UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E
HISTOPATOLÓGICO

INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

PERÍODO ACADÉMICO ABRIL -AGOSTO 2019
ASIGNATURA TECNICAS SEMESTRE: PARALELO:
HISTOLOGICAS TERCERO B
NOMBRE DEL DOCENTE MGS. IVÁN PEÑAFIEL MÉNDEZ
FECHA 25/06/2019
NÚMERO DE PRÁCTICA 07 HORA: 10:00 a 13: 00 DURACIÓN: 3H
LUGAR DE LA PRÁCTICA LAB. E-303 CITOLOGIA E HISTOLOGIA
NOMBRE DEL ESTUDIANTE Garzon Karen
TÍTULO DE LA UNIDAD UNIDAD 3. PROCESAMIENTO DE TEJIDO
TEMA DE LA PRÁCTICA MICROTOMIA: PARTES, MANEJO, TECNICA CORTE Y
PESCA; BAÑO DE FLOTACION (BIOSEGURIDAD)
RESULTADO DE APRENDIZAJE:
Analiza los diferentes métodos dentro del procesamiento del tejido tanto manual como automatizado, para obtener
una muestra que facilite su inclusión, su corte, tinción, montaje con criterio técnico.
Reconocer el microtomo, cada una de las partes que los
OBJETIVO GENERAL constituyen para obtener cortes precisos que ayuden a un
diagnostico confiable.
 Observar el microtomo de rotación y su fundamento.
 Realizar cortes en micras de su bloque de parafina.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Observar el baño de flotación y su utilización.
 Realizar una pesca optima con la laminilla portaobjetos.

FUNDAMENTO TEÓRICO:

LA MICROTOMÍA
La Microtomía es la disciplina que se ocupa de la obtención de finos cortes seriados a partir de
tejidos incluidos en bloques de parafina para su posterior estudio a microscopía óptica y/o
electrónica, lo que la convierte en uno de los pilares básicos de las técnicas procedimentales de
Anatomía Patológica.
El microtomo (o micrótomo) es un aparato mecánico que permite la obtención de secciones de
tejido de espesor micrométrico que pueden ser empleadas posteriormente para su estudio al
microscopio. Los microtomos poseen cuchillas de metal y mecanismos para regular el grosor de
los cortes y el avance de la muestra que se coloca en él. Se utilizan para estudiar secciones de
tejidos potencialmente patológicos de los que se pretende obtener un diagnóstico.
COMPONENTES DE UN MICROTOMO
Aunque pueden variar de unos modelos a otros, los componentes fundamentalesde un microtomo
son:
Portabloques: en el que apoyamos el casete con la muestra. Avanza de formadiscontinua sobre
una cuchilla gracias a un mecanismo regulable de cremallera.Propiamente se denomina
portabloques al dispositivo donde colocamos el materialtisular sumergido en algún medio de
inclusión, generalmente parafina. Los actualesportabloques llevan un sistema de pinzas que se

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adaptan a cualquier tipo de base omolde. A su vez, el portabloques lleva un sistema de

orientación que permiteconseguir la posición en paralelo entre el bloque y la cuchilla.
Portacuchillas: consiste en un dispositivo de fijación basado en una pinza que sujetay orienta
adecuadamente la cuchilla. Esta pinza permite variar el ángulo deinclinación de la cuchilla, así
como su grado de aproximación al portabloques.
Mecanismo de avance del portabloques sobre la cuchilla: sistema mecánico oelectrónico que
proporciona cortes sucesivos de tejido a partir del bloque. Actualmente se consiguen cortes de
hasta 1
Base: sirve para sustentar el microtomo a la mesa.
Caja: también llamada carcasa, aloja el mecanismo de engranajes de precisión y elmecanismo
para seleccionar el espesor de la sección.
Manivela: está situada a la derecha del aparato; consiste en un volante con unamanilla y un
freno. En el volante hay una flecha pintada que indica la dirección enla que se debe mover la
manivela.
Freno: es un tornillo que, accionándolo hacia afuera y/o girándolo sobre sí mismoun cuarto de
vuelta, libera la manivela.
Manivela de recuperación: está situada a la izquierda del microtomo. Una vezutilizado el
microtomo es conveniente hacerle volver a la posición de inicio. Paraello se acciona la manivela
en sentido antihorario hasta que la base del brazoportabloques esté cercano a la caja de
engranajes (1)
Fije las muestras de manera adecuada
La fijación es el paso más importante al llevar a cabo las técnicas de preparación de muestras
histológicas.
No importa el cuidado con el que procese y seccione las
muestras de tejido, los detalles morfológicos esenciales
sólo se mostrarán si el tejido se fija de manera adecuada
y rápida.
 Casi siempre es más difícil seccionar las
muestras mal fijadas que aquellas que
están bien fijadas.
 Los tejidos mal fijados siempre mostrarán
menos características morfológicas,
aunque se hayan procesado de manera óptima y con cuidado.
Procese el tejido de forma apropiada
 Un bloque de parafina será difícil de seccionar, a no ser que una muestra bien fijada sea
procesada de la manera adecuada utilizando un programa apropiadoLas muestras pueden
estar poco procesadas (muestra demasiado grande, programa demasiado breve) o
demasiado procesadas (programa demasiado largo para el tamaño y la naturaleza de la
muestra). En ambos casos, puede ser difícil o imposible realizar un corte.

