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    Guia de Microbiologia de Cosmeticos

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    Título original

    Guia de microbiologia de cosmeticos

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    MICROBIOLOGÍA DE COSMETICOS

    Javier Candelo Montaño


    Jhosed Yamid Bastidas
    Diego Alejandro Alzate
    Javiercandelo1997@gmail.com
    Universidad Santiago de Cali, facultad de ciencias básicas, Laboratorio de
    Microbiología general
    Santiago de Cali 28 Mayo 2017

    El trabajo en un laboratorio de Microbiología de cosmeticos implica la exposición


    a microorganismos y algunos pueden ser potencialmente patógenos. La
    aplicación correcta de las reglas de seguridad e higiene determina la seguridad
    de las personas que se encuentren en el laboratorio

    Utilizar siempre bata de laboratorio, esto evitará que en un momento dado


    ciertas sustancias químicas entren en contacto directo con la piel y con las
    prendas de vestir.

    El uso de guantes, tapabocas y lentes de protección es opcional en la mayoría


    de los casos, pero es obligación emplearlos si se va a manipular muestras
    biológicas potencialmente peligrosas para la salud.

    Cuestionario
    Para que se hacen las diluciones
    Que características tienen los agares DRBC, Manitol, Mc Conkey, Centrimide y
    APC y porque son selectivos
    Que es un medio de cultivo y qué características tiene
    Porque el medio de cultivo Fluorocult permite resultados con fluorescencia y
    porque debe observarse con luz ultravioleta
    Cuál es el fundamento de las diluciones

    INTRODUCCIÓN
    La microbiología es la ciencia que estudia los microorganismos, seres vivos muy
    pequeños que están por debajo del poder resolutivo del ojo humano. Las bacterias
    representan más del 90% de todo el material vivo de la Tierra. Para conseguir su
    multiplicación en el laboratorio es preciso aportar determinados nutrientes y
    condiciones ambientales para cada tipo particular.
    La razón principal por la que es importante determinar los efectos en los
    cosméticos y de la acción de estos microorganismos en la afectación de la salud,
    siendo causante principal de muchas enfermedades
    Es supremamente importante conocer los procedimientos y técnicas que se
    emplean para determinar la incidencia de los microorganismos en los cosmeticos,
    por lo que el conocimiento y la aplicación práctica de métodos para la detección
    rápida de microorganismos es el objetivo del curso teniendo en cuenta que hoy en
    día, es la forma más rápida de obtener información que permitan la toma de
    decisiones
    Cuando se toman las muestras de los cosméticos a analizar hay varios factores
    que se deben tener en cuenta para evitar la contaminación o que pueden afectar
    los resultados en un recuento; tales como temperatura de incubación, método
    empleado, pero lo que asegura buenos resultados, es el cuidado que se tenga
    para obtener y preparar una buena muestra que servirá como inoculo preciso y fiel
    reflejo del número de microorganismos presentes.

    OBJETIVOS:
     Analizar el papel y significado de los microorganismos en la naturaleza y en
    los cosmeticos
     Evaluar los riesgos de la contaminación microbiológica en un cosmetico
     Aplicar los métodos más usados en microbiología para el crecimiento y
    aislamiento de microorganismos
     Realizar las pruebas bioquímicas en microbiología para la identificación de
    cepas conocidas de enterobacterias para lograr una correcta identificación
    de género y especie.
    .

    PREPARACIÓN Y DILUCIÓN DE LAS MUESTRAS DE COSMETICOS:

    MATERIALES:
     Cajas Petri
     Tubo de ensayo con tapa de rosca
     Micro pipeta con puntas estériles
     Aza estériles
     Baja lenguas estéril
     Probeta
     Autoclave
     Pinza
     Espátula estéril.
     Medio: Agar Plate Count
     1g Muestra para análisis
     9ml de agua peptonada+Twin80

    METODOLOGIA:
    En las disoluciones utilizadas para evaluar presencia ausencia: se tiene en cuenta
    la presentación del cosmético se va a usar si es sólido o líquido. A partir de esto
    las disoluciones se hacen con 1g de cosmético en 9ml de agua peptonada y twin
    80, en caso tal que el cosmético sea grasoso usar 1ml de aceite mineral y 1ml de
    miristato de isopropilo
    En materiales estériles solo se debe introducir el material en 9ml de agar Cts.
    Para hacer disoluciones de agua residual se utiliza el agar florocult en 9 ml de este
    agar añadir y 100ml de la muestra de agua

    Para validar soluciones estériles se utiliza el Caldo de cultivo Tioglicolato para


    anaerobios y Tripticasa soya para aerobios en esta prueba se utilizan dos tubos de
    ensayo para cada caso y se agrega 1 ml de muestra

    RECUENTOS MESO AEROBIOS

    OBJETIVO:
     Determinar la presencia de microorganismo meso aerobios.
     Emplear el recuento por Ufc/gr de mesoaerobios.
     Adquirir destreza para la siembra en profundidad.

