Informe PDF

Optimización de técnicas
espectrométricas y separativas para la

identicación de material colorante en
patrimonio cultural
Memoria presentada para optar al Grado de

DOCTOR EN QUÍMICA
CON MENCIÓN INTERNACIONAL
por la Universidad de Granada
Programa: QUÍMICA
Ana Mª López Montes

Granada, 2015
Editor: Universidad de Granada. Tesis Doctorales
Autora: Ana María López Montes
ISBN: 978-84-9125-415-7
URI: http://hdl.handle.net/10481/41724
Tesis doctoral A. López Montes
Directores de Tesis Doctoral:
Dra. María del Rosario Blanc García

Dpto. Química Analítica, Universidad de Granada
Dra. Teresa Espejo Arias

Dpto. de Pintura, Universidad de Granada
Dra. Anne-Laurence Dupont

Centre de Recherche sur la Conservation, Musée national d'Histoire naturelle
CNRS París (Francia)
3
4
Dña. Mª Rosario Blanc García, Profesora Titular del Departamento

de Química Analítica de la Facultad de Ciencias de la Universidad de
Granada,
CERTIFICA
que el trabajo que se presenta en esta Tesis Doctoral, con el título: OPTIMIZA-
CIÓN DE TÉCNICAS ESPECTROMÉTRICAS Y SEPARATIVAS PARA LA
IDENTIFICACIÓN DE MATERIAL COLORANTE EN PATRIMONIO CUL-
TURAL, ha sido realizado bajo mi dirección y la de las profesoras Dña. Tere-
sa Espejo Arias del Departamento de Pintura de la Universidad de Granada y
Dña. Anne-Laurence Dupont, del Centre de Recherche sur la Conservación CRC
(MNHN-CNRS) en París (Francia), y que reúne todos los requisitos para poder
optar al Grado de Doctor con Mención Internacional.
Y para que conste, expido y rmo el presente certicado en Granada el 3 de

noviembre de 2015.
5
6
7
8
Agradecimientos
Debo comenzar agradeciendo a mis directoras, las doctoras Rosario Blanc,

Teresa Espejo y Anne-Laurence Dupont, el interés dedicado, el esfuerzo continuo
y los consejos regalados para la elaboración de esta Tesis Doctoral.
Y debo sumar a este agradecimiento el apoyo que me han ofrecido todos los
profesores y colegas de los departamentos de Química Analítica y de Pintura de la
Universidad de Granada, en especial a D. José Luis Vílchez y D. Alberto Navalón
por acogerme, desde hace más de una década, en su grupo de investigación y
hacerme un agradable hueco en los laboratorios. Recuerdo que el primer día José
Luis me animó a ir haciendo unas medidas sencillas mientras llegaba un técnico de
apoyo para completar mi investigación en Bellas Artes. El técnico de apoyo aun
no ha llegado. . .
Gracias también al director del Archivo de la Real Chancillería de Granada,

D. David Torres, por las facilidades ofrecidas para el acceso a los fondos y sus
bienvenidas aportaciones.
También quiero recordar a todos mis compañeros que han ido pasando cerca
de mí (y que se han quedado conmigo de alguna manera) mientras realizaban sus
doctorados, estancias o proyectos de investigación, a los colegas de congresos. . .
para agradecerles su ayuda incondicional. Entre tantos reencuentros y despedidas
confío en que seguiremos compartiendo ciencia y brindando por nuestros logros
profesionales y personales, aunque haya tantos kilómetros de separación con la
mayoría de vosotros (hasta Francia, Inglaterra, Suiza, Chile, Japón. . . ).
Merci aussi à mes collègues d'Orléans et Paris pour leur très précieuse colla-
boration et amitié.
Gracias también a toda mi familia, que me ha apoyado de manera directa e

indirecta para poder dedicar tiempo (½y más tiempo aun!) a la investigación.
9
A mis padres Pepe y Toñi por animarme y estar siempre seguros de que aca-
baría con este trabajo. Pese a todas las dicultades que han ido apareciendo, sé
que lo estáis disfrutando aun más que yo.
Y tan cercanos como mi familia han sido mis amigos, ofreciendo todas las
facilidades para que mi mente pudiera dedicarle tiempo a esta empresa que he
conseguido concluir.
Por último tengo que dar las gracias, una y otra vez, a Francisco, León y Simón
por soportar mi ausencia en tanto tiempo como les he robado.
Y a todos los que de algún modo habéis hecho posible este trabajo, GRACIAS.
10
A la memoria de mi padre, quien se convirtió de nuevo en polvo de estrellas en

septiembre de 2015.
A quienes me roban y me dan mis mejores sueños: León y Simón
)(
11
12
Índice general
Antecedentes 29
Objetivos 35
Metodología 37
Conguración y proceso de investigación 39
I El material colorante y las técnicas de análisis 43

1. Colorantes y las técnicas de análisis 45
1.1. Généralités concernant la couleur . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
1.1.1. Interaction lumière-matière : Transmission-réfraction, ab-
sorption et réexion spéculaire ou diuse. . . . . . . . . . . 47
1.2. La couleur dans le patrimoine culturel: des colorants naturels aux
colorants synthétiques . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 48
1.3. Classication, représentation et catalogage des matières colorants . 51
1.3.1. Classication des colorants . . . . . . . . . . . . . . . . . . 52
1.3.1.1. Classication par constitution chimique . . . . . . 52
1.3.1.2. Classication par propriétés et applications . . . . 55
1.3.2. Représentation dans l'espace Munsell . . . . . . . . . . . . 57
1.3.3. Catalogage selon la nomenclature Colour Index . . . . . 60
1.4. Colorantes objeto de estudio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 65
1.4.1. Colorantes naturales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 65
1.4.1.1. Colorantes naturales para escritura y decoración . 65
13
Tesis doctoral A. López Montes ÍNDICE GENERAL
1.4.2. Colorants sintéticos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 72

1.4.2.1. Colorantes sintéticos para autocromos . . . . . . . 73
1.4.2.2. Les colorants synthétiques pour textiles . . . . . . 78
1.5. Técnicas analíticas y metodología . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 80
1.5.1. Técnicas ópticas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 83
1.5.1.1. Colorimetría . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 83
1.5.1.2. Espectrometría Uv-vis . . . . . . . . . . . . . . . . 85
1.5.1.3. Espectrometría de absorción por reexión difusa . 89
1.5.1.4. Espectrometría de uorescencia de rayos X . . . . 91
1.5.1.5. Técnicas de análisis empleadas en colaboración con
otros investigadores . . . . . . . . . . . . . . . . . 95
1.5.2. Técnicas separativas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 96
1.5.2.1. Cromatografía líquida de alta ecacia . . . . . . . 96
1.5.2.2. Electroforesis capilar . . . . . . . . . . . . . . . . . 101
1.5.2.3. Sistemas de detección para HPLC y CE . . . . . . 108
1.5.2.4. Comparación entre los métodos de separación em-
pleados. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 110
1.6. Resumen / Abstract / Résumé . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 112
II Identicación y caracterización de materiales 115

2. Identicación de materiales colorantes tras un proceso de enveje-
cimiento acelerado 117
2.1. Introducción . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 119
2.2. Materiales y métodos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 121
2.2.1. Materiales, reactivos y disolventes . . . . . . . . . . . . . . 121
2.2.2. Instrumentación y programas informáticos . . . . . . . . . 122
2.2.3. Preparación de las muestras . . . . . . . . . . . . . . . . . 122
2.2.3.1. Extracción de los colorantes . . . . . . . . . . . . 122
2.2.3.2. Preparación de las muestras para el envejecimiento
articial . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 123
2.2.3.3. Toma y tratamiento de muestra para análisis . . . 124
2.2.4. Metodología analítica aplicada . . . . . . . . . . . . . . . . 124
2.2.4.1. Condiciones del envejecimiento articial acelerado 125
2.2.4.2. Espectrofotometría UV-vis . . . . . . . . . . . . . 125
14
ÍNDICE GENERAL Tesis doctoral A. López Montes
2.2.4.3. Cromatografía líquida de alta ecacia . . . . . . . 125
2.3. Resultados y discusión . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 126
2.3.1. Rojo de Rubia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 126
2.3.2. Amarillo de azafrán . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 129
2.3.3. Azul de índigo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 131
2.3.4. Rojo de carmín . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 135
2.3.5. Amarillo de goma guta . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 138
2.4. Conclusiones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 141
3. Identicación simultánea de colorantes rojos naturales y goma

arábiga en pergaminos manuscritos mediante Electroforesis Ca-
pilar 145
3.1. Introducción . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 148
3.2. Materiales y métodos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 151
3.2.1. Materiales, reactivos y disolventes . . . . . . . . . . . . . . 151
3.2.2. Instrumentación y programas informáticos . . . . . . . . . 152
3.2.3. Preparación de las muestras . . . . . . . . . . . . . . . . . . 153
3.2.3.1. Sustancias de referencia . . . . . . . . . . . . . . 153
3.2.3.2. Muestra de laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . 153
3.2.3.3. Toma y tratamiento de las muestras de pergaminos 154
3.3. Metodología analítica empleada . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 154
3.3.1. Espectrofotometría UV-vis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 154
3.3.2. Electroforesis capilar . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 155
3.4. Resultados y discusión . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 155
3.4.1. Espectrofotometría UV-vis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 155
3.4.2. Optimización del método electroforético . . . . . . . . . . . 156
3.4.2.1. Optimización de las variables experimentales . . . 157
3.4.2.2. Optimización de las variables instrumentales . . . 164
3.4.3. Aplicación del método . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 169
3.4.3.1. Muestra de laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . 170
3.4.3.2. Muestra de la colección de pergaminos . . . . . . 170
3.5. Conclusiones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 177
15
4. Les colorants rouges (XIXe et XXe) de la collection provenant

de l'Institut Supérieur Industriel de Verviers (Belgique) : étude
historique et spectrophotométrique 179
4.1. Introduction . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 182
4.1.1. L'Institut Supérieur Industriel Textile . . . . . . . . . . . . 182
4.1.2. Les entreprises productrices des colorants . . . . . . . . . . 183
4.2. Matériaux et méthodes d'analyses . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 185
4.2.1. Matériaux, réactifs et solvants . . . . . . . . . . . . . . . . . 185
4.2.2. Instrumentation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 186
4.2.3. Préparation des échantillons . . . . . . . . . . . . . . . . . . 186
4.2.3.1. L'étude par spectrométrie d'absorption par rée-
xion diuse et spectrométrie de uorescence X . . 186
4.2.3.2. L'étude par spectrométrie UV-vis . . . . . . . . . 187
4.2.4. Méthodes d'analyses . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 188
4.2.4.1. La spectrométrie d'absorption par réexion diuse 188
4.2.4.2. La spectrométrie UV-vis . . . . . . . . . . . . . . . 188
4.2.4.3. La spectrométrie de uorescence X . . . . . . . . . 188
4.2.4.4. La colorimétrie . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 189
4.3. Résultats et discussion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 189
4.3.1. Résultats des analyses selon le nom commercial . . . . . . . 189
4.3.1.1. Résultats de l'étude par spectrométrie de uores-
cence X . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 193
4.3.2. Résultats des analyses selon le Colour Index
T M Generic Name198
4.3.3. Constitution chimique . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 212

4.4. Conclusion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 215
5. Identication of synthetic dyes in early colour photographs using

capillary electrophoresis and electrospray ionization mass spec-
trometry 217
5.1. Introduction . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 220
5.2. Experimental . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 223
5.2.1. Materials . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 223
5.2.2. Sample preparation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 224
5.2.3. Analytical procedures . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 224
5.2.3.1. UVvisible spectroscopy . . . . . . . . . . . . . . 224
16
ÍNDICE GENERAL Tesis doctoral A. López Montes
5.2.3.2. CE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 225
5.2.3.3. ESI-ITMS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 225
5.3. Results and discussion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 226
5.3.1. UVvis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 226
5.3.2. Optimisation of the CE-PDA method . . . . . . . . . . . . 228
5.3.2.1. Electrolyte . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 228
5.3.2.2. Instrumental parameters . . . . . . . . . . . . . . 232
5.3.3. Optimisation of the CE-ESI-MS methodology . . . . . . . 233
5.3.3.1. CE-ESI-MS(+) for cationic dyes . . . . . . . . . . 236
5.3.3.2. CE-ESI-MS( =) for anionic dyes . . . . . . . . . . 243
5.3.4. Identication of the dyes in the lmcolor photograph . . . 244
5.4. Conclusion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 247
6. Analysis of a royal 15th Century illuminated parchment using a

portable XRF-XRD system and micro-invasive techniques 249
6.1. Introducción . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 252
6.2. Experimental methods . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 254
6.2.1. The privilegio rodado of the Archive of the Royal Chancellery254
6.2.2. Analytical techniques . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 256
6.3. Results and discussion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 258
6.3.1. Unpainted zones and text area . . . . . . . . . . . . . . . . 258
6.3.2. Writing ink . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 261
6.3.3. Gold and silver . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 261
6.3.4. Painted areas: yellow, blue, red, pink, green, white and black 264
6.4. CONCLUSIONS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 270
7. Conclusion 271
Perspectivas 275
Bibliografía 277
A. Fichas descriptivas de los pergaminos seleccionados de la colec-

ción del Archivo de la Real Chancillería de Granada. 293
17
B. Fiche de description de la sélection des colorants de la collection

de l'Institut Supérieur Industriel Textile de Verviers 323
C. MS and MS2 spectra of synthetic dyes in colour photographs 415
18
Índice de guras
1.1. Spectre électromagnétique dans le domaine du visible. . . . . . . . 46

1.2. Schema de réexion spéculaire et réexion diuse. . . . . . . . . . . 48
1.3. Schéma de la classication par constitution chimique . . . . . . . . 53
1.4. Schéma de colorant réactif avec un groupe monochlorotriazine. . . 54
1.5. Schéma de colorant réactif avec un groupe trichloropyrimidine. . . 55
1.6. Schéma de la classication par propriétés et applications . . . . . . 56
1.7. Modèle d'espace Munsell 7.5 R. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
1.8. Munsell Color Space (Gracieuseté de Munsell Colour Services, A
Division of GretagMacbeth). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 58
1.9. Munsell Color Space. Teinte. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 59
1.10. Munsell Color Space. Clarté. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 59
1.11. Munsell Color Space. Saturation. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 60
1.12. Estructura química del alizarín. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 67
1.13. Estructura química del purpurín. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 67
1.14. Estructura química del indigotín. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 68
1.15. Estructura química del crocetín. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 69
1.16. Estructura química del ácido carmínico. . . . . . . . . . . . . . . . 70
1.17. Estructura química del ácido gamboico. . . . . . . . . . . . . . . . 70
1.18. Estrudctura química de brazilina. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 71
1.19. Estructura química de brazileina. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 71
1.20. Flacon d'un colorant rouge de la collection de Verviers. . . . . . . 73
1.21. Estructura química de los colorantes catiónicos seleccionados em-
pleados en autocromos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 76
1.22. Estructura química de los colorantes aniónicos seleccionados em-
pleados en autocromos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 77
19
Tesis doctoral A. López Montes ÍNDICE DE FIGURAS
1.23. Representación gráca del espacio L*a*b*. . . . . . . . . . . . . . . 85
1.24. Esquema de un espectrofotómetro Uv-vis. . . . . . . . . . . . . . . 87
1.25. Modelo de espectro Uv-vis-IR. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 88
1.26. Esquema básico de un equipo de absorción por reexión difusa. . . 90
1.27. Ejemplo de representación gráca de un espectro de absorción por

reexión difusa y su primera derivada. . . . . . . . . . . . . . . . . 90
1.28. Esquema de la acción de la radiación incidente de los rayos X pri-

marios. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 92
1.29. Esquema descriptivo de la fuente de espectrometría de uorescencia

de rayos X. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 93
1.30. Espectro de uorescencia de rayos X. . . . . . . . . . . . . . . . . 94
1.31. Esquema del proceso de elución cromatográca. . . . . . . . . . . . 97
1.32. Esquema básico de un equipo de cromatografía líquida de alta ecacia. 97
1.33. Esquema básico de un cromatograma. . . . . . . . . . . . . . . . . 99
1.34. Esquema básico de un equipo de electroforesis capilar . . . . . . . . 105
1.35. Diagrama básico de un electroferograma. . . . . . . . . . . . . . . . 106
1.36. Esquema de del instrumento para ionización por electronebulización. 109
2.1. Situación de las muestras en el interior de la cámara de envejecimiento.124
2.2. Secuencia de muestras envejecidas del Grupo I de rojo de Rubia. . 126
2.3. Secuencia de muestras envejecidas del Grupo II de rojo de Rubia. 127
2.4. Cromatogramas y espectros UV-vis de la serie envejecida de rojo

de Rubia. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 128
2.5. Secuencia de muestras envejecidas del Grupo I de amarillo de azafrán.129
2.6. Secuencia de muestras envejecidas del Grupo II de amarillo de azafrán.130
2.7. Cromatogramas y espectros UV-vis de la serie envejecida de ama-

rillo de azafrán. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 131
2.8. Secuencia de muestras envejecidas del Grupo I de azul de índigo. . 132
2.9. Secuencia de muestras envejecidas del Grupo II de azul de índigo. . 132
2.10. Cromatogramas y Espectro UV-vis de azul de índigo. . . . . . . . 134
2.11. Secuencia de muestras envejecidas del Grupo I de rojo de carmín. . 135
2.12. Secuencia de muestras envejecidas del Grupo II de rojo de carmín. 136
2.13. Cromatogramas y espectros UV-vis de la serie envejecida de rojo

de carmín. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 137
20
ÍNDICE DE FIGURAS Tesis doctoral A. López Montes
2.14. Secuencia de muestras envejecidas del Grupo I de amarillo de goma

guta. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 139
2.15. Secuencia de muestras envejecidas del Grupo II de amarillo de goma

guta. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 139
2.16. Cromatograma y Espectro UV-vis de amarillo de goma guta. . . . 140
2.17. Muestra amarilla del mapa 11 del la colección Dibujos, mapas y

planos del Archivo de la Real Chancillería de Granada (España). . 143
3.1. a) ácido D-glucurónico; b)L- ramnosa; c) L-arabinosa; d) D-galactosa.150
3.2. Electroferogramas de mezcla patrón para el estudio de la concentra-

ción del electrolito soporte HPO4
−3 . Tampón PDC 20 mM, CTAB
0,5 mM y PO4 º
−3 ; pH 12,1; Ta 25 C; -10 kV. Izq. 270 nm; drcha. 335
nm. Identicación de los picos: (1) ácido glucurónico; (2) Ramnosa;

(3) arabinosa; (4) galactosa; (5) alizarín; (6) purpurín; (7) brazilina;
(8) brazileina; (9) ácido carmínico. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 159
3.3. Electroferogramas de mezcla patrón para el estudio de la concentra-

ción del inversor de ujo CTAB. Tampón PDC 20 mM, PO4
−3 20
a
mM y CTAB ; pH 12,1; T 25 ºC; -10 kV. Izq. 270 nm; drcha. 335
nm. Identicación de los picos: (1) ácido glucurónico; (2) ramnosa;
3.4. Electroferogramas de mezcla patrón para el estudio de la concen-

tración del cromóforo PDC. Tampón PO4
−3 20 mM, CTAB 0,5 mM
a
y PDC; pH 12,1; T 25 ºC; -10 kV. Izq. 270 nm; drcha. 335 nm.
Identicación de los picos: (1) ácido glucurónico; (2) ramnosa; (3)
arabinosa; (4) galactosa; (5) alizarín; (6) purpurín; (7) brazilina; (8)
brazileina; (9) ácido carmínico. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 161
3.5. Electroferogramas de mezcla patrón para el estudio del pH. Tampón

PDC 20 mM, HPO4
−3 20 mM y CTAB 0,5 mM; Ta 25 ºC; -10 kV.
Izq. 270 nm; drcha. 335 nm. Identicación de los picos: (1) ácido
glucurónico; (2) ramnosa; (3) arabinosa; (4) galactosa; (5) alizarín;
(6) purpurín; (7) brazilina; (8) brazileina; (9) ácido carmínico. . . . 162
21
3.6. Electroferogramas de mezcla patrón para el estudio del modicador

orgánico. Tampón PDC 20 mM, PO4
−3 20 mM y CTAB 0,5 mM; pH
a
12,1; T 25 ºC; -10 kV. Izq. 270 nm; drcha. 335 nm. Identicación
de los picos: (1) ácido glucurónico; (2) ramnosa; (3) arabinosa; (4)
galactosa; (5) alizarín; (6) purpurín; (7) brazilina; (8) brazileina; (9)
ácido carmínico. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 163
3.7. Electroferogramas de mezcla patrón para el estudio de la tempe-

ratura. Tampón PDC 20 mM , PO4
−3 20 mM y CTAB 0,5 mM;
pH 12,1; -10 kV. Izq. 270 nm; drcha. 335 nm. Identicación de los
picos: (1) ácido glucurónico; (2) ramnosa; (3) arabinosa; (4) galacto-
sa; (5) alizarín; (6) purpurín; (7) brazilina; (8) brazileina; (9) ácido
carmínico. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 164
3.8. Electroferogramas de mezcla patrón para el estudio de la aplicación

de voltaje. Tampón PDC 20 mM, PO4
−3 20 mM y CTAB 0,5 mM;
a
pH 12,1; T 25 ºC. Izq. 270 nm; drcha. 335 nm. Identicación de
los picos: (1) ácido glucurónico; (2) ramnosa; (3) arabinosa; (4)
galactosa; (5) alizarín; (6) purpurín; (7) brazilina; (8) brazileina;
(9) ácido carmínico. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 165
3.9. Electroferogramas de mezcla patrón para el estudio de la aplicación

de la inyección de la muestra. Tampón PDC 20 mM, PO4
−3 20 mM
y CTAB 0,5 mM; pH 12,1; T º

a 20 C; -10 kV. Izq. 270 nm; drcha. 335
nm. Identicación de los picos: (1) ácido glucurónico; (2) ramnosa;

3.10. Electroferogramas de la mezcla patrón obtenidos tras la optimiza-

ción del método. Tampón PDC 20 mM, PO4
−3 20 mM y CTAB
a
0,5 mM ; pH 12,1; T 20 ºC; -20 kV. Izq. 270 nm; drcha. 335 nm.
arabinosa; (4) galactosa; (5) alizarín; (6) purpurín; (7) brazilina; (8)
brazileina; (9) ácido carmínico. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 168
3.11. Capa de color de rojo de carmín preparada en el laboratorio para

validar el método. Tampón PDC 20 mM, PO4
−3 20 mM y CTAB
a
0,5 mM; pH 12,1; T 20 ºC; -20 kV. Izq. 270 nm; drcha. 335 nm.
arabinosa; (4) galactosa; (9) ácido carmínico. . . . . . . . . . . . . 170
22
3.12. Imágen de pergamino, referencia: ES.18087. ARCHGR / 060CDMA

// Pergamino n º 36. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 175
3.13. Electroferogramas de la muestra procedente del pergamino n º 36.
glucurónico; (2) Ramnosa; (3) arabinosa; (4) galactosa; (9) ácido
carmínico. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 176
3.14. Imágen de pergamino, referencia: ES.18087. ARCHGR / 060CDMA
// Pergamino n º 52. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 176
3.15. Electroferogramas de la muestra procedente del pergamino n º 52.
glucurónico; (2) Ramnosa; (3) arabinosa; (4) galactosa; (8) brazi-
leina; (9) ácido carmínico. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 177
4.1. Structure du support. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 187

4.2. Coordonnées colorimétriques a* et b* des colorants rouges par
nom générique selon le système CIE L*a*b*2000 . . . . . . . . . 192
4.3. Structure moléculaire de C.I. Acide rouge 114. . . . . . . . . . . . . 196
4.4. Spectres d'absorption par réexion diuse des colorants du groupe
C.I. Réactif rouge 83. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 200
4.5. Spectres UV-vis des colorants du groupe C.I. Réactif rouge 83. . . 201
4.6. Représentation graphique des colorants du groupe C.I. Réactif rouge
83 dans le système CIE L*a*b*2000. . . . . . . . . . . . . . . . . . 201
C.I. Réactif rouge 147. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 202
4.8. Spectres d'absorption UV-vis des colorants du groupe C.I. Réactif
rouge 147. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 203
4.9. Représentation graphique des colorants du groupe Réactif rouge 147
dans le système CIE L*a*b*2000. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 203
4.10. Photographie des échantillons B8P9, B35P12 et B35P13. . . . . . . 204
4.11. Spectre d'absorption par réexion diuse des colorants du groupe
C.I. Acide rouge 57. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 205
4.12. Spectre d'absorption UV-vis des colorants du groupe C.I. Acide
rouge 57. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 205
4.13. Représentation graphique des colorants du groupe C.I. Acide rouge
57 selon le système CIE L*a*b*2000. . . . . . . . . . . . . . . . . . 206
23
4.14. Photographie des échantillons B35P26, B35P27, B39P27, B40P10

et B40P42. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 207

C.I. Acide rouge 114. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 207
4.16. Spectres d'absorption UV-vis des colorants du groupe C.I. Acide

rouge 114. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 208
4.17. Représentation graphique des colorants du groupe C.I. Acide rouge

114 dans le système CIE L*a*b*2000. . . . . . . . . . . . . . . . . 209
4.18. Photographie des échantillons B26P16, B26P18, B35P28 et B39P22. 209
4.19. Schéma de base de la structure d'un colorant réactif. . . . . . . . . 213
4.20. Schéma de base de la structure du colorant réactif C.I. Réactif rouge

114. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 214
5.1. Structure and composition of an autochrome plate. . . . . . . . . . 221
5.2. Electropherograms obtained with a mixture of two cationic dyes

(1) TT: Thioavin T and (2) CG: Chrysoidine G- and four anionic
dyes (3)CH: Chrysophenine, (4) RB: Rose Bengal, (5) DII: Diio-
douorescein and (6) EB: Eosin B - with dierent concentrations of
the running buer. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 229
5.3. Optimisation of the running buer: nature of the organic solvent

(a) and acetonitrile concentration (b). . . . . . . . . . . . . . . . . 231
5.4. Electropherograms of the dyes (separate single injections): Capi-

llary: 50 mm i.d., L= 60 cm; electrolyte: 50 mM ammonium acetate
º
with 15 % (v/v) acetonitrile pH 9; temperature 20 C; applied vol-
tage 20 kV; analysis time 20 min, hydrodynamic injection at 1 psi
for 4 s, PDA detection. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 233
5.5. Superimposed EIEs of the cationic dyes (a) and the anionic dyes
(b) (single injections). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 235
5.6. Inuence of dierent organic solvents used in the composition of the

sheath liquid on the MS signal intensity. . . . . . . . . . . . . . . . 236
5.7. Inuence of the concentration of MeOH in the sheath liquid on the

MS signal intensity. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 237
5.8. Original box of lmcolor. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 244
24
5.9. MS and MS2 spectra of a few the dyes identied in the lmcolor
sample. As example: (a) FB (m/z 362.8, MS2: 226.8), (b) RH6G
(m/z 443.2, MS2: m/z 415.1), (c) RB (m/z 992.5). Complete spectra
can be found in the annex 2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 245
6.1. Areas analysed on the parchment: (1) zone without text; (2) text
area; (3) background of the small coat of arms; (4) castle in the
rota of the signum regis (gilding); (5) lion in the rota of the signum
regis (gilding); (6) yellow colour in the capital letter (gilding); (7)
decorative letters surrounding the rota of the seal within the signum
regis (silvering); (8 and 9) yellow colour in two areas of the capital
letter; (10) yellow colour in the signum regis; (11) blue colour at
the top of the signum regis; (12) blue colour at the bottom of the
signum regis; (13) blue colour in the background of the small coat of
arms; (14) reddish pink colour in the capital letter; (15) red colour
in the base of the castle in the signum regis; (16) green colour in the
capital letter; (17) black colour of the drawing in the capital letter;
(18) blue colour in the capital letter. . . . . . . . . . . . . . . . . . 256
6.2. XRD diagrams corresponding to areas: (a) where there is no text

(1 in Fig. 6.1), (b) on the text area (2 in Fig. 6.1) [C = calcite, Gy
= gypsum]. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 260
6.3. XRF spectra collected on areas: (a) where there is no text, (b) on
the text area, corresponding to XRD's of Fig. 6.2 (Cu-Ka line at E
= 8.04 keV is due to the X-ray source). . . . . . . . . . . . . . . . . 261
6.4. XRF spectra collected on gilded areas: (a) the castle in the rota of
the seal (4 in Fig. 6.1), (b) the lion in the rota of the seal (5 in Fig.
6.1); and silvery zones: (c) letters surrounding the rota of the seal
(7 in Fig. 6.1). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 262
6.5. XRD diagrams corresponding to gilded areas: (a) the castle in the
rota of the seal (4 in Fig. 6.1), (b) the lion in the rota of the seal
(5 in Fig. 6.1); and silvery zones; (c) letters surrounding the rota of
the seal (7 in Fig. 6.1) [Cin = cinnabar (vermilion), Au = gold, C
= calcite, M =minium, Gy = gypsum, Ag = silver]. . . . . . . . . 263
25
6.6. XRF spectra collected on: (a) yellow colour of the signum regis (10
in Fig. 6.1) and of the capital letter (8 in Fig. 6.1), (b) blue colour
at the top and the bottom of the signum regis (11 and 12 in Fig.
6.1), (c) red colour of the castle in the rota of the seal (15 in Fig.
6.1). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 265
6.7. XRD diagrams corresponding to: (a) yellow colour of the signum
regis (10 in Fig. 6.1), (b) blue colour in the top of the signum regis
(11 in Fig.6.1), (c) blue colour at the bottom of the signum regis (12
in Fig. 6.1), (d) red colour of the castle in the rota of the seal (15 in
Fig. 6.1), (e) green colour in the capital letter (16 in Fig. 6.1) [LTY
= lead tin yellow type I, Gy = gypsum, C = calcite, Az = azurite,
Hy = hydrocerussite (white lead), Cin = cinnabar (vermilion), Cer
= cerussite (white lead), Mch = malachite]. . . . . . . . . . . . . . 266
6.8. Electropherograms of: (a) yellow area of the capital letter (9 in Fig.
6.1), showing the presence of gamboge (gambogic acid, GC), (b)
blue areas of the signum regis (12 in Fig. 6.1), showing the presence
of indigo (indigotin, IND). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 267
6.9. SEMeEDX analysis from the outer limits of the capital letter and
the vegetable themes in black (17 in Fig. 6.1). . . . . . . . . . . . . 268
26
Índice de tablas
1.1. Classication par l'application tinctoriale. . . . . . . . . . . . . . . 62

1.2. Classication par la structure chimique. . . . . . . . . . . . . . . . 63
1.3. Distribution des colorants textiles. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 64
1.4. Colorantes naturales seleccionados. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66
1.5. Information basique sur les colorants textiles sélectionnés I. . . . . 79
1.6. Information basique sur les colorants textiles sélectionnés II. . . . . 80
1.7. Resumen . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 112
1.8. Abstract . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 113
1.9. Résumé . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 114
3.1. Loongitudes de onda de absorción máxima de los analitos estudiados

y longitud de onda optimizada para su identicación. . . . . . . . 156
3.2. Valores de pKa de los analitos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 156
3.3. Condiciones óptimas del método electroforético. . . . . . . . . . . . 169
3.4. Tiempos de migración y longitudes de onda máximas. . . . . . . . 169
3.5. Resultados de los análisis sobre las muestras obtenidas de la colec-
ción de pergaminos I. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 172
ción de pergaminos II. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 173
ción de pergaminos III. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 174
4.1. Groupes constitués et échantillons indépendants selon l'étude par

nom commercial. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 191
4.2. Résultats de l'analyse par spectrométrie de uorescence X. . . . . . 194
27
Tesis doctoral A. López Montes ÍNDICE DE TABLAS
4.3. Eléments identies par spectrométrie de uorescence X selon le clas-

sement par Colour IndexTM Generic Names. . . . . . . . . . . . . 196
4.4. Classement par nom commercial, Colour Index
T M Generic Name
et fabricant. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 211
5.1. Dyes specication max (optimum wavelengths for the identication

is marked in bold) tm and RSD in CE-PDA (optimised conditions)
of the synthetic dyes (separate single injections). Capillary: 50 mm
i.d., L= 60 cm; electrolyte: 50 mM ammonium acetate with 15 %
(v/v) acetonitrile pH 9; temperature 20 ºC; applied voltage 20 kV;
analysis time 20 min, hydrodynamic injection at 1 psi for 4 s. . . . 227
5.2. Compound formula, migration time and RSD, precursor ions (Mp)
expected (m/z th), Mp found (m/z exp) (in bold) of the referen-
ce dyes. Unassigned additional minor peaks from impurities, by-
products or adducts are also listed when present (italics + underli-
ned when base peaks). Complete spectra can be found in the annex
C. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 239
5.3.
2
I: MS: m/z precursor ion(s) (Mp). MS : daughter ions for the catio-
nic dyes with corresponding proposed fragments or fragment losses
(minus sign), when attributable (MS2 base peaks in bold, unattri-
buted m/z and multiple possible formulas in italics). Spectra for
the complete dyes list can be found in the annex C. . . . . . . . . 240
5.4. II: MS: m/z precursor ion(s) (Mp). MS2: daughter ions for the catio-
nic dyes with corresponding proposed fragments or fragment losses
(minus sign), when attributable (MS2 base peaks in bold, unattri-
buted m/z and multiple possible formulas in italics). Spectra for
the complete dyes list can be found in the annex C. . . . . . . . . 241
5.5.
2
III: MS: m/z precursor ion(s) (Mp). MS : daughter ions for the
cationic dyes with corresponding proposed fragments or fragment
losses (minus sign), when attributable (MS2 base peaks in bold,
unattributed m/z and multiple possible formulas in italics). . Spec-
tra for the complete dyes list can be found in the annex C. . . . . 242
28
Antecedentes
El color ha sido, y sigue siendo, uno de los principales protagonistas de la vida.

