Validacion de Potencia de Antibiotico

UNIVERSIDAD SALVADOREA ALBERTO MASFERRER
FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA
TRABAJO DE GRADUACIN PARA OPTAR AL GRADO DE:

LICENCIATURA EN QUMICA Y FARMACIA
VALIDACIN DE POTENCIA DE ANTIBIOTICO EN GENTAMICINA SOLUCION

INYECTABLE POR EL MTODO DE CILINDRO-PLACA.
PRESENTADO POR:
NELSON SALOMN ZAMORA DAZ
RICARDO JOSE AGUILUZ MORENO
ASESORAS:
LICDA. GRACIA MAGAA
LICDA. MARTHA RUTH MARROQUIN
JULIO 2016
SAN SALVADOR, EL SALVADOR, CENTROAMERICA
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UNIVERSIDAD SALVADOREA ALBERTO MASFERRER
FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA
AUTORIDADES
DR. CSAR AUGUSTO CALDERN

RECTOR
LICDA. DAYSI CAROLINA MARQUINA DE GMEZ

VICERRECTORA
LIC. JULIO ALFREDO RIVAS HERNNDEZ

SECRETARIO GENERAL
LIC. THELMO PATRICIO ALFARO RUGLIANCICH

FISCAL
LICDA. RAQUEL ARAYA DE CORNEJO

DECANO
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INDICE
INDICE ............................................................................................................................................... iii

INDICE DE TABLAS ........................................................................................................................ vi
NDICE DE ANEXOS ........................................................................................................................ vi
RESUMEN......................................................................................................................................... vii
ABSTRACT ...................................................................................................................................... viii
INTRODUCCION .............................................................................................................................. ix
CAPITULO I. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ....................................................................... 10
1.1.
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ............................................................................... 11
1.2. ANTECEDENTES ...................................................................................................................... 12

1.3. JUSTIFICACIN DE LA INVESTIGACIN .......................................................................... 14
1.4 LIMITACIONES ......................................................................................................................... 15
1.5. OBJETIVOS ............................................................................................................................... 16
1.5.1. Objetivo general ................................................................................................................... 16
1.5.2. Objetivos especficos............................................................................................................ 16
CAPITULO II. MARCO TERICO ..................................................................................................... 17
2.1. MARCO TEORICO .................................................................................................................... 18
2.1.1 ANTIBITICOS ....................................................................................................................... 18
2.1.1.1. Definicin .......................................................................................................................... 18
2.1.2. GENTAMICINA ...................................................................................................................... 18
2.1.2.1. Farmacocintica ................................................................................................................ 19
2.1.2.2. Posologa y administracin ............................................................................................... 20
2.1.2.3. Esquemas posolgicos especficos .................................................................................... 21
2.1.2.4. Contraindicaciones ............................................................................................................ 21
2.1.2.5. Precauciones y advertencias ............................................................................................. 21
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2.1.2.6. Reacciones adversas .......................................................................................................... 22

2.1.3. Staphylococcus epidermidis. ................................................................................................... 22
2.1.3.1. Generalidades .................................................................................................................... 22
2.1.3.2. Taxonoma......................................................................................................................... 23
2.1.3.3. Morfologa microscpica .................................................................................................. 23
2.1.3.4. Hbitat ............................................................................................................................... 23
2.1.3.5. Metabolismo ...................................................................................................................... 23
2.1.3.6. Resistencia a agentes fsicos y qumicos ........................................................................... 24
2.1.3.7. Resistencia antibitica ....................................................................................................... 24
2.1.4. VALIDACION ......................................................................................................................... 25
2.1.4.1. Definiciones ...................................................................................................................... 25
2.1.4.2. Mtodos Susceptibles a ser Validados .............................................................................. 25
2.1.4.3. Datos requeridos para la validacin de una determinacin ............................................... 25
2.1.4.4. PARAMETROS DE DESEMPEO ..................................................................................... 26
2.1.5. MTODO DIFUSIN EN PLACA O CILINDRO PLACA ................................................... 28
2.1.5.1. Fundamento ....................................................................................................................... 28
2.1.5.1. Metodologa general para el ensayo segn USP38 ........................................................... 28
2.1.5.2. Especificaciones de USP 38 para el mtodo difusin en placa o cilindro placa ............... 29
2.1.5.2.2. ......................................................................................................................................... 29
CAPITULO III. HIPOTESIS ................................................................................................................ 30
3.1. HIPOTESIS ................................................................................................................................. 31
3.1.1. HIPTESIS DE TRABAJO: ............................................................................................... 31
3.1.2. HIPTESIS NULA: ............................................................................................................. 31
CAPITULO IV. MATERIALES Y METODOS ................................................................................... 32
4.1. MATERIALES Y MTODOS ................................................................................................... 33
4.1.1. MATERIALES..................................................................................................................... 33
4.1.1.1. Siembra de Staphylococcus epidermidis y obtencin de suspensin madre ..................... 33
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4.1.1.2. Estandarizacin de la suspensin de microorganismos ..................................................... 33

4.1.1.3. Preparacin de las placas de prueba .................................................................................. 33
4.1.1.4. Preparacin de las soluciones ............................................................................................ 34
4.2. METODOLOGA ....................................................................................................................... 36
4.2.1. Tipo de estudio ..................................................................................................................... 36
4.2.2. Tiempo y lugar ..................................................................................................................... 36
4.2.3. Universo y muestra............................................................................................................... 36
4.2.4. Recoleccin y Anlisis de los datos ..................................................................................... 36
CAPITULO V. RESULTADOS Y DISCUSIN .................................................................................. 37
5.1. RESULTADOS ............................................................................................................................. 38
5.1.1. PROTOCOLO DE VALIDACION DEL METODO ANALITICO ............................................ 39
5.1.2. INFORME FINAL DE VALIDACION ....................................................................................... 50
5.1.3. RESULTADOS DE PARAMETROS DE DESEMPEO ...................................................... 57
5.2. DISCUSIN DE LOS RESULTADOS ...................................................................................... 58
CONCLUSIONES ............................................................................................................................. 59
RECOMENDACIONES .................................................................................................................... 60
BIBLIOGRAFA................................................................................................................................ 61
GLOSARIO........................................................................................................................................ 62
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INDICE DE TABLAS
Tabla 1: Parmetros de desempeo de procedimientos analticos fsico-qumico y potencia
microbiolgica........................................................................................................................ 26
Tabla 2. Resultados de parmetros de desempeo ................................................................. 57
NDICE DE ANEXOS
ANEXO I: CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES........................................................... 65
ANEXO II. IMGENES PARTE EXPERIMENTAL ...................................................... 66
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RESUMEN
Los parmetros de desempeo, para validar un mtodo de anlisis, son caractersticas del funcionamiento
que debe de presentar una garanta y una confiabilidad de los datos. El mtodo de potencia de antibitico
de Gentamicina, se adapt a las condiciones del laboratorio de microbiologa dentro del laboratorio de
control de calidad de la USAM. El cual dentro de este trabajo se detalla el procedimiento que se debe
realizar para el desarrollo exitoso del ensayo de potencia de Gentamicina.
El objetivo principal de esta investigacin fue la implementacin de los parmetros de desempeo:

especificidad, exactitud, repetibilidad y precisin intermedia del mtodo cilindro placa para la
determinacin de potencia de Gentamicina Solucin Inyectable. La parte prctica fue realizada en el
Laboratorio de Control de Calidad de la USAM, en el rea fsica qumica y microbiologa, en el periodo
de tiempo necesario para dicha validacin.
Al finalizar esta investigacin se puede expresar que la metodologa analtica desarrollada tuvo un
comportamiento preciso ya que los resultados que se obtuvieron avalan esta metodologa pues estos
proporcionan resultados satisfactorios con una precisin, exactitud y linealidad comprobada, es decir que
se comprob que el mtodo cumple con los parmetros establecidos, por lo tanto, se podr repetir esta
prueba cada vez que el laboratorio lo requiera en nuevos anlisis.
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ABSTRACT
Performance parameters to validate a method of analysis, are performance features that should
provide security and reliability of the data. The power method of antibiotic Gentamicin, adapted to
the conditions of the microbiology laboratory inside the quality control laboratory of USAM. Which
in this work the procedure should be performed for the successful development of the power of
Gentamicin assay is detailed.
The main objective of this research was the implementation of performance parameters: accuracy,
precision, and specificity of the cylinder plate method for determining power of Gentamicin Injection
solution. The practical part, was conducted at the Laboratory of Quality Control of USAM, in the
area of microbiology and physical chemistry, in a period of time required for such validation.
Upon completion of this investigation, it can be expressed that, the analytical methodology
developed had a precise behavior since the results obtained support this methodology because these
provide satisfactory results with precision, accuracy and proven linearity, is it was found that the
method meets established parameters, therefore this test can be repeated whenever the laboratory
requires a new analysis that requires it.
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INTRODUCCION
El presente trabajo de investigacin, se realiz con el fin de validar el mtodo de cuantificacin de la
potencia de Gentamicina solucin inyectable, por el mtodo de cilindro placa.
La valoracin microbiolgica de antibiticos es un mtodo analtico que permite bajo las condiciones
adecuadas demostrar la actividad (potencia) de los antibiticos por medio de su efecto inhibidor sobre
los microorganismos.
La validacin es el proceso establecido para la obtencin de pruebas documentadas, mediante estudios
sistemticos de laboratorio y demostrativos, de que un mtodo de anlisis es lo suficientemente fiable y
reproducible para producir el resultado previsto dentro de intervalos definidos. El proceso de validacin
permite el conocimiento de las caractersticas de funcionamiento del mtodo y proporciona un alto grado
de confianza en el mismo y en los resultados obtenidos al aplicarlo.1
Es necesario realizar la validacin bajo las condiciones del laboratorio donde se llevar dicho estudio
para valer los parmetros de desempeo de una metodologa nueva.
Mediante la validacin de este mtodo analtico, se pretendi la implementacin de un nuevo anlisis de
verificacin de calidad por lo cual el mtodo que se valid pretenda establecer que las caractersticas de
desempeo analtico cumplan con los requisitos para la aplicacin analtica propuesta para lograr as
que los resultados obtenidos fueran confiables para ser utilizados en la comprobacin de las
especificaciones de calidad.
Para la validacin se cont con los materiales e insumos necesarios para que pudiera ser implementada
con toda seguridad y seriedad en el laboratorio de control de calidad de la USAM, y debido al respaldo
analtico del laboratorio, este mtodo de validacin pretenda demostrar que es conciso y eficaz.
Con este trabajo de tesis, se vio beneficiado el laboratorio de control de calidad de la USAM, debido a
que contar con un mtodo validado para estimar la potencia de Gentamicina soluciones inyectables y
con esto podr tener resultados repetibles y confiables en futuros anlisis
Velandia Castellanos JC, Validacin del mtodo bacitracina, Colombia
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CAPITULO I. PLANTEAMIENTO DEL

