Determinacion de Compuesstos Polifonicos

UNIVERSIDAD CATLICA DE SANTA MARA
FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS, BIOQUMICAS Y

BIOTECNOLOGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUMICAS
DETERMINACIN DE COMPUESTOS POLIFENLICOS Y EVALUACIN DEL

EFECTO ANTIOXIDANTE DEL FRUTO DE Physalis peruviana AGUAYMANTO
COMPARADO CON SU PRODUCTO LIOFILIZADO
Tesis presentada por los bachilleres en

Farmacia y Bioqumica:
ARROYO OVIEDO, LEVIN OVAL
DELGADO ANYOSA, LUIS ALONSO
Para optar el Ttulo Profesional de:

QUIMICO FARMACUTICO
Asesor: Ph.D. JAIME CARDENAS GARCIA
Arequipa- Per
2016
DEDICATORIA
Dedico este trabajo de tesis sobre todo a Dios, a la Virgen del Rosario por
iluminarme y derramar sus bendiciones para concluirla, y darme las fuerzas para
poder seguir adelante con todos mis proyectos.
A mis abuelos Cancio Arroyo y Manuel Oviedo por sus sabios consejos, ya que
desde el cielo me cuidan.
A mi madre ya que t eres la fuerza que me empuja a seguir hacia adelante,

gracias por tus consejos y reprimendas.
A mi padre por apoyarme en mi carrera universitaria y ser el ejemplo de

superacin.
A mis hermanos Michael y Rub por apoyarme incondicionalmente en mi vida.
Especialmente este trabajo lo dedico a mi hija Amber Valeria ya que ella es la

fuerza para continuar y mis ganas de vivir te amo hijita linda.
A mi esposa Carmen por ser la fuerza en mi hogar y ayudarme a superarme cada

da de mi vida quien amo y adoro en esta vida.
Hay hombres que luchan un da y son buenos. Hay otros que luchan un ao y
son mejores. Hay quienes luchan muchos aos, y son muy buenos. Pero los hay
que luchan toda la vida: esos son los imprescindibles.
Bertolt Brecht
Levin Oval Arroyo Oviedo
Dedico este trabajo de tesis a Dios y a la Virgen Mara por estar siempre conmigo y
darme su amor bondad y fuerzas para seguir adelante y no darme por vencido, a
pesar del tiempo y los obstculos permitindome lograr mis objetivos.
A mi madre Blanca Yanina Anyosa Gutirrez por apoyarme siempre por sobre
todas las cosas, por ser la persona ms querida en mi vida, sin su ayuda no hubiese
terminado esta tesis muchas gracias te amo te quiero mucho mam
A mi mami Leandra Jess que siempre desde el cielo me ilumina y me cuida y por
siempre te llevare en mi corazn.
A mi ta Lucero Jess por ser el faro que me gua y me aconsejo en toda mi vida
universitaria.
A mi ta Katy por apoyarme y empujarme a seguir adelante en mi vida profesional.
Luis Alonso Delgado Anyosa
ii
AGRADECIMIENTOS
Nos gustara agradecer a todas las personas que nos ayudaron y apoyaron para
concluir este trabajo de tesis.
Agradecimiento especial al Dr. Jaime Crdenas por brindarnos su ayuda,

tiempo y paciencia como tambin sus consejos para asesorarnos y concluir este
trabajo de tesis.
De igual importancia agradecemos Dra. Jess Zambrano por ser una gran
persona brindndonos sus consejos y apoyo para culminar este trabajo de tesis.
Al Dr. Juan Ramrez por sus consejos y apoyo para las correcciones de este
trabajo.
Al Dr. Fernando Torres por ayudarnos en la redaccin y consejos para nuestra

tesis.
Al laboratorio de control de calidad por su apoyo incondicional y amistad

brindada por tanto tiempo y al Dr. Jos Villanueva por brindarnos informacin
y ayuda con los reactivos. De corazn muchas gracias a todos.
iii
INDICE DE CONTENIDOS
DEDICATORIA.......I
AGRADECIMIENTOS............III
RESUMEN.......VII
ABSTRACT........X
INTRODUCCION...1
OBJETIVOS............3
HIPOTESIS.........4
CAPITULO I
MARCO TEORICO
1.1 PHYSALIS PERUVIANA AGUAYMANTO.........5
1.1.1 CLASIFICACION TAXONOMICA........6
1.1.2 DISTRIBUCION GEOGRAFICA, REQUERIMIENTOS CLIMATICOS.........7
1.1.3 DESCRIPCION BOTANICA.......7
1.1.4 USOS Y PROPIEDADES MEDICINALES.....10
1.2 RADICALES LIBRES, ESTRS OXIDATIVO Y ANTIOXIDANTE.....12
1.2.1 RADICALES LIBRES.........12
1.2.2 DAO PRODUCIDO POR LOS RADICALES LIBRES........14
1.2.3 ESTRS OXIDATIVO....15
1.2.4 ANTIOXIDANTES..,.......16
1.2.4.1 CLASIFICACION DE LOS ANTIOXIDANTE........17
1.3 COMPONENTES BIOACTIVOS CON CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DE

PHYSALIS PERUVIANA....18
1.3.1 COMPUESTOS FENLICOS.......18
1.3.2 ACCION ANTIOXIDANTE DE LA VITAMINA C........19
iv
1.3.3 CAROTENOIDES........20
1.3.4 FLAVONOIDES.......22
1.3.5 ACCION ANTIOXIDANTE DE LOS FLAVONOIDES FRENTE A RADICALES

LIBRES......24
1.3.6 WITHANOLIDOS...25
1.3.7 FISALINAS.......26
1.4 LIOFILIZACION...27
CAPITULO II
MATERIALES Y METODOS
2.1 LUGAR DE INVESTIGACION.29
2.2 MATERIALES..29
2.2.1 MATERIAL VEGETAL...29
2.2.2 REACTIVOS QUIMICOS....29
2.2.3 MATERIAL DE LABORATORIO..30
2.2.4 EQUIPOS....31
2.3 METODOS.....31
2.3.1 RECOLECCION, SELECCIN Y ALMACENAMIENTO DE LA

MUESTRA.......31
2.3.2 OBTENCION DE EXTRACTO 32
2.3.2.1. METODO: SISTEMA DE EXTRACION POR EQUIPO SOXHLET..32
2.3.2.1.2 FUNDAMENTO....33
2.3.2.1.3 PROCEDIMIENTO......33
2.4 METODO GRAVIMETRICO: DETERMINACION DEL EXTRACTO

SECO....34
2.4.1 FUNDAMENTO.34
2.4.2PROCEDIMIENTO....34
2.5 LIOFILIZACION.35
2.5.1 PROCEDIMIENTO.....35
2.6 ANALISIS POR CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA (CCF).......36
2.6.1 FUNDAMENTO.......37
2.6.2 PROCEDIMIENTO.....37
2.6.3 FACTOR DE RETRASO........38
2.6.4 IDENTIFICACIN DE METABOLITOS SECUNDARIOS.....38
2.7 DETERMINACION DE COMPUESTOS POLIFENOLICOS TOTALES (CPT).39
2.7.1 METODO DE FOLIN-CIOCALTEU....39
2.7.2 DETERMINACION DE COMPUESTOS POLIFENOLICOS POR

ESPECTROFOTOMETRIA........41
2.8 DETERMINACION DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTES...44
2.8.1 METODO CUPRAC (ION CUPRICO REDUCCION DE LA CAPACIDAD

ANTIOXIDANTE)....44
2.8.2 DETERMINACION DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE POR

ESPECTROFOTOMETRIA....45
CAPITULO III
RESULTADOS Y DISCUSION
3.1.- RECOLECCION......47
3.2.- PREPARACION DE LOS EXTRACTOS Y LA DETERMINACION DEL

PORCENTAJE DE RENDIMIENTO.....48
3.2.1 OBTENCION DE EXTRACTOS.......48
3.2.1.1 EXTRACTO ETANOLICO OBTENIDO POR EL METODO DE

EXTRACCION SOXHLET.48
3.2.1.2 EXTRACTO METANOLICO OBTENIDO POR EL METODO DE

EXTRACCION SOXHLET.........50
3.2.1.3 EXTRACTO HEPTANICO OBTENIDO POR EL METODO DE

EXTRACCION SOXHLET.51
3.3 LIOFILIZACION DE MUESTRA DE PHYSALIS PERUVIANA...52
3.4 CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA ...53
vi
3.4.1 ANLISIS FITOQUIMICO PRELIMINAR: CROMATOGRAFA DE CAPA

FINA...53
3.5 DETERMINACION DE COMPUESTOS POLIFENOLICOS TOTALES (CPT).56
3.5.1 EXTRACTO ETANOLICO DESECADO POR MTODO SOXHLET....61
3.5.2 EXTRACTO METANOLICO DESECADO POR MTODO SOXHLET....62
3.5.3 EXTRACTO ETANOLICO LIOFILIZADO POR MTODO SOXHLET...63
3.5.4 EXTRACTO METANOLICO LIOFILIZADO POR MTODO SOXHLET..64
3.6 DETERMINACION DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE POR EL METODO

DE CUPRAC......65
3.7 ANLISIS COMPARATIVOS DE LAS MUESTRAS.......73
3.8 ANALISIS ESTADISTICO....75
IV. DISCUSIN....80
V. CONCLUSIONES....81
VI. SUGERENCIAS.........82
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS....83
VIII. ANEXOS......89
vii
RESUMEN
El presente trabajo de investigacin se utiliz el fruto de la Physalis peruviana

Aguaymanto, la muestra fue recolectada del distrito de Orcopampa, provincia de
Castilla departamento de Arequipa; las cuales se realizaron dos tipos de tratamiento.
Una primera muestra fresca se seleccion de acuerdo a la Norma tcnica Colombiana

(NTC 4580) de acuerdo a su color y tamao, se cort en rodajas y se llev al horno
desecador por un tiempo de 7 horas a una temperatura de 60C. Se pesaron 10
gramos de dicha muestra y se realiz las extracciones con el mtodo de Soxhlet con
los solventes: etanol, metanol y heptano, se obtuvo el porcentaje de rendimiento de
30.96%, 42,27% y 0,102% respectivamente.
La segunda muestra de aguaymanto se dio un tratamiento de liofilizacin, el cual se
cort en mitades y se llev al equipo liofilizador, se pes 10 gr de dicha muestra y se
llev al equipo de extraccin Soxhlet usando como solventes: etanol, metanol y
heptano, se obtuvo el porcentaje de rendimiento de 44.82%, 54,77% y 0,815%
respectivamente.
En el proceso de investigacin se dej de lado el extracto con heptano ya que este

solvente es apolar y la extraccin con dicho solvente era poco significativa para la
investigacin.
viii
Se determin el contenido de compuesto fenlicos totales por el mtodo de Folin-

Ciocalteu el cual los valores son 145.92 mg GAE/10 g de extracto etanolico
desecado y de 151,053 mg GAE/10 g de extracto etanolico liofilizado obtenido por
mtodo Soxhlet, y la muestra metanolica los valores son de 123,757 mg GAE/10 g
de extracto metanolico desecado y de 137,025 mg GAE/10 g de extracto metanolico
liofilizado obtenido por mtodo Soxhlet.
Finalmente se determin la capacidad antioxidante mediante el mtodo de CUPRAC

donde la mayor capacidad antioxidante se obtuvo en la muestra liofilizada, para los
extractos etanolicos liofilizado se obtuvo 13.8 mmol Eq de cido ascrbico/10 g
muestra , el extracto metanolico de la muestra liofilizada se obtuvo un valor de 12.9
mmol Eq de cido ascrbico/10 g muestra; en la muestra desecada el extracto
etanolico tiene un valor de 8,7 mmol Eq de cido ascrbico/10 g , el extracto
metanolico de la muestra desecada se obtuvo un valor de 7,2 mmol Eq de cido
ascrbico/10 g.
La mayor capacidad antioxidante y compuestos fenlicos se determin en la muestra
liofilizada tanto en los extractos de muestras etanolica y metanolica realizando las
extracciones de los principios activos por el mtodo.
ix
ABSTRACT
The present research the fruit of Physalis peruviana "Aguaymanto" used the sample
was collected from Orcopampa district, province of Castilla department of Arequipa;
which two types of treatment were made.
A first fresh sample was selected according to the Colombian Technical Standard
(NTC 4580) according to their color and size, cut into slices and took the desiccator
oven for a time of 7 hours at a temperature of 60 C. 10 grams of the sample were
weighed and the extractions was performed with the Soxhlet method with solvents:
ethanol, methanol and heptane, 30.96 percent yield%, 42.27% and 0.102%
respectively was obtained.
The second sample aguaymanto treatment lyophilization, which was cut into halves
and took the lyophilizer equipment, gave 10 g of the sample was weighed and
brought to the equipment Soxhlet extraction using as solvents: ethanol, methanol and
heptane, the percentage of 44.82% yield, 54.77% and 0.815% respectively was
obtained.
In the research process was set aside extract with heptane as this is nonpolar solvent
and said solvent extraction was insignificant for research.
the content of total phenolic compound was determined by the Folin-Ciocalteu which
values are 145.92 mg GAE / 10 g of dried ethanol extract and 151.053 mg GAE / 10
g of freeze-dried ethanolic extract obtained by Soxhlet method, and the sample
methanolic values are of 123.757 mg GAE / 10 g of dried methanol extract and
137.025 mg GAE / 10 g of freeze-dried extract obtained by Soxhlet methanolic
method.
Finally antioxidant capacity was determined by the method CUPRAC where the
highest antioxidant capacity was obtained in the lyophilized sample, for the ethanolic
extracts lyophilized 13.8 was obtained mmol Eq ascorbic / 10 g sample acid,
methanolic extract of lyophilized sample was obtained a value of 12.9 mmol ascorbic
Eq / 10 g sample acid; in the sample dried ethanolic extract has a value of 8.7 mmol
of ascorbic Eq / 10 g acid, methanolic extract dried sample a value of 7.2 mmol of
ascorbic Eq / 10 g acid was obtained.
The highest antioxidant capacity and phenolics determined in the lyophilized sample
both ethanolic extract methanolic samples and performing the extractions of the
active ingredients by the method.
xi
INTRODUCCION
El Per es un pas muy propicio para el cultivo de frutos, tiene una enorme variedad
de suelos y climas, hace que sea ideal para el desarrollo de estas diversidades de
frutos.
La Physalis peruviana ms conocida en el Per por el nombre de aguaymanto fue
una fruta nativa consumida por antiguos peruanos tales como los incas y cultura
anteriores a esta, se relata que en el jardn de los nobles emperadores incas, el
aguaymanto ha sido una de sus plantas preferidas, que fue cultivada en el valle
sagrado de los incas con dedicacin.
A nivel de amrica posee distintos nombres en varios dialectos, en quechua topo

topo en aymara Uchuva ,cuchuva en espaol se denomina Guinda serrana,
aguaymanto, tomatillo, uvilla (Per);en Bolivia se denomina capul o
motojobobo embolsado; En Colombia Uchuva uvilla guchuva en Venezuela
se conoce como cereza de judas , Topo-topo en Ecuador se la conoce como
uvilla y en Mxico como cereza del Per; por su parte en ingles se le conoce
como Golden Berry , cape gooseberry, giant groundcherry, peruvian groundcherry,
peruvian cherry(U.S) poha (Hawai), jam fruit (india) Physalis. (1)
Numerosas publicaciones confieren a la especie propiedades beneficiosas para el ser

humano, tanto medicinales como nutricionales. Posee vitaminas A, C y complejo B
(rico en pectinas), adems de hierro y fsforo. Por lo tanto, este fruto puede tener
ms de un uso: alimenticio, medicinal y tambin ornamental. En cuanto al uso
alimenticio puede optar distintas vas de comercializacin, como fruto fresco (con/sin
cliz), fruto congelado, fruto deshidratado o fruto para proceso industrial
(mermeladas, pulpa, nctares, conservas).
Los antioxidantes constituyen un grupo de sustancias que, cuando estn presentes en

bajas concentraciones, inhiben o retrasan los procesos oxidativos, a travs de
mecanismos que con llevan a su propia oxidacin. Los suplementos antioxidantes de
las frutas que contienen antioxidantes, pueden ser usados para reducir los daos
oxidativos relacionados con la edad y con enfermedades como la arterioesclerosis

purificar la sangre, tonifica el nervio ptico y es benfica para diabticos, entre otros.
Se estudi la capacidad antioxidantes y determinacin de compuestos polifenlicos

totales que estn presentes en el fruto de Physalis peruviana, y as fomentar el
consumo de aguaymanto en la dieta diaria y as prevenir enfermedades causadas por
procesos oxidativos, y de contribuir a la investigacin de la flora cientfica del Per.
OBJETIVOS
1. Obtener extractos metanolicos y etanolicos de las muestras desecadas y
liofilizadas de Physalis peruviana Aguaymanto por mtodo Soxhlet y
determinacin de componentes bioactivos por cromatografa de capa fina.
2. Determinacin de los compuestos polifenlicos totales por mtodo de Folin-
Ciocalteu y capacidad antioxidante por mtodo de Cuprac de los extractos
etanolicos y metanolicos del fruto de Aguaymanto
3. Comparacin cuantitativa de los compuestos fenlicos totales y capacidad
antioxidante de los extractos del fruto de Aguaymanto obtenidos en el
proceso de liofilizacin y desecacin por estufa.
HIPOTESIS
Dado que algunos componentes polifenlicos presentes en el fruto de aguaymanto

podran tener efecto antioxidante, es probable que estos componentes varen en su
composicin cualitativa y cuantitativa, luego del proceso de liofilizacin.
CAPITULO I
MARCO TEORICO
1.1 Physalis Peruviana Aguaymanto
El Aguaymanto pertenece al gnero Physalis y comprende entre 75 y 90 especies

familia Solanceas, cuyos frutos se forman y permanecen dentro del cliz durante
todo su desarrollo. Existen dudas si el Aguaymanto (Physalis peruviana l.) es
originaria del Per (2) o proviene del Brasil y que ha sido adaptado en los altiplanos
de Per y Chile (3), mientras Bartholomus et al. (1990) (4) reportan que viene del
Ecuador y Per. La planta crece en zonas altas entre Chile y Colombia en forma
silvestre y semisilvestre. En Colombia, las exportaciones iniciaron hace 20 aos y
durante ms de 10 aos ocupa el segundo lugar de exportacin despus del banano.
(5)
No se conocen variedades o cultivares de este fruto, slo ecotipos o clones
procedentes de diferentes regiones, las que han sido seleccionadas por tamao, color,
sabor y forma del cliz. Los ms comunes son los ecotipos denominados
Colombia, Sudfrica y Kenia.
Los nombres comunes con que se le conoce son:Tomatillo; Aguaymanto (centro y
sur del Per); capul (centro del Per, no confundir con el capul Prunus sertina);
uvilla (Cajamarca); Otros: topotopo ; uchuva, motojobobo, embolsado (Bolivia). (6)
1.1.1 CLASIFICACION TAXONOMICA
La clasificacin taxonmica de Physalis peruviana L., segn la National Plant