    MATERIALES:
     Medio: Agar Plate Count
     Cajas Petri
     1g Muestra para análisis
     9ml de agua peptonada+Twin80
     Tubo de ensayo con tapa rosca

    El intervalo de temperaturas en el que crecen los microorganismos es muy amplio:


    de – 34º C a > 90º C. En función de esto se encuadra a los microorganismos en
    tres grupos
    Los que crecen entre 20 – 30º C, con una temperatura óptima de crecimiento está
    entre 30 – 40º C: mesófilos

    METODOLOGÍA:
    En un tubo de ensayo agregar 9ml de agua peptonada+Twin80, luego añadir 1g
    del cosmético. Una vez hecha la dilución añadir 1000 µl de esta en una caja Petri
    estéril y enseguida añadir el medio de cultivo para el análisis. Se puede agitar
    haciendo círculos con el fin de esparcir la muestra por el agar este proceso se
    denomina siembra en profundidad

    RECUENTO ESTIMADO POR TECNOLOGIA STANDARD


    Un recuento bajo de aerobios mesófilos no implica o no asegura la ausencia de
    patógenos o sus toxinas, de la misma manera un recuento elevado no significa
    presencia de flora patógena.
    Un recuento elevado puede significar:
     Excesiva contaminación de la materia prima
     Deficiente manipulación durante el proceso de elaboración
     La posibilidad de que existan patógenos, pues estos son mesófilos
     La inmediata alteración del producto
    El recuento de mesófilos nos indica las condiciones de salubridad de algunos
    cosméticos, es decir se evalúa la presencia de microorganismos presentes en el.
    El objetivo de realizar este análisis es conocer el número de microorganismos
    aerobios mesófilos en el cosmético, un método de recuento en placa y siembra en
    profundidad. Los recuentos se pueden hacer por dos métodos, uno es el
    tradicional, que es contando la cantidad de colonias por el NMP (número más
    probable) en la caja Petri que es una forma de obtener datos cuantitativos a partir
    de las disoluciones y el otro método es por placas de petrifilm que es un medio de
    cultivo listo para ser empleado, un agente gelificante soluble en agua fría, y un
    tinte indicador de color rojo que facilita el recuento de las colonias. Las Placas
    Petrifilm AC se utilizan para el recuento de la población total existente de bacterias
    aerobias en productos y superficies. (ASESORES)

    PRACTICA DE RECUENTO
    Se utiliza aquella dilución donde haya crecimiento bacteriano que contenga entre
    30 y 300 colonias.

    Cuente las colonias y el número encontrado deberá multiplicarlo por el reciproco


    de Ia dilución que utilizo para hacerlo.

    Pueden presentarse ciertas variaciones en los cultivos realizados. Lo importante


    es saber que cuando se puedan encontrar diluciones que contengan entre 30 y
    300 colonias si el recuento es preciso, se informa como Recuento Standard.
    (Bejarano)
    Normas para interpretar y reportar el recuento estándar en placa

    EXPRESION DE LOS RESULTADOS:


    El recuento bacteriano se debe expresar con 2 dígitos y el resto en potencias de
    10. Como no siempre el conteo de colonias produce valores como por ejemplo 10-
    20-50-8O-300 etc. es necesario aplicar algunas correcciones.
    Con la finalidad de convertir el número hallado en uno con 2 dígitos. Ejemplos:
    Si el recuento se realizó en la dilución 10-3 y fue de 138 colonias, el tercer dígito
    por ser mayor que 5 permite adicionar 1 unidad al 2o. o sea que el recuento seria
    190.000= 14 x 104.
    Si el recuento fue de 124, por ser el 3o dígito menor que 5 se anula y se expresa
    120.000= 12 x 104.
    PRENCIA AUSENCIA (HONGOS, ETAPHILO, COLIFORMES Y PSEUDOMONA)

    OBJETIVO
     Determinar y evaluar la presencia de microorganismos en los cosméticos
     Aprender técnicas que permiten evaluar la contaminación de los cosméticos

    MATERIALES:
    Mechero
    Cajas de Petri
    Asas de vidrio estériles

    METODOLOGÍA:

    Se realiza siembra en superficie


    Este proceso se caracteriza porque durante la incubación las colonias crecen en la
    superficie del agar.
    1. Se utilizan placas previamente preparadas que contienen el medio de cultivo
    solidificado (unos 15 mL/placa).
    2. Se deposita en la superficie del agar 1 mL de la muestra o de cada dilución.
    3. Luego de realizada la descarga de la muestra, se procede a extenderla sobre
    toda la superficie de las placas, usando un asa de Drigalski estéril.
    4. Esperar 2 ó 3 minutos a que se seque el inóculo.
    5. Se llevan las placas a incubar y se procede de la misma manera que en el caso
    anterior.
    Para hongos se utiliza el agar DRBC
    Para staphylococus agar Manitol
    Para coliformes agar Mc Conkey
    Para Pseudomonas agar Centrimide
    Para mesoarobios agar Apc
    PRUEBA PARA SOLUCIONES (COLIFORMES MEDIO FLOROCULT)