PROBLEMA
1.1.
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
La aplicacin de los mtodos oficiales debe ser demostrados dentro de las condiciones de trabajo de los
laboratorios dedicados al anlisis de productos farmacuticos, si no se demuestra que es adecuado para
el uso propuesto mediante la realizacin de la validacin del mtodo, se corre el riesgo de dar
interpretaciones de resultados no confiables esto se traslada al usuario final de un producto farmacutico,
como por ejemplo un antibitico, el cual podra no estar cumpliendo con especificaciones de calidad.
Ser posible demostrar que el Mtodo de Potencia de Antibitico de Gentamicina Solucin Inyectable
por el procedimiento Cilindro-Placa: Cumple con los parmetros de desempeo establecidos en una
Validacin analtica?
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1.2. ANTECEDENTES
Con el fin de conocer documentos relacionados al tema, se realiz una bsqueda de trabajos (tesis) que
involucren validacin de mtodos, encontrndose:
Aguilar Chavarra MA. Control de Calidad de tres antibiticos de mayor consumo en El

Salvador. [Tesis para optar al grado de Licenciatura en Qumica y farmacia]. El Salvador:
Universidad Salvadorea Alberto Masferrer. Facultad de Qumica y Farmacia; 1989.
El Control de Calidad se determin en los antibiticos siguientes: ampicilina, tetraciclina y

eritromicina en la forma farmacutica de tabletas y capsulas, para estimar la potencia de
antibiticos de ampicilina y eritromicina se utiliz el mtodo de cilindro-placa utilizando como
microorganismo de prueba C. sarcina lutra, los resultados del anlisis para ampicilina se
consideran satisfactorios ya que de las nueve muestras tomadas solo una estaba por debajo del
lmite inferior (90%) del principio activo, de igual manera los resultados de eritromicina,
evaluados bajo el mismo mtodo se consideran buenos ya que de las cuatro muestras tomadas,
una de estas con un mes antes de vencimiento segn fecha de expiracin, su potencia se
considera baja del lmite inferior. La potencia del antibitico tetraciclina se evalu segn el
mtodo de turbimetra, encontrndose todas las muestras analizadas (tres) entre los lmites
establecidos segn monografa. Otras pruebas realizadas a los productos fueron: Disolucin para
ampicilina y tetraciclina, Determinaciones fsicas: pruebas de Perdida por secado y Contenido
de agua, as como Anlisis de Material de Empaque, concluyendo que de 19 muestras analizada
entre los tres antibiticos se rechaza el 21% de los productos.
Barrientos Cuellar AM, Bertrand Rodrguez FR. Validacin del Mtodo de Anlisis por HPLC
para Cremas de Hidrocortisona distribuidas en el pas. [Tesis para optar al grado de Licenciatura
en Qumica y farmacia]. El Salvador: Universidad Salvadorea Alberto Masferrer. Facultad de
Qumica y Farmacia; 2000.
En la Validacin del Mtodo Analtico por HPLC, se evaluaron los siguientes parmetros al
mtodo: Selectividad, Repetibilidad, Exactitud, Robustez, las cuales cumplieron, por lo que se
estima que las modificaciones realizadas al mtodo oficial, no interfieren en la confiabilidad del
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mtodo, es decir que el mtodo propuesto llena los requerimientos para las aplicaciones
analticas pretendidas.
Corado Hernndez GM, Silhy Zacaras VM. Validacin de un Mtodo Analtico por
Espectrofotometra UV-Visible para la cuantificacin del contenido de cido Glutmico en
Jarabes. [Tesis para optar al grado de Licenciatura en Qumica y farmacia]. El Salvador:
Universidad Salvadorea Alberto Masferrer. Facultad de Qumica y Farmacia; 2008.
Para la Validacin del Mtodo No oficial se evalan parmetros: Sobre el Sistema, la Linealidad;
Sobre el Mtodo, Linealidad, Exactitud, Precisin, Especificidad, por lo que el Mtodo de
espectrofotometra UV-Visible para cuantificacin de Acido glutmico en jarabes, cumple con
todos los parmetros requeridos en la validacin categora I, por lo cual ha sido validado y puede
ser utilizado como mtodo alterno.
Morales Meza JD. Implementacin y Desarrollo de la Tcnica de Potencia Microbiolgica de

Antibiticos y su Impacto Econmico en la empresa Calox de Costa Rica, S.A. [Proyecto para
optar por el ttulo de Ingeniera en Biotecnologa con el grado acadmico de Bachillerato
Universitario]. Costa Rica: Instituto Tecnolgico de Costa Rica. Escuela de Biologa, 2007.
Se establece y estandariza el protocolo para llevar a cabo la prueba de potencia o actividad de

antibiticos basndose en la metodologa USP (U. S. Pharmacopeia) y segn los recursos con
que cuenta la empresa para la cuantificacin de la potencia bacteria de Neomicina y Gentamicina
ambos crema por medio del mtodo de cilindro-placa, utilizando como microorganismo de
prueba S epidermidis, en el presente estudio todos los ensayos realizados a productos con
Neomicina dentro de su composicin presentaron en los datos obtenidos de la curva estndar un
porcentaje de correlacin superior a 98 de modo que la prueba puede aceptarse como vlida y
proceder a la determinacin del porcentaje de potencia microbiolgica.
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1.3. JUSTIFICACIN DE LA INVESTIGACIN

La exigencia de demostrar el desempeo en la aplicacin de mtodos de anlisis y la necesidad de
respaldar con evidencias objetivas el cumplimiento de parmetros, hizo necesario realizar esta validacin
del mtodo analticos para productos farmacuticos establecido, que son una herramienta que brinda
informacin sobre la calidad de los resultados que se obtienen, as como tambin en el control de calidad
de un antibitico se requieren de anlisis especficos por medio de la valoraciones microbiolgicas, que
sometidas a un proceso de validacin garanticen de forma consistente y permanente la confiabilidad y
validez de los datos obtenidos y as juzgar la calidad del producto exigidos por: el Reglamento Tcnico
Centroamericano (RTCA 11.03.39:06) de productos farmacuticos, titulada Validacin de mtodos
analticos para la evaluacin de la calidad de los medicamentos.
Al validar el mtodo analtico, se crea evidencia documentada de un alto grado de confianza, que el
procedimiento descrito suministrar una serie de direcciones precisas y definitivas del mtodo analtico
que deben seguirse al realizarse y efectuarse en el laboratorio para garantizar y cumplir los
requerimientos de la aplicacin analtica propuesta.
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1.4 LIMITACIONES
1. No se cont con un estndar primario de Gentamicina USP, por lo que se trabaj con un
estndar secundario caracterizado contra un estndar primario USP.
2. No se cont con un llenado automatizado para los cilindros de placa, por esto se realiz
un llenado manual utilizando micropipetas calificadas.
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1.5. OBJETIVOS
1.5.1. Objetivo general
Validar el Mtodo de Potencia de Antibitico de Gentamicina Solucin Inyectable, por el Mtodo de
Cilindro Placa
1.5.2. Objetivos especficos

1.5.2.1. Elaborar un Protocolo de Validacin donde se definan los criterios de los parmetros de
desempeo a validar.
1.5.2.2. Ejecutar la Validacin del Mtodo de Potencia de Antibitico de Gentamicina solucin
inyectable por el Mtodo de Cilindro-Placa.
1.5.2.3. Crear evidencia documentada para la declaracin de validez, mediante el procesamiento de datos
para la elaboracin de un Dictamen de Validacin.
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CAPITULO II. MARCO TERICO
2.1. MARCO TEORICO

2.1.1 ANTIBITICOS
2.1.1.1. Definicin
Un antibitico es, por definicin, aquel que se opone a la vida. Los antibiticos son sustancias utilizadas
para impedir el desarrollo de microorganismos en el cuerpo humano. Algunos antibiticos, como la
penicilina, el primer antibitico descubierto por Fleming en 1929, son histricamente naturales, pero
ahora la mayora son antibiticos sintticos.
El antibitico acta por mecanismos diferentes en funcin de su naturaleza y su objetivo es bloquear la
proliferacin de los microorganismos inhibiendo alguno de los pasos de su desarrollo.
Los antibiticos se prescriben en caso de infecciones bacterianas nicamente, y pueden utilizarse ms de
uno para tratar algunas infecciones severas. Los antibiticos se deben prescribir de forma correcta, ya
que las bacterias desarrollan mecanismos de resistencia a los antibiticos que reducen su eficacia.
Un antibitico es una sustancia qumicamente definida, producida en el metabolismo de clulas vivas y
aislada de ellas por primera vez, o uno de sus derivados producidos por mtodos sintticos o biocinticos,
el cual ejerce su accin bacteriosttica o bactericida en pequea concentracin contra microorganismos
vegetales y animales.
Bacteriosttico: Inhibicin o interrupcin de la multiplicacin microbiana tras un periodo variable de
latencia, en general reversible Estos antimicrobianos inhiben la multiplicacin, no destruyen, son
antibiticos bacteriostticos de tal manera que cuando el microorganismo desaparece puede volver a
crecer, el fin es que el sistema inmune acabe con ellos despus de haber tomado el antibitico. (Thrum
y Bocker, 1971)
Bactericida: Eliminacin irreversible de los grmenes en periodo de reproduccin o reposo sin dao para
el microorganismo. Las condiciones previas son: dosificacin ptima, necesaria duracin teraputica,
concentracin suficiente donde est localizada la infeccin.
2.1.2. GENTAMICINA
Es un medicamento Antibitico, Amino glucsido de administracin parenteral, tpica y uso oftlmico.
Tiene efecto concentracin dependiente, efecto post-antibitico prolongado y accin sinrgica con
antibiticos Betalactmicos. Posee un espectro antimicrobiano principalmente frente a bacterias Gram
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negativas (Pseudomonas aeruginosa, E. coli, Proteus, Serratia) y tiene actividad frente a ciertas
bacterias Gram positivas (S. aureus, S. epidermidis, L. monocytogenes).
En combinacin con antibiticos Betalactmicos es eficaz en infecciones producidas por E. fecalis y
Streptococccus Sp. No es capaz de atravesar la pared intestinal y su administracin slo se puede hacer
por va intravenosa o intramuscular. Se utiliza para el tratamiento de las infecciones articulares, cutneas,
otorrinolaringlogas, pulmonares, urinarias, menngeas o, incluso, para luchar contra las septicemias.
La gentamicina tambin puede ser aplicada localmente, sobretodo en oftalmologa en caso
de conjuntivitis, keratitis de origen bacteriano o en casos de lcera de la crnea.
2.1.2.1. Farmacocintica
Con posterioridad a la administracin intramuscular de Gentamicina inyectable, las concentraciones
sricas pico usualmente se producen entre los 30 y 60 minutos, y los niveles sricos son medibles durante
6 a 8 horas. Cuando la gentamicina se administra por infusin intravenosa en un periodo de 2 horas, las
concentraciones sricas son similares a las obtenidas con la administracin intramuscular. En los
pacientes con funcin renal normal las concentraciones sricas mximas de gentamicina (mcg/ml)
usualmente alcanzan hasta cuatro veces el valor de la dosis intramuscular (mg/kg) administrada en cada
aplicacin. Si bien se esperan algunas variaciones debidas a un nmero de variables tales como edad,
temperatura corporal, superficie corporal y diferencias fisiolgicas, el paciente individual que recibe la
misma dosis tiende a presentar concentraciones similares en repetidas determinaciones.
La gentamicina administrada a la dosis de 1 mg/kg cada 8 horas, durante el periodo usual de tratamiento
de 7-10 das, a pacientes con funcin renal normal no se acumula en el suero. Al igual que todos los
aminoglucsidos, la droga puede acumularse en el suero y los tejidos de pacientes tratados con dosis ms
altas y/o durante periodos prolongados, particularmente en presencia de insuficiencia de la funcin renal.
En pacientes adultos, el tratamiento con dosis de Gentamicina de 4 mg/kg/da o mayores, durante 7-10
das puede determinar un incremento leve y progresivo de las concentraciones mximas y mnimas. En
los enfermos con insuficiencia renal la gentamicina se depura ms lentamente del organismo que en los
pacientes con funcin renal normal. Cuanto mayor es el grado de insuficiencia, ms lenta es la depuracin
plasmtica. (Se debe ajustar la dosis).
La transformacin metablica es escasa o nula; la droga se excreta principalmente por filtracin
glomerular. Despus de varios das de tratamiento, la cantidad de Gentamicina excretada en orina se
aproxima a la dosis diaria administrada. Como ocurre con otros Aminoglucsido, una pequea cantidad
de la dosis de Gentamicina puede retenerse en los tejidos, especialmente en los riones.
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Se han detectado pequeas cantidades de Amino-glucsidos en la orina semanas despus de haberse

