Fibra Harina de Pescado

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PRCTICA N 3

DETERMINACIN DE
ANLISIS DE FIBRA DIETARIA
MTODO ENZIMTICO
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA
ESCUELA ACADMICA PROFESIONAL INGENIERA AGROINDUSTRIAL
DETERMINACIN DE ANLISIS DE FIBRA DIETARIA

NDICE:

RESUMEN ......................................................................................... 2

INTRODUCCIN ................................................................................ 3

OBJETIVOS..4
MARCO TERICO .............................................................................. 5

MATERIALES MTODOS ................................................................. 9

RESULTADOS...................................................................................10

DISCUSIONES ......................................................................................

CONCLUSIONES ...................................................................................

BIBLIOGRAFA ...................................................................................

ANEXOS ..............................................................................................

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DETERMINACIN DE ANLISIS DE FIBRA DIETARIA

1. RESUMEN

El papel de la fibra indigerible o alimento o forraje indigesto en la dieta en el


mantenimiento de salud, es ahora considerado tan importante nutricionalmente
como los niveles de nutrimentos absorbibles en los alimentos. Los mtodos
empricos para determinar el contenido en fibra cruda son de uso limitado porque
los resultados pueden representar tan poco como 1/7 de la fibra diettica total de
ciertos alimentos. La fibra diettica puede ser definida como constituida por todos
los componentes de los alimentos que no son rotos porque las enzimas del
conducto alimentario humano para formar compuestos de masa molecular
menor, capaces de ser absorbidos al torrente sanguneo.

Se han desarrollado diferentes mtodos para la estimacin de la fibra diettica.


En la elaboracin de la prctica se identific el contenido de fibras totales pero
no es la cantidad certera ya que no se logr separar totalmente a un pequeo
porcentaje de protenas y cenizas.

1.1 ABSTRACT

The role of indigestible fiber or indigestible food or forage in the diet in maintaining
health, is now considered so important nutritionally as levels of absorbable
nutrients in food. Empirical methods for determining the crude fiber content are
of limited use because the results may represent as little as 1/7 of total dietary
fiber from certain foods. Dietary fiber can be defined as consisting of all the
components of food that are not broken because the enzymes of the human
alimentary canal to form lower molecular weight compounds capable of being
absorbed into the bloodstream.

Different methods have been developed for estimating dietary fiber. In developing
practice of total fiber content it identified but is not the certain amount since failed
to completely separate a small percentage of protein and ash.

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2. INTRODUCCIN

Los mtodos analticos son muy importantes en investigaciones de nutricin;


puesto que, constituyen la base para la interpretacin de datos y, en
consecuencia existen numerosas publicaciones con informacin disponible
sobre tcnicas para evaluar componentes de un producto.

Pero aparece una gran dificultad para seleccionar el mtodo ms adecuado,


porque definir la capacidad de un mtodo, tanto desde el punto de vista analtico
como de la interpretacin de los resultados es tarea complicada, por tanto, la
determinacin del valor nutricional depende bsicamente de la necesidad del
investigador y del producto analizado segn su composicin terica. Sin mtodos
confiables o significativos en la valoracin nutricional se restringen muchos
avances cientficos. Tambin, porque aunque es posible analizar la composicin
qumica de un producto, los requerimientos necesarios para su aislamiento
limitan su uso solamente al desarrollo de investigaciones donde se justifica
separarlos, porque requieren mucho tiempo y dinero.

El concepto actual define a las fibras dietarias como los componentes de la dieta
de origen vegetal que son resistentes a las enzimas digestivas del hombre, y
qumicamente estara representada por la suma de los polisacridos que no son
almidones, y lignina. (Molina B. et al., 2003).

En las ltimas dcadas se han desarrollado estudios e investigaciones que


sealan la asociacin a nivel epidemiolgico entre el bajo consumo de fibra
diettica (FD) y la alta incidencia de enfermedades crnicas, tales como
constipacin, hemorroides, diverticulosis, cncer de colon, diabetes, obesidad,
enfermedad cardiovascular. En la actualidad los estudios se han enfocado en los
efectos de la fermentacin de la FD en el colon. (Vega G., 2012).

Es importante determinar la cantidad de fibra en un producto porque representa


la porcin orgnica de los alimentos que es ms difcil de digerir; las fracciones
de alimentos que no son fibras son fcil y casi completamente digeridas por la
mayora de las especies animales.