Center USDA (2000) es:
Figura N1.1 Physalis peruviana Aguaymanto

Fuente gua de campo de los cultivos andinos (2007)
Tabla 1.1 Clasificacin taxonmica de Physalis peruviana (6)
REINO Plantae
SUBREINO Tracheobionta
DIVISION Angiospermae
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Asteridae
ORDEN Solanales
FAMILIA Solanaceae
GENERO Physalis
ESPECIE Physalis peruviana L.
FUENTE: Elaboracin propia, 2016
1.1.2 DISTRIBUCION GEOGRAFICA, REQUERIMIENTOS CLIMATICOS
En el Per se cultiva en la zona agroecolgica Quechua de clima templado a

templado frio, en localidades ubicadas en la sierra de Ancash, Hunuco, Junn,
Ayacucho, Arequipa y Cuzco, generalmente en huertos familiares, pero tambin en
los bordes de chacras, de zanjas y caminos o intercalados con otros cultivos. En
Cajamarca se le cultiva sobre todo en las provincias de Cajamarca, Chota,
Cajabamba y San Marcos. Se ha iniciado su cultivo en forma comercial en pequeas
reas, existiendo excelentes posibilidades de extender su cultivo.
Actualmente, se ha extendido a casi todas las tierras altas de los trpicos y a varias
partes de los subtropicos, incluyendo Malasia, China y el Caribe.
El aguaymanto prospera desde el nivel del mar hasta los 3 300 msnm. Puede soportar
bajas temperaturas, pero sufre daos irreparables por debajo de 0 C; su crecimiento
es afectado si persisten temperaturas menores a 10 C. La temperatura ptima es de
18 C; temperaturas muy altas pueden perjudicar la floracin y fructificacin.
Requiere gran luminosidad y debe protegerse del viento excesivo. Debe contar con
suficiente agua durante el crecimiento inicial, no as durante la maduracin de los
frutos. Es una planta con alto potencial, ya que crece en suelos pobres, pero bien
drenados, y tiene bajos requerimientos de fertilizacin. (7)
1.1.3 DESCRIPCION BOTANICA
Se trata de una planta de tipo herbceo a semi-arbustiva, erecta, perenne en zonas

subtropicales y que puede alcanzar una altura de entre 0,6 a 0,9 metros y en algunos
casos llega a alcanzar 1,8 metros.
Cliz: Es velloso con venas salientes y con una longitud de unos tres a cuatro cm.
Cubre completamente al fruto durante todo su desarrollo; inicia su alargamiento
cuando ha pasado la fecundacin del fruto. Durante los primeros 40 a 45 das de su
desarrollo es de color verde, con la maduracin del fruto va perdiendo clorofila
volvindose pergamino al final. Es importante porque protege el fruto contra
insectos, pjaros, enfermedades y situaciones climticas extremas, adems de servir
como una fuente indispensable de carbohidratos durante los primeros 20 das del
crecimiento del fruto.
Flor: Es fcilmente polinizada por insectos y por el viento y la auto polinizacin
tambin es comn.
Fruto: Es una baya jugosa de forma globosa u ovoide con un dimetro entre 1,25 y
2,50 cm, pesa entre 4 a 10 g. Contiene unas 100 a 300 semillas pequeas. La
estructura interior del fruto se parece a un tomate en miniatura.
Hojas: El Aguaymanto presenta hojas alternas, simples, pecioladas, acorazonadas y
altamente pubescentes. Tienen un tamao entre 5 a 15 cm de largo y 4 a 10 cm de
ancho. Una planta en condiciones de crecimiento muy favorables puede formar hasta
mil hojas o ms y este nmero depende del desarrollo del tallo y su cantidad de
nudos. Igualmente su rea foliar puede llegar hasta 150 dm2 planta o ms y el tamao
de una hoja hasta 25 a 30 cm2.
Sin embargo, en condiciones desfavorables las hojas pueden alcanzar solamente 10
cm2. Despus de la maduracin del fruto, las hojas amarillean y caen.
Raz: La mayora de las races son fibrosas y se encuentran a unos 10 a 15 cm de
profundidad; el sistema radical es ramificado y profundiza con sus races principales
hasta unos 50 a 80 cm. Las races que se forman de estas no son pivotantes y crecen
ms superficiales, causando un sistema radical dbil, una mayor precocidad de la
produccin y un ciclo de vida ms corto de la planta. El desarrollo de las races
depende del tipo y textura del suelo y especialmente de la aireacin, la temperatura y
la humedad del mismo. En zonas altas, el Aguaymanto desarrolla un sistema de
races ms superficiales con el fin de aprovechar mejor el calor del medioda.
Ciclo vegetativo
El tiempo entre la iniciacin de germinacin y la primera cosecha es de
aproximadamente nueve meses y medio. El periodo til de produccin de la planta es
de nueve a once meses desde el momento de la primera cosecha, ya que a partir de
entonces disminuye tanto la productividad como la calidad de la fruta.
Variedades
En la Universidad del Cuzco se han logrado dos selecciones y se les ha asignado los
nombres de Urubamba y Kayra. En Cajamarca se ha efectuado una evaluacin de
200 ecotipos (Franco, 2000) y entre los ms relevantes se han seleccionado tres de
ellos por su mejor calidad, siendo los ecotipos Cajamarca, San Marcos y
Cajabamba.(7)
Figura N1.2 Physalis peruviana Aguaymanto estadios de la planta
1, 2) Flores de Physalis peruviana; 3) Fruto; 4) Fruto; 5) Hoja; 6) Plntula.

Fuente: Datos tomados de Dostert N, Roque J, Cano A, La Torre M y Weigend M.
Hoja Botanica: Aguaymanto (2012)
1.1.4 USOS Y PROPIEDADES MEDICINALES
El fruto de Aguaymanto, del que se puede obtener un aceite, este es muy rico en
aceites esenciales, en carotenoides (fuente excelente de pro vitamina A, 3000
unidades de caroteno por 100g) en vitamina C, vitamina E y en fitosteroles. Tiene
adems trazas de complejos de vitamina B. Pocas protenas (0,3%) y una cantidad
excepcional de fsforo (55%). (8)
El Aguaymanto es tambin bueno para reforzar el nervio ptico y aliviar dolores de
garganta. Est recomendada para personas que sufren de diabetes tipo I y II, favorece
los tratamientos de prstata es buen diurtico y purifica la sangre. Por su contenido
de flavonoides se le utiliza como tranquilizante natural. (8)
Existen numerosas plantas en nuestra medicina tradicional peruana que no han sido
estudiadas cientficamente en su mayora. Una de estas es el Aguaymanto, que es
usada empricamente para tratar el cncer y otras enfermedades, como asma,
hepatitis, dermatitis y malaria. (9)
Por ser digestiva, ayuda a prevenir el cncer de estmago, colon y del intestino. El
fruto de Aguaymanto ayuda a purificar la sangre, ayuda a eliminar la albmina de los
riones, reconstituye el nervio ptico, limpia las cataratas, contribuye contra la
diabetes, la artritis incipiente y alivia eficazmente las afecciones de la garganta. Por
su contenido de vitamina A se le considera un fruto carotengeno.
Ayuda a combatir las siguientes enfermedades:
Controla la amibiasis.
Combate el asma.
Alivia los problemas bronquiales.
Ayuda con la formacin de los dientes y los huesos por su contenido de

calcio.
Previene la aparicin del cncer por sus propiedades digestivas.
10
Combate el cansancio mental.
Disminuye los niveles de colesterol en sangre.
Combate la depresin.
Consumir el fruto del aguaymanto ya que tiene una sustancia similar a la

insulina.
Previene el envejecimiento.
Alivia los problemas de la garganta.
Favorece la cicatrizacin de las heridas.
Alivia los sntomas caractersticos de este periodo.
Alivia los clicos menstruales.
Favorece el tratamiento de las personas con problemas de la prstata gracias a

sus propiedades diurticas.
Combate la sinusitis.
fortalece el sistema inmunolgico.
Combate el stress. (10)
El cido ascrbico (presente en el fruto de Aguaymanto est alrededor de 28,55

mg/100g) es requerido para el crecimiento y reparacin de tejidos en todo el cuerpo.
Es necesario para la formacin de colgeno, el tejido cicatricial, los ligamentos, los
tendones y los vasos sanguneos. El cido ascrbico es un antioxidante por lo tanto es
un nutriente que acta bloqueando parte del dao causado por los radicales libres
(RL). (11)
11
Los polifenoles tienen propiedades molusquicidas, antihelmnticas,

antihepatotxicas, antiinflamatorias, antidiarreicas, antilcera, antivirales,
antialrgicas y vasodilatadoras. Se ha determinado que inhiben la replicacin del
virus de la inmunodeficiencia Humana (HIV) y del virus simplex humano (HSV),
inhiben las glucosil transferasas del Streptococcus mutans causante de la caries
dental, inhiben la autoxidacin del ascorbato, tambin inhiben efectos citotxicos, la
promocin del crecimiento tumoral y la enzima xantina mono-amina oxidasa. La
actividad antioxidante de los fenoles es el origen de funciones biolgicas tales como
la antimutagnica, anticancergena y antienvejecimiento. (12)
La mayora de los antioxidantes naturales, en especial los flavonoides, muestran una

amplia gama de efectos biolgicos, incluyendo antibacteriano, antiviral, anti-
inflamatorio, antitrombtico y acciones vasodilatadoras antialrgicos. La actividad
antioxidante es una propiedad fundamental importancia para la vida. (13)
1.2 RADICALES LIBRES, ESTRS OXIDATIVO Y ANTIOXIDANTES
1.2.1 RADICALES LIBRES
Se define como cualquier especie qumica, esta puede ser atmica o molecular ya
que tiene uno o ms electrones desapareados en el orbital ms extremo (14) los
cuales darn un carcter muy inestable y altamente reactivas y con la capacidad de
atacar cualquier tipo de biomolculas (15).
Estos tienden a captar electrones de otros tomos con el fin de alcanzar la estabilidad,
una vez que se ha conseguido sustraer el electrn, la otra molcula estable al perder
su electrn se oxida y a su vez se convierte en un radical libre por quedar con un
electrn desapareado dando as el inicio de una reaccin en cadena. (16)
Ya sea por ganancia o prdida de un electrn de un no radical o por la ruptura del

enlace qumico cada tomo participante del enlace retiene un electrn par que
constitua la unin formndose radicales libres de una molcula. (17)
Las fuentes de RL estos pueden ser tipo endgeno y exgeno:
12
Los radicales libres de tipo endgeno se producen normalmente y de forma continua

en el metabolismo celular principalmente en las mitocondrias, por las diversas
reacciones redox, realizadas por las enzimas como la NADHP oxidasa,
lipooxigenasas, ciclooxigenasas y peroxidasas. Pero tambin existen otras fuentes
endgenas de RL como las oxidaciones microsomales, los fagosomas, La auto
oxidacin de sustratos y los neutrfilos. Los RL endgenos juegan un papel
importante en la defensa del organismo contra infecciones y virus si bien la
concentracin de estos puede ser controlada por los sistemas antioxidantes
endgenos. El problema es cuando los RL provienen de fuentes exgenas tales como
el consumo de alimentos con alto contenido de grasa, alimentos procesados tambin
el excesivo consumo de alcohol, la exposicin a diversos qumicos como pinturas,
pegamentos y tipos de contaminantes del medio ambiente como el humo del tabaco,
herbicidas, smog etc. .Solo al encontrarse dos radicales libres cesa el proceso.(18)
El oxgeno molecular al ser consumido por organismos aerobios va a dar la

formacin de especies reactivas de oxigeno (ROS) son considerados RL ya que son
molculas cuyo tomo carecen de electron, esto hacen que sean ms reactivos ya que
toman el electrn faltante de una molcula vecina lo que provocara la oxidacin de
esta ltima molecula, y asi esta tomara su electro faltante de otra y lo que se
generara una reaccin en cadena lo cual cesara cuando llegase a encontrar otra
molcula con un electron libre para poder estabilizarse.(18)
Estas molculas son productos peligrosos del metabolismo celular debido a que no
hay un equilibrio entre las ROS y sustancias antioxidantes lo que generara estrs
oxidativo, y lo que provocara una serie de procesos patolgicos.(18)
Las principales especies reactivas del oxgeno (ROS) o sustancias prooxidantes son:
Radical hidroxilo (HO)-, Perxido de hidrgeno (H2O2), Anin superxido (O2),
Oxgeno singlete (1O2), xido ntrico (NO), Perxido (ROO), Semiquinona (Q) y el
Ozono (O3). (19)
En 1954 la Doctora Rebeca Gerschman sugiri por primera vez que las ROS eran
agentes txicos y generadores de patologas, estableciendo tres postulados bsicos:
1. Los RL constituyen un mecanismo molecular comn de dao cuando los animales
son sometidos a altas presiones de oxgeno y a radicales ionizantes.
13
2. El desequilibrio entre oxidantes y antioxidantes producan los efectos txicos.

3. La produccin de RL es un fenmeno continuo con implicaciones en el
envejecimiento y la carcinognesis.
Actualmente estos postulados se mantienen vigentes y son la base para mltiples
investigaciones. (20)
1.2.2 DAO PRODUCIDO POR LOS RADICALES LIBRES
Los radicales libres son elementos fundamentales en el metabolismo, tambin son un

riesgo especialmente para las clulas y biomolculas como los cidos nucleicos, las
protenas, y lpidos y polisacridos. (16)
El dao celular producido por las especies reactivas del oxgeno ocurre sobre
diferentes macromolculas:
1. Lpidos. Es donde se produce el mayor dao en un proceso conocido como
peroxidacin lipdica, este afecta a las estructuras ricas en cidos grasos
poliinsaturados, alterando la permeabilidad de la membrana celular produciendo
edema y muerte celular. el enranciamiento oxidativo o peroxidacin lipdica
representa una forma de dao hstico que puede ser desencadenado por el oxgeno, el
perxido de hidrgeno, el oxgeno singlete y el radical oxidrilo. los componentes
esenciales de las membranas celulares son los cidos grasos insaturados , por lo que
se cree son importantes para su funcionamiento normal, sin embargo, son vulnerables
al ataque oxidativo iniciado por los radicales libres del oxgeno.(21)
2. Protenas. Hay oxidacin de un grupo de aminocidos como fenilalanina,
tirosina, histidina y metionina; adems la formacin de entrecruzamientos de cadenas
peptdicas, y la formacin de grupos carbonilos.(22)
3. cido desoxirribonucleico (ADN). Ocurren fenmenos de carcinognesis y
mutaciones, hay prdida de expresin o sntesis de una protena por dao a un gen
especfico, modificaciones oxidativas de las bases, delecciones, fragmentaciones,
interacciones estables ADN-protenas, reordenamientos cromosmicos y
desmetilacin de citosinas del ADN que activan genes.
14
El dao se puede realizar por la alteracin (inactivacin/prdida de algunos genes

supresores de tumores que pueden conducir a la iniciacin, progresin, o ambas de la
carcinognesis).
Los genes supresores de tumores pueden ser modificados por un simple cambio en
una base crtica de la secuencia del ADN. (21)
4. Carbohidratos. El dao ocasionado por los radicales libres en carbohidratos
seda en menor proporcin que otras molculas.
Los azcares como la glucosa, manitol o ciertos desoxiazcares reaccionan con el
radical oxidrilo para producir sustancias reactivas. As mismo, el ataque producido
por los radicales libres en los polisacridos a la fragmentacin en unidades ms
sencillas como en el caso de la despolimerizacin del cido hialurnico. (23)
1.2.3 ESTRS OXIDATIVO
Por diversas causas se produce un desequilibrio, haciendo perder el balance entre

condiciones oxidantes y defensas antioxidantes: esto puede deberse a un aumento en
la produccin de especies reactivas de oxigeno (ERO) o a una disminucin en los
sistemas antioxidantes o de reparacin, o a una combinacin de estos factores. (17)
A todo esto se le se le conoce como estrs oxidativo que es la responsable de la
degeneracin celular debido a que los RL pueden reaccionar qumicamente con
protenas, lpidos y DNA. (18)
El Estrs oxidativo produce deterioro celular el cual es responsable de diversas

enfermedades, de manera directa e indirectamente son generados por los radiales
libres.(18)
Este dao puede ser prevenido por el uso de molculas antioxidantes , elcual donan
electrones estabilizando y neutralizando los R.L y asi eliminando los efectos dainos
de estas molculas. (18)
Existe un equilibrio apropiado entre prooxidantes y antioxidantes en una clula

normal. Sin embargo este balance puede alterarse cuando la produccin de
prooxidantes aumenta de modo considerable. Esta circunstancia se presenta despus
de la introduccin en el organismo de ciertos frmacos o venenos insecticidas y/o
15
pesticidas. Tambin este desbalance puede presentarse, debido a una mal nutricin
disminuyendo as la concentracin de antioxidantes por ejemplo la hipovitaminosis
E, o a un fallo funcional de alguna de las enzimas involucradas en la respuesta
antioxidante del organismo. (24)
1.2.4 ANTIOXIDANTES
Un antioxidante es una sustancia que previene o retarda la oxidacin de un sustrato

oxidable puede ser lpido, protena, DNA, o cualquier otro tipo de molcula. (15)
Los antioxidantes que actan como mecanismo de defensa en el organismo. A
concentraciones normales poseen una afinidad mayor que cualquier otro molcula
para interactuar y neutralizar los RL, estos actan donando electrones a los RL y de
esta manera los transforman en dbiles y no txicos.(25)
No todos los antioxidantes actan de esta manera, los llamados enzimticos catalizan
o aceleran reacciones qumicas que utilizan sustratos que reaccionan con los RL.
Los antioxidantes se clasifican en dos grupos:
Antioxidantes endgenos (superoxido dismutasa ,glutatin peroxidasa,

catalasa)
Antioxidantes exgenos estos ingresan a travs de la dieta (vitamina C,

vitamina E, los carotenoides, flavonoides y los licopenos). (20)
En algunas investigaciones se muestra a la terapia antioxidante como una alternativa

para prevenir y contrarrestar a las diversas enfermedades asociadas al estrs
oxidativo, manteniendo el balance entre la formacin y neutralizacin de los
radicales libres. (26)
Los antioxidantes obtenidos a travs de la dieta, puede actuar de dos formas:
- Primero previniendo la generacin excesiva de los radicales libres, y as evitar
que se produzca el dao celular por efecto del estrs oxidativo.
- Segundo, una vez ya producido el dao oxidativo los antioxidantes puedan
mantener los niveles de radicales libres y as evitar que el dao contine
16
avanzando y con ello algunos sntomas de las enfermedades producidas por el

efecto del estrs oxidativo pueden disminuir. (27)
1.2.4.1 CLASIFICACION DE LOS ANTIOXIDANTES
Los antioxidantes se pueden clasificar de manera simple en endgenos y exogenos:

Antioxidantes Endgenos
Glutatin peroxidasa (GPx).- Es una seleno protena en presencia de

glutatin (GHS), como agente reductor cataliza la reduccin del perxido de
hidrogeno.(15)
Catalasa.- Es una hemoproteina se encuentra en el interior de los grnulos

citoplasmticos llamados peroxisomas se encarga de catalizar la
descomposicin del perxido de hidrogeno en agua y oxgeno. (15)
Superxido dismutasa (SOD).- Acta neutralizando los radicales
superxido y as transformarlo en perxido de hidrogeno en presencia de
zinc.(15) :
Antioxidantes Exgenos
Vitamina E.- Es un conjunto de compuestos fenlicos conocidos como

tocoferoles y tocotrienoles, siendo el alfa tocoferol el ms activo es de
carcter lipofilico y es el ms importante protector de las molculas
lipdicas.(25)
Polifenoles.- Son un conjunto heterogneo de las molculas que comparten

las caractersticas de poseer en su estructura varios grupos fenlicos, tienen
una potente actividad antioxidante estos pigmentos naturales estn en los
vegetales. (25)
Carotenoides.- Son hidrocarburos polienicos no contienen oxgeno y son los

ms activos por poseer un sistema de dobles enlaces conjugados mucho mas
largos lo que facilita su accin antioxidante y son responsables del intenso
color amarillo, anaranjado o rojo de un gran nmero de vegetales. (25)
17
Vitamina C.- Es un antioxidante hidrosoluble que potencia la accin

antioxidante de otros antioxidantes como la vitamina E y el selenio, no es
sintetizado en el organismo, es consumida por medio de los alimentos; su
funcin principal es neutralizar el oxgeno singlete (O2), captura radicales
oxidrilo y aniones superxido y realiza la regeneracin de la forma oxidada
de la vitamina E una vez que se ha unido a un RL.
Destruye eficazmente a las nitrosaminas y posee efecto anticarcinogenico

frente al humo del tabaco por concentrarse en los alveolos pulmonares. (25)
1.3 COMPONENTES BIOACTIVOS CON CAPACIDAD ANTIOXIDANTE