interrumpido la administracin de la droga. La depuracin renal de la Gentamicina es similar a la de la
creatinina endgena. En los pacientes con marcada insuficiencia de la funcin renal, se observa una
disminucin de la concentracin de amino-glucsidos en orina y de su penetracin en el parnquima
renal defectuoso. Este descenso en la excrecin de la droga, junto con la potencial nefrotoxicidad de los
aminoglucsidos, debe tenerse en cuenta cuando se tratan pacientes de este tipo con infecciones del tracto
urinario.
La Gentamicina atraviesa las membranas peritoneales y la placentaria. Dado que los Aminoglucsido
difunden pobremente en el espacio subaracnoideo despus de la administracin parenteral, las
concentraciones de Gentamicina en el lquido cefalorraqudeo usualmente son bajas y dependen de la
dosis, la velocidad de penetracin y el grado de inflamacin menngea
2.1.2.2. Posologa y administracin

Las dosis recomendadas para la administracin intramuscular y endovenosa son idnticas. Gentamicina
inyectable tambin puede administrarse por va subcapsular (cpsula de Tenon). Antes del tratamiento
se debe determinar el peso del paciente para calcular la dosis correcta. Gentamicina inyectable no debe
mezclarse fsicamente con otros medicamentos, sino que debe administrarse por separado de acuerdo
con la va de administracin y el esquema de dosificacin recomendados. Es aconsejable determinar las
concentraciones sricas mximas y mnimas de Gentamicina para asegurar niveles adecuados, pero no
excesivos. Despus de la administracin intravenosa o intramuscular de Gentamicina inyectable dos o
tres veces por da, es esperable hallar una concentracin mxima de 4 a 6 mcg/ml, medida 30 minutos a
una hora luego de la administracin.
La duracin usual del tratamiento para todos los enfermos es de siete a diez das. En las infecciones
complicadas puede ser necesario un curso ms largo de tratamiento. En dichos casos se recomienda la
observacin estrecha de la funcin renal auditiva y vestibular, ya que es ms probable que ocurra
toxicidad cuando el tratamiento se extiende por ms de diez das. La dosificacin deber reducirse si esta
clnicamente indicado.
2.1.2.2.1. Administracin intramuscular Pacientes con funcin renal normal Adultos: La dosis
recomendada de Gentamicina inyectable para enfermos con infecciones graves y funcin renal normal
es de 3 mg/kg/da, administrados en tres dosis iguales cada ocho horas o dos dosis iguales cada 12 horas
o una nica dosis diaria.
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2.1.2.2.2. Administracin intravenosa La administracin intravenosa de gentamicina puede ser

particularmente til en el tratamiento de enfermos con septicemia o de aquellos en estado de shock. Esta
puede ser tambin la va de administracin preferida para algunos enfermos con insuficiencia cardiaca
congestiva, trastornos hematolgicos, quemaduras graves o aquellos con reduccin de la masa muscular.
Para la administracin intravenosa en adultos, una dosis nica de gentamicina inyectable puede diluirse
en 50 a 200 ml de solucin salina normal estril o en una solucin estril de dextrosa en agua al 5%; en
lactantes y nios, el volumen de diluyente debe ser menor. La solucin puede administrarse por infusin
durante un periodo de media hora a dos horas. En ciertas circunstancias una dosis nica de gentamicina
inyectable sin diluir tambin puede administrarse directamente en una vena o en la tubuladura de
infusin, lentamente, en un periodo de 2 a 3 minutos.
2.1.2.2.3. Administracin subconjuntival y administracin subcapsular (capsula de tenon) La

administracin de Gentamicina inyectable por va subconjuntival ha resultado efectiva y segura en el
tratamiento de infecciones bacterianas oculares profundos y graves producidas por microorganismos
sensibles. Tambin se ha empleado eficazmente en asociacin con la penicilina, antes y despus de la
ciruga ocular, siempre que se halle presente o se sospeche una infeccin bacteriana. Las inyecciones
subconjuntivales y subcapsulares (cpsula de Tenon) deben ser efectuadas nicamente por quienes
posean experiencia en este tipo de aplicacin. La dosis usual de Gentamicina inyectable vara de 10 a 20
mg, dependiendo de la gravedad de la infeccin ocular.
2.1.2.3. Esquemas posolgicos especficos Infecciones del tracto urinario (ITU): Los pacientes con
infecciones urinarias, especialmente si son crnicas y recurrentes, y sin evidencia de insuficiencia renal,
pueden tratarse con una dosis diaria nica de 160 mg de Gentamicina administrada por va intramuscular
durante 7 a 10 das.
2.1.2.4. Contraindicaciones Pacientes con antecedentes de hipersensibilidad o reacciones txicas

graves a la Gentamicina o a otros Aminoglucsidos.
2.1.2.5.
Precauciones y advertencias Los enfermos tratados con Aminoglucsidos deben
permanecer bajo estricta vigilancia mdica debido a la potencial toxicidad asociada con su uso. Se
recomienda el monitoreo de la funcin renal y del octavo nervio craneano durante el tratamiento,
particularmente en los pacientes con funcin renal disminuida, conocida o sospechada. La orina debe
examinarse para establecer si hay disminucin de la gravedad especfica, aumento en la excrecin de
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protenas, o presencia de clulas o cilindros. Peridicamente debe determinarse el nitrgeno ureico en

sangre, la creatinina srica o la depuracin de creatinina.
2.1.2.6. Reacciones adversas Nefrotoxicidad: Se han comunicado efectos adversos renales, como lo
demuestra la presencia de cilindros, clulas o protenas en la orina, o el incremento de la uremia,
nitrgeno no proteico, creatinina srica y oliguria. Los efectos adversos renales ocurren ms
frecuentemente en los pacientes con antecedentes de insuficiencia renal y en aqullos tratados durante
perodos ms prolongados o con dosis ms altas que las recomendadas.
2.1.3. Staphylococcus epidermidis.

2.1.3.1. Generalidades
Staphylococcus epidermidis es una especie bacteriana perfectamente redonda del gnero Staphylococcus
y familia Staphylococcaceae. Crece en grupos y vive generalmente en la piel humana. Fue originalmente
llamada Staphylococcus albus.
La bacteria Staphylococcus epidermidis no mantiene el tinte violceo cuando se tie con el mtodo de
Gram (bacterias gram-negativo) y casi todas las cepas de Staphylococcus epidermidis no producen la
enzima coagulasa que induce la coagulacin.
La bacteria Staphylococcus epidermidis crece por respiracin aerbica (convierte el oxgeno en dixido
de carbono) o por fermentacin (divide compuestos orgnicos complejos en sustancias simples).
Staphylococcus aureus se destaca como un importante patgeno humano, produce infecciones tanto en
la comunidad como a nivel hospitalario. En la comunidad, las infecciones por S. aureus son a menudo
agudas, piognicas y superficiales, aunque tambin puede producir, con menor frecuencia, infecciones
profundas como osteomielitis, neumona y endocarditis aguda.
A nivel nosocomial, S. aureus es un importante agente de infecciones de herida quirrgica, de prtesis y
otras. Tambin S. aureus es causa de una serie de infecciones producidas por toxinas como el sndrome
del shock txico, la intoxicacin alimentaria y el sndrome de piel escaldada. Staphylococcus epidermidis
es integrante de la flora normal de piel, pero produce infecciones crecientes de piel.
Pgina | 22
2.1.3.2. Taxonoma
Los miembros del gnero Staphylococcus son catalasa positivos y hasta hace poco formaban parte de la
familia Micrococacceae junto a los gneros Planococcus y Stomacoccus. Estudios genticos han
demostrado que Staphylococcus y Micrococcus no estn relacionados.
Los estafilococos son cocos Gram positivos, catalasa positiva y el diamino cido en el peptidoglicano es
la L-lisina. El gnero Staphylococcus posee alrededor de 30 especies, de las cuales destacaremos S.
aureus, S. saprophyticus y S. epidermidis.
2.1.3.3. Morfologa microscpica