Ha sido empleado para designar categorías, expresar sentimientos y estados de áni-
mo, indicar símbolos y referencias, incluso para desarrollar la creatividad además
de estar vinculado irremediablemente a la materia. Indudable es su importancia
en cualquiera de las facetas del arte, los objetos artísticos, el patrimonio cultural,
natural e histórico.
Movidos por el interés en la conservación del patrimonio artístico, la Univer-
sidad de Granada se vinculó a instituciones públicas y privadas que tenían, como
uno de sus objetivos principales, este mismo n, surgiendo un grupo de investiga-
ción multidisciplinar que se consolidó con los trabajos realizados en proyectos de
I+D (Investigación y desarrollo).
En el año 2003, gracias a una beca de investigación asociada al proyecto Apli-
cación de nuevas tecnologías a la conservación y restauración del documento gráco
1
y material de archivo , inicié mi carrera investigadora ligada a la identicación
del color. La consecución de becas y contratos de investigación, me llevó a la de-
fensa, en 2006, de la Tesis Doctoral en Bellas Artes titulada Importancia de la
identicación de los componentes del color para la conservación y restauración
del documento gráco. Nuevas metodologías de análisis. En ella se desarrollaron
métodos analíticos usando técnicas cromatográcas y separativas para la identi-
cación de colorantes naturales en documento gráco. Las aplicaciones se realizaron
sobre colecciones de documentos en papel y pergamino pertenecientes al Archivo
de la Real Chancillería el Archivo Histórico Provincial, el Archivo de la Dipu-
tación y el Archivo de la Abadía del Sacromonte todos ellos de Granada.
1
Ministerio de Ciencia y Tecnología. Proyecto de Investigación Cientíca y Desarrollo Tecno-
lógico. Ref. MAT2002-01903.
29
Tesis doctoral A. López Montes Antecedentes
Los resultados fueron presentados en congresos

2 , y publicados en artículos
2
1) López-Montes, A., Espejo, T., Vilchez, J.L. Identication of dyes and organic pigments
by HPLC-PDA and capillary electrophoresis, 34th Archaeometry, Zaragoza (2004).
2) Espejo, T., López-Montes, A., Duran, A., Justo, A. Un nuevo estudio sobre el color en al
codicología árabe, VII Ccongreso nacional de color, Pamplona, (2004).
3) López-Montes, A., Espejo,T., Vilchez, J.L.,Blanc, R. Lara F.;,Navalón, A., Bueno, J. Identi-
cation of dyes in documents by capillary electrophoresies, Euroanalysis 2004, Salamanca (2004).
4) Espejo, T., Bueno, J., López-Montes, A.,Torres, D. Investigación y dasarrollo de nuevos
protocolos de análisis para el conocimeinto de los documentos de archivo, Congreso internacional
de restauración y conservación, Murcia(2005).
5) López-Montes, A., Espejo, T., Torres, D., Bueno, J., Blanc, R., Vilchez J.L. Identication
of the ink in the collection of drawings and maps in the Royal Chancellery archives in Gra-
nada (Spain) by means of capillary electrophoresis, 10th Congress of the international colour.
Association AIC COLOUR 05.Granada, (2005).
6) Bueno, J., Espejo, T., López-Montes, A. Colour as an indication of the start of a new chapter
capital letters in illuminated codices, 10th Congress of the international colour. Association AIC
COLOUR 05.Granada, (2005).
7) López-Montes, a., Espejo, T., Blanc, R., Vilchez, J.L., Pérez-Rodriguez, J.L. Identication
of ing for writing in graphic documents by dierent analytical techniques, 11as Jornadas de
análisis instrumental, Barcelona, (2005).
8) López-Montes, A., Bueno, J., Galán, I., Pérez-Mata, R., Parra-Arcas, P., Espejo T. Me-
todología para el estudio y restauración de la colección de pergaminos del archivo histórico de
la Dipuntación Provicila de Granada, XVI Congreso de conservación y restauración de bienes
culturales, Valencia (2006).
9) López-Montes, A., Plata-Rios, C., Blanc, R., Vílchez, J.L., Espejo, T. Estudios de los cam-
bios inducidos por tratamientos de desacidicación de documentos grácos, XVI Congreso de
conservacion y restauración de bienes culturales, Valencia (2006).
10) Espejo, T., Durán, A., López Montes, A., Blanc, R. Application of analytical technologies
in the study of paper media in hispano-arabic manuscripts. A model of transition in 15th century
Granada, 28th congress IPH. Capellades, Barcelona (2006).
30
Antecedentes Tesis doctoral A. López Montes
cientícos
3 y capítulos de libro4 .
La formación paralela que llevé a cabo para cubrir los objetivos de esa Tesis
Doctoral, me condujeron a cursar el programa de doctorado Química además
de cursos especializados en quimiometría y técnicas separativas a partir del año
3
1) López-Montes, A. Nuevas Tecnologías aplicadas en la conservación de los documentos
grácos: identicación de colorantes y aglutinantes orgánicos. Cuadernos de Restauración (2006)
87-98.
2) Blanc, R., Espejo, T., López-Montes, A., Torres, D., Crovetto, G., Navalón, A., Vilchez,
J.L. Sampling and Identication of natural dyes in historical maps and drawings by liquid chro-
matography with diode-array detection. J. Chromatography A 1122 (2006) 105-113.
3) López-Montes, A., Blanc, R., Espejo, T., Huertas, F.J., Navalon, A., Vilchez, J.L. Simul-
taneous identication of natural dyes in the Collection of drawings and maps from the Royal
Chancellery archives in Granada (Spain) by CE. Electrophoresis 28 (2007) 1245-1251.
4) López-Montes, A., Espejo, T.,Vilchez, J.L., Blanc, R. Notas sobre la identicación mediante
técnicas de análisis químico del amarillo de azafrán envejecido articialmente. Óptica Pura y
Aplicada 41 (2008) 261-265.
5) Espejo,T., López-Montes, A., García-Bueno, A., Durán, A., Blanc, R. A study about co-
lorants in the arabic manuscript Collection of the Sacromonte abbey, Granada, Spain. A new
methodology for chemical analysis. Restaurator 29 (2008) 76-106.
6) López-Montes, A., Blanc, R., Espejo, T., Navalón, A., Vilchez, J.L. Characterization of
sepia in ancient Graphics documents by capillary electophoresis. Micrhochemical J. 93 (2009)
121-126.
7) Espejo, T., Durán, A., López-Montes, A., Blanc, A. Microscopic and spectroscopic techni-
ques for the study of paper supports of Hispano-Arabic manuscripts from Al-Andalus: a transition
model in the 15th century. J. Cultural Heritage 11 (2010) 50-58.
4
1) Espejo, T. (dir.), Torres,D., Parra, P., Martín, E., Bueno,J., López Montes, A. (col.)
Recuperando el Patrimonio Documental de Granada, Archivo Histórico Provincial de Granada,
Archivo General de la Diputación de Granada Ed. Universidad de Granada, Granada (2004).
2) Torres, D. (dir), Espejo, T., López-Montes, A. (col) Colección de mapas y Dibujos del
Archivo de la Real Chancillería de Granada. Ed. Consejería de Cultura de la Junta de Andalucía,
Granada (2005) 61-64.
3) Blanc, R., Espejo, T., López-Montes, A., Navalón, A., Crovetto, G., Vilchez, J.L. Meto-
dología para la toma de muestra e identicación de colorantes naturales en dibujos y mapas del
Archivo Histórico de la Real Chancillería de Granada por Cromatografía Líquida en Homenaje
al Profesor Don Fermín Capitán: Investigación actual en la Escuela Analítica de Granada Ed.
Universidad de Granada, Granaa (2007) 521-541.
4) López-Montes, A. Analyses of dyes in the map collection of the Real Chancillería of Gra-
nada, en Art Technology, Sources and Methods, Ed. Archetype Publications, London (2008)
127-135.
5) López-Montes, A. Qué es un manuscrito Andalusí en El manuscrito Andalusí, hacia una
denominación de origen, Ed. Consejería de Cultura de la Junta de Andalucía, Granada (2008)
61-64.
31
2005. En el año 2006 defendí el Diploma de Estudios Avanzados en Química con el

trabajo titulado Identicación de colorantes en Documentos Grácos y material
de archivo mediante Electroforesis Capilar.
Una vez nalizada la Tesis Doctoral en Bellas Artes, los siguientes contratos
de investigación para el perfeccionamiento de doctores, estuvieron vinculados a
instituciones que realizan estudios cientícos de materiales artísticos, lo que me
permitió seguir trabajando y profundizando en las aplicaciones de la Química
Analítica en el estudio del color.
La compilación de los trabajos realizados desde 2007 hasta hoy, conforman esta
memoria de Tesis Doctoral en Química, en la que se parte del estudio del enve-
jecimiento articial acelerado del grupo de colorantes objeto de la primera Tesis
Doctoral, para entender su evolución y conocer la posibilidad de su identicación
una vez alterados.
Según la experiencia obtenida en esos años de trabajo, observé que a pesar

de que los artistas empleaban técnicas aprendidas de sus antepasados, éstas de-
bieron adaptarse al material y utensilios con los que contaban. A lo largo de la
historia, los artistas y artesanos han ido adaptando las herramientas cotidianas de
otras labores para su uso particular, por lo que hemos de suponer que los uten-
silios para la elaboración de los manuscritos evolucionaron por la inuencia de
la zona geográca, y esto habrá repercutido en la manufactura dejando marcas
visibles. Ejemplos de estas variaciones y marcas identicativas, los encontramos
en los trabajo de campo realizados por J. L. Estève, donde demuestra las causas
que motivan algunas de las marcas peculiares en la manufactura de manuscritos
árabes sobre las que se han pronunciado multitud de teorías, ninguna de ellas de-
mostradas. Asimismo, hemos de suponer que las condiciones climáticas empujaron
a crear leves cambios en las recetas para asegurar la estabilidad del material en
ambientes húmedos o secos, temperaturas extremas o cambios bruscos de éstas
entre otros muchos factores.
A partir de estas modicaciones constatadas de las recetas originales, se trabajó

en la adaptación de nuevas técnicas analíticas de identicación y caracterización
de colorantes naturales de origen natural y sintético, todos ellos empleados de
documentos grácos y material de archivo, desde la antigüedad hasta nuestros
días.
Para la realización de esta Tesis Doctoral se ha contado con la colaboración

del Departamento de Pintura, el Departamento de Química Analítica y el Cen-
32
Antecedentes Tesis doctoral A. López Montes
tro de Instrumentación Cientíca de la Universidad de Granada, el Archivo de la

Real Chancillería de Granada, el Instituto de Ciencias de los Materiales de Sevilla
(CSIC), la Facultad de Ciencias de la Universidad de Navarra, la Biblioteca Nacio-
nal de Francia (BNF) en París (Francia), el Centro de estudio de Arqueomateriales
Ernest-Babelon perteneciente al IRAMAT (CNRS) en Orleans (Francia), el Cen-
tre de Recherche sur la Conservation (CRC) (MNHN,CNRS) en París (Francia) y
el Museo del Louvre en París (Francia).
33
34
Objetivos
El objetivo principal de esta memoria de Tesis es contribuir al estudio de los

materiales colorantes constituyentes del patrimonio cultural mediante la aplicación
de técnicas separativas y espectroscópicas. Los objetivos especícos planteados
para el desarrollo del trabajo son:
1. Realizar una revisión, en profundidad, de la literatura existente relacionada

con el tema, ya sea relativa a este tipo de aplicación como en otras anes.
2. Seleccionar una colección de colorantes orgánicos naturales y sintéticos de

interés para su caracterización.
3. Elegir las técnicas de análisis más adecuadas para el estudio de los materiales
seleccionados teniendo en cuenta las ventajas y desventajas que presentan
en todas las fases del trabajo.
4. Desarrollar métodos de análisis para la identicación de los colorantes selec-

cionados mediante las técnicas separativas y espectroscópicas elegidas opti-
mizando las variables implicadas.
5. Desarrollar nuevos procedimientos de toma y tratamiento de muestras que

permitan que la cantidad de muestra tomada sea mínima y se mantenga la
integridad física del documento analizado.
6. Aplicar los métodos propuesto en muestras históricas.
7. Estudiar el proceso de envejecimiento de ciertos materiales especialmente

sensibles.
35
Tesis doctoral A. López Montes Objetivos
36
Metodología
La metodología de trabajo seguida ha constado de las siguientes fases:
a) Revisión de fuentes bibliográcas y documentales de publicaciones re-

lacionadas con el tema, ya sea relativa a este tipo de aplicación como en
otras anes. Además consulta de investigaciones similares que han servido
de antecedentes y referentes ineludibles del trabajo.
b) Selección de los materiales objetos de estudio. Clasicación del origen de

los materiales y selección de los principales colorantes orgánicos naturales
y sintéticos que podrán encontrarse en las colecciones empleadas durante el
proceso de aplicación.
c) Elección de las técnicas de análisis según las características del material

y los artefactos que se han estudiado revisando las ventajas y desventajas
que presentanban, tanto en el trabajo de laboratorio como los efectos sobre
el artefacto.
d) Planicación del proceso de envejecimiento acelerado de los materiales

objeto de estudio. Elaboración de probetas y selección de las condiciones
climáticas de envejecimiento articial acelerado.
e) Desarrollo de métodos analíticos para la caracterización de los materiales

empleados y su estado de conservación para conocer su evolución. Para ello
se han empleado distintas técnicas analíticas como: Microscopía electróni-
ca de barrido y difracción de rayos X para la identicación de materiales
inorgánicos. Medida de color mediante colorímetros valorando, de manera
independiente, tono, valor y luminosidad y la relación entre estos paráme-
tros. Uso de cromatografía líquida de alta resolución, electroforesis capilar,
37
Tesis doctoral A. López Montes Metodología
ambas acopladas a un detector de diodos en línea, espectroscopia Uv-vis,

espectrometría de absorción por reexión difusa, espectrometría de uores-
cencia de rayos X, difracción de rayos X y espectroscopia micro-Raman para
la identicación y caracterización de los materiales orgánicos.
f) Optimización de la toma y tratamiento de muestra mediante metodolo-

gía clásica, ensayos de diferentes disolventes orgánicos y mezclas hidroorgá-
nicas para la puesta a punto de extracciones líquido-líquido y microextrac-
ciones líquido-líquido.
g) Aplicación de los métodos desarrollados en muestras históricas docu-

mentales: la colección de colorantes de Verviers, una placa de lmcolor, la
colección de pergaminos y un privilegio rodado del Archivo de la Real Chan-
cillería de Granda.
h) Estudio y discusión de los resultados obtenidos entre el equipo multidis-

ciplilnar de trabajo para elaborar las conclusiones nales.
i) Elaboración de las actividades de publicación y difusión de los resulta-

dos logrados para la explotación y divulgación de los mismos.
38
Conguración y proceso de
investigación
La temática de esta Tesis Doctoral se centra, principalmente, en la carac-

terización del material colorante (tanto pigmentos como colorantes naturales y
sintéticos) empleado en patrimonio cultural (artístico y documental).
El primer trabajo parte del estudio de las alteraciones físicas y químicas que
sufre el grupo de colorantes objeto de la precedente Tesis Doctoral en Bellas Artes
(rojo de carmín, rojo de Rubia, amarillo de azafrán, amarillo de goma guta y azul
de índigo) tras un envejecimiento articial acelerado, para entender su evolución
y conocer la posibilidad de su identicación una vez alterados. Este trabajo se
realizó íntegramente en los laboratorios del Departamento de Química Analítica
de la Universidad de Granada, dentro del grupo de investigación FQM-338 Quí-
mica Analítica y Ciencias de la Vida dirigido por D. José Luis Vílchez Quero,
y el subgrupo Ciencia y Cultura Escrita dirigido por Dña. Teresa Espejo Arias.
Ella junto con la profesora Dña. M ª Rosario Blanc García, del departamento de
Quimica Analítica de la Universidad de Granada, colaboraron en la supervisión
de este trabajos como continuación de la precedente tesis doctoral durante mi
etapa posdoctoral aun en Granada. Parte de estos resultados se presentaron en
el VIII Congreso Nacional del Color celebrado en Madrid (España) en 2007 bajo
el título Apuntes a las teorías del uso e historia del color a través de su estudio
físico-químico y su posterior restauración. Más adelante, en 2008, un extracto de
esta investigación se publicó en la revista Óptica pura y aplicada con el título
Notas sobre la identicación mediante técnicas de análisis químico del amarillo
de azafrán envejecido articialmente [López-Montes y col, 2008].
En los mismos laboratorios y con el mismo grupo de investigación se realizó
39
Tesis doctoral A. López Montes Conguración y proceso de investigación
el trabajo de identicación simultánea de colorantes y material aglutinante su-

mando la dirección de la doctora Dña. Anne-Laurence Dupont del CRC (CNRS,
MNHN) en París (Francia), perteneciente a la Sorbonne Universités. Se trata de
la continuación de la línea de investigación sobre color en documento gráco. La
aplicación del método se realizó sobre la colección de pergaminos manuscritos del
Archivo de la Real Chancillería de Granada gracias a la colaboración de su direc-
tor D. David Torres. Los resultados se presentaron en el 36th HPLC Symposium
celebrado en 2011 en Budapest (Hungría).
La organización, selección y caracterización de la colección de colorantes sinté-

ticos provenientes de Lieja se realizó en el centro de investigación Ernest-Babelón,
en Orléans (Francia) bajo la dirección de Dña. Patricia Roger Puyo, durante una
estancia de perfeccionamiento de doctores.
Siguiendo con el programa de perfeccionamiento posdoctoral, la siguiente es-

tancia en el centro CRC-CNRS en París (Francia) permitió la elaboración del tra-
bajo de identicación de colorantes sintéticos empleados en autocromos. El trabajo
se publicó en 2013, en la revista Talanta, bajo el título Identication of synthetic
dyes in early colour photographs using capillary electrophoresis and electrospray
ionisationmass spectrometry. El trabajo fue dirigido por Dña. Anne-Laurence
Dupont y D. Bertrand Lavédrine, director del CRC (MNHN-CNRS). Para la dis-
cusión de los resultados se contó con la ayuda de D. Bernard Desmazières del
laboratorio LAMBE-CNRS, Evry (Francia) [López-Montes y col., 2013].
Por último, dentro del programa internacional Charisma, el grupo Ciencia y

Cultura Escrita solicitó la colaboración de D. Jacques Castaing y D. Adrián Durán
de los laboratorios del C2RMF Louvre en París (Francia), para hacer un estudio
in situ comprobando la viabilidad de un prototipo portátil que combina difracción
y uorescencia de rayos X para la identicación de materiales en documentos grá-
cos. Los análisis se completaron por el investigador A. Durán con espectroscopía
micro-Raman. A este compendio de resultados se añadió la aplicación de los mé-
todos de identicación de colorantes desarrollados en la Tesis en BBAA mediante
CE-PDA realizados en el departamento de Química Analítica de la Universidad de
Granada, y el estudio por SEM/EDX en el Centro de Instrumentación Cientíca
(CIC) de la Universidad de Granada. La interpretación de los resultados se realizó
en estrecha colaboración con los investigadores Castaing, Durán y Espejo. Esta
investigación en la que se colabora con varias instituciones y se aplican diversas
técnicas analíticas que se complementan, se publicó en J. of Archaeological Science
40
Conguración y proceso de investigación Tesis doctoral A. López Montes
en el año 2014 con el título Analysis of a royal 15th Century illuminated parch-
ment using a portable XRF-XRD system and micro-invasive techniques [Durán
y col., 2013].
Con la colaboración de todos los investigadores y de los responsables de los cen-
tros implicados que nos han facilitado el acceso a los documentos históricos, se ha
podido llevar a cabo este estudio, cuya metodología se ha aplicado al conocimiento
de obras de gran interés cultural.
41
Tesis doctoral A. López Montes Conguración y proceso de investigación
42
Parte I
El material colorante y las

técnicas de análisis
43
Capítulo 1
Colorantes y las técnicas de

análisis
1.1. Généralités concernant la couleur
´
La lumière naturelle se compose d ondes électromagnétiques qui peuvent être
dénies par leur longueur d'onde (λ). Les ondes électromagnétiques visibles par
l'÷il humain, ont des longueurs d'onde comprises entre 380 nm (violet) et 780 nm
(rouge). C'est Isaac Newton qui propose pour la première fois au XVIIe siècle un
cercle des couleurs chromatiques basé sur la décomposition de la lumière blanche
[Newton, 1704].
Dans la décomposition du spectre électromagnétique en fonction de la longueur

d'onde (Figure 1.1) les trois zones d'intérêt pour notre travail sont :
45
Tesis doctoral A. López Montes Capítulo 1.
Figura 1.1: Spectre électromagnétique dans le domaine du visible.
Ultraviolet : < 380 nm
Visible : 380 -780 nm
Infrarouge : > 780 nm
La couleur résulte de l'interaction du rayonnement lumineux avec la matière et sa

perception exige trois éléments :
Une source lumineuse qui l'éclaire
La réexion de la lumière par sa surface
La détection de cette lumière par un récepteur
46
Capítulo 1. Tesis doctoral A. López Montes
1.1.1. Interaction lumière-matière : Transmission-réfraction, ab-

sorption et réexion spéculaire ou diuse.
On peut produire diérents phénomènes lorsqu'une lumière entre en interaction
avec la matière : la lumière peut être transmise, absorbée ou rééchie [Billmeyer
et Saltzman, 1981].
La transmission la réfraction
La transmission est la propagation de la lumière à travers de la matière trans-

parente ou translucide. Dans ce phénomène, la direction des rayons lumineux est
déviée en fonction de sa réfraction dans la matière. L'indice de réfraction (n) d'un
milieu transparent est déni par le rapport entre la vitesse de propagation de la
lumière dans le vide, (c) et sa vitesse dans le milieu (v1).
n = c/v1
L'absorption
La couleur est due à l'absorption sélective d'une partie de la radiation de la

lumière incidente. Le matériau réechit certaines longueurs d'ondes et en absorbe
d'autre selon sa couleur.
La réexion : spéculaire ou diuse
La réexion de la lumière peut être spéculaire ou bien diuse suivant la nature

de la surface. La réexion est spéculaire quand le rayon incident donne naissance
à un rayon rééchi unique à un angle identique au rayon incident. La réexion
diuse est le cas le plus intéressant dans ce sujet. La réexion diuse intervient
sur les interfaces irrégulières, la lumière est rééchie dans un grand nombre de
directions et l'énergie du rayon incident est redistribuée dans une multitude de
rayons rééchis (Figure 1.2).
47
Figura 1.2: Schema de réexion spéculaire et réexion diuse.
1.2. La couleur dans le patrimoine culturel: des colo-

rants naturels aux colorants synthétiques
Dans la Préhistoire les hommes découvrirent le moyen de teindre les étoes
avec des colorants d'origine végétale ou animale. Les colorants employés sont la
gaude (Suisse), l'indigo (Provence), la garance (Monhenjo-Dao dans le Valle del
Indo) et le pourpre de murex (Crète) [Délamare et Guineau, 2000]. Ces colorants
sont aussi utilisés par les Egyptiens, qui perfectionneront les techniques de teinture
des hommes préhistoriques [Bomford, 1995].
Les Sumériens et les Egyptiens furent les premiers à savoir utiliser et même
préparer des colorants pour les usages les plus divers. Ces techniques furent répan-
dues peu à peu parmi tous les peuples de la Méditerranée. Vers la même époque,
on pratiquait aux Indes la teinture de l'Indigo, et en Chine on connaissait, comme
en Egypte, l'usage des oxydes métalliques et de leurs diverses combinaisons pour
colorer les émaux. Pline l'ancien écrit dans L'histoire naturelle qu'il est habituel de
trouver l'indigo, le kermès ou l'orcanète vers l'époque Égyptienne [Maltese, 1981].
48
On retrouve au Moyen Age des recettes transmises par les Egyptiens qui ont
été à la base de quelques expériences de la chimie moderne [Girardin, 1877]. Nous
pouvons diérencier les colorants ternes pour les textiles du peuple, et les colorants
intenses et brillants pour les textiles dans la classe dominante. Puis, les conditions
de préparations et d'emplois des colorants se précisèrent comme l'indique le ma-
nuscrit de Théophile (XIe XIIe siècle). En même temps, de nouveaux colorants
rent leur apparition : le bois rouge de Brésil (venu des Indes au XIIe siècle) [Ro-
ger et Villela-petit 2003], le kermès (introduit dans la péninsule Ibérique par les
Arabes au XIIIe siècle), la cochenille (importée en Europe par les Espagnols après
la conquête du Mexique) [Meybeck, 1963].
Progressivement, les procédés d'extraction des colorants naturels et leur ap-

plication à la teinture s'améliorèrent et atteignirent dès le XVIIe siècle un haut
degré de perfection. En 1671, Colbert t publier l'Instruction générale pour la
teinture des laines et manufactures de laine de toutes couleurs et pour la culture
des drogues ou ingrédients qu'on y employé [Mukerji, 2007]. Cet ouvrage donnait
le détail sur les recettes de teinture et les principales plantes tinctoriales poussant
en Europe.
Actuellement, contrairement aux colorants végétaux qui, eux, ont complète-

ment disparu ou n'ont plus que des usages très restreints, quelques pigments mi-
néraux sont encore utilisés de nos jours, mais les colorants organiques synthéti-
ques prédominent, surtout ces dernières années, depuis que de nouveaux produits
dont les propriétés sont remarquables et les applications nombreuses sont appa-
rus[Gordon et Gregory, 1983].
La première découverte de ces colorants articiels remonte à 1788, et est due

à Hausmann qui constata la formation d'une couleur jaune dûe à l'acide picrique,
mais ce ne fut toutefois que cinquante-neuf ans après que, grâce à Guinon Airé
de Lyon, l'on sut proter de la remarquable propriété que possédait cet acide,
d'imprimer à la fourrure une belle coloration jaune très solide.
En 1818 Braconnot, puis en 1840 et 1841, Boutin et Schuck reconnurent que

le suc d'aloès traité par l'acide azotique fournissait des acides nitrés colorés qu'ils
utiliseront dans la teinture de la soie et de la laine.
En 1818, le Dr. Prout découvrit sous le nom de purpurate d'ammoniaque une

matière colorante d'un rouge pourpre dérivant de deux produits d'oxydation de
l'acide urique ; c'est ce que l'on appelle aujourd'hui la merexide, qui n'a été ap-
pliquée à la teinture qu'en 1853 par MM. Sacc et A. Schlumberger, c'est-à-dire
49
quarante-cinq ans après sa découverte.
Des 1834, Runge avait indiqué comme réactions caractéristiques de l'aniline :

la couleur violette qu'elle donne avec le chlorure de chaux, la couleur rouge pour-
pre qu'elle fournit avec le chlorure d'or sous l'inuence de la chaleur, ainsi qu'une
autre couleur rouge que son chlorhydrate produit à la température de 100 C par °
le contact du bichromate de potasse, mais ces faits curieux passèrent inaperçus.
Ce ne fut que dix ans plus tard que M. Hofmann, en étudiant les bases organiques
contenues dans l'huile de goudron de houille, conrma les observations de Runge
et y ajouta nombre de faits nouveaux ; mais il fallut encore douze ans pour que
ces réactions de laboratoire trouvent une application industrielle. La gloire en est
due, d'une part, à un chimiste anglais, W.H. Perkin qui, au début de l'année 1856
isola la matière violette Mauvéine, créée dans les actions oxydantes sur l'aniline et
t l'examen de ses propriétés tinctoriales [Délamare et Guineau, 2000] [Girardin,
1877]. Cette date, la plus importante de l'histoire des colorants, fut déterminante
pour l'essor de la chimie organique, si l'on considère les innombrables recherches
que suscita la fabrication des colorants de plus en plus variés et complexes [Gila-
bert, 2003]. Perkin découvira aussi l'aniline purpura, par hasard, lors d'un accident
dans le laboratoire [Hunt, 1986].
Un peu plus tard en 1859, F. Verguin, chimiste de la Maison Renard & Franc,
continue sur la voie de Perkin et synthétise la Fuchsine, magnique colorant rouge
résultant de l'oxydation de l'aniline par le tétrachlorure d'étain. La découverte des
nouvelles matières tinctoriales produisit en tous pays une très grande sensation,
les violets et les rouges d'aniline dérivant des essais de savants et praticiens.
La deuxième moitié du XIXe siècle vit la découverte des colorants de synthèse

préparés à partir des dérivés du goudron de houille. Ces derniers, grâce à la vivacité
de leurs nuances, à leur solidité, à leur facilité d'application pour la coloration des
substances les plus diverses, supplantèrent rapidement les colorants naturels.
Tous les eorts des industriels d'alors pour améliorer la qualité des produits
naturels et les procédés de leur application, furent évincés progressivement. On
assista à la ruine d'industries jadis orissantes et à la disparition de la culture des
plantes tinctoriales. Par example, les colorants rouges naturels pour textiles étaient
à base de garance, de kermès ou de cochenille jusqu'au XIXe siècle. Les cultures de
garance furent étendues dans le comté d'Avignon notamment quand Louis-Philippe
eût fait adopter le pantalon rouge garance pour l'armée. En 1869, Graebe et
Liebermann en Allemagne rent la synthèse de l'alizarine (principe colorant de la
50
garance) et Perkin en Grande-Bretagne à un jour d'intervalle. L'avènement des

colorants synthétiques supplanta ces colorants naturels du fait de leur bas prix
sur le marché et de leur meilleure résistance au temps en entraînant la ruine des
provinces qui cultivait ce type de colorants [Cardon, 1990].
La quantité de matière premières nécessaire pour la fabrication d'un colorant

naturel était environ 100 fois supérieure à celle nécessaire pour la fabrication des
colorants synthétiques ; la plante Rubia tinctoria (garance) fournissait seulement
2 % d'alizarine ; la plante Insatis tinctoria 0,4 % d'indigo ; on avait besoin de 3000
cochenilles pour obtenir 1 g de carmin et pour la même quantité de jaune de safran,
on avait besoin de 20 eurs de Crocus sativus L.
L'éclosion des colorants synthétiques est due aux exigences de plus en plus
impérieuses de la clientèle au sujet de la solidité et de la vivacité des coloris,
mais aussi et surtout est liée à l'industrie issue des produits pétroliers qui fera
apparaitre sur le marché de nombreux matériaux nouveaux tels que: caoutchoucs
synthétiques, matières plastiques, nouvelles bres synthétiques, dont la coloration
entraînait pour chaque cas particulier l'obligation de disposer d'une gamme de
colorants à caractères très spéciaux et spéciques, et qui, le plus souvent, devaient
être créés spécialement pour cet usage.
Les matières premières de base des colorants organiques synthétiques servant

à la fabrication des produits intermédiaires et par conséquent à celle des co-
lorants, étaient naguère extraites exclusivement du goudron par pyrogénation de
la houille. Avant d'être transformées en colorants, les matières de base subissent
une série de transformations chimiques pour conduire aux produits intermédiaires
généralement incolores ou très peu colorés.
1.3. Classication, représentation et catalogage des ma-

tières colorants
Les matériaux colorants peuvent se classer en trois groupes : les pigments, les
colorants et les laques. Pour les suivantes recherches, nous avons sélectionné les
colorants d'entre eux.
Les colorants sont des matières organiques, naturelles ou synthétiques, utilisées

pour apporter une couleur déterminée à un milieu ou une surface. Ils sont solubles
dans le milieu d'utilisation et ont un pouvoir opaciant faible voir nul. Ils se xent
51
par une liaison chimique sur le support soit directement, soit avec un prétraitement
(exemple de la teinture du textile).
1.3.1. Classication des colorants

Les principaux modes de classication des colorants naturelles ou synthétiques
reposent soit sur leur constitution chimique, soit sur leur propriétés et méthode
d'application aux diérents substrats (le cuir, le papier ou les bres textiles par
exemple). Dans ce cas, le texte comprend la classication spécique pour substan-
ces colorantes par constitution chimique et par propriétés et application.
1.3.1.1. Classication par constitution chimique