DE PHYSALIS PERUVIANA
1.3.1 COMPUESTOS FENLICOS
Las plantas vasculares sintetizan una gran cantidad de molculas orgnicas, como
consecuencia de su metabolismo secundario.
Muchos de Los fenoles son clasificados como metabolitos secundarios y estn
ampliamente distribuidos en el reino vegetal. Se localizan en todas las partes de las
plantas y su concentracin es variable a lo largo del ciclo vegetativo. Estos
compuestos participan de diversas roles, tales como la asimilacin de nutrientes, la
sntesis proteica, la actividad enzimtica, la fotosntesis, soporte mecnico de la
planta, la alelopata y la defensa ante los factores adversos del ambiente.
Los fenoles estn asociados al color, las caractersticas sensoriales como, sabor,
astringencia, dureza, las caractersticas nutritivas y las propiedades antioxidantes de
los alimentos de origen vegetal. La caracterstica antioxidante de los fenoles se debe
a la reactividad del grupo fenol. (28)
18
1.3.2 ACCION ANTIOXIDANTE DE LA VITAMINA C.
La vitamina C o L-ascorbato es un derivado cido de la glucosa. Su obtencin en la

dieta es esencial para la supervivencia del hombre (y los primates en general, adems
de cobayos, murcilagos y algunas aves y peces).
Presenta una configuracin de lactona, en la que los grupos oxidrilos asociados al

doble enlace funcionan como agentes con alto potencial reductor, lo que le permite,
incluso, participar en la reduccin directa del oxgeno, funcionando as como sustrato
donante en las reacciones de las peroxidasas. (29)
Las vitaminas C y E, as como la A, clasifican como antioxidantes interruptores,

porque actan interrumpiendo la reaccin en cadena de formacin de radicales libres,
atrapndolos y reducindolos, a diferencia de los antioxidantes preventivos (entre los
que se encuentran las enzimas peroxidasas), que evitan la iniciacin de la secuencia
de reacciones. (30)
El cido ascrbico es oxidado en dos pasos en los que pierde cada vez un electrn,
pasando por una forma ascorbilo de radical libre . Este intermedio es seguidamente
oxidado de cido dehidroascrbico que es irreversiblemente hidrolizado para dar
cido 2,3-dicetogulnico. (31)
Figura N 1.3 Ascorbato, radical ascorbil, cido dehidroascorbico y

2,3dicetogulonico
19
1.3.3 CAROTENOIDES
Los carotenoides son pigmentos orgnicos del grupo de los isoprenoides compuestos
responsables de la coloracin de gran nmero de alimentos vegetales y animales,
como zanahorias, zumo de naranja, tomates, salmn y yema de huevo. Desde hace
muchos aos, se sabe que algunos de estos compuestos, como y caroteno, as
como la -criptoxantina, son provitaminas A. No obstante, estudios recientes han
puesto de manifiesto las propiedades antioxidantes de estos pigmentos, as como su
eficacia en la prevencin de ciertas enfermedades del ser humano, como la
aterosclerosis o incluso el cncer. Todo ello ha hecho que desde un punto de vista
nutricional, el inters por estos pigmentos se haya incrementado notoriamente.
La principal funcin de los pigmentos carotenoides, tanto en vegetales como en

bacterias, es captar energa luminosa, energa que es luego transferida a las clorofilas
para ser transformada durante la fotosntesis. (32)
Proporcionan color a las frutas y verduras. Debido a la presencia en su molcula de

un cromforo consistente total o principalmente en una cadena de dobles enlaces
conjugados dando colores amarillos, anaranjados y rojizos a los frutos. Estn
presentes en todos los tejidos fotosintticos, junto con las clorofilas, as como en
tejidos vegetales no fotosintticos, como componentes de cromoplastos, que pueden
ser considerados como cloroplastos degenerados. Los carotenoides siempre
acompaan a la clorofila en una relacin de tres a cuatro partes de clorofila por una
parte de carotenoide. Estos pigmentos se encuentran en frutas y vegetales amarillos y
en los cloroplastos de tejidos verdes, donde estn enmascarados por la clorofila hasta
que el tejido envejece. El contenido en carotenoides de las frutas aumenta durante la
maduracin, si bien parte de la intensificacin del color se debe a la prdida de
clorofila.(33)
Algunos pigmentos carotenoides poseen actividad provitamnica A por lo que hasta

hace unos aos han tomado importancia nutricional, si bien recientemente se ha
puesto de manifiesto que la importancia de estos compuestos va ms all, y se ha
demostrado que juegan un papel importante en la prevencin de diversas
enfermedades degenerativas humanas. (33)
20
La funcin biolgica principal de los carotenoides es servir como pigmentos

accesorios en la recoleccin de la luz durante el proceso fotosinttico, y como
sustancias fotoprotectoras, inhibiendo la propagacin de especies reactivas de
oxgeno y otros radicales libres, por tanto impiden la accin nociva de stos a nivel
celular. En los animales, este conjunto de pigmentos presenta varias actividades
biolgicas muy importantes desde el punto de vista nutricional y fisiolgico. (34)
Figura N 1.4 Estructura de los principales carotenoides

Fuente: Importancia nutricional de los pigmentos carotenoides Antonio J. Melndez-
Martnez
21
1.3.4 FLAVONOIDES
Los flavonoides comprenden un grupo de compuestos polifenlicos ampliamente

distribuidos en las frutas y en los vegetales, as como en el t negro, el caf, la cocoa,
la cerveza y el vino rojo. (35)
Pueden aparecer desde simples molculas fenlicas hasta compuestos muy
polimerizados con pesos moleculares superiores a los 30 000 Da. (35)
De todas sus propiedades biolgicas las de mayor inters han sido sus efectos
antioxidantes, los cuales han sido blancos de un sin nmero de estudios
principalmente de corte clnico y nutricional, teniendo en cuenta que a menudo dosis
farmacolgicas de antioxidantes dietticos comnmente como es el caso de las
combinaciones vitamnicas (vitamina E ms vitamina C y b-caroteno), no producen
los efectos esperados o estos resultan dainos, por lo que para lograr una mejor
accin antioxidante se prefiere incluir en la dieta una mezcla de flavonoides y
taninos. (36)
3
2 4
B
8 1
5
7 2 6

A C
6 3
5 4
O
Figura. N 1.5 Estructura bsica de los flavonoides y sistema de numeracin

22
Figura. N 1.6 Subclase de flavonoides

Fuente: Los flavonoides: antioxidantes o prooxidantes, Instituto de Ciencias Bsicas
y Preclnicas "Victoria de Girn" Gilberto Prez Trueba
23
1.3.5 ACCION ANTIOXIDANTE DE LOS FLAVONOIDES FRENTE A

RADICALES LIBRES
Los flavonoides son sustancias beneficiosas para la salud ya que un elevado

consumo de frutas, vegetales y sus derivados ayudan a eliminar numerosos radicales
libres. Numerosas investigaciones demuestran que los flavonoides son poderosas
sustancias antioxidantes. Los mecanismos de accin descriptos que definen la
capacidad antioxidante de los flavonoides son: a) el atrapamiento de especies activas
del oxgeno y del nitrgeno; y b) la quelacin de metales de transicin (hierro,
cobre) que pueden iniciar reacciones de oxidacin. La capacidad antioxidante de los
flavonoides depende, del nmero de localizacin de sus grupos hidroxilo. Se han
determinado otros mecanismos por el cual los flavonoides podran proteger a los
lpidos del dao por sustancias oxidantes o por otros compuestos que podran afectar
la estructura y/o funcin de las membranas biolgicas.(37)
La accin antioxidante de los polifenoles vegetales actan en los sistemas biolgicos,

esto provoc un gran inters en estos flavonoides ya que tienen una actividad
farmacolgica amplia, pueden unirse al ADN en enzimas como adems producir
quelacion de iones metlicos como el Fe+2 Cu+ 2 y Zn+2 adems de eliminar radicales
libres. Es usado para enfermedades como diabetes mellitus, cncer, cardiopatas,
infecciones vrales, ulcera estomacal y duodenal y en inflamaciones, su capacidad
antioxidante se debe a que los flavonoides presentan en su estructura los
sustituyentes dihidroxlicos en posiciones 3' y 4' en el anillo B se muestran ms
actividad como antioxidantes y que este efecto antioxidante es potenciado por la
presencia de enlaces dobles entre los carbonos 2 y 3, un grupo hidroxilo (OH) libre
en la posicin 3 y un grupo carbonilo en la posicin 4; como sucede con la
quercetina. (38)(39)(40)
24
+ R+ RH +
+ R+ RH
Figura N 1.7 Formacin de radical flavinico por la captura de radicales libres por
los polifenoles.
1.3.6 WITHANOLIDOS
Son un grupo de esteroides naturales construidos sobre un esqueleto de tipo
ergostano. Se caracterizan por poseer una cadena lateral de nueve tomos de
carbono, con una lactona de seis miembros formada por los carbonos 22 a 26.
Los primeros constituyentes de este grupo fueron descubiertos de la planta a la cual
deben su nombre withania somnifera. Estos han sido hallados adems en otras
plantas del genero withania, y tambin en plantas de los generos acnistus (dunalia),
jaborosa, nicandra, physalis, datura, lycium, etc, todas ellas pertenecientes a la
familia de las solanceas encontrndose principalmente en las hojas de los vegetales
mencionados.(41)
25
28

27

22 26
20
17
1
14

Figura. N 1.8 Esqueleto withanolido

1.3.7 FISALINAS
Son de estructuras muy complejas, porque adems de la lactona presentan otro anillo
de -lactona fusionada al anillo D. Se derivan de los seco esteroides 16,24 13,14
ergostano ciclo de tipo carbonilado C-15.
Han sido utilizadas como sustancias inmunosupresoras para evitar respuestas del
sistema inmune, por ejemplo cuando se hace un trasplante de rganos, presencias de
alergias y enfermedades autoinmunes. Los principales compuestos activos en el
aguaymanto son las fisalinas A, B, D, F y glucsidos.(42)
26

Figura. N 1.9 Tipos de fisalinas
Fuente: Gnero Physalis - uma reviso sobre vitaesterides Therezinha C. B.
Tomassini
1.4 LIOFILIZACION
Se conoce como liofilizacin al proceso de conservacin que utiliza a la sublimacin

con el fin de reducir prdidas de los componentes voltiles o termo sensibles. Es el
proceso ms noble de conservacin de productos biolgicos, porque junta dos
mtodos de conservacin que son muy fiables, la congelacin y la deshidratacin.
Sin utilizar productos qumicos o conservantes, este proceso es el ms adecuado para
preservar clulas, enzimas, vacunas, virus, levaduras, sueros, derivados sanguneos,
algas, as como frutas, vegetales, carnes, peces y alimentos en general. En este
proceso de secado los productos que se obtienen no se ven alterados y se pueden
hidratar fcilmente. (43)
27
Las principales ventajas de la liofilizacin son:
Al aplicar bajas temperaturas al producto las sustancias inestables presentes no

sufren cambios por lo que la perdida de compuestos voltiles es mnima.
Durante el proceso de liofilizacin no hay formacin de burbujas ni espumas, lo

que hace suponer procesos de desnaturalizacin de las protenas.
Los compuestos presentes permanecen uniformemente disperso y distribuido sin

sufrir cambio de su concentracin ni tendencia a la congelacin.
El producto liofilizado se presenta como un armazn solido sumamente poroso y

ocupa esencialmente el mismo espacio total que ocupaba la solucin original; el
residuo final consta de una estructura desmenuzable, entrelazada y
extraordinariamente porosa. Como resultado de estas caractersticas, su
solubilidad es extremadamente rpida y completa.
El producto final tiene despus del proceso de liofilizacin un contenido muy

bajo en humedad pudiendo llegar a ser inferior al 0.5%.
El desarrollo de bacterias y cambios enzimticos no se puede realizar durante el

proceso de la liofilizacin ni cuando el producto esta desecado.
Dado que durante todo el proceso de sublimacin se efecta un elevado vaco,

el cual puede ser conservado una vez liofilizado el producto, por tanto la
cantidad de oxigeno presente es nula, con lo que los constituyentes fcilmente
oxidables quedan protegidos. (44)
28

CAPITULO II
MATERIALES Y METODOS
2.1 LUGAR DE INVESTIGACION

El presente trabajo de investigacin se llev a cabo durante los meses de diciembre a
marzo 2016, en los Laboratorios (Laboratorio de control de Calidad H-203 y H103)
de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Catlica De Santa Mara.
2.2 MATERIALES
2.2.1 MATERIAL VEGETAL

El material de investigacin usado para este trabajo es el fruto de Aguaymanto.
2.2.2 REACTIVOS QUIMICOS
Estndar de cido ascrbico (Merck)

Alcohol metlico
Alcohol etlico
Heptano
Reactivo de Follin-Ciocalteau
cido Glico
29
Carbonato de Sodio
Acetato de etilo
Cloruro de cobre (II)
Neocuproina 98%
Agua destilada
Hidrxido de amonio.
Amoniaco
Vainillina
cido sulfrico
Tricloruro de aluminio
Solucin de Dragendorff
Estndar de Quercetina
Estndar de rutina
Cloruro frrico
2.2.3 MATERIAL DE LABORATORIO
Fiolas (5,10, 25, 50,10 y 250 ml) (Marca Kimax).

Frascos mbar tapa rosca.
Micropipetas de 0-100 ul y 100 1000 ul (Marca Transderpette)
Papel Aluminio
Papel filtro (Marca Whatman).
Pipetas de 0.5, 1, 2, 5, y 10 ml (Marca Hirschmann).
Probetas de 10 y 100 ml.
Tubos de ensayo
Vaso de precipitado de 10 y 100 ml. (Marca Prex)
Capilares de vidrio.
Cuba de TLC.
Placas de Silica Gel 60 F254 (Marca Merck).
Bagueta de vidrio
Pizetas
30
2.2.4 EQUIPOS
Balanza Analtica (Marca

Equipo de extraccin Soxhlet
Lmpara de Luz UV (Marca Camag).
Equipo de liofilizacin labconco
Cmara para Cromatografa de capa Fina.
Espectrofotmetro UV/V
Rotavapor (Marca Buchi).
Agitador
Refrigerador.
Cocina elctrica.
Bao Mara.
2.3 METODOS
2.3.1 RECOLECCION, SELECCIN Y ALMACENAMIENTO DE LA

MUESTRA
La recoleccin de aguaymanto se realiz en horas de la maana en un vivero

ubicado en el departamento de Arequipa provincia de Castilla distrito de Orcopampa.
La seleccin de los frutos de aguaymanto fueron clasificados segn el color, teniendo

en cuenta la carta de color establecida por la Norma Tcnica Colombiana 4580, el
cual se usos el tipo 6 para la recoleccin de la muestra (45)
Una vez que se seleccion se procedi a lavar la fruta con agua potable corriente y se
enjuago con agua destilada luego, se procedi al secado del fruto con tela de
algodn; se procedi a guardarlos a refrigeracin a 4C para luego ser llevadas al
laboratorio H-103 para su respectiva investigacin.
31
Figura N 2.1 Tabla de color de la Physalis peruviana Aguaymanto
Fuente: NTC 4580(45)
2.3.2 OBTENCION DE EXTRACTO
Los mtodos de extraccin para obtener los principios activos o metabolitos

secundarios del fruto se us el mtodo de extraccin por Soxhlet, la extraccin solo
separa las sustancias que pueden ser disueltas en lquidos o mezcla de estos llamados
en laboratorio como solventes.
Los solventes empleados para la extraccin por mtodo de Soxhlet son: Etanol,
Metanol y Heptano; el cual se hicieron por duplicado y se determin el porcentaje de
rendimiento por diferencia de pesada.
2.3.2.1. METODO: SISTEMA DE EXTRACION POR EQUIPO SOXHLET
La obtencin de extractos con los diversos solventes se emple el mtodo de

extraccin Soxhlet, el cual se hicieron por duplicado y despus determinar su
rendimiento por diferencia de pesadas.
32
2.3.2.1.2 FUNDAMENTO
Se define como la accin de separar con un solvente una fraccin especfica de una
muestra, dejando el resto lo ms ntegro posible. Se pueden realizar desde los tres
estados de la materia, y se llaman de la siguiente manera. La extraccin Soxhlet se
fundamenta en las siguientes etapas
1) Se aade el solvente en un baln.
2) Ebullicin del solvente que se evapora hasta un condensador a reflujo.
3) El solvente condensado cae sobre un recipiente que contiene un cartucho poroso

con la muestra en su interior en la que es cubierta por el solvente.
4) Ascenso del nivel del solvente cubriendo el cartucho hasta un punto en que se
produce el reflujo que vuelve el solvente con el material extrado al baln.
5) Se vuelve a producir este proceso la cantidad de veces que sea necesaria para que
la muestra quede agotada. Lo extrado se va concentrando en el baln del solvente.
(40)
2.3.2.1.3 PROCEDIMIENTO
Para la extraccin de los principios activos de la muestra de aguaymanto se hicieron

2 extracciones, se usaron dos tipos de muestras, una muestra fresca que se la
estabilizo y deseco, y otra muestra liofilizada, en ambas muestras se tomaron 10 g,
luego se procedi a envolver con papel filtro formando unos pequeos cartuchos que
fueron colocados en el cuerpo del equipo de extraccin. En el baln del equipo de
extraccin se coloc 150 ml de solvente; los solventes usados fueron etanol, metanol
y heptano.
El proceso de extraccin se control la temperatura a bao mara para no exceder el

punto de ebullicin del solvente.
Una vez que el solvente llego a su punto que ebullicin, asciende por el conducto
lateral en estado gaseoso y al pasar por los refrigerantes, estos vapores se condensan
y caen al cuerpo del equipo estando en contacto con la muestra (cartucho de papel
33
filtro con 10 g de muestra) cubriendo el solvente toda la muestra, una vez que el
solvente alcance el nivel del sifn del equipo este solvente desciende retornando al
baln con los principios activos extrados, inicialmente contenan el solvente puro,
este procedimiento se repite varias veces hasta agotar la muestra con el fin de poder
as extraer la mayor cantidad de sustancias activas que contiene el fruto.
La extraccin se realiz por igual y con las mismas condiciones para los tres
solventes evitando que cada solvente sobrepase su punto de ebullicin.
2.4 METODO GRAVIMETRICO: DETERMINACION DEL EXTRACTO

SECO
2.4.1 FUNDAMENTO
Para la determinacin del porcentaje de solido soluble conocido como %RE

(Porcentaje de rendimiento de extraccin) se basa en el mtodo gravimtrico.
Este mtodo consiste en la determinacin de la diferencia de peso al evaporar todo el

solvente del extracto obtenido con el peso inicial de la muestra antes de la extraccin.
2.4.2 PROCEDIMIENTO
Primeramente se tom un baln previamente tarado y se coloc las muestras de los

extractos obtenidos por diferentes solventes, para su evaporacin mediante el equipo
de rotavapor, luego se llev el baln al horno desecador a una temperatura de 40C
por 4 horas para la eliminacin total del solvente por evaporacin hasta la aparicin
del residuo con un peso constante, al trmino del cual se procedi a determinar el
porcentaje de rendimiento de los extractos secos.
El porcentaje de rendimiento del extracto seco se realiza con la siguiente formula:
%ES = Pf / Pi x 100
Dnde:
Pi = Peso inicial
Pf = Peso Final
%ES = Porcentaje de extracto seco
34
2.5 LIOFILIZACION
2.5.1 PROCEDIMIENTO
Mtodo de Liofilizacin
El fruto de aguaymanto se lav y se cort en mitades, luego fueron colocadas en una

bandeja y esparcidas por toda la bandeja
Figura. N 2.2 Aguaymanto colocado en la bandeja de liofilizacin
Fuente: Elaboracin propia, 2016
Luego se coloc dentro del liofilizador y se le coloco el sensor de temperatura
35
Figura. N 2.3 Colocando el sensor de temperatura en la bandeja de liofilizacin
Luego se gradu el liofilizador, se le aplico a la muestra de aguaymanto un pre

congelamiento por 8 horas
Un primer segmento se llev a una temperatura de congelacin por -50c por un

tiempo de 24 horas.
En el segundo segmento se llev a una temperatura de congelacin de -20C por un

tiempo de 20 horas.
Y por ltimo en el tercer segmento se llev a una temperatura de congelacin de 5C

por un tiempo de 10 horas.
2.6 ANALISIS POR CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA (CCF)
La cromatografa de capa fina (en ingls Thin Layer Chromatography o tlc) es una
tcnica analtica rpida y sencilla.
Permite determinar el grado de pureza de un compuesto, comparar muestras, realizar

el seguimiento de una reaccin.(46)
36
2.6.1 FUNDAMENTO
Es un procedimiento que se utiliza para separar molculas relativamente pequeas.

