MTODOS DE BANDEO CROMOSMICO

INTRODUCCIN

Se entiende el conjunto de bandas transversales de tamao e intensidad de

tincin diferentes que aparecen sobre cromosomas determinados segn un
modelo de distribucin que depende del tinte utilizado. Como norma general se
admite que el patrn de bandeo es el mismo para cualquier tejido dentro de una
misma especie y que no cambie durante el desarrollo.

El bandeo cromosmico es, esencialmente, un fenmeno del cromosoma

fijado. Aunque las tcnicas de bandeo son muy variadas, todas ellas pueden
agruparse en seis clases principales. La clasificacin inicialmente propuesta por la
conferencia de pars, que presupone que en todos los casos hay una fijacin
confluida que contiene cido actico, es la siguiente: Bandas Q, G, C, R, T y
feulgen. A estos tipos de bandas habra que aadir las bandas de replicacin y las
bandas de restriccin.

Durante las ltimas dcadas se han descrito un elevado nmero de alteraciones cromosmicas
recurrentes frecuentes asociadas con subtipos tumorales particulares. Adems, estas
aberraciones citogenticas han contribuido a establecer en muchos casos el pronstico de la
enfermedad y en algunos incluso a indicar tratamientos especficos.
 OBJETIVOS

Aprender sobre el Bandeo Cromosmico.

Conocer la importancia del Bandeo Cromosmico.

Describir los distintos mtodos de Bandeo Cromosmico.

Conocer la nomenclatura cromosmica internacional.

Aprender el cultivo celular y el proceso del material.

Reconocer los grupos cromosmicos

 BANDEO CROMOSMICO

Hasta 1968, las tcnicas citolgicas no permitan detectar sobre los cromosomas
metafsicos de la mitosis ms que las constricciones primarias (centrmero) y, en
ocasiones, las secundarias; por ello era difcil diferenciar entre s los cromosomas
con longitudes relativas e ndices centromricos semejantes. El primer paso en la
diferenciacin de los cromosomas por bandeo transversal de los cromatidios se
debi a la tcnica de fluorescencia, utilizando como fluorocromos la mostaza de
quinacrina y derivados, introducida por Caspersson y colaboradores.

Con la tcnica convencional de tincin con Giemsa los cromosomas se tien

intensamente y en forma homognea y se los puede contar y agrupar por su
aspecto general y eso era lo nico que se poda hacer en los primeros cariotipos.
La identificacin de cada cromosoma vino posteriormente con las tcnicas de
bandeo. Estas tcnicas que generan bandas transversales permiten definir a cada
cromosoma y estudiar su estructura. Cada cromosoma tiene del patrn de bandas
caracterstico y existen varias tcnicas de tincin con fines especficos. El bandeo
G es el ms utilizado en citogentica clnica.

Por patrn de bandeo cromosmico se entiende el conjunto de bandas

transversales de tamao e intensidad de tincin diferentes que aparecen sobre
cromosomas determinados segn un modelo de distribucin que depende del tinte
utilizado. Como norma general se admite que el patrn de bandeo es el mismo
para cualquier tejido dentro de una misma especie y que no cambia durante el
desarrollo. El bandeo cromosmico es, esencialmente un fenmeno del
cromosoma fijado.