Gram positivos que poseen tendencia a agruparse en racimos. Tienen una forma esfrica y un dimetro
de alrededor de una micra.
2.1.3.4. Hbitat
Staphylococcus epidermidis es integrante de la flora normal de la superficie corporal donde sobrevive
gracias a sus lipasas, mientras S. aureus se encuentra habitualmente a nivel de la nasofaringe y de zonas
hmedas como pliegues inguinales y axilas. A nivel del vestbulo nasal anterior la adherencia parece
estar mediada por el contenido en cidos teicoicos. Se estima que el ndice de portacin nasal en los
adultos es de alrededor del 20-30%. Expresado longitudinalmente, cerca del 30% de la poblacin puede
ser portador permanente, el 50% portador intermitente y el 20% no es colonizado. Algunas poblaciones
pueden tener una tasa de colonizacin mayor como el personal de salud, los pacientes en hemodilisis,
diabticos, adictos a drogas intravenosas, etc. A pesar que S. aureus posee numerosos factores de
virulencia, puede convivir con el husped humano formando parte de su flora normal sin causar ningn
dao
2.1.3.5. Metabolismo
En cuanto a la forma de obtener su energa a travs de la fermentacin y de la respiracin. En cuanto a
los requerimientos de cultivo, son no exigentes desde el punto de vista nutricional, creciendo en medios
pobres y simples. En su relacin con el oxgeno son aerobios-anaerobios facultativos.
Pgina | 23
2.1.3.6. Resistencia a agentes fsicos y qumicos

Es muy resistente a las condiciones ambientales normales. Es capaz de sobrevivir hasta tres meses en
un cultivo a temperatura ambiente. Muere expuesto a temperaturas mayores de 60 C por una hora. En
cuanto a los agentes qumicos, es sensible a la mayora de los desinfectantes y antispticos, que lo matan
en pocos minutos.
2.1.3.7. Resistencia antibitica

S. aureus puede poseer resistencia para diferentes antimicrobianos. En general los estafilococos aislados
de infecciones comunitarias, hasta hace poco tiempo, no posean muchos genes de resistencia salvo por
la produccin de penicilinasa. Sin embargo, actualmente asistimos a la emergencia de cepas comunitarias
resistentes a meticilina u oxacilina (ver ms adelante). En cuanto a los aislamientos de origen
nosocomial, un elevado porcentaje de los mismos tienen varios determinantes de resistencia y
fundamentalmente resistencia a meticilina, asociada a resistencia a aminoglucsidos, macrlidos y
quinolonas.
2.1.3.7.1. Resistencia a -lactmicos

Existen variados mecanismos que median resistencia a -lactmicos. La produccin de - lactamasa
inactiva ciertos -lactmicos por medio de hidrlisis del anillo -lactmico. Estas enzimas atacan a la
penicilina G, ampicilinas, carboxipenicilinas y ureidopenicilinas.
El producto de hidrlisis carece de actividad antibacteriana. Ms del 90% de los aislamientos de S. aureus
produce este tipo de enzimas, tambin llamadas penicilinasas. Parte de la enzima que se produce es
excretada al medio externo y parte permanece adherida a la membrana celular. Se han reconocido cuatro
variantes de -lactamasa llamadas A, B, C y D. En la mayora de los aislamientos esta enzima es
codificada por plsmidos, pero tambin se puede encontrar a nivel cromosmico como parte de un
elemento transponible.
Por otro lado, tenemos la resistencia a meticilina u oxacilina. sta consiste en la produccin de una nueva
protena fijadora de penicilina (penicillin-binding protein) PBP, llamada PBP2a o PBP2, no presente en
las cepas sensibles. Esta nueva PBP tiene una afinidad disminuida por la mayora de los
y cefalosporinas.
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-lactmicos
2.1.4. VALIDACION
2.1.4.1. Definiciones
Accin documentada que demuestra que un procedimiento, proceso, equipo, material, actividad
o sistema conducen a los resultados previstos. (RTCA BPM 11.03.42:07).
La validacin de un procedimiento analtico es un proceso que establece, mediante estudios en

el laboratorio, que las caractersticas de desempeo del procedimiento cumplen con los
requisitos para las aplicaciones analticas prevista (USP 38).
2.1.4.2. Mtodos Susceptibles a ser Validados

Son validables los mtodos analticos clasificados en la siguiente forma:
a. Ensayos de identificacin
b. Ensayos para la identificacin del analito de inters de una materia prima o de una especificidad
farmacutica.
c. Ensayos para la determinacin de caractersticas inherentes.
d. Ensayos de lmite de impurezas y de cuantificacin de impurezas.
e. Ensayos para la determinacin de analitos en lquidos biolgicos y en productos naturales.
f.
Ensayos microbiolgicos.
No es recomendable considerar ningn mtodo oficial o de farmacopea totalmente validado para una
especificacin, puesto que difcilmente tendr los mismos componentes ni la misma proporcin de estos.
2.1.4.3. Datos requeridos para la validacin de una determinacin

Los requisitos de las pruebas farmacopeicas varan desde valoraciones analticas muy rigurosas hasta
evaluaciones de tributos subjetivos. Considerando esta amplia variedad, es lgico que diferentes
procedimientos de prueba requieran diferentes esquemas de validacin. A continuacin, se indican las
categoras de pruebas ms habituales para las que se exigen datos de validacin:
Categora I: los procedimientos analticos para la cuantificacin de los componentes principales de
frmacos a granel o ingredientes, en productos farmacuticos terminados.
Categora II: los procedimientos analticos para la determinacin de impurezas en frmacos a granel o
de productos de degradacin en productos farmacuticos terminados. En estos anlisis incluyen anlisis
cuantitativos y pruebas de lmite.
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Categora III: los procedimientos analticos para la determinacin de las caractersticas de desempeo
(por ejemplo, disolucin, liberacin del frmaco).
Categora IV: pruebas de identificacin
De acuerdo al Reglamento Tcnico Centroamericano (RTCA 11.03.39.06) de Productos Farmacuticos,
titulada VALIDACION DE METODOS ANALITICOS PARA LA EVALUACIN DE LA
CALIDAD DE LOS MEDICAMENTOS
Tabla 1: Parmetros de desempeo de procedimientos analticos fsico-qumico y potencia
microbiolgica.
Categora de Categora
Categora tipo II
Categora
Categora
prueba
I
tipo II
tipo IV
Principio
activo (s)
Prueba de
limite
Cuantitativa
Prueba de
limite
Cualitativa
Parmetro de
desempeo
Si
Si
*
Exactitud
Si
Si
No
Precisin
Si
Si
Si
Especificidad
No
No
Si
Lmite de
deteccin
No
Si
No
Lmite de
cuantificacin
Si
Si
No
Linealidad
Si
Si
*
Intervalo
* Puede requerirse dependiendo de la naturaleza del ensayo.
Fsico
qumico
desempeo
Identificacin
*
Si
*
*
No
No
Si
No
No
*
*
No
No
2.1.4.4. PARAMETROS DE DESEMPEO

2.1.4.4.1. Exactitud. es la proximidad de los resultados de pruebas obtenidas por ese mtodo para un
valor verdadero, es decir, que expresa la contigidad de un resultado al valor verdadero, y la capacidad
del mtodo analtico para dar los resultados lo ms prximo posibles a dicho valor. S la diferencia entre
el valor encontrado y el valor verdadero es pequea, la exactitud es buena
2.1.4.4.2. Precisin. Es el grado de concordancia entre resultados de pruebas individuales cuando el

mtodo es aplicado repetidamente a mltiples muestras de una muestra homognea. Tambin indica el
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grado de reproducibilidad del mtodo analtico bajo condiciones normales de trabajo, es decir la
capacidad del mtodo para dar resultados semejantes cuando se aplica repetidamente a una muestra. La
precisin de un mtodo analtico es usualmente expresada por una desviacin estndar o una desviacin
estndar relativa.
2.1.4.4.3. Repetibilidad. Se refiere a la precisin del mtodo efectuado en las mismas condiciones, sobre
la misma muestra, por un mismo analista, en el mismo laboratorio, con los mismos aparatos y reactivos,
en el curso de la misma serie de anlisis efectuados Puede necesitarse utilizar dos concentraciones del
analito (alta y baja) o ms (alta, media y baja).
2.1.4.4.4. Reproducibilidad. Es la precisin de los resultados de un mtodo analtico efectuado sobre

la misma muestra, pero en condiciones diferentes. Su ensayo debe estudiar las principales condiciones
de variabilidad del mtodo analtico: tiempo (diferentes das), analista e instrumentos. La
reproducibilidad global se determina por el coeficiente de variacin. Si se desea estudiar el efecto de
cada una de las tres variables por separado (tiempo, analista e instrumentos), deber realizarse un anlisis
de varianza.
2.1.4.4.5. Robustez. Evala los efectos de pequeos cambios en las condiciones operacionales del
anlisis sobre la fiabilidad del mtodo analtico. Detecta factores que originan variaciones menores y los
que necesitan de una atencin especial debido a que dan origen a variaciones significativas.
2.1.4.4.6. Especificidad. Es la habilidad de fijar inequvocamente el analito en presencia de componentes

que se puedan creer presentes como impurezas, productos de degradacin o componentes matriciales.
2.1.4.4.7. Lmite de deteccin. Se considera como la cantidad de analito ms baja presente en una
muestra, que puede ser detectada pero no necesariamente cuantificada bajo las condiciones
experimentales. El lmite de deteccin es usualmente expresado como la concentracin del analito en la
muestra (ppm, %,).
2.1.4.4.8. Lmite de cuantificacin. La cantidad ms baja o mnima de analito en una muestra que ha
sido determinada con precisin y exactitud aceptable bajo condiciones experimentales establecidas. El
lmite de cuantificacin se expresa como la concentracin del analito en la muestra.
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2.1.4.4.9. Linealidad y rango. Es la habilidad de obtener resultados de las pruebas de forma directa o
por una transformacin matemtica bien definida, proporcional a la concentracin del analito en muestras
dentro de un rango dado. Dentro del trmino linealidad se encuentra implcita la proporcionalidad entre
la concentracin del analito y la respuesta.
2.1.5. MTODO DIFUSIN EN PLACA O CILINDRO PLACA

2.1.5.1. Fundamento
Se basa en la difusin del antibitico desde un cilindro vertical a travs de una capa de agar solidificada
en una placa de Petri hasta inhibir totalmente el crecimiento del microorganismo aadido, en un rea
circular o zona de inhibicin en torno del cilindro que contiene una solucin del antibitico.
2.1.5.1. Metodologa general para el ensayo segn USP38

