN FORENSE

, Qu es el ADN no codificante?,

Cul es el poder Identificativo delas distintas pruebas de ADN?

Cules pueden ser los usos inteligentesdel ADN en la investigacin criminal? o

Cules son las limitaciones deluso del ADN en el proceso penal?

.2. ALGUNOS PRINCIPIOS BSICOS DE LA IDENTIFICACIN GENTICA El

genoma humano es un termino que se utiliza para describir el contenido total de ADN
(siglas del cido cido, que es la molcula portadora de la informacin gentica) en cada
clula humana y contiene el conjunto de instrucciones (cdigo gentico) para la sntesis
de las pro-tenas, las cuales son, en ltima instancia, las responsables de la fisiologa y
morfologa de las clulas que, a su vez, son los componentes bsicos de todos nuestros
tejidos y rganos. Todas y cada una de los trillones de clulas que componen nuestros
tejidos y nuestros rganos (excepto las clulas sexuales: el espermatozoides y el vulo,
que han reducido a la mitad el contenido del ADN y determinadas clulas como los
glbulos rojos de la sangre que han perdido su ncleo celular) son portadoras del mismo
conjunto de instrucciones genticas (de un mismo genoma) . Por lo tanto,
independientemente del rgano o tejido del que extraigamos el ADN de un mismo
individuo, el perfil gentico que obtengamos ser el mismo. Este es el principio bsico de
Universalidad del genoma en el que se basa el anlisis gentico comparativo que se lleva
a cabo entre la muestra dubitada (en general un vestigio biolgico encontrado en la
escena del delito o en el cuerpo de la victima: sangre, semen, saliva pelos, tejidos, restos
epidrmicos,...) y una muestra de referencia indubitada (en general sangre o saliva)
extrada de la persona de la que se sospecha pueda haber dejado el indicio biolgico
dubitado. Independientemente del tejido u rgano de procedencia el perfil gentico que se
obtenga ser el mismo si vestigio y muestra de referencia provienen de la misma persona.
Otra caracterstica fundamental que hace del genoma humano una herramienta aplicable
al campo de la identificacin humana es su Diversidad. Es decir, el cdigo gentico (que
es idntico en todas las clulas de un mismo individuo) presenta variaciones en los
distintos individuos de la poblacin. Ms adelante analizaremos de forma mas detenida la
naturaleza y el significado de esta diversidad gentica, quedmonos ahora simplemente
con la idea de que este principio de diversidad nos ofrece la posibilidad de obtener un
cdigo gentico identificador que tericamente permite distinguir de forma precisa a cada
individuo de

PAG 1861

3. ANTONIO ALONSO ALONSO una poblacin (con la excepcin de los gemelos

idnticos o univitelinos). Tambin veremos mas adelante que la precisin o la fiabilidad

de dicha identificacin vendr limitada fundamentalmente por dos factores :el tipo de
anlisis de ADN comparativo que pueda realizarse y las posibles relaciones de parentesco
gentico entre los individuos que hay que diferenciar en el anlisis gentico. Una tercera
caracterstica del genoma es su Estabilidad en muestras forenses. La molcula de ADN
presenta en condiciones normales una gran estabilidad tanto en fluidos biolgicos que
forman manchas secas(sangre, semen, saliva,...) sobre distintos soportes como a partir de
diversos tejidos humanos incluso mucho despus de la muerte. Es posible pues, obtener y
descifrar la secuencia de parte del material gentico a partir de un gran nmero de
vestigios biolgicos de inters forense para obtener su cdigo gentico identificador y
compararlo con el obtenido a partir de una muestra de referencia de la persona de la que
se sospecha proviene el vestigio.3. LOS GENOMAS HUMANOS Y LOS TIPOS DE
HERENCIA Realmente la informacin gentica de las clulas humanas se organiza en
dos genomas: El gran genoma nuclear de herencia compartida por ambos progenitores y
el pequeo genoma mitocondrial que transmiten exclusivamente las madres en sus
vulos.3.1 El ADN nuclear : La herencia compartida de los padres El genoma nuclear se
localiza como su propio nombre indica en el ncleo celular y representa el 99 por 100 del
contenido de ADN celular total. Se encuentra asociado de forma muy especfica a ciertas
protenas formando unas estructuras filamentosas denominadas cromosomas que pueden
ser visualizadas al microscopio en el ncleo de las clulas endivisin. Un zigoto humano
tiene 23 pares de cromosomas (46 cromo-somas), un miembro de cada par proviene de la
madre, mientras que el otro proviene del padre. . Por el contrario, las clulas
reproductoras(vulo y espermatozoide) durante su formacin reciben al azar sola-mente
un miembro de cada par, es decir solo tienen 23 cromosomas. El nmero de cromosomas
volver a ser de 46 tras la fertilizacin del vulo por el espermatozoide y de este modo se
mantendr constante el nmero de cromosomas a travs de las generaciones.

