INSTITUTO TECNOLÓGICO “ESCUELA INDUSTRIAL

SUPERIOR PEDRO DOMINGO MURILLO”

PRÁCTICA DE LABORATORIO N°4

ANALISIS MICROBIOLOGICAS DE SUPERFICIES VIVAS E INERTES
MATERIA: BMI-400
ESTUDIANTES:
AGUILAR QUISPE DAMARIS NICOLE 9983880
ANTONIO YUJRA JHOSTIN MAURICIO 7031140
AQUINO RAMOS EYMI GABRIELA 10903564
ENCINAS CHACON JASMIN MELANY 9924011
GERONIMO ACHA MIGUEL 5960051
ZAMBRANA JURADO KATERINE 10082355
SEMESTRE: CUARTO PARALELO: “A”
DOCENTE: ING. REYNALDO FLORES
FECHA DEL LABORATORIO: 17 DE SEPTIEMBRE DE 2024
FECHA DE ENTREGA: 24 DE SEPTIEMBRE DE 2024
LA PAZ – BOLIVIA
1.TÍTULO DE LA PRÁCTICA N°1

ANALISIS MICROBIOLOGICAS DE SUPERFICIES VIVAS E INERTES

2. OBJETIVO GENERAL
Determinar la carga microbiana presente en superficies vivas e inertes, mediante técnicas de
recolección, cultivo, incubación y analisis microscopico para identificar la posible presencia de
microorganismos patógenos o contaminantes.

3. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
•Recolectar muestras microbiológicas de una superficie viva, mediante el uso de hisopos y
técnicas de muestreo aséptico.
•Preparar los cultivos microbiológicos en medios de peptona y la solución madre, para favorecer
el crecimiento de microorganismos presentes en la muestra.
•Observar el crecimiento bacteriano (colmenas) presentes en las cajas Petri con la ayuda
de un microscopio.

4. FUNDAMENTO TEÓRICO
El análisis microbiológico de superficies vivas e inertes es un aspecto crucial en la evaluación de
la seguridad alimentaria y la salud pública. La contaminación microbiana puede tener graves
consecuencias, incluyendo brotes de enfermedades transmitidas por alimentos, que afectan a
millones de personas cada año. Por lo tanto, la identificación y cuantificación de microorganismos
en estas superficies es esencial para prevenir riesgos sanitarios. Este marco teórico se propone
explorar en profundidad los conceptos, métodos, resultados y consideraciones relevantes en el
análisis mi1. Conceptos Fundamentales

4.1 Superficies Vivas e Inertes

Superficies Vivas: Estas son las partes del cuerpo humano que pueden transferir
microorganismos a los alimentos. Las manos son el principal vector de contaminación en la
manipulación de alimentos, ya que pueden albergar bacterias patógenas debido a prácticas de
higiene inadecuadas o a la falta de desinfección.

Superficies Inertes: Incluyen utensilios, equipos y cualquier otra superficie que no esté viva
pero que entre en contacto con alimentos. Estas superficies pueden acumular microorganismos
debido a residuos alimentarios, humedad y falta de limpieza adecuada.

4.2 Microorganismos de Interés

Los microorganismos que se analizan comúnmente incluyen:
•Bacterias Mesófilas Aerobias (BMA): Indicadores generales de la carga microbiana en
una superficie.

•Coliformes Totales (CT): Su presencia indica contaminación fecal y es un indicador crítico en

la seguridad alimentaria.

•Patógenos Específicos: Como Salmonella, Escherichia coli O157:H7, Listeria

monocytogenes, y Vibrio cholerae, que son responsables de enfermedades graves.

4.3. Importancia del Análisis Microbiológico

El análisis microbiológico tiene varias implicaciones significativas:

•Prevención de Enfermedades: La identificación de patógenos en superficies puede

prevenir brotes de enfermedades transmitidas por alimentos. Según la Organización Mundial de
la Salud (OMS), cada año, aproximadamente 600 millones de personas se enferman debido a
alimentos contaminados.

•Cumplimiento Normativo: Las regulaciones sanitarias exigen el monitoreo regular de la

contaminación microbiana en entornos de manipulación de alimentos. Las normativas como el
Código Alimentario Internacional (Codex Alimentarius) establecen límites microbiológicos que
deben cumplirse para garantizar la seguridad alimentaria.
El Codex enfatiza que el análisis microbiológico de superficies es fundamental para asegurar que
los alimentos sean seguros para el consumo humano. Esto incluye la identificación y
cuantificación de microorganismos patógenos y no patógenos en superficies que pueden entrar
en contacto con alimentos, así como en las manos de los manipuladores.

•Mejora de Prácticas Higiénicas: Los resultados del análisis pueden guiar la

implementación de mejores prácticas en la limpieza y desinfección. La información obtenida
puede ser utilizada para capacitar al personal y mejorar los protocolos existentes.

4.4. Métodos de Muestreo

Los métodos de muestreo son variados y deben adaptarse a las características específicas de las
superficies analizadas:

•Hisopado: El hisopado es uno de los métodos más comunes para recoger muestras de
superficies regulares e irregulares. Se utiliza un hisopo estéril para frotar sobre la superficie a
analizar, recogiendo así microorganismos presentes.

