19 OFICINA ESPAÑOLA DE

PATENTES Y MARCAS

ESPAÑA 11 Número de publicación: 2 364 768

21 Número de solicitud: 201150001

51 Int. CI.:

C11B 1/10 (2006.01)

C11C 1/04 (2006.01)

C12M 1/107 (2006.01)

C12M 1/00 (2006.01)

C11C 3/00 (2006.01)

C12P 7/64 (2006.01)

12 PATENTE DE INVENCIÓN CON EXAMEN PREVIO B2

22 Fecha de presentación: 73 Titular/es:

19.06.2009 ENI S.P.A. (100.0%)
PIAZZALE E.MATTEI 1
30 Prioridad: I- OO144 ROMA IT
72 Inventor/es:
30.06.2008 IT MI2008A001203
D'ADDARIO, Ezio, Nicola;
43 Fecha de publicación de la solicitud: CAPUANO, Federico;
14.09.2011 D'ANGELI, Edoardo y
MEDICI, Roberto
74 Agente/Representante:
Fecha de modificación de las reivindicaciones:
21.01.2013 CURELL SUÑOL, Marcelino

Fecha de la concesión:
28.01.2013

45 Fecha de publicación de la concesión:

07.02.2013

54 Título: PROCEDIMIENTO PARA LA EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS GRASOS A PARTIR DE BIOMASA DE

ALGAS.
57 Resumen:
Procedimiento para la extracción de ácidos grasos a
partir de biomasa de algas, que comprende producir
una suspensión acuosa de biomasa de algas;
someter la suspensión acuosa de biomasa de algas a
hidrólisis ácida y extracción mediante la adición de
por lo menos un disolvente orgánico apolar y por lo
menos un ácido inorgánico a dicha suspensión
acuosa de biomasa de algas, de tal modo que se
obtengan las tres fases siguientes: una fase
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semisólida que comprende una suspensión espesa

de la biomasa de algas; una fase acuosa que
comprende compuestos inorgánicos y compuestos
orgánicos hidrófilos; una fase orgánica que
comprende ácidos grasos y compuestos orgánicos
hidrófobos distintos a dichos ácidos grasos.

Aviso: Se puede realizar consulta prevista por el art. 40.2.8 LP.

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PROCEDIMIENTO PARA LA EXTRACCiÓN DE ÁCIDOS GRASOS A PARTIR DE

BIOMASA DE ALGAS

5
DESCRIPCION

La presente invención se refiere a un procedimiento para la extracción de

ácidos grasos a partir de biomasa de algas.
10 Más en particular, la presente invención se refiere a un procedimiento para la
extracción de ácidos grasos de biomasa de algas que comprende el tratamiento de
una suspensión acuosa de biomasa de algas con por lo menos un disolvente apolar
orgánico y por lo menos un ácido inorgánico.
Las algas, en particular, las microalgas, se cultivan actualmente para la
15 producción de compuestos valiosos tales como, por ejemplo, ácidos grasos
poliinsaturados [por ejemplo, ácido eicosapentaenoico (EPA), ácido docosahexaenoico
(DHA), y similares], vitaminas (por ejemplo, f3-caroteno, y similares) y agentes de
gelificación, que se incluyen en los campos nutricional, farmacéutico y cosmético.
El cultivo de microalgas para los sectores anteriores se caracteriza por
20 capacidades de producción bastante limitadas (del orden de cientos-miles de
toneladas al año) con un alto valor añadido de los compuestos obtenidos (cientos-
miles de dólares por kilogramo). Éste es el motivo por el cual pueden tolerarse
sistemas de producción, particularmente sistemas de extracción y purificación, caros y
complejos que deben satisfacer los estrictos reglamentos de tipo sanitario y nutricional,
25 típicos de los campos mencionados anteriormente.
El paso de los campos mencionados anteriormente de utilización tradicional de
las microalgas, al campo medioambiental/energético, requiere el desarrollo de
tecnologías que conduzcan a fuertes aumentos en la capacidad de producción (de
cientos-miles de toneladas al año a millones de toneladas al año) y una fuerte
30 reducción en los costes de producción debido al valor añadido limitado de los
productos destinados para el campo medioambiental/energético (cientos-miles de
dólares por tonelada).

2
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Se describen en la técnica procedimientos relacionados con la extracción de

compuestos de biomasas de algas.
La patente US nO 4.341.038, por ejemplo, describe un procedimiento para la
recuperación de productos oleosos a partir de algas que comprende: (a) hacer crecer
5 algas halófilas unicelulares, sin pared celular, en una solución salina; (b) recoger estas
algas con el fin de obtener una suspensión espesa basada en algas yagua salina; (c)
extraer los productos oleosos de dicha suspensión espesa utilizando un disolvente
para dichos productos; (d) recuperar dichos productos oleosos y algas residuales.
Dichos productos oleosos pueden utilizarse como fuentes de energía, en particular
10 combustible, o como fuente de otros productos tales como, por ejemplo, fertilizantes, o
para nutrición animal.
La patente US n° 5.338.673 describe un procedimiento para la producción
selectiva de ácidos grasos poliinsaturados a partir de un cultivo de microalgas de la'
especie Porphyridium cruentum, así como un procedimiento para su extracción. En
15 particular, el procedimiento de extracción incluye: concentrar la biomasa de algas;
someter dicha biomasa de algas concentrada a lisis celular, preferentemente po~

medio de homogenización mecánica; separar la fase líquida de la fase sólida,

conteniendo dicha fase sólida dichos ácidos grasos poliinsaturados; extraer dichos!
ácidos grasos poliinsaturados utilizando un disolvente orgánico tal como, por ejemplo,
20 hexano o cloroformo; evaporar dicho disolvente orgánico con el fin de obtener dichos
ácidos grasos poliinsaturados.
Dichos ácidos grasos poliinsaturados, tales como, por ejemplo, ácido
eicosapentaenoico (EPA), ácido docosahexaenoico (DHA), ácido araquidónico, se
utilizan particularmente en el sector farmacéutico.
25 La patente US nO 5.539.133 describe un procedimiento para obtener Iípidos con
una gran cantidad de ácidos grasos poliinsaturados que presentan entre 20 y 22
átomos de carbono, a través de la extracción de un material de partida de origen
animal o vegetal, presentando dicho material de partida un contenido en agua de
desde el 5% en peso hasta el 50% en peso y un tamaño de partícula comprendido
30 entre 0,01 mm y 50 mm, llevándose a cabo dicha extracción utilizando un disolvente
orgánico, preferentemente miscible con agua (por ejemplo, etanol) o a través de gas
comprimido licuado (por ejemplo, dióxido de carbono, propano, o combinaciones de
los mismos). Como material de partida que puede utilizarse para este fin, también se