Les colorants peuvent être aussi classés en un certain nombre de grandes fami-
´
lles dont l'une se distingue par la présence d un groupe chromophore caractéris-
tique qui se rattache à un individu chimique de base (Figure 1.3) [Hedayatullah,
1976], [Meybeck, 1963].
52
Figura 1.3: Schéma de la classication par constitution chimique
La famille de colorants la plus importante parmi tous est celle des colorants
azoïques caractérisés par le groupe chromophore azoïque : -N=N-. Il y a une grande
variété de ses représentants et une grande diversité dans ses applications. Depuis
ces dernières années, de nombreuses catégories de colorants azoïques ont trouvé
une faveur de plus en plus marquée auprès des industries intéressées. Ce succès
peut s'expliquer par la relative facilité des recherches dans le domaine des colorants
azoïques qui a permis aux chimistes de préparer de nombreux composés de toutes
nuances et dont les propriétés tinctoriales et les solidités étaient parfaitement
adaptées à l'usage auquel on les destinait.
Le deuxième groupe important est composé des colorants réactifs. La première
entreprise qui a fabriqué les colorants réactifs est l'I.C.I. (Imperial Chemical In-
dustries) en 1956. Ces colorants suscitèrent le même intérêt que la Mauvéine et
53
provoquèrent un eort considérable de la part des rmes concurrentes pour lan-

cer des produits équivalents. En 1956, l'Institut de Chimie des Colorants de Bâle
relevait 169 brevets concernant la constitution de nouveaux colorants réactifs. Il
s'agissait de dérivés dont la molécule colorée pouvait avoir des constitutions chi-
miques extrêmement variées comme les colorants azoïques ou anthraquinoniques,
mais qui possédaient une caractéristique commune au point de vue tinctorial, celle
de se xer sur la bre par réaction chimique par création de liaisons de covalence.
Les colorants ainsi xés étaient extraordinairement solides au lavage, à l'extraction,
aux solvants et même à certaines interventions chimiques.
S'il n'est pas possible de connaître avec précision les compositions des colorants
réactifs lancés dans le commerce, du moins peut-on en avoir une idée à la lecture
des brevets qui les protégent.
Schématiquement, un colorant réactif se compose d'une molécule colorée subs-
tituée par des groupes solubilisants et reliée à un reste porteur d'un ou de plusieurs
groupes réactifs. Entre les groupements réactifs qui ont été brevetés, nous remar-
quons particulièrement deux types:
le monochlorotriazine: (Procion H, Cibacrone) (Figure 1.4)
Figura 1.4: Schéma de colorant réactif avec un groupe monochlorotriazine.
54
le trichloropyrimidine: (Reacton, Drimaréne) (Figure 1.5)
Figura 1.5: Schéma de colorant réactif avec un groupe trichloropyrimidine.
Les colorants réactifs avec un groupe réactif monofonctionnel trichloropyrimi-

dine reçoivent le nom commercial de Drimarene X. Les colorants réactifs avec un
groupe réactif diuoropyrimidiene reçoivent le nom commercial de Drimarene K
[Chen, 2006].
Les premiers colorants réactifs, les Procion, puis les Cibacrone, ont été appli-
´
qués à la cellulose, mais la gamme des applications s est assez rapidement étendue
aux polyamides et à la laine.
1.3.1.2. Classication par propriétés et applications

Les colorants peuvent se classer d'un point de vue de la solubilité dans trois
grandes catégories : 1) les colorants solubles dans l'eau, 2) les colorants insolubles
dans l'eau mais solubles dans l'alcool et 3) les colorants solubles dans les matières
grasses et vernis [Hedayatullah, 1976] (Figure 1.6).
Les colorants solubles (1) sont à peu près exclusivement utilisés pour la teinture
et l'impression des bres textiles. Les colorants anioniques (1.a) ou colorants acides
(1.a.1) teignent les bres protéiniques (laine, soie. . . ) en bain acide (d'où leur
nom). Les colorants directs ou substantifs (1.a.2) teignent les bres cellulosiques
(coton, viscose. . . ) en bain neutre et les colorants à mordants ou métallisables
(1.a.3) peuvent servir à d'autres usages qu'à la teinture des bres protéiniques ou
cellulosiques. Les colorants cationiques ou basiques (1.b) contiennent un groupe
55
aminé qui teinte en milieu acide à une température voisine de 105 º C pour obtenir
un bon rendement des colorants. Ils sont utilisés pour teindre la laine en couleurs
pastels. Les colorants réactifs (1.c) possèdent un groupe réactif qui a la propriété
de se lier chimiquement avec la bre à teindre. Ce qui leur confère une très bonne
tenue.
Figura 1.6: Schéma de la classication par propriétés et applications
Les colorants insolubles (2) peuvent être utilisés pour la teinture ou la colora-
tion de supports extrêmement variés : bres textiles diverses, matières plastiques,
peinture, etc. Les colorants de cuve (2.a) donnent par réduction en milieu alcalin,
´
un leuco dérivé, une cuve qui possède de l anité pour les bres.
´
Les colorants sulfurés (2.b) sont appliqués d une façon un peu analogue sur
bres cellulosiques, mais en pratiquant la réduction au moyen de sulfure de so-
dium. Les colorants formés sur la bre (2.c) comprennent les colorants azöiques
56
´
insolubles et les colorants d oxydation . Les colorants dispersables ou plas-
´
toslubles (2.d) servent à la teinture des bres d acétate de cellulose et de bres
synthétiques ou encore pour la coloration de certains vernis. Les pigments (2.e)
´
sont utilisés dans l industrie des peintures et pour la coloration dans la masse
´
d articles variés au cours de leur fabrication. Les colorants pour matières grasses
´
et pour vernis (3) sont insolubles dans l eau mais solubles dans les solvants et les
matières grasses comme l'huile.
1.3.2. Représentation dans l'espace Munsell

Une personne, n'ayant a priori pas de connaissance en colorimétrie, dénira
la couleur d'une façon simple (rouge, verte, jaune, etc.) à laquelle elle associera
une notion de clarté, c'est-à-dire le taux de blanc présent (clair, foncé, etc.) et une
notion de saturation ou de pureté (pastel, délavée, etc.).
Par analogie et dans le but de se rapprocher de la perception de la couleur par
l'÷il humain, les espaces perceptuels représentent la couleur à travers trois entités
: la teinte, l'intensité ou luminosité (clarté) et la saturation (Figure 1.7).
Figura 1.7: Modèle d'espace Munsell 7.5 R.
Le système de Munsell (Figure 1.8) est un modèle colorimétrique inventé par

l'artiste Albert Henry Munsell en 1898 et qui a été redéni par la Société américai-
ne d'optique (Optical Society of America) en 1943. Dans le système de Munsell, les
couleurs sont ordonnées dans un espace en trois dimensions correspondant à trois
57
attributs: H (`'hue = teinte) V (`'value : luminosité) C (`'chroma : saturation),

qui ressemble à un arbre. Le tronc (l'axe vertical) V constitue une échelle de tons
neutres de gris, le noir étant placé à la base et le blanc à la cime. Les teintes H
sont situées sur un cercle chromatique entourant le tronc. L' axe horizontal C, de
longueurs variables, représente le degré de saturation de chacune des teintes .
1
Figura 1.8: Munsell Color Space (Gracieuseté de Munsell Colour Services, A Di-
vision of GretagMacbeth).
a) Teinte Munsell :
La teinteest la qualité qui distingue une couleur d'une autre. C'est ce qui
diérencie un rouge (R) d'un jaune rouge (YR), par exemple. La gure 1.9 montre
qu'un secteur peut être subdivisé en sous-sections pour une meilleure précision.
Dans ce cas, un numéro précédera la valeur donnée à la section (3YR par exemple).
Chaque axe est représenté par un faible nombre de valeurs.
Ainsi, la teinte est représentée par un disque divisé en dix secteurs. Ces valeurs
correspondent aux teintes suivantes : rouge R, jaune-rouge YR, jaune Y, jaune-vert
GY, vert G, bleu-vert BG, bleu B, bleu-pourpre PB, pourpre P et rouge-pourpre
RP. Les abréviations précédentes sont données en anglais telles qu'elles ont été
dénies par Munsell [McLaren, 1986].
1
www.delandtsheer.net/Colorimetrie Consulta 27/07/2008.
58
Figura 1.9: Munsell Color Space. Teinte.
b) Clarté Munsell :
La clartése réfère à la position relative d'une teinte par rapport à l'échelle
verticale des gris (Figure 1.10). La clarté permet de qualier une teinte pâle ou
foncée, ou encore claire ou sombre.
Figura 1.10: Munsell Color Space. Clarté.
59
c) Saturation Munsell :
La saturationest le degré d'éloignement horizontal d'une teinte à partir du gris
neutre de même clarté sur l'échelle des gris. C'est ce qui permet de qualier une
couleur de saturée ou d'insaturée , ou encore de lumineuse ou atténuée
. En ajoutant du gris, on rend la teinte moins saturée (Figure 1.11).
Figura 1.11: Munsell Color Space. Saturation.
1.3.3. Catalogage selon la nomenclature Colour Index

On a dressé de véritables catalogues de colorants connus de chaque famille,
avec ceux dont les brevets sont tombés dans le domaine public, en mentionnant,
pour chacun, leur composition chimique, leurs désignations commerciales, leurs
propriétés [Meybeck, 1963].
En 1924, le British Society of Dyers and Colourist a publié un indice avec
toutes les substances colorantes sous le titre : Colour Index. Plus tard, les 2ème et
3ème édition sont publiées en compagnie de l'American Association of Textiles
´
Chimists and Colorist . Jusqu à la deuxième guerre mondiale paraissait, régu-
lièrement tenues à jour, de nouvelles éditions des Farbstotabellen de Schultz en
langue allemande, et du Colour Index de Rowe en langue anglaise. En 1956, cet
ouvrage a été entièrement refondu par les spécialistes anglais et américains .
2
2
Edité par The Society of Dyers and Colourists et par The American Association of Textile
Chemists and Colorists.
60
Toutes les matières colorantes naturelles et synthétiques ont un nom particu-

lier comme Tyrian pourpre, magenta or rouge de cochenille. Mais au 19e siècle,
les entreprises ont développé une grande quantité de nouveaux colorants avec des
noms aléatoires [McLaren, 1986]. Ces mêmes entreprises ont parfois créé des co-
lorants identiques avec diérents noms à cause de la compétition dans le secteur
industriel .
3
La nomenclature selon le Colour Index peut se révéler très utile lorsqu'il s'agit
de trouver les équivalents d'un produit colorant, quel qu'il soit, d'une marque à
l'autre et de connaitre sa composition réelle si ce n'est pas un secret industriel .
4
A partir de la publication de la deuxième édition entre 1956 et 1958, le Colour

Index est devenu une référence obligée pour la classication des colorants. En 1971,
la troisième édition a été publiée, complètement révisée. Ainsi tous les colorants
organiques et inorganiques sont classés selon trois concepts diérents [Gilabert,
2003] :
L'application tinctoriale. Chaque élément reçoit un C.I. Generic Name plus

un chire de série. Les colorants sont mis dans l'ordre alphabétique dans
trois volumes (1, 2 et 3) qui contiennent les données sur son application, les
résultats obtenus sur sa solidité (se référant ici à la résistance à l'altération)
et les entreprises qui les commercialisent. On distingue les types tinctoriaux
suivants (Tableau 1.1) :
3
www.colour-index.org Consulta 5/6/2008. Society of Dyes & Colourists, Bradford, UK.
4
www.dotapea.com/nomenclaturepig.htm Consulta 3/6/2008.
61
Tabla 1.1: Classication par l'application tinctoriale.
La structure chimique. Le volume 4 est formé de tous les colorants ayant une
structure connue. Chaque colorant a un C.I. constitution Number (CICM)
formé de 5 chires auquels s'ajoutent les propriétés des matériaux, la mét-
hode d'obtention et la bibliographie sur le colorant (Tableau 1.2).
62
Tabla 1.2: Classication par la structure chimique.
Le nom commercial. Le volume 5 est divisé en 3 parties. La première partie

est une liste des principaux fabricants des matériaux colorants ; la deuxième
est une liste de toutes les marques connues d'un même colorant sous son
C.I. Generic Name (CIGN), et la troisième partie comprend une liste alpha-
63
bétique de tous les noms commerciaux et sa relation avec son C.I. Generic
Namber, C.I. Constitution Number (CICN) et l'entreprise productrice.
Par exemple, l'Indanthren C.I. 69.800 a une application comme Food Pigment et
Vat, et correspond au Colour Index C.I. Vat blue 4 .
Tabla 1.3: Distribution des colorants textiles.
Il existe 22 noms commerciaux diérents ayant ce même Colour Index, mais il

est normalement connu sous le nom Blue Indanthren RS. Indanthren est le nom
64
commercial que BASF a donné aux colorants tina anthraquinoniques ayant une
haute solidité. En plus, on peut voir dans le Tableau 3 que selon la distribution
des colorants textiles une unique classe chimique peut contenir une grande variété
de classes tinctoriales. Par exemple, les colorants azoïques peuvent être acides,
basiques, directs, dispersés, mordants, pigments, réactifs ou solubles (Tableau 1.3).
1.4. Colorantes objeto de estudio

1.4.1. Colorantes naturales
Este trabajo se ha centrado, principalmente, en la caracterización e identi-
cación de colorantes orgánicos naturales usuales en documentos grácos, y en
colorantes orgánicos sintéticos empleados para el tinte de textiles y para la colo-
ración del almidón que forma la base de color de los primeros dispositivos a color
llamados autocromos.
1.4.1.1. Colorantes naturales para escritura y decoración

La cantidad de colorantes naturales que se ha empleado a lo largo de la historia
en textos y decoraciones de documentos grácos es muy amplia, por lo que se marcó
un criterio de selección de los colorantes objeto de estudio del capítulos 2, 3 y 6,
basándose en los siguientes puntos:
Colorantes de naturaleza orgánica habituales en la escritura y decoración de

documentos.
Colorantes que han sido usados de manera habitual en el marco cronológi-

co de las colecciones documentales sobre las que se aplicarán los métodos
desarrollados.
Colorantes estudiados en profundidad durante la realización de la anterior

Tesis Doctoral.
Colorantes de relativa facilidad de obtención y de habitual comercialización.
Atendiendo a estas razones, la relación de los colorantes seleccionados en la Tesis

Doctoral previa a la que está ligada esta memoria, se ha añadido el rojo de madera
de Brasil. En la siguiente tabla se recogen los datos fundamentales de los colorantes
65
seleccionados. Estos son: rojo de Rubia, azul de índigo, amarillo de azafrán, rojo
de carmín, amarillo de goma guta y rojo de madera de Brasil.
Tabla 1.4: Colorantes naturales seleccionados.
66
Rojo de Rubia
El rojo de rubia, o de la raíz de rubia procede de la planta Rubia tinctorum
L., de la familia de las Rubiaceas, crece en el sur de América y en Europa. Es,
quizá, uno de los colorantes más antiguos descrito por Plinio, Herodoto y Discó-
rides valorado, especialmente, en la Edad Media. El nombre habitual que suele
darse al colorante obtenido de esta raíz es rubia, madder o rojo de granza. Sus
agentes colorantes son el alizarin (Figura 1.12) y el purpurín (Figure 1.13), ambos
del grupo de las antraquinonas [Puchalska y col., 2003]. El alizarín, de tonalidad
amarillenta, es el componente principal de esta planta, especialmente sensible al
pH. La tonalidad del purpurín, tiende a ser rosácea y su extracción debe hacerse
a temperatura baja para evitar que se oscurezca.
Figura 1.12: Estructura química del alizarín.
Figura 1.13: Estructura química del purpurín.
67
Azul de índigo
El azul de índigo, por su naturaleza, puede considerarse como pigmento o co-
lorante, ya que es un azul de origen orgánico vegetal, insoluble en agua, pero que
no necesita mordientes para teñir, depositándose en forma de partículas micros-
cópicas entre las bras de un soporte. Procede de la planta conocida Indigofera
tinctoria 5 . Contiene indirrubina o rojo de índigo, indihumina o pardo de índigo,
sustancias gelatinosas, materiales nitrogenados y sales minerales, silicato, calcio,
potasio, magnesio, hierro, etc [Sainsbury, 1991]. El componente principal es el
indigotín (Figura 1.14). El color se extrae de las hojas de esta planta. La hoja
º
se macera en un baño alcalino a 50 C hidrolizando el glucósido natural incoloro
llamado indicán que dará el color, consiguiendo una solución incolora por esta hi-
drólisis enzimática. Esta solución, una vez escurrida, se deja fermentar, en contacto
con el aire se oxida y se vuelve insoluble produciendo el colorante azul conocido
como índigo o añil [Balfour-Paul, 1998].
Figura 1.14: Estructura química del indigotín.
5
Familia de las Leguminosas.
68
Amarillo de azafrán
El amarillo de azafrán se extrae de los estigmas de la or del azafrán o Croccus
Sativus L6 . El componente que da el color al azafrán son las crocinas, una familia
de inusuales carotenoides solubles en agua. Son ésteres mono y di-glicosilados
de la crocetina, donde D-glucosa y D-gentobiosa se encuentran como residuos
carbohidratos. El digentobiosil éster de crocetina llamado crocetín (Figura 1.15)
es el componente mayoritario [Lozano y col., 1999]. El amarillo obtenido con el
azafrán es muy brillante y apreciado desde épocas antiguas.
Figura 1.15: Estructura química del crocetín.
Rojo de carmín
El rojo carmín, procedente de la cochinilla ( Dactylopius coccus )7 o el Kermes,
es uno de los colorantes más apreciado desde la antigüedad. El componente prin-
cipal de la cochinilla es el ácido carmínico, un ÿ-C-glicopiranosil derivado de la
antraquinona [Wouters y Verhecken, 1989] que se encuentra alojado en la zona del
abdomen de los insectos hembra, y puede dar dos tonalidades, un púrpura o un
escarlata brillante (Figura 1.16). Se extrae directamente del insecto disecado en
un baño de agua caliente.
6
Familia de las Iridáceas.
7
La cochinilla también llamada grana de cochinilla o cochinilla del carmín es un insecto
parásito de distintas plantas como pueden ser el cactus.
69
El ácido carmínicocambia fácilmente de coloración dependiendo del pH del

medio, pasando de un amarillo anaranjado en medio ácido hasta el violeta en
medio básico.
Figura 1.16: Estructura química del ácido carmínico.
Amarillo de goma guta

8
El amarrillo de goma guta se extrae de una variedad del árbol de la Garcinia .
Su componente principal, y el que le conere el color amarillo, es el ácido gamboico
[Montagna y Pigmenyo, 1993.] (Figura 1.17). Debido a su aspecto transparente y
su tonalidad amarilla clara poco cubriente, ha sido muy empleado en veladuras y
corladuras aunque más tarde se sustituyó por colorantes más resistentes y menos
tóxicos.
Figura 1.17: Estructura química del ácido gamboico.
8
Familia de las Clusiaceae.
70
Rojo de madera de Brasil

El rojo de la madera de Brasil o Brazilwood procede del árbol Caesalpinia
sappan L., aunque erróneamente a todos los rojos procedentes de maderas rojas
tropicales se les ha llamado en Europa Brazilwood o madera de Brasil [Manhita y
col., 2013]. Los principales constituyentes de este colorante son los homoisoavo-
noides brazilina y brazileina.
Es interesante destacar que el brazilín es el constituyente principal en el pig-
mento crudo, y que el brazileina puede ser aislado en grandes cantidades cuando el
extracto orgánico se expone al aire y la luz, resultado de la oxidación del hidroxyl
del brazilina al grupo carbonil [Oliveira, 2002]. Ambos compuestos (Figura 1.18 y
1.19) son tetracíclicos, con dos anillos aromáticos, una pirona y un anillo de cinco
miembros.
Figura 1.18: Estrudctura química de brazilina.
Figura 1.19: Estructura química de brazileina.
71
1.4.2. Colorants sintéticos

La terminologie des colorants organiques synthétiques est fort compliquée parce
qu'aucune règle ne précise leur appellation [Barnett, 2007]. Jusqu'en 1963, il y
avait environ 25000 marques de colorants correspondant à 5000 espèces chimiques
dénies. On suppose qu'actuellement ce nombre est plus élevé.
Le fait qu'un même colorant peut être fabriqué par de nombreux concurrents
qui le vendent chacun sous une désignation commerciale diérente est bien connu.
De plus, un fabricant peut vendre un même colorant sous plusieurs marques dis-
tinctes suivant l'usage auquel il le destine : teinture d'une bre, textile, coloration
de vernis, de matières grasses, etc.
On ne peut pas désigner les colorants du nom de leur formule chimique parce
que, d'une part, c'est très compliqué pour les utilisateurs et les chimistes et, d'autre
part, les fabricants de colorants ne veulent pas divulguer le secret de la constitution
de leurs produits .
La désignation des premiers colorants rappelle leurs nuances ou le nom de

leur inventeur :
Mauvéine / Fuchsine
Violet de Lauth / Violet de Hofmann
Plus tard, ils vont porter des noms de colonies :
Rouge Congo / Noir Zambésie
Parfois l'appellation du colorant met en évidence son emploi principal, ses

propriétés tinctoriales ou ses principales solidités :
Ecarlate au gras
Rouge pour laine
Rouge Lumière
Le plus souvent la marque choisie est absolument arbitraire :
Bleu Benzo
Le nom du colorant est en général suivi d'une lettre : J, R, B, G, abréviation des

mots jaune, rouge, bleu et du mot allemand Gelb (jaune). Cette lettre peut être
72
précédée d'un chire : 1, 2, 3. . . ce qui donne une indication sur la nuance du

colorant. Ainsi, un rouge 3 J est plus jaunâtre qu'un rouge 2 J ou qu'un rouge J.
En particulier, pour le colorant réactif Drimarene, fabriqué par Sandoz en 1959,
le nom est suivi d'une lettre qui certie son type de groupe réactif monofonctionnel
: K ou R pour Diuorochloropyrimidine ou X ou Z pour Trichloropyrimidine.
Par exemple (Figure 1.20):
Nom : Ecarlate drimarene R 3G
Figura 1.20: Flacon d'un colorant rouge de la collection de Verviers.
Description : Colorant réactif (. . . drimarene. . . ) rouge (Ecarlate. . . ), fabri-

qué par Sandoz (ou Ciba ou Novartis) (. . . drimarene. . . ) en compagnie
d'un groupe réactif monofuntionnel (. . . R. . . ) avec une coloration nale très
(. . . 3. . . ) jaunâtre (. . . G) .
1.4.2.1. Colorantes sintéticos para autocromos

Los autocromos son los primeros artefactos fotográcos que proporcionaban
una imagen en color. La base solía ser un cristal (que más tarde se sustituyó por
una base plástica) sobre la que se colocaba una trama de pequeños gránulos de
almidón coloreado con colorantes orgánicos sintéticos. La mayor parte de estos
colorantes fueron introducidos por la industria química con nes comerciales de
varios campos (no exclusivamente artísticos). Para preparar las bases que daría
lugar a la imagen en color, había que preparar tres lotes de almidón coloreado en
violetas, naranjas y verdes. La combinación de estos tres colores debía crear la luz
blanca ya que el color nal se obtenía por síntesis aditiva del color. Uno de los
aspectos más complejos durante el desarrollo de estos prototipos fue conseguir el
teñido exacto y duradero de la fécula aunque Louis Lumière llegó a armar que
73
la elaboración de esas soluciones tintoriales fue simple en comparación con otros

problemas técnicos que se plantearon en la elaboración de las placas [Lavédrine
y Gandolfo, 2009]. Los colorantes iniciales propuestos por L. Lumière se basaron
en los empleados para la realización de ltros fotográcos y fueron: violeta cristal,
azul de metileno, tartrazina, azul carmín, eosina y rosa de Bengala. Pero seguía
siendo un misterio el grupo de colorantes usados por la empresa de los hermanos
Lumière hasta que Seyewetz, químico que trabajó con los hermanos Lumière, es-
cribió ils sont teintés avec des colorants basiques qui doivent fournir des teintures
d'un bel éclat. On peut employer notamment, pour obtenir les teintes oragées,
vertes et violettes, des mélanges composés avec l'érythrosine, la tartrazine et le
bleu carmin dont la solidité à la lumière est pratiquement très bonne, grâce à un
vernis protecteur dont on les recouvre pour les isoler de l'émulsion sensible et du
contact de l'air . En este texto, además de enumerarse algunos de esos colorantes,
se observa el interés de los fabricantes por su conservación [Seyewetz, 1939]. Más
tarde se descubrió una confusión sobre el azul carmín debido a una errónea traduc-
ción, y gracias a este dato junto con más escritos de la época, en 1908 se conocía
el uso de los siguientes colorantes: violeta cristalizado, tartrazina, eritrosina J.,
azul patentado (azul carmin) y verde solido nuevo cristalizado 3B. La evolución y
renovación de la lista de colorantes siguió hasta 1929 apareciendo más información
en notas manuscritas y en registros de empresas recuperados durante el cierre de
muchas empresas. A causa de este trasiego y del secretismo por las patentes, la
única forma de conocer los colorantes que realmente conforman una base fotográ-
ca autocroma es realizar un análisis de los elementos. La selección del grupo de
colorantes sintéticos que pudieron ser empleados en estas bases fotográcas y que
son objeto del capítulo 5, se ha basado en las siguientes fuentes bibliográcas.
Publicaciones sobre el uso de los colorantes en autocromos durante el proceso

de elaboración.
Revelaciones de Seyewetz.
Información recopilada por los recientes trabajos de Lavédrine y Gandolfo

basada en los archivos de los hermanos Lumière.
Por lo tanto, los colorantes seleccionados fueron los siguientes :
74
Colorantes catiónicos:
Azul de metileno (Methylene blue) (MB)
Violeta cristal (Crystal violet) (CV)
Verde brillante (Brillant green) (BG)
Auramina O (Auramine O) (AO)
Crisoidina G (Chrysoidine G) (CG)
Violeta de etilo (Ethyl violet) (EV)
Rodamina B (Rhodamine B) (RHB)
Rodamina 6G (Rhodamine 6G) (RH6G)
Tioavina T (Thioavin T) (TT)
Azul Basonyl (Basonyl Blue) (BB)
Azul 810 Flexo (Flexo Blue 810) (FB)
Azul Victoria R (Victoria blue R) (VBR)
Auramina G (Auramine G) (AG)
Azul Victoria B (Victoria Blue B) (VBB).
Colorates aniónicos:
Eritrosina B (Erythrosine B) (ERB)
Azul patente VF (Patent Blue VF) (PBVF)
Eosina Y (Eosin Y) (EY)
Eosina B (Eosin B) (EB)
Crisofenina (Chrysophenine) (CH)
Diidouoresceina (Diiodouorescein) (DII)
Rojo Bengal (Rose Bengal) (RB)
Azul patente V (Patent Blue V) (PBV)
Eritrosina B:2 (Erythrosine B:2) (ERB2),
Sus estructuras químicas se representan en las siguientes guras (Figura 1.21 y

1.22):
75
Figura 1.21: Estructura química de los colorantes catiónicos seleccionados emplea-

dos en autocromos.
76
Figura 1.22: Estructura química de los colorantes aniónicos seleccionados emplea-

dos en autocromos.
77
1.4.2.2. Les colorants synthétiques pour textiles

La collection de colorants de Verviers comporte plusieurs milliers d'échantillons
au total, ils étaient utilisés pour les études de teintures, coloris et impression. Il y a
probablement plus de 7000 produits chimiques, ainsi que de nombreux échantillons
textiles (tissus, ls, . . . ) Tous les échantillons répertoriés ont une numérotation de
la forme BbPp (produit n º p dans le bac nº b). Ainsi, le bac nº 6 compte 46
produits (ou échantillons), numérotés de B6P1 à B6P46. Les 40 bacs (soit 22 % de
l'ensemble) inventoriés ont été étiquetés et numérotés de 1 à 40.
Pour cette étude (chapitre 4) nous avons sélectionné un groupe de colorants
qui répond aux caractéristiques suivantes :
Couleur : rouge
Colorant en poudre
Entreprise d'origine : Geigy, Ciba et Sandoz
Parmi tous ces produits, certains se trouvaient dans les 32 premiers bacs qui con-
tiennent une grande variété de couleurs : bleu, brun, gris, jaune, noir, orange, rose,
vert, violet et rouge ; certains dans les bacs 33 à 40, qui contiennent exclusivement
des produits rouges. Au total, 1185 produits dans les 40 bacs ou nous dénombrons
440 produits rouges.
Lors de la sélection des produits rouges pour cette étude, nous avons groupé
les rouges provenant des entreprises Geigy, Ciba et Sandoz parce qu'ils correspon-
dent aux principales marques de la collection et parce que Ciba, Geigy et San-
doz s'associeront plus tard à la Société Novartis, ce qui nous permettra d'étudier
l'évolution historique de ces produits colorants.
Tous les rouges brillants sélectionnés correspondent à la zone spécique [2.5R
4/8, 4/10, 4/12 ; 5R 4/10, 4/12, 4/14] dans le système Munsell. A la suite de cette
sélection, le groupe de colorants qui fera l'objet de ce travail forme un ensemble
de 45 rouges.
On a répertorié les échantillons dans un chier où chaque ligne du chier co-
rrespond à un échantillon. Chaque échantillon est décrit dans le tableau suivant
par ordre de numération. La colonne Référence - Data correspond à la numé-
ration du produit. La colonne Nom correspond aux nom du produit chimique
indiqué sur l'étiquette d'origine. La colonne Fabricant correspond au nom du
78
fabricant, qui gure sur l'étiquette d'origine du produit. La colonne Colour Index
correspond à la référence de colour index generic name indiquée sur une autre
étiquette non originale que contiennent tous les acons et qui ont probablement
été ajoutés par l'Institut Supérieur Industriel Textile (Tableau 1.5 et 1.6).
Tabla 1.5: Information basique sur les colorants textiles sélectionnés I.
79
Tabla 1.6: Information basique sur les colorants textiles sélectionnés II.
1.5. Técnicas analíticas utilizadas para el desarrollo de

metodología analítica
La determinación por medio de análisis químicos de la naturaleza de los ma-
teriales colorantes es una tarea compleja debido a la cantidad y composición de
los pigmentos y colorantes. El porcentaje de colorante o pigmento presente en
una capa pictórica de escritura o decoración es muy baja. Las cantidades dispo-
nibles para su análisis son realmente pequeñas. La composición de los colorantes
naturales diere según sea su lugar de origen, los procedimientos de extracción
empleados y el modo de aplicación. Además sus propiedades físico-químicas pue-
den alterarse fácilmente con el paso del tiempo, por el mal estado de conservación
80
o por intervenciones de restauración.
En el año 2001, M. Clarke [Clarke, 2001] publicó una revisión de la evolución

de las técnicas empleadas para la identicación de pigmentos y colorantes en ma-
nuscritos medievales europeos. El primero y más sencillo de los exámenes que se
realizaba era una inspección visual comparada con muestras conocidas. En algunas
ocasiones se llegaba a recurrir, incluso, a sencillos exámenes químicos a la gota.
El estudio era tan rudimentario que en la mayoría de los casos se caía en interpre-
taciones erróneas. En 1924, Laurie comenzó a realizar los primeros exámenes de
pigmentos in situ con microscopio, y unos años más tarde, en 1949, analizó unas
pequeñas muestras procedentes de manuscritos con análisis microquímicos. Otras
de las primeras técnicas analíticas habituales fue el análisis por espectrometría
visible, aunque presentaba un gran problema: un mismo espectro visible podía
corresponder a pigmentos o colorantes con composición química distinta e incluso,
el paso del tiempo, entre otras alteraciones, podían modicar el espectro visible
del colorante o pigmento. En 1968 Flieder [Flieder, 1968] dio un gran paso en este
campo al usar la cromatografía en capa na (TLC) para identicar aglutinantes,
espectroscopia de emisión atómica para identicar sustancias metálicas y espec-
trometría infrarroja (IR) para colorantes orgánicos, aunque este último presentaba
grandes problemas por las impurezas, los aglutinantes y los diferentes soportes.
Las técnicas empleadas para el estudio analítico de pigmentos y colorantes

en documentos grácos se han visto incrementadas recientemente. Guineau y col.
[Guineau y col., 1998] examinaron los pigmentos en un manuscrito francés del si-
glo XV usando UV-vis con reexión. Wallert [Wallert, 1986] describió el uso de
UV-vis en disolución con difracción de RX (XRD) y espectrometría infrarroja pa-
ra la identicación de rojos orgánicos en tres manuscritos italianos del siglo XV.
Burandt [Burandt, 1994] hizo una discusión del uso de la espectrometría infrarro-
ja por transformada de Fourier (FTIR) para identicar tintas en dibujos. Clark
y Gibas [Clark y Gibas, 1998] también examinaron pigmentos en un manuscrito
sirio-bizantino del siglo XIII usando espectrometría Raman. La espectrometría de
uorescencia y la espectrometría de uorescencia tridimensional han sido usadas
para los análisis de amarillos y púrpuras orgánicos por Quandt y Wallet [Quandt,
1998]. La cromatografía en capa na (TLC) ha sido a menudo empleada para la
separación de componentes químicos de colorantes naturales, pero la detección,
identicación y análisis cuantitativo realizado son limitados. Estos límites se han
ido reduciendo signicativamente aplicando cromatografía líquida de alta resolu-
81
ción (HPLC) con detección UV-vis. Vest y Wouters [Vest y wouters, 1999] usaron
estas técnicas para identicar lacas, indigos, madder y taninos en 54 encuaderna-
ciones de manuscritos y libros impresos datados en época medieval hasta el nal
del siglo XVIII. Algunos autores citan el uso de aditivos para mejorar la uores-
cencia de los componentes e incrementar la sensibilidad en HPLC. Recientemente
se han realizado estudios para comparar la mejora entre el análisis de colorantes
por HPLC-PDA y UHPLC-PDA [Serrano y col., 2013]. La electroforesis capilar
acoplada a distintos detectores (PDA) o ESI-MS se empleó, desde hace algo más
de una década, para la identicación de antraquinonas, agentes colorantes presen-
tes en la composición de las cochinillas, las lacas rojas y el madder [Puchalska y
col., 2003].
F. Déroche [Déroche, 2000], en su manual de codicología sobre manuscritos de

escritura árabe, recoge la recopilación de los resultados obtenidos en el análisis
de las tintas de una colección de coranes custodiados por la Biblioteca Nacional
de Francia. Las técnicas analíticas empleadas en ese caso fueron la espectrometría
de uorescencia de rayos X y la espectrometría de absorción en reexión difusa.
Otro trabajo de reciente publicación y en relación directa con la identicación
de los materiales colorantes sobre manuscritos de origen andalusí es el artículo
sobre el análisis de las tintas de la colección de manuscritos árabes del Archivo
de la Abadía del Sacromonte de Granada donde se aplicó HPLC-PDA, ED-PDA
y SEM-EDX para su identicación [Espejo y col., 2008]. Actualmente se están
adaptando técnicas de análisis no destructivas para la identicación de materiales
artísticos con gran éxito y efectividad, apoyándose en la mayoría de los casos, en
la combinación de varias técnicas o el uso puntual de técnicas microdestructivas
para la correcta interpretación de los datos. Las técnicas más comunes son la
uorescencia de rayos X (FRX) y la espectroscopía Raman para la identicación de
pigmentos. Ricciardi y Delaney [Ricciardi y Delaney, 2011] combinaron imágenes
obtenidas por espectroscopía de reectancia y luminiscente junto con espectroscpía
de reectancia de bra óptica (FORS) y uorescencia de rayos X (XRF) para
identicar el mapa de pigmentos usados en un manuscrito iluminado de la colección
Rosenwald (Galería Nacional de Arte, Washington DC). Similar combinación con
FORS, XRF y espectroscopía Raman fue empleada por Aceto y col. [Aceto y
col., 2014] en el año 2014 para la caracterización de colorantes en manuscritos
iluminados. Gulmini y col. [Gulmini y col., 201e] señalaron la efectividad de estas
técnicas junto con Vis-FORS para obtener un estudio preliminar de los coloranes
82
empleados, limitados por la concentración de estos en las muestras. En esta Tesis