•Esponja: La técnica con esponja es ideal para superficies más grandes, como mesas o pisos,
donde se necesita una mayor recolección de muestra. Se humedece una esponja estéril con
solución salina o un medio nutritivo y se frota sobre la superficie.
• Placas RODAC: Las placas RODAC (Replicate Organism Detection and Counting) son utilizadas
para muestrear superficies planas y permiten un conteo más fácil y preciso de colonias
bacterianas. Estas placas contienen medios selectivos que favorecen el crecimiento bacteriano.

4.5 Crecimiento microbiano

Cuando hablamos de crecimiento microbiano en realidad nos referimos al número de células, no
al tamaño de las células. Los microbios que están en la etapa de "crecimiento" aumentan en
cantidad y se agrupan en colonias (grupos de células la suficientemente grandes como para ser
observados sin el microscopio) de cientos de miles de células, o poblaciones de miles de millones
de células. Si bien el tamaño de las células individuales casi se duplica durante la vida de la célula,
este cambio no es muy significativo si se lo compara con los aumentos de tamaño observados
durante la vida de las plantas y los animales.

La dirección del estriado está indicada por las flechas. La estría de la serie 1 se forma a partir del
cultivo bacteriano original. El ansa de inoculación se esteriliza después de cada serie de estrías.
En las series 2 y 3 el ansa toma bacterias de la serie anterior, con lo que se diluye el número de
células cada vez. Hay numerosas variantes de estos patrones.
Recuento de la caja Petri
El método utilizado con más frecuencia para la medición de poblaciones bacterianas es el
recuento en placa. Una ventaja importante de esta técnica es que mide el número de células
viables. Una desventaja es que se requiere bastante tiempo, por lo general 24 horas o más, para
que se formen colonias visibles. Esto puede plantear un grave problema en algunas aplicaciones,
como por ejemplo el control de calidad de la leche, cuando no es posible mantener un lote
determinado durante tanto tiempo.
El recuento en placa se basa en la suposición de que cada bacteria crece y se divide para producir
una sola colonia. Esto no siempre es cierto porque las bacterias con frecuencia crecen unidas en
cadenas o como grumos. Por consiguiente, a menudo una colonia no se produce como resultado
de una única bacteria sino de segmentos cortos de una cadena o de un agregado bacteriano. Para
reflejar esta realidad los recuentos en placa suelen informarse como uniciudades formadoras de
colonias (UFC).

Cuando se realiza el recuento en placa es importante que crezca sólo un número limitado de
colonias en la placa. Cuando hay demasiadas colonias algunas células se encuentran apiñadas y
no pueden desarrollarse; esta situación es causa de inexactitudes en el recuento.

Cálculo
Para superficies regulares: el número de colonias obtenidas (ufc) se multiplicará por el factor de
dilución y por el volumen de solución diluyente utilizada en el muestreo (10 mL) y se dividirá entre
el área de la superficie hisopada o muestreada (100 cm2).

5. PROCEDIMIENTO
5.1 Materiales y Reactivos

MATERIALES Y EQUIPOS CANTIDAD

Cajas Petri 3
Tubos de ensayo 3
Pipeta graduada de 1ml 1
Pipeta graduada de 10 ml 1
Matraz Erlenmeyer de 500ml 1
Piseta 1
Gradilla 1
Frasco de vidrio de 250ml 1
Mechero de vidrio 1
Isopos 5
Paños de tela 2
 Marcador de vidrio 1
Tijera 1
Algodón 1

5.2 Procedimiento
1. Preparar una solución de peptona a 0.1 %
2. En un frasco de vidrio colocar 100 ml de peptona a 0.1%
3. Con los hisopos tomar muestras en superficies vivas como una mano o
barba.
4. Una vez realizada la toma de muestra volver a laboratorio, la toma de
muestra se debe tomar de la siguiente manera.
5. Con los hisopos remojados en peptona se tomara la muestra de una mano
realizando movimientos circulares, es de suma importancia que el mechero
este encendido e la toma de muestras.
6. Cada hisopo utilizado se debe llevar al frasco de vidrio, llevar la muestra a
laboratorio para el respectivo análisis
7. En laboratorio se realizara 3 tipos de análisis, Dilucion-1, Dilución -2 y
Dilución-3.
8. Para la Diluc-1 se tomara 1 ml de la muestra y 25 ml del medio de cultivo
directamente en una caja Petri, en movimientos circulares suaves disolver la
muestra, se debe tener cuidado de no formar la piel de elefante si fuerael
caso repetir el proceso.
9. Cuando la muestra alcance la homogenización tapar y voltear para su
respectivo marcado
10. Para la Diluc-2 se tomara 1 ml de la muestra madre y 9 ml de peptona a
0.1% en un tubo de ensayo de este tubo de ensayo como segunda muestra
se tomara 1 ml de la segunda muestra y 25 ml del medio de cultivo en una
caja petri disolver y homogenizar para luego tapar repitiendo el proceso de
la anterior
11. Para la Diluc-3 se tomara de la segunda muestra 1 ml y 9 ml de peptona
en un tubo de ensayo de esta disolución se debe sacar 1 ml y 25 ml del medio
de cultivo en una caja petry
12. Con todas las cajas ya marcadas se llevara a 48 horas pasado el tiempo se
hará el control de conteo
PREPARACION DE LA MUESTRA