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indican las algas unicelulares (microalgas), o macroalgas que pertenecen a la familia

de las algas rojas, pardas o verdes. Dichos ácidos grasos poliinsaturados tales como,
por ejemplo, ácido docosahexaenoico (DHA), ácido araquidónico, se utilizan
particularmente en la industria alimentaria.
5 La patente US nO 6.166.231 describe un procedimiento para separar lípidos, en
particular aceites alimentarios, de un material de origen biológico (por ejemplo, algas,
levaduras o bacterias) que comprende: (a) poner en contacto un disolvente (por
ejemplo, hexano, o diversos éteres de petróleo) con una suspensión acuosa del
material de origen biológico que contiene los lípidos a contracorriente, siendo dicho
10 disolvente esencialmente inmiscible con agua; (b) recoger el disolvente, conteniendo
dicho disolvente los lípidos extraídos de dicha suspensión acuosa del material de
origen biológico; y (c) separar los lípidos de dicho disolvente.
Dicha suspensión acuosa del material de origen biológico se somet~

preferentemente a centrifugación con el fin de alcanzar una concentración de

15 sustancia sólida en la suspensión no superior al 50% y, posteriormente, a lisis celular
por medio, por ejemplo, de homogenización mecánica. Puede obtenerse un~
extracción mejorada de los lípidos a través de un aumento en el pH, preferentemente
entre 5 y 10, de dicho material de origen biológico a través de procedimientos
conocidos en la técnica, tales como, por ejemplo, mediante la adición de una
20 disolución cáustica (por ejemplo, hidróxido de potasio o hidróxido de sodio). El
aumento en el pH también impide la formación de emulsiones entre el material de
origen biológico y el disolvente.
Miao X. et al. describen la producción de biodiésel a partir de algas en el
siguiente artículo: "Biodiesel production from heterotrophic microalgal oil", publicado en
25 "Bioresource Technology" 97 (2006), págs. 841-846. En dicho artículo, se secan algas
de la especie Chorella protothecoídes, hechas crecer de manera heterótrofa, y
posteriormente se pulverizan en un mortero y se someten a extracción con hexano con
el fin de extraer el aceite. El aceite extraído se somete posteriormente a
transesterificación ácida en presencia de metanol y ácido sulfúrico como catalizador de
30 transesterificación, con el fin de obtener biodiésel.
La producción de biodiésel a partir de algas también se describe por Hossain S.
et. al. en el siguiente artículo: "Biodiesel Fuel Production from Algae as Renewable
Energy", publicado en "American Journal of Biochemistry and Biotechnology" 4 (3)

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(2008), págs. 250-254. En dicho artículo, se secan algas de las especies Oedogoníum
y Spírogyra, tras molerse y pulverizarse en mortero tanto como sea posible, en un
horno termostático a 80 D e, durante 20 minutos para eliminar el agua. Posteriormente,
se mezcla una disolución de hexano y éter con las algas secadas para extraer el
5 aceite. Se recupera el aceite extraído por medio de evaporación a vacío de dicha
disolución en hexano y éter. Se lleva a cabo la reacción de transesterificación del
aceite así obtenido, con el fin de obtener biodiésel, en presencia de una combinación
de hidróxido de sodio como catalizador de transesterificación, y metanol
(transesterificación básica).
10 Los procedimientos anteriores, sin embargo, pueden presentar diversos puntos
críticos, tales como, por ejemplo:

lisis celular de la biomasa efectuada normalmente mediantE!

homogenización mecánica , molienda o pulverización, de modo que se
15 liberen las fracciones lipídicas intra y endocelulares y se mejore el contacto
con el disolvente;
secado de la biomasa efectuada normalmente por medio de técnicas
costosas, tales como, por ejemplo, secado por pulverización o liofilización "
una operación que también requiere particular atención con respecto a la
20 temperatura utilizada durante el secado que debe mantenerse dentro de un
determinado intervalo de modo que no se ponga en peligro la calidad de
los compuestos (por ejemplo, lípidos) que van a extraerse;
difícil separación de la fase acuosa de la fase de disolvente que contiene
las fracciones lipídicas, una operación que puede ser particularmente difícil
25 debido a la formación de emulsiones.

El solicitante ha descubierto actualmente que la extracción de ácidos grasos de

biomasa de algas puede llevarse a cabo ventajosamente por medio de un
procedimiento que comprende el tratamiento de una suspensión acuosa de biomasa
30 de algas con por lo menos un disolvente orgánico apolar y por lo menos un ácido
inorgánico. Dicho procedimiento permite tanto la hidrólisis ácida de la fracción lipídica
presente en la biomasa de algas, con el fin de obtener ácidos grasos, y la extracción
contemporánea de dichos ácidos grasos, que va a efectuarse. En particular, dicho

5
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procedimiento permite que se obtengan las tres fases siguientes, sin intervenciones
adicionales: (i) una fase semisólida que comprende una suspensión espesa de la
biomasa de algas; (ii) una fase acuosa que comprende compuestos inorgánicos y
compuestos orgánicos hidrófilos; (iii) una fase orgánica que comprende ácidos grasos
5 y compuestos orgánicos hidrófobos diferentes de dichos ácidos grasos.
Un objetivo de la presente invención es, por tanto, proporcionar un
procedimiento para la extracción de ácidos grasos de biomasa de algas, que
comprende:

10 producir una suspensión acuosa de biomasa de algas;

someter la suspensión acuosa de biomasa de algas a hidrólisis ácida y
extracción mediante la adición de por lo menos un disolvente orgánico
apolar y por lo menos un ácido inorgánico a dicha suspensión acuosa de'
biomasa de algas, con el fin de obtener las tres fases siguientes:
15
(i) una fase semisólida que comprende una suspensión espesa de la'
biomasa de algas;
(ii) una fase acuosa que comprende compuestos inorgánicos y
compuestos orgánicos hidrófilos;
20 (iii) una fase orgánica que comprende ácidos grasos y compuestos
orgánicos hidrófobos distintos a dichos ácidos grasos.

La fracción lipídica presente en la biomasa de algas que proviene del cultivo de

microalgas, comprende generalmente diversos grupos de moléculas lipídicas, tales
25 como, por ejemplo: glicéridos, por ejemplo, mono-, di-, tri-acilglicéridos (que contienen
ácidos grasos); ceras (que contienen ácidos grasos más alcoholes y ácidos grasos
más esteroles); hidrocarburos; ácidos grasos libres; esteroles; fosfolípidos , tales como,
por ejemplo, diacil-fosfoglicéridos, alquil-acil-fosfolípidos, alquenil-acil-fosfoglicéridos
(que contienen ácidos grasos más un grupo fosfórico), esfingofosfolípidos (que
30 contienen ácidos grasos más un grupo fosfórico y una base nitrogenada); glicolípidos
(que contienen ácidos grasos más hidratos de carbono y una base nitrogenada);
aminolípidos (que contienen ácidos grasos y una base nitrogenada). Además de estas
moléculas lipídicas, otros compuestos orgánicos hidrófobos, tales como, por ejemplo,

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clorofilas, carotenoides, terpenos; tocoferoles, están presentes generalmente en dicha

biomasa de algas.
La fracción lipídica mencionada anteriormente y dichos otros compuestos
orgánicos hidrófobos se extraen normalmente por medio de disolventes, operando
5 según procedimientos conocidos en la técnica, tales como, por ejemplo, los descritos
en los documentos notificados anteriormente.
Tal como se mencionó anteriormente, la adición de por lo menos un disolvente
orgánico apolar y por lo menos un ácido inorgánico a la suspensión acuosa
mencionada anteriormente de biomasa de algas, según el procedimiento objeto de la
10 presente invención, permite que tanto la hidrólisis ácida de dicha fracción lipídica
obteniéndose ácidos grasos, como la extracción de dichos ácidos grasos, se efectúen
simultáneamente. Además, el procedimiento que es el objeto de la presente invención'
permite obtener, además de los ácidos grasos mencionados anteriormente, alcoholeS"
hidrófilos, tales como, por ejemplo, glicerina a partir de triglicéridos, alcohol metílico a
15 partir de clorofilas; alcoholes hidrófobos de cadena larga, tales como, por ejemplo, tito I
a partir de clorofilas; compuestos orgánicos hidrófobos que, durante la hidrólisis ácida,
sólo se hidrolizan parcialmente o no se hidrolizan. Al final de la hidrólisis y la
extracción, los compuestos así obtenidos se dividen, como resultados de sus
diferentes características, entre la fase orgánica (hidrófoba) y la fase acuosa (hidrófila).
20 Se ha verificado que la hidrólisis ácida de la suspensión acuosa de la biomasa
de algas, permite que se liberen los ácidos grasos para solubilizarse instantáneamente
en el disolvente, evitando así la formación de emulsiones y favoreciendo en
consecuencia su recuperación, por ejemplo, mediante evaporación del disolvente.
La fase acuosa (ii) comprende preferentemente unos compuestos inorgánicos
25 (por ejemplo, parte del ácido inorgánico utilizado para la hidrólisis ácida; sales de
nitrógeno y sales de potasio que provienen del cultivo de algas) y compuestos
orgánicos hidrófilos (por ejemplo, glicerina; alcohol metílico; aminoácidos y
polipéptidos que provienen de la hidrólisis de las sustancias proteicas presentes en la
biomasa de algas). Dichos compuestos orgánicos hidrófilos están presentes
30 generalmente en una cantidad pequeña.
La fase orgánica (iii) comprende preferentemente, además de ácidos grasos,
compuestos orgánicos hidrófobos diferentes de los ácidos grasos tales como, por
ejemplo, tito I y otros alcoholes hidrófobos de cadena larga, clorofila, carotenoides.