Se colocan cantidades medidas de sustancias a ensayar en placas con medio de cultivo slido inoculado
con un microorganismo adecuado.
Las placas se incuban para permitir el desarrollo del microorganismo. Durante la incubacin el agente
antimicrobiano difunde hacia la zona que lo rodea y establece un gradiente de concentracin,
alcanzndose la 36 concentracin inhibitoria mnima a cierta distancia. Conforme el microorganismo
crece se forma un halo turbio, excepto en la regin donde la concentracin de la sustancia es por arriba
de la concentracin inhibitoria mnima; all es donde se observa una zona de inhibicin.
El tamao de dicha zona queda determinado por la sensibilidad del microorganismo, el tipo de medio de
cultivo, las condiciones de incubacin, la velocidad de difusin de la sustancia y su concentracin. La
zona obtenida es una zona clara (halo) de inhibicin del crecimiento en torno a los reservorios. La base
cuantitativa del ensayo es la relacin entre el dimetro de las zonas de inhibicin y la concentracin de
antibitico.
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2.1.5.2. Especificaciones de USP 38 para el mtodo difusin en placa o cilindro placa
2.1.5.2.1. Medios, microorganismos y estndar Seleccionar para cada antibitico el medio y diluente
adecuado y microorganismo a utilizar.
Preparar el medio agar que en forma lquida e inoculado y homogenizado con una suspensin de
microorganismos testigo y se coloca la cantidad de medio especificado para cada antibitico.
En el da del ensayo, preparar a partir de la solucin madre cinco o ms diluciones, por lo general, con
una diferencia de concentracin entre diluciones sucesivas en una proporcin de 1:1.25.
2.1.5.2.2. Material y cristalera

- Utilizar cajas de Petri de 100 x 20 mm con una capa de agar llamada capa base del medio adecuado.
- Utilizar cilindros de acero inoxidable con un dimetro externo de 8mm, dimetro interno de 6mm y
10mm de largo, a intervalos de 60 en un radio de 2.8 cm.
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CAPITULO III. HIPOTESIS
3.1. HIPOTESIS
3.1.1. HIPTESIS DE TRABAJO:
El mtodo analtico de potencia de antibitico para Gentamicina solucin inyectable, cumple con
los parmetros de validacin establecidos.
3.1.2. HIPTESIS NULA:

El mtodo analtico de potencia de antibitico de Gentamicina solucin inyectable no cumple con
los parmetros de validacin establecidos.
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CAPITULO IV. MATERIALES Y

METODOS
4.1. MATERIALES Y MTODOS

4.1.1. MATERIALES
4.1.1.1. Siembra de Staphylococcus epidermidis y obtencin de suspensin madre
1 placa de Petri 90 x 15 mm con agar antibitico N 1
2 tubos de 22x200 mm con agar inclinado de medio antibitico N 1
1 botella de Roux con agar antibitico N 1 o 2 Placas de Petri 90 x 15 mm con agar antibitico N 1
Perlas de ebullicin estriles
1 asa de platino
1 mechero
1tubo de ensayo 22 x 200 mm con 15 mL de solucin salina estril
1 balanza analtica
4.1.1.2. Estandarizacin de la suspensin de microorganismos

3 tubos de ensayo estriles de 22 x 200 mm
1 tubo de 9 mL de solucin estril para Blanco
1 Erlenmeyer de 50 mL estril
1 espectrofotmetro UV/Vis
2 pipetas morh de 5 mL estriles
1 frasco lavador
2 pipetas morh de 1 mL estriles (o micropipetas y puntas estriles)
6 tubos de ensayo de 15 x 200 mm con 9 mL de solucin salina estril
4.1.1.3. Preparacin de las placas de prueba

Placas de Petri 100 x 20 mm estriles
1 Erlenmeyer de 500 mL con 450 mL de Medio Antibitico N 11
1 balanza semianaltica
Bao mara a 45 C
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1 Erlenmeyer de 125 mL con 100 mL de Medio Antibitico N 11

1 pipeta monocanal de 100 a 1000 microlitros con puntas
2 pipetas Morh de 25 mL despuntadas estriles
2 pipetas Morh de 5 mL despuntadas estriles
4.1.1.4. Preparacin de las soluciones

4.1.1.4.1. Estndares
4.1.1.4.1.1. Preparacin de solucin stock
Estndar Gentamicina Sulfato (con Certificado con instrucciones de preparacin o con potencia
asignada).
Micro-esptula
Pipeta volumtrica
Balones volumtricos
Porta muestra estril
Balanza analtica
Beaker de 250 mL estril
250 mL de buffer fosfato pH 8.0 (B3) estril
4.1.1.4.1.2. Preparacin del estndar S1, S2, S3, S4 y S5.

Micro-bureta
Balones volumtricos
Beakers
Pipeta Pasteur
1 litro de buffer fosfato pH 8.0 (B3) estril
4.1.1.4.2. Muestras
Mnimo 15 viales de Gentamicina de 80 mg/2 mL
Jeringa de 3 mL para extraer contenido de los viales.
Erlenmeyer de 50 mL con rosca estril
Beaker de 100 o 250 mL
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Pipeta Pasteur
Agitador de vidrio estril
Pipetas volumtricas
Balones volumtricos
1.5 litros de buffer fosfato pH 8.0 (B3) estril
4.1.1.5. Colocacin y llenado de cilindros.

Bao de agua ajustado a 47.5 C
Cilindros de acero inoxidable
Micropipetas con capacidad para medir 200 microlitros
Pinzas estriles (o aparato colocador de cilindros) y molde para colocar cilindros
Puntas descartables estriles adecuadas para medir 200 microlitros
12 copitas medidoras
Incubadora a 36-37.5 C.
4.1.1.6. Lectura de Halos de inhibicin

Lector de halos de inhibicin (pie de rey, vernier, etc).
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4.2. METODOLOGA
4.2.1. Tipo de estudio

- Experimental: se basa a la realizacin de ensayos dentro de un laboratorio de control de calidad.
- Prospectiva: se desarrolla la investigacin segn la obtencin los resultados en un lapso de tiempo
determinado.
4.2.2. Tiempo y lugar

El desarrollo experimental se realiz en las reas fisicoqumicas y microbiolgicas del Laboratorio de
Control de Calidad USAM, donde se proporcionarn los estndares, reactivos, materiales y equipos
calificados para la validacin.
4.2.3. Universo y muestra

Las muestras son obtenidas comercialmente de farmacias provenientes de un laboratorio nacional,
utilizando de 15-20 viales de un mismo lote de fabricacin.
4.2.4. Recoleccin y Anlisis de los datos

La recoleccin de investigacin bibliogrfica se realiza en bibliotecas de Universidades nacionales y
bibliotecas virtuales de artculos cientficos relacionados con Validacin de Potencia de Antibiticos con
otros principios que no son de inters de este estudio, para la recoleccin de lecturas en los
procedimientos se utilizarn hojas diseadas para el uso previsto, luego sern introducidos en hojas de
clculos validadas predeterminados por el laboratorio.
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CAPITULO V. RESULTADOS Y
DISCUSIN
5.1. RESULTADOS
5.1.1. PROTOCOLO DE VALIDACION

DEL METODO ANALITICO
Pgina | 39
PROTOCOLO DE VALIDACIN
Pgina: 1 de 10
LABORATORIO CONTROL USAM
PROTOCOLO N: 30
Revisin: 0
Cdigo: PVGI30
Ttulo: VALIDACIN DE POTENCIA DE ANTIBIOTICO EN GENTAMICINA SOLUCION
INYECTABLE 80 mg/2mL POR EL MTODO DE CILINDRO-PLACA
Elaborado por:
Revisado por:
Eg. Ricardo Jos Aguiluz Moreno
Lic. Gracia Magaa
Eg. Nelson Salomn Zamora Daz
Lic. Martha Ruth Marroqun
Elaboracin: 07-06-2016
Aprobacin: 21-06-2016
1. OBJETIVO.
Demostrar que el Mtodo Analtico de la valoracin de Gentamicina Sulfato Inyeccin por Potencia
de Antibiticos es confiable, y proporcionar resultados consistentes y repetitivos que cumplen con
los parmetros de desempeo establecidos.
1.1.
ALCANCE:
Gentamicina Sulfato Inyeccin
1.2.
Formula Cuali-Cuantitativa:
Contenido declarado: 80 mg / 2 mL
2. RESPONSABLES:
Ricardo Jos Aguiluz Moreno
Nelson Salomn Zamora
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Pgina: 2 de 10
PROTOCOLO N: 30
Revisin: 0
Cdigo: PVGI30
Elaborado por:
Revisado por:
Lic. Gracia Magaa
2.1.
PARAMETROS A ESTUDIAR:
DEL MTODO:
Especificidad.
Exactitud.
Recobro.
Linealidad.
Precisin.
Repetibilidad.
Precisin Intermedia.
3. DESCRIPCIN DEL MTODO ANALTICO.

3.1.
Reactivos:
Solucin Amortiguadora B.3
Agar Antibitico N 11
Agar Antibitico N1
3.2.
Estndares:
Gentamicina Sulfato
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228
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Pgina: 3 de 10
PROTOCOLO N: 30
Revisin: 0
Cdigo: PVGI30
Elaborado por:
Revisado por:
Lic. Gracia Magaa
3.3.
Material a Utilizar:
Balones volumtricos de 100.0mL
Placas Petri de vidrio 20X100 mm
Cilindros de acero inoxidable de 8mm de dimetro externo y 6mm de dimetro interno, 10mm
de altura.
4. EQUIPOS:
-
Incubadora
Medidor de halos
Micro-pipeta
4.1.
Preparacin de reactivos.
Solucin amortiguadora B.3

Pesar 16.73g de fosfato bibsico de potasio y 0.523g de fosfato monobsico de potasio para 1 litro de
agua, pH despus de la esterilizacin 8.0 + 0.1
Agar antibitico N11
Agar Antibitico N1
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Pgina: 4 de 10
PROTOCOLO N: 30
Revisin: 0
Cdigo: PVGI30
Elaborado por:
Revisado por:
Lic. Gracia Magaa
5. PROCEDIMIENTO DE ENSAYO DE GENTAMICINA SULFATO

5.1 Condiciones generales para el ensayo
Mtodo de ensayo: cilindro placa
Medio de cultivo capa base: (Tabla 4) Medio antibitico N 11, 21 mL.
Medio de cultivo capa de siembra: (Tabla 3 inculo) Medio N 11, 4 mL (Tabla 5)
Microorganismo de prueba: (Tabla 3) Staphylococcus epidermidis ATCC 12228
Medio de preparacin de suspensin inculo: (Tabla 3) Medio antibitico N 1
Absorbancia de inculo a 580 nm: 25%T
Concentracin de inculo en el medio de cultivo: (Tabla 3) 0.03 mL por cada 100 mL de medio
Concentraciones de estndar: (Tabla 2) 1.92, 2.4, 3, 3.75 y 4.68 g/mL
Volumen de estndar o muestra a inocular en cada cilindro: 200 L.
Diluyentes de la prueba: (Tabla 2) B3 (Buffer fosfato pH 8, Tabla 12)
5.2 Tcnica
5.2.1 Estandarizacin del microorganismo de prueba