PAG 1862

4. CONCEPTOS BSICOS DE ADN FORENSE Un cromosoma es bsicamente una

fina hebra de ADN rodeada por otros componentes, fundamentalmente protenas. La
molcula de ADN,portadora de la informacin gentica, es una larga cadena doble compuesta de una unidad qumica que se repite a lo largo de la cadena: elnucletido. El
componente fundamental de un nucletido son las bases nitrogenadas. Existen cuatro
tipos de bases A, G, T y C (A: Adenina, G:Guanina, T: Timina y C: Citosina) cuya
ordenacin a lo largo de la cadena del ADN ser lo que determine la informacin
gentica. La cantidad total de ADN de una clula es alrededor de 3000 millones de
nucletidos. Un gen es un segmento de ADN (cuyo tamao puede variar entre 3000100.000 nucletidos) que contiene la informacin para la sntesis de una protena. Se
estima que el numero de genes humanos es de 30.000, siendo desconocida en la
actualidad la funcin de ms del 50 por 100 de estos genes. Sin embargo, estos 30.000
genes solo representan una pequesima fraccin (2-3 por 100) del ADN total de una
clula. El resto de ADN, que representa la fraccin mayoritaria del genoma nuclear
humano, esta compuesto en gran parte de secuencias de ADN repetitivo sin una funcin
clara y que se suele denominar ADN no codificante en el sentido de que no codifica

informacin para la sntesis de protenas. Es precisamente una fraccin de este ADN no

codificante la que mas inters tiene en gentica forense, ya que se trata de regiones de
ADN con una gran variabilidad de tamao entre los individuos dela poblacin. Las
regiones de ADN no codificante de mayor inters en gentica forense son las
denominadas regiones de ADN microsatlite.Se trata de pequeas regiones ADN
repetitivo en tandem (de 100-500nucletidos) compuestas por una secuencia (de 4-5
bases) que se repite en tandem n veces. Es precisamente el nmero de veces que se repite
esta unidad de secuencia lo que presenta una gran variabilidad entre los individuos de una
poblacin. De aqu que a estas regiones se las denomine STRs (del ingles: Short
Tandem Repeats: pequeas repeticionesen tandem). Hoy en da, la mayora de los
anlisis forenses de ADN sebasan en el estudio simultaneo de un conjunto de 10 a 15 de
estas regio-nes cortas distribuidas en los distintos cromosomas humanos. Un
perfilgentico no es mas que el patrn de estos fragmentos cortos de ADNordenados
por su tamao. Dicho patrn es fcilmente convertible en unsencillo cdigo numrico
muy fcil de almacenar, manejar y comparar,ofreciendo un alto poder de discriminacin
gentica tanto en la identi-ficacin de vestigios biolgicos de inters en la investigacin
criminalcomo en la investigacin biolgica de la paternidad ya que estos
perfilesgenticos tienen una procedencia al 50 por 100 paterna y materna (verms
adelante).

PAG 1863

5. ANTONIO ALONSO ALONSO3.2 El ADN mitocondrial: La herencia materna

Adems del ADN nuclear, las clulas humanas contienen un pequeogenoma circular (de
16.569 nucletidos) que se encuentra dentro de lasmitocondrias (los orgnulos celulares
del citoplasma celular cuya funcinprincipal es la produccin de energa) y que se hereda
exclusivamentepor la va materna ya que las mitocondrias son aportadas por el citoplasma del vulo y no por el espermatozoide. El ADN mitocondrial tambin presenta
variabilidad gentica (en lasecuencia del ADN) y, por lo tanto, es una herramienta muy
til en laidentificacin gentica humana. Se trata, adems, de un genoma cuyoestudio
ofrece una ventaja importante con respecto al estudio del ADNnuclear : Su gran
sensibilidad. Es un genoma que se presenta en un grannmero de copias (hay 100-10000
copias de ADN mitocondrial por cadacopia de genoma nuclear, segn el tipo celular) y,
por tanto, ser deaplicacin en muchos casos en los que no sea posible la obtencin
deADN nuclear (p.ej: tallos de pelos, restos seos antiguos,...). Sin embargola
variabilidad gentica del ADN mitocondrial es menor que la observadamediante el
anlisis de las secuencias de ADN repetitivo del gran genomanuclear. Como
consecuencia de su menor variabilidad, el perfil genticoque se obtiene mediante el
estudio del ADN mitocondrial presenta unpoder discriminacin en general mucho mas
limitado (ver mas adelante).No olvidemos que si el ADN mitocondrial se hereda de forma
inalteradade madres a hijos todos los miembros de una familia que compartan lalnea
materna tendrn el mismo perfil de ADN mitocondrial. Es decir,que este tipo de ADN
mas que perfiles individuales permite identificarlinajes maternos.3.3 El cromosoma Y :
La herencia paterna de los varones Hay una parte del genoma nuclear que es especifico