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 Existen varias técnicas que se pueden utilizar para obtener secciones de bloques difíciles.
 Si es difícil seccionar el bloque porque el tejido es duro, la superficie expuesta puede
empaparse en agua fría o en un agente reblandecedor, como una solución de detergente
blando, suavizante o MollifexTM.
 Para muestras calcificadas, puede aplicar un agente descalcificador, durante 10 minutos
o más, en el tejido expuesto, ello le permitirá obtener varias secciones. Enjuague bien los
bloques antes de montarlos en el porta muestras del microtomo y de volver a cortarlos,
ya que los rastros del agente de descalcificación dañarán la placa de presión del
portacuchillas.
 El sistema Leica Paraffin Tape-TransferTM está recomendado para obtener secciones de
bloques difíciles en los que la fijación, el procesamiento o la infiltración puede ser
errónea y los métodos de corte normales no se realizan con éxito.
 Cuando es imposible obtener secciones de un bloque porque la muestra ha sido
incorrectamente procesada en primera instancia, puede ser posible reprocesarlo.

Realice la inclusión de las muestras con cuidado

La inclusión es un paso importante que precisa una aproximación cuidadosa. Una inclusión poco
cuidadosa puede hacer la microtomía mucho más difícil.
 No llenar lo suficiente el molde de inclusión
puede dar lugar a una sujeción inestable en el
microtomo y originar cortes de distinto espesor
“uno grueso y después otro fino” y otros
problemas.
 Evitar llenar excesivamente los moldes de
inclusión, porque esto puede interferir con la alineación correcta de la cara del bloque
durante el corte.

 Cualquier exceso de parafina en la parte exterior del molde de inclusión debería ser
eliminado antes de sujetarlo, para asegurarse de que el bloque está sujeto con firmeza
durante el seccionamiento.
 La orientación de la muestra es muy importante.
Coloque el microtomo de manera adecuada
La posición del microtomo en el laboratorio es importante.
 Coloque el microtomo en un lugar estable, lejos de ráfagas de aire, puertas y puntos de
paso. Cualquier movimiento del aire debido a los equipos de aire acondicionado u otras
causas puede hacer que el tratamiento de la sección sea muy difícil.
 Es preferible utilizar un banco ajustable en altura y una silla ergonómica.
 Es muy importante que el personal no esté distraído al usar el microtomo por los riesgos
de lesionarse con cuchillas extremadamente afiladas. Al colocar los microtomos en un
laboratorio debería considerarse el potencial para interactuar con otros miembros del
personal.

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 Es preferible tener un suelo antideslizante en las inmediaciones de los microtomos

porque, inevitablemente, los fragmentos de parafina caerán al suelo y pueden originar
una superficie resbaladiza. Muchos laboratorios usan esterillas antideslizantes para que
el entorno sea más seguro.
Utilice las características de seguridad de forma apropiada
Debe estar familiarizado con las características de seguridad del microtomo que está utilizando
y observar algunas normas básicas durante el corte.
 Las cuchillas reutilizables y desechables del microtomo
están extremadamente afiladas y pueden causar lesiones de
carácter grave a no ser que se actúe con el cuidado
pertinente al trabajar con ellas. Los accidentes se producen
cuando un usuario está distraído o no está completamente
concentrado.
 Use pinzas o pincel en lugar de los dedos para coger las
secciones o los fragmentos de parafina de la cuchilla o de la
cara del bloque.
 Los microtomos de rotación Leica están equipados con una
protección de seguridad (protección de la cuchilla o
protección del dedo), un bloqueo del volante y un freno del
volante para garantizar que se trabaja con seguridad.
 La protección de seguridad puede estar colocada para cubrir
toda la longitud del filo.
 El bloqueo del volante inmovilizará el portamuestras en la parte superior de la carrera
de corte; se debe utilizar al cambiar los bloques
 .La protección debe estar colocada y el bloqueo del volante activado cuando un bloque
está siendo colocado o eliminado de la pinza portabloques, o cuando se está realizando
cualquier manipulación del bloque mientras la cuchilla está colocada. La protección
también debe ser utilizada cuando el microtomo se deja sin supervisión.
 El freno del volante bloqueará el microtomo en cualquier posición del mango; se utiliza
al realinear la cara del bloque o al ajustar el
avance de desbaste.
 La cuchilla debería ser extraídas del microtomo
cuando se limpia el equipo o se deja sin
supervisión. La mejor manera de hacerlo es
quitar la sujeción y utilizar el expulsor de la
cuchilla situado en la parte izquierda de la
protección para comenzar a extraerla
lateralmente.