Tratar la cepa tipo KWIK-STIK pase 2, en presentacin de hisopos con el microorganismo de prueba
de la siguiente manera: Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, proceder a hisopar en todas las
direcciones sobre palcas conteniendo agar antibitico N1, incubar 24 horas de 32-35C al cabo de las
cuales se evidencia crecimiento; realizar lavados con SSN para colectar las colonias en tubos de ensayo;
leer en el espectrofotmetro hasta obtener una transmitancia del 25% a 580nm
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PROTOCOLO N: 30
Revisin: 0
Cdigo: PVGI30
Elaborado por:
Revisado por:
Lic. Gracia Magaa
5.2.2 Preparacin de la curva
Solucin Madre: Pesar exactamente una cantidad de estndar equivalente a 100 mg de Gentamicina
Sulfato Estndar Colocar en matraz volumtrico de 100 mL, disolver en B3 (1000 mcg/mL).
Curva de calibracin
-
De la solucin stock tomar una alcuota de 192 mcL, colocarla en un matraz volumtrico de 100
mL y llevar hasta el volumen con B3. Concentracin final: 1.92 g/mL
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PROTOCOLO N: 30
Revisin: 0
Cdigo: PVGI30
Elaborado por:
Revisado por:
Lic. Gracia Magaa
5.2.3 Preparacin de la muestra

Hacer un pool con 5 productos, seguir las instrucciones de la farmacopea para la preparacin previa y
hacer por triplicado las diluciones necesarias para llevar a una concentracin de 3 g/m.
80 mg
2 mL
0.1 mL
250.0 mL
1.9 mL
10.0 mL
5.3 Esquema
Colocar en cada placa Petri 6 cilindros, preparando las repeticiones segn el siguiente esquema
Una vez cargadas las placas de bioensayo se incubarn durante 16-18 h a 36-37.5 C (Tabla 6). El
antibitico presente en el medio difundir e inhibir el crecimiento del microorganismo inoculado, dando
lugar a halos de inhibicin de crecimiento. Los tamaos de los halos de inhibicin obtenidos se
encuentran entre los 11 y 19 mm.
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PROTOCOLO N: 30
Revisin: 0
Cdigo: PVGI30
Elaborado por:
Revisado por:
Lic. Gracia Magaa
6. PROCEDIMIENTO PARA VALIDAR CADA PARMETRO:

6.1.
Precisin, Linealidad, Exactitud del Mtodo.
LINEALIDAD DEL METODO ( EXACTITUD, PRECISION, RECOBRO Y ESPECIFICIDAD)

Slc
peso est mg V1 mL
Stockug/mL
10
100
100
exactitud
%
activo mg matriz Ml mL Solc.st ug
V1
C fin ug/mL
75
2,250
2
2,25
225,0
100
2,25
100
3,000
2
3
300,0
100
3,00
130
3,900
2
3,9
390,0
100
3,90
TOTAL
9,15
6
9,15
X3
27,45
18
27,45
El nmero total de determinaciones es de 9 (tres por cada nivel de concentracin).
NOTA: el estndar de trabajo que se utiliza para adicionar a las muestras debe ajustarse al 100%.
Preparacin de las soluciones madres de estndares: (POR TRIPLICADO)

Pesar 10.0mg de Estndar de Gentamicina Sulfato en baln volumtrico de 100.0mL
Aforar con Solucin Amortiguadora B.3 Concentracin final 100 ug/mL.
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PROTOCOLO N: 30
Revisin: 0
Cdigo: PVGI30
Elaborado por:
Revisado por:
Lic. Gracia Magaa
Preparacin de la muestra a 75%.

Tomar una alcuota de 2.25 mL de solucin MADRE DE ESTANDAR baln volumtrico de 100 mL y
agregar 2.0 mL de matriz llevar aforo con Solucin Amortiguadora B.3
Preparacin de la muestra a 100%. (Realizar tres alcuotas)

Preparacin de la muestra a 130%. (Realizar tres alcuotas)

Procedimiento:
Preparar 3 placas Petri por cada concentracin de la siguiente manera:
Agregar 21 mL de agar antibitico N11 y 4mL de capa inoculo, colocar 6 cilindros en cada placa a los
cuales se les colocara 200 L de cada concentracin segn corresponda.
Preparar 1 curva estndar segn lo descrito en 5
ESPECIFICIDAD
Preparar matriz y una muestra a una concentracin (matriz + St de Gentamicina) para comparar la
respuesta.
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Pgina: 9 de 10
PROTOCOLO N: 30
Revisin: 0
Cdigo: PVGI30
Elaborado por:
Revisado por:
Lic. Gracia Magaa
Preparacin de la Matriz:
Tomar 2 mL de matriz y transferir a un baln volumtrico de 100 mL con diluyente.
Preparacin de la muestra (matriz + principio activo):

Tomar una alcuota de 3.0 mL de solucin MADRE DE ESTANDAR baln volumtrico de 100mL y
Realizar las correspondientes Lecturas
6.2.
REPETIBILIDAD:
Preparar 6 determinaciones, preparando 6 estndares Gentamicina Sulfato y preparando 6 muestras de

un lote de producto terminado al 100% segn lo descrito en el numeral 5.
6.3.
PRECISION INTERMEDIA:
Se efectuar la precisin siguiendo las mismas indicaciones del apartado 6.2., utilizando como muestras
soluciones del mismo lote de producto terminado, en das diferentes, por dos analistas diferentes.
NOTA: Para la realizacin de este parmetro se pueden usar los resultados de la Repetibilidad de uno de
los analistas.
Pgina | 48
Pgina: 10 de 10
PROTOCOLO N: 30
Revisin: 0
Cdigo: PVGI30
Elaborado por:
Revisado por:
Lic. Gracia Magaa
7. CRITERIOS DE ACEPTACIN:
PARMETRO DE
REPORTAR
LIMITE
Respuesta despus de aplicar el mtodo
Solo debida al analito
DESEMPEO
1. Especificidad
RECOBRO
Prueba de Cochran
G exp < G tab
T Student
T exp < T tab
Porcentaje de recobro
98 -102%
LINEALIDAD DEL METODO

2. Exactitud
Coeficiente de determinacin (r2)

Pendiente (1)
Intervalo de confianza de la pendiente IC
(1)
Intervalo de confianza del intercepto IC (o)
Rango lineal
0.95
0
Incluye la Unidad
Debe incluir el cero
--------
PRECISION
3. Repetibilidad
4. Precisin
Intermedia
Coeficiente de variacin Global
2%
Promedio
--------
Coeficiente de variacin
2%
Promedio
--------
2%
Prueba de Fisher
F exp < F tab
Prueba T student
T exp < T tab
Pgina | 49
5.1.2. INFORME FINAL DE

VALIDACION
Pgina | 50
INFORME FINAL DE VALIDACIN

Pgina: 1 de 6
INFORME N: 30
Cdigo: IFGI30
Elaborado por:
Revisado por:
Lic. Gracia Magaa
INFORME FINAL
1. OBJETIVO:
Proporcionar todos los resultados obtenidos en la Validacin del Mtodo Analtico de Gentamicina
Sulfato por Potencia de Antibiticos para demostrar que es un mtodo confiable, consistente y
repetitivo que cumpli con los parmetros de desempeo establecidos.
2. ALCANCE:
Gentamicina Sulfato solucin inyectable
2.2.
Formula Cuali-Cuantitativa:
Contenido declarado: 80 mg / 2 mL
3. RESPONSABLES:
Ricardo Jos Aguiluz Moreno
Nelson Salomn Zamora Daz
Pgina | 51

Pgina: 2 de 6
INFORME N: 30
Cdigo: IFGI30
Elaborado por:
Revisado por:
Lic. Gracia Magaa
4. DESCRIPCION
DEL
METODO
ANALITICO
EMPLEADO
EN
LA
CUANTIFICACION
Ver Protocolo de Validacin cdigo: PVGI30, revisin 0, apartado 5.
6. RESULTADOS ANALTICOS Y ESTADSTICOS DE LA VALIDACION DE

GENTAMICINA SOLUCION INYECTABLE
EXACTITUD, LINEALIDAD, PRECISION Y ESPECIFICIDAD DEL METODO:
% Teorico
% Encontrado
Promedio
DS
Varianza
Sln 1
75
76,7
73,3
73,3
74,58
1,9245
3,7037
Sln 2
100
100,0
100,0
96,7
99,17
1,9245
3,7037
Sln 3
130
130,0
126,7
126,7
128,33
1,9245
3,7037
Gexp
0,3333
G tab.
0,870
Gexp<Gtab
EL FACTOR CONCENTRACIN NO INFLUYE EN LA
VARIABILIDAD DE LOS RESULTADOS
% Teorico
% Recuperacion
Sln 1
75
102,2
97,8
97,8
Sln 2
100
100,0
100,0
96,7
Sln 3
130
100,0
97,4
97,4
Pgina | 52
t exp
p
1,9374
0,05
Promedio
DS
98,81
1,82
DE VALIDACIN
% INFORME
Encontrado FINAL Promedio
DS
Varianza
% Teorico
Pgina:3,7037
3 de 6
LABORATORIO
CONTROL
USAM
76,7
73,3
73,3
74,58
1,9245
INFORME N: 30
Cdigo: IFGI30
Sln 2
100
100,0
100,0
96,7
99,17
1,9245
3,7037
Sln 3
130
130,0 POR
126,7
126,7
128,33
1,9245
3,7037
INYECTABLE
80 mg/2mL
EL MTODO
DE
CILINDRO-PLACA
Elaborado por:
Revisado por:
Lic. Gracia Magaa
Sln 1
75
Gexp
0,3333
G tab.
0,870
Gexp<Gtab
EL FACTOR CONCENTRACIN NO INFLUYE EN LA