del varn, setrata del cromosoma Y. En la especie humana el sexo esta determinadopor
los cromosomas sexuales X e Y de tal forma que el genoma de lasmujeres esta contenido
en 22 parejas de autosomas y dos cromosomas X(46, XX), y el de los varones es de 22
parejas de autosomas mas un solocromosoma X y un cromosoma Y (46, XY). El
cromosoma Y se transmiteexclusivamente por va paterna a la descendencia de varones
de maneramas o menos inalterada a lo largo de las generaciones. En este cromoso-ma
existen tambin regiones cortas de ADN repetitivo variables en tama-o, cuyo estudio
permite en este caso trazar linajes paternos separadosincluso varias generaciones.
Adems el cromosoma Y es una herramienta

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6. CONCEPTOS BSICOS DE ADN FORENSEque permite obtener un patrn gentico

especfico del varn, lo cualtiene un gran inters prctico en la identificacin gentica de
restos desemen y otros fluidos biolgicos del supuesto agresor en los casos deagresiones
sexuales a mujeres. El anlisis de regiones cortas de ADN repetitivo del cromosoma Yque
hoy se realiza de rutina ofrece tambin un poder de discriminacinms bajo que el
normalmente obtenido mediante el estudio de las regio-nes STR autosmicas. No
olvidemos que, en ultimo termino, el anlisisgentico del cromosoma Y no permite
diferenciar genticamente a losmiembros de una familia que compartan la misma lnea
paterna.4. LA OBTENCIN DE LAS MUESTRAS DE ADN La obtencin de ADN en el
mbito penal suele tener al menos dosescenarios y dos momentos distintos dentro del
proceso. Por un lado setrata de obtener el ADN dubitado (la prueba) de la escena del
delito odel cuerpo de la victima y, por otro, la obtencin del ADN de referenciade las
personas implicadas en el proceso con las que realizar el anlisisgentico comparativo .
Dada la sensibilidad de las tcnicas actuales de anlisis gentico enmuestras forenses
(cuyo limite de sensibilidad esta cercano a detectar elcontenido de ADN de unas docenas
de clulas) el tipo y el nmero deposibles muestras e indicios biolgicos susceptibles de
ser identificadospor ADN (sangre, semen, saliva, pelos, tejidos, restos celulares en objetos tocados, ..) se ha ido incrementando en los ltimos aos. Cada vezse hace mas
necesario el desarrollo de protocolos de investigacin queaseguren el rpido aislamiento
de la escena (evitando posibles conta-minaciones o transferencia de indicios) para una
adecuada recogida ydocumentacin de los indicios biolgicos por personal especializado
queaseguren la correcta conservacin y la custodia de las muestras desde surecogida. La
posibilidad de poder demostrar de forma documentada lacadena de custodia de las
muestras es una garanta ms para la admisi-bilidad de la prueba del ADN durante el acto
de la vista oral. La facilidad con que en la actualidad puede obtenerse una
muestrabiolgica de referencia para acceder al perfil gentico de un individuo(sin
necesidad de violentar su integridad fsica con una extraccin san-gunea mediante, por
ejemplo, una toma de saliva o, incluso sin suparticipacin directa, mediante la recogida
de indicios abandonadospor el imputado o mediante al anlisis de sus familiares) ha
modificadotambin el tipo de intervencin corporal necesaria (a veces innecesaria)

