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    Cinética Enzimática

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    Resolución de un ejercicio de una cinética de Michaelis-Menten para la clase de ingeniería enzimática.

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    Resolución de un ejercicio de una cinética de Michaelis-Menten para la clase de ingeniería enzimática.

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    Cinética enzimática

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    Instituto Politécnico Nacional

    Unidad Profesional Interdisciplinaria de


    Biotecnología
    Ingeniería enzimática

    Tarea – Cinética enzimática

    Profesor:
    Raúl Ricardo Díaz Contreras

    Grupo:4BV1

    Fecha de entrega: 15/02/2019


    En experimentos de laboratorio se utilizaron dos decarboxilasas (A y B) obtenidas de diferentes
    microorganismos (ver tabla). Decida cual enzima demuestra un mayor coeficiente de especificad, (V max/Km),
    recuerde que entre mayor sea el valor del coeficiente de especificad más específica es la enzima.

    Enzima A Enzima B
    [S] (mM) Velocidad [S] (mM) Velocidad
    (µM/min) (µM/min)
    0.0002 0.3373 0.005 0.3962
    0.0002 0.3364 0.005 0.3857
    0.0005 0.6945 0.01 0.6163
    0.0005 0.6957 0.01 0.6413
    0.001 1.0764 0.05 1.5606
    0.001 1.1407 0.05 1.5689
    0.005 1.9636 0.1 1.9862
    0.005 1.7706 0.1 1.7909
    0.01 2.0641 0.25 2.2011
    0.01 2.0751 0.25 2.2047

    Graficamos Velocidad contra concentración de sustrato para comprobar de cual cinética se trata:

    V vs [S] - Enzima A
    2.5
    [Velocidad (µM/min)

    1.5

    0.5

    0
    0 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012
    [S] (mM)

    V vs [S] - Enzima B
    2.5

    2
    Velocidad (µM/min

    1.5

    0.5

    0
    0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3
    [S] (mM)
    Observamos que el modelo que se empleara es la cinética de Michaelis-Menten.
    Obtenemos los inversos de la velocidad y de la concentración de sustrato para cada enzima:

    Enzima A Enzima B
    1/[S] 1/V 1/[S] 1/V
    5000 2.96471983 200 2.52397779
    5000 2.97265161 200 2.59268862
    2000 1.43988481 100 1.6225864
    2000 1.43740118 100 1.55933261
    1000 0.92902267 20 0.64077919
    1000 0.87665469 20 0.63738925
    200 0.50926869 10 0.50347397
    200 0.5647803 10 0.55837847
    100 0.48447265 4 0.4543183
    100 0.48190449 4 0.45357645

    Graficamos y obtenemos su ecuación:

    1/V vs 1/[S] - Enzima A


    3.5
    3
    2.5
    2
    1/V

    1.5 y = 0.0005x + 0.4223


    R² = 0.9994
    1
    0.5
    0
    0 1000 2000 3000 4000 5000 6000
    1/[S]

    1/V vs 1/[S] - Enzima B


    3

    2.5

    2
    1/V

    1.5 y = 0.0108x + 0.4323


    R² = 0.9967
    1

    0.5

    0
    0 50 100 150 200 250
    1/[S]
    Con la ecuación de la recta obtenemos los valores de V máx ,Km y el coeficiente de especificidad:
    1 𝑘𝑚 1 1
    = ∗ +
    𝑉 𝑉𝑚á𝑥 [𝑆] 𝑉𝑚á𝑥

    Enzima A Enzima B
    𝟏 𝟏
    = 0.4223
    = 0.4323
    𝑽𝒎á𝒙 𝑽𝒎á𝒙

    𝑽𝒎á𝒙 = 2.36798484 µM/min 𝑽𝒎á𝒙 = 2.31320842 µM/min

    𝑲𝒎 𝑲𝒎
    = 0.0005 = 0.0108
    𝑽𝒎á𝒙 𝑽𝒎á𝒙

    𝑲𝒎 = 0.00118399 mM 𝑲𝒎 = 0.02498265 mM

    𝑽𝒎á𝒙 𝑽𝒎á𝒙
    = 2000 = 92.5925926
    𝑲𝒎 𝑲𝒎

    La enzima A es más específica.

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