INICIO

PREPARAR MUETRA DE
PEPTONA

TOMA DE MUESTRA CON

HISOPOS

PREPARACION DE LA DIL-1

PREPARACION DE LA DIL-2

PREPARACION DE LA DIL-3

48 HORA EN EL

CONTEO DE
MICRORGANISMOS
6. CÁLCULOS
DIL-1 DIL-2 DIL-3

Resultado = 3 Resultado = 0 Resultado = 0

7. RESULTADOS

DIL-1 DIL-2 DIL-3

T = 35 t = 48 h T= 35 t=48h T=35°C y t=48h
Ausencia de Crecimiento Ausencia de crecimiento
Crecimiento microbiano = 3 microbiano negativo microbiano

Se considera la búsqueda de patógenos tales como salmonella, Listeria monocito genes, en caso
s8gnifiquen un peligro para el proceso. Para la detección de patógenos se deberá tomar una
muestra diferente caso contrario no es necesario.
8. CONCLUSIONES
El análisis microbiológico de la muestra tomada de la piel de una persona dedicada a la limpieza
en un baño no arrojó la presencia significativa de microorganismos patógenos ni alteraciones de
la piel. Estos resultados pueden estar asociados a una adecuada higiene personal y al uso de
medidas de protección durante la actividad de limpieza, como el uso de guantes y lavado
frecuente de manos.
Aunque los resultados no mostraron contaminación relevante en esta muestra específica, es
importante continuar con las buenas prácticas de higiene y protección personal, especialmente
en entornos con alta exposición a microorganismos como los baños. Mantener estas prácticas
reduce el riesgo de infecciones y garantiza la seguridad durante las actividades de limpieza.

9. RECOMENDACIONES
•Mantener una adecuada higiene personal: Aunque los resultados no mostraron
contaminación significativa, se recomienda seguir realizando un lavado de manos exhaustivo
con agua y jabón después de cada sesión de limpieza, para prevenir la acumulación de
microorganismos.

•Uso de equipo de protección personal (EPP): Es fundamental continuar utilizando guantes

adecuados y, de ser necesario, mascarillas o ropa de protección para minimizar la exposición a
microorganismos presentes en el baño. El uso de EPP adecuado reduce el riesgo de contacto
directo con superficies contaminadas.

•Desinfección de superficies: Se sugiere reforzar las prácticas de desinfección en los baños,

asegurándose de que se utilicen productos desinfectantes de amplio espectro que eliminen
patógenos potenciales y que se apliquen correctamente, de acuerdo a las recomendaciones del
fabricante.

•Monitoreo periódico de la piel: A pesar de los resultados actuales, sería recomendable

realizar análisis microbiológicos periódicos para detectar cualquier cambio de la piel o la
presencia de patógenos que pudieran aparecer debido a la exposición continua a superficies de
alto riesgo.

•Formación en buenas prácticas de higiene: Continuar con la capacitación del personal de

limpieza en buenas prácticas de higiene, con énfasis en técnicas de lavado de manos, uso
adecuado del EPP y la correcta manipulación de productos químicos de limpieza.

10. BIBLIOGRAFÍA
Analisis de superficies vivas e inertes. (2016, 8 noviembre). Scribd.

https://es.scribd.com/document/330457167/Analisis-de-Superficies-Vivas-e-Inertes

Garcia, Y. (2024, 12 junio). Análisis de Superficies Vivas e Inertes. Scribd.

https://es.scribd.com/document/698483847/Analisis-de-superficies-vivas-e-inertes

GUÍA TÉCNICA PARA EL ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE SUPERFICIES EN CONTACTO CON

ALIMENTOS Y BEBIDAS. (2007, 7 junio). sanipes.gob.pe.

https://www.sanipes.gob.pe/normativas/8_RM_461_2007_SUPERFICIES.pdf

Introducción a la microbiología. (s. f.). Google Books.

https://books.google.com.bo/books?id=Nxb3iETuwpIC&pg=PA63&hl=es&source=gbs_selected

_pages&cad=1#v=onepage&q&f=false

muestreo de superficies vivas e inertes en un comedor industrial de ciudad obregon sonora. (s. f.).

[instituto tecnologico sonora].

https://Http://biblioteca.itson.mx/dac_new/tesis/428_Sortillon_Jazmin.pdf

superficies vivas e inertes y ambiente plaqueo ambiental. (2021, febrero). Scribd.

https://es.scribd.com/document/517468861/INFORME-N-8-PLAQUEO-AMBIENTAL-

SUPERFICIES-VIVAS-E-INERTES-GRUPO-1-2-1

Centro de Capacitación en Calidad Sanitaria S.A. de C.V. (s. f.). Calidad Sanitaria.

https://www.calidadsanitaria.com/servicios/superficies-vivas-e-inertes/