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En el presente informa se utiliz un mtodos enzimtico-qumicos, el cual
consiste en aislar los residuos de FD por accin enzimtica, sin embargo este
mtodo tiene un pequeo margen de error ya que no logra separar totalmente a
las protenas ni a las cenizas que se encuentran apegadas a las fibras.

3. OBJETIVOS

Determinar la fibra dietaria de una muestra alimenticia (harina de pescado


y harina de snack).
Analizar y evaluar el mtodo enzimtico de determinacin de fibra dietaria.
Conocer el procedimiento experimental de la determinacin de la fibra
total en el laboratorio.

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4. MARCO TERICO

4.1 DEFINICIN DE FIBRA DIETTICA

La definicin de fibra, como tambin todos los mtodos utilizados para su


evaluacin, no se han establecidos de forma unnime an. La fibra diettica o
alimentaria, como es mencionada por los diversos autores, puede ser
conceptualizada como un conjunto muy amplio y heterogneo de compuestos
presentes en los alimentos de origen vegetal, en su mayora polisacridos. La
fibra diettica (FD) puede ser definida como un componente de los alimentos
funcionales, de acuerdo con sus propiedades fisiolgicas, como tambin por su
composicin qumica.

Adems de eso, componentes presentes en la fraccin de fibra como, por


ejemplo, la inulina y los fructo-oligosacridos (FOS), son denominados
prebiticos: ingredientes alimentarios no digeridos en el intestino que, al
alcanzar el intestino grueso, son metabolizados selectivamente por un nmero
limitado de bacterias denominadas benficas. Estas son llamadas as por alterar
la microflora bacteriana saludable, capaz de inducir efectos fisiolgicos
importantes para la salud. (Hernaez R., 2010).

El trmino fibra diettica o alimentaria fue adoptado por primera vez por Hipsley
en 1953 para describir los componentes de las paredes celulares de los
vegetales en los alimentos. El significado fisiolgico de la fibra se obtuvo en 1971
cuando Burkitt recomend un mayor consumo de fibra diettica para mejorar la
funcin intestinal, basado en estudios comparativos entre frica y el Reino
Unido. Desde 1972, cuando Trowell defini por primera vez a la fibra diettica,
muchas definiciones se han propuesto a nivel nacional e internacional (INS
Kelloggs, 2009).

4.2 COMPONENTES DE LA FIBRA ALIMENTARIA

Con las nuevas definiciones, el nmero de sustancias que se incluyen en el


concepto de fibra ha aumentado y es probable que la investigacin que se est
llevando a cabo en este campo permita que nuevos productos puedan ser
incluidos bajo el concepto de fibra diettica.

La fibra est compuesta por diferentes tipos de polmeros, esencialmente


polisacridos, con propiedades y caractersticas muy especficas. Los
polisacridos estn constituidos por ms de 10 monosacridos, unidos por
enlaces glucosdicos. Se forman como cadenas lineales o ramificadas, que
pueden estar integradas por homopolisacridos, constituidos por un solo tipo de
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monosacridos, como es el caso del glucgeno, almidn y la celulosa; y los
heteropolisacridos que estn formados por dos o ms monosacridos
diferentes, como son la hemicelulosa, pectinas, muclagos y resinas.
Los componentes de la fibra diettica total, por sus propiedades fsicas, se
clasifican en insolubles y solubles en agua (Cuadro 1). La fibra insoluble se
encuentra compuesta por celulosa, la hemicelulosa insoluble y lignina, que se
localizan en los revestimientos de los granos y aportan estructura a las clulas
de la plantas; se encuentran en todos los tipos de material vegetal. Los
componentes de la fibra soluble son las pectinas, gomas (-glucanos y
pentosanos), muclagos y algunas hemicelulosas; este tipo de fibra se halla en
las paredes celulares.

TABLA 1. Componentes de la fibra y sus fuentes en los alimentos

Caracterstica Componente Fuente principal de


alimentos
Insoluble Celulosa Plantas (cereales y leguminosas,
Hemicelulosa verduras)
Lignina Granos de cereal y leguminosas, frutas
Plantas leosas
Soluble -glucano Granos (avena, centeno)
Pectina Frutas, verduras, leguminosas, papa,
Goma remolacha
Inulina Leguminosas (guar, algarrobo), algas
Cebolla, trigo, alcachofa,
achicoria
Fuente: Meyer y Tungland (2001).

