Test Ames

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TEST

DE AMES

HEREDIA MAGALI TINELLI ALDANA


El test de Ames es una prueba in vitro que permite evaluar el potencial
efecto mutagénico de compuestos químicos o productos biológicos
como una medida indirecta del posible efecto carcinogénico sobre
seres humanos.
Esta prueba utiliza varias cepas de Salmonella typhimurium auxótrofas
para el aminoácido histidina, que poseen distintas mutaciones en genes
del operón histidina.
Esas mutaciones son el blanco para mutágenos que producen daño al ADN
por diferentes mecanismos.
Se utilizan las siguientes cepas de Salmonella typhimurium:
• TA 97ª
• TA 98
• TA 100
• TA 102
• TA 1535
• TA1538

Las mismas deberán ser provistas por un centro de referencia que


certifique su autenticidad. Éstas se conservarán congeladas a -80 °C (en
freezer) o en nitrógeno líquido.
Características de las cepas:

• Defecto en la cubierta de lipopolisacarido, normalmente protege a las


bacterias de las sustancias químicas del ambiente
• El sistema de reparación del ADN ha sido inactivado , aumentando su
susceptibilidad a los mutágenos
• Una de las cepas detecta sustitución de un par de bases y las otras tres
corrimiento de marco de lectura
• Cada cepa lleva la mutación que la hace incapaz de sintetizar el
aminoácido histidina (his-)
Evaluacion de los resultados:

Los datos se evalúan según los siguientes criterios:


Una muestra se considera Positiva (mutagénica) si el número promedio
de revertantes, con cualquiera de las cepas y en cualquiera de las
concentraciones probadas, es al menos dos veces mayor que el número
de revertantes detectadas en el control negativo y se observa un
incremento relacionado con la concentración en las revertantes por
placa con la misma cepa.
Una muestra se considera Negativa (no mutagénica) si no hay ninguna
concentración en la que se produce un número promedio de
revertantes por placa superior, por lo menos en dos veces al número de
revertantes detectadas en el control negativo y no muestra un
incremento de revertantes relacionado con la concentración. Deben
realizarse dos ensayos independientes con cada muestra.
Ventajas del uso del test :

Es una prueba sencilla y rápida para detectar si una sustancia es


mutagénica.
 Es un test para la identificación rápida de la producción de cáncer
por sustancias.
 Existe una similitud entre las lesiones que se producen en el ADN de
la bacteria y en las células humanas
 Gran amplificación biológica.
Limitaciones :

Salmonella typhimurium es una célula procariota, por lo tanto no es un


modelo perfecto para los seres humanos. Hígado de rata Fracción S9 se
utiliza para imitar las condiciones metabólicas mamíferas por lo que
puede evaluarse el potencial mutagénico de metabolitos, sin embargo
hay diferencias en el metabolismo y la mutagenicidad de los productos
químicos entre humano y rata. La prueba por lo tanto, puede mejorarse
mediante el uso de fracción de S9 de hígado humano; su uso fue
limitado anteriormente por su disponibilidad, pero es ahora disponible
comercialmente y por lo tanto puede ser más factible.

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