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La suspensión acuosa de biomasa de algas proviene . preferentemente del

cultivo de algas, preferentemente unicelulares (microalgas), efectuado con aguas
residuales procedentes de aguas residuales industriales. En este caso, el cultivo de
algas metaboliza las sustancias que contienen nitrógeno y/o fósforo contenidas en el
5 mismo contribuyendo a su purificación. El CO 2 contenido en los gases de combustión
industriales (refinerías, estaciones termoeléctricas, plantas de generación de
hidrógeno, etc.) puede utilizarse como el CO 2 necesario para el crecimiento de las
algas.
La suspensión acuosa de biomasa de algas se somete preferentemente a
10 espesamiento para obtener una mayor concentración de sustancia seca en dicha
biomasa de algas. Dichos espesamiento puede efectuarse por medio de diversos
procedimientos, tales como, por ejemplo:

separación por gravedad en sedimentadores utilizados habitualmente en

15 plantas de tratamiento de agua;
filtración a vacío;
tratamiento por medio de prensas de filtro de banda.

La sedimentación de cepas de algas de agua dulce tales como, por ejemplo, la

20 cepa Scenedesmus sp., puede facilitarse mediante la utilización de polielectrolitos
catiónicos (por ejemplo poliacrilamidas) utilizados en cantidades de 2 ppm - 5 ppm
(transición de la concentración de algas de desde 0,4 gil hasta 40-50 g/l en unas
cuantas horas).
Para los objetivos de la presente descripción y de las siguientes
25 reivindicaciones, la definición de los intervalos numéricos comprende siempre los
extremos, a menos que se especifique lo contrario.
Según una forma de realización preferida de la presente invención, la
suspensión acuosa de biomasa de algas presenta una concentración de sustancia
seca comprendida entre el 3% en peso y el 40% en peso, más preferentemente entre
30 el 5% en peso y el 35% en peso, con respecto al peso total de la suspensión acuosa
de biomasa de algas.
Según una forma de realización preferida de la presente invención, el
disolvente orgánico apolar puede seleccionarse de hidrocarburos alifáticos, tales

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como, por ejemplo, hexano, n-octano, hidrocarburos aromáticos tales como, por
ejemplo, isómeros de xileno; cortes de refinería que comprenden combinaciones de
dichos hidrocarburos alifáticos y/o aromáticos, presentando preferentemente dichos
cortes de refinería un punto de ebullición que oscila desde 60°C hasta 160°C; éteres
5 de petróleo; o combinaciones de los mismos. Se prefieren hexano, n-octano o
combinaciones de los mismos.
Otros disolventes, tales como, por ejemplo, éteres, cetonas, hidrocarburos
clorados o combinaciones de los mismos no se excluyen de la presente invención, con
la condición de que sean inmiscibles con agua.
10 Según una forma de realización preferida de la presente invención, la razón
entre la concentración de sustancia seca en la biomasa de algas y el volumen de
disolvente orgánico apolar está comprendida entre 1: 1 y 1:80, preferentemente entre
1:3 y 1:70.
Según una forma de realización preferida de la presente invención, el ácido
15 inorgánico puede seleccionarse de ácido sulfúrico, ácido clorhídrico, ácido fosfórico,
ácido nítrico, o combinaciones de los mismos. Se prefieren ácido sulfúrico, ácido
clorhídrico, ácido fosfórico, o sus combinaciones.
Según una forma de realización preferida de la presente invención, la razón
entre la concentración de sustancia seca en la biomasa de algas y el volumen de ácido
20 inorgánico está comprendida entre 1:0,01 y 1:5, preferentemente entre 1:0,02 y 1:3.
Según una forma de realización preferida de la presente invención, la hidrólisis
ácida y la extracción se llevan a cabo, a presión atmosférica, al punto de ebullición del
disolvente cuando dicha temperatura es inferior a 100°C, o a 100°C cuando el punto'
de ebullición del disolvente es superior a 100°C. La hidrólisis ácida y la extracción se '
25 llevan a cabo preferentemente a presión atmosférica, a 100°C.
Según una forma de realización adicional de la presente invención, la hidrólisis
ácida y la extracción se efectúan a una temperatura de 100°C, a la presión de
equilibrio del disolvente a esta temperatura.
Según una forma de realización preferida de la presente invención, la hidrólisis
30 ácida y la extracción se llevan a cabo a un valor de pH comprendido entre 0,5 y 3. La
hidrólisis ácida y la extracción se llevan a cabo preferentemente a un valor de pH de 2.
Según una forma de realización preferida de la presente invención, la hidrólisis
ácida y la extracción se llevan a cabo durante un periodo que oscila desde 1 hora

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hasta 3 horas. La hidrólisis ácida y la extracción se llevan a cabo preferentemente

durante un periodo de 2 horas.
Según una forma de realización preferida de la presente invención, el
disolvente orgánico apolar y el ácido inorgánico se añaden de manera contemporánea
5 a la biomasa de algas.
Según una forma de realización adicional de la presente invención, el
disolvente orgánico apolar se añade a la biomasa de algas antes del ácido inorgánico.
Según una forma de realización adicional de la presente invención, el
disolvente orgánico apolar se añade a la biomasa de algas tras el ácido inorgánico.
10 Al final de la hidrólisis y la extracción, se obtienen las tres fases siguientes (i)-
(iii) que se separan por gravedad. Dichas tres fases (i)-(iii) se recuperan
posteriormente y se someten a un tratamiento conocido en la técnica con el fin de
obtener los compuestos de interés.
Debe observarse que las tres fases (i)-(iii) se separan fácilmente por gravedad
15 sin la necesidad de ningún tratamiento de separación particular.
Preferentemente, la fase semisólida (i) que comprende una suspensión espesa
de la biomasa de algas, tras la eliminación del agua residual por medio de
procedimientos conocidos en la técnica, por ejemplo, a través de decantación, se
somete a pirólisis con el fin de obtener aceites pirolíticos.
20 Preferentemente, la fase acuosa (ii) que comprende compuestos inorgánicos y
compuestos orgánicos hidrófilos, se somete a digestión anaerobia por medio de
microorganismos en ausencia de oxígeno con el fin de obtener biogás (metano, en un
porcentaje del 50% al 70%, dióxido de carbono y otros subproductos de reacción).
Alternativamente, pueden mezclarse la fase (i) y la fase (ii) y posteriormente
25 someterse a digestión anaerobia por medio de microorganismos, en ausencia de
oxígeno, para obtener biogás.
Debe observarse que en la producción de biogás, es preferible no utilizar ácido
sulfúrico como disolvente orgánico apolar ya que podría interferir negativamente en la
producción del mismo biogás. Podrían surgir fenómenos de competencia, por ejemplo,
30 entre floras bacterianas metanogénicas y reductoras de azufre debido a la presencia
de concentraciones significativas de sulfato, o podrían desarrollarse cantidades
relevantes de ácido sulfúrico en el biogás producido. En el caso de la producción de
biogás, es preferible utilizar ácido clorhídrico como disolvente orgánico apolar.