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 Se puede utilizar unas pinzas (no con los dedos) o elevar con el imán al final del pincel
Leica y extraerlo de forma segura. Las cuchillas utilizadas deberían desecharse de manera
adecuada en un contenedor de “objetos afilados” o en la ranura de “cuchillas usadas”
situada en la base del dispensador de cuchillas.
 No deje nunca una cuchilla en el lugar de trabajo o en una caja, con el filo mirando hacia
arriba. Si por casualidad se cae una cuchilla, déjela caer, no intente cogerla en ningún
caso (éste es un reflejo natural contra el que tiene que luchar).
Ajuste el ángulo de inclinación de la cuchilla de forma óptima
El ángulo de inclinación de la cuchilla se puede ajustar y debe ser configurado para un
rendimiento óptimo
 El ángulo de incidencia previene el contacto entre la
faceta de la cuchilla y la cara del bloque.
 El ángulo de la faceta es el ángulo creado entre las dos
facetas que forman el filo. Para el uso rutinario, las
cuchillas desechables están hechas con un ángulo de la
faceta de 35° aproximadamente, pero este ángulo puede
variar en función del tipo de cuchilla y su fabricante.
 Por eso, hay que ajustar, de forma óptima, el ángulo de
inclinación en función del tipo de cuchilla.
 Siga las instrucciones del fabricante del microtomo para
el ajuste del ángulo recomendado. Para los
portacuchillas Leica se recomienda1 un ajuste de entre
1° y 5°.
Maximice la vida útil de la cuchilla
Hay algunas estrategias simples para obtener la vida máxima de cada cuchilla.
 Al limpiar la cuchilla, evite arrastrar cualquier cosa a lo largo del filo, incluso las fibras
de celulosa pueden dañarla.
 Evite tocar el borde con cualquier objeto duro, como un pincel o unas pinzas.
 Use la cuchilla sistemáticamente, trabajando desde un extremo al otro. Esto le
proporcionará la máxima vida útil a cada parte de la cuchilla.
 Utilice un lado de la cuchilla para desbastar y otro para la obtención del corte, o
alternativamente use cuchillas diferentes.
 Un microtomo de retracción prolonga la vida de la cuchilla porque retrae ligeramente la
muestra después del corte y reduce la formación de residuos en la parte posterior de la
cuchilla.
Oriente la muestra de manera adecuada
La orientación de la muestra puede afectar a la facilidad con la que se puede obtener una cinta e
influye directamente sobre la calidad de la sección.

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 En la mayoría de los laboratorios, todos los moldes de inclusión están colocados en la

pinza portaobjetos con la misma orientación (p. ej., la etiqueta hacia la izquierda para la
orientación este-oeste o la etiqueta
boca arriba para la orientación
norte-sur). Esto se hace para
facilitar el desbastado de múltiples
bloques antes de preparar las
secciones de alta calidad y de
permitir cortes más profundos o
recortes sin una pérdida excesiva
del tejido. Por eso, debe tener en
cuenta la orientación de la muestra
hacia la cuchilla en el estado de
inclusión. Este requisito a menudo
se pasa por alto.
 La ilustración de la página 12 muestra la orientación preferida para algunas muestras
típicas. Las opiniones difieren en lo que se refiere a qué orientación es la mejor para
determinados tipos de muestra, pero la orientación es importante y se debe tomar en
consideración.
 Ejemplo A. Intestino: la cuchilla pasa a través de la mucosa al final
 Ejemplo B. Cérvix: es mejor presentar un punto de tejido denso en la cuchilla más que
un borde recto.
 Ejemplo C. Piel: la cuchilla pasa a través de la epidermis al final.

 Los microtomos como el Leica RM2235 también tienen un instrumento de precisión de

la orientación con controles calibrados que facilita el hecho de encontrar una posición
cero o una variable medida en los ejes x/y. Tener esta capacidad es muy útil cuando se
recortan los bloques preparados en otros laboratorios o en otros microtomos, donde se
requiere una alineación precisa para evitar una pérdida innecesaria de tejido. Para usarlo
de manera rutinaria, al cortar varios bloques, es importante que este porta muestras esté
ajustado a la posición cero en ambos ejes, antes de empezar a cortar. Esto se consigue
fácilmente utilizando los indicadores
 (rojos), puntos de las muescas (paradas de clic) y las marcas de indicadores.

Estudie las características del diseño del microtomo y aprender a utilizarlo

Los microtomos con retracción están diseñados para que la muestra se retire de la
cuchilla en la carrera ascendente. Es importante saber si su microtomo tiene esta
prestación.
 La posición retraída es una característica de diseño que proporciona distintas ventajas
durante el corte y prolonga la vida de la cuchilla.

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 Al usar un microtomo de retracción, el alineamiento de la cara del bloque al borde de la

cuchilla debe ser efectuado con el bloque en la carrera descendente (en la posición
avanzada – no retraída).
 Si un bloque está alineado cerca del borde de la cuchilla mientras el brazo de la muestra
está en la posición retraída, en la siguiente vuelta completa del volante, el bloque
avanzará en función del valor de la posición retraída más el grosor de la sección
seleccionada. Esto provocaría que se cortara un trozo grueso que podría dañar tanto la
muestra como la cuchilla.
 Los microtomos también pueden ser manuales, semimotorizados o completamente
motorizados.
 Los equipos motorizados reducen los movimientos repetitivos que pueden contribuir a
desarrollar enfermedades músculo-esqueléticas.

Tenga cuidado al efectuar un “recorte”, un “refrentado” o un “desbastado”

En la microtomía, esta etapa requiere un excelente cuidado, ya que tejido importante
para el diagnóstico se puede perder fácilmente o la superficie del bloque puede ser
dañada.
 Antes de iniciar el recorte, asegúrese siempre
de que todos los mecanismos de sujeción están
apretados con seguridad.
 El objetivo de recortar un bloque de forma
adecuada es exponer el tejido con cautela en el
nivel en el que se pueda obtener una sección
representativa.
 El recorte normalmente se efectúa con unos
grosores de entre 10 y 30 µm.
 Al efectuar un recorte basto y rápido de tejidos
quebradizos se corre el riesgo de dañar la
superficie de la muestra. Tenga especial
precaución al utilizar el dispositivo de recorte
mecánico a 30 µm.
 Como paso final, pula la cara del bloque cortando suavemente unas pocas secciones finas.
Tenga en cuenta los factores que afectan al grosor de la sección
Configure el microtomo con el ajuste deseado, pero observe que hay varios factores que
determinan el grosor de la sección real.
 Una sección cohesiva de 4 µm puede proporcionar más información que una sección de
2 µm interrumpida severamente.