Al igual que otras cromatografas, consiste de una fase estacionaria y una fase mvil.
(47)
La muestra se desplaza con una fase mvil que es un lquido. Esta fase mvil se hace
pasar a travs de una fase estacionaria de gel de slice o almina con la que es
inmiscible, y que se fija a una superficie slida como una lmina de vidrio, plstico,
o aluminio. (48)
2.6.2 PROCEDIMIENTO
Se procedi a cortar placas de Silica gel con dimensiones de 10 x 3 cm y trazamos

con lpiz dos mrgenes: superior e inferior, cada uno a 1 cm del borde de la placa.
Sobre la lnea de la base inferior sembramos en banda, con los capilares pequeas
cantidades de muestra, dejando secar bien antes de la siguiente siembra.
Secar bien la placa y colocarla en la cuba de desarrollo con su respectiva fase mvil
(previamente saturada 30 min antes).
Se hizo desarrollar el cromatograma hasta que la fase mvil llego a la lnea

horizontal superior marcada anteriormente.
Si la mezcla de muestras que se est analizando presenta color, se vern los distintos
colores migrando a distintas velocidades.
Se retir la placa de la cuba de desarrollo y se dej secar por 30 minutos

aproximadamente y se observ a luz UV/V a 254 nm, procedindose a marcar las
cuidadosamente las manchas donde se poda visualizar un componente de la muestra.
Si son incoloras hay que someter la placa a algn tratamiento con una sustancia
reveladora para poder determinar la presencia de sustancias sobre el silicato. El tipo
de revelador depender del tipo de molculas que se analizan.
37
2.6.3 FACTOR DE RETRASO
La constante RF (Ratio of Front) es simplemente una manera de expresar la posicin

de un compuesto sobre una placa como una fraccin decimal, mide la retencin de un
componente. Se define como:
Distancia recorrida desde el origen por el compuesto

Rf =
Distancia recorrida desde el origen por el frente del eluyente
La distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente desde el centro de la

mancha, los clculos se simplifican si el denominador es 10. Para que los RF sean
reproducibles deben ser fijadas una serie de condiciones (Espesor de la placa, fase
mvil, fase estacionaria, cantidad de muestra). El mximo valor de RF que se puede
alcanzar es de 1, lo ideal es un RF entre 0.65 y 0.7.(49)
2.6.4 IDENTIFICACIN DE METABOLITOS SECUNDARIOS
Para la identificacin de taninos por cromatografa de capa fina se utiliz como fase
mvil, metanol y acetato de etilo (50:50) y revelador FeCl3 al 1% en etanol,
pudiendo dar un color azul negruzco o color verde.
Para el caso de flavonoides se aplic cromatografa de capa fina, se utilizo como fase
mvil metanol y acetato de etilo (50:50) y reveladores AlCl3 al 1% en etanol: a luz
UV a 366nm y vapores de amoniaco a luz UV a 366 Nm. En la placa cromatografica
colocamos estndar de quercetina y rutina, adems se coloco muestra de extracto
etanolico de fruto desecado y extracto etanolico liofilizado donde se espera la
aparicin de manchas fluorescentes amarillas.
En la identificacin de alcaloides por cromatografa de capa fina se utiliz como fase

mvil metanol y acetato de etilo (50:50) que es adecuado como sistema de screening
para muchos alcaloides y revelador Dragendorff, si hay presencia de alcaloides se
evidenciara manchas de color marrn o anaranjado intenso.
38
2.7 DETERMINACION DE COMPUESTOS POLIFENOLICOS TOTALES

(CPT)
El mtodo que se utiliz para la determinacin de compuestos fenlicos totales

(CPT) se realiz el ensayo de Folin-Ciocalteau.
2.7.1 METODO DE FOLIN-CIOCALTEU
El Fundamento del mtodo Folin-Ciocalteu se utiliza como medida del contenido en

compuestos fenlicos totales en productos vegetales. Est basado que los compuestos
fenlicos reaccionan con el reactivo de Folin-Ciocalteu, a pH basal, el cual da lugar a
una coloracin azul susceptible de ser determinada espectrofotomtricamente a 765
nm. Este reactivo contiene una mezcla de wolframato sdico y molibdato sdico en
cido fosfrico y reacciona con los compuestos fenlicos presentes en la muestra. El
cido fosfomolibdotngstico (formado por las dos sales en el medio cido), de color
amarillo, al ser reducido por los grupos fenlicos da lugar a un complejo de color
azul intenso, cuya intensidad es la que medimos para evaluar el contenido en
polifenoles. (50)
El reactivo de Folin inicialmente (W6+,

Mo6+) es de color amarillo.
Luego de la reaccin este reactivo

queda reducido (W 5+, Mo5+) dando
una coloracin azul, el cual se lleva a
lectura al espectrofotmetro
Figura N 2.4 Mecanismo de accin del reactivo de Folin-Ciocalteu.

El mecanismo de reaccin es una reaccin redox, por lo que adems puede

considerarse tambin, como un mtodo de medida de la actividad antioxidante total.
La oxidacin de los polifenoles presentes en la muestra, causa la aparicin de una
39
coloracin azulada que presenta un mximo de absorcin a 765 nm, y que se

cuantifica por espectrofotometra en base a una recta patrn de cido glico. Se trata
de un mtodo preciso y sensible, que puede padecer numerosas variaciones,
fundamentalmente en lo relativo a los volmenes utilizados de la muestra a analizar,
concentracin de reactivos y tiempo de reaccin.
COOH COO-
Na2CO3
HO OH HO OH
OH OH
- -
COO COO
+ 2 Mo6+ + 2 Mo5+ + 2 H+
HO OH O OH
OH O
Figura N 2.5 Reaccin del cido glico con el reactivo de folin-ciocalteu

Tambin se pueden producir variaciones en el modo de expresar los resultados, sin

embargo, el patrn recomendado es el cido glico. Este ensayo de anlisis de los
polifenoles totales, se utiliza con frecuencia en el estudio de las propiedades
antioxidantes de alimentos vegetales, como zumos de fruta, al tratarse de un
parmetro que generalmente, muestra una estrecha correlacin con los diferentes
mtodos de medicin de la actividad antioxidante. (50)
40
2.7.2 DETERMINACION DE COMPUESTOS POLIFENOLICOS POR

ESPECTROFOTOMETRIA
El uso del mtodo de Folin-Ciocalteau se utiliza para determinar compuesto

fenlicos, el cual necesariamente utiliza los siguientes reactivos.
Se prepara una solucin de carbonato de sodio al 20% (Na2CO3) en una fiola,

para lo cual se pes 10 g de carbonato de sodio y se disolvi en 50 ml de agua
destilada.
Se prepar una solucin de madre de cido glico de 1000 ppm lo cual se
pes 0.05 g de cido glico y se transfiri a una fiola de 50 ml se disolvi y se
enraz con agua destilada. A partir de esta solucin madre se prepar 5
diluciones de diferentes concentraciones en un rango de 2 ppm-10 ppm
siguiendo la siguiente ecuacin de dilucin.
C X V= C1 X V1
1000 ppm X V1 = 2 ppm X 10 ml
V1 = 0.02 ml = 20 ul
Se prepararon 05 diluciones con concentraciones de 2, 4, 6,8 y 10 ppm a

partir de la solucin madre de 1000 ppm los cuales son llevados a fiolas de 10
ml a partir del cual se utilizara para obtener la curva de calibracin de cido
glico.
41
TABLA N 2.1 Diluciones Para La Curva De Calibracin De cido Glico

Concentracin de Solucin Patrn de
Acido Glico Acido Glico
(ppm) 1000 ppm (ul)
2 ppm 20
4 ppm 40
6 ppm 60
8 ppm 80
10 ppm 100
En la Tabla N 2.2 se muestran los valores a utilizarse para la preparacin de la curva

de calibracin. Luego de realizada la mezcla se dej reaccionar por 2 horas en
oscuridad, se prepar un blanco para ajustar la absorbancia a cero.
TABLA N 2.2 Valores para preparar la curva de calibracin de cido glico
N Patrn Blanco Std 1 Std 2 Std 3 Std 4 Std 5

Concentracin de 0 2 4 6 8 10
cido glico ppm
Solucin patrn de
cido glico
0 1 1 1 1 1
1000 ppm (ml)
Agua destilada (ml) 4 4 4 4 4 4
Reactivo de Folin- 250 250 250 250 250 250

Ciocalteau (ul)
Carbonato de Sodio 2 2 2 2 2 2
al 20% (ml)
Volumen final de 7.25 7.25 7.25 7.25 7.25 7.25
los tubos de ensayo
42
Los volmenes finales de todos los tubos al momento de mesclar los reactivos es de
7.25, en el tubo blanco se siguen las indicaciones de la Tabla N2.2 se le agrega 1 ml
de agua destilada para poder trabajar tambin a un volumen de 7.25 ml.
Luego se procedi a medir las absorbancias a 765 nm en el espectrofotmetro, se

traz la Absorbancia Vs Concentracin para obtener la curva de calibracin
estndar.
La determinacin de los compuesto fenlicos en las muestras extradas por el equipo

de extraccin se hizo el mismo procedimiento en la tabla N2.2 en lugar de usar
cido glico se adiciono las muestras en estudio. Estas muestras fueron ledas en el
espectrofotmetro contra un blanco a 765 nm, trabajando en condiciones oscuridad y
temperatura ambiente.
FIGURA N 2.6 Tubos con estndares para hacer la lectura en el espectrofotmetro
43
2.8 DETERMINACION DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTES
La determinacin de la capacidad antioxidante de muestras naturales o sintticas,

existe muchos mtodos, para este trabajo de investigacin se realiz el mtodo
CUPRAC (Cupric Ion Reducing Antioxidant Capacity).
2.8.1 METODO CUPRAC (ION CUPRICO REDUCCION DE LA

CAPACIDAD ANTIOXIDANTE)
Mtodo de Cuprac
En el presente trabajo se determinara la capacidad antioxidante del aguaymanto.
Para ello se utilizar un procedimiento en que consiste en utilizar el reactivo Cu(II)-
Neocuproina[Cu(II)-Nc] como agente oxidante cromognico. El procedimiento se
denomina CUPRAC, acrnimo del ingls copper reducing antioxidant capacity.
Los protones liberados pueden neutralizarse con la solucin de acetato amnico. En
esta reaccin los polifenoles (-OH) se oxidan a las correspondientes formas
quinnicas (= O) y el Cu (II)-Nc es reducido a Cu(I)-Nc que es muy coloreado y
muestra un mximo de absorcin a 450 nm.
ComplejodeCu+2AntioxidanteComplejodeCu+1
Representativo
Figura N 2.7 Reduccin del cobre y formacin de complejo

Las ventajas del mtodo de Cuprac para la evaluacin de la capacidad antioxidante

son:
El mtodo Cuprac acta lo suficiente rpido para oxidar antioxidantes que
poseen grupo tiol, que no son detectados por otros mtodos.
44
Este reactivo (Cuprac) esta disponible en la mayora de laboratorios.

El reactivo es mucho ms estable y fcilmente accesible que los reactivos
cromognico radicales.
El quelato producido por el Cu+1 no puede actuar como un prooxidante por lo
que no se podra dar un error negativo en la determinacin antioxidante del
Cu+1
La absorbancia CUPRAC frente a las curvas de concentracin estn
perfectamente lineal en un amplio intervalo de concentracin, a diferencia de
los de otros mtodos que producen curvas polinmicas.
Los valores de TAC (Capacidad antioxidante total de antioxidantes) que se
encuentran con CUPRAC son perfectamente aditiva, es decir, los TAC de una
mezcla fenlica es igual a la suma de los valores de TAC de sus polifenoles
constituyentes.
Este mtodo mide simultneamente antioxidante lipofilicos e hidrofilicos.(51)
Reactivos a Preparar:
Acetato de Amonio: Solucin Buffer 1M a pH7.

Neocuproina: Solucin 7.5 x 10-3 M en Etanol.
Cloruro de cobre Di hidratado: Solucin 1.2 x 10-2 M en Agua.
cido Ascrbico: Stock 2.0 x 10-4 M en Etanol.
2.8.2 DETERMINACION DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE POR

ESPECTROFOTOMETRIA
Para la determinacin de la capacidad antioxidante se prepar una curva de

calibracin de cido ascrbico para lo cual se usaron 6 tubos de ensayo, de los cuales
un tubo es el tubo blanco y 5 tubos son los estndares, a los cuales se le aadi las
siguientes soluciones: 1 ml de Buffer Acetato de Amonio, 1 ml de Neocuproina, 1 ml
de CuCl2, cido Ascrbico 0.25ml, 0.5ml, 1ml, 1.5ml, 2ml, con excepcin del
blanco, finalmente se agregaron 2ml, 1.75ml, 1.5ml, 1ml, 0.5ml excepto al tubo
nmero 5.(Tabla N4)
Luego de ser mezcladas y dejadas en reposo a temperatura ambiente por 30 minutos

en oscuridad, y fueron ledas en el espectrofotmetro a 450 nm.
45
TABLA N2.3 Valores para preparar la curva de calibracin con cido ascrbico
Blanco Std.1 Std.2 Std.3 Std.4 Std.5

Buffer Acetato (ml) 1 1 1 1 1 1
Neocuproina (ml) 1 1 1 1 1 1
CuCl2 (ml) 1 1 1 1 1 1
cido Ascrbico (ml) - 0.25 0.5 1 1.5 2
Agua Destilada (ml) 2 1.75 1.5 1 0.5
FIGURA N 2.8 Tubos con estndares para hacer la lectura en el espectrofotmetro
46
CAPITULO III
RESULTADOS Y DISCUSION
3.1.- RECOLECCION
La recoleccin del fruto de aguaymanto fue recolectada en un vivero del distrito de

Orcopampa, provincia de Castilla departamento de Arequipa se recolectaron en horas
de la maana aproximadamente 6 kilos de fruto de aguaymanto.
Luego se lavaron los frutos con agua corriente y se finalmente se enjuagaron con
agua destilada se secaron con tela de algodn, una vez estando seco se procedi a
seleccionar el fruto por su tamao, su estado de maduracin y que no estn
golpeadas, no deben recolectarse cuando estn baadas por el roci o lluvia y deben
desecharse si estn descoloridos o atacados por insectos, luego se almaceno bajo una
temperatura de 4C para luego llevarlas a la ciudad de Arequipa a los laboratorios de
la Universidad Catlica de Santa Mara.
Estas muestras del fruto de aguaymanto en los laboratorios de la Universidad

Catlica de Santa Mara se procedieron a cortarlos en rodajas para llevarlas el horno
desecador a una temperatura de 60oC por un tiempo de 7 horas hasta sequedad, luego
47
se pes 10 g del fruto desecado, se procedi a realizar las extracciones con los
respectivos solventes.
En el caso de la liofilizacin tambin se procedi a cortar el fruto en mitades con un

cuchillo de plstico para evitar la oxidacin del fruto y se procedi a colocarlas en la
bandeja del liofilizador para qu empiece su tratamiento, luego terminado el mismo
se procedi a pulverizar el producto para tambin realizar las extracciones con los
respectivos solventes.
Para la identificacin taxonmica del fruto se envi una muestra al laboratorio de

biologa de la Universidad Nacional de San Agustn.
3.2. PREPARACION DE LOS EXTRACTOS Y LA DETERMINACION DEL

PORCENTAJE DE RENDIMIENTO
Se realizaron extracciones con diversos solventes (etanol, metanol y heptano) por

duplicado bajo las mismas condiciones, lo cual se emple el mtodo de extraccin
por Soxhlet.
Luego para evaluar la capacidad antioxidantes y la determinacin de compuesto

fenlicos totales se usaron los mtodos de CUPRAC y FOLIN-CIOCALTEU
respectivamente, se realizaron extracciones continuas la cual se usaron el mtodo de
extraccin Soxhlet usado los solventes etanol, metanol y heptano.
3.2.1 OBTENCION DE EXTRACTOS
3.2.1.1 EXTRACTO ETANOLICO OBTENIDO POR EL METODO DE

EXTRACCION SOXHLET
Para realizar la extraccin con etanol se realiz el mtodo de extraccin Soxhlet la

cual se realiz 2 veces, en las mismas condiciones en 2 das consecutivos de manera
independientes.
Para la extraccin de los principios activos de la muestra de aguaymanto se usaron

dos tipos de muestras, una muestra fresca la cual se estabilizo y se deseco, y otra
muestra que se liofilizo, en ambas muestras se tomaron 10 g, luego se procedi a
envolver con papel filtro formando unos pequeos cartuchos de papel filtro que
48
fueron colocados en el cuerpo del equipo de extraccin. En el baln del equipo de

extraccin se coloc 150 ml de etanol como menstruo, la extraccin hasta el
agotamiento de la muestra que duro aproximadamente 5 horas, obtenindose al final
del extracto etanolico una coloracin dorado.
Para la obtencin del extracto seco se llev el extracto etanolico al equipo de

rotavapor a una temperatura de 78C (punto de ebullicin del etanol) hasta obtener
un volumen menor a 20 ml, luego se llev el baln al horno desecador hasta realizar
desecacin completa a un peso constante.
Una vez realizada la desecacin individual de cada muestra tanto la muestra,

desecada y liofilizada se procedi a calcular el porcentaje de rendimiento de cada una
de las extracciones. (Tabla N 3.1)
Una vez que se determin el porcentaje de rendimiento en los dos tipos de muestras,
se realiz la reestructuracin de las muestras en los balones con el mismo tipo de
solvente de extraccin (etanol) a un volumen final de 150 ml para luego colocarlos
en un frasco color mbar rotulados y llevarlos a refrigeracin de 4C, se reserva estos
extractos para luego ser usados.
Tabla N 3.1 Porcentaje de rendimiento de los extractos etanolicos de las muestras

desecada y muestra liofilizada del fruto de aguaymanto obtenidos por mtodo soxhlet
Peso del Extracto Porcentaje de