Los bandeos cromosmicos hacen posible que se tenga un mayor conocimiento

acerca de la estructura cromosmica y de los reordenamientos que se producen
en las distintas alteraciones tales como: fusiones y fisiones cntricas,
translocaciones recprocas y en tandem; inverciones peri y paracntricas;
delecciones; duplicaciones; contricciones secundarias.; gapss, fracturas
cromosmicas, etc. Por otro lado permiten realizar estudios evolutivos de especies
relacionadas entre s.
 EL CULTIVO CELULAR Y EL PROCESAMIENTO DEL MATERIAL
Para el estudio cromosmico se debe realizar el cultivo un tejido del individuo
donde las clulas crezcan y se dividan rpidamente. El tejido ms accesible para
ese fin es la sangre y las clulas que crecen son los linfocitos. La tcnica
comienza con la toma de una muestra de sangre perifrica por venopuntura con
heparina como anticoagulante. Se siembran alrededor de 10 gotas en un medio
enriquecido y se incuba a 37C durante 72 horas. La estimulacin de la divisin
celular se logra con la adicin de un factor mitognico como es la
fitohemaglutinina. Pasado ese tiempo, se agrega una solucin de colchicina al
medio para detener la divisin celular y evitar que las clulas completen la mitosis.
La colchicina acta inhibiendo la formacin del huso mittico y las clulas que
alcanzan la metafase se acumulan en el cultivo. Luego se agrega una solucin
hipotnica que hace que las clulas se hinchen y se las hace estallar con una
tcnica de goteo sobre un portaobjeto y los cromosomas se liberan.
Posteriormente el material se fija y se tien de acuerdo a las diferentes tcnicas.
 EL CROMOSOMA METAFSICO

Todos los cromosomas alcanzan en la metafase su mximo grado de

organizacin, ordenamiento y compactacin. Cada cromosoma metafsico est
constituido por dos cromtides unidas por el centrmero. Este centrmero o
constriccin primaria divide al cromosoma en dos brazos que se designan p (petit)
para el brazo corto y q para el brazo largo. De esa manera, por ejemplo, 7p es el
brazo corto del cromosoma 7 e Yq es el brazo largo del cromosoma Y. La posicin
del centrmero permite clasificar a los cromosomas en tres tipos principales:

Metacntricos: Cundo el centrmero es ms o menos central y los brazos

son de aproximadamente igual longitud.

Submetacntricos: Cundo el centrmero est alejado del centro y los

brazos son desiguales.

Acrocntricos: Cundo el centrmero est cerca de uno de los extremos y

uno de los brazos es muy corto. 4 Los cromosomas acrocntricos humanos
tienen satlites unidos por un tallo, excepto el Y. Ellos son los cromosomas
13, 14, 15, 21 y 22 y dichos satlites estn constituidos por
heterocromatina.
 LOS GRUPOS CROMOSMICOS
Existen 23 cromosomas humanos distintos: los 22 autosomas y el sexual (X y el
Y). Estos se pueden clasificar en 7 grupos, A, B, C, D, E, F y G, de acuerdo a su
morfologa y su tamao de mayor a menor. Estos grupos se conformaron de
acuerdo a la tincin standard con Giemsa que no permita reconocer a cada
cromosoma individualmente y solo su pertenencia a un grupo. De todos modos,
sigue siendo de utilidad para denominarlos por grupos cuando hay dificultades con
el bandeo.
 LA NOMENCLATURA CROMOSMICA INTERNACIONAL

La terminologa bsica para el bandeo cromosmico se estableci en Pars en

1971 y dise en primer ideograma con las bandas tpicas de cada cromosoma a
distintos niveles de resolucin. En sucesivas reuniones internacionales se fueron
actualizando los criterios de la nomenclatura cromosmica. La ltima fue en 1995
y el informe se conoce como International System for Human Cytogenetic
Nomenclature (ISCN). Las regiones y las bandas se enumeran a partir del
centrmero y hacia los telmeros. El centrmero no constituye una banda.
Para designar una banda en particular se acord poner primero el nmero
del cromosoma seguido del smbolo del brazo, el nmero de la regin, el
nmero de la banda, subbanda, etc., todo seguido y sin dejar espacios.
Ejemplo, 14q32.3 es la designacin para la subbanda 3, de la banda 2, de
la regin 3, del brazo largo del cromosoma 14. Al leerlo de corrido, los
nmeros que corresponden a regin, banda y subbanda deben decirse
separadamente y no como decenas. Las bandas permiten tambin el
mapeo de genes en el cromosoma, es decir la designacin del locus (pl.
loci). Muchos rearreglos cromosmicos han permitido la identificacin de
genes debido a los efectos fenotpicos de la disrupcin de estos.