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 El grosor real del primer par de secciones de una cinta puede ser mayor de lo indicado
debido a la dilatación por calor3, 4, al cortar un bloque frío (como se ha descrito en las
secciones 1, 2 & 3 abajo).
 Otros factores como la velocidad de
rotación, el ajuste del ángulo de
incidencia y las condiciones del filo
pueden influir sobre el grosor real
alcanzado.

Asegúrese de que los bloques están fríos

El corte normalmente mejora cuando la muestra está bien
incluida en parafina dura. Por esta razón, la mayoría de los
bloques de parafina deben estar fríos cuando se cortan las
secciones. El método exacto utilizado para enfriar el bloque es
importante.
 La parafina fría proporciona un mejor soporte para los
elementos duros en una muestra, permitiendo que se
obtengan secciones más delgadas.
 Coloque los bloques sobre una placa fría o sobre una
superficie fría y húmeda durante unos minutos (como la
superficie de hielo derritiéndose).
 El agua penetra un poco en la cara del bloque, hinchando los tejidos y haciéndolos más
adecuados para cortarlos. Esto tiene particular importancia en el caso de tejidos
excesivamente deshidratados, secos o que se desmigajan.
 El hecho de colocar los bloques en el congelador puede ocasionar la ruptura de la
superficie, cuando el tejido se separa de la parafina que tiene alrededor. Esto puede hacer
que sea más complicado obtener secciones cohesivas. Las secciones de la izquierda
fueron cortadas de un bloque relativamente caliente, sin enfriar. Las secciones de la
derecha fueron cortadas del mismo bloque después de que se enfriara, sobre la superficie
de hielo derritiéndose.

Elija el portaobjetos y el adhesivo correctamente

La elección del portaobjetos y del adhesivo depende de los métodos de tinción que se aplicarán
inmediatamente después.
 Los portaobjetos siempre deben estar limpios, sin grasa ni polvo, y deben guardarse y
manipularse correctamente.
 Si la tinción se realiza para incluir la recuperación antigénica (IHC), el pretratamiento
enzimático (ISH) o los prolongados pasos de incubación, se deben utilizar portaobjetos
cargados o un adhesivo como el amino-alquil-silano (AAS). Algunos tintes especiales,
particularmente aquellos que emplean reactivos alcalinos, también pueden hacer que las
secciones se eleven despegándose.

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 Los portaobjetos siempre deben estar etiquetados de manera adecuada y con precisión,
de forma que cumplan las regulaciones locales.

Deje flotar las secciones con cuidado

La flotación debería expandir la sección a sus dimensiones originales y garantizar que es
completamente plana.
 Supervise la temperatura con cuidado. La temperatura deberá oscilar entre 5-9 ˚C por
debajo del punto de fusión de la parafina.
 Asegúrese de que el agua está limpia y de que no tenga burbujas ni residuos de la sección
(para evitar una contaminación entre sí).
 Coloque las secciones con el lado liso (brillante) hacia abajo.
 Coloque las secciones en la superficie del agua con un movimiento de barrido suave.
 Las secciones se pueden dañar con mucha facilidad al quitar las arrugas o burbujas con
un cepillo o pinzas.
 Examine cada sección mientras flota en la superficie del agua, ya que las imperfecciones
se pueden ver fácilmente.
 Deje la muestra seccionada en
la superficie del agua el
tiempo suficiente para que se
alise. Una expansión excesiva
puede estropear la morfología
en secciones sensibles.
 Para propiciar un drenaje
eficiente y para prevenir que
la sección se caiga del portaobjetos, extraiga los portaobjetos del agua en posición
vertical.
 Antes de colocar los portaobjetos en un horno o secador de portaobjetos, escúrralo en
posición vertical brevemente para quitar el exceso de agua.
 Elimine la espuma de la superficie del agua con un tejido sin pelusas entre los bloques,
para evitar cualquier posibilidad de una contaminación entre sí.
 Para evitar cualquier posibilidad de mezcla, haga flotar las secciones de un bloque
simultáneamente.

Seque los portaobjetos de manera adecuada

Un secado adecuado garantiza que las secciones estén completamente deshidratadas, libres de
daños por calor, planas y que sea improbable que se despeguen durante la tinción.

 Drene el agua excedente de debajo de la sección antes de secarla. Esto es vital si los
portaobjetos están secos y planos sobre una placa caliente5
 Los portaobjetos pueden ser almacenados en estantes en posición vertical y después
secados en un horno.

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 Generalmente, las temperaturas de secado no deberían superar los 65 ˚C.

 Un calor excesivo puede ocasionar gotas de agua debajo de una sección que se va a hervir
y esto provocaría daños.
 Seque las secciones durante un tiempo de entre 10 y 30 minutos.
 Algunas muestras delicadas obtendrán los mejores resultados al secarlas a 37 ˚C durante
más tiempo (varias horas hasta por la noche).
Realice una limpieza y un mantenimiento profundo del microtomo
Es importante eliminar la parafina y los residuos de tejido acumulados después de su uso. Es
importante efectuar un mantenimiento preventivo de forma regular.
 Limpie el equipo diariamente.
 Antes de limpiarlo, quite siempre la cuchilla.
 El portacuchillas se puede retirar sencillamente para facilitar el acceso para limpiarlo.
 Los desperdicios de la sección se quitan mejor con un pincel seco.
 No limpie las superficies exteriores con alcohol o xileno, ya que no son resistentes a estos
disolventes y se debe evitar una exposición al xileno. Se recomiendan una solución para
eliminar la parafina, detergentes comerciales suaves o jabón y agua.
 Durante la limpieza, no debe penetrar ningún fluido en el interior del instrumento.
 Como mínimo una vez al año, el instrumento debe pasar una inspección realizada por un
técnico de servicio cualificado.
 Siga las instrucciones de lubricación facilitadas en el manual de instrucciones y utilice
los lubricantes recomendados. (2)
MATERIALES Y MÉTODOS
Equipos Materiales Reactivos
 Microtomo  Set de pinzas
 Baño de flotación  Cuchillas de microtomo de
 Estufa histológica bajo perfil
 Agujas de disección
 Jeringa de 5cc
 Lamina de portaobjetos