Doctoral, las técnicas ópticas y separativas no destructivas y microdestructivas
que se han empleado para el análisis de los materiales han sido:
Técnicas ópticas:
Colorimetría
Espectroscopia Uv-vis
Espectrometría de absorción por reexión difusa
Espectrometría de uorescencia de rayos X
Microscopía electrónica de barrido con microanálisis por difracción de rayos

X (SEM-EDX)
Difracción de rayos X junto con espectrometría de uorescencia de rayos X

portátil (XRF-XRD)
Espectroscopia micro-Raman
Técnicas separativas
Cromatografía líquida de alta resolución acoplada a un detector de diodos

en línea (HPLC-PDA)
Electroforesis capilar acopladas a un detector de diodos en línea (CE-PDA)
Electroforesis capilar acoplada a un detector de masas con inonización por

electronebulizador (CE/ESI-MS)
1.5.1. Técnicas ópticas

1.5.1.1. Colorimetría
´
Desde el año 1931, la CIE (Comission Internationale de l Éclairage) estableció
que los datos de un color podían ser perfectamente representados por tres coe-
cientes solamente, datos que permitirían caracterizar universalmente un color.
A partir de entonces, se puede encontrar una gran variedad de sistemas colori-
métricos como son el espacio RGB; el espacio de color CIE XYZ, que fue denido
con el n de corregir ciertos defectos del espacio RGB gracias a los trabajos de
Judd; el espacio CIE L*u*v*, denido como una modicación menor realizada
83
por Eastwood del espacio U*V*W* y el espacio CIE L*a*b* o el espacio L*C*h*,
obtenidos a partir del espacio L*a*b* o L*u*v* entre otros .
Gracias al sistema colorimétrico CIE 1931, se puede denir el color de un objeto

por tres coordenadas X, Y y Z, llamadas componentes tricromáticos, basadas en un
iluminante y un observador estándar CIE, que permite obtener los valores numéri-
cos precisos de los tres factores de la percepción visual, de una manera totalmente
objetiva e independiente de la cualidad del observador humano. Este sistema X,
Y, Z, es la base cientíca de la colorimetría moderna. Más tarde, en 1976, se creó
el espacio CIELAB y gracias a sus valores L*a*b* o L*C*h* se pasó a un nuevo
espacio mucho más simple de localización pero igualmente uniforme. El sistema
CIELAB es actualmente el más utilizado en colorimetría [Chrisment, 2000]. Para
el estudio de colorantes textiles, se ha empleado el espacio L*a*b* descrito a conti-
nuación. Estos sistemas diferentes de coordenadas cromáticas son empleados para
identicar y apreciar un color y sus tintes, y para apreciar la proximidad entre
dos colores. Permite, por ejemplo, saber si dos colorantes de composición diferente
son percibidos como un solo color. Los parámetros a determinar para realizar las
medidas colorimétricas son:
El iluminante estándar
La CIE ha establecido las propiedades espectrales de varios iluminantes están-
dar (A, C y D65 son los más comunes) correspondientes a tres iluminaciones
bien particulares: iluminante A representa la luz de una lámpara de lamentos de
tungsteno, iluminante C corresponde a la luz media de día y D65 corresponde a
la luz media de día incluyendo los datos UV. Otros iluminantes estándar pueden
ser E (equienergético) o F (para estudiar lámparas uorescentes).
El observador estándar
Igualmente están establecidas las características para un observador estándar
representativo de la media de la población. Se creó, inicialmente, en observador
2° que más tarde se sustituyó por observador 10° con el n de obtener un
° °
sistema más representativo de un observador real. Emplear un observador 2 ó 10
indica el ángulo sobre el cual el color es visto por el observador en relación a la
normalidad.
84
El espacio CIE L*a*b*

En el espacio L*a*b*, L* representa la claridad (luminosidad de negro a blan-
co), y los componentes a* y b* representan, respectivamente, la oposición de los
colores verde-rojo y la oposición de los colores azul-amarillo (Figura 1.23.
Figura 1.23: Representación gráca del espacio L*a*b*.
1.5.1.2. Espectrometría Uv-vis

La espectrometría Uv-vis es un método de análisis óptico que ofrece informa-
ción sobre la absorbancia de las sustancias en las longitudes de onda del UV y
visible. Los espectros de absorción pueden obtenerse por la radiación ultravioleta,
(UV), visible (vis) e infrarroja (IR) [Cela, Lorenzo y Casas, 2002].
El objetivo de la espectroscopía UV-vis es medir la longitud de onda a la cual
una sustancia absorbe la máxima radiación además de medir la intensidad de dicha
radiación absorbida. El tono percibido es complementario del color de la radiación
absorbida, es decir, si un objeto nos parece de color rojo es porque el ojo sólo
percibe la luz arrojada reejada por el objeto, que absorbe todas las longitudes de
ondas excepto del rojo. Cuando se altera el agente colorante, la banda de absorción
puede desplazarse hacia el violeta o el rojo. Cuando la absorción se desplaza a
85
mayores longitudes de onda se dice que se ha producido un efecto batocrómico,

mientras que si disminuye la longitud de onda de máxima absorción se produce un
efecto denominado hipsocrómico. Habrá que tener además en cuenta, que cuanto
mayor sea el ancho y alto de banda mayor será la intensidad del color.
El equipo
Un espectrofotómetro permite medir la absorbancia de una disolución homo-

génea sobre una región de datos espectrales o a una longitud de onda especíca.
El espectrofotómetro comprende (Figura 1.24):
Una fuente de radiación de intensidad constante con diferentes fuentes de

iluminación: luz blanca (luz policromática) de tipo tungsteno y luz Uv con
una lámpara de deuterio.
Un monocromador que separa la banda de longitud de onda deseada del

resto del espectro y la dispersa al compartimento de la muestra.
Un compartimento para la muestra: una cubeta transparente de cuarzo don-

de se coloca la disolución a estudiar.
Una célula fotoeléctrica que restituye una corriente proporcional al número

de fotones recibidos y un detector electrónico de tipo fotodiodo. Su respuesta
es proporcional a la corriente eléctrica y permite una medida relativa de la
intensidad luminosa.
86
Esquema
Figura 1.24: Esquema de un espectrofotómetro Uv-vis.
El equipo de espectrofotometría empleado permite obtener un espectro de ab-

sorción continua entre 190 y 1100 nm con un intervalo de 2 nm, aunque las medidas
obtenidas en la región espectral del infrarrojo cercano (NIR) tienen un error ele-
vado. Las medidas se obtienen por transmisión, son rápidas y el equipo es de uso
sencillo utilizado, principalmente, para conocer los datos cualitativos y cuantita-
tivos de una disolución coloreada.
El espectro visible y UV-vis

El espectro es la representación gráca de la absorción de una muestra en
función de su longitud de onda (Figura 1.25). Los ejes de coordenadas del espectro
visible son: Longitud de onda: nm (eje X); % de absorción (eje Y).
87
Figura 1.25: Modelo de espectro Uv-vis-IR.
Según la ley de Beer-Lambert, la absorbancia de una disolución es proporcional

a la concentración de la sustancia en disolución, a condición de desplazarse a la
longitud de onda a la cual la sustancia absorbe los rayos luminosos. Es por lo que
la longitud de onda está reglada en función de la sustancia por la cual se conoce
la concentración relativa [Skoog y West, 1989].
Las sustancias colorantes tienen una banda de absorción característica, aunque
una misma banda de absorción puede corresponder a colorantes con el mismo tono,
claridad y saturación aunque de orígenes diferentes. El espectro visible o UV-vis
de una sustancia colorante no ofrece información sobre el origen del colorante, pero
el espectro será una característica fundamental en el estudio para su identicación
[Skoog, West, Holler y Crouch, 2005].
Es interesante destacar el hecho de que un compuesto coloreado no comporta
necesariamente que sus máximos de absorción estén situados sobre la zona visible.
Existe, en efecto, numerosas sustancias donde el máximo de absorción se encuentra
en la zona ultravioleta, aunque también presenten bandas de absorción en la región
visible del espectro [Hedayatullah, 1976].
Por lo tanto, el estudio por espectrometría UV-vis de todos los colorantes es
un complemento a los datos obtenidos mediante espectrometría de absorción por
reexión difusa en la región visible.
88
1.5.1.3. Espectrometría de absorción por reexión difusa
Las espectrometría de absorción por reexión difusa consiste en la medida

de la diferencia de intensidad de un haz de luz blanca antes y después de que
interaccione sobre la supercie del color que se quiere analizar, midiéndose la luz
que se reeja de manera difusa [Skoog y West, 1989]. La radiación remitida puede
estar formada por radiación de reexión especular (el ángulo de reexión es igual
al ángulo de la frecuencia) o la radiación de reexión difusa (en todos los demás
ángulos) como es este caso.
El equipo
Se ha trabajado con un equipo de espectrometría de absorción portable Ocean

Optics. El equipo básico de espectrofotometría está compuesto por (Figura 1.26):
Una fuente de luz que puede ser monocroma o no.
Las sondas ópticas; La primera ilumina la supercie a analizar (entorno a

2
1mm ). La segunda sonda, anular, recibe la luz reejada por la muestra.
Un detector.
El espectrómetro Ocean Optics se compone de una ranura ja que dispersa la luz.
El sistema de detección está compuesto por un detector ccd
9 (2048).
El esquema del dispositivo básico es el siguiente:
9
Dispositivo de carga acoplado, en inglés charge-coupled device.
89
Figura 1.26: Esquema básico de un equipo de absorción por reexión difusa.
El espectro de absorción por reexión difusa y su derivada

El análisis de un espectro visible y su primera derivada permite conocer los
puntos principales, mínimos y máximos, de la curva de absorción del color en esa
zona del espectro (Figura 1.27).
Figura 1.27: Ejemplo de representación gráca de un espectro de absorción por

reexión difusa y su primera derivada.
90
A pesar de la importante información que ofrece el sistema Ocean Optics, las

grácas obtenidas no caracterizan completamente un colorante. Para completar
esta información se hizo necesario el uso de la espectrometría UV-vis, que apor-
ta información relevante también de la zona ultravioleta del espectro. Los datos
obtenidos por el sistema Ocean Optics y por espectrometría UV-vis en la zona
visible del espectro son ligeramente diferentes debido a que las medidas obtenidas
por el último sistema se realizan de una muestra en disolución. En esta ocasión
se han empleados los datos de espectrometría de absorción por reexión difusa
para el estudio de la zona visible, porque estos han sido obtenidos con una mayor
resolución debido a las características de los sistemas de medida, y los datos de la
espectrometría UV-vis para la exploración de la zona ultravioleta.
1.5.1.4. Espectrometría de uorescencia de rayos X
La espectrometría de uorescencia de rayos X (XRF) es una técnica espectros-

cópica de análisis químico elemental, no destructivo, que permite un análisis de la
supercie (en torno a algunos micrómetros de profundidad) utilizando la propie-
dad física de la materia denominada uorescencia de rayos X [Skoog, West, Heller
y Crouch, 2005].
Emplea la emisión secundaria (o uorescente de radiación X) que se genera al

excitar una muestra con una fuente de radiación X. Esta radiación X incidente (o
primaria) expulsa electrones de las capas interiores del átomo (Figura 1.28). Cuan-
do un fotón X encuentra un átomo, hay probabilidad de desplazar un electrón del
núcleo por el efecto fotoeléctrico. A partir de aquí se crea un movimiento de elec-
trones; los procedentes de capas más externas ocupan los lugares que han quedado
vacantes, y el exceso energético resultante de esta transición se disipa en forma de
radiación X uorescente o secundaria, con una longitud de onda característica que
depende del gradiente energético entre los orbitales electrónicos implicados y la
intensidad directamente relacionada con la concentración del elemento de la mues-
tra. Los electrones pasan de un nivel dado fundamental a un nivel de excitación,
aunque este paso es inestable.
91
Figura 1.28: Esquema de la acción de la radiación incidente de los rayos X prima-

rios.
Los electrones de la corteza electrónica de los átomos se sitúan en los niveles

de energía correspondientes a las capas K, L, M, etc, subdivididas en subcapas.
Cuando un electrón, bajo el efecto de un aporte de energía (rayos X), pierde
su nivel de energía inicial (Ex), se crea una laguna electrónica. Esta se puede
completar por un electrón proveniente de un nivel electrónico superior (Ey). La
desexcitación se acompaña de la emisión de una radiación electromagnética de
energía igual a la diferencia Ey-Ex. Esta emisión se traduce por un conjunto de
rayos de uorescencia característicos del elemento.
Esta uorescencia de rayos X que se analiza es un efecto característico de los
elementos de la materia, en la que la energía de rayos X corresponde exactamente
a la diferencia entre los dos niveles de energía.
El equipo
El equipo consta de un canal de uorescencia de rayos X de dispersión de
energía, compuesto esencialmente por (Figura 1.29):
92
Figura 1.29: Esquema descriptivo de la fuente de espectrometría de uorescencia

de rayos X.
Una fuente de excitación: Un tubo de rayos X equipado con un lamen-

to de tungsteno calentado por una corriente (cátodo) y un anticátodo de
molibdeno.
Un generador de alta tensión para alimentar la fuente de excitación.
Un detector y analizador: la señal es recibida por el analizador antes de

aparecer sobre el ordenador bajo la forma de un espectro de rayos X. Un
sistema de visión con una cámara y un láser permiten seleccionar la zona de
2
análisis (alrededor de 1mm ).
Esquema
El posicionamiento de la muestra en relación al detector se efectúa por ajuste
manual de un puntero láser ajustado con la ayuda de una cámara. Aunque el
equipo no permite detectar los elementos ligeros de número atómico inferior a 13,
se ha empleado para vericar si otros elementos de número atómico superior, como
los metales, pudieran haber sido empleados como base o aditivos de los colorantes,
además de que muchos colorantes poseen núcleo o átomos metálicos.
93
El espectro de rayos X
Los espectros de rayos X emitidos por la materia derivan de su exposición a
los rayos X resultantes del tubo y de las características de la composición de la
muestra. Analizado este espectro se puede deducir la composición elemental de la
muestra.
El ruido de fondo de la señal proveniente se debe esencialmente a dos fenóme-
nos:
La difusión Rayleigh de los rayos del tubo por la muestra: la muestra se

comporta como una salida especular que reenvía la señal del tubo sobre el
detector sin modicar la energía.
El efecto Compton: cambio de longitud de onda de la radiación electromag-

nética de alta energía al ser difundida por los electrones.
Figura 1.30: Espectro de uorescencia de rayos X.
En consecuencia se observa la señal de molibdeno (tubo de rayos X) como

ruido de fondo en todos los espectros (Figura 1.30).
94
La espectrometría de uorescencia de rayos X no permite determinar la forma

sobre la cual los elementos están ligados pero sí qué elementos están presentes.
1.5.1.5. Técnicas de análisis empleadas en colaboración con otros in-

vestigadores
Microscopía electrónica de barrido con microanálisis por energía dis-
persiva de rayos X
Esta técnica, la microscopía electrónica de barrido con microanálisis por ener-
gía dispersiva de rayos X (SEM-EDX), aporta gran información sobre sustancias
inorgánicas a partir de una cantidad mínima de muestra. Aporta información sobre
la composición química y una imagen morfológica en escala de grises. La imagen
morfológica ofrece una imagen tridimensional de la muestra debido a los electrones
secundarios que emergen como consecuencia de su barrido por un delgadísimo haz
de electrones.
También se puede obtener una imagen a causa de los electrones retrodisper-
sados registrable fotográcamente donde la densidad de los puntos blancos sobre
fondo negro reeja la abundancia de elementos inorgánicos sobre los orgánicos. A
su vez se puede obtener un espectro de cualquier punto de la muestra con el que,
una vez interpretada, se podrán identicar los componentes exactos de la muestra.
Se empleó la instrumentación del Centro de Instrumentación Cientíca de la
Universidad de Granada y el apoyo técnico de su personal especializado.
Espectrometría de difracción de rayos X / espectrometría de uores-

cencia de rayos X
Sistema portátil diseñado por los investigadores del laboratorio del Centre
de Recherche et de Restauration des Musées de France (C2RMF), que permite el
estudio in situ del patrimonio cultural realizando el análisis XRF-XRD simultáneo
localizado en un mismo punto sin necesidad de toma de muestra.
El análisis por XRF consiste en la emisión, por parte del material a analizar,
de rayos X secundarios característicos cuando ha sido excitado por el bombardeo
de rayos X de alta energía. Aporta información cualitativa y cuantitativa able
acerca de la composición supercial de los materiales (de hasta unas micras de
profundidad usando el prototipo mencionado).
95
El análisis por XRD aporta, por un lado, información sobre la estructura crista-
lina debido a la geometría de las direcciones de difracción que vienen condicionadas
por el tamaño y forma de la celdilla elemental del cristal, presente en una muestra;
y por otro lado, información sobre la composición interna, ya que la intensidad
de los rayos difractados están íntimamente relacionados con la naturaleza de los
átomos y las posiciones que ocupan en la red, por lo que su medida constituye la
información tridimensional necesaria para conocer la estructura interna del cristal.
Espectroscopia micro-Raman
Se trata de una técnica de microanálisis espectroscópica basada en los fenó-
menos de dispersión Raman de la luz monocromática generada por un láser en el
rango de luz visible, infrarrojo cercano o ultravioleta cercano. Puede llegar a apor-
tar información acerca de materiales inorgánicos y orgánicos presentes en obras de
arte, aunque la identicación de estos últimos suele presentar bastantes limitacio-
nes debido a los fenómenos de uorescencia.
El análisis fue realizado en colaboración con investigadores del Instituto de

Ciencias de los Materiales de Sevilla perteneciente al Consejo Superior de Investi-
gaciones Cientícas (CSIC).
1.5.2. Técnicas separativas

1.5.2.1. Cromatografía líquida de alta ecacia
La cromatografía líquida de alta ecacia (HPLC) es el tipo de cromatografía de
elución más versátil y ampliamente utilizada. Se emplea para separar y determinar
especies en diversos materiales orgánicos, inorgánicos y biológicos. Se utiliza una
fase móvil líquida y una fase estacionaria muy namente dividida.
El proceso de elución cromatográca consiste en introducir la muestra junto

con la fase móvil en la cabeza de la columna. A continuación se empieza a adicionar
la fase móvil de forma continuada arrastrando de esta manera la muestra a través
de la columna cromatográca. A partir de este momento, el analito que tenga
mayor interacción con la fase estacionaria se desplazará más lentamente (Figura
1.31). En el caso ideal, cada analito tendrá una velocidad distinta de elución y al
llegar al extremo de la columna, pasarán de forma individual por el detector.
96
Figura 1.31: Esquema del proceso de elución cromatográca.
El Equipo
Los componentes básicos de un equipo de Cromatografía líquida de alta ecacia
son los siguientes (Figura 1.32):
Figura 1.32: Esquema básico de un equipo de cromatografía líquida de alta ecacia.
Recipiente de fase móvil y sistemas de desgasicación y tratamiento de disol-

ventes: compartimento que contiene los recipientes de vidrio con los disolventes
97
que constituyen la fase móvil con un sistema de ltro y desgasicador que elimina
las partículas en suspensión de los líquidos y los gases disueltos [Cela y col. 2002].
Válvula de dosicación de disolvente: la válvula introduce automáticamente

líquidos de dos o más recipientes en proporciones que pueden variarse de manera
continua por lo que puede trabajarse con gradientes.
Sistema de bombeo: está formado por un sistema de bombas capaces de generar

una presión de ujo de hasta 6000 psi (libras por pulgada).
Sistema de inyección de la muestra: la muestra se inyecta en un bucle que

contiene la mezcla de disolventes diseñada. De ahí pasará a la cabeza de la columna
cromatográca. La cantidad de muestra que se inyecta se encuentra en el orden
de los microlitros.
Precolumna: situada delante de la columna cromatográca con un relleno de

las mismas características. Extrae las partículas y contaminantes de los disolventes
y muestras prolongando así la vida de la columna cromatográca.
Columna cromatográca: es el elemento esencial del sistema cromatográco.

La columna cromatográca contiene la fase estacionaria, posee un relleno de gel
de sílice generalmente y será en ella donde se realice la separación cromatográca.
Sistema de termostatización de la columna cromatográca: la columna debe

mantenerse en condiciones constantes de temperatura a lo largo de todo el análisis.
Con los cambios de temperatura se consigue variar la viscosidad de la fase móvil
y, por lo tanto, los parámetros que de ella dependan.
El sistema de detección empleado se desarrolla en el apartado 1.5.2.3.
El cromatograma
Los componentes de la muestra que han sido eluidos por la fase móvil, atravie-
san la fase estacionaria a distintas velocidades debido a las posibles interacciones
entre estos y dicha fase estacionaria. Desde ahí se dirigen al detector siguiendo una
distribución gaussiana que se recoge, por tanto, en forma de curva. Dichas curvas
se conocen como picos o bandas cromatográcos y su conjunto más la línea base
se denomina cromatograma (Figura 1.33). El cromatograma es la representación
gráca de la respuesta del sistema de detección y ofrece información cualitativa y
cuantitativa de la muestra.
98
Figura 1.33: Esquema básico de un cromatograma.
La información cualitativa se obtiene a partir del tiempo de retención (tR ) de

cada pico del cromatograma. Los picos cromatográcos son identicados por su
tR , que es el tiempo que tarda un analito en llegar al detector desde el comienzo
del análisis.
La información cuantitativa se obtiene a partir del área o altura de cada pico
que es proporcional a la cantidad de analito.
Parámetros cromatográcos
La resolución (RS )
La resolución nos da una medida cuantitativa de la capacidad de la columna
para separar dos analitos. Se basa en la relación entre la distancia que hay entre
los ápice de los picos y la anchura de los mismos. Se dene como:
2[(tR )B −(tR )A ]
RS = WA +WB
Donde:
W :anchura de pico
99
Factor de retención
La retención en cromatografía líquida relaciona el tiempo de permanencia del
soluten en la fase estacionaria con el tiempode permanencia del solutno en la
fase móvil y se mide usualmente mediante el denominado factor de retención (K)
denido como:
tR −tM tR
K= tM = t0M
Donde:
tR : tiempo de retención
tM : tiempo muerto
t0R : tiempo de retención corregido
Ecacia de la columna cromatográca

La efeicacia de una columna es el poder de separación o puricación de una
mezcla de líquidos miscibles. Esta se ve afectada por el grado de ensanchamiento de
pico que experimenta un componente a través de la columna y viene determinado
por la altura de plato (H) y el número de platos teóricos (N ).
El concepto de plato teórico se dene como la porción del lecho cromatográco
en la que se alcaza el equilibrio de distribución entre los analitos con la fase móvil
con la fase estacionaria.
Para determinar la ecacia de la columna se calcula el número de platos teóricos
(N ) y la altura equivalente de plato teórico (H) utilizado las siguientes ecuaciones
desarrolladas por Foley y Dorsey [Foley y Dorsey, 1983].
tR 2

N = 16 W
L L·W 2
H= N = 16t2R
Donde:
L: Longitud de la columna
H : Altura equivalente de plato teórico
100
1.5.2.2. Electroforesis capilar

La electroforesis capiarl es una técnica separativa que se dene como técnica
de separación en la que las sustancias a analizar se separan en función de su
diferente movilidad, en sentido y velocidad, bajo la acción de un campo eléctrico.
El medio en el que los analitos son separados se denomina medio electroforético.
Se trata de una disolución tampón por la que se conduce la corriente y mantiene
la carga eléctrica de los analitos. Estos se moverán a distintas velocidades por
esta disolución (medio electroforético) hacia el ánodo o el cátodo según su carga
eléctrica. Esta velocidad de migración es directamente proporcional a la movilidad
electroforética de la molécula, y además va a depender de la viscosidad del medio, el
campo eléctrico, la carga eléctrica neta de la molécula y el tamaño de la molécula.
Hay distintos modos operatorios en electroforesis capilar. El que se ha empleado
para el desarrollo de la identicación de los colorantes ha sido la electroforesis
en zona (CZE), que consiste en que el movimiento de las especies cargadas se
realiza a través de un capilar hueco por el que circula la disolución tampón que
contiene la muestra. Otras modalidades son la electroforesis capilar en gel (CGE),
isoelectroenfoque capilar (CIEF) e isotacoforesis capilar (CITP).
Fenómeno de migración
El movimiento de los analitos dependerá sobre todo de la carga eléctrica de la
molécula. Una molécula con carga positiva (un catión) migrará hacia el electrodo
con carga negativa (el cátodo) mientras que una molécula con carga negativa (un
anión) se moverá hacia el electrodo con carga positiva (el ánodo). Las moléculas
neutras no se verán inuenciadas por este tipo de movimiento. Los iones no sólo
se moverán dependiendo de la carga sino también de la masa de los mismos.
Así la relación carga/masa será un parámetro fundamental en el fenómeno de la
migración. La migración de las especies se da por dos fenómenos simultáneos: la
electromigración y la electroósmosis.
101
a) Electromigración
Consiste en la separación de las especies cargadas gracias a las diferencias en
las velocidades electroforéticas de cada una de las especies en función de su relación
carga/tamaño. Estas velocidades electroforéticas son directamente proporcionales
al campo eléctrico aplicado (V ) e inversamente proporcionales a la longitud total
del capilar (LT ) y viene dada por la expresión:
νe = µe LVT
donde:
νe :velocidad electroforética
µe :movilidad electroforética
µ
Igualmente, la movilidad electroforética ( e) de cada especie viene dada por:
e
µe = 6πηr
donde:
e :carga del soluto ionizado
η :viscosidad de la disolucion tampón
r :radio del soluto
102
Para medir la velocidad y la movilidad electroforética es necesario conocer el

tiempo que tarda un soluto en migrar desde el punto de inyección hasta el detector.
Este tiempo se denomina tiempo de migración y si sólo se diera el fenómeno de la
electromigración, su expresión sería:
2
LT LT
tM = νe µe V
donde:
tM :tiempo de migración
Despejando de esta expresión el valor de la velocidad o la movilidad electrofo-

rética, las expresiones resultantes son:
LD
νe = tM
LD
µe = L
tM VT
donde:
LD :Longitud del capilar hasta el detector
Por lo tanto, conociendo parámetros experimentales como el tiempo de mi-

gración, voltaje aplicado y dimensiones del capilar se puede conocer la velocidad
o movilidad electroforética de un soluto. Aunque los valores reales se obtendrán
teniendo en cuenta el otro fenómeno que ocurre en las separaciones electroforéticas
y que se denomina electroósmosis.
b) Electroósmosis
La electroósmosis es el movimiento de la disolución tampón a través del capilar
con respecto a una supercie cargada bajo la acción de un campo eléctrico. A esto
se debe el ujo electroosmótico (FEO) que va a depender de la composición del ca-
pilar y de la naturaleza de la disolución tampón. Los capilares que se han utilizado
− −OH) que se ionizan
son de sílice fundida. Sus paredes tienen grupos silanoles (Si
dando grupos que pueden estar cargados positivamente (SiOH
2+ o negativamente
−
(SiO ), o incluso neutros (SiOH), dependiendo del pH de la disolución tampón.
103
Para asegurar la carga negativa del capilar se pasa una disolución básica de
KOH o NaOH a una concentración aproximada de 0,1 M. La cargas positivas de la
disolución tampón serán atraídas por las cargas negativas de los grupos silanoles
formando una capa inerte de cationes denominada capa ja, que estará fuertemente
unida a la pared del capilar.
Sobre ésta, se adherirá otra capa de cationes ya que la anterior no es lo su-
cientemente densa como para compensar todas las cargas negativas. La segunda
capa de cationes está unida de manera más débil a la pared del capilar y se conoce
como capa móvil. El conjunto de estas dos capas forman la doble capa difusa. Al
aplicar un campo eléctrico, la capa móvil es atraída hacia el cátodo arrastrando a
su vez a la disolución tampón y es, por lo tanto, causante del ujo electroosmótico.
El FEO es la fuerza motriz mayor en la separación y explica que tanto cationes
como aniones migran a un mismo electrodo. El ujo electroosmótico presenta un
perl de velocidades cuasi plano porque la fuerza conductora en sistemas condu-
cidos por electricidad se distribuye uniformemente a lo largo del capilar.
El perl plano de ujo es el motivo por el cual no se producen ensanchamientos
en los picos electroforéticos, hecho que justica las ecacias tan elevadas que se
consiguen por esta técnica. En cambio, cuando el ujo se produce por presión,
como es el caso de la cromatografía líquida de alta resolución, el perl de ujo es
parabólico, dando lugar a picos cromatográcos anchos.
104
El Equipo
Los componentes básicos de un instrumento de Electroforesis Capilar son los
siguientes (Figura 1.34):
Figura 1.34: Esquema básico de un equipo de electroforesis capilar
Generador de alto voltaje: es una fuente de alimentación que produce un voltaje

entre 5 y 30 kV. La fuerza iónica de la disolución tampón debe generar una corriente
comprendida entre 10 y 100 m A al aplicar el voltaje.
Capilares: los materiales más empleados en la fabricación de capilares han sido
teón, pirex y sílice fundida. De todos ellos el último es el más aconsejable por po-
seer mayor transparencia, conductividad térmica alta y diámetros muy pequeños.
El único inconveniente que presenta es que se trata de un material muy frágil, pero
para subsanarlo se recubre de una capa de poliimida de 10 a 30 m m que aumenta
considerablemente su exibilidad.
Sistema de termostatización: el enfriamiento de los capilares es un factor in-
dispensable ya que minimiza la posibilidad de una descomposición de los analitos,
permite la utilización de voltajes elevados, mejora la reproducibilidad de los tiem-
pos de migración y de los picos electroforéticos, altura y área.
105
Sistemas de inyección de la muestra: los sistemas de inyección más utilizados

son la inyección hidrodinámica y la inyección electrocinética. En ambos casos la
muestra entra por el extremo del capilar que está colocado en el recipiente con la
muestra. En el caso de la inyección hidrodinámica, la introducción de la muestra
se realiza por presión, succión o efecto de la gravedad. En el caso de la inyección
electrocinética, se aplica un pequeño voltaje durante un periodo de tiempo concreto
en el recipiente donde se encuentra la muestra junto con el ánodo y el extremo del
capilar. De esta manera, los componentes de la muestra migrarán hacia el interior
del capilar en dirección al cátodo.
El sistema de detección empleado se desarrolla en el apartado 1.5.2.3.
El electroferograma
La señal recogida por el sistema de detección se reeja en una gráca llamada
electroferograma compuesto por la línea base y los picos electroforéticos (Figura
1.35). Los picos se ordenarán según su tiempo de migración de menor a mayor,
saliendo primero los componentes catiónicos seguidos de los néutros y por último
los aniónicos. El electroferograma ofrece información cualitativa y cuantitativa de
la muestra.
Figura 1.35: Diagrama básico de un electroferograma.
106
La información cualitativa se obtiene a partir de los tiempos de migración (tM )

de cada pico, que será constante bajo condiciones idénticas para cada componente.
Por lo tanto el tM será un parámetro para identicar los analitos.
La información cuantitativa se obtiene a partir del área o altura de los picos
electroferográcos, permitiéndonos establecer curvas de calibrado con cantidades
conocidas de componentes y así poder determinar la concentración de una muestra
problema.
Parámetros de calidad
Los parámetros que determinan la calidad de una separación son:
a) Tiempo de análisis
Los resultados se deben obtener en el menor tiempo posible. Para ello se debe
utilizar capilares cortos, voltajes altos y ujos electroosmóticos altos. Pero cuanto
mayor sea el ujo electroosmótico, peor es la resolución, por lo que es mejor acortar
el tiempo de análisis aumentando el voltaje y acortando el capilar en lugar de
aumentar el ujo electroosmótico.
b) Ecacia
La ecacia (capacidad para originar picos de buenas características de anchura
y simetría) se mide a través del número de platos teóricos (N ). Picos estrechos y
con alto tiempo de migración tendrán un número de platos teóricos elevado y por
tanto será de mayor ecacia. La ecacia de la separación es igual que el número de
platos teóricos. Depende del voltaje. A mayor voltaje mayor será la ecacia. Pero
el límite del voltaje que se puede emplear es de 30kV ya que el límite de intensidad
de la corriente eléctrica está limitado por el efecto térmico o Efecto de Joule que
optimizó el valor del máximo.
c) Resolución
La resolución expresa la calidad de una separación. Se conoce como resolución a
la medida del grado de separación de los componentes constituyentes de una misma
muestra. Inuye en la resolución la longitud del capilar. Al aumentar la longitud
del capilar aumenta el tiempo de análisis por lo que se debe llegar a un compromiso
107
entre el menor tiempo de análisis pero con la máxima resolución. También aumenta
al aumentar el voltaje aplicado, optimizando el pH, la composición de la disolución
tampón y optimizando el ujo electroosmótico.
d) Selectividad
La selectividad expresa la capacidad que presenta un método para detectar
o determinar analitos concretos en matrices o mezclas sin interferencia de otros
componentos.Se reere a la separación que se consigue entre los ápices de los picos
correspondientes a dos solutos en un electroferograma. La mejor forma de modicar
la selectividad es cambiar el pH y la composición de la disolución tampón. En
cuanto a los parámetros de separación:
1.5.2.3. Sistemas de detección para HPLC y CE

Para seleccionar el sistema de detección más adecuado hay que tener en cuenta
la naturaleza de las moléculas que se van a detectar. Los sistemas de detección pue-
den ser técnicas ópticas, como la detección por espectrometría UV-vis, detección
luminiscente, espectrometría Raman o detectores de índice de refracción; técnicas
electroquímicas como la detección amperométrica, conductimétrica o potenciomé-
trica; y otras técnicas de detección como la espectrometría de masas o la detección
por técnicas radioquímicas.
En el caso de la cromatografía líquida de alta resolución, se ha empleado un

detector de diodos en línea (PDA) compuesto por una lámpara de deuterio o
tungsteno que produce una luz blanca sobre un monocromador que selecciona
la longitud de onda adecuada produciendo una luz monocromática que se enfo-
ca sobre la ventana de detección. La luz que atraviesa la muestra se recoge en
un fotodiodos. El rango del detector comprende entre 190 y 800nm en el equipo
empleado. El detector emite una luz blanca que atraviesa primero la muestra y
después el monocromador. De este modo, se pueden obtener cromatogramas a dis-
tintas longitudes de onda con una sola inyección de muestra, pudiendo seleccionar
longitudes de onda distintas para cada analito a estudio.
Para la identicación de los materiales por electroforesis capilar, se ha empleado

un detector de diodos en línea (PDA) y un espectrómetro de masas con ionización
por electronebulizador (ESI-MS).
108
En el caso del detector PDA acoplado a CE, la luz monocromática generada por
la selección realizada por el monocromador, se enfoca sobre la ventana de detección
del capilar. La luz que atraviesa éste capilar se recoge en un fotodiodos. El tamaño
del haz de luz que incide sobre el capilar no debe ser superior al diámetro interno de
éste, así se evitan los fenómenos de luz parásita. Una rendija colocada entre la lente
de enfoque y el capilar permite determinar el tamaño del haz de luz. La ventana
de detección del capilar debe estar exenta del recubrimiento de poliimida exterior.
El rango del detector comprende entre 190 y 600 nm en el equipo empleado. En
este caso también se pueden obtener electroferogramas a distintas longitudes de
onda con una sola inyección de muestra, pudiendo seleccionar longitudes de onda
distintas para cada analito a estudio.
Figura 1.36: Esquema de del instrumento para ionización por electronebulización.
El segundo sistema de detección fue la espectrospocía de masas acoplada con

ionización por electronebulizador (ESI-MS) (Figura 1.36).La ionización por elec-
tronebulizador se realiza en condiciones atmosféricas de presión y temperatura.El
analito que será ionizado se introduce disuelto en un solvente volátil a través de
109
un capilar de metal muy pequeño cargado a un ujo de algunos microlitros por

minuto. El capilar metálico se mantiene a un potencia de varios kilovoltios con
respecto al electrodo cilíndrico que rodea a dicha aguja. A causa de la repulsión de
las cargas eléctricas, el líquido, al salir del capilar, formará un aerosol con partí-
culas altamente cargadas. Después pasará a través de un capilar de desolvatación
donde al evaporarse el disolvente, las moléculas del analito se aproximan, repelen y
nalmente, cuando la repulsión de las cargas positivas vence la tensión supercial,
estallan (explosión de Coulomb). Este proceso se repite hasta que el analito queda
libre de solvente. Por último, los iones se transportan hacia el espectrómetro de
masas. Este equipo permite analizar, con gran precisión, la composición de ele-
mentos químicos e isótopos atómicos separando los núcleos atómicos en función
de la relación masa/carga (m/z).
1.5.2.4. Comparación entre los métodos de separación empleados.