4.3 ESTRUCTURA DE LA FIBRA DIETTICA

La estructura de la fibra diettica se divide en tres tipos de polmeros:

1) Polisacridos estructurales. Son los que forman la pared celular y se


encuentran entre ellos: las sustancias ppticas, hemicelulosa y la celulosa.
2) Los polisacridos no estructurales. Son ms fciles de extraer y aislar; se
encuentran entre ellos: los muclagos, inulina, las gomas (goma arbica, agar,
tragacanto, karaya, alginatos, entre otros) y el almidn resistente. (Hughes,
1991; Monro, 1996).
3) Los componentes estructurales no polisacridos: entre los que se encuentran
la lignina, cutina, suberina, cido ftico, taninos.

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TABLA 2. Composicin qumica de la fibra dietaria.


CONJUNTOS DE
FIBRA CADENA PRINCIPAL REFERENCIAS
DERIVACIN

Celulosa -(1,4) glucosa Olson et al. (1987)

-(1,4) glucosa y -(1,3)


-glucano Johansson et al. (2000)
glucosa

Hemicelulosa Olson et al. (1987)

Xilanos D-(1,4) xilosa

Arabinoxilanos D-(1,4) xilosa Arabinosa

Manosa D-(1,4) manosa

D-(1,4) manosa y -D-


Glucomanosa
(1,4) glucosa

D-(1,4) manosa y -D-


Galactoglucomanosa Galactose
(1,4) glucosa

Galactomanosa D-(1,4) manosa -D-galactosa

Xiloglucano -D-(1,4) glucosa -D-xilosa

Pectina

-(1,4)-D- cido
galacturnico (algunos de Ridley, ONeill y Mohnen
Homogalacturonano
los grupos carboxilo estn (2001)
esterificados metilo)

(1-4) cido galacturnico, Galactosa, arabinosa,


Oechslin, Lutz, y Amado
Ramnogalacturonano-I (1,2) ramnosa y de 1, 2, 4- xilosa, ramnose, cido
(2003)
ramnosa galacturnico

azcar inusual, tales


-(1,4) cido Vidal, Doco, Williams, y
Ramnogalacturonano-II como; apiosa, cido
galapturnico Albersheim (2000)
actico, fucosa

Arabinanos -(1,5)-L-arabinofuranosa -arabinosa

Galactanos -(1,4)-D-galactopyranosa

Arabinogalactanos-I -(1,4)-D-galactopiranosa -arabinosa

-(1,3)- y -(1,6)-D-
Arabinogalactanos-II -arabinosa
galactopiranosa

-(1,4) cido Le Goff, Renard, Bonnin,


Xilogalacturonano Xilosa
galacturnico y Thibault (2001)

Inulina -(1,2)-D-fructosil-fructosa Blecker et al. (2001)

Goma

Carragenina Sulfato-galactosa

-(1,4)-D-cido manurico
Alginato o -(1,4)-L-cido
galacturnico

goma de semilla de Sing, Mishra, Khare,


(1,4)-D-manosa D-(1,6) galactosa
Abutilon indicum: e.g.1 Khare yGupta (1997)

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Ramnosa, arabinosa,
goma de semilla de xilosa, manosa, galactosa, Abbott, Wu, Carlson,
Lesquerella fendleri: e.g.2 glucosa, cido Slodki y Kleiman (1994)
galacturnico

Oligofructosa (hidrlisis (1,2)-D-fructosil-


enzimtica de inulina) fructosa

Polidextrosa (sinttica) D-Glucosa

Maltodextrinas resistentes
(calor y tratamiento -(1,4)-D-Glucosa -(1,6)-D-Glucosa
enzimtico de almidn)

Polifenoles: alcohol siringil


Sun, Tomkinson y Bolton
Lignina (s), guayacil alcohol (G) y
(1999)
alcohol p-cumaril (H)

(1,4)-vinculado D-
Quitosano glucosamina y N-acetil-D- Borderis et al. (2005)
glucosamina

FUENTE: 2013. Published by Science and Education Publishing

4.4 COMPOSICIN DE LA HARINA DE PESCADO


La harina de pescado se produce de la captura de peces para los cuales existe
poca o ninguna demanda para el consumo humano, por ejemplo, la anchoveta,
el jurel, el capeln y el lanzn. Estos peces almacenan aceite en su carne.
La harina de pescado es un polvo marrn compuesto habitualmente por entre
60% y 72% de protena, entre 5% y 12% de grasa y entre 10% y 20% de ceniza.
Los productores proveen detalles del tipo de materia prima utilizada y del
contenido tpico de nutrientes. Estas harinas suponen una buena fuente de
energa en la alimentacin de aves, cerdos, vacas, ovejas y en la piscicultura.
(Mario et al., 2012).