PROCEDIMIENTO / TÉCNICA:

1.Prendemos el
microtomo y baño
de flotación
colocando agua y a
la temperatura
adecuada

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2. Colocamos el bloque de la
parafina ya incluida

3. Limpiamos la zona y
colocamos la cuchilla
primero de desbaste.

4.Desbastamos con palanca arriba

abajo y moviendo poco a poco la
palanca de avance

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5. Al tener ya el tejido a plena vista,

y si existe algún tipo de residuo
limpiarlo con la brocha hacia un
lado sin tocar a cuchilla.

6. Al terminar de limpiar,
colocamos la cuchilla para el
corte definitivo

7. Realizamos el corte, la palanca

una vuelta completa y la de
avance ya no la movemos

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8. Realizamos 3 vueltas completas y con

una pinza lo recogemos de la punta y con
la aguja lo cortamos el final.

9. Y lo colocamos en el
baño de flotación lo mas
lejos de nosotros.

10. Lo pescamos con un

portaobjetos y lo cortamos
el final con una aguja.

Y esperamos que se seque

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RESULTADO (Gráficos, cálculos, etc.)

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CUESTIONARIO
1. Cite los diferentes tipos de microtomos y sus características

TIPOS DE MICROTOMOS
1. Micrótomo de Oscilación:
Posee un sistema de avance de tornillo y las secciones se
obtienen por un sistema oscilatorio de planaza que
realiza l porta bloque sobre la cuchilla al vascular sobre
ella.
Ventajas: simplicidad y bajo coste
Desventajas: no permite obtener secciones seriadas.
2. Micrótomo de Rotación:
Ha sido el más empleado en anatomía patológica. El
porta bloque colocado en posición vertical se mueve de
arriba abajo. Delante del filo de la cuchilla El porta
bloques avanza de manera automática y constante, en
cada vuelta del mango.
Ventajas:
 Al tener más peso, tiene más precisión, permite
obtener secciones seriadas muy finas.
 El mecanismo de avance es más exacto.
Desventajas:
 El elevado precio debido a la complejidad del mecanismo de avance, que además
dificulta y encarece las reparaciones.
 La imposibilidad de cortar con él tejidos incluidos en celoidina, en gelatina y en propilén
glicol.
3. Micrótomo de Deslizamiento:
Existen principalmente dos tipos según se movilice el porta
bloques, sobre la cuchilla permaneciendo esta fija, o
viceversa, en ambos casos.
El movimiento que produce el corte es el avance y retroceso
de la porción móvil sobre unas guías metálicas.
Ventajas:
 Por su diseño ocasiona pocas averías.
 Permite regular de forma exacta la presión de la
cuchilla sobre el tejido.
 Debido al tamaño de la cuchilla permite seccionar bloques titulares de gran tamaño.
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 Por la disposición de esta cuchilla permite cortar bloques incluidos en celoidina.

Inconvenientes:
 No permite realizar cortes seriados, con lo cual se enlentece el proceso.
 La exposición de la cuchilla puede provocar accidentes
 Es casi imposible obtener secciones de un espesor inferior a 8 micras.
4. Micrótomo de Congelación:
Se utiliza para efectuar secciones de tejido congelado y por
tanto no deshidratado. La congelación se consigue haciendo
circular CO2 por el interior del porta bloques procedente de
una bombona y de esta forma el gas cuando se expande
provoca el enfriamiento del tejido. Una vez congelada las
secciones de trabajan con una cuchilla que se encuentra sobre
un eje fijo de manera que el avance lo realiza el porta bloques
por un mecanismo directo del tornillo.
Inconvenientes:
 Necesita CO2 y los cortes generalmente son mayores
de 10 micras y se dificulta el estiramiento.
 El micrótomo de congelación ha sido desplazado por el criostato, solo se utiliza para el
sistema nervioso, para estudios arquitecturales e histoquímicas.
5. Criostato o criotomo:
Colocado en un mueble frigorífico con una tapadera en la parte superior y tiene una manivela
que se mueve desde fuera consta de un micrótomo de tipo Minot. Semejante al convencional de
parafina que está incluido en una cámara de congelación permite obtener cortes de material sin
fijar a -20ºC o incluso a -60.
La manivela que controla la realización del corte está
fuera mientras que la cuchilla y el mecanismo de avance
está dentro de la cámara fría. La obtención de secciones
seriadas es posible gracias a la existencia de un sistema
antienrrollamiento que obliga al corte a deslizarse sobre la
superficie de la cuchilla, en los más modernos es posible
optar por el corte manual o motorizado, así como enfriar
rápidamente la muestra, a menos 60ºC por medio de
isopentano o nitrógeno líquido.
Ventajas:
 Con el se obtienen cortes más delgados que con el micrótomo de congelación de 4 micras
o incluso 2 que se utiliza no solo para entrar en estudios histoenzimáticos o
inmunohistoquímica o en grasas. Se realiza primero 1 devastado de 10-20 micras se
corta generalmente a 5. En éste caso la pieza saldrá al revés que con el micrótomo de
rotación, o de tipo Minot.