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La fase orgánica (iii) que comprende ácidos grasos y otros compuestos

orgánicos hidrófobos diferentes de dichos ácidos grasos, se somete preferentemente a
una etapa de evaporación con el fin de recuperar el disolvente orgánico apolar que se
recircula al procedimiento, los ácidos grasos y los otros compuestos orgánicos
5 hidrófobos diferentes de dichos ácidos grasos. Tras la evaporación, dicha fase
orgánica (iii) se esterifica en presencia de un alcohol que presenta desde 1 hasta 4
átomos de carbono, preferentemente metanol, etanol, y un catalizador ácido o básico,
para producir glicerol y ésteres alquílicos, en particular ésteres metílicos o ésteres
etílicos (biodiésel).
10 Alternativamente, tras la evaporación, dicha fase orgánica (iii) puede someterse
a hidrogenación/desoxigenación en presencia de hidrógeno y un catalizador con el
objetivo de producir diésel verde. Los procedimientos de
hidrogenación/desoxigenación se conocen en la técnica y se describen, por ejemplo
en la solicitud de patente europea EP 1.728.844.
15 Dependiendo de la utilización específica del biodiésel o diésel verde producido
según se describió anteriormente y que puede utilizarse como tal o en una
combinación con otros combustibles para vehículos de motor, los compuestos
orgánicos hidrófobos diferentes de dichos ácidos grasos que, al contrario que dichos
ácidos grasos, no se esterifican ni hidrogenan/desoxigenan, pueden permanecer en:
20 dichos biodiésel o diésel verde, o pueden retirarse utilizando técnicas conocidas en la
materia, tales como, por ejemplo, tratamiento con materiales sólidos adsorbentes (por
ejemplo, gel de sílice, u otros materiales polares porosos) o tratamiento térmico.
Alternativamente, la fase orgánica (iii) que comprende ácidos grasos y otros
compuestos orgánicos hidrófobos diferentes de dichos ácidos grasos, puede
25 someterse directamente a esterificación o hidrogenación/desoxigenación. En este
caso, se evita la etapa de evaporación del disolvente orgánico apolar.
La presente invención se ilustra a continuación con mayor detalle por medio de
una forma ilustrativa haciendo referencia a la figura 1 notificada a continuación.
Según una forma de realización típica del procedimiento de la presente
30 invención, la suspensión acuosa de la biomasa de algas se produce a través de cultivo
de algas, preferentemente microalgas, efectuado con aguas residuales procedentes de
aguas residuales industriales. La producción de microalgas, por ejemplo, puede

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llevarse a cabo adecuadamente combinando sistemas de cultivo tales como

fotorreactores y estanques abiertos.
La suspensión acuosa de biomasa de algas así obtenida se espesa mediante
separación por gravedad.
5 El agua residual con un contenido reducido de sustancias contaminantes
nitrogenadas y/o fosfóricas puede descargarse directamente, o someterse a
tratamiento de purificación de acabado antes de descargarse, para poder cumplir con
los requisitos legales (no representado en la figura 1).
Si el agua disponible para el cultivo de algas no es suficiente, puede
10 recircularse en gran medida el agua liberada del espesamiento de la biomasa de algas
y reutilizarse en el procedimiento como aguas residuales industriales (tal como se
muestra en la figura 1).
La biomasa de algas espesada se alimenta preferentemente a un reactor
equipado con un refrigerante de reflujo.
15 A continuación, se alimentan los siguientes productos a dicho reactor:

una suspensión acuosa de biomasa de algas que presenta un contenido

variable de sustancia seca, preferentemente desde el 5% en peso hasta er
40% en peso con respecto al peso total de la suspensión acuosa de
20 biomasa de algas;
un disolvente orgánico apolar, preferentemente hexano o n-octano;
un ácido inorgánico, preferentemente ácido sulfúrico o ácido clorhídrico
hasta que se obtiene un pH de aproximadamente 2.

25 Dicho reactor, mantenido a presión atmosférica, se calienta hasta el punto d~

ebullición del disolvente cuando dicha temperatura es inferior a 100°C, o hasta 1000 e
si dicha temperatura es superior a 100°C. Dicha temperatura se mantiene constante
por medio del refrigerante del reactor que condensa el agua que se evapora.
La formación de ácidos grasos, debida a la hidrólisis ácida a la que se sometE:
30 la biomasa de algas, se monitoriza por medio de análisis mediante cromatografía de
gases del disolvente.
Cuando la hidrólisis y la extracción han concluido (verificado por medio de
análisis mediante cromatografía de gases: se facilitan detalles adicionales referentes a

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dicho análisis en los siguientes ejemplos), las tres fases (i), (ii) Y (iii) se separan por
gravedad. Dichas tres fases (i), (ii) Y (iii) se someten preferentemente al tratamiento
descrito anteriormente con el fin de obtener: aceites pirolíticos, biodiésel o diésel
verde, biogás.
5 Se proporcionan algunos ejemplos ilustrativos y no limitativos para una mejor
compresión de la presente invención y para su realización.

Ejemplo 1

10 Preparación de la biomasa de algas

En los siguientes ejemplos 2-6, se utilizó la cepa de algas Scenedesmus sp.,

de la colección interna, que normalmente crece en agua dulce. El procedimiento de
cultivo adoptado se describe a continuación en la presente memoria.
15 Se preparó el inóculo que iba a introducirse en el tanque de crecimiento
descrito a continuación en la presente memoria , tal como sigue:

se descongeló una muestra de cultivo monoalgal conservado previamente·

a -85°e en una disolución de glicerina al 10%, dejándola a temperatura
20 ambiente, se sometió luego a centrifugación para eliminar el sobrenadante
obteniendo una pasta celular;
se inoculó la pasta celular así obtenida en tres matraces de 250 mi que
.
contenían 50 mi de disolución que comprendía nutrientes obteniéndose u~
cultivo de algas;
25 dicho cultivo de algas se hizo crecer en una cámara climática iluminada ~

una temperatura constante de 30o e, en presencia de un 0,5% de e0 2 e~

aire;
tras aproximadamente una semana, el matraz alcanzó una concentración
de 0,3 gil, se utilizó este cultivo como inóculo para tres matraces de 1 litro
30 que contenían 500 mi de disolución que comprendía nutrientes y se
colocaron en la cámara climática;

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tras 2 días, el cultivo presentaba una concentración de 0,5 gil Y se utilizó

este cultivo como inóculo para un tanque de crecimiento de laboratorio que
presentaba un volumen de 35 litros.
Se hizo crecer el inóculo, preparado según se describió anteriormente, en el
5 medio de cultivo M4N, descrito en la bibliografía para el cultivo de microalgas. Las
condiciones de crecimiento fueron las siguientes:

Agua: potable;
KN0 3 : 5,0 gil;
10 KH 2P0 4: 1,25 gil;
CaCI 2: 0,01 gil;
FeS04-7H20: 0,003 gil;
MgS0 4-7H 20: 2,5 gil;
Microelementos: 1 ml/I de la siguiente disolución: 2,86 g de H3 B0 3 , 1,81 g de
15 MnCb-4H 20, 80 mg de CuS04-5H20, 220 mg de ZnS04-7H20, 210 mg de
Na2Mo04, 25 g de FeS04-7H 20, 33,5 g de EDTA y 1 gota de H2S0 4
concentrado por litro;
pH de funcionamiento: 7,8.
Tanque de inóculo: 10% en volumen del cultivo anterior en medio M4N.
20 Se iluminó el tanque desde el exterior por medio de lámparas de tungsteno de
17.500 Lux y se mantuvo a 28°C por medio de circulación de agua termostática
También se alimentó el tanque con una mezcla de aire y CO2 al 10% en aire, a unq
velocidad de flujo de 200 litros/hora, con un control del pH (punto de referencia de pH
de 7,0).
25
Medio de cultivo del tanque (M4N optimizado):