MTODOS DE BANDEO CROMOSMICO

BANDEO Q
Los cromosomas fijados (sin tratamientos adicionales) se tien con fluorocromos
(quinacrina, acridina, Hoechst 33258, DAPI, cromomicina, etc.) y sus derivador.
Hay que utilizar microscopio de fluorescencia. La banda es especfica de la regin
del ADN (rica en AT o GC) pero con interaccin de las protenas cromosmicas.
Por ejemplo, es sabido que reacciones de soluciones de ADN con quinacrina
producen mayor fluorescencia en regiones ricas en AT; sin embargo, en el
cromosoma fijado la reaccin puede der diferente.

Algunas de las bandas mostrarn fluorescencia brillante y otras aparecern

oscuras; las bandas oscuras son llamadas bandas Q y corresponden muy de
cerca a las bandas G. La tcnica es til para detectar heteromorfismos, que son
variaciones normales en la apariencia de los cromosomas.

Tal es el caso de los cromosomas del ratn, Mus muluscus, cuyas regiones
centromricas fluorescen menos que el resto de los brazos cromosmicos a pesar
de que el ADN satlite que compone la regin pericentromrica tiene mayor
contenido en AT que el ADN principal (65% y 58%, respectivamente). Por el
contrario, en otra especie de ratn, Mus cervicolor, el ADN satlite de las regiones
centromricas fluoresce ms que el resto del cromosoma aunque tiene menor
contenido en AT. Ambas situaciones indican que la interaccin del ADN con las
protenas en el cromosoma eucaritico puede modificar la reaccin fluorescente
con la quinacrina.
BANDEO G
El bandeo G se logra con un tratamiento controlado con tripsina antes de la
coloracin con Giemsa y produce bandas claras y oscuras en los cromosomas.
Las bandas oscuras contienen ADN rico en bases A-T que replica tardamente y
son pobres en genes constitutivos y las bandas claras contienen ADN rico en G-C
que replica tempranamente y tienen muchos genes constitutivos.

Cuando un cromosoma est ms elongado puede mostrar un mayor nmero de

bandas y esto se aprovecha para estudiarlo con mayores detalles. Esta
metodologa que permite buscar alteraciones estructurales mnimas se conoce
como bandeo de alta resolucin y se logra sincronizando el cultivo y con
preparaciones hechas en profase o prometafase es decir, antes que los
cromosomas alcancen su compactacin mxima. Los cromosomas en la mitad de
la metafase muestran un nivel de resolucin de 400 bandas mientras que los de
alta resolucin alcanzan niveles de resolucin de 550 y hasta de 850 bandas.
BANDEO C
La tcnica de Banda C fue descubierta por casualidad y originado en un
experimento en donde ADN satlite marcado en ratn fue hibridizado in situ con
cromosomas de raton. En este experimento, el ADN del cromosoma fue
desnaturalizado con NaOH y renaturalizado en buffer SSC. Los sitios hibridizados
fueron detectados por autoradiografa usando coloracin de Giemsa para
cromosomas.
La prueba de hibridizacin preferencialmente fue en las regiones centromericas
de los cromosomas. Sin embargo tambin se noto que el Giemsa coloreo otras
regiones en otros cromosomas (Fukui y Nakayama, 1996).
Esta banda se caracteriza por teir aquellas regiones ricas en heterocromatina
constitutiva que corresponden a secuencias de ADN altamente repetitivas; se
encuentran principalmente en centrmero, telmeros y ADN satlite y en
ocasiones constricciones secundarias como son los NORs.

BANDEO R
Al tratar a los cromosomas antes de teirlos, con calor o productos qumicos
particulares, las bandas claras y oscuras que aparecen estn invertidas. Si las
bandas G y Q se tien mal, entonces el bandeo R se emplea para brindar un
contraste superior, permitiendo as que las bandas se lean ms fcilmente. Es la
inversa del bandeo C y tie las regiones no centromricas, preferiblemente a los
centrmeros.
 Tipos de Bandeos Cromosmicos
Los bandeos cromosmicos pueden clasificarse en morfolgicos y dinmicos:

Los bandeos morfolgicos: Se obtienen basndose en tcnicas

inherentes a la heterogeneidad de la cromatina.

Nomenclatura de Bandeos Morfolgicos

QFQ: Bandas Q por fluorescencia usando quinacrina.