Las ventajas e inconvenientes que se pueden encontrar entre separaciones rea-
lizado por HPLC y CE se resumen en los siguientes puntos:
La cantidad de muestra necesaria para el análisis por CE es muy pequeña,

del orden de los nanolitros, mientras que en HPLC se emplean muestras del
orden de los microlitros.
CE consume cantidades muy pequeñas de reactivos (mililitros frente a litros

en HPLC).
En ambas técnicas se permite el trabajo con disoluciones acuosas, por lo que

se pueden inyectar directamente las muestras disueltas en agua.
Las separaciones en ambas técnicas se pueden llevar a cabo a temperatu-

ra ambiente, evitando la posible descomposición o desnaturalización de las
muestras que son sensibles a las temperaturas elevadas o especialmente ba-
jas.
Las separaciones realizadas con CE presentan una ecacia muy alta, al tra-
bajar con capilares muy pequeños en los cuales se disipa muy bien el calor
generado por aplicación de voltajes altos. Esto minimiza el ensanchamiento
de los picos electroforéticos, obteniendo ecacias de 400.000 platos teóricos
110
que compiten favorablemente con los que se consideran altos en HPLC (unos
20.000 platos teóricos).
Presentan tiempos de separación muy cortos al emplear voltajes altos y ca-

pilares cortos, considerablemente menores a los obtenidos por HPLC para
los mismos analitos.
Ambas son fácilmente automatizable en distintas etapas del proceso, tanto

en la inyección de la muestra como para la toma, cuanticación y almacena-
miento de los datos.
111
1.6. Resumen / Abstract / Résumé

Siguiendo las especicación del modelo de tesis doctoral con mención interna-
cional y con el n de facilitar al lector el seguimiento de los capítulos, se presentan
las siguientes tablas a modo de resumen (tablas 1.7,1.8 y 1.9)donde se pueden
situar los analitos, técnicas y aplicaciones implicadas en cada capítulo de esta
memoria.
Tabla 1.7: Resumen
112
Tabla 1.8: Abstract
113
Tabla 1.9: Résumé
114
Parte II
Identicación y caracterización
de materiales
115
Capítulo 2
Identicación de materiales
colorantes tras un proceso de
envejecimiento acelerado
RESUMEN
La composición química y las características físicas de los materiales artísticos

(soporte, capa pictórica, capa de protección. . . ) dependen de diferentes factores
tales como la fuente de origen, el procedimiento utilizado para su aplicación, las
condiciones de almacenamiento a través del tiempo y el proceso de envejecimiento.
Se destaca, en este punto, la problemática de la identicación de los colorantes
orgánicos después de su envejecimiento, ya que en muchos casos pueden haberse
modicado sus características físicas o químicas.
Para la identicación de los colorantes bajo estas condiciones se realizó un es-

tudio comparativo entre las muestras patrón sin envejecer y las muestras articial-
mente envejecidas en una cámara climática sometiéndolas a condiciones drásticas
de humedad, temperatura e iluminación.
Las técnicas que se emplearon para identicar y evaluar los cambios sufridos
por estos colorantes fueron la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) y
la espectroscopía UV-visible.
117
ABSTRACT
Chemical composition and physical characteristics of art materials (support,

paint layer, protection layer. . . ) depend on dierent factors such as their origin,
the application process, the storage conditions throughout the centuries and the
ageing processes. It is important to acknowledge that the identication of aged
organic dyes can be dicult due to the possible changes that their physical and
chemical characteristics could have undergone with time.
A comparative study between standard samples and samples aged in a con-

trolled climate chamber under extreme conditions of humidity, temperature and
light was carried out.
The techniques of identication and evaluation used were High Performance

Liquid Chromatography (HPLC) and UV-visible spectroscopy.
RÉSUMÉ
La composition chimique et les caractéristiques physiques des matériaux artis-

tiques (support, couche picturale, couche de protection. . . ) dépendent de diérents
facteurs comme la provenance du matériau, le procédé employé pour l'application,
les conditions de stockage à travers le temps et les processus de vieillissement. Il
est important de souligner la diculté technique de l'identication des colorants
organiques vieillis à cause des modications qu'ont pu subir leurs caractéristiques
physiques et chimiques avec le temps.
Pour l'identication des colorants, nous avons eectué une étude comparative
entre des échantillons de référence et des échantillons vieillis articiellement en
chambre climatique en conditions drastiques d'humidité, température et lumière.
Les techniques utilisées pour l'identication et l'évaluation ont été la chroma-

tographie liquide haute performance (HPLC) et la spectroscopie UV-Visible.
118
2.1. Introducción
Si hacemos un intento por imaginar cómo sería la vida en otra época, es inevi-
table comenzar coloreando nuestra escena. Si situamos nuestra imaginación en la
prehistoria, dominan los tonos ocres. Si intentamos recrear una escena medieval,
la teñiremos de púrpuras, rojos y dorados, y si, por el contrario, pensamos en el
futuro, lo imaginaremos inundado de colores metálicos. Pero estas recreaciones, en
la mayoría de los casos, no concuerdan con la realidad de la época.
Una recreación realista de los colores del pasado se ve enormemente dicultada

porque el paso del tiempo los ha modicado de manera extraordinaria [Bonford,
1995]. Apenas si quedan restos de los brillantes colores de las esculturas griegas o de
las catedrales góticas y muchas de las pinturas murales que han llegado a nuestros
días han sufrido graves modicaciones cromáticas. El envejecimiento natural, las
condiciones ambientales y la mano del hombre, han hecho que, a menudo, estos
cambios o pérdidas sean irreparables.
Sin embargo, para poder reconstruir el pasado, entender las culturas, inter-
pretar su simbología. . . es necesario intentar reconstruir, de la manera más el
posible, esa riqueza cromática, haciendo un estudio exhaustivo del color, elemento
unido al hombre desde el principio de los tiempos y al que le da múltiples valores
usándolo, incluso, para modicar su apariencia y su entorno natural [Hutchings,
2004].
Las variaciones cromáticas, debidas a diferentes causas, es uno de los factores

principales que ha llevado a los historiadores del arte a elaborar erróneas teorías
basándose, casi exclusivamente, en el examen visual. Otro factor importante es el
medio por el que nos ha llegado la información de los materiales y de las técnicas
empleadas a lo largo de la historia para la creación de las obras de arte: textos
y recetarios difíciles de transmitir y de lexicografía compleja de difícil traducción
[Déroche, 2000].
La aplicación del método cientíco para el estudio de las obras de arte ha

cambiado esta situación: el estudio físico y químico de los materiales, el intento
por recrear antiguas recetas y los procesos de restauración, junto con algunos
sucesos anecdóticos o accidentales, han hecho que se cuestionen algunas de estas
teorías, hasta ahora dadas por ciertas.
Con el objetivo de estudiar de manera cientíca los materiales y técnicas em-

pleadas en las obras de arte se diseñaron consecutivos proyectos de investigación
119
(MAT 2002-01903 y CTQ 2005-07717) mediante una colaboración entre los De-
partamentos de Pintura y de Química Analítica de la Universidad de Granada.
La principal motivación era la aplicación de este conocimiento a los documentos
grácos para poder situarlos en un marco cronológico y geográco correcto, com-
pletar la recreación de la historia y uso del color, y estudiar los cambios inducidos
por diversos factores que han afectado a las tintas de dichos documentos [López-
Montes, 2006] [Durán, 2006]. De esta manera se pueden establecer los protocolos
de restauración y conservación idóneos atendiendo a la particularidad de cada
pieza.
Durante la revisión de la bibliografía existente se acreditó la abundancia de

publicaciones donde se recogen estudios sobre colorantes orgánicos naturales de
origen animal o vegetal, debido principalmente a su interés en la industria cosmé-
tica, farmacéutica y alimentaria [García-Falcón y Simal-Gándara, 2005] [senacke-
rib, 2000] [Chigurupati, y col., 2002]. También se han encontrado trabajos sobre
identicación de colorantes empleados como capas pictóricas [Millani, Romani y
Favaro, 1998], [Buti y col., 2014] o como tintes para textiles. La mayoría de ellos
se centraban en la identicación y caracterización de materiales [Seixas de Melo,
2004].
En los últimos años ha crecido el interés por la valoración de las alteraciones

que pueden sufrir estos materiales por efecto de agentes externos o por el propio
envejecimiento natural. En la última década aparecen los primeros estudios sobre
la inuencia de los factores ambientales en colorantes naturales (cochinilla, palo
de Brasil, azafrán, amarillo indio e índigo entre otros) [Lópz Montes, 2008], es-
tudios relativos al envejecimiento acelerado de colorantes usados en documentos
grácos (cochinilla, azafrán, índigo y granza) [Plata y col., 2006] [Kampasakali
y Varella, 2008] [Gosetti y col, 2015], donde se describen las variaciones tonales
producidas, envejecimiento de sustancias rojas empleadas como tintes en textiles
[Clamente y col., 2007] [Degano y col., 2011], degradación de los carotenoides del
azafrán [Selim, Tsimido y Biliaderis, 2000], y alteraciones de la molécula de índigo
independientemente de su aplicación [Rondao, 2010].
Debido a la escasez de publicaciones en comparación con la magnitud de este

campo, se ha querido abordar esta investigación cuyo objetivo principal es evaluar
los cambios físicos y químicos de los colorantes simulando los procesos de enveje-
cimiento natural para ayudar a su identicación en obras de arte y saber si están
presentes a pesar de las alteraciones que hayan podido sufrir.
120
El estudio se ha realizado sometiendo a los colorantes a un proceso de en-

vejecimiento acelerado, en disolución (como elemento independiente) y aplicados
sobre papel (como material colorante). Se han valorado las variaciones de color por
espectrometría UV-vis, y las modicaciones en la composición por cromatografía
líquida de alta resolución acoplada a un detector de diodos en línea.
Se recoge, en este capítulo, el ensayo de envejecimiento que se ha realizado
sobre los colorantes orgánicos que fueron objeto de estudio de la Tesis Doctoral a
la que está ligada esta investigación. Estos son: rojo carmín, rojo de rubia, amarillo
de azafrán, amarillo de goma guta y azul de índigo.
2.2. Materiales y métodos

2.2.1. Materiales, reactivos y disolventes
El papel seleccionado como soporte para el estudio ha sido de bra de yute de
factura artesanal por su gran contenido en celulosa, de gran estabilidad y resis-
tencia, y sin adición de encolantes ni colorantes durante el proceso de fabricación.
Fue elaborado por el molino papelero de Capellades.
Los colorantes naturales empleados fueron obtenidos de diferentes fuentes: el
rojo de carmín fue extraído del insecto Coccus cacti, el rojo de rubia de la raíz
de la planta Rubia tinctorum, el amarillo de azafrán de los estigmas de la planta
Crocus sativus L., el amarillo de goma guta de la resina del árbol Garcinia hanburü
y el azul de índigo de las hojas prensadas de la planta Indigofera tinctoria. Todos
los productos naturales (insectos y plantas) fueron suministrados por Kremer-
Pigmente (Cracovia, Polonia).
El reactivo dodecil sulfato sódico (SDS) fue suministrado por Sigma Aldrich
Chemie (Steinheim, Alemania).
El agua empleada, en todos los casos, fue puricada mediante el sistema Milli-Q
(Millipore, Bedford, USA).
Los disolventes metanol, ácido acético (99 % de pureza) y ácido triuoroacético
(99 % pureza) fueron proporcionados por Merck (Darmstadt, Alemania); el aceto-
nitrilo fue proporcionado por Panreac (Barcelona, España), y todos ellos fueron
de calidad gradiente-HPLC.
Todos los disolventes y disoluciones de los reactivos fueron ltrados a través
del sistema Milli-Q plus con membranas de nylon de 0,2 µm de tamaño de poro
121
(Millipore, Bedford, MA, USA).
2.2.2. Instrumentación y programas informáticos

Para la extracción de los colorantes y preparación de muestras se empleó un
baño de ultrasonidos Selecta (Barcelona, España).
El equipo utilizado para las mediciones de pH ha sido un pH-metro CRISON
Instruments S.A. D501.
Para realizar los espectros de absorbancia de los colorantes se ha empleado un
equipo Agilent 8453E (Waldbronn, Alemania) realizando el tratamiento de datos
con el programa Chemstation.
El equipo cromatográco fue Agilent 1100 series HPLC (Agilent Technologies,
Palo Alto, USA) equipado con una bomba cuaternaria, un desgasicador, mues-
treador automático, inyección automática, un compartimento de termostatización
de la columna y un detector de diodos acoplado en línea. La separación cromato-
gráca se llevó a cabo con una columna Luna NH2 100a (250 mm x 4,6 mm d.i.,
5 µm partícula) de Phenomenex (Torrance, USA). La columna se protegió con
una precolumna NH2 amino-aminopropileno (Phenomenex) de 4 mm x 3 mm d.i.
El cromatógrafo fue controlado a través del programa ChemStation para LC 3D
(Agilent).
La cámara de envejecimiento utilizada fue Solarbox 3000e RH (Italia) equipada
con una lámpara de xenón (irradiancia 300-800 nm) y ltro indoor S208/S408 .
1
El programa empleado para el control de las condiciones fue Xen43.
2.2.3. Preparación de las muestras

2.2.3.1. Extracción de los colorantes
Para extraer el rojo de carmín se colocaron 10 insectos en un vaso de preci-
pitado con 50 mL de agua calidad Milli-Q a 30 ºC durante 15 min. Después, la
disolución coloreada fue ltrada con papel de ltro neutro.
El rojo de Rubia
2 se extrajo de la raíz de Rubia tinctorum L. triturada colo-
cando 3 gr en un vaso de precipitado con 50 mL de agua calidad Milli-Q a 30 ºC

1
Placa de vidrio sódico-cálcico de larga vida útil para condiciones de exposición en interior
con revestimiento para la retención del infrarrojo.
2
Comunmente llamado rojo de granza entre los pintores.
122
durante 15 min. La disolución coloreada fue ltrada con papel de ltro neutro.
Para la obtención del colorante amarillo de azafrán se colocaron 15 estigmas

de la or del azafrán en un vaso de precipitado con 50 mL de agua calidad Milli-Q.
Después de dejarlo reposar, la disolución, que se colorea rápida y fácilmente, se
transrió a otro vaso de precipitado retirando los estigmas.
El amarillo de goma guta se preparó colocando 1 gr de resina en un vaso de

precipitado con 50 mL de metanol en un baño de ultrasonidos durante 20 min. La
disolución coloreada fue ltrada con papel de ltro neutro.
Para obtener el azul índigo, se tomaron 0,2 gr de las hojas prensadas de la

planta Indigofera Tinctoria y se colocaron en un vaso de precipitado con 50 mL de
ácido acético en una concentración de 17,5 M en un baño de ultrasonidos durante
45 min. La disolución fue ltrada con un ltro de nylon de 0,2 µm de tamaño de
poro.
2.2.3.2. Preparación de las muestras para el envejecimiento articial
Se prepararon dos grupos de muestras: Grupo I compuesto por los colorantes

aplicados sobre papel, y Grupo II de colorantes en disolución.
Para el Grupo I de muestras (colorantes sobre papel) con ayuda de un pincel

de cerda muy suave, se aplicó una capa de color homogénea sobre el papel. Este
proceso se repitió 3 veces dado el poco poder cubriente de los colorantes, que al
no estar aglutinados con ninguna sustancia, simplemente teñían el papel.
Para el Grupo II de muestras (colorantes en disolución) se prepararon viales de

vidrio transparente que contenían las disoluciones: rojo de carmín, rojo de rubia
y amarillo de azafrán disueltos en agua, el amarillo de goma guta en metanol y el
azul de índigo en ácido acético.
Las muestras se introdujeron en la cámara de envejecimiento en las condicio-

nes adecuadas para el estudio (muestras LUZ), y una réplica de cada una de las
muestras de ambos grupos se mantuvieron en condiciones estables de humedad y
temperatura (25 ºC y 30 % de HR) protegidas de la luz, que se emplearían como
muestras de referencia y control (muestras REF) (Figura 2.1).
123
Figura 2.1: Situación de las muestras en el interior de la cámara de envejecimiento.
2.2.3.3. Toma y tratamiento de muestra para análisis

Las muestras del Grupo I se tomaron con la ayuda de un pincel frotando
2
suavemente sobre una supercie de 1 cm , introduciéndolas en un micro-vial al
que se añadió 100 µl de SDS 0,1 M en disolución acuosa. Ninguna de las muestras
se ltró para evitar que parte del colorante se quedara atrapado en la membrana
[Blanc y col., 2006]. Para las muestras del Grupo II se tomó un volumen de 3 mL
y se introdujo en la cubeta de cuarzo para ser analizada directamente en el equipo
UV/vis.
2.2.4. Metodología analítica aplicada

Para llevar a cabo este estudio se utilizó la siguiente metodología analítica.
124
2.2.4.1. Condiciones del envejecimiento articial acelerado
Las condiciones seleccionadas para la cámara climática respondieron a las nor-

mas ISO 5630-3:1996 º
3 e ISO 11341:20044 , que fueron 80 C, 65 % de
HR e irradian-
cia de 550 W m
−2 con ltro para eliminar la radiación ultravioleta (ltro indoor).
Los tramos de envejecimiento fueron de 0h, 24h, 48h, 72 y 144h.
2.2.4.2. Espectrofotometría UV-vis
Después de cada sesión de envejecimiento para la identicación de los distintos

colorantes, se extrajeron 3 ml de las disoluciones del Grupo II para introducirlos
en la cubeta de cuarzo. El estudio de absorción se realizó en un rango compren-
dido entre 190 y 1100 nm. Se realizaron 3 réplicas instrumentales y 3 réplicas
experimentales de cada condición.
2.2.4.3. Cromatografía líquida de alta ecacia
La metodología analítica aplicada para la identicación de los distintos colo-

rantes mediante HPLC fue desarrollada con anterioridad [Blanc y coñ, 2006]. Los
parámetros cromatográcos fueron los siguientes.
La fase móvil consistió en una disolución de SDS 40 mM con tampón fosfato 10

mM (pH 2.3) y 0,1 % de ácido triuoroacético como eluyente A. Como eluyente B
se usó acetonitrilo con un programa gradiente de 5 % de B a 95 % de B en 45 min
frente al diluyente A. El ujo fue de 0,6 ml/min hasta el minuto 40 y aumentando
a 1ml/min hasta el nal de la separación. La columna se mantuvo a 45 C y el º
volumen de inyección fue de 20 µl. La detección se llevó a cabo con un detector de
diodos (PDA) instalado en el equipo ofreciendo información espectral en pasos de
2 nm entre 190 y 900 nm durante todo el análisis cromatográco. Se realizaron 3
réplicas instrumentales y 3 réplicas experimentales de cada condición.
3
Papel y cartón. Envejecimiento acelerado. Parte 4: Tratamiento con calor húmedo a 80ºC y
65 % de humedad relativa.
4
Pinturas y barnices. Envejecimiento articial y exposición a radiación articial de luz ltrada
de arco de xenón.
125
2.3. Resultados y discusión

El comportamiento ante el envejecimiento acelerado de los colorantes estudia-
dos ha sido dispar, resultado esperable ya que sus composiciones son distintas,
aunque sí se ha observado, como resultado común y según reza en la bibliogra-
fía consultada, que los colorantes aplicados sobre un soporte celulósico adquieren
mayor resistencia a las alteraciones provocadas por el envejecimiento acelerado
[Gosetty y col., 2015 [Rondao, 2010].
Las muestras del Grupo I se analizaron por HPLC-PDA y los datos que se
emplearon para la identicación de los colorantes fueron el tiempo de retención
(tR) y el espectro UV-vis obtenido en los máximos de los picos cromatográcos.
Se recurrió a la preparación de las muestras del Grupo II para su estudio por

espectrofotometría con el n de caracterizar e identicar los espectros correspon-
dientes a los distintos colorantes (labor imprescindible para la identicación de los
picos cromatográcos), y para estudiar la evolución del envejecimiento de estos
colorantes independientemente del soporte al que se encuentren jados.
2.3.1. Rojo de Rubia

La tonalidad del rojo procedente de la raíz de Rubia tinctorum resistió hasta
el nal de proceso de envejecimiento tanto en las muestras del Grupo I (Figura
2.2) como en las muestras del Grupo II (Figura 2.3).
Figura 2.2: Secuencia de muestras envejecidas del Grupo I de rojo de Rubia.
126
Figura 2.3: Secuencia de muestras envejecidas del Grupo II de rojo de Rubia.
Durante el estudio del Grupo I por HPLC (Figura 2.4), se observó que la
muestra de referencia a 0h presentaba 2 picos cromatográcos correspondientes
al alizarín (tR : 33,501 min) y purpurín (tR : 36,286 min), los dos componentes
principales del colorante obtenido de la raíz de Rubia. Estos compuestos se habían
denido previamente en un trabajo anterior mediante HPLC-PDA y el uso de
patrones [blanc y col. 2006].
A partir de la primera sesión de envejecimiento y hasta las 72h, estas señales

fueron disminuyendo en área y altura, llegando a ser completamente imposibles
de identicar a 144h.
El espectro UV-vis obtenido de las muestras del Grupo II (Figura 2.4), mostró
idénticos resultados, perdiendo intensidad de absorción respecto al espectro de
referencia (201, 236, 280 y 510 nm) [Blanc y col. 2006]. A partir de las 72 h se
observó un desplazamiento de la banda de absorción de 510 nm a 430 nm, lo que
indica una tendencia de la tonalidad roja hacia el amarillo, como puede observarse
en los viales de la gura 2.3.
127
Figura 2.4: Cromatogramas y espectros UV-vis de la serie envejecida de rojo de

Rubia.
Según C. Clementi et col. [Clementi y col., 2007], en sus estudios realizados

sobre el envejecimiento de estas sustancias empleadas como colorantes textiles, el
purpurín es el principal componente de esta planta, responsable de las propieda-
des cromáticas del rojo de Rubia y, por lo tanto, de su espectro de absorbancia.
Según sus investigaciones, también lo hace responsable de la degradación de este
rojo, siendo la degradación fotoquímica, debido a la exposición a la luz, el factor
más importante. En sus estudios marca las variaciones obtenidas en los espectros
de absorbancia y los estudios cromatográcos (al igual que se ha hecho en esta
sección), pero tampoco identica la presencia de nuevos compuestos ni el proceso
químico de la degradación de alizarín y purpurín como ha ocurrido en nuestro
caso.
128
I. Degano y col. [Degano y col., 2007] presenta una lista de productos secun-
darios encontrados en muestras históricas de textil envejecidas de manera natural
que podrían ser atribuidas al deterioro del rojo de Rubia y a su combinación
con otros productos presentes . Esta hipótesis no la conrma, ya que remarca la
contraposición entre los resultados obtenidos por C. Clementi, quien no identica
ningún producto de degradación, y los ensayos realizados por Ahn y Obendorf
[Ahn t Obendorf, 2000], que indica la posible presencia de ácido ftálico, anhidro
ftálico y ácido benzoico como posibles productos de degradación.
2.3.2. Amarillo de azafrán
Durante el proceso de envejecimiento se detectó que la tonalidad amarilla ori-

ginalmente intensa y brillante del amarillo de azafrán empalidecía rápidamente,
llegando a desaparecer en un breve espacio de tiempo (Figuras 2.5 y 2.6).
Figura 2.5: Secuencia de muestras envejecidas del Grupo I de amarillo de azafrán.
129
Figura 2.6: Secuencia de muestras envejecidas del Grupo II de amarillo de azafrán.
Como se puede comprobar en el cromatograma (Figura 2.7), el pico cromato-

gráco característico de la muestra sin envejecer, que aparece con (tR : 34,6 min
[8A] y correspondiente al crocetín, desapareció ya tras la primera sesión de enve-
jecimiento.
A partir de ese momento, el crocetín no fue identicable por el método croma-

tográco empleado, y tampoco se detectó la formación de otro compuesto.
De las muestras del Grupo II se obtuvieron idénticos resultados, ya que las

bandas de absorción propias del crocetín (259 y 401 nm) [Blanc y col., 2006]
desaparecieron después de la primera sesión de envejecimiento (Figura 2.7).
A partir de las 24h no se registró ninguna banda de absorción en los espectros

realizados en las muestras.
Si se compara este comportamiento con otros colorantes también de origen

vegetal (como el rojo de Rubia o el amarillo de goma guta), se detecta que la
resistencia a la luz del amarillo de azafrán es bastante menor, ya que el resto suelen
seguir siendo reconocibles hasta las últimas fases del proceso de envejecimiento
acelerado [López-Montes y col., 2006].
130
Figura 2.7: Cromatogramas y espectros UV-vis de la serie envejecida de amarillo

de azafrán.
Los estudios de K. Selim y col. [Selim, Tsimidou y Biliaderis, 2000] sobre la

degradación de los carotenoides del azafrán también señala la alta sensibilidad a
la oxidación de los carotenoides solubles, como es el crocetín.
2.3.3. Azul de índigo

Durante la optimización de los métodos por HPLC y CE para la identicación
de colorantes orgánicos en la Tesis Doctoral en Bellas Artes [López-Montes, 2006],
se observó que el azul de índigo presentaba un comportamiento muy particular. La
muestra preparada para su análisis variaba en tan solo 24 h. A pesar de las buenas
y apropiadas condiciones de conservación de las muestras procesadas, aparecieron,
siempre, 2 picos cromatográcos que evolucionaban de manera similar tanto en las
grácas obtenidas por HPLC como por CE.
131
En las muestras del Grupo I sobre papel, se observó que la tonalidad azulada
desapareció rápidamente a partir de la primera sesión de envejecimiento. El colo-
rante en disolución del Grupo II se comportó de manera similar, virando comple-
tamente hacia el amarillo en la segunda sesión (24 h), y volviéndose transparente
a partir de la tercera sesión de envejecimiento (48 h) (Figuras 2.8 y 2.9).
Figura 2.8: Secuencia de muestras envejecidas del Grupo I de azul de índigo.
Figura 2.9: Secuencia de muestras envejecidas del Grupo II de azul de índigo.
132
Al analizar las muestras del Grupo I por HPLC, se observó que la señal de
índigo era reconocible hasta las 24h de envejecimiento (tR : 34,777 min) [Blanc y
col., 2006].
Durante las 24h de envejecimiento, apareció un segundo pico cromatográco

(a) con tR : 24,665 min que fue desapareciendo, a la vez que la señal de índigo, a
partir de las 72h de envejecimiento (Figura 2.10).
En el Grupo II, la muestra de referencia de azul de índigo en disolución sin

envejecer presentaba bandas de absorción características a 286, 348 y 623nm [Blanc
y col., 2006].
Las muestras envejecidas se volvieron de color amarillo pasadas 24 h, y sus

espectros de absorbancia presentaron tres nuevas bandas de absorción a 250, 307
y 380 nm, perdiéndose las banda a 348 y 623 nm (Figura 2.10).
Las muestras que se mantuvieron en condiciones estables de humedad y tem-

peratura, y protegidas de las radiaciones luminosas (muestras REF), también pre-
sentaron el mismo comportamiento tanto en el estudio por HPLC como por es-
pectrofotometría, aunque de manera más pausada que las muestras envejecidas
articialmente, cuyas variaciones fueron más rápidas y acentuadas. Este resultado
llevó a pensar que esta transformación no se debía a la exposición a temperatu-
ra, iluminación y humedad relativa elevados, sino que simplemente estos fueron
parámetros aceleradores de las reacciones de degradación.
133
Figura 2.10: Cromatogramas y Espectro UV-vis de azul de índigo.
La consulta bibliográca sobre la alteración de la molécula de índigo, indicó que

esta molécula se transforma, por oxidación, en dehidroíndigo [Rondao y col. 2010].
Estas dos moléculas son semejantes, con idéntico color y espectro de absorción,
pero con la particularidad de que la molécula de dehidroíndigo es uorescente.
Se deduce, por tanto, que el cromatograma obtenido de la muestra inicial a 0h
se correspondía posiblemente con las moléculas de índigo. La formación de la mo-
lécula de dehidroíndigo fue evidente en las muestras envejecidas durante 24 y 72 h.
A partir de ese momento la molécula de dehidroíndigo también pudo alterarse. En
el estudio por espectrofotometría, se observó la existencia de una nueva molécula
que podría ser la de dehidroindigo y la forma ceto existente en menor extensión, ya
que las bandas de absorción coincidieron a 348 y 600 nm (compuesto de tonalidad
idéntica al índigo pero uorescente), como indican Rondao y col. [Rondao y col.,
2010].
134
2.3.4. Rojo de carmín
En la gura 2.11 se puede observar la apariencia de las muestras del grupo I,

y en la gura 2.12 las muestras del grupo II después de la secuencia de envejeci-
miento. La tonalidad roja sobre papel fue apreciable hasta las 48 h, haciéndose
muy tenue, aunque presente, en los dos últimos tramos de envejecimiento. La di-
solución coloreada se volvió bastante transparente, con tendencia al rosa a las 24
h, y al amarillo a partir de las 48 h, llegando en estas condiciones hasta el nal
del proceso.
Figura 2.11: Secuencia de muestras envejecidas del Grupo I de rojo de carmín.
135
Figura 2.12: Secuencia de muestras envejecidas del Grupo II de rojo de carmín.
En la valoración de los resultados mediante HPLC de las muestras del Grupo

I (Figura 2.13), observamos que el cromatograma de la muestra de referencia (0h,
sin envejecer) presenta un pico cromatográco que corresponde al ácido carmínico,
con (tR : 14,448 min [Blanc y col., 2006]. Tras la primera sesión de envejecimiento
(24 h), ese pico cromatográco se adelantó 2 min y apareció un nuevo pico (a) con
tR : 23,776 min.
Después de la segunda sesión de envejecimiento (48 h), el pico correspondiente

al ácido carmínico se mantuvo, y aumentó el área y altura de la nueva señal que
apareció a los 23,776 min, lo que conrmaría la aparición de un nuevo compuesto.
A partir de ese tramo de envejecimiento y hasta el nal se sigue observan-

do claramente el pico correspondiente al ácido carmínico y el del segundo nuevo
compuesto.
Por lo tanto, el cromatograma conserva el pico cromatográco correspondiente

al ácido carmínico hasta el nal del proceso de envejecimiento, junto con otro
compuesto señalados a partir de las 24 h de exposición. Este compuesto no ha
podido ser caracterizado con el instrumental disponible ni contrastado con los
resultados obtenidos por otros autores (hasta ahora las investigaciones realizadas
sobre el envejecimiento de este colorante señalan la aparición de nuevos compuestos
pero sin caracterizarlos).
136
Figura 2.13: Cromatogramas y espectros UV-vis de la serie envejecida de rojo de

carmín.
En la valoración de los resultados por espectrometría UV-vis de las muestras

del Grupo II (Figura 2.13), se observó que el espectro se fue modicando a cada
paso, suavizándose la línea y desapareciendo la curva cercana a longitudes de onda
propias del rojo (cercanas a los 500 nm) a partir de las 48 h de exposición.
El espectro de absorción de la muestra inicial de referencia a 0h presentó bandas
de absorción a 206, 234, 284, 334, 521 y 563 nm, propias de rojo de carmín [Blanc
y col., 2006].
Tras el primer envejecimiento de 24 h, el espectro fue similar, disminuyendo
la intensidad de las 2 primeras bandas, aumentando la intensidad de la tercera, y
suavizándose las dos bandas de absorción cercanas a los 550 nm. Las longitudes de
onda de los máximos de las bandas de absorción son idénticas a las de la muestra
de referencia (0 h) por lo que no se señaló la presencia de ningún compuesto nuevo.
No hay ninguna señal de absorción que pueda corresponderse con el nuevo pico
137
cromatográco que se empezó a identicar a 24h en las muestras del Grupo I.