PAG 1865

7. ANTONIO ALONSO ALONSOpara la obtencin de las muestras de referencia de los

imputados. Eneste punto es necesario resaltar los ltimos cambios legislativos,
llevadosa cabo en nuestro pas, con respecto a la obligatoriedad a someterse ala
toma de muestras, que sin duda abren las puertas a la toma contra el
consentimiento de los sospechosos si existen acreditadas razones segn resolucin
motivada por un juez de acuerdo a los principios de propor-cionalidad. La
jurisprudencia en este punto nos ofrecer una respuestaacerca de la posibilidad de
interpretar esta reforma legal del artculo 363de la Ley de Enjuiciamiento Criminal
como una puerta abierta en determinadas situaciones a la toma de muestras para
el anlisis de ADN sinnecesidad del consentimiento informado (sin conocimiento del
afectado)y la posible colisin de esta prctica con la presuncin de inocencia yotros
derechos fundamentales.5. EL PODER IDENTIFICATIVO DE LOS ADNS FORENSES Ya
hemos hecho referencia a lo largo de este capitulo al distintopoder de
discriminacin individual que ofrece el estudio de las distin-tas regiones (STRs, STRs
del cromosoma Y y ADN mitocondrial) de losgenomas humanos. Son los perfiles
genticos obtenidos mediante el anlisis simultaneode un numero significativo (1017) de regiones STRs en los cromosomasautosmicos los que ofrecen un mayor
poder de discriminacin indivi-dual, alcanzndose ndices de identificacin en los
que la frecuencia deaparicin del perfil en la poblacin es tan baja ( por encima de
1 en unbilln) que hace tericamente imposible (en una poblacin real de
6000millones) la existencia de un segundo individuo no relacionado genti-camente
con el mismo perfil de ADN. De la misma forma los perfiles STRs autosmicos
heredados al 50por 100 de la madre y del padre ofrecen un gran poder de
individuali-zacin para el anlisis de familiares ascendientes y descendientes directos, ofreciendo lo que se denomina un Poder de Exclusin a priori(Porcentaje de
falsos padres que serian efectivamente excluidos por unconjunto de 13-17 regiones
STRS) superior al 99,99 por 100. Hay sin embargo un conjunto de muestras de la
escena del delito enlas que por diversas razones tcnicas solo es posible realizar un
anlisisde ADN mitocondrial. Este es el caso de una alta proporcin de muestrasde
pelos que se analizan en los laboratorios forenses. En este caso nosenfrentamos a
una clara reduccin en el poder de discriminacin indivi-dual ya que algunos
perfiles genticos (se denominan haplotipos) tienen
PAG 1866

. CONCEPTOS BSICOS DE ADN FORENSEuna alta incidencia (alrededor del 2 por

100) en distintas poblacionesEuropeas. Lo mismo ocurre en la actualidad con el
estudio de regionesSTR del cromosoma Y, ya que hay un haplotipo que es muy
comn (3por 100 de la poblacin Europea). En cualquier caso el poder de

discriminacin de un anlisis genticode STRs autosmicos puede verse

influenciado, tambin, por diversosmotivos, tales como la disponibilidad de la
muestra de referencia ade-cuada para la comparacin, la obtencin de perfiles
genticos parcialeso mezclas de perfiles, o el grado de parentesco gentico entre
los indi-viduos que hay que discriminar.6. EL ADN NO CODIFICANTE Y LA INTIMIDAD
PERSONAL Desde un punto de vista funcional el ADN se ha clasificado comoADN
codificante y no codificante para referirse a los genes (con infor-macin para la
sntesis de protenas) o a las regiones de ADN cuyasecuencia no aporta informacin
directa para la sntesis de protenas,respectivamente. Ya sabemos desde el ao
2001 (ao en el que se obtuvoel primer borrador de la secuencia completa del
genoma humano) que elnumero total de los genes humanos ronda alrededor de
30.000 genes, loque supone una porcin muy pequea (alrededor del 2 por 100) de
todoel genoma humano. Tanto las regiones cortas de ADN repetitivo nuclear(muy
abundantes en todo el genoma) como las regiones del ADN mito-condrial que se
utilizan en el campo forense se localizan en regiones deADN no codificante y por
tanto de su estudio no obtendremos informa-cin alguna acerca de caractersticas
fsicas o fenotpicas del individuo(tales como la predisposicin individual a padecer
enfermedades de basegentica,...). La nica informacin que nos proporciona el
estudio deestas regiones es un cdigo annimo diferenciador que
denominamosperfil gentico y que en ltimo trmino es una coleccin de
fragmentosde ADN ordenados de acuerdo a su tamao que son caractersticos
decada individuo. De hecho, la informacin aportada por estas regionescarece de
valor hasta que es comparada con otro perfil annimo deuna muestra de referencia
para establecer la identidad o la no identi-dad gentica entre las muestras
comparadas o su grado de parentescogentico. Podemos decir, por tanto, que el
perfil gentico que se obtienedel estudio de estas regiones variables de ADN no
codificante es comoel cdigo de barras que se utiliza para clasificar los productos
en unsupermercado que nada nos dice de las caractersticas del producto peronos
sirve para identificarlo.
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