Agua: potable;
KN0 3 : 1,5 gil;
30 KH 2P04: 1,25 gil;
K2HP0 4: 0,1 gil;
CaCb: 0,01 gil;
FeS04-7H20: 0,003 gil;

14
 ES 2 364 768 B2

Se centrifugó la biomasa de algas obtenida en una centrífuga de discos del tipo

Alfa Laval obteniendo una suspensión acuosa de biomasa de algas que presentaba un
volumen de aproximadamente 2 litros (concentración de sustancia seca de 10 g/litro).
A continuación, se sometió la suspensión acuosa de biomasa de algas a
5 filtración a vacío hasta que se obtuvo una concentración de sustancia seca que
variaba desde el 5% en peso hasta el 10% en peso con respecto al peso total de la
suspensión acuosa de biomasa de algas.
Se conservaron las muestras obtenidas en una nevera antes de someterse a
hidrólisis y extracción de ácidos grasos.
10
EJEMPLO 2 (invención)

Extracción de ácidos grasos (concentración de sustancia seca igual al 10%) Y su

esterificación para la producción de ésteres metílicos (biodiésel)
15
Se añadieron 50 mi de n-octano y 0,5 mi de ácido sulfúrico concentrado al 96%
a un matraz de tres bocas de 250 mi, equipado con un refrigerante de reflujo y
agitador, que contenía 50 g de una suspensión acuosa de biomasa de algas de algas
de la cepa Scenedesmus sp. obtenida según se describe en el ejemplo 1, que
20 presentaba una concentración de sustancia seca igual al 10% en peso con respecto al
peso total de la suspensión acuosa de biomasa de algas.
Se llevó el matraz al punto de ebullición del agua (100°C) por medio de una
camisa de calefacción. Se mantuvo la mezcla de reacción, con agitación, a dicha
temperatura , durante 2 horas.
25 Durante la hidrólisis/extracción, se monitorizó la formación de ácidos grasos por
medio de análisis mediante cromatografía de gases de muestras de la mezcla de
reacción tomadas directamente del matraz de reacción en diversos momentos: los
resultados obtenidos se notifican en la tabla 2.
Con este fin, las muestras tomadas en diversos momentos se sometieron a·
30 centrifugación rápida con el fin de separar el disolvente (n-octano) que contenía los
ácidos grasos a medida que se formaron en la mezcla de reacción. Las muestras de
disolvente obtenidas de este modo se analizaron utilizando un cromatógrafo de gases
modo 6890 de Agilent, equipado con una columna DB-5HT de 30 m de largo, que

15
 ES 2 364 768 B2

presentaba un diámetro interno de 0,32 mm , y con un detector FID (detector de

ionización de llama), funcionando en las siguientes condiciones:

gas portador: helio a 15 psi;

5 detector de temperatura FID: 400°C;
temperatura del horno: 50°C (inicial) ; aumento de temperatura de 10°C/min
hasta 400°C; permanencia a 400°C durante 12 mino

Tras 2 horas, se detuvo la agitación, se llevó de nuevo la mezcla a temperatura

10 ambiente y se dejó que se separasen las tres fases por gravedad .
Se recuperó la fase orgánica, aproximadamente 50 mi , que comprendía n-
octano , ácidos grasos y compuestos orgánicos hidrófobos diferentes de dichos ácidos
grasos, tomándola directamente del matraz de reacción y se puso en una ampolla
equipada con un refrigerante de reflujo y agitador.
15 A continuación, se añadieron 20 mi de metanol y 1 mi de ácido sulfúrico
concentrado al 96% como catalizador de esterificación de los ácidos grasos. Se llevó a
cabo la reacción de esterificación a 60°C, con agitación.
Se monitorizó la formación de ésteres metílicos por medio de análisis mediante-
cromatografía de gases en diversos momentos, funcionando en las mismas
20 condiciones descritas anteriormente: los resultados obtenidos se notifican en la tabla
2.
TABLA 2
Resultados del análisis mediante cromatografía de gases
(% con respecto a la concentración de sustancia seca inicial)
Esteres metílicos totales
Tiempo de reacción Ácidos grasos totales
(ácidos grasos con
(h) extraídos
esterificación)
0,5 4,5 4,2
1,0 5,5 5,4
1,5 6,3 6,0
2,0 6,3 6,5

16
 ES 2 364 768 B2

EJEMPLO 3 (comparativo)

Extracción de ácidos grasos y lípidos (concentración de sustancia seca igual al 10%) Y

transesterificación de dichos lípidos para la producción de ésteres metílicos (biodiésel)
5
Se efectuó una prueba de producción de ésteres metílicos a partir de lípidos
como control , utilizando procedimientos conocidos en la técnica.
Para este fin, se sometieron 50 g de una suspensión acuosa de biomasa de
algas de algas de la cepa Scenedesmus sp. obtenida según se describe en el ejemplo
10 1, que presentaba una concentración de sustancia seca igual al 10% en peso con
respecto al peso total de la suspensión acuosa de biomasa de algas, a lisis mecánica
en un molino de bolas (Fritsch Pulverisette), funcionando al 50% de la velocidad
máxima, durante 20 minutos, luego se secaron mediante liofilización.
Se extrajo la fracción lipídica de 5 g de biomasa de algas tratada según se
15 describió anteriormente con 150 mi de una mezcla de cloroformo/metanol (1:2 v/v).
Tras la separación de la fase semisólida que contenía la suspensión espesa de la
biomasa de algas mediante centrifugación, se eliminó el metanol de la fase orgánica
mediante la adición de agua y posterior separación mediante segregación de la fase"
acuosa y parte del metanol contenido en la misma.
20 Se puso una alícuota de esta fase orgánica igual a 20 mi en una ampolla
equipada con un refrigerante de reflujo y agitador. Se añadió posteriormente 1 mi de
ácido sulfúrico concentrado al 96% .
Se consiguió que la ampolla alcanzara una temperatura de 60°C por medio d~
una camisa de calefacción. Se mantuvo la mezcla de reacción, con agitación, a esta
25 temperatura, durante 2 horas.
Tras 2 horas, se detuvo la agitación y se llevó de nuevo la mezcla de reacciól1
a temperatura ambiente. Se midió la cantidad de ácidos grasos formados por medio de
análisis mediante cromatografía de gases funcionando en las mismas condicione~
descritas anteriormente: los resultados se indican en la tabla 3.
30 Se introdujo una segunda alícuota de dicha fase orgánica igual a 20 mi en una
ampolla equipada con un refrigerante de reflujo y agitador. Se añadieron
posteriormente 20 mi de metanol y 1 mi de ácido sulfúrico concentrado al 96% como
catalizador de transesterificación.

17
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Se llevó la ampolla a una temperatura de 60°C por medio de una camisa de

calefacción. Se mantuvo la mezcla de reacción, con agitación, a esta temperatura
durante 2 horas.
Tras 2 horas, se detuvo la agitación y se llevó de nuevo la mezcla de reacción
5 a temperatura ambiente. Se midió la cantidad de ésteres metílicos formados por medio
de análisis mediante cromatografía de gases, funcionando en las mismas condiciones
descritas anteriormente: los resultados obtenidos se indican en la tabla 3.