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6. Ultra micrótomo:
Prácticamente es un derivado del de tipo Minot pero con mejorar técnicas que permiten efectuar
secciones de manómetros de espesor incluso en plásticos. Se obtiene en microscopia electrónica.
Tiene un sistema de iluminación múltiple con una luz
incidente sobre el bloque posterior
Tiene un alcance técnico por dilatación de una varilla,
metálica que se controla por n microordenador que
permite el ajuste digital en pasos de un manómetro.
Tiene una platina, porta cuchillas regulable apta para
cuchillas de vidrio o diamante, El sistema óptico tiene
un microscopio o una lupa binocular incorporado
mediante un motor se regula el brazo de avance tiene
una unidad de control independiente con selectores
para avance macro y micrométrico regulable en amplitud y velocidad. El porta bloques es una
pinza redondeada como la de los taladros (como la de las brocas). (3)
2. Caracteristicas de las diferentes cuchillas de microtomo

Tipo de cuchillas
Las cuchillas que utilizan los micrótomos pueden ser de tres tipos de materiales, los cuales
dependen de la necesidad que el laboratorio necesite cubrir y de la finura del corte que requieran
las secciones.

Cuchillas de acero

Las cuchillas de acero para micrótomos son especiales para cortar secciones de tejidos blandos
de animales y/o vegetales.

Las cuchillas de acero pueden utilizarse en histología,

corcho, madera y poliestireno expandido para
microscopía de luz.

Cuchillas de vidrio

Las cuchillas de vidrio para micrótomos son ideales para

extraer secciones muy delgadas para microscopía de luz
y electrónica.

Cuchillas de diamante

Las cuchillas de diamante para micrótomos generalmente se utilizan en las industrias, pues éstas
se utilizan para cortes finos de materiales duros como huesos, dientes y materia vegetal como,
maderas duras, pues además son ideales para microscopía de luz como y electrónica. (4)

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3. Investigar cobre problemas en la técnica de corte.

4. Investigar sobre soluciones ante problemas de la técnica de corte

Defecto

Cintas curvadas

Posible causa

1. Los márgenes superior e inferior del bloque no son paralelos.

2. La cuchilla no está uniformemente afilada, provocando mayor compresión de uno de
los lados del bloque que del otro.
3. Un lado del bloque está más caliente que el otro.

Solución

1. Desbastar el bloque.
2. Intentar utilizar otra porción del borde de la cuchilla o afilar la cuchilla.
3. Dejar que el bloque se enfríe. Buscar las posibles causas del calentamiento o
enfriamiento, tales como lámparas o corrientes de aire.

2. Defecto

Secciones comprimidas

Posible causa

1. Cuchilla desafilada.
2. Cera demasiado blanda a temperatura ambiente para la realización de cortes.
3. La cera está más caliente que la temperatura ambiente.

Solución

1. Utilizar otra porción del margen de la cuchilla o afilar la cuchilla. La compresión a

menudo sucede cuando se ha redondeado la superficie de corte producido por los
sucesivos afilados.
2. Reinfiltrar en cera adecuada o cortar secciones más finas. Enfriar el bloque raras veces
da buen resultado. La cera debe contener un solvente contaminante debido a una
técnica incompleta de microondas.
3. Enfriar el bloque a temperatura ambiente.

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3. Defecto

Secciones que alternativamente son finas con compresión o finas

Posible causa

1. El bloque o la cera que sostiene el bloque al soporte permanece caliente desde el

montaje.
2. El bloque o la cera que sostiene el bloque está agrietado o flojo
3. Cuchilla perdida.
4. Cuchilla agrietada.
5. Micrótomo defectuoso.

Solución

1. Enfriar el bloque y mantener a temperatura ambiente.

2. Comprobar el tornillo del soporte. Quitar el bloque y el soporte del micrótomo, derretir
la cera del soporte, y asegurarse que el soporte está seco. Recubrir el soporte y volver a
montar el bloque. Engriar a temperatura ambiente antes de volver a usarlo.
3. Libera todos los tornillos del soporte y comprueba en busca de suciedad, arena, o cera
blanda. Comprueba el soporte de la cuchilla en busca de mellas por cera en la
superficie de soporte.
4. Desechar la cuchilla.
5. Que un profesional reacondicione el micrótomo.

4. Defecto

Secciones que tienen abultamientos en el centro

Posible causa

1. Algunos solventes permanecen en la muestra.

2. Cera fría en el centro, caliente fuera.
3. Sólo la porción afilada de la cuchilla es aquella que corta el centro del bloque.
4. Objetos impregnados con cera dura y encastrados en blando.

Solución

1. Re infiltrar la muestra.
2. Dejar que el bloque se enfríe a temperatura ambiente. Este es un resultado frecuente al
no permitir que los bloques se enfríen de forma equilibrada.
3. Probar a utilizar otra porción del margen de la cuchilla o volver a afilar la cuchilla.
4. Re-infiltrar la muestra.

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5. Defecto

Objetos que se rompen, o que se hacen añicos por la cuchilla

Posible causa

1. Si el objeto aparece con aspecto "de tiza" y se hace añicos bajo el filo de la cuchilla, no
fue completamente deshidratado y fue infiltrado defectuosamente.
2. Si el objeto se hace añicos bajo la cuchilla pero no se hace como tiza, es demasiado
duro para cortar en parafina
3. Si el objeto empuja desde la cera pero no se hace añicos, se ha usado un mal solvente
infiltrador, o cera.