VARIABILIDAD DE LOS RESULTADOS
% Teorico
% Recuperacion
Sln 1
75
102,2
97,8
97,8
Sln 2
100
100,0
100,0
96,7
Sln 3
130
100,0
97,4
97,4
t exp
p
n
n-1
1,9374
Promedio
DS
CV
t tab(P=0.05)
2,3060
98,81
1,82
1,84
CV<2
CUMPLE
0,05
9,0
8,0
PRECISION
texp<ttab
NO EXISTE DIFERENCIA SIGNIFICATIVA ENTRE
LA RECUPERACIN MEDIA Y 100
SE CONFIRMA LA BUENA EXACTITUD DEL
METODO
LINEALIDAD DEL METODO:

Numero
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Adicionado X(ug) Recuperado Y(ug)

2,25
2,3
2,25
2,2
2,25
2,2
3,0
3,0
3,0
3,0
3,0
2,9
3,9
3,9
3,9
3,8
3,9
3,8
Promedio y/x
DEST.F(Y/X)
CVf
b1
bo
0,98813Pgina
factor |de
53respuesta
0,01816
1,838157557
0,969474969 pendiente

Numero Adicionado X(ug) Recuperado Y(ug)
Pgina: 4 de 6
1
2,25
2,3
INFORME
N:
30
Cdigo: IFGI30
2
2,25
2,2
DE POTENCIA
DE ANTIBIOTICO EN GENTAMICINA SOLUCION
3 Ttulo: VALIDACIN
2,25
2,2
INYECTABLE
80
mg/2mL
POR
EL MTODO DE CILINDRO-PLACA
4
3,0
3,0
Revisado por:
5 Elaborado por:
3,0
3,0
Lic. Gracia Magaa
6
3,0
2,9
7
3,9
3,9
07-07-2016
8 Elaboracin:3,9
3,8
3,9
3,8
Promedio y/x
DEST.F(Y/X)
CVf
b1
bo
r
r
probabilidad
n
n-2
0,98813
0,01816
1,838157557
0,969474969
0,054212454
0,99481
0,99740
0,05
9
7
tn-2,0.05
factor de respuesta
pendiente
ordenada al origen
coeficiente de determinacin
coeficiente de correlacin
2,365 t de tabla
0,90690 b1 - t0.95,n-2 s b1 intervalo de confianza de la
1,03205 b1+ t0.95,n-2 s b1 pendiente
IC ( 1)
-0,14125 b0 - t0.95,n-2 s b0 intervalo de confianza de la

0,24968 b0 + t0.95,n-2 s b0ordenada
IC ( o)
2,3
Rango Lineal
3,9
mg
ug Recuperados
4,0
-1,00
-1,0
4,00
9,00
ug
Adicionados
Pgina | 54
14,00

Pgina: 5 de 6
INFORME N: 30
Cdigo: IFGI30
Elaborado por:
Revisado por:
Lic. Gracia Magaa
ESPECIFICIDAD
La respuesta al aplicar el mtodo es exclusivamente del analito.
REPETIBILIDAD
Numero
1
2
3
4
5
6
promedio
DS
CV
RESULTADO
%
97,0
97,1
97,7
97,4
98,2
97,1
97,4
0,462241
0,474499
CV<2
CUMPLE
PRECISION INTERMEDIA:
Analista
Promedio
Min (%)
Max (%)
DS
CV%
Varianza
Promedio
SD
CV%
S
NELSON
97,0
97,1
97,7
97,4
98,2
97,1
97,4
97,0
98,2
0,4622
0,4745
0,2137
97,5
0,4988
0,5115
0,26
RICARDO
98,4
97,4
97,1
97,5
98,2
97,1
97,6
97,1
98,4
0,5565
0,5701
0,3097 Pgina | 55

Pgina: 6 de 6
INFORME N: 30
Cdigo: IFGI30
INYECTABLE 80NELSON
mg/2mL POR EL MTODO
Analista
RICARDODE CILINDRO-PLACA
Elaborado por:
Revisado
97,0
98,4 por:
Lic. Gracia Magaa
Eg. Nelson Salomn Zamora Daz97,1
Lic.97,4
Martha Ruth Marroqun
97,7
97,1
97,4
97,5
98,2
98,2
97,1
97,1
Promedio
97,4
97,6
Min (%)
97,0
97,1
Max (%)
98,2
98,4
DS
0,4622
0,5565
CV%
0,4745
0,5701
Varianza
0,2137
0,3097
Promedio
97,5
SD
0,4988
CV%
0,5115
S
0,26
Criterio
Resultado
Fcal<Ftab
F-cal
1,45
Fcalc<Ftab
varianzas son estadisticamente iguales
t-cal
0,68
tcal<ttab
tcal<ttab
No hay diferencia entre los promedios
DECLARACION DE APTITUD DEL METODO
El mtodo es apto para el uso propuesto.
Pgina | 56
5.1.3. RESULTADOS DE PARAMETROS DE DESEMPEO

Tabla 2. Resultados de parmetros de desempeo
PARMETRO DE
REPORTAR
LIMITE
RESULTADOS
Respuesta despus de aplicar el

mtodo
Solo debida al
analito
Respuesta
debido solo al
analito
G exp < G tab
G tab=0.87
G exp=0.33
T exp < T tab
t tab=2.3
t exp=1.9
98 -102%
98.8%
DESEMPEO
1. Especificidad
RECOBRO
Prueba de Cochran
T Student
Porcentaje de recobro

2. Exactitud
0.95
0.99
0.97
Incluye la
Unidad
Debe incluir el
cero
0.906901.03205
-0.141250.24968
--------
2.3-3.9
Coeficiente de variacin Global
2%
1.8
Promedio
--------
97.4%
2%
0.47
Promedio
--------
97.5%
2%
0.5
Coeficiente de determinacin (r2)

Pendiente (1)
Intervalo de confianza de la
pendiente IC (1)
Intervalo de confianza del
intercepto IC (o)
Rango lineal
PRECISION
3. Repetibilidad
4. Precisin
Intermedia
Prueba de Fisher
F exp < F tab
Prueba T student
T exp < T tab
Pgina | 57
F tab=5.05
F exp=1.45
t tab=2.23
t exp=0.68
5.2. DISCUSIN DE LOS RESULTADOS

En la validacin de potencia de antibitico en Gentamicina solucin inyectable por el mtodo de cilindroplaca llevado a cabo en esta investigacin, los parmetros a estudiar se definen y se seleccionan en
funcin de las caractersticas de la muestra, tipo de mtodo analtico y rango de concentracin del analito.
En comparacin con otros trabajos de validacin de antibiticos o validaciones se encuentran

concordancias entres los parmetros fijados de estudio, como ya ha sido mencionado, los parmetros a
estudiar se establecen segn el tipo de metodologa, por ejemplo en la investigacin Validacin del
Mtodo de Anlisis por HPLC para Cremas de Hidrocortisona distribuidas en el pas se incluyen los
parmetros que en esta investigacin se estudiaron los cuales son: especificidad, exactitud, Repetibilidad
y precisin intermedia, en la investigacin Validacin de un Mtodo Analtico por Espectrofotometra
UV-Visible para la cuantificacin del contenido de cido Glutmico en Jarabes igualmente se estudian
los mismos parmetros pero incluyendo, linealidad del sistema Por qu la diferencia de agregar otro
parmetro de estudio, a qu se debe que no se incluya en la validacin de potencia de Gentamicina? La
validacin llevada a cabo en esta investigacin est basada bajo lineamientos establecidos USP, no se
realizan cambios al mtodo establecido, en cambio la validacin para la cuantificacin de cido
glutmico es un mtodo que ha sido modificado y acondicionado a nuevas condiciones del lugar donde
se lleva a cabo, por lo que se habla de un mtodo no oficial de la USP por lo tanto debe demostrar que
el mtodo empleado contribuye a la obtencin de resultados repetitivos.
Para la investigacin que se presenta, los parmetros en estudio son tomados de la Gua de Validacin
de mtodos fisicoqumicos del Organismo Salvadoreo de Acreditacin, ya que es el ente el cual ha
acreditado al laboratorio de control de calidad de la USAM, cumpliendo con todos los elementos de cada
parmetro de estudio que se reflejan en la tabla 2. Resultados de parmetros de estudio.
Por lo que se establece que el mtodo proporciona resultados repetitivo.
Lo novedoso del estudio es que como resultados se presenta el Protocolo de validacin y el Informe final
de validacin, dos documentos de suma importancia al momento de validar, requeridos segn el
Reglamento Centroamericano Validacin de Mtodos Analticos para la Evaluacin de la Calidad de
los Medicamentos as sirviendo como un molde a estudiantes de Qumica y farmacia y todo aquel
interesado en la validacin de mtodos analticos.
Pgina | 58
CONCLUSIONES
-
Los resultados obtenidos en el recobro nos indican que el factor concentracin no influye en la
variabilidad de los resultados con un G experimental de 0.3333 siendo menor al G de tablas que
es de 0.870. El porcentaje promedio de recobro obtenido (100.0%) est incluido en el Intervalo
de confianza de la media poblacional IC () que es 98-101%.
En cuanto a la linealidad del mtodo se puede concluir que existe buena correlacin entre los
microgramos de activo adicionados y los recuperados ya que se obtuvo un coeficiente de
determinacin de 0.9948 para y el Intervalo de confianza de la pendiente incluye la unidad
El mtodo tambin muestra precisin aceptable pues el coeficiente de variacin experimental es

1.84% y no sobrepasa el lmite 2%.
Se comprueba la Especificidad del mtodo ya que la placa que solamente contena matriz no
presento crecimiento de halos, lo contrario a la placa con matriz y estndar que, si tuvo
crecimiento de halos, corroborando as que la matriz no presenta interferencias para el principio
activo.
Se comprueba la Repetibilidad del mtodo con un Coeficiente de variacin menor a 2 % siendo

de 042%. De igual manera en la Precisin Intermedia la prueba de Fischer nos indica que los
datos experimentales en todos los puntos evaluados provienen de poblaciones con varianzas
similares ya que en todos los casos el F calculado no es mayor al de tablas. Por otra parte, tambin
se refleja que no existe evidencia de diferencia significativa entre las medias de cada una de las
series de porcentajes pues los valores de t experimental son menores al de t de tabla a un nivel
de confianza del 95%.
Se concluye que el mtodo es apto para el uso propuesto.
Pgina | 59
RECOMENDACIONES
-
Colocar la capa base sobre una mesa con un nivel comprobado para asegurar la uniformidad del
medio cultivo.
Colocar la capa inoculo habiendo esperado un tiempo prudencial, despus de haber colocado la
capa base.
Descartar para anlisis aquellas placas en las cuales no se logra una capa uniforme debido a que
puede contribuir a datos errneos.
Colocar los cilindros sobre la capa inoculo habiendo esperado un tiempo prudencial luego de
haber distribuido la capa inoculo.
Pgina | 60
BIBLIOGRAFA
1. Velandia Castellanos JC. (2008). Validacin Del Mtodo Analtico Para La Cuantificacin
De Bacitracina En El Laboratorio De Control De Calidad De Una Industria Farmacutica
Veterinaria. Cali, Colombia: Pontificia Universidad Javeriana.
2.
Farmacopea de Los Estados Unidos, USP 38, Formulario Nacional, NF 33. EE.UU. (2015).
3. R.T.C.A. (2006). Productos Farmacuticos, Validacin de Mtodos Analticos para la