TABLA 3
Resultados del análisis mediante cromatografía de gases
(% con respecto a la concentración de sustancia seca inicial)

Tiempo de reacción Acidos grasos totales Esteres metílicos totales

(h) extraídos (transesterificación lipídica)
2 6,3 6,5
10
Comparando la tabla 3 con la tabla 2, puede observarse que el procedimiento
según la presente invención, aunque mucho más sencillo, presenta rendimientos
análogos a los obtenidos con los procedimientos conocidos en la técnica.

15 EJEMPLO 4 (invención)

Extracción de ácidos grasos (concentración de sustancia seca igual al 5%)

Se añadieron 50 mi de n-octano y 0,5 mi de ácido sulfúrico concentrado al 96°1<1

20 a un matraz de tres bocas de 250 mi, equipado con un refrigerante de reflujo ':lo

agitador, que contenía 50 g de una suspensión acuosa de biomasa de algas de algas

de la cepa Scenedesmus sp. obtenida según se describe en el ejemplo 1, que
presentaba una concentración de sustancia seca igual al 5% en peso con respecto a
peso total de la suspensión acuosa de biomasa de algas.
25 Se llevó el matraz al punto de ebullición de agua (100°C) por medio de una
camisa de calefacción. Se mantuvo la mezcla de reacción, con agitación, a dicha
temperatura, durante 2 horas.

18
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Tras 2 horas, se detuvo la agitación y se llevó de nuevo la mezcla de reacción

a temperatura ambiente. Se midió la cantidad de ácidos grasos formados por medio de
análisis mediante cromatografía de gases, funcionando en las mismas condiciones
descritas anteriormente: se observó una cantidad de ácidos grasos igual al 6,3% con
5 respecto a la concentración de sustancia seca inicial.

EJEMPLO 5 (invención)

Extracción de ácidos grasos (concentración de sustancia seca igual al 5% - diferente

10 ácido inorgánico)

Se añadieron 50 mi de n-octano y 1,0 mi de ácido clorhídrico al 37% a un

matraz de tres bocas de 250 mi, equipado con un refrigerante de reflujo y agitador, que
contenía 50 g de una suspensión acuosa de biomasa de algas de algas de la cepa
15 Scenedesmus sp. obtenida según se describe en el ejemplo 1, que presentaba una
concentración de sustancia seca igual al 5% en peso con respecto al peso total de la
suspensión acuosa de biomasa de algas.
Se llevó el matraz al punto de ebullición de agua (1OO°C) por medio de una·
camisa de calefacción. Se mantuvo la mezcla de reacción, con agitación, a dicha
20 temperatura, durante 2 horas.
Tras 2 horas, se detuvo la agitación y se llevó de nuevo la mezcla de reaccióri'
a temperatura ambiente. Se midió la cantidad de ácidos grasos formados por medio de
análisis mediante cromatografía de gases, funcionando en las mismas condicionef
.
,
descritas anteriormente: se observó una cantidad de ácidos grasos igual al 6,6% cOr1,
25 respecto a la concentración de sustancia seca inicial.

EJEMPLO 6 (invención)

Extracción de ácidos grasos (concentración de sustancia seca igual al 10% - diferent~

•
30 disolvente orgánico)

Se añadieron 50 mi de hexano y 0,5 mi de ácido sulfúrico concentrado al 96% a

un matraz de tres bocas de 250 mi, equipado con un refrigerante de reflujo y agitador,

19
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que contenía 50 g de una suspensión acuosa de biomasa de algas de algas de la cepa

Scenedesmus sp. obtenida según se describe en el ejemplo 1, que presentaba una
concentración de sustancia seca igual al 10% en peso con respecto al peso total de la
suspensión acuosa de biomasa de algas.
5 Se llevó el matraz al punto de ebullición próximo al del hexano (69°C) por
medio de una camisa de calefacción. Se mantuvo la mezcla de reacción, con
agitación, a dicha temperatura, durante 2 horas.
Durante la hidrólisis/extracción, se monitorizó la formación de ácidos grasos por
medio de análisis mediante cromatografía de gases de muestras de la mezcla de
10 reacción tomadas directamente del matraz de reacción en diversos momentos,
funcionando en las mismas condiciones descritas anteriormente: los resultados
obtenidos se indican en la tabla 4.

TABLA 4
Resultados del análisis mediante cromatografía de gases
(% con respecto a la concentración de sustancia seca inicial)

Tiempo de reacción (h) Ácidos grasos totales extraídos

1,0 3,3
2,0 4,2
3,0 5,0
4,0 5,8
15

EJEMPLO 7 (invención)

Cuantificación y caracterización de los compuestos presentes en las tres fases (i)-(iii)

20
Se añadieron 300 mi de n-octano y 13 mi de ácido clorhídrico al 37% a u'l
matraz de tres bocas de 2 litros, equipado con un refrigerante de reflujo y agitador, qu~
contenía 630 g de una suspensión acuosa de biomasa de algas de algas de la cep~

Scenedesmus sp. obtenida según se describe en el ejemplo 1, que presentaba unC\

25 concentración de sustancia seca igual al 5% en peso con respecto al peso total de la
suspensión acuosa de biomasa de algas.

20
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Se llevó el matraz al punto de ebullición de agua (100°C) por medio de una

camisa de calefacción. Se mantuvo la mezcla de reacción, con agitación, a dicha
temperatura, durante 2 horas.
Tras 2 horas, se detuvo la agitación y se llevó de nuevo la mezcla de reacción
5 a temperatura ambiente. Se midió la cantidad de ácidos grasos formados por medio de
análisis mediante cromatografía de gases, funcionando en las mismas condiciones
descritas anteriormente: se observó una cantidad de ácidos grasos igual al 6,2% con
respecto a la concentración de sustancia seca inicial, y una cantidad de total lípidos
igual al 7,2% con respecto a la concentración de sustancia seca inicial.
10 Las fases líquidas: la fase acuosa (ii) y la fase orgánica (iii) se recuperaron por
medio de desbordamiento.
La fase sólida (i) que quedó en el matraz se lavó dos veces con
aproximadamente 160 mi de agua cada vez. Se eliminó el agua de lavado decantando
la biomasa de algas residual y mediante posterior desbordamiento.
15 A continuación, se recuperaron los siguientes materiales:

fase semisólida (i): 90,2 g de suspensión espesa de la biomasa de algas con

una concentración de sustancia seca del 12,5% en peso con respecto al peso
total de la suspensión acuosa de la biomasa de algas;
20 fase acuosa (ii): 974 mi de fase acuosa que también comprendía la fase de
lavado de la suspensión espesa de la biomasa de algas;
fase orgánica (iii): 300 mi de fase orgánica que presentaba un contenido de
,
ácidos grasos igual a 6,5 g/litro (6,2% en peso con respecto a la concentraciórj
de sustancia seca inicial).
25
Se sometieron los materiales anteriores a los análisis indicados en la tabla 5:,
los resultados obtenidos se indican en la tabla 6.

21
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TABLA 5
Procedimiento de análisis
Greenberg, Clescerl, Eaton, Standard Methods for
the Examination of Water and Wastewater
CGD ("Procedimientos estándar para el examen de agua
yaguas residuales") n.o 5220, 18a Ed., Hanover
Maryland, (1992)
Hidratos de Trevelyan y Harrison, Arch. Biochem. Biophys.
carbono 39(2): págs. 419-139 (1952)
Bradford, Bio-rad Protein Assay ("Ensayo de
Proteínas proteínas Bio-rad")
Biochem 72, pág. 248 (1976)

Se midieron la cantidad de lípidos totales y la cantidad de ácidos grasos por

medio de análisis mediante cromatografía de gases funcionando en las mismas
5 condiciones descritas anteriormente: los resultados se indican en la tabla 6.