GTG: Bandas G por tratamiento enzimtico con tripsina utilizando Giemsa.

RFA: Bandas R por fluorescencia usando naranja de acridina.

RHG: Bandas R mediante desnaturalizacin trmica utilizando Giemsa.

THG: Bandas T por desnaturalizacin trmica empleando Giemsa.

CBG: Bandas C por hidrxido de bario utilizando Giemsa

 Los bandeos dinmicos: Se obtienen basndose en tcnicas que implican
la incorporacin de una base anloga, bromo-desoxiuridina (BrdU), en el
ADN durante la fase S del ciclo celular. Se denomina tambin bandeo de
replicacin debido a la relacin existente entre el tiempo de incorporacin
del BrdU y el patrn de replicacin.

Nomenclatura de Bandeos Dinmicos

GBG: Bandas G por incorporacin de BrdU utilizando Giemsa.

RBA: Bandas R por incorporacin de BrdU empleando naranja de acridina.

RBG: Bandas R por incorporacin de BrdU utilizando Giemsa.

GB-AAu: Bandas G por incorporacin de BrdU empleando anticuerpos

especficos unidos a partculas de oro coloidal.

RB-AAu: Bandas R por incorporacin de BrdU usando anticuerpos

especficos unidos a partculas de oro coloidal.
 IMPORTANCIA BIOLGICA DE LAS BANDAS CROMOSMICAS
El descubrimiento de las tcnicas de bandeo cromosmico ha significado un
considerable progreso tanto en citogentica humana como en citogentica general
ya que, al poder obtenerse imgenes reproducibles de la existencia de estructuras
cromosmicas transversales (bandas) de diferente tamao a lo largo de los
cromosomas, fue posible disponer de una herramienta de identificacin de cada
cromosoma humano, como as los de un importante nmero de otros organismos
tanto animales como vegetales.

Adicionalmente, esta metodologa permiti localizar con certeza los puntos de

fractura observados en la mayora de los reordenamientos estructurales y
establecer qu cromosomas estaban involucrados en dichas aberraciones. Estas
posibilidades citolgicas produjeron un gran impacto especialmente a nivel clnico
ya que permitieron diferenciar y caracterizar citogenticamente un elevado nmero
de nuevos sndromes de malformacin y retardo mental congnitos.

Asimismo, la ms reciente y significativa aplicacin de las bandas cromosmicas

ha sido en el REVISIN Dr. Mximo E. Drets 108 Revista Mdica del Uruguay
programa del genoma humano ya que, tanto genes como sndromes gnicos, son
ahora ubicados habitualmente en los mapas de bandas cromosmicas. El gran
valor de los diversos patrones de bandeo es que caracterizan a cada cromosoma
de diversas especies de entidades biolgicas superiores, excepto los vertebrados
inferiores que no las poseen.
 CONCLUSIONES

Aprendimos sobre el Bandeo Cromosmico.

Conocimos la importancia del Bandeo Cromosmico.

Describimos los distintos mtodos de Bandeo Cromosmico.

Conocimos la nomenclatura cromosmica internacional.

Aprendimos el cultivo celular y el proceso del material.

Reconocimos los grupos cromosmicos.

 REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Solari AJ. Gentica Humana: Fundamentos y Aplicaciones en Medicina. 3era ed.

Buenos Aires: Editorial Mdica Panamericana; 2004.

Jorde LB, Carey JC, Bamshad MJ, White RL. Gentica Mdica. 3era ed. Espaa:
Editorial Elsevier; 2007.

Lacadena J. Citogentica. Espaa: Editorial Complutense;1996.

Drets M E. Una saga citogentica: El descubrimiento de los mtodos de bandeo

cromosmico. Significado y proyeccin bio-mdica [en lnea]. Uruguay: Revista
Mdica Uruguay; 2002.[Fecha de acceso 04 de Abril del 2015]. Disponible en:
http://www.rmu.org.uy/revista/18/2/2/es/3/

http://www.geocities.com/ResearchTriangle/Lab/2513/bandeos.htm