Quizá se debió a que la concentración del nuevo compuesto era inferior al límite
de detección del espectrofotómetro empleado.
A partir de las 48 h, las dos primeras bandas se unieron, presentado un máximo

de absorción a 234 nm, la tercera banda se mantuvo y desaparecieron las dos
bandas de absorción detectada en la franja de los 550 nm, lo que indicó que la
tonalidad roja se había perdido por completo como ya se señaló con el análisis
visual de las muestras.
Desde las 72 h de envejecimiento y hasta el nal del proceso apareció una única
banda de absorción muy ancha entre los 210 y los 320 nm, desapareciendo el resto
de las bandas indicadas en los tramos anteriores. El espectro de absorción de rojo
carmín se modicó por completo aunque no se detectó ninguna banda de absorción
que pudiera corresponder con el segundo compuesto detectado en la evaluación por
HPLC.
Según los estudios de envejecimiento de F. Gosetti y col. [Gosetti y col., 2015],

el colorante procedente de la cochinilla es generalmente mucho más foto-estable
cuando está aplicado sobre un soporte que cuando está en disolución acuosa, con-
clusión que coincide con los resultados obtenidos en este estudio. La formación de
los productos de degradación depende de la matriz en la que se encuentre, pero
hasta ahora ningún autor ha podido identicarlos con certeza, simplemente se ha
constatado la presencia de nuevos elementos como se ha señalado también durante
este estudio.
2.3.5. Amarillo de goma guta
El color amarillo intenso obtenido de la resina de goma guta fue bastante

resistente durante todo el proceso de envejecimiento, tanto en las muestras del
Grupo I como del Grupo II, como se puede observar en las guras 2.14 y 2.15. La
tonalidad amarilla permaneció hasta el nal del ensayo de envejecimiento a 144 h.
138
Figura 2.14: Secuencia de muestras envejecidas del Grupo I de amarillo de goma

guta.
Figura 2.15: Secuencia de muestras envejecidas del Grupo II de amarillo de goma

guta.
A pesar de que la tonalidad propia de este colorante permaneció bastante

inalterable, los resultados obtenidos por el estudio cromatográco y espectrofo-
tométrico no revelaron que esta estabilidad fuese tan acusada (Figura 2.16). Se
observaron alteraciones del ácido gamboico y aparición de bastantes interferentes.
139
Los tres picos cromatográcos característicos de este colorante, con tR : 40,130,

41,830 y 42,378 min [Blanc y col., 2006], se mantuvieron hasta las 48h de enve-
jecimiento. A este tiempo también aparece bastante bien reconocible un nuevo
compuesto (a) con tR : 24,010 min.
A partir de la muestra envejecida a 72 h, las señales características del amarillo
de goma guta se enmarañaron con multitud de picos solapados dando lugar a una
montaña entre el min 31 y el min 46. El pico obtenido a las 24,010 min se hizo
más evidente al igual que otro nuevo compuesto (b) con tR: 13,899 min.
En el tramo nal del proceso, estos dos picos de los nuevos compuestos ganaron
en altura y área, y el deterioro de los picos característicos de este amarillo siguió
en aumento.
Figura 2.16: Cromatograma y Espectro UV-vis de amarillo de goma guta.
En este caso los resultados no se pueden contrastar con estudios previos debido
a la escasez de bibliografía referente a este compuesto colorante y su empleo en
patrimonio.
140
En los espectros UV-vis realizados a las muestras del Grupo II (Figura 16) se
observó el mismo comportamiento que en las muestras analizadas por cromato-
grafía del Grupo I.
La muestra de referencia presentó 3 máximos de absorción a 205, 290 y 364
nm [8A]. Esta última banda se corresponde con la absorción de las tonalidades
amarillas.
La muestra a 24 h resistió bastante bien las condiciones a las que estaba ex-
puesta, aunque la segunda banda se desplazó hacia la izquierda 10 nm. Aun así,
el espectro era perfectamente reconocible.
A las 48 h, las dos primeras bandas de absorción desaparecieron permaneciendo
la tercera a 364 nm, siendo la principal y más característica de este colorante, por lo
que también podría identicarse gracias a la permanencia de la tonalidad amarilla.
Finalmente, a partir de las 72 h y hasta el nal del proceso, las línea de absor-
ción desaparecen indicando la alteración completa del compuesto amarillo.
2.4. Conclusiones
En este capítulo se ha observado el efecto del envejecimiento acelerado gracias
al control de tres parámetros: exposición a la luz, humedad relativa y temperatu-
ra. La combinación de los parámetros en condiciones elevadas permite simular la
acción del paso del tiempo de manera acelerada, en los materiales estudiados.
La combinación de las técnicas de análisis empleadas para la evaluación de las
alteraciones (espectrofotometría UV-vis y cromatografía líquida de alta resolución)
ha permitido cumplir el objetivo del trabajo, además de que han demostrando ser
lo sucientemente selectivas y sensibles.
Se ha conrmado que estos materiales sí son sensibles a la exposición de estos
parámetros, observándose cambios físicos y químicos como consecuencia de las
alteraciones, describiéndose con detalle durante la discusión de los resultados.
El rojo procedente de la raíz de Rubia tinctorum ha sido el colorante más
estable al proceso de envejecimiento de entre todos los estudiados. Los picos cro-
matográcos y las bandas de absorción para su identicación han ido reduciéndose
en intensidad durante el proceso de envejecimiento hasta perderse por completo
en las muestras sobre papel durante el último tramo de envejecimiento (144h).
El amarillo de azafrán fue indetectable a partir del primer tramo de enve-
jecimiento (24h), tanto por cromatografía líquida como por espectrofotometría.
141
No se ha manifestado ningún nuevo compuesto durante el proceso completo de

envejecimiento.
Los colorantes azul de índigo, rojo carmín y amarillo de goma guta, además
de alterarse, han dado lugar a la formación de nuevos compuestos. Estos nuevos
compuestos no han podido ser caracterizados en este trabajo, pero abren una nueva
vía de investigación que se desarrollará apoyada en este estudio preliminar y en la
bibliografía consultada.
Las alteraciones de estos colorantes implica la imposibilidad de identicación
en muchas ocasiones si no han estado conservados en las mejores condiciones de
conservación. Esto implica que la no identicación de estos materiales en una
obra de cierta antigüedad no supone su no uso. Por lo tanto, no se podrá ar-
mar, de manera categórica, su ausencia. Afortunadamente, en algunos documentos
grácos las cubiertas han colaborado en la protección de los materiales, lo que ha
permitido la conservación e identicación de estos colorantes orgánicos naturales.
La buena conservación de estos materiales evita, de manera realmente conside-
rable, el desencadenamiento de estas alteraciones. Así se ha podido identicar rojo
carmín, amarillo de goma guta y amarillo de azafrán en la colección de dibujos
y planos fechada entre el s. XVI y el s. XIX del Archivo de la Real Chancillería
de Granada [López-Montes y col., 2008], índigo en la colección de libros árabes
anteriores al s. XVI de la Abadía del Sacromonte en Granada (España) [Espejo y
col., 2008] y en el hilo empleado en la encuadernación original de un manuscrito
medieval fechado a nales del s. XIV [Durán y col., 2012], entre otros ejemplos.
Por otra parte, conociendo estas alteraciones de los materiales, es posible iden-
ticar los colorantes estudiados a pesar de las alteraciones que el paso del tiempo
haya podido ocasionar.
Con este nuevo conocimiento, además de poder identicar los colorantes a
pesar de encontrarse alterados, se puede establecer el estado de conservación en
el que se encuentran y si el proceso de alteración ha comenzado. Como ejemplo
se ha rescatado el cromatograma obtenido de la muestra del mapa n º 11 de la
colección de dibujos y planos del Archivo de la Real Chancillería de Granada , en
5
5
El estudio completo de los colorantes de esta colección se recogió en la Tesis Doctoral Im-
portancia de la identicación de los componentes del color para la conservación y restauración
del documento gráco. Nuevas metodologías de análisis, Tesis Doctoral, Universidad de Granada
(2006) y se publicó parcialmente en Blanc, R., Espejo, T., López-Montes, A., Torres, A., Crovet-
to, G., Navalón, A., Vílchez, J.L. Sampling and identication of natural dyes in historical maps
and drawings by liquid chromatography with diode-array detection. J. Chromatography A 1122
142
el que se han marcado los tres picos cromatográcos identicativos del amarillo
de goma guta, y se detecta la aparición del primer compuesto de alteración (a)
(Figura 2.17).
Figura 2.17: Muestra amarilla del mapa 11 del la colección Dibujos, mapas y planos
del Archivo de la Real Chancillería de Granada (España).
Las alteraciones identicadas en los colorantes son irreversibles, ya que se pro-

ducen cambios en la estructura química de las moléculas, por lo que debe prestarse
especial atención a sus condiciones de conservación para ralentizar los cambios que
se puedan liberar.
El estudio de la evolución de degradacion de los colorantes y su caracterización
en todas las etapas hace posible que una completa interpretación de los análisis
sistemáticos de identicación de materiales previos a las intervenciones de restau-
ración aporten, además, informacion sobre el estado de deterioro de la obra. Esta
información se considera esencial para mejorar el trabajo de los restauradores y
conservadores del patrimonio cultural.
(2006) 105-113, y en López-Montes, A., Blanc. R., Espejo, T., Vilchez, J.L. Analyses of dyes in
the map collection of the Real Chancillería of Granada, Art Technological Source Research 2,
London (2008) 127-135.
143
144
Capítulo 3
Identicación simultánea de
colorantes rojos naturales y goma
arábiga en pergaminos
manuscritos mediante
Electroforesis Capilar
RESUMEN
En este capítulo se presenta el desarrollo de una nueva y simple metodología
para la identicación simultánea de los colorantes rojos naturales más usuales en
manuscritos y goma arábiga como aglutinante, empleados durante la manufactura
de documentos históricos.
Usando electroforesis capilar con detector de diodos en línea es posible iden-
ticar los 3 monosacáridos (L-arabinosa, D-galactosa y L-ramnosa) y el ácido D-
glucurónico que componen la goma arábiga además de los componentes principales
de los rojos seleccionados: ácido carmínico procedente de la cochinilla americana,
alizarín y purpurín de la raíz de Rubia tinctorum y brazilina y brazileina de la
madera de Brasil.
La metodología fue aplicada a la colección de pergaminos manuscritos conser-
vados en el Archivo de la Real Chancillería de Granada (España).
145
La identicación simultánea de colorantes y gomas permite reducir considera-

blemente el número de muestras necesarias para estudiar los materiales presentes
en documentos grácos. La información obtenida facilita la contextualización his-
tórica; ayuda a comprender mejor el proceso de manufactura y es el punto de
partida para hacer comparaciones con otros documentos similares.
ABSTRACT
This chapter presents the development of a new simple methodology to si-
multaneously identify the most usual natural red dyes and gum Arabic employed
during the manufacture of ancient graphic documents.
Using capillary electrophoresis with diode array detection it is possible to iden-
tify D-glucuronic acid and the three monosaccharides (L- arabinose, D-galactose
and L-rhamnose) , which composegum arabic as well as the principal components
of the red dyes: carminic acid from American cochineal, alizarin and purpurin from
Rubia tinctorum root and brazilin and brazilein from brazilwood.
The methodology was applied on the collection of manuscript parchments from
the Archive of Royal Chancellery of Granada (Spain).
The simultaneous identication of dyes and gums allowed to considerably re-
duce the number of samples needed to study the materials used in graphic do-
cuments. The analyses facilitate historical contextualization. They also help to
better understand the manufacture process and serve as a starting point to draw
comparisons with other similar documents.
RÉSUMÉ
Dans ce chapitre nous présentons le développement d'une nouvelle méthodo-
logie simple pour l'identication simultanée des colorants rouges naturels le plus
souvent utilisés dans les manuscrits, ainsi que de la gomme arabique utilisée comme
liant, employés pour la manufacture des documents graphiques anciens.
L'électrophorèse capillaire a permis d'identier l'acide D-glucuronique et les 3
monosaccharides (L-arabinose, D-galactose et L-rhamnose) composant la gomme
arabique, ainsi que les principales composés des colorants rouges sélectionnés :
146
acide carminique de la cochenille, alizarine et purpurine de la racine de garance

Rubia tinctorum -, et braziline et brazileine du bois du Brésil.
La méthodologie a été employée sur la collection de parchemins manuscrits
conservés dans les archives de la Chancellerie Royale de Grenade (Espagne).
L'identication simultanée des colorants et des gommes permet de réduire re-
marquablement le nombre d'échantillons pour l'étude des matériaux présents dans
les documents graphiques. L'information obtenue facilite la contextualisation his-
torique et aide à mieux comprendre les procédés de fabrication. C'est le point de
départ pour mettre en relation d'autres documents graphiques similaires.
147
3.1. Introducción
La identicación de los materiales en documentos grácos ha sido, y es, objeto
de multitud de trabajos de investigación. La principal limitación se encuentra en la
disponibilidad de muestras procedentes del patrimonio cultural para su manipula-
ción y estudio. Especialmente crítico es este punto para el estudio, identicación y
caracterización de capas pictóricas y grácas en documentos de archivo si lo com-
paramos con otro grupo de obras como pintura mural o escultura policromada,
porque la cantidad de muestra disponible es ínma.
Por otra parte, debido a la diferente naturaleza química de los materiales em-
pleados en la decoración y escritura de los documentos, para la identicación de
sus elementos principales (materia colorante, aglutinante y aditivos), es inevitable
realizar, al menos, un análisis por grupo de materiales. Así pues, se duplica o tri-
plica el muestreo en cada documento haciéndose una práctica poco entendida por
los custodios de estas obras, tediosa para los cientícos, poco económica para los
laboratorios y dañina para los bienes culturales.
Para mejorar esta situación y gracias a los conocimientos y experiencia ad-

quirida en los años previos, se planteó el desarrollo de una metodología analítica
para lograr la identicación simultánea de colorantes y aglutinantes. Con una sola
muestra se podría obtener información relevante para la identicación y carac-
terización del colorante y el aglutinante empleado en una decoración o escritura
realizando un solo análisis.
Después de la revisión bibliográca, se encontró un único trabajo en el que se

abordaba la identicación simultánea de materiales de distinta naturaleza. Domé-
nech Carbó y col. en 2007 publicaron un trabajo sobre la identicación simultánea
de pigmentos de plomo y aglutinantes usando voltamperometría de micropartículas
[Doménech y col., 2007]. Además de la problemática anteriormente mencionada,
ellos destacaron la complejidad causada por los componentes interferentes que
aparecen por las interacciones entre los materiales de las capas pictóricas. Vande-
lenabeele y col. publicaron un trabajo en el año 2000, donde durante la aplicación
de la metodología desarrollada para la identicación de aglutinantes y barnices
por espectroscopía micro-Raman, descubrieron la presencia de un pigmento o co-
lorante junto con el aglutinante en un libro de Horas medieval, aunque no llegaron
a caracterizarlo por carecer de los datos sucientes [Vandenabeele y col., 2000].
Por lo tanto, hasta ahora, lo habitual es la combinación de varias técnicas para
148
la identicación, sobre una misma obra, de pigmentos/colorantes y aglutinantes

con muestras diferentes, como realizó Kuckova y col. [Kuckova y col., 2005], em-
plearon microespectroscopía de infrarrojos y desorción/inonización láser asistida
por matriz con detector de iones y detector de masas (MALDI-TOF-MS), o Ed-
wards y col. [Edwards, Newton y Russ., 2000] empleando espectroscopía Raman,
microscopía electrónica de barrido (SEM) y análisis de energía dispersiva de rayos
X (EDAX).
Para iniciar esta línea de identicación simultánea se comenzó por la selección

de los colorantes rojos más habituales en documento gráco: rojo de cochinilla,
rojo de Rubia y rojo de madera de Brasil, y el aglutinante por excelencia de las
técnicas de escritura y decoración acuosas
1 de documentos grácos en papel o
pergamino: la goma arábiga.
La información acerca del origen, uso y composición de estos colorantes se

recoge en el apartado 1.4 de la introducción.
Este aglutinante es un hydrocoloide que se extrae de la Acacia senegal proce-

dente, especialmente, de África. Está compuesta de una mezcla de polisacáridos
(arabinogalactanos muy ramicados con unidades nales de ramnosa y ácido glu-
curonico), y otros compuestos proteínicos [Gröbl y col., 2005], por lo cual contiene
principalmente ácido D-glucurónico, L-ramnosa, L-arabinosa y D-galactosa [Pic-
ton, Bataille y Muller, 2000] (Figura 3.1).
1
La acuarela se caracteriza por crear capas de color de gran transparencia realizada con
pigmentos y colorantes aglutinados con goma arábiga junto otros aditivos como azúcares y hu-
mectantes naturales (hiel de buey) o sintéticos [Knut, 1998]. El gouache es una técnica similar
pero con la que se consigue capas de color opacas y cubrientes compuestas por un pigmento o
colorante y un aglutinante que también suele ser la goma arábiga, junto con cargas blancos como
blanco de planta, de zinc, de plomo o de yeso para darle mayor pastosidad y opacidad [Bello y
Borrell, 2002].
149
Figura 3.1: a) ácido D-glucurónico; b)L- ramnosa; c) L-arabinosa; d) D-galactosa.
La técnica más habitual para la identicación de estos compuestos ha sido

la cromatografía líquida o de gases con distintos sistemas de detección [Gröÿl y
col., 2005]. También se encuentra bastante bibliografía sobre la identicación de
la goma arábiga por electroforesis capilar [Rovio, 2008] [Bazzarella, 1998] [Gröÿl
y col., 2005], acoplada a un detector de uorescencia, de diodos e incluso la de-
tección electroquímica. Aunque en ninguno de estos casos la aplicación era sobre
muestras procedentes de documentos grácos ni se realizaba simultáneamente la
identicación de otros compuestos que acompañan a la goma en capas pictóricas.
La aplicación de este estudio se ha realizado sobre la Colección de pergaminos
del Archivo de la Real Chancillería de Granada. Se trata de una colección de
documentos manuscritos en pergamino fechados entre 1344 y 1758. La colección
se formó por la transferencia de pergaminos procedentes de las Cancillerías Reales
de España, Francia y Gran Bretaña, la Chancillería de Granada, la Audiencia
de Sevilla y Valencia, Reyes de armas, Concejos, Notariado, Cancillería Ponticia
y otras secretarías eclesiásticas, Cabildo de la Iglesia Catedral y el Obispado de
Córdoba, Órdenes regulares y congregaciones religiosas (Compañía de Jesús y
Orden de la Santísima Trinidad), la Orden Militar de Santiago, Cofradías y las
Universidades de Granada y Salamanca.
Están escritos en castellano, francés, inglés y latín con escritura gótica do-
cumental o cursiva: gótica textual, minúscula diplomática, cortesana, procesal y
150
humanística. Presentan contenido variado en función de sus diferentes producto-

res, predominando los de temas genealógicos. Son originales salvo algunos trasla-
dos notariales y testimonios de autos. Su tipología diplomática es diversa [Mártir,
2009].
El estado de conservación predominante es bueno. Las únicas deciencias que
presentan un grupo minoritario de documentos son tintas desvaídas o perforaciones
mínimas. Los documentos más deteriorados se restauraron con anterioridad. Se
encuentran conservados en un mueble planero agrupados en carpetas según el
tamaño y protegidos en su interior con papel japonés y poliéster de 75 µm de
espesor.
3.2. Materiales y métodos

3.2.1. Materiales, reactivos y disolventes
Los colorantes naturales empleados fueron obtenidos de diferentes fuentes: el
rojo de carmín fue extraído del insecto Coccus cacti, el rojo de Rubia de la raíz de
la planta Rubia tinctorum, el rojo de madera de Brasil de la planta Caesalpinia
sappan L., y la goma arábiga de la resina de la planta Acacia Senegal. Todas estas
fuentes naturales fueron suministradas por Kremer-Pigmente (Cracovia, Polonia).
Los patrones de los principales componentes de los colorantes fueron suminis-
trados por las siguientes casas comerciales: ácido carmínico (del rojo de carmín)
por Merck (Darmstadt, Alemania), alizarín y purpurín (del rojo de Rubia) por
Fluka Chemie (Buchs, Alemania) y brasilina y brazileina por M.P. Biomedicals
(California, EE.UU.).
El papel sobre el que se preparó una muestra de tinta roja en el laboratorio
fue de bra de algodón sin encolantes ni aglutinantes suministrado por el molino
papelero de Capellades (España).
Los patrones de L-arabinosa, L-ramnosa, D-galactosa y ácido D-glucurónico
fueron suministrados por Sigma-Aldrich (Steonheim, Alemania).
Los reactivos ácido 2,6-piridincarboxílico (PDC) y bromuro de cetilmetilamo-
nio (CTAB) fueron obtenidos de Sigma-Aldrich Chemie (Steinheim, Alemania). El
fosfato trisódico anhidro fue suministrado por Probus (Barcelona, España), bora-
to sódico por Riedel-deHaën (Esebre, Alemania) el ácido triuoroacético (TFA),
sulfato de cobre (CuSO4) y fosfato sódico dibásico (Na2HPO4) e hidróxido sódi-
151
co (NaOH) fueron suministrado por Panreac (Barcelona, España) y trihidruro de

nitrógeno (disolución de NH3 al 28-30 %) y el ácido clorhídrico (HCl)por Merck
(Darmstadt, Alemania).
El agua empleada, en todos los casos, fue puricada mediante el sistema Milli-Q
(Millipore, Bedford, USA). Los disolventes acetonitrilo y metanol fueron suminis-
trados por Fluka Chemie (Buchs, Suiza), etanol por Alcoholes del Sur (Córdaba,
España), 1-propanol y ádico sulfúrico (98 % pureza) por Panreac (Barcelona, Es-
paña).
Todos los disolventes y disoluciones de los reactivos fueron ltrados a través

del sistema Milli-Q plus (Millipore, Bedford, MA, USA). Los ltros para la pre-
paración de las muestras fueron de celulosa regenerada de 0,2 µm de tamaño de
poro (Minisart Sartorius Steidem Biotech, Goettingen, Alemania).
3.2.2. Instrumentación y programas informáticos
El equipo de electroforesis capilar fue HP

3D CE instrument (Agilent Tech-
nologies, Waldbron, Alemania) equipado con un detector de diodos en línea, un

módulo de termostatización del capilar y muestreador automático.
La optimización de las separaciones se llevó a cabo en dos capilares: el primero

fue un capilar recubierto de sílice fundida, de Agilent (Alemania), de 36 cm x 50
mm d.i., con distancia efectiva hasta el detector de 28 cm; el segundo presenta-
ba características similares pero de 36 cm de longitud y 20mm d.i, con distancia
efectiva hasta el detector de 28 cm.
Para la adquisición y subsecuente procesado de los electroferogramas se empleó

el programa HP ChemStation.
Para realizar los espectros de absorbancia de los colorantes se ha utilizado un

espectrofotómetro Agilent 8453E (Waldbronn, Alemania) realizando el tratamien-
to de datos con el programa Chemstation.
Las medidas de pH fueron realizadas con un pH-metro CRISON Instruments

S.A. D501.
152
3.2.3. Preparación de las muestras

3.2.3.1. Sustancias de referencia
Las sustancias de referencia de los colorantes fueron obtenidas por extracción
desde las diferentes fuentes descritas usando los disolventes adecuados.
El rojo de carmín, rojo de Rubia y rojo de madera de Brasil se extrajeron
colocando en vasos de precipitado individuales los insectos y las plantas trituradas
con agua desionizada a 30 ºC durante 15 min. Después las disoluciones coloreadas
fueron ltradas con papel de ltro neutro. Seguidamente estas disoluciones fueron
evaporadas hasta sequedad con corriente de nitrógeno y los extractos se redisol-
vieron en el volumen adecuado de agua Milli-Q para conseguir una concentración
de 5 g/l.
Los patrones puros de los compuestos de los colorantes se disolvieron en agua en
una concentración de 0,5 g/l. Aunque se trabajó con estas sustancias para vericar
algunos de los resultados, todo el trabajo de optimización se realizó empleando
las sustancias de referencia obtenidas directamente de las fuentes naturales para
obtener los mismos compuestos con los que el artista trabajaba en su taller.
Los patrones del ácido y los monosacáridos componentes de la goma arábiga
fueron disueltos directamente en agua ultrapura en una concentración 3 mM. Estos
patrones se emplearon para dopar las muestras e identicar los picos electroforé-
ticos de la goma arábiga.
Los extractos de los monosacáridos y el ácido que componen la goma arábiga
fueron extraídos de esta resina colocando 10 mg de goma arábiga en un vial con
º
2 ml de TFA 2M manteniéndolo a 110 C durante 1 h y 30 min para realizar el
tratamiento de hidrólisis de los polisacáridos. Después, se eliminó el TFA pasando
una corriente de nitrógeno. El residuo nal fue reconstituido en 200 µl de agua
ultrapura.
3.2.3.2. Muestra de laboratorio

Se preparó una muestra simulando una capa de acuarela con cada uno de los
colorantes sobre una pieza de papel de algodón sin encolates ni colorantes. El
procedimiento para la elaboración de esta tinta fue similar el empleado en el taller
de un artista.
El colorante se extrajo de la fuente natural correspondiente colocando los in-
sectos o las sustancias vegetales en un recipiente con agua y calentado suavemente
153
hasta que la disolución se coloreó. A continuación se extrajeron los restos sólidos

usando papel de ltro, y la disolución restante se llevó a sequedad hasta conseguir
una pasta coloreada. Esta pasta se aglutinó con goma arábiga preparada ante-
riormente en agua al baño maría. A la pasta se le añadió el aglutinante suciente
para conseguir una capa cubriente y uida de fácil aplicación con un pincel de
celda suave. Se aplicaron varias capas sobre el papel y se dejaron secar durante
una semana antes de proceder a su análisis. La concentración del colorante y la
goma fue desconocida. Esto no es mayor problema en este caso ya que un artista
o escribano realizaba este proceso de manera artesanal y dejándose llevar por la
experiencia y el aspecto de las mezclas.
Para la extracción de la muestra se usó un pincel cargado con una disolución
acuosa de SDS 0,1 M y se frotó sobre la supercie. La muestra extraída se intro-
dujo en un microvial al que 100 µl de SDS 0,1 M. Seguidamente la muestra de
hidrolizó siguiendo el proceso descrito. Por último se eliminó el TFA con corriente
de nitrógeno y se reconstituyó la muestra en 100 µl de agua ultrapura.
3.2.3.3. Toma y tratamiento de las muestras de pergaminos
Las muestras analizadas de la colección de pergaminos fueron obtenidas si-
guiendo el método propuesto por Blanc y col. [Blanc y col., 2006], usando un
pincel cargado con un disolución acuosa de SDS 0,1 M y aplicándolo directamente
sobre la capa de color del pergamino. Esta muestra se introdujo en un micro-vial
al que se añadió 100 µl de SDS 0,1 M. Ninguna de las muestras se ltró para evitar
que parte del colorante se quedase retenido en la membrana.0
Después se le aplicó el tratamiento de hidrólisis descrito con anterioridad a
todas las muestras, eliminando el TFA con corriente de nitrógeno y reconstituyendo
los residuos en 100 µl de agua ultrapura. Una vez completado el tratamiento, las
muestras fueron inyectadas en el capilar para separar e identicar los colorantes
orgánicos y la goma.
3.3. Metodología analítica empleada

3.3.1. Espectrofotometría UV-vis
Para obtener los espectros de absorbancia de las muestras de referencia, las
disoluciones acuosas de cada una de las sustancias se introdujeron en una cubeta
154
de cuarzo ajustando las concentraciones en cada caso para no saturar el detector.

