Prueba de Ames

3.
-En efecto, la contaminacin atmosfrica urbana aumenta el riesgo de padecer enfermedades

respiratorias agudas, como la neumona, y crnicas, como el cncer del pulmn y las
enfermedades cardiovasculares.
4.- El test de Ames es un ensayo biolgico para evaluar el potencial mutagnico de
compuestos qumicos. Puesto que el cncer est vinculado a menudo con el dao de el ADN,
la prueba tambin sirve como un ensayo rpido para estimar el potencial cancergeno de un
compuesto, ya que las pruebas estndar para la carcinogenicidad hechas
sobreroedores toman aos para completarse y son caras de realizar
6.- Mutacin revertante: mutantes que espontneamente pierden el fenotipo de mutante y regresan al
fenotipo silvestre. Una mutacin que corrije la mutacin)
7.- Esta prueba utiliza varias cepas de la bacteria Salmonella typhimurium alteradas
genticamente para presentar mutaciones en los genes implicados en la sntesis de histidina.
A causa de dichas mutaciones, estas bacterias requieren de un suministro externo de histidina
para su crecimiento. El ensayo pone a prueba la capacidad del mutgeno para provocar una
alteracin gentica en las bacterias que permita el retorno al crecimiento en un soporte libre
de histidina. Las cepas del probador estn especialmente construidas para tener una Mutacin
con cambio puntual en los genes necesarios para sintetizar histidina, que permite la deteccin
de mutgenos que actan a travs de diferentes mecanismos. Algunos compuestos son muy
especficos, causando reversiones en slo una o dos cepas.1 El probador de cepas tambin
lleva mutaciones en los genes responsables de la sntesis del lipopolisacrido, haciendo que
la pared celular de las bacterias sea ms permeable,2 y en la supresin reparan el sistema
para hacer la prueba ms sensible.3 En el ensayo tambin se aaden enzimas del
hgado4 (provenientes de extracto de hgado de rata) para simular el efecto del metabolismo,
ya que algunos compuestos como el benzopireno no son mutagnicos, pero s lo son sus
productos metablicos.5
8.- El mtodo directo, como se denomina, aumenta la sensibilidad del ensayo, permitiendo
una concentracin in situ de la muestra en alrededor de 10 a 20 veces; es decir, que la
muestra problema adicionada presenta una mayor respuesta al anlisis en funcin del
aumento de compuestos genotxicos como consecuencia del proceso de filtracin de la
muestra problema (Cornell Institute for Medical Research, 1986)
11.- La fraccin S9 es un homogeneizado de hgado de rata, inducido con Aroclor 1254,
congelado, proveniente del Instituto de Investigaciones Biomdicas, UNAM.
12.- . Despus de 66 horas de incubacin a 37C, las colonias revertantes son contadas. El
valor igual o mayor a dos, de la expresin obtenida de dividir el nmero de revertantes en
las placas de prueba entre el nmero de revertantes de las placas control, indica la presencia
de actividad mutagnica en la muestra problema.
Una muestra es considerada positiva cuando existe una relacin
dosisrespuesta entre las concentraciones probadas y el nmero de revertantes
inducidas en por lo menos una dosis, considerando que la razn de
mutagenicidad (RM) es mayor o igual a 2. El factor debe ser usado apenas
como una gua, pues cuando la cepa presenta una tasa de reversin
espontnea baja, como en el caso de TA1535, TA1537 y TA1538, la razn de
mutagenicidad debe ser igual o superior a 3, a fin de asegurar una significancia
de la prueba
13.- La prueba debe realizarse lo ms rpido posible y las muestras deben ser
siempre mantenidas en refrigeracin (4 2 C) hasta el momento de realizarla.
El recipiente debe llenarse completamente para evitar la prdida de
compuestos voltiles. Se debe verificar el pH de la muestra problema. En caso
de que se presenten valores menores que 5.0 o mayores de 8.0, ajustar el pH a
7.0 antes de proceder a filtracin de la muestra problema. Generalmente la
muestra trae presencia de slidos suspendidos y microorganismos, por lo que
se debe proceder a la filtracin de la muestra problema en membranas de
acetato de celulosa de 0.45 m, para obtener su esterilidad. En caso de que las
muestras problema presenten mucho material particulado, es recomendable
una pre-filtracin con pre-filtro. Se debe verificar la esterilidad de la muestra en
placas de agar nutritivo, inoculando 200 L e incubndolas por 24 horas a 37
2 C. En caso de que la muestra problema presente contaminacin, repetir el
proceso de filtracin.|

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