Solución

1. Si el objeto es irreemplazable, intentar disolver la cera, deshidratar hasta EtOH al 95%,

infiltrar, y reencastrar, por lo demás desechar el bloque y comenzar con un material
nuevo.
2. Aplicar un spray entre cada uno de los cortes con celoidina o infiltrar completamente
en celoidina o en plástico.
3. Volver a infiltrar en un medio adecuado usando una parafina diferente que funda a
mayor temperatura.

6. Defecto

Las cintas se rompen

Posible causa

1. Una muestra en la cuchilla.

2. Arena en la muestra.

Solución

1. Cambiar a otra porción de la cuchilla.

2. Comprobar el margen de corte del bloque. Si la superficie está surcada hasta arriba, la
arena posiblemente se había arrastrado. Probar otra parición del margen de la cuchilla.
Si los surcos permanecen en su lugar, analiza minuciosamente. Si hay muchos surcos,
desecharlo.
3. Sin embargo puedes mirar la forma de eliminar depósitos de sílice duros.

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7. Defecto

Las cintas se pegan al bloque de la cara de la cuchilla

Posible causa

1. La cinta está electrificada, se comprueba si la cinta se une a todo lo demás.

2. Angulo incorrecto de la cuchilla.
3. El margen superior del bloque tiene fragmentos de cera.
4. El margen de la cuchilla (tanto la parte frontal como la trasera) tiene fragmentos de cera
sobre ella.

Solución

1. Echar vaho sobre la cuchilla, incrementar la humedad ambiental, ionizar el aire, incluso
con una llama Bunsen a corta distancia de la cuchilla.
2. Cambiar el ángulo de la cuchilla.
3. Limpiar la superficie superior del bloque.
4. Limpiar la cuchilla con xileno.

NO SE FORMAN CINTAS

8. Defecto

1. Porque la cera se desmigaja.

2. Porque los cortes, pese a ser perfectos, no se adhieren el uno al otro.
3. Porque los cortes se enrollan en cilindros.

Posible causa

1. Cera contaminada con algún solvente orgánico.

2. Parafina para usada para infiltrar demasiado dura, pura.
3. 3a. Se necesita cera demasiado dura a temperatura ambiente para la realización de
cortes más finos.
3b. Angulo de la cuchilla erróneo.

Solución

1. Re-encastrar (Nota: la cera absorbe vapores de hidrocarburos).

2. 2a. Sumergir los bloques en cera blanda, recortar los lados antes de cortar.
2b. Calentar el bloque ligeramente con una bombilla cerca
3a. Reinfiltrar en cera adecuada. Si el corte se realiza muy despacio, y el margen del
corte se aguanta flácido con un pincel, a veces se pueden formar tiras.

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3b. Ajustar el ángulo de la cuchilla.

9. Defecto

Cortes de diferente grosor

Posible causa

1. Juego en las correderas del micrótomo

2. Soporte mal fijado
3. Porta bloques caliente
4. Inclinación incorrecta
5. Cuchilla muy usada

Solución

1. Engrasar correderas
2. Fijar bien la cuchilla y el porta bloques
3. Enfriamiento del porta bloques y el bloque
4. Aumentar la inclinación de la cuchilla aflojando los tornillos
5. Cambiar la cuchilla

10. Defecto

Cortes de espesor irregular

Posible causa

1. Vibraciones en partes del microtomo

2. Vibraciones en la cuchilla
3. Juego en las correderas

Solución

1. Bloquear los tornillos del portacuchillas

2. Reglar o hacer reglar el micrótomo Cambiar la cuchilla por una menos alta o de cabeza
más larga

11. Defecto

Los cortes están comprimidos

Posible causa

1. Cuchilla desafilada
2. Temperatura ambiente alta

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Solución

1. Probar otra zona de la cuchilla

2. Enfriar el bloque

12. Defecto

Cortes con estrías

Posible causa

1. Cuchilla mal pulimentada

2. Presencia de polvo sobre el corte

Soluciones

1. Probar otra zona de la cuchilla

2. Entre tira y tira limpiar el bisel con una gasa empapada en xilol

El grosor de los cortes que se obtienen con estos tipos de micrótomos oscila entre 10 y 20
micras, lo que se suele considerar como fino, comparándolo con la magnitud de las células.

Los cortes se recogen sobre agua a 36-40ºC, en un baño de María, de aquí se "pescan" sobre
los portaobjetos que, previamente se han impregnado con una ligera capa de albúmina de
Mayer, y se llevan a la estufa, durante media hora a 58ºC.

De esta forma se logra el pegado de los cortes sobre la porta y la mejor manipulación de éstos
en los procesos de desparafinación y tinción. (5)

5. Enunciar la temperatura correcta de un baño de flotación y sustancia que

ayuden a una buena adherencia del tejido

Están constituidos por un tanque fabricado en material inoxidable, el cual tiene montado en la
parte inferior del mismo un conjunto de resistencias eléctricas mediante los cuales transfieren
calor a un medio como agua o aceite, que se mantiene a una temperatura preseleccionando a
través de un dispositivo de control.

Se pone en agua a 47°C aproximadamente, se pone en un portaobjetos y se añade alcohol,

gelatina sin sabor, goma para extender y deslizar el tejido, ya deslizado este se levanta y se coloca
sobre una laminilla, entonces se pasa a la desparafinacion sobre una platina o estufa a más de
60°C-70°C para pasar luego a la tinción.