TABLA 4. Composicin nutricional de la harina de pescado.


Composicin nutricional Unidad Cantidad
Materia seca % 90,00
Energa metabolizable (aves) Mcal/kg 3,10
Energa digestible (cerdos) Mcal/kg 3,20
Protena % 50,00
Metionina % 1,80
Metionina + cistina % 1,95
Lisina % 4,00
Calcio % 7,50
Fsforo disponible % 3,80
cido linoleico % 0,15
Grasa % 14,00
Fibra % 1,20
Ceniza % 16,50

FUENTE: (Mario et al., 2012).

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4.5 SISTEMA FIBERTEC 1023 E /TECATOR TM LINE ANALIZADOR DE FIBRA


Este sistema incluye un bao de agua con agitacin y un mdulo de filtracin
para detectar de forma cuantitativa la fibra diettica en una gran variedad de tipos
de muestras. El mdulo de filtracin filtra y recoge seis soluciones de muestras
e incluye un sistema para su deshidratacin rpida. La filtracin se acelera con
un "Modo de presin" incorporado, para romper los residuos atascados en el filtro
durante la filtracin. El tiempo de filtracin va de 2 a 4 minutos para 100 ml de
solucin digerida. El Bao de agua con agitacin incuba 12 muestras en cada
lote. El rango de temperatura va desde temperatura ambiente hasta 80C y se
pueden configurar previamente tres temperaturas. (Catlago FOSS, 2014)

5. MATERIALES

Muestra: harina de pescado y harina de snack.

Equipos
Equipo para determinar fibra dietaria FOSS
Mufla
Crisol fritado, tamao de poro de 40 a 60 um ASTM
Estufa
Enzimas: alfa amilasa, proteasa y glucoamilasa.
Esptula, Shaker y Beakers.
Campana desecadora
Micropipetas de 50 a 200 uL

Reactivos

Alfa amilasa termoestable, HCl y NaOH


Proteasa
Amiloglucosidasa
Etanol de 95
Acetona
Celita

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6. MTODOS

Muestras: 1 gr (harina de pescado y harina de snack)

Regular ph
agregando 9.5 ml 40 ml solucin buffer hasta ph 8.2
de NaOH y 3 gotas
de HCl

Colocar en beakers y agregar 50 uL de


alfa amilasa

Llevar al Shaker a 80C por 45 min

Enfriar hasta 60C y agregar 100 uL de


proteasa

Incubar a 60C por 30 min

Adicionar 200 uL
de
Adicionar 5 ml de HCl y regular
amiloglucosidasa
pH hasta 4.5
e incubar por 30
min a 60C

Agregar 4 volmenes de alcohol: (232 ml


en harina de pescado y 218 ml en harina
de snack)

Agregar 10 ml de OH y
utilizar 0.5 gr de Celita, para Filtrar en crisol
mejorar la filtracin

Obtenindose: protena,
cenizas y fibras totales

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7. RESULTADOS

Muestra Peso (gr)


Harina de pescado (1) 1.0019
Harina de Pescado (2) 1.0125

Crisol Cdigo Peso Celite aadido Contenido despus Residuo


de filtrar
Harina de 042 30.2824 0.5001 31.0843 0.3018
Pescado
496 30.2342 30.5516 0.3174

1 + 2

% = 2 100
1 + 2
2

R1 = Peso de residuo 1
R2 = Peso de residuo 2
m 1= Peso de muestra 1
m 2 = Peso de muestra 2
A = peso de ceniza de 1
P = peso de protena de 2
B = blanco

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1+2
=
2

BR1 = Residuo 1
BR2 = Residuo 2
BA = Peso de ceniza de BR2
BP = Peso de protena de BR1

Calculo de fibra para la harina de pescado


R1 = 0.3018
R2 = 0.3174
m 1= 1.0019
m 2 = 1.0125
A = 0.165
P = 0.05
B = 0.0757

1 + 2

% = 2
1 + 2
2

0.3096 0.165 0.05 0.0757


% = 100
1.0072

% = 1.87

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BR1 = 0.3018
BR2 = 0.3174
BA = 0.0761
BP = 0.1578

1 + 2
=
2

= 0.3096 0.1578 0.0761

= 0.0757

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8. DISCUSIONES

El mtodo de obtencin de fibra cruda se basa en la digestin cida y alcalina


usando soluciones de cido sulfrico e hidrxido de sodio donde al final
de la muestra se obtendr un residuo y sales que con calcinacin posterior se
determina la fibra cruda. La diferencia de pesos despus de la calcinacin nos
indica la cantidad de fibra presente. (Ankom 2005). La determinacin de fibra
cruda a comparacin de fibra dietara es la utilizacin de reactivos diferentes en
este caso usamos Acido Clorhdrico a comparacin de cido sulfrico, adems
que en el mtodo de fibra dietara se trabaj usando enzimas a comparacin de
la fibra cruda que se determina hidrolizando la muestra y llevndola a altas
temperaturas.