Evaluacin de la Calidad de los Medicamentos. En Reglamento Tecnico Centro Americano.
Centro America.
4. Morales Meza JD. (2007). Implementacin y Desarrollo de la Tcnica de Potencia
Microbiolgica de Antibiticos y su Impacto Econmico en la empresa Calox de Costa Rica,
S.A. Costa Rica: Instituto Tecnolgico de Costa Rica. Escuela de Biologa: UCR.
5. Corado Hernndez, Silhy Zacaras. (2008). Validacin de un Mtodo Analtico por
Espectrofotometra UV-Visible para la cuantificacin del contenido de cido Glutmico en
Jarabes. Universidad Salvadorea Alberto Masferrer. Facultad de Qumica y Farmacia:
USAM.
6. Barrientos Cuellar AM, Bertrand Rodrguez FR. (2000). Validacin del Mtodo de Anlisis
por HPLC para Cremas de Hidrocortisona distribuidas en el pas. Universidad Salvadorea
Alberto Masferrer. Facultad de Qumica y Farmacia; USAM.
Pgina | 61
GLOSARIO
-
Especificidad; selectividad: Capacidad de evaluar, medir e identificar simultnea o

separadamente, los analitos de inters de forma inequvoca sin interferencias de impurezas,
productos de degradacin, compuestos relacionados, excipientes u otras sustancias
previsibles presentes en la matriz de la muestra.
Exactitud; veracidad: Es la proximidad entre los resultados de la prueba obtenidos mediante

ese mtodo y el valor verdadero.
Intervalo: amplitud entre las concentraciones inferior y superior de analito (incluyendo esos
niveles), en la cual se puede determinar el analito con un nivel adecuado de precisin,
exactitud y linealidad utilizando el mtodo segn se describe.
Linealidad: capacidad para obtener resultados de prueba que sean proporcionales ya sea
directamente o por medio de una transformacin matemtica bien definida, a la concentracin
de analito en muestras en un intervalo dado.
Mtodo analtico: Adaptacin especfica de una tcnica analtica para un propsito de

medicin seleccionado, en la cual se identifican los recursos materiales y el procedimiento.
Microorganismos viables: Organismos microscpicos como bacterias y hongos con

capacidad de reproduccin y dan lugar a la formacin de colonias.
Parmetros de desempeo analtico; parmetros de mrito o elementos requeridos para

el ensayo de validacin: Caractersticas de validacin que necesitan ser evaluadas y que
tpicamente corresponden a la siguiente lista: exactitud, precisin, especificidad, lmite de
deteccin, lmite de cuantificacin, linealidad e intervalo de linealidad.
Precisin: Expresa el grado de concordancia entre una serie de mediciones individuales

obtenidas de mltiples muestreos de una misma muestra homognea original o bien a partir
de varias muestras obtenidas por dilucin de la muestra bajo condiciones establecidas.
Existen tres formas de determinacin: repetibilidad, precisin intermedia y reproducibilidad.
Pgina | 62
Procedimiento analtico: Descripcin detallada de los pasos necesarios para aplicar un

mtodo analtico.
Validacin: Establecimiento de la evidencia documental que un procedimiento analtico

conducir con un alto grado de seguridad a la obtencin de resultados precisos y exactos
dentro de las especificaciones y atributos de calidad previamente establecidos.
Validacin de un procedimiento analtico: Procedimiento para establecer pruebas

documentales
que demuestren cientficamente que un mtodo analtico tiene las
caractersticas de desempeo que son adecuadas para cumplir los requerimientos de las
aplicaciones analticas pretendidas. Implica la demostracin de la determinacin de las
fuentes de variabilidad y del error sistemtico y al azar de un procedimiento, no slo dentro
de la calibracin sino en el anlisis de muestras reales.
Pgina | 63
ANEXOS
Pgina | 64
ANEXO I: CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

2016
2015
DIC
Actividad
3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2
Presentacin del tema

Primera reunin con
asesor
Recoleccin de
informacin
Revisin / segunda
reunin con asesor
Recoleccin de
informacin
Revisin asesor
Revisin de
observaciones
Presentacin de
anteproyecto
Revisin de
observaciones
Correccin de
observaciones
Ejecucin de practica
Procesamiento de los
datos
Revisin final por jurado
Defensa
Pgina | 65
ANEXO II. IMGENES PARTE EXPERIMENTAL
Preparacin de las pruebas, en imagen: USP38, Protocolo de validacin.
En imagen: Estndar de Gentamicina en frasco mbar, al final frascos con solucin buffer N 9
Pgina | 66
Preparacin: se muestra puntas para micropipetas, micropipeta, cristalera.
Frasco con bacterias S.epidermidids
Pgina | 67
Empaques con bacteria
Preparacin de la bacteria inoculo
Pgina | 68
En ambas imgenes se muestra la prueba la transmitancia del inoculo
Pgina | 69
Preparacin de soluciones para la curva con soluciones estndares
Balones con muestra de repetibilidad 1
Pgina | 70
Preparacin de soluciones de muestra, se observa en la parte derecha inferior los viales de muestra
Preparacin de los balones con soluciones de muestras, traslado de balones a copas de vidrio
Pgina | 71
Preparacin de la base a la cual se le inoculo la bacteria
Preparacin de las placas para adiccin de capa inoculada, en imagen se visualizan las placas, adems
la conexin de entrada de gas al mechero para evitar contaminacin ambiental en las placas.
Pgina | 72
Molde para la colocacin manual de cilindros de acero inoxidable sobre las bases de agar en la placa,
la flecha en crculo es la del inicio que concuerda con la flecha que las placas poseen.
Colocacin de cilindros de acero inoxidable sobre placas (foto demostrativa, placa no utilizada en el
proceso).
Pgina | 73
Llenado de cilindros colocados sobre las placas
Placas de curva del estndar con los cilindros llenados
Pgina | 74
Incubacin de placas
Incubadora
Pgina | 75
Placas despus de incubar y se les ha retirado el cilindro de acero inoxidable
Lector de halos
Pgina | 76
Halos de inhibicin de crecimiento bacteriano
Ajustando micrmetro para lectura de halos de inhibicin
Pgina | 77

Validacion de Potencia de Antibiotico

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UNIVERSIDAD SALVADOREA ALBERTO MASFERRER

FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA

TRABAJO DE GRADUACIN PARA OPTAR AL GRADO DE:

VALIDACIN DE POTENCIA DE ANTIBIOTICO EN GENTAMICINA SOLUCION

UNIVERSIDAD SALVADOREA ALBERTO MASFERRER

FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA

DR. CSAR AUGUSTO CALDERN

LICDA. DAYSI CAROLINA MARQUINA DE GMEZ

LIC. JULIO ALFREDO RIVAS HERNNDEZ

LIC. THELMO PATRICIO ALFARO RUGLIANCICH

LICDA. RAQUEL ARAYA DE CORNEJO

INDICE ............................................................................................................................................... iii

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ............................................................................... 11

1.2. ANTECEDENTES ...................................................................................................................... 12

2.1.2.6. Reacciones adversas .......................................................................................................... 22

4.1.1.2. Estandarizacin de la suspensin de microorganismos ..................................................... 33

El objetivo principal de esta investigacin fue la implementacin de los parmetros de desempeo:

Velandia Castellanos JC, Validacin del mtodo bacitracina, Colombia

CAPITULO I. PLANTEAMIENTO DEL

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Aguilar Chavarra MA. Control de Calidad de tres antibiticos de mayor consumo en El

El Control de Calidad se determin en los antibiticos siguientes: ampicilina, tetraciclina y

Morales Meza JD. Implementacin y Desarrollo de la Tcnica de Potencia Microbiolgica de

Se establece y estandariza el protocolo para llevar a cabo la prueba de potencia o actividad de

1.3. JUSTIFICACIN DE LA INVESTIGACIN

1.5.2. Objetivos especficos

CAPITULO II. MARCO TERICO

2.1. MARCO TEORICO

Se han detectado pequeas cantidades de Amino-glucsidos en la orina semanas despus de haberse

2.1.2.2. Posologa y administracin

2.1.2.2.2. Administracin intravenosa La administracin intravenosa de gentamicina puede ser

2.1.2.2.3. Administracin subconjuntival y administracin subcapsular (capsula de tenon) La

2.1.2.4. Contraindicaciones Pacientes con antecedentes de hipersensibilidad o reacciones txicas

Precauciones y advertencias Los enfermos tratados con Aminoglucsidos deben

protenas, o presencia de clulas o cilindros. Peridicamente debe determinarse el nitrgeno ureico en

2.1.3. Staphylococcus epidermidis.

2.1.3.3. Morfologa microscpica

2.1.3.6. Resistencia a agentes fsicos y qumicos

2.1.3.7. Resistencia antibitica

2.1.3.7.1. Resistencia a -lactmicos

La validacin de un procedimiento analtico es un proceso que establece, mediante estudios en

2.1.4.2. Mtodos Susceptibles a ser Validados

2.1.4.3. Datos requeridos para la validacin de una determinacin

2.1.4.4. PARAMETROS DE DESEMPEO

2.1.4.4.2. Precisin. Es el grado de concordancia entre resultados de pruebas individuales cuando el

2.1.4.4.4. Reproducibilidad. Es la precisin de los resultados de un mtodo analtico efectuado sobre

2.1.4.4.6. Especificidad. Es la habilidad de fijar inequvocamente el analito en presencia de componentes

2.1.5. MTODO DIFUSIN EN PLACA O CILINDRO PLACA

2.1.5.1. Metodologa general para el ensayo segn USP38

2.1.5.2. Especificaciones de USP 38 para el mtodo difusin en placa o cilindro placa

2.1.5.2.2. Material y cristalera

CAPITULO III. HIPOTESIS

3.1.2. HIPTESIS NULA:

CAPITULO IV. MATERIALES Y

4.1. MATERIALES Y MTODOS

4.1.1.2. Estandarizacin de la suspensin de microorganismos

4.1.1.3. Preparacin de las placas de prueba

1 Erlenmeyer de 125 mL con 100 mL de Medio Antibitico N 11