El estudio de absorción se realizó en un rango comprendido entre 190 y 1100 nm.
3.3.2. Electroforesis capilar

Antes de utilizar el capilar por primera vez este fue acondicionado con NaOH
1 M durante 20 min, seguido de agua desionizada durante 10 min y por último 20
min de la disolución tampón.
El acondicionamiento habitual al inicio de cada sesión de trabajo se realizó
º
a 20 C haciendo pasar NaOH 0,1 M durante 5 min, agua desionizada durante 3
min y la disolución tampón durante 7 min. Con este acondicionamiento se aseguró
la reproducibilidad de los electroforegramas y la estabilidad de los tiempos de
migración.
Después de cada sesión y antes de guardar el capilar también se realizaron
trabajos de acondicionamiento. Se pasó agua desionizada durante 3 min y segui-
damente una corriente de aire para secar el capilar.
La disolución tampón estaba compuesta por fosfato trisódico 20 mM, CTAB 0,5
mM y PDC 40mM a pH 12,2 ltrada con una membrana de 0,20 µm. La separación
fue llevada a cabo a -20 kV resultando una corriente de 19 µA, realizándose a
º
temperatura constate de 20 C. La muestra se inyectó por el ánodo con una presión
de 50 mbar durante 10 s. El tiempo de análisis fue de 20 min. La detección se
realizó en tres canales a 270, 252 y 335 nm. Para todas las muestras y condiciones
se realizaron 3 réplicas instrumentales y 3 experimentales.
3.4. Resultados y discusión

3.4.1. Espectrofotometría UV-vis
Previo al desarrollo y optimización del método electroforético se desarrolló el
estudio espectrofotométrico de los colorantes para poder caracterizarlos y seleccio-
nar la longitud de onda de absorción adecuada para la detección por PDA según
la absorción máxima (máx) de cada analito.
Con los datos obtenidos (tabla 3.1) se llegó a una solución de compromiso y
se seleccionó 270 nm como longitud de onda adecuada para la identicación de
los componentes de la goma arábiga y rojo de Rubia y, simultaneamente, 335 nm
155
para la identicación de los componentes de rojo de carmín y rojo de madera de

Brasil. [López-Montes, 2006]
Tabla 3.1: Loongitudes de onda de absorción máxima de los analitos estudiados y

longitud de onda optimizada para su identicación.
3.4.2. Optimización del método electroforético

Para la elaboración del método electroforético se han optimizado cada una
de las variables experimentales e instrumentales de manera individual, con una
muestra compuesta por todos los analitos implicados (los colorantes rojos naturales
y la goma arábiga).
Para la optimización de dichas variables, además de conocer la solubilidad y
el espectro UV-vis, fue necesario recopilar los valores de pKa de cada uno de los
compuestos. En la tabla 3.2 se recogen los datos.
Tabla 3.2: Valores de pKa de los analitos.
156
3.4.2.1. Optimización de las variables experimentales

Partiendo de la bibliografía consultada sobre la identicación de monosacári-
dos en la que se aconseja emplear tampones de pH básico dado el alto valor de
pKa de los monosacáridos, y dado que este rango de alcalinidad también sería
compatible para la separación de los colorantes rojo, se comenzó ensayando el mé-
todo propuesto por Rovio y col. [Rovio, 2008] empleando un electrolito formado
por NaOH 130 mM y Na2HPO4 36 mM a pH 12,6.
Los resultados no fueron óptimos ya que algunos monosacáridos se solapaban
y no se obtenía ninguna señal de los colorantes. El siguiente método ensayado fue
el propuesto por Bazzarelle y col. [Bazzarella, 1998] con un electrolito compuesto
por CuSO4 60 mM y NH3 500 mM a pH 11,6. En este caso ni los colorantes ni el
ácido glucurónico pudieron ser identicados.
Siguiendo con este método, se creó una variante añadiendo borato sódico 40
mM a pH 10,3, combinando la propuesta anterior con la realizada en 2007 por
López-Montes y col. para la identicación de colorantes naturales [Bazzarella,
1998], pero los resultados no fueron mejorados.
Por último, y combinando los métodos propuestos por Mazanek [Mazanek,
2006] y Gröÿl [Gröÿl y col., 2005], se realizó una disolución electrolítica compuesta
por PDC 20 mM (cromóforo), CTAB 0,5 mM (inversor de ujo) y Na2HPO4
−3
10mM (electrolito soporte) a pH 12,1 en polaridad negativa para invertir la pola-

ridad de la fuente (movilidad del cátodo al ánodo.
Se añadió PDC para conseguir determinar los monosacáridos, ya que no contie-
nen ningún grupo cromóforo, utilizando detección UV-Vis indirecta. En este caso
el electrolito absorbe la radiación y los compuestos de interés se determinan por
la disminución de absorbancia. El inversor de ujo CTAB se añadió al electrolito
soporte para forzar el ujo electroosmótico hacia el ánodo junto con el potencial
negativo para el análisis de los aniones.
157
Con este electrolito se consiguió obtener señal de todos los colorantes (identi-
cación directa) y el aglutinante (identicación indirecta) presentes en la muestra.
Una vez obtenido el electrolito adecuado, se continuó con la optimización de
las concentraciones de los reactivos, el pH y el efecto ocasionado por la adición
de modicadores orgánicos con el n de conseguir separar e identicar todos los
analitos.
La concentración del electrolito soporte Na2HPO4
−3 3 se estudió en un rango
de concentración comprendido entre 5 y 40 mM, además de compararlo con un

electrolito sin este reactivo (0, 5, 10, 20, 30 y 40 mM). Se observó que la adicción
de Na2HPO4
−3 era imprescindible para evitar solapamientos, optimizando su con-
centración en 20 mM, ya que se conseguía mejor separación de los monosacáridos

además de mayor señal, similar comportamiento para el pico correspondiente al
ácido carmínico, que también aumentaba en área e intensidad (Figura 3.2).
158
Figura 3.2: Electroferogramas de mezcla patrón para el estudio de la concentración

del electrolito soporte HPO4
−3 . Tampón PDC 20 mM, CTAB 0,5 mM y PO4−3 ;
a º
pH 12,1; T 25 C; -10 kV. Izq. 270 nm; drcha. 335 nm. Identicación de los picos:
(1) ácido glucurónico; (2) Ramnosa; (3) arabinosa; (4) galactosa; (5) alizarín; (6)
purpurín; (7) brazilina; (8) brazileina; (9) ácido carmínico.
159
Se estudió en concentraciones de CTAB en concentraciones de 0,5, 1, y 1,5

mM seleccionándose 0,5 mM porque se conseguía mejor separación de los picos
electroforéticos y una corriente adecuada de -56 µA al aplicar un voltaje de -
10 kV. A partir de 1 mM se detectó un efecto de desdoblamiento de los picos
electroforéticos correspondientes a los monosacáridos (Figura 3.3).

del inversor de ujo CTAB. Tampón PDC 20 mM, PO4
−3 20 mM y CTAB ; pH
12,1; T
a 25 ºC; -10 kV. Izq. 270 nm; drcha. 335 nm. Identicación de los picos:
(1) ácido glucurónico; (2) ramnosa; (3) arabinosa; (4) galactosa; (5) alizarín; (6)
160
La concentración del cromóforo PDC se ensayó en el rango comprendido entre

10 y 40 mM (10, 20 30 y 40 mM) (Figura 3.4). Al aumentar la concentración se
mejoraba ligeramente la separación de las señales de brazilina y brazileina además
de que los picos correspondientes a la goma arábiga y el resto de los componentes
de los rojos se estrechaban y aumentaban en intensidad, por lo tanto se seleccionó
PDC a 40mM.

del cromóforo PDC. Tampón PO4
−3 20 mM, CTAB 0,5 mM y PDC; pH 12,1; Ta
25 ºC; -10 kV. Izq. 270 nm; drcha. 335 nm. Identicación de los picos: (1) ácido
glucurónico; (2) ramnosa; (3) arabinosa; (4) galactosa; (5) alizarín; (6) purpurín;
(7) brazilina; (8) brazileina; (9) ácido carmínico.
161
El efecto del pH sobre el electrolito compuesto por PDC 40mM, CTAB 0,5
mM y Na2HPO4
−3 20 mM se estudió, inicialmente, en el rango comprendido entre
9 y 12,7 en pasos de 1 unidad (pH 9, 10, 11, 12 y 12,7) ajustando el pH con HCl
1N ó NaOH 1N.
Se observó que a un pH inferior a 11 no se conseguía la identicación de ninguno
de los analitos y que a pH 12,7 algunas de ellos no se detectaban. Así pues se ajustó
el rango de estudio del pH entre 11 y 12,5 (Figura 3.5). Los mejores resultados se
obtuvieron a pH 12 aunque se consideró trabajar a pH 12,1 porque los resultados
eran idénticos y este era el pH propio del electrolito.
Figura 3.5: Electroferogramas de mezcla patrón para el estudio del pH. Tampón
PDC 20 mM, HPO4
−3 20 mM y CTAB 0,5 mM; Ta 25 ºC; -10 kV. Izq. 270 nm;
drcha. 335 nm. Identicación de los picos: (1) ácido glucurónico; (2) ramnosa; (3)
arabinosa; (4) galactosa; (5) alizarín; (6) purpurín; (7) brazilina; (8) brazileina;
(9) ácido carmínico.
162
A continuación se analizó la inuencia de un modicador orgánico al 5 % (v/v)

en la composición del electrolito (Figura 3.6) con el n de mejorar la separación
modicando la polaridad y viscosidad del electrolito. Los modicadores orgánicos
seleccionados fueron: etanol, 1-propanol, acetonitrilo y metanol. Finalmente se
descartó el uso de cualquier modicador orgánico porque retrasaba la migración
de los picos electroforéticos sin mejorar la separación o reducían la intensidad de
la señal.
Figura 3.6: Electroferogramas de mezcla patrón para el estudio del modicador

orgánico. Tampón PDC 20 mM, PO4
−3 20 mM y CTAB 0,5 mM; pH 12,1; Ta
163
3.4.2.2. Optimización de las variables instrumentales

Se describe, a continuación, la inuencia ejercida por las principales variables
instrumentales que afectan a la separación de la mezcla de colorantes estudiados
mediante CE: temperatura durante la separación, voltaje aplicado e inyección de
la muestra.
La temperatura fue estudiada en el rango comprendido entre 20 y 30 ºC (Fi-

gura 3.7). Al aumentar la temperatura el tiempo de análisis se reducía pero la
resolución de los compuestos empeoraba. Por lo tanto se seleccionó 20 ºC por ob-
tenerse los mejores resultados además de trabajar en una temperatura cercana a
la temperatura ambiente y facilitar el control de esta.
Figura 3.7: Electroferogramas de mezcla patrón para el estudio de la temperatura.

Tampón PDC 20 mM , PO4
−3 20 mM y CTAB 0,5 mM; pH 12,1; -10 kV. Izq. 270
nm; drcha. 335 nm. Identicación de los picos: (1) ácido glucurónico; (2) ramnosa;
(3) arabinosa; (4) galactosa; (5) alizarín; (6) purpurín; (7) brazilina; (8) brazileina;
(9) ácido carmínico.
164
La aplicación del voltaje fue estudiada en un rango comprendido entre 5 y 15

kV (-5, -7, -10, -12 y -15 kV) en polaridad negativa (Figura 3.8). A -5 kV no se
consiguió la identicación de la goma arábiga, y el resto de las señales fueron de
menor intensidad. Entre -12 y -15 kV los picos de goma arábiga y de rojo de Rubia
se solapan, por lo que se decidió realizar la separación a -10 kV.
Figura 3.8: Electroferogramas de mezcla patrón para el estudio de la aplicación de

voltaje. Tampón PDC 20 mM, PO4
−3 20 mM y CTAB 0,5 mM; pH 12,1; Ta 25
ºC. Izq. 270 nm; drcha. 335 nm. Identicación de los picos: (1) ácido glucurónico;
(2) ramnosa; (3) arabinosa; (4) galactosa; (5) alizarín; (6) purpurín; (7) brazilina;
(8) brazileina; (9) ácido carmínico.
165
Por último se optimizó las condiciones de inyección de la muestra empleando

el modo de inyección hidrodinámica
2 manteniendo la presión a 50 mbar y modi-
cando los tiempos de inyección entre 1 y 5 segundos en pasos de 1 segundo (Figura

3.9). Tiempos superiores a 4 segundos inyectaba tanta cantidad de muestra que
se solapaban algunos picos. Con solo 1 segundo de inyección la cantidad de mues-
tra era insuciente para su análisis. Respecto a los resultados obtenidos a 2 y 3
segundos se seleccionó 2 segundos porque los picos estaban mejor resueltos a prác-
ticamente iguales condiciones de altura y área respecto a la inyección realizada a
3 segundos.
Figura 3.9: Electroferogramas de mezcla patrón para el estudio de la aplicación de

la inyección de la muestra. Tampón PDC 20 mM, PO4
−3 20 mM y CTAB 0,5 mM;
a º
pH 12,1; T 20 C; -10 kV. Izq. 270 nm; drcha. 335 nm. Identicación de los picos:
(1) ácido glucurónico; (2) ramnosa; (3) arabinosa; (4) galactosa; (5) alizarín; (6)
2
En este tipo de inyección, la introducción de la muestra se realiza por presión, succión o
gravedad. El equipo empleado realiza la introducción de la muestra por presión en el extremo
inicial del capilar. Este sistema es menos discriminatorio que la inyección electrocinética.
166
Después de haber optimizado todos los parámetros, no se consiguió la sepa-

ración óptima entre los picos correspondientes a la arabinosa (3) (monosacáridos
de la goma arábiga) y el compuesto de purpurín (6) correspondientes al rojo de
Rubia, por lo que se intentó mejorar esta separación utilizando un capilar de 20
µm diámetro interno, inferior al utilizado hasta este momento.
Todos los parámetros optimizados con anterioridad fueron respetados, a ex-
cepción del voltaje aplicado (que debía aumentarse porque la corriente obtenida
a -15 µA era demasiado baja al trabajar con el capilar más delgado) y las con-
diciones de inyección de la muestra. El voltaje se volvió a optimizar entre -20 y
-30 kV para conseguir una corriente adecuada, seleccionando -20 kV, ya que a -30
kV la corriente era tan alta que estropeaba el capilar. La inyección hidrodinámica
se estudió manteniendo la presión ja a 50 mbar y variando los tiempos de inyec-
ción entre 5 y 12 segundos, seleccionando 10 segundos como valor óptimo (Figura
3.10). En inyecciones hidrodinámicas, un tiempo de inyección elevado puede causar
el ensanchamiento de los picos y el empeoramiento de la separación. Pero hay que
tener también en cuenta que el volumen de la muestra inyectada dependerá de la
viscosidad del electrolito, la presión, el tiempo de inyección y las dimensiones del
capilar. Por esto, al trabajar con un capilar de diámetro reducido (20 µm d.i.) se
determinó elevar hasta 10 s el tiempo de inyección comprobando que la separación
y forma de los picos era adecuada.
167
Figura 3.10: Electroferogramas de la mezcla patrón obtenidos tras la optimización

del método. Tampón PDC 20 mM, PO4
−3 20 mM y CTAB 0,5 mM ; pH 12,1; Ta
Con el uso de un capilar de menor diámetro se consiguió mejorar la sensibilidad

de los picos electroforéticos de ácido glucurónico (1) y galactosa (4). También se
mejoró la resolución entre los picos de ramnosa (2), arabinosa y pururín (3,6) y
galactosa (4). Además se redujo el tiempo de análisis. La separación de las señales
correspondientes a arabinosa y purpurín no fue posible a pesar de la optimización
de todos los parámetros. En cualquier caso, los compuestos alizarín y purpurín
aparecerán siempre en conjunto puesto que la separación de ambos solo se puede
realizar en un laboratorio por medios químicos y el escribano o artista que empleara
el rojo de Rubia lo emplearía extrayendo ambos compuestos de la raíz o con un
colorantes comercializado con ambos compuestos. Tampoco podría dar lugar a
error la confusión por la identicación de purpurín en lugar de arabinosa porque
este monosacárido también aparecería en conjunto con el resto de monosacáridos
y el ácido que componen la goma arábiga.
En la tabla 3 se muestran las condiciones óptimas del método electroforético y
en la gura 9 los electroferogramas obtenidos bajo las condiciones óptimas, a 270
y 335 nm, de la muestra con mezcla de todos los analitos. En la tabla 4 se recogen
los tiempos de migración de cada analito y sus longitudes de onda máximas.
168
Tabla 3.3: Condiciones óptimas del método electroforético.
Tabla 3.4: Tiempos de migración y longitudes de onda máximas.
3.4.3. Aplicación del método

La aplicación de la metodología propuesta se llevó a cabo en dos etapas. En la
primera etapa se preparó una muestra en el laboratorio simulando una tinta de es-
critura con materiales conocidos con el objeto de validar la metodología propuesta
así como la toma y tratamiento de muestra. En la segunda etapa se aplicó dicha
metodología para analizar las muestras de la colección de pergaminos manuscritos.
169
3.4.3.1. Muestra de laboratorio

La toma y tratamiento de muestra y el análisis simultáneo de los componentes
de las muestras realizadas en el laboratorio fue efectivo. Se preparon muestras de
cada uno de los colorantes aglutinados con goma arábiga para comprobar la idonei-
dad del método desarrollado. Se muestra, a modo de ejemplo, los electroferogramas
obtenidos de una de una de las muestra preparada, donde puede identicarse el
ácido carmínico procedente del rojo de carmín y el ácido y los tres monosacáridos
componentes de la goma arábiga (Figura 3.11). Las ligeras variaciones en los tiem-
pos de migración están dentro del error estándar relativo de tiempo de migración
calculado para esta técnica (menor a 0,5 %).
Figura 3.11: Capa de color de rojo de carmín preparada en el laboratorio para

validar el método. Tampón PDC 20 mM, PO4
−3 20 mM y CTAB 0,5 mM; pH
a
12,1; T 20 ºC; -20 kV. Izq. 270 nm; drcha. 335 nm. Identicación de los picos: (1)
ácido glucurónico; (2) ramnosa; (3) arabinosa; (4) galactosa; (9) ácido carmínico.
3.4.3.2. Muestra de la colección de pergaminos

El método fue aplicado sobre la colección de pergaminos manuscritos de la
Real Chancillería de Granda compuesta por 219 documentos.
Tras la consulta directa de la colección se seleccionaron un total de 27 manus-
critos que contenían tintas rojas, naranjas o rosas. De entre ellos se tomaron 44
muestras de las que 28 dieron resultado positivo mientras que 16 dieron resultado
negativo para los analitos que se pretendían identicar.
170
La identicación de los analitos se basó en los tiempos de migración y el es-

pectro UV-vis obtenido en el ápice del pico electroforético comparando con los
resultados obtenidos de las muestras empleadas como patrón. En los casos en los
que había dudas, debido a la baja concentración del analito, las muestras se dopa-
ron añadiendo una pequeña concentración de los patrones conocidos para observar
si los picos electroforéticas aumentaban en área o altura y por lo tanto correspon-
dían a los analitos de estudio.
Las tablas 3.5, 3.6 y 3.7 recoge el número de muestras tomadas de cada uno
de los manuscritos junto con el año en el que se ha datado el documento y las
sustancias identicadas.
171
Tabla 3.5: Resultados de los análisis sobre las muestras obtenidas de la colección
de pergaminos I.
172
de pergaminos II.
173
de pergaminos III.
De las muestras analizadas se destacan los siguientes resultados.
En cuanto a la identicación de los colorantes rojos, el rojo de carmín se

identicó en 14 muestras correspondientes a los documentos número 1, 36, 47,
48, 50, 52, 58, 59, 71, 116, 127, 157, 180 y 188, correspondiendo la muestra más
antigua al año 1462 y la más reciente a 1700. El rojo procedente de la madera de
Brasil se encontró exclusivamente en una muestra del mapa número 52 fechado
en 1608. Finalmente el rojo de Rubia no se identicó en ninguna muestra de las
analizadas.
La presencia de goma arábiga se identicó en 19 muestras pertenecientes a los

documentos número 8, 17, 36, 47, 50, 51, 52, 57, 58, 174 y 188, correspondiendo
la muestra más antigua al año 1431 y la más reciente al año 1608.
174
La identicación simultánea de colorantes y goma arábiga fue positiva en 4

muestras del total analizadas: en los manuscritos 36, 47 y 58 (Figura 3.12) se
identicó rojo de carmín y goma arábiga (Figura 3.13), siendo el documento más
antiguo fechado en 1462, por lo que señalamos que el ácido carmínico caracterís-
tico de esta muestra roja no puede proceder de la cochinilla Coccus cacti, puesto
que aún no había intercambio comercial con América del Sur, por lo que podría
proceder de la cochinilla de Armenia u otro insecto europeo o asiático; en el ma-
nuscrito 52 (Figura 3.14) fechado en 1608, se identicó la mezcla de rojo carmín,
rojo de madera de Brasil y goma arábiga (Figura 3.15). Las chas descriptivas de
los pergaminos pueden consultarse en el apéndice A.
Figura 3.12: Imágen de pergamino, referencia: ES.18087. ARCHGR / 060CDMA

// Pergamino n º 36.
175
Figura 3.13: Electroferogramas de la muestra procedente del pergamino n º 36.

Izq. 270 nm; drcha. 335 nm. Identicación de los picos: (1) ácido glucurónico; (2)
Ramnosa; (3) arabinosa; (4) galactosa; (9) ácido carmínico.
Figura 3.14: Imágen de pergamino, referencia: ES.18087. ARCHGR / 060CDMA

// Pergamino n º 52.
176
Figura 3.15: Electroferogramas de la muestra procedente del pergamino n º 52.

Izq. 270 nm; drcha. 335 nm. Identicación de los picos: (1) ácido glucurónico; (2)
Ramnosa; (3) arabinosa; (4) galactosa; (8) brazileina; (9) ácido carmínico.
3.5. Conclusiones
Se ha comprobado que CE-PDA es una técnica óptima de análisis para la
separación e identicación de la goma arábiga y los colorantes presentes en este
estudio. La identicación de la mezcla de los analitos seleccionados es efectiva,
usando una única muestra y un único tratamiento de muestra.
La toma y tratamiento de las muestras es simple, rápido y económico.
La muestra necesaria es mínima, del orden de los microgramos, por lo que se
considera que es un sistema de identicación de micromuestras con una técnica de
análisis micro-invasiva.
Las muestras presentaron electroferogramas bastante limpios a pesar de las
complejas matrices con las que se trató, por lo que cabría armar que el método
de tratamiento de muestra e identicación es, además, muy selectivo.
La principal ventaja de la identicación simultánea radica en la obtención de
gran información con poco número de muestras, por lo que se protege la integridad
física del documento.
En cuanto a la colección estudiada, se observa que los ilustradores no suelen
emplear mezclas de colorantes rojos, excepto en uno de los casos en el que se
177
pudo emplear para modicar la tonalidad roja, por el uso de capas superpuestas,
o por la simple contaminación del pincel. También se ha observado que es mucho
más común el uso de rojo de carmín dentro del grupo de rojos orgánicos en esta
colección.
El uso de la goma arábiga como aglutinante fue habitual en las técnicas de
decoración de obras manuscritas sobre pergamino durante la edad media y hasta el
s. XVIII como se ha podido comprobar con la gran cantidad de muestras positivas.
En aquellas en las que no se ha identicado el aglutinante, puede deberse al uso
de otras sustancias como aglutinante (goma de tragacanto, colas, huevo. . . ) o a la
baja concentración de la goma arábiga.
La insistencia en el empleo de electoforesis capilar para el análisis de materia-
les en patrimonio cultural que se lleva realizando desde 2007, se debe a la baja
cantidad de muestra necesaria para su análsis (técnica micro-invasiva) y a la gran
información que se puede obtener de un solo análisis; sumando los conocimientos
que ya se tienen, se puede identicar de manera simultánea los colorantes, agluti-
nantes e incluso el estado de envejecimiento de los materiales con una sola muestra
y un único análisis.
178
Capítulo 4
Les colorants rouges (XIXe et

XXe) de la collection provenant
de l'Institut Supérieur Industriel
de Verviers (Belgique) : étude
historique et
spectrophotométrique
RESUMEN
El centro Ernest-Babelon cuenta, actualmente, con la colección de colorantes
industriales destinados al teñido de textiles proveniente del Instituto Superior In-
dustrial de Verviers (Bélgica), cedida una vez que cesó su actividad. Los productos
custodiados representan un conjunto de material industrial de valor inestimable
del siglo XIX.
Los análisis para la caracterización de los colorantes efectuados en el Centro

han sido la espectrometría de absorción por reexión difusa, la espectrometría de
uorescencia de rayos X y la colorimetría. El hecho de disponer de muestra permitió
efectuar otros análisis espectrales complementarios con espectrofotometría UV-vis,
179
disponible en el Departamento de Química Analítica de la Universidad de Granada

(España), trabajo realizado durante una colaboración entre ambos organismos.
Su clasicación y caracterización por métodos de análisis espectrométricos
podrán representar una contribución importante en arqueología industrial. Es-
ta caracterización no será únicamente un conjunto de datos, sino que permitirá
establecer una base de referencia correspondiente a un periodo insucientemente
representado hoy en día, además de engrosar el campo de estudios sobre pigmentos
y colorantes en un espacio temporal distinto a la prehistoria o la Edad Media.
ABSTRACT
The Center Ernest-Babelon hosts an important collection of textile industrial
dyes from the Superior Industrial Institute of Verviers (Belgium). The collection
was donated to the Center when the Institute was closed down. This industrial
materials collection from the 19th century has an inestimable know-how value.
At the Center, absorption spectroscopy/diuse reectance, X-ray uorescence
spectrometry and colorimetry were used in order to characterize these dyes. The
availability of the samples allowed carrying out additional analyses with UV-vis
spectrophotometry in the Analytical Chemistry Department of the University of
Granada (Spain) through collaboration between the two institutes.
The classication and characterization by spectrometry techniques will be an
important scientic contribution to industrial archaeology. The large set of data
gathered through the characterization will not only be quantitative but should
enable establishing a database of dyes from this insuciently represented period
of time, in contrast to the large amount of available studies on prehistoric and
medieval pigments and dyes.
RÉSUMÉ
Une collection de colorants industriels destinés à la teinture des textiles se
trouve aujourd'hui déposée au Centre Ernest-Babelon. Elle provient de L'Institut
Supérieur Industriel Textile de Verviers (Belgique) qui a depuis plusieurs années
cessé son activité. Les produits sauvegardés représentent un ensemble industriel
inestimable en matière de savoir-faire remontant au XIXe siècle.
Les analyses pour la caractérisation des colorants ont été principalement eec-
tuées au moyen de méthodes développées au Centre : la spectrométrie d'absorption
180
par réexion diuse la spectrométrie de uorescence X et la colorimétrie. Le fait

de disposer des échantillons a permis d'eectuer d'autres analyses spectrales com-
plémentaires dont la spectrophotométrie UV-vis, disponible au département de
Chimie Analytique de l'Université de Grenade (Espagne). Ces analyses ont été
eectuées dans le cadre d'une collaboration entre les deux organismes.
Le classement et la caractérisation de ces colorants par des méthodes d'analyses
spectrométriques pourront représenter une contribution importante à l'archéologie
industrielle. Cette caractérisation ne sera pas uniquement un ensemble de données
de type quantitatif, elle permettra d'établir une base de données de référence
correspondant à une période insusamment représentée à ce jour et élargir ainsi
le domaine d'étude des pigments et colorants à un espace temporel autre que celui
de la préhistoire ou du moyen-âge.
181
4.1. Introduction
Dans l'histoire de l'art, l'histoire contemporaine est une période d'une grande
importance dans le développement des matériaux. Les colorants synthétiques tex-
tiles du début de la fabrication des colorants synthétiques à l'explosion industrielle
à la n du XIXe siècle sont encore mal connus. Les eorts pour l'étude et le recueil
de données d'analyses restent insusants.
Ces types de colorants sont rarement mentionnés dans la bibliographie de la
conservation des textiles, donnant une fausse impression indiquant que les colo-
rants organiques synthétiques sont peu employés, alors qu'ils sont une des princi-
pales sources de la teinture textile malgré qu'ils soient des produits très polluants.
Actuellement, il existe environ 5000 colorants le cuir, le papier, les textiles ou
les aliments. Cela ne veut pas dire que notre ÷il et capable de diérencier autant
de nuances de couleurs mais l'existence de ces nombreux produits traduit une
évolution basée sur des considérations strictement techniques si ce n'est purement
commerciales.
4.1.1. L'Institut Supérieur Industriel Textile

La province de Liège est une province wallonne de Belgique. Verviers est l'un
des quatre arrondissements administratifs de la province de Liège. A l'ère industrie-
lle (du XVIIIe au début du XXe siècle) elle fut un centre important de production
lainière connu et reconnu mondialement pour ses innovations technologiques
1 . En
1842, la Chambre de Commerce avait un établissement d'enseignement profession-

nel d'ordre général, mais la création de l'enseignement textile proprement dit à
Verviers remonte à l'année 1855 quand la Chambre de Commerce créa une Ecole
2
de tissage , origine de l'Institut Supérieur Industriel de la Communauté française
de Belgique (à partir de 1992).
Les sujets principaux qui sont conés à l'Institut Supérieur Industriel Textile
pour la formation des ingénieurs sont en rapport avec l'industrie textile : la chimie
des textiles et des colorants, la gestion économique et nancière de l'entreprise ou
bien l'aspect écologique de techniques de production.
En 2006, la collection de colorants modernes en provenance de l'Institut Su-
périeur Industriel Textile de Verviers (Belgique) a été conée au Centre Ernest-
1
www.verviers.be Consultation 8/07/2008.
2
www.verviers.be Consultation 30/06/2008.
182
Babelon. Dans la collection des colorants modernes en provenance de Verviers

presque tous les acons conservent leur étiquette d'origine. Ainsi, on peut consta-
ter la grande variété des entreprises internationales consacrées à la fabrication et
à la commercialisation de colorants et pigments pour les textiles durant les XIXe
et XXe siècles.
Ces colorants modernes proviennent de marques diérentes et de pays distincts.
Les marques classées par pays d'origine sont :
Suisse ( Ciba, Geigy, Ciba-Geigy, Sandoz)
Allemagne (Basf, Hoechst, Cassella, Cassella-Hoechst, Bayer, IG Farbenin-

dustrie)
Angleterre (L.B. Holliday, I.C.I., Yorkshire Chemicals Ltd.)
Belgique (Les colorants de Tertre S.A., Althouse Tertre S.A., TERTRE car-
bonichimique S.A., ETS J. Vandemeulebroucke S.A.)
France (Ets Kuhlmann, Francaise des matières colorantes S.A., Francolor)
Hollande (Vondelingenplaat)
U.S.A. (Dupont de Nemours)
Italie (Aziende colori nazionali ani)
Les cinq principales marques CIBA, L.B. Holliday, Basf, Geigy et Hoechst (com-
ptant chacune environ une centaine de produits) représentent plus de 55 % des
1185 échantillons inventoriés (pour l'instant, 40 bacs étiquetés et numérotés).
4.1.2. Les entreprises productrices des colorants

Geigy, Ciba et Sandoz ont été crées à Bâle, ces entreprises ont initialement
fait le commerce de teintures pour textiles puis plus tard celui des médicaments.
La plus ancienne des trois est Geigy, créée au milieu du XVIIIe siècle, devient
Ciba aux environs de 1860 puis Sandoz en 1886 [Fontrodona, 2005]. Les noms de
Geigy et Sandoz proviennent de ses fondateurs, alors que Ciba vient des initiales
de Company for Chemical Industry Basel . Le groupe international Novartis
provient de la fusion de ces trois entreprises.
183
Geigy
L'histoire des sociétés fondatrices de Novartis commence en 1758 quand Johann
Rudolf Geigy-Gemuseus crée à Bâle une société pour faire le commerce de
Matériaux, produits chimiques, teintures et médicaments en tous genres . En
1857, Johann Rudolf Geigy Merian, en association avec Johann Müller-Pack, fait
l'acquisition d'un terrain à Bâle sur lequel il construit un moulin pour le pilage
des bois de teinture et une usine d'extraction des teintures. Deux ans plus tard, ils
amorcent la production de fuchsine synthétique. Au début du XXe siècle la raison
sociale de l'entreprise devient J.R. Geigy Ltd. Vingt ans après, c'est la création à
Manchester de la société Geigy Colour Company Ltd. et trois ans plus, tard
la construction d'une usine à Huningue, en France.
En 1925, commence la concurrence avec Ciba pour la fabrication de pro-
duits auxiliaires textiles et un peu plus tard avec le démarrage de la produc-
tion d'insecticides. En 1939, Paul Müller, chercheur à Geigy, découvre l'ecacité
du DDT, découverte qui lui vaut le prix Nobel en 1948. Geigy perdure avec
l'introduction de nouveaux herbicides et médicaments jusqu'en 1970 ; à cette date
Ciba et Geigy fusionnent pour former Ciba-Geigy Ltd.
Ciba
En 1859, Alexander Clavel lance la production de la fuchsine au sein de son
usine de teinture de la soie à Bâle. Cinq ans après, de nouvelles installations vouées
à la production de teintures sont construites et, en 1873, Clavel vend son usine
de teinture à la société Bindschedler & Bush, récemment créée. Plus tard, c'est la
transformation de Bindschedler & Bush en une société par actions à responsabilité
limitée sous le nom de Gesellschaft für Chemische Industrie Basel (Compagnie
pour l'industrie chimique de Bâle). L'abréviation Ciba devient si répandue
que les dirigeants l'adoptent en 1945 comme nom de leur Société. Cette entreprise
évolua en introduisant la production de substances pharmaceutiques de la même
façon que Geigy .
3
En 1918, une convention d'exploitation commune des mêmes substances phar-

maceutiques Interssengemeinschaft Basel (Basler IG) se met en place entre
Sandoz, Ciba et Geigy. Cette convention sera reconduite jusqu'en 1950.
3
www.ciba.com Consultation 12/12/2007.
184
Sandoz
L'origine de Sandoz remonte à 1886, quand le Dr. Alfred Kern et Edouard
Sandoz constituent à Bâle une Compagnie de produits chimiques. Les deux pre-
mières teintures produites au sein de cette compagnie seront le bleu d'alizarine
et l'auramine. La Compagnie lance durant 1895 les premières substances pharma-
ceutiques et le partenariat est transformé en une société par actions sous la raison
sociale de Chemishe Fabrik vormals Sandoz .
Peu à peu, la Société Chemishe Fabrik vormals Sandoz crée de nouveaux dépar-
tements comme le département des produits chimiques responsable des produits
pour les textiles, le cuivre et le papier. En 1995, avec la création de Clairant Ltd.,
Sandoz se sépare de la division Chimie pour se concentrer sur ses activités dans
les secteurs Pharmacie et Aliments.
Novartis
En 1996, Sandoz et Ciba (antérieurement Ciba-Geigy) fusionnent pour for-
mer Novartis dans le cadre de l'une des plus importantes fusions d'entreprises de
l'histoire. L'organisation de Novartis s'articule en divisions distinctes qui répon-
dent à un positionnement diversié dans la santé ; de fait, aujourd'hui Novartis est
l'une des plus grandes entreprises actives dans le domaine de la santé. Cependant
au cours de cette fusion Novartis abandonne la fabrication des colorants, voue un
dévouement exclusif au secteur pharmaceutique.
Parallèlement, la production des colorants continue liée aux entreprises Sandoz
et Ciba. Un secteur de l'entreprise Sandoz continue la production des colorants
après la fusion avec Clariant et forment Clariant-Sandoz en 1995. Et à partir de
1996, après la formation de Novartis, un secteur de Ciba a pris son indépendance
sous le nom de Ciba Specialty Chemicals qui conserve la production des colorants .
4
4.2. Matériaux et méthodes d'analyses

4.2.1. Matériaux, réactifs et solvants
Les solvants employés ont été l'eau Milli-Q, qualité ultra pure (Millipore, Bed-
ford, USA), le méthanol qualité HPLC procuré par Merck (Darmstadt, Allemag-
4
www.novartis.fr Consultation 01/10/2008.
185
ne), et le dodécyl-sulfate de sodium (SDS) en solution aqueuse 0,1 M procuré par

Sigma Aldrich Chemie (Steinheim, Allemagne).
Les colorants rouges en poudre ne pour textiles des entreprises Geigy, Ciba et
Sandoz proviennent de l'Institut Supérieur Industriel Textile de Verviers (Liège,
Belgique).
Pour le support des colorants nous avons employé du carton neutre sans ad-
hésifs ni colorants, et du ruban adhésif neutre de la marque Scotch® Magic 3M
(Madrid, Espagne).
4.2.2. Instrumentation
Nous avons travaillé avec le système de spectrométrie d'absorption par réexion
diuse d'Ocean Optic (France) équipé d'un spectromètre à réseau plan gravé de
300 t/mm et à fente d'entrée 50 µm et d'un détecteur ccd 2048.
La caractérisation par spectrophotométrie UV-vis a été eectuée avec un spec-
trophotomètre Agilent 8453E (Waldbronn, Alemania).
Le spectromètre de uorescence X portable ARTAX de Bruker (France) utilisé
est équipé de deux tubes de rayon X fonctionnant à une puissance maximale de 50
kV et 0,8 mA : un tube à anode de molybdène et un tube à anode de tungstène.
Le répertoire des coordonnées colorimétriques a été obtenu à partir des spectres
d'absorption par réexion diuse.
4.2.3. Préparation des échantillons

Pour l'étude de notre ensemble de colorants nous avons sélectionné les rouges en
poudre ne pour textiles des entreprises Geigy, Ciba et Sandoz ayant une coloration
correspondante à : 2.5R (4/8, 4/10, 4/12) et 5R (4/10, 4/12, 4/14) dans le système
Munsell. Tous ces colorants sont situés dans les bacs 1 (B1) à 40 (B40).
4.2.3.1. L'étude par spectrométrie d'absorption par réexion diuse

et spectrométrie de uorescence X
Les mesures par spectrométrie d'absorption par réexion diuse et spectromé-
trie de uorescence X ont été eectuées directement sur le colorant en poudre.
L'échantillon n'a pas besoin d'un traitement spécique, seulement d'un support
adéquat.
186
Le support de carton neutre, est composé de deux plaques de 3,5 mm d'épaisseur.