La fibra detergente neutro (FDN) es la obtencin de un residuo fibroso


(fundamentalmente celulosa, hemicelulosa y lignina) se obtiene luego de
disolver con detergente neutro los compuestos presentes en el contenido celular
junto con sustancias de la pared celular de fcil digestin. Se denomina fibra
insoluble en detergente cido (FDA) al residuo fibroso que queda luego de
disolver el contenido celular y las hemicelulosas de la FDN (fibra insoluble en
detergente neutro) empleando detergente cido, el cual est constituido
fundamentalmente por celulosa y lignina. La diferencia con el mtodo de fibra
dietaria es que el nmero de repeticiones en el mtodo anterior es mayor pero
el mtodo de FDN nos permite obtener solo fibra total y el FDA ayuda a obtener
fibra insoluble he aqu porque son 2 procedimientos seguidos uno del otro, en
cambio el mtodo de fibra deitaria nos permite la obtencin de fibra total.

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9. CONCLUSIONES

A partir de los resultados obtenidos se concluye que el porcentaje de fibra


total de la harina de pescado es 1.87 que el porcentaje de fibra total de la
harina de fibra de snack.
La solucin que contiene a la harina de pescado necesit ms HCl para
regular el ph a 4,5
Se practic correctamente el desarrollo de la metodologa para hallar la
fibra total en las muestras alimenticias de harina de pescado.

10. BIBLIOGRAFA

Ankom. 2005. Subject: Neutral Degerteng Fiber in Feeds. Filter bags


technique (ANKOM200).

FOSS (2014). Catlago - FOSS: un socio de laboratorio de confianza, en


todas las fases del proceso. Barcelona, Espaa.

Hernaez R. (2010). Estudio del consumo de fibra diettica en


adolescentes de la capital Federal de Buenos Aries. Argentina.
Marios S., Snchez E., Sures G., Rodrguez J. (2012). Harina de

pescado. 26/09/2014, de Ministerio del Poder Popular para la


Educacin Universitaria. Sitio web:
http://www.monografias.com/trabajos95/harina-pescado/harina-
pescado.shtml
Meyer D y Tungland B. (2001). Tecnologa Avanzada en fibra dietaria:
oligosacridos no digeribles y polisacridos: los efectos fisiolgicos y
consecuencias para la salud. Editorial Blackwell Science. New Jersey.

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Molina Baena B., Monereo Megas S. y Silveira Rodrguez M. 2003
ALIMENTOS FUNCIONALES Y NUTRICIN PTIMA. Revista
Espaola de Salud Pblica v. 77 n.3 Madrid, mayo-junio 2003.
rgano Informativo del Instituto de Nutricin y Salud Kelloggs (2009).
Dieta y Salud Fibra. Mxico.
Vega Griselda, 2012. Alimentos funcionales: Saludables, dinmicos y
prometedores. nfasis alimentacin, Ao XXVIII, N 9, Octubre 2012.

11. ANEXOS

FIGURA N 1. Equipo para determinar fibra dietaria en analizador de fibra /


Tecator Line

FIGURA N2. Peso 1 g de muestra en la balanza analtica

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FIGURA N3. Crisol fritado, con tamao de poro de 40-60 un ASTM; con celita
dentro de la estufa

FIGURA N4. Agregar HCl al Beaker hasta ajustar un pH de 4,5.

FIGURA N5. Alfa- amilasa termoestable

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FIGURA N6. Proteasa

FIGURA N7. Agregar 200uL de Glucoamilasa con micropipeta

FIGURA N8. Agregar 40mL de buffer al beaker con 1 g de muestra.

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FIGURA N9. Agregar 4 volumenes de Etanol de 78% al celite para desnaturalizar

FIGURA N10. Incubar las muestras a 60C por 30 minutos despus de agregar cada
enzima. FOSS WR1024 Water bath/ Teacator Line.

FIGURA N11. Ph-metro

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