TABLA 6
Biomasa de algas % en peso con respecto a la
suspensión acuosa de la biomasa de
algas inicial
g/I(*) g (**) Fase Fase Fase
semi- acuosa (ii) orgánica
sólida (i) (iii)
CGD 75,0 47,2 53,3 36,2 10,4
Hidratos de 5,0 3,1 80,0 12,0 8,0
carbono
Proteínas 32,0 20,3 40,0 58,5 1,5
Lípidos totales 11,0 6,9 - - 32,8
Acidos grasos 0,5 0,3 - - 651

(*): gil en el inóculo inicial;

10 (**): g en la suspensión acuosa de biomasa de algas inicial

22
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REIVINDICACIONES

1. Procedimiento para la extracción de ácidos grasos a partir de biomasa de

5 algas, caracterizado porque comprende:

producir una suspensión acuosa de biomasa de algas;

someter la suspensión acuosa de biomasa de algas a hidrólisis ácida y
extracción mediante la adición de por lo menos un disolvente orgánico
10 apolar y por lo menos un ácido inorgánico a dicha suspensión acuosa de
biomasa de algas, llevándose a cabo dicha hidrólisis ácida y dicha
extracción durante un periodo de tiempo comprendido entre 1 hora y 3
horas, de tal modo que se obtengan las tres fases siguientes:
(i) una fase semisólida que comprende una suspensión espesa de la
15 biomasa de algas;
(ii) una fase acuosa que comprende compuestos inorgánicos y
compuestos orgánicos hidrófilos;
(iii) una fase orgánica que comprende ácidos grasos y compuestos
orgánicos hidrófobos distintos a dichos ácidos grasos.
20
2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque la
suspensión acuosa de biomasa de algas proviene del cultivo de algas unicelulares
(microalgas), efectuado con aguas residuales que proceden de aguas residuales
industriales.
25
3. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque la
suspensión acuosa de biomasa de algas se somete a espesamiento con el fin de
obtener una mayor concentración de sustancia seca en dicha biomasa de algas.

30 4. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores,

caracterizado porque la suspensión acuosa de biomasa de algas presenta una
concentración de sustancia seca comprendida entre 3% en peso y 40% en peso con
respecto al peso total de la suspensión acuosa de biomasa de algas.

23
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5. Procedimiento según la reivindicación 4, caracterizado porque la

suspensión acuosa de biomasa de algas presenta una concentración de sustancia
seca comprendida entre el 5% en peso y el 35% en peso con respecto al peso total de
5 la suspensión acuosa de biomasa de algas.

6. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores,

caracterizado porque el disolvente orgánico apolar se selecciona de entre
hidrocarburos alifáticos tales como hexano, n-octano; hidrocarburos aromáticos, tales
10 como isómeros de xilenos; cortes de refinería que comprenden mezclas de dichos
hidrocarburos alifáticos y/o aromáticos; éteres de petróleo; o mezclas de los mismos.

7. Procedimiento según la reivindicación 6, caracterizado porque el disolvente

orgánico apolar se selecciona de entre hexano, n-octano, o mezclas de los mismos.
15
8. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores,
caracterizado porque la razón entre la concentración de sustancia seca en la biomasa
de algas y el volumen de disolvente orgánico apolar está comprendida entre 1:1 y
1:80.
20
9. Procedimiento según la reivindicación 8, caracterizado porque la razón
entre la concentración de sustancia seca en la biomasa de algas y el volumen de
disolvente orgánico apolar está comprendida entre 1:3 y 1:70.

25 10. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores,

caracterizado porque el ácido inorgánico se selecciona de entre ácido sulfúrico, ácido
clorhídrico, ácido fosfórico, ácido nítrico, o mezclas de los mismos.

11. Procedimiento según la reivindicación 10, caracterizado porque el ácido

30 inorgánico se selecciona de entre ácido sulfúrico, ácido clorhídrico, ácido fosfórico, o
mezclas de los mismos.

24
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12. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores,

caracterizado porque la razón entre la concentración de sustancia seca en la biomasa
de algas y el volumen de ácido inorgánico está comprendida entre 1:0,01 y 1:5.

5 13. Procedimiento según la reivindicación 12, caracterizado porque la razón

entre la concentración de sustancia seca en la biomasa de algas y el volumen de ácido
inorgánico está comprendida entre 1:0,02 y 1:3.

14. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores,

10 caracterizado porque la hidrólisis ácida y la extracción se llevan a cabo, a presión
atmosférica, al punto de ebullición del disolvente, si dicha temperatura es inferior a
100ºC.

15. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13,

15 caracterizado porque la hidrólisis ácida y la extracción se llevan a cabo, a presión
atmosférica, a 100ºC, si el punto de ebullición del disolvente es superior a 100ºC.

16. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13,

caracterizado porque la hidrólisis ácida y la extracción se llevan a cabo, a presión
20 atmosférica, a 1OOºC.

17. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13,

caracterizado porque la hidrólisis ácida y la extracción se llevan a cabo a una
temperatura de 100ºC, a la presión de equilibrio del disolvente a dicha temperatura.
25
18. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores,
caracterizado porque la hidrólisis ácida y la extracción se llevan a cabo a un pH
comprendido entre 0,5 y 3.

30 19. Procedimiento según la reivindicación 18, caracterizado porque la hidrólisis

ácida y la extracción se llevan a cabo a pH 2.

25
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20. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque la hidrólisis

ácida y la extracción se llevan a cabo durante 2 horas.

21. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores,

5 caracterizado porque el disolvente orgánico apolar y el ácido inorgánico se añaden de
manera contemporánea a la biomasa de algas.

22. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20,

caracterizado porque el disolvente orgánico apolar se añade a la biomasa de algas
10 antes del ácido inorgánico.

23. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20,

caracterizado porque el disolvente orgánico apolar se añade a la biomasa de algas
tras el ácido inorgánico.
15
24. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores,
caracterizado porque la fase semisólida (i) que comprende una suspensión espesa de
la biomasa de algas, tras eliminar el agua residual, se somete a pirólisis con el fin de
obtener aceites pirolíticos.
20
25. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores,
caracterizado porque la fase acuosa (ii) que comprende compuestos inorgánicos y
compuestos orgánicos hidrófilos se somete a digestión anaerobia por medio de
microorganismos en ausencia de oxígeno con el fin de obtener biogás.
25
26. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23,
caracterizado porque la fase (i) y la fase (ii) se mezclan y posteriormente se someten a
digestión anaerobia por medio de microorganismos en ausencia de oxígeno con el fin
de obtener biogás.
30
27. Procedimiento según la reivindicación 25 ó 26, caracterizado porque el
disolvente orgánico apolar es ácido clorhídrico.

26
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28. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores,

caracterizado porque la fase orgánica (iii) que comprende ácidos grasos y otros
compuestos orgánicos hidrófobos distintos a dichos ácidos grasos se somete a
evaporación con el fin de recuperar el disolvente orgánico apolar que se recircula al
5 procedimiento.

29. Procedimiento según la reivindicación 28, caracterizado porque dicha fase

orgánica (iii) se somete a esterificación en presencia de un alcohol que presenta entre
1 y 4 átomos de carbono y un catalizador ácido o básico, con el fin de producir glicerol
10 Y ésteres alquílicos (biodiésel).