(g) Rendimiento (%)
3,265 32.65
Muestra
Desecada 2,928 29,28

Promedio 30,965
4,704 47,04
Liofilizada 4,261 42,61
Promedio 44,825
49
3.2.1.2 EXTRACTO METANOLICO OBTENIDO POR EL METODO DE

EXTRACCION SOXHLET
Para realizar la extraccin con metanol se us extraccin por Soxhlet, esto se realiz
2 das consecutivos de manera independiente, usando una muestra de 10g.
Para la extraccin de los principios activos de las muestra de aguaymanto se us la

misma tcnica de extraccin con etanol la que se us 10 g de muestra, tanto desecada
como liofilizada del cual se envolvi en papel filtro formando cartuchos pequeos
para que puedan ser colocados dentro del cuerpo del equipo de extraccin.
En el baln del equipo de extraccin se coloc 150 ml de metanol como menstruo, la

extraccin se realiz hasta agotamiento de la muestra que aproximadamente duro 5
horas y as obtenindose un extracto metanolico con una coloracin amarillo claro.
Para la obtencin del extracto seco se llev el extracto metanolico al equipo de rota
vapor a una temperatura de 64C (punto de ebullicin del metanol) hasta obtener un
volumen menor a 20 ml, luego se llev el baln al horno desecador hasta realizar
desecacin completa a un peso constante..
Una vez realizada la desecacin tanto en la muestra liofilizada y desecada se

procedi a realizar el porcentaje de rendimiento de la muestra (Tabla N 3.2).
Despus de calcular el porcentaje de rendimiento se procedi a disolver la muestra

desecada y liofilizada a un volumen de 150 ml y se guard en frascos color mbar,
se almaceno a temperatura menor de 4C hasta ser empleado.
50
Tabla N 3.2 Porcentaje de rendimiento de los extractos metanolicos de la muestra

desecada y muestra liofilizada del fruto de aguaymanto obtenidos por mtodo soxhlet

(g) Rendimiento (%)
4,432 44,32
Muestra
Desecada 4,022 40,22

Promedio 42,27
5,928 59,28
Promedio 54,77
3.2.1.3 EXTRACTO HEPTANICO OBTENIDO POR EL METODO DE

EXTRACCION SOXHLET
La extraccin con heptano se realiz como en las extracciones anteriores durante 2

das consecutivos de manera independiente usando una muestra de 10 g.
Para los principios activos de la muestra de aguaymanto se us el mismo tipo de

tcnica realizada anteriormente, el cual se us tambin 10 g de muestra liofilizada y
desecada, siguiendo el procedimiento anteriormente descrito.
Se coloc 150 ml de heptano como solvente de extraccin, se trabaj hasta

agotamiento de la muestra, esto duro aproximadamente 6 horas, obteniendo un
extracto heptanico.
La coloracin de los extractos tanto liofilizado y desecado mostro dos coloraciones

distintas, en el caso del extracto con muestra desecada y liofilizada se obtuvo una
coloracin casi transparente pero ligeramente amarillo muy tenue.
Los extractos heptanicos se llevaron al equipo de rotavapor a una temperatura de

98C (punto de ebullicin del Heptano) hasta obtener un volumen menor a 20 ml, el
51
baln se llev al horno desecador para la eliminacin total del solvente a una
temperatura de 40C hasta sequedad.
Luego de realizar la desecacin de las muestras liofilizada y desecada se realiz el

clculo del porcentaje de rendimiento de la muestra (Tabla N 3.3).
Una vez determinada su porcentaje de rendimiento, las dos tipos de muestras se

volvieron a reconstituir con sus respectivo solvente, se le agrego 150 ml de solvente
(heptano).
TABLA N 3.3 Porcentaje de rendimiento de los extractos heptanico de la

muestra desecada y muestra liofilizada del fruto de aguaymanto obtenidos por
mtodo soxhlet

(g) Rendimiento (%)
0,011 0,11
Muestra
Desecada 0,0094 0,094

Promedio 0,102
0,085 0,85
Promedio 0,815
3.3 LIOFILIZACION DE MUESTRA DE PHYSALIS PERUVIANA
Inicialmente se pes 750 g de muestra el cual se coloc en la bandeja del liofilizador,

luego de terminada la liofilizacin se volvi a pesar la muestra ya estando dentro de
una bolsa hermticamente cerrada para que dicha muestra liofilizada no tome
humedad, el cual se calcul la perdida de agua despus de la liofilizacin:
Pi = Peso inicial de la muestra cortada en mitades: 750 g
Pf = Peso de la muestra liofilizada: 105 g
Pi-Pf = 645 g
52
El cual se puede observar que la liofilizacin realizo la extraccin del 86 % del peso
inicial el cual se puede concluir que se elimin el agua contenida en el fruto.
3.4 CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA
3.4.1 ANLISIS FITOQUIMICO PRELIMINAR: CROMATOGRAFA DE

CAPA FINA
La cromatografa en capa fina del extracto etanolico de Aguaymanto, se realiz con

el objetivo de identificar algunos de los principales metabolitos secundarios que
seran los responsables del efecto Fito farmacolgico.
IDENTIFICACIN DE TANINOS
Rf. 0.89
Figura N 3.1 IDENTIFICACION DE TANINOS LUZ VISIBLE

Fuente: Elaboracin Propia, 2016
La placa cromatografica para taninos que utilizo como fase mvil una mezcla de
metanol y acetato de etilo (50:50) y como revelador cloruro frrico en etanol;
muestra en detalle una banda que podra corresponder a este tipo de metabolito se
observa mancha color verde (Rf de 0.89)
53
IDENTIFICACIN DE FLAVONOIDES
Fase Mvil : metanol y acetato de etilo (50:50)
Revelador: AlCl3 al 1% en etanol a luz UV a 366 nm
1. Fruto desecado Rf= 0.91
2. Fruto liofilizado Rf= 0.91
3.Quercetina Rf=0.87
4. Rutina Rf=0.10
Figura N 3.2 IDENTIFICACIN DE FLAVONOIDES

Tabla N 3.4 Cuadro de identificacin de flavonoides
Muestra Muestra Estndar Estndar rutina

Muestra
extracto Extracto Quercetina

Desecado Liofilizado
N color Rf Color Rf color R Color Rf
1 Azul- 0.91 - - - - - -
turqueza
2 - - Azul- 0.91 - - - -
turqueza
3 - - - - Amarillo 0.87 - -
4 - - - - - - Amarillo- 0.10
naranja
54

La placa cromatografica para flavonoides utilizo como fase movil una mezcla de
metanol y acetato de etilo (50:50) y como revelador AlCl3 al 1% en etanol a luz UV a
366 nm, muestra en detalle las bandas que podra corresponder a este tipo de
metabolitos, se observan manchas azul turquesa(Rf de 0.91) en muestra desecada y
liofilizada y se observa mancha color amarillo (Rf de 0.87) en estndar de Quercetina
y mancha color naranja caf(Rf de 0.10) para estndar de Rutina.
IDENTIFICACION DE FLAVONOIDES ESTNDAR QUERCETINA Y

RUTINA
Fase Mvil : metanol y acetato de etilo (50:50)
Revelador: vapores de amoniaco a luz UV a 366 nm
1. Fruto desecado Rf1= 0.91

2. Fruto desecado Rf2 = 0.57
3. Fruto liofilizado Rf = 0.91
4. Quercetina Rf = 0.87
Tabla N 3.5 Identificacin de flavonoides estndar quercetina y rutina
Muestra Muestra Estndar Quercetina

Muestra
extracto Extracto
Desecado Liofilizado
N Color Rf Color Rf color Rf
1 Azul-turqueza 0.91 - - - -
2 Azul-turqueza 0.57 - - - -
3 - - Azul-turqueza 0.91 - -
4 - - - - Amarillo 0.87
55

La placa cromatografica para flavonoides que utilizo como fase mvil una mezcla de
metanol y acetato de etilo (50:50) y como revelador vapores de amoniaco a luz UV a
366 nm, muestra en detalle las bandas correspondientes a este tipo de metabolito, se
observan manchas azul turquesa (Rfs 0.57, 0.91) en muestra desecada y muestra
liofilizada se observa una mancha color azul-turqueza (0.91), Se observa una
mancha color amarillo (Rf de 0.87) para estndar de quercetina.
IDENTIFICACIN DE ALCALOIDES
Figura N 3.4 IDENTIFICACIN DE ALCALOIDES

La placa cromatografica para alcaloides que utilizo como fase mvil una mezcla de
metano: acetato de etilo(50:50) y como revelador reactivo Dragendorf a luz UV a
366 nm el cual tiene un color naranja muy intenso el cual se observ que no contiene
sustancias alcaloides (negativo)
3.5 DETERMINACION DE COMPUESTOS POLIFENOLICOS TOTALES

(CPT)
Para la determinacin de compuestos fenlicos totales (CPT) se realiz un ensayo de

FOLIN-CIOCALTEU. Este mtodo es usado para la determinacin de compuesto
fenlicos ya que es un mtodo bastante fcil de usar y adems se usa tcnicas
espectrofotomtricas usando como curva de calibracin el cido glico previamente
calibrado como solucin patrn.
56
Se procedi en primer lugar a obtener la curva de calibracin de cido glico, para

ello se utiliz 6 tubos de ensayo previamente rotulados en los cuales se le agregaron
en forma ordenada primero cido glico, agua destilada, reactivo de Folin-Ciocalteu
y finalmente Carbonato de sodio al 20% obteniendo un volumen final de 7.25 ml en
este caso el tubo blanco no se le agrego cido glico, ms detallado se describi en el
Captulo II una vez terminado el procedimiento se llev a reposar a oscuridad para
que reaccionaran por 2 horas, luego de concluido se llev al pabelln H 201
(laboratorio de control de calidad) para las lecturas en el espectrofotmetro UV/V a
765nm.(Tabla N 3.6)
Este procedimiento se realiz por triplicado en das consecutivos, usando las mismas
condiciones que la primera vez.
Tabla N3.6 Datos de la curva de calibracin de cido glico
Concentracin Absorbancias a760 nm Absorbancia Desviacin

N
(mg/L) Abs 1 Abs 2 Abs 3 Promedio Estndar
1 2 0.025 0.024 0.026 0.025 0.00100
2 4 0.054 0.054 0.055 0.054 0.00058
3 6 0.083 0.086 0.084 0.084 0.00153
4 8 0.112 0.113 0.112 0.112 0.00058
5 10 0.142 0.147 0.143 0.144 0.00265
FUENTE: Elaboracin Propia, 2016
Estos datos de la tabla N 3.6 fueron sometidos a un anlisis estadstico de regresin

lineal, el objetivo de este anlisis es poder obtener una curva de calibracin del
mtodo y que la ecuacin sea capaz de vincular las dos variables (concentracin y
absorbancia). El anlisis de la regresin va permitir obtener un modelo de relacin la
que se obtiene una variable dependiente Y (absorbancia) y una variable
independiente X (concentracin de Acido Glico mg/L), el coeficiente de
determinacin r2 va a indicar cul es el porcentaje de variabilidad en que la variable
Y pueda ser explicada por la variable X.
57
Se puede observar en la Figura N 3.5 que la respuesta es lineal ya que el coeficiente

de determinacin es cercano a la unidad, lo que indica que hay una relacin directa
entre la concentracin de los compuestos fenlicos del extracto de aguaymanto y la
absorbancia.
En la curva de calibracin se obtuvo el coeficiente de determinacin (r2) igual a

0.9997, teniendo una pendiente (b) de 0.0148 y teniendo un intercepto () 0.0048.
Esto indica un buen ajuste de datos por lo que la ecuacin de regresin va a quedar
de la siguiente manera:
Y = b(x) + a
y = 0.0148 x - 0.0048
Figura N3.5 Grafica de calibracin usando como estndar acido glico

FUENTE: Elaboracion Propia, 2016
La determinacin de los lmites de deteccin y cuantificacin se realiz el siguiente

clculo llevado la concentracin a 0
Para calcular Ybl se lleva la concentracin igual a 0.
y = 0.0148 (0) - 0.0048

Por lo tanto Ybl = 0.0048
58
Para la determinacin de Sbl se tiene que relacionar la Concentracin Vs Desviacin

Estndar dndonos la siguiente ecuacin:
y = 0.000165x + 0.000278
Ahora determinamos el clculo de la Desviacin Estndar de la absorbancia a la

concentracin 0:
a=0.000278
b=0.000165
y = 0.000165(0) + 0.000278
Por lo tanto Sbl = 0.000278
Determinacin de los Lmites de deteccin para Fenoles Totales
Ybl 3 Sbl 1
LDD x
b n1
0,0048 3 0,000278 1
LDD
0,0148 5
LDD =0.170
Determinacin delos Lmites de cuantificacin para Fenoles Totales
Ybl 10 Sbl 1
LDQ x
b n1
0,0048 10 0,000278 1
LDQ x
0,0148 5
LDQ = 0,229 ppm
En la curva de calibracin obtenida (Figura N 3.5) para la cuantificacin de fenoles

totales se determin que tiene un lmite de deteccin de 0.170 ppm y un lmite de
cuantificacin de 0.229 ppm, lo que se deduce que los valores por debajo de estas
concentraciones no sern detectables ni cuantificables con este mtodo utilizado.
59
Como se puede observar en las tablas las concentraciones de fenoles totales hallados
en la extraccin etanolica por soxhlet de la muestra de aguaymanto, desecada y
liofilizada se demuestra que son detectables y cuantificables.
El contenido de compuestos fenlicos totales que se encontraron en la extraccin

etanolica por soxhlet se expresa en miligramos (mg) de Acido Glico equivalente
(GAE) /10 g de aguaymanto
En las Tabla N 3.7 se puede apreciar las absorbancias y las concentraciones finales
de los extractos etanolicos de aguaymanto la que se encontr compuestos fenlicos
los cuales los valores oscilan de 145.17 a 146.64 mg GAE/10 g de extracto
Etanolico desecado obtenido por mtodo soxhlet y valores que oscilan de 148.11 a
153.99 mg GAE/10 g de extracto etanolico liofilizado obtenido por mtodo soxhlet.
Adems se puede observar en las tablas las concentraciones de fenoles totales

hallados en la extraccin metanolica por soxhlet de la muestra de aguaymanto,
desecada y liofilizada se demuestra que son detectables y cuantificables.
En las Tabla N 3.7 se puede apreciar las absorbancias y las concentraciones finales
de los extractos con metanol de aguaymanto la que se encontr compuestos
fenlicos los cuales los valores oscilan de 123.12 a 124.59 mg GAE/10 g de extracto
con metanol desecado obtenido por mtodo soxhlet y valores que oscilan de 136.35 a
137.82 mg GAE/10g de extracto con metanol liofilizado obtenido por mtodo
soxhlet.
Tabla N 3.7 Extraccin SOXHLET
Extraccin Etanolica
Muestra Concentracin mg GAE/ 10 g de
desecada Absorbancias (mg/L) muestra
1 0.095 6.743 146.64
2 0.094 6.675 145.17
Promedio 0.0945 6.709 145.92
60
Extraccin Metanolica
desecada Absorbancias (mg/L) muestra
1 0.079 5.662 123.12
2 0.08 5.729 124.59
Promedio 0.0795 5.69 123.7575
Extraccin Etanolica
liofilizada Absorbancias (mg/L) muestra
1 0.1 7.081 153.99
2 0.096 6.162 148.11
Promedio 0.098 6.945 151.053
liofilizada Absorbancias (mg/L) muestra
1 0.088 6.27 136.35
2 0.089 6.337 137.82
Promedio 0.0885 6,304 137.112
3.5.1 EXTRACTO ETANOLICO DESECADO POR MTODO SOXHLET
Se parte desde la ecuacin de la recta del cido glico.
Y = 0.0148 (x) - 0.0048
0.0945 = 0.0148 (x) - 0.0048
X= 6.709 mg/L
Hallando las concentraciones en cada disolucin que se realiz para la muestra
(C1)(1ml) = (6.709mg/L)(7.25ml)
C1 =48.64 mg/L
(C2)(0.5ml)=(48.64 mg/L)(10ml)
C2 =972.8 mg/L
61
Determinando la cantidad de compuestos fenlicos de la muestra

X= 972.8 mg x 150 ml
1000ml
X= 145.92 mg GAE/10 g de muestra
Determinando la cantidad porcentual de fenoles totales obtenidos en la muestra

promedio de extraccin.
%Fenoles Totales = 145.92mg x 100

3096.5 mg
%Fenoles Totales = 4.712%
3.5.2 EXTRACTO METANOLICO DESECADO POR MTODO SOXHLET
Y = 0.0148 (x) - 0.0048
0.0795 = 0.0148 (x) - 0.0048
X= 5.69 mg/L
(C1)(1ml) = (5.69 mg/L)(7.25ml)

C1 =41.2525 mg/L
(C2)(0.5ml) = (41.2525 mg/L)(10ml)

C2 =825.05 mg/L
Determinando la cantidad de compuestos fenlicos en la muestra
X= 825.05 mg x 150 ml
1000ml
X= 123.7575 mg GAE/ 10 g de muestra
62

%Fenoles Totales = 123.7575mg x 100

4227 mg
3.5.3 EXTRACTO ETANOLICO LIOFILIZADO POR MTODO SOXHLET
Y = 0.0148 (x) - 0.0048
0.098 = 0.0148 (x) - 0.0048
X= 6.945 mg/L
(C1)(1ml) = (6.945 mg/L)(7.25ml)
C1 =50.351 mg/L
(C2)(0.5ml) =(50.351 mg/L)(10ml)
C2 =1007.02 mg/L
Determinando la cantidad de compuestos fenlicos en la muestra
X= 1007.02mg x 150 ml
1000ml

%Fenoles Totales = 151.053 mg x 100

4482.5 mg
63
3.5.4 EXTRACTO METANOLICO LIOFILIZADO POR MTODO

SOXHLET
Y = 0.0148 (x) - 0.0048
0.0885= 0.0148 (x) - 0.0048
X= 6.304 mg/L
(C1)(1ml) = (6.304 mg/L) (7.25ml)
C1 =45.704 mg/L
(C2)(0.5ml) = (45.704 mg/L)(10ml)
C2 =914.08 mg/L
Determinando la cantidad de compuestos fenlicos en 10 g de muestra
X= 914.08 mg x 150 ml
1000ml
Determinando la cantidad porcentual de fenoles totales obtenidos en la de

muestra promedio de extraccin.
%Fenoles Totales = 137.112 mg x 100

5477 mg
%Fenoles Totales = 2.50 %
64
3.6 DETERMINACION DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE POR EL

METODO DE CUPRAC
Para la realizacin de la determinacin de la capacidad antioxidante de la

aguaymanto, para este trabajo se utiliz el mtodo de CUPRAC, la cual se realiz
por triplicado.
En la construccin de la curva de calibracin de este mtodo se us el cido

ascrbico del cual se dispuso 6 tubos del cual incluyo el blanco la cual las
absorbancias de dichos tubos se leen en el espectrofotmetro a 450 nm.
Los 6 tubos que han sido ledos en el espectrofotmetro contienen soluciones de

buffer acetato de amonio 1M, Neocuproina7.5 x 10-3 M, cloruro de cobre II 1.2 x 10-
2
M y cido ascrbico 2.0 x 10-4 M ( el tubo blanco no contiene cido ascrbico)
luego a final se le agrega agua destilada a todos los tubos, ms detalladamente se
explica en el captulo II de este trabajo, luego estos tubos se colocan en una gradilla
cubiertas en papel aluminio cada tubo el cual se coloca dicha gradilla en una zona
oscura sin contacto con la luz, se deja reaccionar por 30 minutos los cuales estos
tubos presenta coloracin anaranjado claro muy tenue que luego se llev al pabelln
H 201 (laboratorio de control de calidad) para las lecturas en el espectrofotmetro
UV/V a 450nm.Esta lectura se realiz por triplicado en tres das consecutivos las
cuales tuvieron las mismas condiciones para realizar la lectura en la primera vez.
Tabla N 3.8 Absorbancias por triplicado, curva de calibracin de cido ascrbico
Concentracin Absorbancias a 450 nm Absorbancia Desviacin