Los cortes se extienden al depositarlos sobre la superficie del líquido ex tendedor contenido en
un recipiente

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Esto impide que se formen facetas desiguales en el filo de la denominado “baño de flotación”
(éste mantiene la navaja produciéndose, con ello, un afilado deficiente. temperatura entre 40o a
45o C). Las secciones se depositan en el líquido procurando que la superficie brillante (aquella
correspondiente al filo de la navaja) se ponga en contacto con el líquido caliente. En caso que
ciertas arrugas persistan, se emplean unas pinzas finas o un pincel de pelo de camello, para
ejercer una ligera tracción entre los extremos de los cortes y así desarrugarlos totalmente.

Las secciones se extienden aisladas o formando cintas, estas se recogen y adhieren al

portaobjetos de la misma forma: en el caso que se requiere recoger los cortes aislados, extendido
previamente como una cinta, deben separarse utilizando las mismas pinzas finas o agujas de
disección.

Para garantizar una mejor adhesión de los cortes a los porta objetos se recomienda incorporar
sustancias adherentes al líquido ex tendedor en ciertos casos al portaobjetos.

Estas sustancias suelen emplearse de las manetas:

a) Extensión previa de la sustancia adherente a una de las superficies de la lámina

portaobjetos, por ejemplo, la albúmina de Mayer, constituida por partes iguales de glicerina y
clara de huevo, a la mezcla se le añaden algunos cristales de timol como ingrediente conservante.
La mezcla se filtra y se guarda en refrigeración. Se le utiliza extendiendo una gota de la mezcla
en el portaobjetos y se deja secar. Los cortes se recogen cuidadosamente sumergiendo, por
debajo de ellos, el portaobjetos en forma oblicua.

Otra sustancia adherente que se emplea de la misma manera es la poli- L-lysina (solución de
25 miligramos de la sustancia en 25 ml de agua destilada). Una gota de la solución se extiende
en el portaobjetos y éstos se secan a 50 o - 55o C. durante toda la noche y está lista para su uso

b) Al líquido de flotación se le añaden sustancias. Uno de los procedimientos más sencillos

es coloración el que consiste en disolver, en el agua ya caliente del baño de flotación (dos
litros) 0.5 g de gelatina.

En otros casos se emplea una solución que posee los ingredientes siguientes:

- agua destilada --------------------------------- 1,000 ml

- bicromato de potasio--------------------------0.2 gramos

- gelatina -----------------------------------------0.2 gramos

El agua destilada se calienta a 60 o C para disolver en la gelatina y el bicromato de potasio,

sucesivamente. Se filtra y está lista para su uso. Este líquido previamente filtrado se puede
utilizar varias veces. (se recomienda guardarlo en el refrigerador). (6)

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OBSERVACIONES

 Se observo el procedimiento del corte del tejido y las diferentes precauciones que se
debería tomar antes en el proceso y después de terminar el corte.
CONCLUSIONES

 Observamos el microtomo de rotación es el más empleado en anatomía patológica.

El porta bloque colocado en posición vertical se mueve de arriba abajo. Delante del filo
de la cuchilla. El porta bloques avanza de manera automática y constante, en cada vuelta
del mango
 Realizamos cortes en micras del bloque de parafina que incluimos, donde primero
devastamos donde la palanca va de arriba abajo y con otra cuchilla realizamos el corte
definido donde la palanca da una vuelta completa, lo recogemos con la pinza, lo
colocamos en el baño de flotación, y por último en el portaobjetos
 Observamos el baño de flotación que está constituido por un tanque fabricado en material
inoxidable, el cual tiene montado en la parte inferior del mismo un conjunto de
resistencias eléctricas mediante los cuales transfieren calor a un medio como agua o
aceite, que se mantiene a una temperatura preseleccionando a través de un dispositivo de
control.
 Realizamos una pesca optima con la laminilla portaobjetos donde primero colocamos el
corte ya definitivo lo mas lejos de nosotros en el baño de flotación de ahí pescamos con
el portaobjetos y lo cortamos con la aguja, esperamos que se seque.

RECOMENDACIONES

 Se recomienda que siempre que vayamos a ingresar al laboratorio debemos colocarnos

todas las medidas de bioseguridad y siempre debemos trabajar con el material limpio y
esterilizado para obtener unos buenos resultados.
 Se recomienda que al momento de cortar tengamos mucha precaución ya que estamos
trabajando con cuchillas que puede generar cualquier tipo de accidente.

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BIBLIOGRAFIA
1. Medina, R. A. Microtomia.
2. Microtomy_booklet_spanish_online.pdf [Internet]. [citado 30 de junio de 2019].
Disponible en:
https://www.leicabiosystems.com/fileadmin/_migrated/content_uploads/Microtomy_b
ooklet_spanish_online.pdf
3. quieroapuntes.com. Micrótomo [Internet]. [citado 15 de junio de 2019]. Disponible en:
https://www.quieroapuntes.com/microtomo.html
4. Pardell X. Microtomo - Apuntes de Electromedicina Xavier Pardell [Internet]. [citado
15 de junio de 2019]. Disponible en: https://www.pardell.es/microtomo.html
5. Realización de cortes en parafina. Available at:
http://www.euita.upv.es/varios/biologia/tecnicas_de_histologia_vegetal/Documentos/
Cortes_p.htm. (Accessed: 30th June 2019)
6. Baño de flotación para cortes de parafina, MH8517 - WWW-Interface. Available at:
http://shop.llg.de/info3349_lang_ES.htm. (Accessed: 30th June 2019)

DIRECTOR/A DE CARRERA DOCENTE RESPONSABLE DEL LABORATORIO

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