30. Procedimiento según la reivindicación 28, caracterizado porque dicha fase

orgánica (iii) se somete a hidrogenación/desoxigenación en presencia de hidrógeno y
un catalizador con el fin de producir diésel verde.
15
31. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27,
caracterizado porque la fase orgánica (iii) que comprende ácidos grasos y otros
compuestos orgánicos hidrófobos distintos a dichos ácidos grasos se somete
directamente a esterificación, o hidrogenación/desoxigenación.
20

27
 OFICINA ESPAÑOLA
DE PATENTES Y MARCAS
21 N.º solicitud: 201150001
ESPAÑA
22 Fecha de presentación de la solicitud: 19.06.2009

32 Fecha de prioridad: 30-06-2008

INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA

51 Int. Cl. : Ver Hoja Adicional

DOCUMENTOS RELEVANTES

Categoría Documentos citados Reivindicaciones

afectadas

X PYLE D et al. Production of Omega-3 Polyunsaturated Fatty Acid from Biodiesel-Waste Glycerol 1-32
by MIcroalgal Fermentation. Annual international meeting of the American Society of Agricultural
& Biological Engineers 2007: Junio 17 - 20, 2007, Minneapolis, Minnesota, USA, 20070617;
20070617 - 20070620 American Society of Agricultural and Biological Engineers, Minneapolis,
USA. No. 77028, Páginas: 6436-6445. Isbn: ISBN 978-1-60423-961-4; ISBN 1-60423-961-1.

X BELARBI E-H et al. A process for high yield and scaleable recovery of high purity 1-32
eicosapentaenoic acid esters from microalgae and fish oil. Process Biochemistry, 20000501
Elsevier Science Publishers Ltd, GB. Vol. 35, No. 9, Páginas: 951-969. Isbn: ISSN 0032-9592.

X CRANWELL P A. Decomposition of aquatic biota and sediment formation: bound lipids in algal 1-32
detritus and lake sediments. FRESHWATER BIOLOGY, 19790101 BLACKWELL SCIENTIFIC
PUBLICATIONS, OXFORD, GB. Vol. 9, No. 4, Páginas: 305 - 313. Isbn: ISSN 0046-5070.

X KIM M K et al. Enhanced production of Scenedesmus spp. (green microalgae) using a new 1-32
medium containing fermented swine wastewater. BIORESOURCE TECHNOLOGY, 20070801
ELSEVIER BV, GB. Vol. 98, No. 11, Páginas: 2220-2228. Isbn: ISSN 0960-8524.

Categoría de los documentos citados

X: de particular relevancia O: referido a divulgación no escrita
Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación
misma categoría de la solicitud
A: refleja el estado de la técnica E: documento anterior, pero publicado después de la fecha
de presentación de la solicitud

El presente informe ha sido realizado

 para todas las reivindicaciones  para las reivindicaciones nº:

Fecha de realización del informe Examinador Página

26.08.2011 A. Maquedano Herrero 1/4
 INFORME DEL ESTADO DE LA TÉCNICA
Nº de solicitud: 201150001

CLASIFICACIÓN OBJETO DE LA SOLICITUD

C11B1/10 (2006.01)
C11C1/04 (2006.01)
C12M1/107 (2006.01)
C12M1/00 (2006.01)
C11C3/00 (2006.01)
C12P7/64 (2006.01)
Documentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación)

C11B, C11C, C12M, C12P

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INVENES, EPODOC, WPI, BIOSIS

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OPINIÓN ESCRITA
Nº de solicitud: 201150001

Fecha de Realización de la Opinión Escrita: 26.08.2011

Declaración

Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986) Reivindicaciones 1-32 SI

Reivindicaciones NO

Actividad inventiva (Art. 8.1 LP11/1986) Reivindicaciones SI

Reivindicaciones 1-32 NO

Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicación industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de
examen formal y técnico de la solicitud (Artículo 31.2 Ley 11/1986).

Base de la Opinión.-

La presente opinión se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como se publica.

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OPINIÓN ESCRITA
Nº de solicitud: 201150001

1. Documentos considerados.-

A continuación se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la técnica tomados en consideración para la
realización de esta opinión.

Documento Número Publicación o Identificación Fecha Publicación

D01 PYLE D et al. Production of Omega-3 Polyunsaturated Fatty Acid
from Biodiesel-Waste Glycerol by MIcroalgal Fermentation.
Annual international meeting of the American Society of
Agricultural & Biological Engineers 2007: Junio 17 - 20, 2007,
Minneapolis, Minnesota, USA, 20070617; 20070617 - 20070620
American Society of Agricultural and Biological Engineers,
Minneapolis, USA. No. 77028, Páginas: 6436 - 6445.
Isbn: ISBN 978-1-60423-961-4; ISBN 1-60423-961-1.
D02 BELARBI E-H et al. A process for high yield and scaleable
recovery of high purity eicosapentaenoic acid esters from
microalgae and fish oil. Process Biochemistry, 20000501 Elsevier
Science Publishers Ltd, GB. Vol. 35, No. 9, Páginas: 951-969.
Isbn: ISSN 0032-9592.
D03 CRANWELL P A. Decomposition of aquatic biota and sediment
formation: bound lipids in algal detritus and lake sediments.
FRESHWATER BIOLOGY, 19790101 BLACKWELL SCIENTIFIC
PUBLICATIONS, OXFORD, GB. Vol. 9, No. 4, Páginas: 305-313.
Isbn: ISSN 0046-5070.
D04 KIM M K et al. Enhanced production of Scenedesmus spp. (green
microalgae) using a new medium containing fermented swine
wastewater. BIORESOURCE TECHNOLOGY, 20070801
ELSEVIER BV, GB. Vol. 98, No. 11, Páginas: 2220 - 2228.
Isbn: ISSN 0960-8524.

2. Declaración motivada según los artículos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de
marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaración

La solicitud reivindica un procedimiento para la extracción de ácidos grasos a partir de biomasa de algas que han crecido en
aguas residuales procedentes de la industria. El procedimiento comprende la producción de una suspensión acuosa de
biomasa de algas que se somete posteriormente a una hidrólisis ácida y a extracción mediante la adición de, por lo menos,
un disolvente orgánico. La adición de este disolvente orgánico conduce a la formación de tres fases. De ellas, la llamada
fase orgánica es la que contiene los ácidos grasos que se extraen mediante el procedimiento de la invención.
D01 se refiere a un procedimiento de extracción de ácidos grasos a partir de biomasa de algas. La suspensión acuosa se
trata con una disolución que contiene un disolvente apolar (cloroformo) y un ácido inorgánico (ácido sulfúrico), formándose
así dos fases. La existencia de una tercera fase debería considerarse implícita, ya que no se reporta la destrucción de la
fase sólida correspondiente a la biomasa.
D02 describe un procedimiento para extraer ácidos grasos a partir de biomasa de algas. Se trata la pasta de algas
(biomasa) con una disolución de un ácido (cloruro acético) en metanol, seguido de la adición de un disolvente apolar
(hexano) para extraer los ácidos grasos. D02 revela la formación de fases, aunque no entra en detalle.
D03 y D04 describen procedimientos que incluyen hidrólisis y extracción con disolventes apolares de ácidos grasos a partir
de algas.
Así, parece que todas las etapas utilizadas en el procedimiento de la reivindicación 1 pertenecerían al estado de la técnica
ya conocido por el que un experto en la materia extraería ácidos grasos a partir de algas. Dado que no se ha demostrado
efecto inesperado alguno en las etapas de la reivindicación 1, se considera que ésta no cumple el requisito de actividad
inventiva en el sentido del artículo 8.1 de la Ley 11/1986. Lo mismo ocurre para las otras reivindicaciones (2-32) que no
presentan característica técnica tal que en combinación con las de la reivindicación 1 pudiera satisfacer dicho requisito.
Se considera que la solicitud sí que cumple el requisito de novedad en el sentido del artículo 6.1 de la Ley 11/1986.

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