N
(mM) Abs 1 Abs 2 Abs 3 Promedio Estndar
1 0.01 0.3570 0.3610 0.3590 0.35900 0.0020000
2 0.02 0.5480 0.5420 0.5620 0.55067 0.0102632
4 0.04 0.9270 0.9310 0.9420 0.93333 0.0077675
6 0.06 1.2920 1.2850 1.3200 1.29900 0.0185203
8 0.08 1.6820 1.6730 1.6850 1.68000 0.0062450
FUENTE ELABORACION PROPIA, 2016
65

Los valores obtenidos en la Tabla N 3.8 son sometidos estos datos a un anlisis
estadstico de regresin lineal del cual se obtuvo un coeficiente de determinacin r2
igual a 0.9999393, una pendiente (b) 18.8270325, y un intercepto () 0.1736646
Por lo tanto esto indica un buen ajuste de los datos lo que la ecuacin de regresin
queda de la siguiente manera:
Y= b(x) + a
y = 18.8270x + 0.17366
Se grafic la curva de calibracin usando como estndares las soluciones de cido

ascrbico a diferentes concentraciones.
En la Figura N 3.6 se puede observar que esta curva de calibracin de calibracin

obtenida, presenta un valor de R2 =0.9999393, muy cercano a la unidad lo que indica
que hay una relacin directa entre la absorbancia y la concentracin del cido
ascrbico, por lo tanto dicha ecuacin va a servir de referencia para la determinacin
de la capacidad antioxidante de la muestra en estudio.
CurvadeCalibracionAcidoAscorbico
1,8000000 y=18.8270x+0.173664
1,6000000 R=0.9999393
1,4000000
1,2000000
Absorbancia
1,0000000
0,8000000 promabs
0,6000000
Lineal(promabs)
0,4000000
0,2000000
0,0000000
0 0,02 0,04 0,06 0,08 0,1
Concentracion
Figura N 3.6 Grafica de calibracin usando como estndar cido ascrbico

Fuente de elaboracin propia, 2016
66
La determinacin de los lmites de deteccin y cuantificacin se realiz el siguiente

clculo llevado la concentracin a 0
Para calcular Ybl se lleva la concentracin igual a 0.
y = 18.8270 (0) + 0.173664

Por lo tanto Ybl = 0.173664
Para la determinacin de Sbl se tiene que relacionar la Concentracin Vs Desviacin
Estndar dndonos la siguiente ecuacin:
y = 0.080899 x + 0.0055614
Ahora determinamos el clculo de la Desviacin Estndar de la absorbancia a la

concentracin 0:
a=0.080899
b= 0.0055614
y = 0.080899 (0) + 0.0055614

Por lo tanto Sbl= 0.0055614
Determinacin de los Lmites de deteccin.
Ybl 3 Sbl 1
LDD x
b n1
0.1736 3 0.00556 1
x
18.8270 5
LDD= 0,0045 mM
Determinacin delos Lmites de cuantificacin.
Ybl 10 Sbl 1
LDQ x
b n1
0.0054
0.1736 10 0.00556 1
x
18.8270 5
LDQ = 0,0054 mM
67
La curva de calibracin para determinar la capacidad antioxidante, muestra un lmite

de deteccin de 0.0045 mM y un lmite de cuantificacin de 0.0054 mM lo que va a
indicar que los valores por debajo de estas concentraciones no sern detectable ni
cuantificables.
Utilizando el mtodo CUPRAC, los resultados sern expresados como capacidad

antioxidante equivalente a cido ascrbico que se reporta como mg de cido
ascrbico/ g de extracto.
Usando la ecuacin de la curva de calibracin teniendo como estndar el cido

ascrbico se realiz los clculos de contenido de mg equivalente de cido
ascrbico/10 g de muestra el cual se puede apreciar en la tabla N 3.9 y se determino
mg eq. cido ascrbico/10 g de muestra desecada de los extractos etanolicos y
metanolicas, y de muestra liofilizada de los extractos etanolicos y metanolicos
La muestra usada para la determinacin de capacidad antioxidante de la aguaymanto

se us 5 ml del extracto enrasado en una fiola de 10ml.
Tabla N 3.9 Absorbancias De Los Extractos
Extraccin Etanolica
mg eq. cido
Muestra Concentracin ascrbico/10 g de
desecada Absorbancias (mM) muestra
1 0.285 8.85 1558.66
2 0.284 8.70 1532.24
Promedio 0.2845 8.7 1532.24
mg eq. cido
desecada Absorbancias (mM) muestra
1 0.266 7.35 1294.48
2 0.265 7.2 1268.06
Promedio 0.2655 7.2 1268.06
68
Extraccin Etanolica
mg eq. cido
liofilizada Absorbancias (mM) muestra
1 0.35 13.95 2456.87
2 0.347 13.86 2441.02
Promedio 0.3485 13.8 2430.456
mg eq. cido
Muestra Concentracin ascrbico/10 g
liofilizada Absorbancias (mM) de muestra
1 0.338 13.05 2298.36
2 0.336 12.9 2271.94
Promedio 0.337 12.9 2271.95
Clculos extracto Etanolico desecado
Se parte desde la ecuacin de la curva de calibracin
ABS= 0.2845 CC =0.0058 mM
(C1)(1ml) = (5 ml)(0.0058 mM)
C1 =0.029 mM
(C2)(5 ml)=(10 ml)(0.0295 mM)
C2 =0.058 mM
Determinando la cantidad de capacidad antioxidante 10 g de muestra
contenidos en 150 ml de solvente
0.058 mmol x 150 ml = 8.7 mmol
ml
X= 8.70 mmol eq. cido ascrbico/10 g de muestra
176,12 mg x 8.7 mmol =1532.244 mg

mmol
X= 1532.244 mg Eq. cido ascrbico/10 g de muestra
69
Determinando la cantidad porcentual de capacidad antioxidante obtenidos en la

muestra de extraccin.
%capacidad antioxidante = 1532.244mg x 100

3096.5 mg
% capacidad antioxidante = 49.48 %
Clculos Extracto Metanolico desecado
ABS= 0.2655 CC =0.0048 mM
(C1)(1ml) = (5 ml)(0.0048 mM)
C1 =0.024 mM
(C2)(5 ml)=(10 ml)(0.0245 mM)
C2 =0.048 mM

X=0.048 mmol x 150 ml = 7.2 mmol

ml
176,12 mg x 7.2 mmol = 1268.064 mg

mmol
70

%capacidad antioxidante = 1268.064 mg x 100

4227 mg
Clculos Extracto Etanolico liofilizado
ABS= 0.3485 CC =0.0092 mM
(C1)(1ml) = (5 ml)(0.0092 mM)
C1 =0.046 mM
(C2)(5 ml)=(10 ml)(0.046 mM)
C2 =0.092 mM

X=0.092 mmol x 150 ml

ml
176,12 mg x 13.8 mmol = 2430.456 mg

mmol
71


4482.5 mg
% capacidad antioxidante = 54,22 %
Clculos Extracto Metanolico Liofilizado
ABS= 0.337 CC =0.0086 mM
(C1)(1ml) = (5 ml)(0.0086 mM)
C1 =0.043 mM
(C2)(5 ml)=(10 ml)(0.043 mM)
C2 =0.086 mM

X= 0.086 mmol x 150 ml
ml
X=12.9 mmol eq. cido ascrbico/10 g de muestra
176,12 mg x 12.9 mmol = 2271.948 mg

mmol


5477 mg
72
3.7 ANLISIS COMPARATIVOS DE LAS MUESTRAS
En el presente trabajo se puede observar que la comparacin de las muestras de

los compuesto fenlicos totales usando el mtodo de Folin-Ciocalteu, tanto de la
muestra desecada y liofilizada el cual en la tabla N 3.10 se puede observar que
hay una variacin debido al tipo de extraccin de los principios activos de la
muestra; el cual la muestra liofilizada contiene mayor cantidad de compuestos
fenlicos comparadas con las muestras desecadas.
La capacidad antioxidante se analiz con el mtodo de Cuprac el cual se pudo

observar que las muestras liofilizadas contienen mayor capacidad antioxidante
que las muestra desecada lo cual se puede verse en la tabla N 3.10
En el trabajo se observ que el contenido de fenoles y la capacidad antioxidante

se obtiene en mayor cantidad en la muestra liofilizada que la muestra desecada
en sus dos extracciones tanto etanolico y metanolico.(Figura N 3.7)
Tabla N 3.10 Comparacin de compuestos polifenlicos y capacidad antioxidante
Compuestos Capacidad
Polifenolicos Antioxidante
Muestra mgGAE/10g mg eq AA/10g
EtOH Desecado 145.920 1532.24
MeOH desecado 123.757 1268.06
EtOH liof 151.053 2430.45
MeOH liof 137.025 2271.95
73
mg eq AA/10g
3000
2500
EtOH liof
MeOH liof
2000
1500 EtOH Desecadoo

MeOH Desecado
1000
500
0
120 125 130 135 140 145 150 155 160
mg GAE/10g
Figura N 3.7 Grafica de comparacin de compuestos polifenlicos y capacidad

antioxidante
3.000,000
2430,45
2.500,000 2271,95
2.000,000
1532,24
1.500,000 Seri
Compuestos Fenlicos
1268,06
es1
mgGAE/10g
Seri
Capacidad Antioxidante
1.000,000 mg eq AA/10g
es2
500,000
145,920 123,757 151,053 137,025
0,000
EtOH MeOH EtOHliof MeOHliof
Desecado desecado
Figura N 3.8 Grafico Comparativo de compuestos fenlicos y capacidad

antioxidante
74
3.8 ANALISIS ESTADISTICO
Compuestos fenlicos mg GAE/10g muestra
Se realiz anlisis de varianza para los compuestos fenlicos mg GAE/10g de

muestra el cual se realiz en 4 diferentes extractos (extracto desecado etanolico y
metanolico, extracto liofilizado etanolico y metanolico).
Tabla N 3.11 Concentraciones De Los Compuestos Fenlicos De Las Muestras

Etanolicos Liofilizadas Y Desecadas
EtOH EtOH MetOH MetOH

Desecado liofilizado Desecado Liofilizado
mg 146.64 153.99 123.12 136.35
GAE/10g
muestra 145.17 148.11 124.59 137.82
El anlisis estadstico con estos datos se lleva a cabo el ANOVA de una sola va (mg
GAE/10 g muestra) a un nivel de confianza del 95% obtenindose los resultados de
la tabla N 3.12.
Tabla N 3.12 Tabla ANOVA para Compuestos Fenolicos por Extractos

Fuente Suma de Cuadrados Gl Cuadrado Medio Razn-F Valor-P
Entre grupos 850,044 3 283,348 55,21 0,0010
Intra grupos 20,5285 4 5,13214
Total (Corr.) 870,573 7
Esto indica que la Razon-F (55.21) sea mayor al valor de tablas o en todo caso el
valor P < 0,05 indica que hay diferencia significativa en los 4 grupos de estudio en
relacin a su concentracin de mg GAE/10 g muestra
Para determinar cul o cules grupos son diferentes se llev a cabo el Test De Tukey
obtenindose los resultados de la tabla N3.13
75
Tabla N 3.13 Pruebas De Mltiple Rangos Para Compuestos Fenlicos Por

Extractos
Mtodo: 95,0 porcentaje Tukey HSD

EXTRACTOS Casos Media Grupos
Homogneos
MetOH Dsecado 2 123,855 X
MetOH liof 2 137,085 X
EtOH Dsecado 2 145,905 XX
EtOH liof 2 151,05 X
Contraste Sig. Diferencia +/- Lmites

EtOH Dsecado - EtOH liof -5,145 9,22235
EtOH Dsecado - MetOH Dsecado * 22,05 9,22235
EtOH Dsecado - MetOH liof 8,82 9,22235
EtOH liof - MetOH Dsecado * 27,195 9,22235
EtOH liof - MetOH liof * 13,965 9,22235
MetOH Dsecado - MetOH liof * -13,23 9,22235
* indica una diferencia significativa.
Adems se infiere que el solvente de eleccin es el etanol ya que por su carcter

lipofilicos este tiene ms afinidad por los compuestos fenlico por lo que los
extractos de etanol liofilizado y etanol desecado no hay diferencia significativa entre
ellos de igual manera el extracto de etanol desecado y el metanol liofilizado no hay
diferencia significativa.
De acuerdo a este anlisis estadstico se resuelve que los extractos etanolicos de

muestras liofilizada y desecada son ms adecuados para la extraccin de compuestos
fenlicos en este tipo de muestra.
76
Figura N 3.9 Caja de bigotes anlisis de compuestos fenlicos

Fuente: elaboracin Propia, 2016
77
Capacidad Antioxidante Mg Eq cido Ascrbico/10g De Muestra
Al realizar el anlisis de varianza para Capacidad Antioxidante mg Eq cido

ascrbico/10g de muestra en la que se realiz 4 extractos diferentes (extracto
desecado etanolico y metanolico, extracto liofilizado etanolico y metanolico).
Tabla N 3.14 Concentraciones de la capacidad antioxidante de las muestras

etanolicas liofilizadas y desecadas
EtOH EtOH MetOH MetOH

Desecado liofilizado Desecado Liofilizado
mg Eq 1558.66 2456.87 1294.48 2298.36
AA/10g
muestra 1532.24 2441.02 1268.06 2271.94
El anlisis estadstico con estos datos se lleva a cabo el ANOVA de una sola va (mg
Eq AA/10 g muestra) a un nivel de confianza del 95% obtenindose los resultados de
la tabla N 3.13
Tabla N 3.15 Tabla ANOVA para Capacidad Antioxidante por Extracto

Fuente Suma de Gl Cuadrado Razn-F Valor-P
Cuadrados Medio
Entre grupos 1,91566E6 3 638553, 2178,18 0,0000
Intra grupos 1172,64 4 293,159
Total (Corr.) 1,91683E6 7
Esto indica que la Razon-F (2178,18) sea mayor al valor de tablas o en todo caso el
valor P < 0,05 indica que hay diferencia significativa en los 4 grupos de estudio en
relacin a su concentracin de mg Eq AA/10 g muestra
Para determinar cul o cules grupos son diferentes se llev a cabo el Test De Tukey
obtenindose los resultados de la tabla N3.16
78
Tabla N 3.16 Pruebas de Mltiple Rangos para Capacidad Antioxidante por

Extracto

Extracto Casos Media Grupos Homogneos
MetOH Desc 2 1281,27 X
EtOH Desc 2 1545,45 X
MetOH Liof 2 2285,15 X
EtOH Liof 2 2448,94 X

EtOH Desc - EtOH Liof * -903,495 69,7018
EtOH Desc - MetOH Desc * 264,18 69,7018
EtOH Desc - MetOH Liof * -739,7 69,7018
EtOH Liof - MetOH Desc * 1167,67 69,7018
EtOH Liof - MetOH Liof * 163,795 69,7018
MetOH Desc - MetOH Liof * -1003,88 69,7018
Se deduce que en las 4 muestras no hay diferencia significativa esto se puede

observar en la Tabla N 3.16 , trambioen se puede observar que la capacidad
antioxidante se obtiene en mayor concentracin en las muestras liofilizadas de los
extractos etanolicos y metanolicos.
Figura N 3.10 Caja de bigotes anlisis de capacidad antiosidente

Fuente: elaboracin Propia, 2016
79
IV. DISCUSIN
En el extracto etanolico, metanolico y heptanico de la muestra desecada se

obtuvieron un rendimiento de 30,96% , 42,27% y 0,102% respectivamente; en el
extracto etanolico, metanolico y heptanico de la muestra liofilizada se obtuvo un
rendimiento de 44,82%, 54,77% y 0.815% respectivamente, el cual comparando con
citado en la tesis Aparcana y Villareal(55) reportaron que el rendimiento del extracto
etanolico es de 10% el cual difiere completamente a la de este trabajo debido que la
muestra usada por Aparcana y Villareal(55) es una muestra fresca usando como
mtodo de extraccin maceracin. En el presente trabajo se us la muestra desecada
y mtodo de extraccin soxhlet con el que hubo mayor rendimiento en las
extracciones.
En la determinacin de compuestos polifenlicos totales por el mtodo de Folin-