    OBJETIVOS
     Aprender a realizar pruebas que permiten identificar microorganismos en
    soluciones
     Aprender a identificar la E.Coli mediante luz ultravioleta
     Comparar las diferentes pruebas y generar un criterio que permita escoger
    en que caso debe utilizarse cada una

    MATERIALES:
    Mechero
    Encendedor
    Luz UV
    Solución estéril
    Caldo de cultivo Fluorocult

    METODOLOGÍA:
    Se utilizan 90 ml de caldo de cultivo Florocult
    Agregar 10 ml de agua (muestra)
    En 24 horas se analiza

    EXPRESION DE LOS RESULTADOS


    Un cambio de color a azul verdoso significa presencia de coliformes
    En caso de ser positivo para coliformes se observa con luz ultravioleta si es
    fluorescente significa que hay presencia de E. coli

    PRUEBAS PARA MATERIALES ESTERILES EN CTS


    OBJETIVOS
     Conocer el fundamento de las pruebas para materiales en el laboratorio
     Utilizar y conocer técnicas que permiten evaluar la esterilidad de soluciones
     Comparar las diferentes pruebas y generar un criterio que permita escoger
    en que caso debe utilizarse cada una

    MATERIALES:
    Material estéril
    Pinzas y tijeras esterilizadas
    Mechero
    Encendedor
    Caldo Tripticasa de soya

    METODOLOGÍA:
    Se toma el caldo Tripteina soya en un envase con tapa, puede ser de jugo hit, se
    flamea la boca del envase
    Se agrega el material estéril con mucha precaución para no tocar el material
    Flamear la boca del envase y tapar

    EXPRESION DE LOS RESULTADOS:


    Un cambio en la presentación del medio o turbiedad es una respuesta negativa
    Si no hay cabios la esterilidad es positiva

    PRUEBAS PARA SOLUCIONES ESTERILES

    OBJETIVOS
     Comprobar la esterilidad de soluciones
     Utilizar y conocer técnicas que permiten evaluar la esterilidad de soluciones

     Comparar las diferentes pruebas y generar un criterio que permita escoger
    en que caso debe utilizarse cada una

    MATERIALES
    4 Tubos de ensayo
    Micro pipeta con puntas estériles
    Mechero
    Encendedor
    Medio de cultivo Tioglicolato
    Medio de cultivo Tripticasa de soya

    METODOLOGÍA:
    Se toman 4 tubos de ensayo 2 con medio de cultivo tioglicolato y dos con
    tripticasa de soya
    Se toma 1 tubo con medio tioglicolato y 1 con medio tripticasa de soya
    Agregar 1 ml de muestra a cada tubo y encubar a 25 °C
    Tomar otros dos tubos uno con medio tioglicolato y otro con medio tripticasa de
    soya
    Agregar 1 ml de muestra a cada uno y encubar a 37°C

    RESULTADOS
    Se observa el tubo de ensayo se identifica como negativa la presencia de gas o se
    presenta turbio

    EXPRESION DE LOS RESULTADOS:


    En una evaluación de presencia ausencia los resultados se expresan como
    positivos o negativos
    Referencias

    (s.f.). Obtenido de
    https://www.invima.gov.co/images/pdf/intranet/dirdecosmeticos/capacitaciones_entren
    amientos/Presentaciones/Junio%202013/LIMITE%20MICROBIANO%20LMM%20-
    %20INVIMA.pdf

    aerobios, P. P. (s.f.). Obtenido de http://multimedia.3m.com/mws/media/444944O/petrifilm-


    aerobic-count-plate-interpretation-guide-spanish.pdf

    ASESORES, A. C. (s.f.). ANÁLISIS DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESÓFILOS. Recuperado el 26


    de 05 de 2017, de http://www.analizacalidad.com/docftp/fi189arm2004-4(2).pdf

    Bejarano, L. D. (s.f.). Guia de laboratorio de microbiologia II.

    INVIMA, I. n. (s.f.). Obtenido de


    https://www.invima.gov.co/images/pdf/intranet/dirdecosmeticos/capacitaciones_entren
    amientos/Presentaciones/Junio%202013/LIMITE%20MICROBIANO%20LMM%20-
    %20INVIMA.pdf

    Rugama, F. A., & Castillo, Y. (s.f.). Un enfoque práctico para la inocuidad alimentaria. Recuperado
    el 27 de 05 de 2017, de https://avdiaz.files.wordpress.com/2010/02/documento-
    microbiologia.pdf

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