TP de Cromatografia

PARTE EXPERIMENTAL
EQUIPO Y MATERIAL
Tubos de ensayo
Gradilla
Papel de filtro Whatman N1
Pipeta capilar
Pipeta
Vidrio de reloj
Regla
Estufa
Placas de silica gel.
Cuba de vidrio
OBJETIVOS
Identificar a travs de una cromatografa en papel la naturaleza de una

muestra incgnita en comparacin con la de un colorante patrn. (RF).
Analizar el avance producido sobre las tiras de papel de filtro por cada
uno de los solventes empleados.
Mediante una cromatografa en capa delgada se comprobar la

presencia de colorantes (carotenos) en una muestra del extracto vegetal
obtenido anteriormente en el TPL de extraccin.
PROCEDIMIENTO
Para la cromatografa en papel:
Se nos entrega 2 compuestos distintos; uno, el colorante patrn,

presenta el color rojo Congo, y la muestra incgnita una coloracin violeta
Comenzamos colocando en 3 tubos de ensayo cada uno de los

solventes en una cantidad relativa tal que alcance 1,5cm de altura desde el
fondo. Procedemos a su carga bajo la campana de gases. Los solventes
correspondientes fueron:
A. 3:1 ol-isopropil + NH4OH

B. 3:1 n-butanol + NH4OH
C. ol amlico + NH4OH
Colocados los solventes tapamos los tubos con un con un tapn de

corcho y los ubicamos en la gradilla de trabajo. Cortamos tiras de papel de filtro
Whatman N1 de 1cm por 16cm de largo. Previo a comenzar el sembrado
practicamos en otros papeles la pipeta capilar a emplear, siendo que permita
un sembrado pequeo y parejo. Elegida la pipeta comenzamos. Sobre una
misma tira de papel aplicaremos 2 muestras debidamente separadas; la
incgnita y el colorante patrn, a una distancia del final de la tira de 2cm.,
puesto que el solvente en el tubo alcanza una altura de 1,5cm desde el fondo y
no queremos que la muestra se sumerja en l. Para ayudarnos marcamos con
un lpiz de grafito los puntos en que se har el depsito. Repetimos el
sembrado unas 8 veces hasta lograr una alta concentracin de ambos
compuestos.
Numeramos las tiras de papel con lpiz (A, B y C) y procedemos a

colocarlas dentro de los tubos de ensayo, evitando realizar presin sobre el
fondo y cuidando que el solvente no se agite y alcance la altura del sembrado.
Tapamos con los corchos revisando que estos no tengan escape, ni presionen
las tiras de papel. Esperamos entre 30 a 40 minutos a que se produzca el
ascenso por capilaridad.
Pasado el tiempo y
observando que ya no se
produzca ascenso del solvente
en la tira de papel cortamos el
proceso, extrayendo las tiras
sobre una hoja de papel. All
procedemos a marcar con lpiz
el punto mximo que haya
alcanzado cada uno de los
solventes (no la coloracin).
Para finalizar las llevamos a una estufa para su secado. Una vez extrado de all
observamos unas coloraciones en la zona baja de las tiras. Calculamos el RF de
cada uno de los compuestos en cada solvente. En nuestro caso el RF de la
muestra incgnita en los 3 casos fue 1, puesto que el color violeta siempre
alcanzo el punto mximo de ascenso del solvente. En cambio el del patrn
siempre fue muy cercano a 0 ya que prcticamente no se observo ascenso de la
marca de este pigmento sobre las tiras de papel. Comparando los resultado con
los obtenidos por otros grupos podemos concluir que nuestra muestra
incgnita est compuesta por el colorante rojo Congo (que ensayamos) y el
colorante violeta de malaquita que presento un RF de 1 en los dems grupo.
Para la cromatografa en capa delgada:
Sobre una placa de gel de slice de 0.25mm de espesor vamos a

proceder a sembrar, con una pipeta capilar, una muestra del extracto vegetal
extrado en el TPL de Extraccin. Llenamos una cuba de vidrio con unos ml de
una solucin de Benceno: Acetona (70/30) y tapamos con un vidrio de reloj.
Repetido varias veces el proceso de sembrado procedemos a colocar la placa
dentro de la cuba que ya contiene la solucin, tomando total precaucin al
momento de depositarla dada la fragilidad que presenta. Tapamos con el vidrio
de reloj y esperamos unos minutos a que comience a ascender. En este caso
elegiremos el momento en el cual detener el ascenso del solvente, unos 2cm
antes del borde final.
Pasado un tiempo
extraemos la placa de la solucin y
la colocamos en la estufa para
poder apreciar mejor los tonos que
aparecieron. Podemos observar una
ligera coloracin amarillenta en la
parte media del ascenso, un poco
ms fuerte en la parte superior y en
contacto con el alcance mximo del
solvente una coloracin naranja.
Justamente estos pigmentos
corresponden a los 3 ismeros ,
carotenos.

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Identificar a travs de una cromatografa en papel la naturaleza de una

Mediante una cromatografa en capa delgada se comprobar la

Para la cromatografa en papel:

Se nos entrega 2 compuestos distintos; uno, el colorante patrn,

Comenzamos colocando en 3 tubos de ensayo cada uno de los

A. 3:1 ol-isopropil + NH4OH

Colocados los solventes tapamos los tubos con un con un tapn de

Numeramos las tiras de papel con lpiz (A, B y C) y procedemos a

Para la cromatografa en capa delgada:

Sobre una placa de gel de slice de 0.25mm de espesor vamos a

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