Ciocalteu (tabla 3.10) el contenido de compuestos fenlicos de la muestra desecada
fueron expresadas en miligramos de cido glico por cada 10 g de muestra donde se
obtuvo 145,92 mg GAE/10g (14592 mg GAE/100g) en extracto etanolico y 123,757
mgGAE/10g (1237,57 mgGAE/100g) en extracto metanolico, lo cual lo reportado
por Aparcana y Villareal (55) es de 106 y 149 mg/Eq.AG/100g. Esta diferencia se
debe al tipo de muestra usada, siendo la muestra de Aparcana y Villareal (55) una
muestra fresca y en este trabajo se us muestra desecada. El valor reportado por
Repo y Encina (56) fue de 154 mg Eq.AG/100g y por Mier et al. (57) 240,16 mg
Eq.AG/100g son muestras donde se han usado extracciones metanolicas.
En los extractos etanolicos y metanolicos de la muestra liofilizada se obtuvieron

valores de 151,053 mg GAE/10g y 137,025 mg GAE/10g respectivamente, las
cuales no se pudieron comparar.
La capacidad antioxidante de los extractos etanolicos y metanolicos de las muestras

desecadas y liofilizada son los siguientes valores 1532,24 mg Eq AA/10g y 1268,06
mg Eq AA/10g respectivamente, 2430,45 mg Eq AA/10g y 2271,95 mg Eq
AA/10g muestra liofilizada el cual no se pudo comprar debido a que no se encontr
trabajos para poder comparar, pero se determina que hay una mayor capacidad
antioxidante debido a que se conserva los principios activos en este tipo e muestra.
80
V. CONCLUSIONES
1. El mayor porcentaje de rendimiento se obtuvo en el extracto metanolico tanto

en la muestra desecada como liofilizado siendo sus valores de 42.27% y
54.77% ; extracto etanolico tiene un porcentaje de rendimiento de las muestras
desecada y liofilizadas de 30.96% y 44.82% respectivamente, y por ltimo el
porcentaje de rendimiento del extracto heptanico tanto de la muestra desecada
y liofilizada es de 0.102% y 0.815% respectivamente, este extracto heptanico
no se tom en cuenta debido a que su rendimiento es significativamente bajo
para anlisis de cuantificacin. Se logr determinar la presencia de taninos y
flavonoides por cromatografa de capa fina a partir del extracto etanolico
desecado y liofilizado del aguaymanto.
2. El contenido de compuestos fenlicos por el mtodo de Folin-Ciocalteu fue
mayor en los extractos etanolicos y metanolicos de las muestras liofilizadas, el
cual se obtuvieron 151,053 mg GAE /10g de muestra y 137.025 mg GAE /10g
de muestra respectivamente y en menor cantidad en la muestra desecada de los
extractos etanolicos y metanolicos la que se obtuvieron 145.92 mg GAE /10g
de muestra y 123.757 mg GAE /10g de muestra respectivamente.
La capacidad antioxidante por el mtodo de Cuprac se realiz con los extractos
etanolicos y metanolicos de la muestra liofilizada siendo su mayor capacidad
antioxidante de 2430,45 mg Eq. cido Ascrbico/10 g de muestra y 2271.95
mg Eq. cido Ascrbico/10 g de muestra respectivamente y de menor
capacidad antioxidante de las muestra desecada de los extractos etanolicos y
metanolicos siendo su capacidad antioxidante de 1532.24 mg Eq. cido
Ascrbico/10 g de muestra y 1268.06 mg Eq. cido Ascrbico/10 g de muestra
respectivamente.
3. La comparacin cuantitativa de compuestos fenlicos y capacidad
antioxidante en los extractos etanolico y metanolico de las muestras desecadas
y liofilizadas es mayor en el extracto liofilizado en ambos mtodos (ver Tabla
N3.10); lo que hace suponer que en el proceso de liofilizacin los principios
activos presentes se encuentran estabilizados y no sufriran algn tipo de
cambio.
81
VI. SUGERENCIAS
1. Se sugiere un estudios de compuestos polifenlicos y capacidad antioxidante

de la cascara del fruto del aguaymanto.
2. Se sugiere realizar la determinacin compuestos fenlicos y capacidad

antioxidante en cada estadio del fruto de aguaymanto de acuerdo a la tabla de
la norma tcnica colombiana 4580.
3. Se propone darle una forma farmacutica al fruto de aguaymanto desecado

para ser consumido en la dieta diaria.
82
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. Saludeo.com, propiedades y beneficios medicinales del aguaymanto [acceso

el 12 de enero 2016]. Disponible en: http://www.saludeo.com/propiedades-
beneficios-medicinales-aguaymanto-salud/ Copyright 2016 Saludeo. Todos los derechos
reservados. Powered by TRESMEDIA
2. Legge, a.p. 1974. Notes on the history, cultivation and uses of Physalis
peruviana l. J. Royal hort. Soc., 310-314.
3. Crfg. 1997. Cape gooseberry physalis peruviana l. California rare fruit
growers, p. 1-3. Woodhead publishing limited, 2011
4. Bartholomus, a., a. De la rosa, j.o. Santos, l.e. Acero y w. Moosbrugger.
1990. El manto de la tierra - flora de los andes. Gua de 150 especies de la flora
andina. Ed. Lerner, bogot.
5. Fisiologa del cultivo de la uchuva (physalis peruviana l.) Pedro jos
almanza-merchn y gerhard Fischer. Rev. Bras.
Frutic. vol.36 no.1 Jaboticabal Jan./Mar. 2014
6. Usda.gov, clasificacin taxonmica de la physalis peruviana l segn national
plants center usda (2000) [acceso el 12 de enero 2016] disponible en:
http://plants.usda.gov/java/classificationservlet?source=display&classid=phpe4#
7. Fao.org, gua de campo de los cultivos andinos pag 105,106 y 107 [ultimo
acceso el 12 de enero 2016] disponible en:
http://www.fao.org/docrep/010/ai185s/ai185s.pdf Como citar la publicacin: Tapia, M. E. y
A.M. Fries. 2007. Gua de campo de los cultivos andinos. FAO y ANPE. Lima.
8. Eurohydro.com, physalis peruviana [acceso el 12 de enero 2016] disponible
en:www.eurohydro.com/pdf/articles/sp_hydroponia-y-physalis-peruviana.pdf
9. Efecto citotxico de Physalis peruviana (capul)An Fac Med Lima 2006;

Trabajos Originales1Estudiantes de la Escuela Acadmico Profesional de Medicina
Humana.Facultad de Medicina, UNMSM. Lima, Per.2Docente del Laboratorio de
Virologa. Facultad de Ciencias y Filosofa,Universidad Peruana Cayetano Heredia
(UPCH). Lima, Per.ISSN 1025 - 5583Pgs. Anales de la Facultad de
MedicinaUniversidad Nacional Mayor de San Marcos
83
10. Sierraexportadora.gob.pe, aguaymanto deshidratado sierra exportadora,

[ultimo acceso el 12 de marzo del 2016] disponible en:
www.sierraexportadora.gob.pe/perfil_comercial/perfil%20comercial%20aguaymanto
.pdf como citar la publicacin: Arex asociacin regional de exportadores de
Lambayeque.
11. Encina, c. Influencia del descerado y composicin del almbar en la

optimizacin del tratamiento trmico de la conserva de aguaymanto (physalis
peruviana l.) Para la mayor retencin de cido ascrbico [tesis de maestra en
scientiae]. Lima: universidad nacional agraria la molina, 2006. [ultimo acceso el 12
de marzo del 2016] disponible en:
biblioteca.ucsp.edu.pe/biblioteca/catalogo/ver.php?id=33923&idx=1005893
12. bdigital.uncu.edu.ar, actividad antioxidante de los compuestos fenlicos

contenidos en las semillas de la vid (vitis viniferal.) Disponible en:
bdigital.uncu.edu.ar/objetos_digitales/2627/tesispaladino.pdf
13. Researchgate.net, antioxidant activity and total phenolics in selected fruits,

vegetables, and grain products [ultimo acceso el 12 de marzo del 2016] disponible
en:
www.researchgate.net/publication/215523945_antioxidant_activity_and_total_pheno
lics_in_selected_fruits_vegetables_and_grain_products
14. halliwell, 1996-venero, 2002.Dao oxidativo, radicales libres y antioxidantes

[ultimo acceso el 17 de junio del 2016] disponible en:
http://www.bvs.sld.cu/revistas/mil/vol31_2_02/mil09202.pdf
15. Lucia Constanza, Maira M Muoz. Estrs oxidativo: origen y consecuencias

de la toxicidad del oxigeno [internet]. 2012 [ultimo acceso el 17 de marzo del
2016];vol 10(18) 135-215 Disponible en:
http://www.scielo.org.co/pdf/nova/v10n18/v10n18a08.pdf
84
16. Octavio Maldonado Saavedra , Eric Nahm Jimnez Vzquez. Radicales

libres y su papel en las enfermedades crnico-degenerativas [internet]2010 [ultimo
acceso el 17 de marzo del 2016];vol 10(18) 135-215 Disponible en:
https://www.uv.mx/rm/num_anteriores/revmedica_vol10_num2/articulos/radicales.p
df
17. Noem Crdenas-Rodrguez y Jos Pedraza-Chaverri. Especies reactivas de

oxgeno y sistemas antioxidantes: aspectos bsicos [internet]201[ultimo acceso el 17
de marzo del 2016] disponible en:
www.educacionquimica.info/include/downloadfile.php?pdf=pdf928.pdf
18. Luis Delgado Olivares, Gabriel Betanzos Cabrera, Teresa Sumaya. Importancia de
los antioxidantes dietarios en la disminucin del estrs oxidativo [internet] 2010 vol
50(10-15) [ultimo acceso el 17 de marzo del 2016] disponible en:
http://www.uaa.mx/investigacion/revista/archivo/revista50/Articulo%202.pdf
19. Pias Caballero y m. Lpez tema 2: lesiones inducidas por radicales libres.
Necrosis: morfologa y tipos. [ultimo acceso el 12 de marzo del 2016] disponible en:
http://eusalud.uninet.edu/apuntes/tema_02.pdf
20. Rosa Mayor Oxilia. Estrs Oxidativo y Sistema de Defensa Antioxidante [internet]
2010;5(2):2329[ultimo acceso el 12 de marzo del 2016] disponible en:
http://www.imt.edu.py/admin/uploads/Documento/v5n2a05.pdf
21. Scielo.sld.cu/,dao oxidativo, radicales libres y antioxidantes cap. Justo r.

Venereo Gutirrez1 [ultimo acceso el 17 de junio del 2016] disponible en:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=s0138-65572002000200009&script=sci_arttext
22. WEBB A. ; Complementos Nutricionales Y Alimentos Funcionales.; c
EDITIRIAL ACRIBIA s.a. Zaragoza espaa; 2006
23. Revista de educacin bioqumica .La capacidad antioxidante total. Bases y
aplicaciones, vol. 28, nm. 3, septiembre, 2009, pp. 89-101 Disponible en:
http://redalyc.uaemex.mx/src/inicio/ArtPdfRed.jsp?iCve=49016098004
85
24. Lic. Daniel Eugenio Bentez Zequeira. Vitaminas y oxidorreductasas

antioxidantes: defensa ante el estrs oxidativo [ultimo acceso el 17 de junio del 2016]
disponible en: http://bvs.sld.cu/revistas/ibi/vol25_2_06/ibi10206.pdf
25. Esther Molina. El papel de los antioxidantes como desaceleradores del
envejecimiento [internet] 2012 6:3(1109-1119) [ultimo acceso el 17 de junio del
2016] disponible en:
http://www.iidenut.org/pronj/kaslos/solidos/pdf_revista_tec/Renut%2021/Renut_21_
(2012)_7_El_papel_de_los_antioxidantes_como_desaceleradores_del_envejecimient
o.pdf
26. Antioxidant therapy for the prevention of cardiovascular [ultimo acceso el 17
de junio del 2016] disponible en:
http://qjmed.oxfordjournals.org/content/qjmed/92/5/239.full.pdf
27. Www.sciencedirect.com, Oxidative stress hypothesis in alzheimers diseases
(William R. Markesbery) [ultimo acceso el 17 de junio del 2016] disponible en:
http://www.sciencedirect.com/science/a1584996006296
28. Silvia cristina paladino .Actividad antioxidante de los compuestos fenlicos
contenidos en las semillas de la vid (vitis viniferal.) disponible en:
http://bdigital.uncu.edu.ar/objetos_digitales/2627/tesispaladino.pdf
29. Mayes pa. Estructura y funcin de vitaminas hidrosolubles. En: bioqumica
de harper. Murray rk, mayes pa, granner dk eds. Mxico df:el manual moderno, s. A.;
1997. P.719-20.
30. Shite j., et all. Antioxidant vitamins attenuate oxidative stress and cardiac
dysfunction in tachycardia induced cardiomiopathy. J am college cardiol
2001;38(6):1734-40). 2016 American College of Cardiology Foundation
31. Dieta y nutricin; aplicaciones medicas y teraputicas (Vitamina c) [ultimo

acceso el 17 de mayo del 2016] disponible en:
http://www.iqb.es/nutricion/vitaminac/vitaminac.htm#absorcion
32. Palazzo P. Prooxidant actions of carotenoids in biological systems. Nutr Rev

1998; 56: 257-265. [ultimo acceso el 17 de febrero del 2016] disponible en:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9763875
86
33. Importancia nutricional de los pigmentos carotenoides; idus.us.es [revisado el

25 de enero del 2016] disponible en :
https://idus.us.es/xmlui/bitstream/handle/11441/26406/Importancia%20nutricional%
20de%20los%20pigmentos%20carotenoides.pdf?sequence=1&isAllowed=y
34. Pigmentos carotenoides en frutas y vegetales; mucho ms que simples

colorantes naturales; digital.csic.es [revisado el 25 de enero del 2016] disponible
en : http://digital.csic.es/bitstream/10261/5754/1/IG_AGROCSIC_4.pdf
35. Structural aspects of antioxidant activity of flavonoids. Free radic biol med
1996;20:331-42. van acquire sa, et al.
36. Carlos eduardo nez. Extracciones con soxhlet. Cenunez.com.ar. 2008

[revisado el 12 de enero del 2016] disponible en:
http://www.cenunez.com.ar/archivos/39-extraccinconequiposoxhlet.pdf
37. Patricia i. Oteiza, flavonoides y procianidinas: mecanismos de accion
antioxidante iquifib- dep. qumica biolgica (conicet-uba), facultad de farmacia y
bioqumica, universidad de buenos aires, argentina [consultado 25 de enero 2016].
Disponible en: www.idecefyn.com.ar/clf12002/archivos/C_17_OteizaPI.doc
38. TRUEBA PG, Et al, Evaluacin de la actividad antioxidante de la

gossypitrina atravs de ensayos in vitro e in vivo. Tesis de diploma. Universidad de
la habana. Pags. 10-14, 1997.
39. Structural aspects of antioxidant activity of flavonoids. Free radic biol med
1996;20:331-42. van acquire sa, et al.
40. Gilberto perez trueba Los flavonoides: antioxidantes y prooxidantes, centro

de investigacin biomdica , instituto de ciencias bsicas y preclnicas victoria de
giron rev cubana invest biomed 2003:22(1):48-57
41. Aislamiento y elucidacin estructural de Withanolidos de la planta Acnistus
Breviflorus :Estudios preliminares sobre su biosntesis, autor: Veleiro, Adriana Silvia
1985 Tesis Doctoral
87
42. Gnero Physalis - uma reviso sobre vitaesterides Therezinha C. B.

Tomassini, Nancy S. Barbi, Ivone M. Ribeiro, Deise C. D. Xavier Far-
Manguinhos/FIOCRUZ - Rua Sizenando Nabuco, 100 - Manguinhos - 21041-250 -
Rio de Janeiro RJ
43. Juan sebastin ramrez navas Liofilizacin de alimentos universidad del valle
cali Colombia. 2006 revista reciteia - v.6 n.2.
44. Jos Luis Vila Jato, Tecnologa Farmacetica, Editorial: Sntesis Ao: 1999
(496-497)
45. Helen J. Mier G., Gabriela Caez. RNTC 4580. Norma Tcnica Colombiana.
Frutas frescas. Uchuva. Especificaciones.1999.
46. www.uam.es, cromatografa en placa fina [revisado el 25 de enero del 2016]
disponible en: www.uam.es/docencia/jppid/documentos/practicas/actuales/guion-
p6.pdf
47. uprm.edu, cromatografia de capa fina [revisado el 25 de enero del 2016]
disponible en: www.uprm.edu/biology/profs/velez/fina.htm
48. Estudio fitoqumico preliminar y actividad antioxidante de las hojas de

achyrocline alata dc. (huira-huira) y su relacin con su contenido de compuestos
fenlicos totales, arequipa 2014 nayra alvarado, edith / cdigo de tesis 65.1505.fb
49. Textoscientificos.com, cromatografia en capa finarevisado el 25 de enero del

2016] disponible en: www.textoscientificos.com/quimica/cromatografia/capa-fina.
50. Determinacin de polifenoles totales por el mtodo de Folin-Ciocalteu

[revisado el 25 de enero del 2016]
https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/52056/Garcia%20Mart%C3%ADnez%2
0et%20al.pdf?sequence=1
51. Reat Apak et at ,Comparative Evaluation of Various Total Antioxidant
Capacity Assays Applied to Phenolic Compounds with the CUPRAC
Assay [revisado el 25 de mayo del 2016] http://www.mdpi.com/1420-
3049/12/7/1496
88
VIII. ANEXOS
Anexo 1: NDICE DE FIGURAS
Figura N1.1 Physalis peruviana Aguaymanto.....6
Figura N1.2 Physalis peruviana Aguaymanto estadios de la planta....9
Figura N 1.3Ascorbato, radical ascorbil, acido dehidroascorbico y

2,3dicetogulonico........................................................................................................19
Figura N 1.4 Estructura de los principales carotenoides...21
Figura. N 1.5 Estructura bsica de los flavonoides y sistema de numeracin..22
Figura. N 1.6 Subclase de flavonoides......23
Figura N 1.7 Formacin de radical flavinico por la captura de radicales libres por los
polifenoles.......25
Figura. N 1.8 Esqueleto withanolido....26
Figura. N 1.9 Tipos de fisalinas....27
Figura N 2.1 Tabla de color de la Physalis peruviana Aguaymanto.32
Figura. N 2.2 Aguaymanto colocado en la bandeja de liofilizacin.35
Figura. N 2.3 Colocando el sensor de temperatura en la bandeja de liofilizacin...36
Figura N 2.4 Mecanismo de accin del reactivo de Folin-Ciocalteu...39
Figura N 2.5 Reaccin del cido glico con el reactivo de folin-ciocalteu..40
Figura N 2.6 Tubos con estndares para hacer la lectura en el espectrofotmetro..43
89
Figura N 2.7 Reduccin del cobre y formacin de complejo....44
Figura N 2.8 Tubos con estndares para hacer la lectura en el espectrofotmetro...46
Figura N 3.1 Identificacin de taninos luz visible...53
Figura N 3.2 Identificacin de flavonoides...54
Figura N3.3 Identificacin de flavonoides estndar quercetina y rutina...55
Figura N 3.4 Identificacin de alcaloides..56
Figura N3.5 Grafica de calibracin usando como estndar acido glico.....58
Figura N 3.6 Grafica de calibracin usando como estndar cido ascrbico...66
Figura N 3.7 Grafica de comparacin de compuestos polifenlicos y capacidad
antioxidante.74
Figura N 3.8 Grafico Comparativo de compuestos fenlicos y capacidad

antioxidante.74
Figura N 3.9 Caja de bigotes anlisis de compuestos fenlicos....77
Figura N 3.10 Caja de bigotes anlisis de capacidad antioxidante.......79
90
Anexo 2: NDICE DE TABLAS
Tabla 1.1 Clasificacin taxonmica de Physalis peruviana.....6
Tabla N 2.1 diluciones para la curva de calibracin de cido glico........42
Tabla N 2.2 valores para preparar la curva de calibracin de cido glico.42
Tabla N2.3 valores para preparar la curva de calibracin con cido ascrbico....46
Tabla N 3.1 porcentaje de rendimiento de los extractos etanolicos de la muestra

desecada y muestra liofilizada del fruto de aguaymanto obtenidos por mtodo
soxhlet.49
Tabla N 3.2 porcentaje de rendimiento de los extractos metanolicos de la muestra

soxhlet.51
Tabla N 3.3 porcentaje de rendimiento de los extractos heptanico de la muestra

soxhlet.....52
Tabla N 3.4 cuadro de identificacin de flavonoides....54
Tabla N 3.5 identificacin de flavonoides estndar quercetina y rutina...55
Tabla N3.6 datos de la curva de calibracin de cido glico...57
Tabla N 3.7 extraccin soxhlet..60
Tabla N 3.8 absorbancias por triplicado, curva de calibracin de cido ascrbico..65
Tabla N 3.9 absorbancias de los extractos....68
Tabla N 3.10 comparacin de compuestos polifenlicos y capacidad antioxidante.73
Tabla N3.11 Concentraciones De Los Compuestos Fenlicos De Las Muestras

Etanolicas Liofilizadas Y Desecadas..75
91
Tabla N 3.12 Tabla ANOVA para Compuestos Fenolicos por Extractos.75
Tabla N 3.13 Pruebas de mltiple rangos para compuestos fenolicos por

extractos..76
Tabla N 3.14 Concentraciones de la capacidad antioxidante de las muestras

etanolicas liofilizadas y desecadas..78
Tabla N 3.15 Tabla ANOVA para Capacidad Antioxidante por Extracto78
Tabla N 3.16 Pruebas de Mltiple Rangos para Capacidad Antioxidante por

Extracto...79
92
Anexo 3: ABREVIATURAS
HIV Virus De La Inmunodeficiencia Humana
HSV Virus Simplex Humano
RL Radicales Libres
ROS Especies Reactivas De Oxigeno
EO Estrs Oxidativo
GSH-Prx Glutatin Peroxidasa
SOD Superoxido Dismutasa
CPT Compuestos Polifenlicos Totales
CUPRAC Cupric Ion Reducing Antioxidant Capacity
GAE Equivalentes de cido glico
TAC Capacidad antioxidante total
93
Anexo 4: mg Eq cido glico/10g me muestra de las Extracciones etanolica

realizadas en las muestras desecada y liofilizada
mgGAE/10gdemuestra
EtOHdesecado EtOHliofilizado
146.64 153.99
145.17 148.11
Anexo 5: Prueba F de varianza de las concentraciones de los extractos

etanolicos desecada y liofilizada
PruebaFparavarianzasdedosmuestras
EtOH
EtOHliof desecado
Media 151.05 145.905
Varianza 17.2872 1.08045
Observaciones 2 2
Gradosdelibertad 1 1
F 16
P(F<=f)unacola 0.155958261
ValorcrticoparaF(unacola) 161.4476387
Anexo 6: Prueba de T-students de las concentraciones de los extractos etanolicos

desecada y liofilizada
Pruebatparadosmuestrassuponiendovarianzasiguales
EtOH EtOH
desecado liof
Media 145.905 151.05
Varianza 1.08045 17.2872
Observaciones 2 2
Varianzaagrupada 9.183825
Diferenciahipotticadelasmedias 0
Gradosdelibertad 2
Estadsticot 1.69774938
P(T<=t)unacola 0.11582509
Valorcrticodet(unacola) 2.91998558
P(T<=t)doscolas 0.23165018
Valorcrticodet(doscolas) 4.30265273
94
Anexo 7: mg Eq cido glico/10g me muestra de las Extracciones metanolica

realizadas en las muestras desecada y liofilizada
mgGAE/10gdemuestra
MeOHdesecado MeOHliof
123.12 136.35
124.59 137.82
Anexo 8: Prueba de T-students de las concentraciones de los extractos etanolicos

desecada y liofilizada
Pruebatparadosmuestrassuponiendovarianzasiguales
MeOHdesecado MeOHliof
Media 123.855 137.085
Varianza 1.08045 1.08045
Observaciones 2 2
Varianzaagrupada 1.08045
Diferenciahipotticadelasmedias 0
Gradosdelibertad 2
Estadsticot 12.72792206
P(T<=t)unacola 0.003058133
Valorcrticodet(unacola) 2.91998558
P(T<=t)doscolas 0.006116265
Valorcrticodet(doscolas) 4.30265273
95
Anexo 9: ANOVA Simple - Compuestos Fenolicos por Extractos
Variable dependiente: Compuestos Fenolicos (mg GAE/10 muestra)

Factor: Extractos
Nmero de observaciones: 8
Nmero de niveles: 4
El StatAdvisor
Este procedimiento ejecuta un anlisis de varianza de un factor para Compuestos
Fenolicos. Construye varias pruebas y grficas para comparar los valores medios de
Compuestos Fenolicos para los 4 diferentes niveles de Extractos. La prueba-F en la
tabla ANOVA determinar si hay diferencias significativas entre las medias. Si las
hay, las Pruebas de Rangos Mltiples le dirn cules medias son significativamente
diferentes de otras. Si le preocupa la presencia de valores atpicos, puede elegir la
Prueba de Kruskal-Wallis la cual compara las medianas en lugar de las medias. Las
diferentes grficas le ayudarn a juzgar la significancia prctica de los resultados, as
como le permitirn buscar posibles violaciones de los supuestos subyacentes en el
anlisis de varianza.
Resumen Estadstico para Compuestos Fenolicos
Extractos Recuento Promedio Desviacin Coeficiente de Mnimo Mximo
Estndar Variacin
EtOH Desc 2 145,905 1,03945 0,712414% 145,17 146,64
EtOH Liof 2 151,05 4,15779 2,75259% 148,11 153,99
MetOH Desc 2 123,855 1,03945 0,839245% 123,12 124,59
MetOH Liof 2 137,085 1,03945 0,75825% 136,35 137,82
Total 8 139,474 11,152 7,99578% 123,12 153,99
Extractos Rango Sesgo Curtosis

Estandarizado Estandarizada
EtOH Desc 1,47
EtOH Liof 5,88
MetOH Desc 1,47
MetOH Liof 1,47
Total 30,87 -0,547103 -0,597575
El StatAdvisor
Esta tabla muestra diferentes estadsticos de Compuestos Fenolicos para cada uno de
los 4 niveles de Extractos. La intencin principal del anlisis de varianza de un
factor es la de comparar las medias de los diferentes niveles, enlistados aqu bajo la
columna de Promedio. Selecciones Grfica de Medias de la lista de Opciones
Grficas para mostrar grficamente las medias.
96
ADVERTENCIA: Hay una diferencia de ms de 3 a 1 entre la desviacin estndar

ms pequea y la ms grande. Esto puede causar problemas puesto que el anlisis de
varianza asume que las desviaciones estndar de todos los niveles es igual.
Seleccione Verificacin de Varianza de la lista de Opciones Tabulares para ejecutar
una prueba estadstica formal para la diferencia entre las sigmas. Podra considerar
transformar los valores de Compuestos Fenolicos para eliminar cualquier
dependencia de la desviacin estndar de la media.
Tabla ANOVA para Compuestos Fenolicos por Extractos
Cuadrados Medio
Entre grupos 850,044 3 283,348 55,21 0,0010
Intra grupos 20,5285 4 5,13214
Total (Corr.) 870,573 7
El StatAdvisor
La tabla ANOVA descompone la varianza de Compuestos Fenolicos en dos
componentes: un componente entre-grupos y un componente dentro-de-grupos. La
razn-F, que en este caso es igual a 55,2105, es el cociente entre el estimado entre-
grupos y el estimado dentro-de-grupos. Puesto que el valor-P de la prueba-F es
menor que 0,05, existe una diferencia estadsticamente significativa entre la media de
Compuestos Fenolicos entre un nivel de Extractos y otro, con un nivel del 95,0% de
confianza. Para determinar cules medias son significativamente diferentes de otras,
seleccione Pruebas de Mltiples Rangos, de la lista de Opciones Tabulares.
Pruebas de Mltiple Rangos para COMPUESTOS FENOLICOS por

EXTRACTOS

EXTRACTOS Casos Media Grupos
Homogneos
MetOH Dsecado 2 123,855 X
MetOH liof 2 137,085 X
EtOH Dsecado 2 145,905 XX
EtOH liof 2 151,05 X
Contraste Sig. Diferencia +/-

Lmites
EtOH Dsecado - EtOH liof -5,145 9,22235
EtOH Dsecado - MetOH Dsecado * 22,05 9,22235
EtOH Dsecado - MetOH liof 8,82 9,22235
EtOH liof - MetOH Dsecado * 27,195 9,22235
EtOH liof - MetOH liof * 13,965 9,22235
MetOH Dsecado - MetOH liof * -13,23 9,22235
97
El StatAdvisor
Esta tabla aplica un procedimiento de comparacin multiple para determinar cules
medias son significativamente diferentes de otras. La mitad inferior de la salida
muestra las diferencias estimadas entre cada par de medias. El asterisco que se
encuentra al lado de los 4 pares indica que estos pares muestran diferencias
estadsticamente significativas con un nivel del 95,0% de confianza. En la parte
superior de la pgina, se han identificado 3 grupos homogneos segn la alineacin
de las X's en columnas. No existen diferencias estadsticamente significativas entre
aquellos niveles que compartan una misma columna de X's. El mtodo empleado
actualmente para discriminar entre las medias es el procedimiento de diferencia
honestamente significativa (HSD) de Tukey. Con este mtodo hay un riesgo del
5,0% al decir que uno o ms pares son significativamente diferentes, cuando la
diferencia real es igual a 0.
Verificacin de Varianza
Prueba Valor-P
Levene's 1,20378E28 0
Comparacin Sigma1 Sigma2 F-Ratio P-Valor

EtOH Dsecado / EtOH liof 1,03945 4,15779 0,0625 0,3119
EtOH Dsecado / MetOH Dsecado 1,03945 1,03945 1,0 1,0000
EtOH Dsecado / MetOH liof 1,03945 1,03945 1,0 1,0000
EtOH liof / MetOH Dsecado 4,15779 1,03945 16,0 0,3119
EtOH liof / MetOH liof 4,15779 1,03945 16,0 0,3119
MetOH Dsecado / MetOH liof 1,03945 1,03945 1,0 1,0000
El StatAdvisor
El estadstico mostrado en esta tabla evala la hiptesis de que la desviacin estndar
de COMPUESTOS FENOLICOS dentro de cada uno de los 4 niveles de
EXTRACTOS es la misma. De particular inters es el valor-P. Puesto que el valor-
P es menor que 0,05, existe una diferencia estadsticamente significativa entre las
desviaciones estndar, con un nivel del 95,0% de confianza. Esto viola uno de los
supuestos importantes subyacentes en el anlisis de varianza e invalidar la mayora
de las pruebas estadsticas comunes.
La tabla tambin muestra una comparacin de las desviaciones tpicas para cada par
de muestras. P-valores por debajo de 0.05, de los cuales hay 0, indican una
diferencia estadsticamente significativa entre las dos sigmas al 5% de nivel de
signifiacin.
98
99
Anexo 10: ANOVA Simple - Capacidad Antioxidante por Extracto
Variable dependiente: Capacidad Antioxidante (mg Eq AASC/10g muestra)

Factor: Extracto
Nmero de observaciones: 8
Nmero de niveles: 4
El StatAdvisor
Este procedimiento ejecuta un anlisis de varianza de un factor para Capacidad
Antioxidante. Construye varias pruebas y grficas para comparar los valores medios
de Capacidad Antioxidante para los 4 diferentes niveles de Extracto. La prueba-F en
la tabla ANOVA determinar si hay diferencias significativas entre las medias. Si
las hay, las Pruebas de Rangos Mltiples le dirn cules medias son
significativamente diferentes de otras. Si le preocupa la presencia de valores
atpicos, puede elegir la Prueba de Kruskal-Wallis la cual compara las medianas en
lugar de las medias. Las diferentes grficas le ayudarn a juzgar la significancia
prctica de los resultados, as como le permitirn buscar posibles violaciones de los
supuestos subyacentes en el anlisis de varianza.
Resumen Estadstico para Capacidad Antioxidante

Extracto Recuento Promedio Desviacin Coeficiente de Variacin Mnimo Mximo
Estndar
EtOH Desc 2 1545,45 18,6818 1,20882% 1532,24 1558,66
EtOH Liof 2 2448,94 11,2076 0,457652% 2441,02 2456,87
MetOH Desc 2 1281,27 18,6818 1,45807% 1268,06 1294,48
MetOH Liof 2 2285,15 18,6818 0,817529% 2271,94 2298,36
Total 8 1890,2 523,291 27,6844% 1268,06 2456,87
Extracto Rango Sesgo Curtosis

Estandarizado Estandarizada
EtOH Desc 26,42
EtOH Liof 15,85
MetOH Desc 26,42
MetOH Liof 26,42
Total 1188,81 -0,0949082 -1,38128
El StatAdvisor
Esta tabla muestra diferentes estadsticos de Capacidad Antioxidante para cada uno
de los 4 niveles de Extracto. La intencin principal del anlisis de varianza de un
factor es la de comparar las medias de los diferentes niveles, enlistados aqu bajo la
columna de Promedio. Selecciones Grfica de Medias de la lista de Opciones
Grficas para mostrar grficamente las medias.
100
Tabla ANOVA para Capacidad Antioxidante por Extracto

Cuadrados Medio
Entre grupos 1,91566E6 3 638553, 2178,18 0,0000
Intra grupos 1172,64 4 293,159
Total (Corr.) 1,91683E6 7
El StatAdvisor
La tabla ANOVA descompone la varianza de Capacidad Antioxidante en dos
componentes: un componente entre-grupos y un componente dentro-de-grupos. La
razn-F, que en este caso es igual a 2178,18, es el cociente entre el estimado entre-
grupos y el estimado dentro-de-grupos. Puesto que el valor-P de la prueba-F es
menor que 0,05, existe una diferencia estadsticamente significativa entre la media de
Capacidad Antioxidante entre un nivel de Extracto y otro, con un nivel del 95,0% de
confianza. Para determinar cules medias son significativamente diferentes de otras,
seleccione Pruebas de Mltiples Rangos, de la lista de Opciones Tabulares.
Pruebas de Mltiple Rangos para Capacidad Antioxidante por Extracto

Extracto Casos Media Grupos Homogneos
MetOH Desc 2 1281,27 X
EtOH Desc 2 1545,45 X
MetOH Liof 2 2285,15 X
EtOH Liof 2 2448,94 X

EtOH Desc - EtOH Liof * -903,495 69,7018
EtOH Desc - MetOH Desc * 264,18 69,7018
EtOH Desc - MetOH Liof * -739,7 69,7018
EtOH Liof - MetOH Desc * 1167,67 69,7018
EtOH Liof - MetOH Liof * 163,795 69,7018
MetOH Desc - MetOH Liof * -1003,88 69,7018
El StatAdvisor
Esta tabla aplica un procedimiento de comparacin multiple para determinar cules
medias son significativamente diferentes de otras. La mitad inferior de la salida
muestra las diferencias estimadas entre cada par de medias. El asterisco que se
encuentra al lado de los 6 pares indica que estos pares muestran diferencias
estadsticamente significativas con un nivel del 95,0% de confianza. En la parte
superior de la pgina, se han identificado 4 grupos homogneos segn la alineacin
de las X's en columnas. No existen diferencias estadsticamente significativas entre
aquellos niveles que compartan una misma columna de X's. El mtodo empleado
101
actualmente para discriminar entre las medias es el procedimiento de diferencia

honestamente significativa (HSD) de Tukey. Con este mtodo hay un riesgo del
5,0% al decir que uno o ms pares son significativamente diferentes, cuando la
diferencia real es igual a 0.
Verificacin de Varianza
Prueba Valor-P
Levene's 5,40268E26 0
Comparacin Sigma1 Sigma2 F-Ratio P-Valor

EtOH Desc / EtOH Liof 18,6818 11,2076 2,77848 0,6880
EtOH Desc / MetOH Desc 18,6818 18,6818 1,0 1,0000
EtOH Desc / MetOH Liof 18,6818 18,6818 1,0 1,0000
EtOH Liof / MetOH Desc 11,2076 18,6818 0,359909 0,6880
EtOH Liof / MetOH Liof 11,2076 18,6818 0,359909 0,6880
MetOH Desc / MetOH Liof 18,6818 18,6818 1,0 1,0000
El StatAdvisor
El estadstico mostrado en esta tabla evala la hiptesis de que la desviacin estndar
de Capacidad Antioxidante dentro de cada uno de los 4 niveles de Extracto es la
misma. De particular inters es el valor-P. Puesto que el valor-P es menor que 0,05,
existe una diferencia estadsticamente significativa entre las desviaciones estndar,
con un nivel del 95,0% de confianza. Esto viola uno de los supuestos importantes
subyacentes en el anlisis de varianza e invalidar la mayora de las pruebas
estadsticas comunes.
La tabla tambin muestra una comparacin de las desviaciones tpicas para cada par
de muestras. P-valores por debajo de 0.05, de los cuales hay 0, indican una
diferencia estadsticamente significativa entre las dos sigmas al 5% de nivel de
signifiacin.
102
103
104

Determinacion de Compuesstos Polifonicos

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Determinacion de Compuesstos Polifonicos

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Determinacion de Compuesstos Polifonicos

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

UNIVERSIDAD CATLICA DE SANTA MARA

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS, BIOQUMICAS Y

ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUMICAS

DETERMINACIN DE COMPUESTOS POLIFENLICOS Y EVALUACIN DEL

Tesis presentada por los bachilleres en

Para optar el Ttulo Profesional de:

Asesor: Ph.D. JAIME CARDENAS GARCIA

A mi madre ya que t eres la fuerza que me empuja a seguir hacia adelante,

A mi padre por apoyarme en mi carrera universitaria y ser el ejemplo de

A mis hermanos Michael y Rub por apoyarme incondicionalmente en mi vida.

Especialmente este trabajo lo dedico a mi hija Amber Valeria ya que ella es la

A mi esposa Carmen por ser la fuerza en mi hogar y ayudarme a superarme cada

Levin Oval Arroyo Oviedo

A mi ta Katy por apoyarme y empujarme a seguir adelante en mi vida profesional.

Luis Alonso Delgado Anyosa

Agradecimiento especial al Dr. Jaime Crdenas por brindarnos su ayuda,

Al Dr. Fernando Torres por ayudarnos en la redaccin y consejos para nuestra

Al laboratorio de control de calidad por su apoyo incondicional y amistad

1.1 PHYSALIS PERUVIANA AGUAYMANTO.........5

1.1.1 CLASIFICACION TAXONOMICA........6

1.1.2 DISTRIBUCION GEOGRAFICA, REQUERIMIENTOS CLIMATICOS.........7

1.1.3 DESCRIPCION BOTANICA.......7

1.1.4 USOS Y PROPIEDADES MEDICINALES.....10

1.2 RADICALES LIBRES, ESTRS OXIDATIVO Y ANTIOXIDANTE.....12

1.2.1 RADICALES LIBRES.........12

1.2.2 DAO PRODUCIDO POR LOS RADICALES LIBRES........14

1.2.3 ESTRS OXIDATIVO....15

1.2.4.1 CLASIFICACION DE LOS ANTIOXIDANTE........17

1.3 COMPONENTES BIOACTIVOS CON CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DE

1.3.1 COMPUESTOS FENLICOS.......18

1.3.2 ACCION ANTIOXIDANTE DE LA VITAMINA C........19

1.3.5 ACCION ANTIOXIDANTE DE LOS FLAVONOIDES FRENTE A RADICALES

2.1 LUGAR DE INVESTIGACION.29

2.2.1 MATERIAL VEGETAL...29

2.2.2 REACTIVOS QUIMICOS....29

2.2.3 MATERIAL DE LABORATORIO..30

2.3.1 RECOLECCION, SELECCIN Y ALMACENAMIENTO DE LA

2.3.2 OBTENCION DE EXTRACTO 32

2.3.2.1. METODO: SISTEMA DE EXTRACION POR EQUIPO SOXHLET..32

2.4 METODO GRAVIMETRICO: DETERMINACION DEL EXTRACTO

2.6 ANALISIS POR CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA (CCF).......36

2.6.3 FACTOR DE RETRASO........38

2.6.4 IDENTIFICACIN DE METABOLITOS SECUNDARIOS.....38

2.7 DETERMINACION DE COMPUESTOS POLIFENOLICOS TOTALES (CPT).39

2.7.1 METODO DE FOLIN-CIOCALTEU....39

2.7.2 DETERMINACION DE COMPUESTOS POLIFENOLICOS POR

2.8 DETERMINACION DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTES...44

2.8.1 METODO CUPRAC (ION CUPRICO REDUCCION DE LA CAPACIDAD

2.8.2 DETERMINACION DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE POR

3.2.- PREPARACION DE LOS EXTRACTOS Y LA DETERMINACION DEL

3.2.1 OBTENCION DE EXTRACTOS.......48

3.2.1.1 EXTRACTO ETANOLICO OBTENIDO POR EL METODO DE

3.2.1.2 EXTRACTO METANOLICO OBTENIDO POR EL METODO DE

3.2.1.3 EXTRACTO HEPTANICO OBTENIDO POR EL METODO DE

3.3 LIOFILIZACION DE MUESTRA DE PHYSALIS PERUVIANA...52

3.4 CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA ...53

3.4.1 ANLISIS FITOQUIMICO PRELIMINAR: CROMATOGRAFA DE CAPA

3.5 DETERMINACION DE COMPUESTOS POLIFENOLICOS TOTALES (CPT).56

3.5.1 EXTRACTO ETANOLICO DESECADO POR MTODO SOXHLET....61