La première plaque contient des enfoncements circulaires de 6 mm de diamètre ré-
gulièrement espacés pour le dépôt des échantillons poudreux. Les deux plaques
sont unies avec un ruban adhésif neutre. Une fois les échantillons déposés, on
recouvre la face supérieure du support avec le même ruban adhésif pour facili-
ter le nettoyage de la surface de l'échantillon et éviter la contamination entre les
colorants (Figure 4.1).
Figura 4.1: Structure du support.
Le support de carton neutre s'est avéré compatible avec l'étude par spectromé-
trie d'absorption par réexion diuse et par spectrométrie de uorescence X parce
que l'épaisseur du colorant compacté est de 3,5 mm et parce qu'il n'engendre pas
de raies interférentes.
4.2.3.2. L'étude par spectrométrie UV-vis

Les spectres d'absorptions pour la spectrométrie UV-vis sont obtenus suite à
la dissolution des colorants dans un solvant adéquat (solutions translucides).
Plusieurs solvants ont été testés : H2O ultra pure qualité Milli-Q, Méthanol
et Dodécyl-sulfate de sodium (SDS) en solution aqueuse 0,1 M. Dans toutes les
solutions la concentration de colorant est de 500 mg/L.
187
Tous les colorants sont solubles dans H2O et SDS. Tous les échantillons sont
également totalement soluble dans le méthanol sauf B8P3, B8P4, B17P23, B35P9
et B35P10 qui ne le sont que partiellement.
Nous avons sélectionné le solvant le mieux adapté à notre étude en compa-

rant les courbes d'absorbance des colorants dissous dans les solvants. Les maxima
d'absorption sont identiques pour les solutions des colorants dans les trois solvants
mais on distingue les plus fortes absorptions dans le SDS en solution aqueuse 0,1
M.
4.2.4. Méthodes d'analyses

4.2.4.1. La spectrométrie d'absorption par réexion diuse
Les conditions expérimentales sont en mode d'absorbance, avec un temps
d'intégration de 800 msec et nombre d'acquisitions pour la moyenne 50.
Nous avons fait 3 mesures dans 3 zones diérentes de chaque échantillon.
4.2.4.2. La spectrométrie UV-vis

Les colorants ont une forte absorption dans la zone visible du spectre mais le
maximum d'absorption n'est pas systématiquement situé dans le domaine visible
[Hedayatullah, 1976]. L'étude par spectrométrie UV-vis de tous les colorants va
compléter les données obtenues par spectrométrie d'absorption par réexion diuse
dans la zone ultraviolette du spectre. Les conditions des mesures sont en mode
d'absorption et la gamme des longueurs d'onde utilisées est 190 et 1100 nm.
Nous avons fait 3 mesures de chaque échantillon dans les 3 solvants pour dé-
terminer l'homogénéité des échantillons.
4.2.4.3. La spectrométrie de uorescence X

Nous avons employé une source d'excitation avec un tube à rayons X équipé
d'un lament du tungstène chaué par un courant (cathode) et d'une anticathode
au molybdène pour l'acquisition des spectres de rayons X de chaque colorant.
188
4.2.4.4. La colorimétrie
Les conditions pour les données colorimétriques qui ont été calculées sont les
suivantes : Illuminant C, observateur à 10 ° et plage de calcul du domaine spec-
tral 380-780 nm. Les conditions ont été sélectionnés selon les requises du logiciel
employé pour l'exportation de données. Le logiciel que nous avons utilisé et qui
permet d'obtenir les données colorimétriques à partir des spectres d'absorption
par réexion diuse a été développé par Mathieu Guilhem [Guilhem, 2003].
4.3. Résultats et discussion

Une fois les trois types de mesures eectuées sur tous les colorants, nous avons
comparé les données entre colorants ayant un même nom générique, les colorants
fabriqués par la même entreprise, etc et cherché à comprendre les particularités
de chacun ainsi que les similitudes. C'est pourquoi, nous présentons dans les ré-
sultats les courbes obtenues en absorption par réexion diuse, celles obtenues
en spectrométrie UV-vis et les coordonnées colorimétriques selon deux modes de
classication, l'un lié au nom commercial du colorant, l'autre lié au classement
selon le Colour Index
T M Generic Name (CIGN). Le Colour Index est un système
de catalogage universel de tous les colorants connus avec l'information sur leur
constitution chimique, leurs désignations commerciales et leurs propriétés entre
autre type d'information [Meybeck, 1963].
Les résultats du classement suite à toutes les analyses pour chaque colorant
sont compilés en annexe B.
4.3.1. Résultats des analyses selon le nom commercial

La première comparaison de nos résultats s'est faite sur la base du nom com-
mercial noté sur l'étiquette originale du acon. Les groupes que l'on a pu constituer
sont les suivants:
189
Terasil. 1 échantillon : B6P12
Erio/Erionyl. 3 échantillons : B17P23, B26P16, B26P18
Nylosane. 5 échantillons : B35P26, B35P27, B35P28, B39P22, B39P27
Xylene. 2 échantillons : B18P30, B27P24
Drimarene. 12 échantillons : B8P3, B8P4, B8P9, B8P12, B34P4, B34P5,

B35P9, B35P10, B35P11, B35P12, B35P13, B35P15
Tectilon. 2 échantillons : B39P31, B40P10
Lanasol. 3 échantillons : B39P32, B40P11, B40P12
Leonyl. 1 échantillon : B40P7
Cibacrone . 4 échantillons : B40P8, B40P9, B40P17, B40P18
Cibalane. 1 échantillon : B26P1
Ecarlate direct. 10 échantillons : B40P20, B40P21, B40P22, B40P23, B40P24,

B40P25, B40P26, B40P27, B40P28, B40P29
Aquamine. 1 échantillon : B40P42
Nous avons fait l'étude de chaque échantillon pour faire la comparaison entre les
données obtenues des spectres d'absorption et la première dérivée acquises par la
spectrométrie d'absorption par réexion diuse.
En général, tous les spectres présentent une forte absorption jusque 500 nm en-
viron et une rupture de pente vers 630 nm (données caractéristiques d'un colorant
rouge). Après nous avons souligné les similitudes et les particularités de chaque
colorant.
Le tableau suivant récapitule les similitudes et les diérences entre les échanti-
llons selon le regroupement fait à partir de nom commercial et les données obtenues
par spectrométrie d'absorption(Tableau 4.1) :
190
Tabla 4.1: Groupes constitués et échantillons indépendants selon l'étude par nom
commercial.
191
Le graphique suivant indique la position des coordonnées colorimétriques a*

et b* correspondantes aux échantillons rouges précédents dans le système CIE
L*a*b*2000 (Figure 4.2).
Les données colorimétriques des 45 colorants rouges oscillent entre 20 et 40
sur l'axe a*. Sur l'axe b* les données oscillent entre 5 et 20 pour la plupart des
colorants rouges et 30 pour le colorant B34P5 qui est le plus écarté de la zone de
regroupement générale (a*, b*) où se trouvent les rouges.
Figura 4.2: Coordonnées colorimétriques a* et b* des colorants rouges par nom

générique selon le système CIE L*a*b*2000 .
192
La gure .. montre que les données colorimétriques des colorants analysés ne se

regroupent pas selon l'ordre de leurs noms commerciaux. Eectivement, i la diver-
sité des colorants qui appartiennent à un groupe donné selon le nom commercial
est grande. Ainsi nous pouvons conclure que le nom commercial n'est pas une
référence de la coloration ni du type de colorant en poudre.
4.3.1.1. Résultats de l'étude par spectrométrie de uorescence X

Nous avons étudié tous les échantillons par spectrométrie de uorescence X
pour vérier s'il y avait des éléments de numéro atomique supérieur à 13 qui
pouvaient se trouver présents dans la base du colorant ou comme additif.
Les éléments détectés par spectrométrie de uorescence X nous permettent
d'eectuer les regroupements montrés au tableau 4.2 Nous y avons indiqué le
colorant par type, nom commercial, nom du fabriquant, les éléments détectés (les
éléments dont la réponse est de faible intensité sont indiqués entre parenthèses).
193
Tabla 4.2: Résultats de l'analyse par spectrométrie de uorescence X.
194
Si nous comparons les groupes constitués par nom générique et les groupes
constitués à partir des éléments détectés par la spectrométrie de uorescence X,
nous trouvons les similitudes suivantes :
Les échantillons B26P16 et B26P18 ont les mêmes caractéristiques spectro-

métriques et les mêmes éléments détectés par l'analyse en uorescence X. Cette
correspondance est logique parce que les deux échantillons correspondent au même
colorant Rouge Erionyl RS 140 %.
C'est aussi le cas avec le groupe B35P28 et B39P22 (Rouge Nylosane f RS

140 %) et le groupe B39P22 et B40P12 (Rouge Lanasol G). Dans le tableau la der-
nière colonne indique la désignation du colorant selon le CIGN. Nous constatons
des éléments communs dans les colorants ayant le même C.I. mais plus égalemnet
des éléments supplémentaires. Ces derniers appartiennent peut-être à la composi-
tion d'un additif. En eet certains additifs pouvaient être ajoutés pour modier
les propriétés (non colorées) du colorant telles que la solubilité par exemple. Ceci
est expliqué en n de paragraphe.
Les échantillons B39P32 et B40P12 de C.I. Réactif rouge 83 contiennent du

soufre (S), du chlore (Cl) et du brome (Br). Le groupe des échantillons B8P9,
B35P12 et B35P13 présente du soufre (S) et du chlore (Cl) exclusivement et co-
rrespond aux C.I. Réactif rouge 147. Les cinq échantillons qui constituent le groupe
C.I. Acide rouge 57 (B35P26, B35P27, B39P27, B40P42 et B40P10) présentent
du soufre (S), du chlore (Cl) et du fer (Fe). Le colorant B40P42 de Sandoz de
nom commercial Aquamine contient du plomb (Pb), du brome (Br) et du cuivre
(Cu). Le colorant B40P10 de Ciba de nom commercial Tectilon présente les trois
éléments principaux ainsi que du zinc (Zn) et du calcium (Ca). Tous ces éléments
identiés ne modient pas la couleur nale du colorant. Les données spectromé-
triques et les coordonnées colorimétriques sont très proches.
Dans le groupe C.I. Acide rouge 114 nous pouvons diérencier deux sous-
groupes qui correspondent à deux noms commerciaux diérents : Erionyl de la
marque ciba-Geigy et Nylosane de la marque Sandoz. Les quatre échantillons qui
composent le groupe (B26P16, B26P18, B35P28 et B39P22) ont en commun la
présence de soufre (S), de chlore (Cl) et de potassium (K). En plus, nous avons
identié du fer (Fe) dans le sous-groupe Erionyl, cet élément ne modie pas la
coloration nale du colorant. Les données spectrométriques et les coordonnées
colorimétriques des échantillons du groupe C.I. Acide rouge 114 sont identiques.
Dans le tableau suivant, nous reclassons les groupes à partir du CIGN, et
195
indiquons le fabricant et les éléments identiés (Tableau 4.3) :
Tabla 4.3: Eléments identies par spectrométrie de uorescence X selon le classe-

ment par Colour IndexTM Generic Names.
Nous constatons que les colorants regroupés par Colour IndexCIGN présentent
en général les mêmes éléments de base, parfois d'autres éléments sont présents qui
peuvent remplir la fonction d'additif sans modier les caractéristiques du colorant.
An d'illustrer notre démarche, prenons par exemple le groupe C.I. Acide rouge
114, dont la structure moléculaire est la suivante (Figure 4.3) :
Figura 4.3: Structure moléculaire de C.I. Acide rouge 114.
196
Le seul élément que nous pouvons vérier par spectrométrie de uorescence X

est le soufre (S). Les autres éléments : le carbone (C), l'hydrogène (H), l'azote (N)
et le sodium (Na) ne sont pas détectables (numéro atomique inférieur à 13).
Dans le cas de C.I. l'Acide rouge 114 Erionyl du fabricant Ciba-Geigy, nous
identions trois éléments supplémentaires : le chlore (Cl), le potassium (K) et le fer
(Fe) (B26P16 et B26P18). Pour C.I. l'acide rouge 114 Sandoz gamme Nylosane
(B35P28 et B39P22), seuls les éléments chlore (Cl) et potassium (K) sont présents.
Ainsi on peut concevoir que chaque entreprise a pu modié la formulation de
la matière colorante d'une certaine manière pour améliorer les propriétés de leur
gamme. Dans le cas de Ciba-Geigy, on peut imaginer l'ajout d'un additif ou peut
être la présence d'un résidu des composés intermédiaires. Certains éléments iden-
tiés (en marge des éléments propres à la structure de base du colorant) peuvent
aussi correspondre à des produits résiduels, lors de la fabrication des produits
intermédiaires des colorants.
Pendant les processus de fabrication on peut produire des remplacements élec-
trolytiques que modient les propriétés des colorants et qui peuvent ajouter quel-
ques éléments dans la composition nale. Une des réactions, la plus habituelle, est
la sulfonation des composés aromatiques, c'est à dire, l'introduction de groupe-
ments acide sulfonique (SO3H). L'ajout d'un substituant acide sulfonique sur un
noyau aromatique permet d'augmenter la solubilité du colorant dans l'eau. Cette
caractéristique est très importante pour les colorants textiles. Si nous faisons une
comparaison avec les colorants de la collection Verviers, tous sont solubles dans
l'eau et contiennent du soufre (S).
Un autre type de réaction importante est l'introduction de groupes aminés.
Le groupe aminé est un des plus fréquents dans la chimie des colorants car il est
5
essentiel dans la réaction d'azocopulation . Il est également présent dans plusieurs
colorants du fait de ses eets auxochromes (déplacement hypsochrome ou batho-
chrome). La méthode, la plus adéquate, est la réduction des nitrodérivés en milieu
acide, basique ou neutre. Pour la réduction en milieu acide (méthode Béchamp)
la présence du fer est nécessaire, la réduction en milieu neutre emploie le bisulfure
sodique ou bisulte sodique et la réduction en milieu basique utilise un mélange
de zinc (poudre) et d'hydroxyde sodique. L'identication des éléments fer, soufre
5
Réaction de substitution électrophile aromatique.
197
et zinc peut indiquer une étape de réduction de nitrodérivés dans la fabrication.

La présence des éléments métalliques comme le fer ou le cuivre peut correspon-
dre, aussi, au processus de formation des complexes métalliques durant la fabrica-
tion des colorants. Les colorants métallisables et métallifères sont de constitution
particulière, susceptibles de se former par chélation avec des sels métalliques de
chrome, de cuivre, de nickel, de cobalt. . . . Ces complexes peuvent être réalisés au
cours des opérations de teinture sur bres protéiniques ou cellulosiques, générale-
ment par traitement de la bre teinte, dans un bain bouillant de sel métallique. Ces
éléments susceptibles de former des complexes métalliques peuvent être réalisés à
l'usine même (cela est peut être le cas ici). Enn, ces colorants métallifères sont
utilisés pour la teinture de certaines bres textiles dans la masse, car ils induisent
une excellente solidité de la teinture.
Une autre réaction bien connue dans l'industrie des colorants textiles est la
réaction d'halogénation où un chlore (Cl) ou brome (Br) sont ajoutés aux composés
aromatiques en présence d'un acide de Lewis pour obtenir des composés halogénés.
Les anthraquinones halogénées sont des produits intermédiaires très appréciés pour
l'obtention des colorants dans l'industrie textile.
La présence de potassium (K) peut correspondre à un matériau inerte pour
grossir le colorant mais sans interaction directe sur ses propriétés, de la même
façon qu'on peut le trouver dans les pigments et les colorants pour la peinture.
On peut trouver tout l'information sur les matériaux intermédiaires dans la
Partie I : 2.2.2 Les produits intermédiaires ainsi que la bibliographie citée.
4.3.2. Résultats des analyses selon le Colour IndexT M Generic

Name
Suite à nos précédentes remarques nous avons eectué une comparaison globale
sur la base du CIGN. Cette indication se trouve aussi sur une deuxième étiquette
non-originelle présente sur tous les acons, probablement ajoutée par l'Institut
Supérieur Industriel textile.
Les groupes sont :
C.I. Disperse rouge 169. 1 échantillon : B6P12
C.I. Réactif rouge 15. 1 échantillon : B40P8
198
C.I. Réactif rouge 78. 1 échantillon B40P11
C.I. Réactif rouge 83. 2 échantillons : B39P32, B40P12
C.I. Réactif rouge 118. 2 échantillons : B35P9, B35P10
C. I. Réactif rouge 147. 3 échantillons : B8P9, B35P12, B35P13
C.I. Acide rouge 57. 5 échantillons : B35P26, B35P27, B39P27, B40P10,

B40P42
C.I. Acide rouge 85. 1 échantillon : B40P7
C.I. Acide rouge 114. 4 échantillons : B26P16, B26P18, B35P28, B39P22
C.I. Direct rouge 37. 1 échantillon : B40P20
C.I. Direct rouge 39. 9 échantillons : B40P21, B40P22, B40P23, B40P24,

B40P25, B40P26, B40P27, B40P28, B40P29
199
Les échantillons sans indication du CIGN sont B17P23, B18P30 et B34P5.
La plupart des échantillons sont uniques. Nous avons constitué quatre groupes.
Ces groupes sont: CI. Réactif rouge 83, C.I. Réactif rouge 147, C.I. Acide rouge 57
et C.I. Acide rouge 114. Les groupes C.I. Réactif rouge 118 et C.I. Direct rouge 39
contiennent 2 et 9 échantillons respectivement, ce sont des échantillons d'un même
type de colorant : l'écarlate Drimarene R 3G dans le cas de C.I. Réactif rouge 118
et l'écarlate direct 3 BS dans le cas de C.I. Direct rouge 39. L'étude comparative
des résultats d'analyse de ces groupes est présentée ci-dessous.
Groype: C.I. Réactif rouge 83
Les produits qui ont un C.I. Réactif rouge 83 sont B39P32 (Lanasol red G) et
B40P12 (Rouge Lanasol G) (Figure 4.4).
Les spectres UV-vis des échantillons B39P32 y B40P12 (Figure 4.5)sont iden-
tiques avec deux maxima d'absorption à 270 et 698 nm que sont les plus caracté-
ristiques de ces colorants.
Figura 4.4: Spectres d'absorption par réexion diuse des colorants du groupe C.I.
Réactif rouge 83.
200
Figura 4.5: Spectres UV-vis des colorants du groupe C.I. Réactif rouge 83.
Sur le graphe colorimétrique, l'on peut observer les spectres d'absorption ca-
ractéristiques.
Figura 4.6: Représentation graphique des colorants du groupe C.I. Réactif rouge
83 dans le système CIE L*a*b*2000.
201
Nous avons montré que les deux échantillons possèdent des maxima d'absorption
identiques dans la zone ultraviolette et visible et que les coordonnées colorimétri-
ques son très proches (Figure 4.6). Par conséquence, elles composent un groupe
bien déni.
Groupe: C.I. Réactif rouge 147
Dans le groupe C.I. Réactif rouge 147, se rassemblent les produits B8P9 (Rouge
brillant Drimarene R 4 BL) B35P12 (Rouge brillant Drimarene K 4 BL) et B35P13
(Rouge Drimarene R 4 BL et K 4 BL). Les maxima d'absorption se situent vers
505 et 553 nm (Figure 4.7).
Figura 4.7: Spectres d'absorption par réexion diuse des colorants du groupe C.I.
Réactif rouge 147.
Dans l'étude par spectrométrie UV-vis nous remarquons que les maxima d'absorption
des échantillons B35P12 et B35P13 sont identiques (Figure 4.8).
202
Figura 4.8: Spectres d'absorption UV-vis des colorants du groupe C.I. Réactif
rouge 147.
Les colorants avec un C.I. Réactif rouge 147 sont très proches sur le graphe des
données colorimétriques (Figure 4.9) ; Selon les données spectrales nous pouvons
dire que ces colorants rouges sont très proches.
Figura 4.9: Représentation graphique des colorants du groupe Réactif rouge 147
dans le système CIE L*a*b*2000.
203
Les éléments identiés par la spectrométrie de uorescence X sont S et Cl dans

les trois échantillons.
Si on observe la poudre des colorants, on peut diérencier deux textures dié-

rentes dans les colorants et aussi une légère diérence de couleur pour B35P12 et
B35P13, qui témoignent des légères diérences spectrométriques entre les échan-
tillons de ce groupe C.I. Réactif rouge 147 (Figure 4.10).
Figura 4.10: Photographie des échantillons B8P9, B35P12 et B35P13.
Groupe: C.I. Acide rouge 57
Le maximum d'absorption caractéristique des colorants C.I. Acide rouge 57

se situe vers 510 nm avec une variation de ± 10 nm et une rupture de pente
vers 640nm ± 13 nm (Figure 4.11). Dans ce groupe se rassemblent les produits
B35P26, B35P27 et B39P27 (Rouge Nylosane E BL), B40P10 (Rouge Tectilon
3B) et B40P42 (Rouge Aquamine B SL).
204
Figura 4.11: Spectre d'absorption par réexion diuse des colorants du groupe C.I.
Acide rouge 57.
On peut constater la concordance entre les données du spectre d'absorption

UV-vis dont les absorptions maximales se situent à 249, 309 et 526 nm et celles
du spectre d'absorption par réexion diuse (Figure 4.12).
Figura 4.12: Spectre d'absorption UV-vis des colorants du groupe C.I. Acide rouge
57.
Le groupe des échantillons B40P10 et B40P42 est distant du groupe formé

par les échantillons B35P26, B35P27 et B39P27 bien que les cinq échantillons
appartiennent au même groupe C.I. Acide rouge 57 (Figure 4.13). Probablement
205
cette diérence de localisation est majeure par rapport aux diérences trouvées
entre les colorants des autres groupes, parce que les coordonnées colorimétriques
sont calculées dans l'intervalle 380-780 nm et la plus grand coïncidence dans la
courbe d'absorption est dans la zone d'absorption ultraviolette.
Figura 4.13: Représentation graphique des colorants du groupe C.I. Acide rouge
57 selon le système CIE L*a*b*2000.
Le groupe des échantillons B35P26, B35P27 et B39P27 Nylosane contient du S,

du Fe et du Cl. Les deux échantillons B40P10 et B40P42 contiennent les éléments
S, Cl, Fe, Pb, Br, Cu et S, Fe, Zn, Cl et Ca respectivement. Ces éléments peuvent
être les résidus d'un procédé ayant servi à modier la coloration. Si nous observons
directement la poudre des colorants nous pouvons observer que leur coloration est
très proche (Figure 4.14).
206
Figura 4.14: Photographie des échantillons B35P26, B35P27, B39P27, B40P10 et

B40P42.
Groupe: C.I. Acide rouge 114
Figura 4.15: Spectres d'absorption par réexion diuse des colorants du groupe
C.I. Acide rouge 114.
Les courbes d'absorption des quatre colorants sont très proches : les maxima
d'absorption caractéristiques se situent à environ 466, 546 nm avec un épaulement
à 661nm ; les points d'inexion sont à 626 et 704 nm. Ce groupe contient les
produits B26P16 et B26P18 (Rouge Erionyl RS 140 %) et B35P28 et B39P22
(Rouge Nylosane F RS 140 %) (Figure 4.16).
207
Les maxima d'absorption dans la zone ultraviolette sont situés à 256 et 370 nm
pour les quatre échantillons. Dans la zone visible du spectre il y a un maximum
vers 520 nm qui correspond à tous les échantillons du groupe C.I. Acide rouge 114
(Figure 4.17).
Figura 4.16: Spectres d'absorption UV-vis des colorants du groupe C.I. Acide rouge
114.
208
Figura 4.17: Représentation graphique des colorants du groupe C.I. Acide rouge
114 dans le système CIE L*a*b*2000.
Les coordonnées colorimétriques du groupe C.I. Acide rouge 114 sont très pro-
ches avec une valeur moyenne de 25 pour a* et de 15 pour b* (Figure ). Les données
spectrales dans les zones visible et ultraviolette sont analogues. Selon l'étude par
spectrométrie de uorescence X, les quatre échantillons contiennent du S, Cl et K
et les échantillons B26P16 et B26P18 contiennent en plus du fer. La présence de
fer n'est pas liée à une diérence de coloration nale des produits. Nous pouvons
vérier la similitude avec l'observation directe (Figure 4.18). De ce fait on peut
dire que les quatre échantillons correspondent au même colorant rouge.
Figura 4.18: Photographie des échantillons B26P16, B26P18, B35P28 et B39P22.
209
Eectivement, les colorants ayant le même CIGN présentent des bandes d'absorption
identiques (maximum d'absorption et point d'inexion) dans la zone ultraviolette
et visible ainsi que des coordonnées colorimétriques très proches.
Ces résultats nous amènent à penser que chaque fabricant disposait d'un nom
commercial diérent propre à ses produits colorants. Cependant, les colorants de
même nom commercial peuvent avoir diérents CIGN ainsi que le montre le ta-
bleau suivant (Tableau 4.4):
210
Tabla 4.4: Classement par nom commercial, Colour Index

T M Generic Name et
fabricant.
Selon nos résultats nous pouvons émettre les hypothèses suivantes. L'entreprise
Sandoz a fabriqué les colorants Nylosane, Xylene, Drimarene et Aquamine. Le fa-
bricant Ciba peut correspondre à l'entreprise originale ou à la fusion de Ciba et
Geigy (antérieurement Ciba-Geigy), les produits sont Terasil, Erionyl, Tectilon,
211
Lanasol, Leonyl, Cibracrone, Cibalane et Ecarlate direct. L'entreprise Geigy a fa-

briqué les colorants en collaboration avec Ciba ou Bale. Les colorants sont Terasil,
Erio, Erionyl, Tectilon et Lanasol. Il n'y a pas d'autres entreprises qui fabriquent
des colorants avec le même nom générique.
Il est possible que le nom générique fasse référence au fabricant et au type de

colorant. Par exemple Drimarene est un colorant fabriqué par Sandoz et qui
correspond aux colorants de type réactif.
La bibliographie existante [Meybeck, 1963] [Hedayatullah, 1976] [Gilabert,

2003] conrme que, eectivement, Drimarene correspond à une gamme de
colorants réactifs fabriqués par l'entreprise Sandoz.
Les colorants réactifs sont des produits dérivés dont la molécule colorée pouvait
avoir des constitutions chimiques extrêmement variées : azoïques, anthraquinoni-
ques, etc., mais qui, tous, possédaient une caractéristique commune au point de
vue tinctorial, celle de se xer sur la bre, par réaction chimique, par des liaisons
covalentes. Les colorants ainsi xés étaient extraordinairement solides au lavage,
à l'extraction, aux solvants, et même à certaines interventions chimiques, comme
cela a été démontré récemment pour les combinaisons cellulose-colorant réactif
[Gilabert, 2003].
Les premiers colorants réactifs, les Procion, puis les Cibacrone, ont été appli-
qués à la cellulose, mais la gamme des applications s'est assez rapidement étendue
aux polyamides et à la laine. S'il n'est pas possible de connaître avec précision la
composition des colorants réactifs lancés sur le marché, du moins peut-on en avoir
une idée par l'étude des brevets que les protègent.
Pourtant, un colorant ayant un CIGN précis peut se retrouver sous divers noms
commerciaux selon l'entreprise de fabrication (Tableau 44).
4.3.3. Constitution chimique

La connaitre de la structure chimique des colorants est indispensable pour
mieux déterminer leurs conditions de conservation optimales (paramètres de lu-
mière, d'humidité et de température) mais, aussi, pour connaissaitre les causes
possibles des changements de composition et leur aspect nal.
Les colorants organiques synthétiques pour textiles ont une structure chimique
de base liée au groupe auxquels ils appartiennent : réactif, dispersé, acide ou direct
par exemple.
212
Ainsi le schéma de la structure de base d'un colorant réactif est le suivant

(Figure 4.19) :
Figura 4.19: Schéma de base de la structure d'un colorant réactif.
La structure d'un colorant réactif comprend un groupe solubilisant (S), un

groupe chromophore (C), un groupe de pontage (P) et un groupe réactif (R) qui
contient un additif (X). Le groupe solubilisant favorise la dissolution du colorant et
est habituellement un groupe SO3Na. Le groupe chromophore confère la couleur.
Le groupe de pontage isole la structure du groupe réactif pour la préservation de
la couleur. Le groupe réactif réagit avec les groupes NH2, -SH et OH des bres
textiles par des réactions d'addition ou de substitution (Chen, 2006).
Le nom commercial, donne quelquefois une information sur la composition chi-
mique du colorant. Par exemple, Lanasol est un nom commercial de l'entreprise
Ciba pour les colorants réactifs qui contiennent deux groupes réactifs caractéris-
tiques : a-b- dicromopropionamide et a- bromoacrylamide [Church et col. 1998
Parte I]. Ce produit est introduit dans le commerce en 1966 [Church et col. 1998
Parte II]. Dès lors, Lanasol est un des colorants réactif les plus employés pour la
teinture de la laine avec une excellente résistance à la lumière.. Le Lanasol peut
être synthétisé à partir des espèces marines de Rhodophyta comme la Odonthalia
dentata. L'entreprise Sandoz choisit, en 1959 [Chen, 2006], le nom de Drimarene
213
pour ses colorants réactifs [Cochet et col. 1996] et ajoute une lettre (X ou K) pour
dénir le type de groupe réactif du colorant [Chen, 2006].
Mais, pour connaitre la structure chimique exacte d'un colorant breveté et com-
T M Generic Name ou son
mercialisé, il est nécessaire de consulter son Colour Index
Colour IndexTM Constitution Number (CICN). Par exemple, si nous regardons
les indications sur le colorant C.I. Acide rouge 114 , nous obtenons l'information
suivante [Thinakaran et col. 2008] [Lee et col. 2003] :
Les possibles désignations commercials : Rouge Erionyl RS 140 % Rouge

Nylose F RS 140 %
Les fabricants : Sandoz et Ciba
Le type de colorant : colorant azoïque
La formule moléculaire : C37 H28 N4 O10 S3 Na2
Le nom chimique (IUPAC) :Disodim-8-((3,3'-dimethyl-4'-((4-((4- methylphenyl)sulphonyl)oxy)

1,1'-biphenyl)-4-yl)azo)-7- hydroxy-1,3-naphthalenedisulphonate.
La structure moléculaire (Figure 4.20) :
Figura 4.20: Schéma de base de la structure du colorant réactif C.I. Réactif rouge
114.
De nos jours, nous pouvons trouver nombre de catalogues qui rassemblent

beaucoup d'informations sur les colorants à partir de la classication selon le
système Colour Index.
Les indications les plus courantes que nous trouvons sont : la constitution
chimique, la solubilité, le spectre UV-vis et les références bibliographiques.
214
4.4. Conclusion
Comme nous avons pu le comprendre durant cette étude, un même produit avec
une base colorante bien connue peut être transformé an d'améliorer ses qualités
et rendre plus facile son application à diérents textiles. Mais pour sauvegarder
leurs secrets de fabrication, l'accès à l'information sur les additifs est protégée et
est impossible aux personnes extérieures à la société industrielle textile.
Selon la bibliographie que nous avons consultée pendant cette recherche, nous
comprenons que chaque colorant pourra posséder une anité pour des bres tex-
tiles de nature diverse. Chaque type de bre peut être teinte par une gamme
de colorants de diérents classements tinctoriaux. Chaque classe tinctoriale a des
caractéristiques et propriétés particulières qui sont appropriées à certaines applica-
tions. Les colorants directs sont d'application très facile, les colorants soufrés sont
les moins chers, les colorants réactifs ont les colorations les plus pures et brillantes
et les colorants azoïques insolubles sont les plus solides. Les propriétés de solidité
peuvent varier entre chaque classe tinctoriale et entre colorants d'une même classe
tinctoriale. De plus, la solidité est un paramètre aecté à diérentes propriétés, le
même colorant peut posséder une haute solidité à la lumière, par exemple, mais
avoir une piètre solidité au lavage. Autre facteur important qui a provoqué la gran-
de variété de colorants pour textile est la compétitivité des industries productrices
et consommatrices des matériaux colorants.
Les études comparatives que nous avons eectuées montrent que les colorants
textiles de la Collection Verviers peuvent être groupés selon le Colour Index parce
que ce classement permet de regrouper des colorants dont les qualités physiques
sont très proches. Les diérences proviennent de la nomenclature qui s'est modiée
à l'occasion de l'évolution de la marque commerciale, avec la transformation des
produits pour améliorer ses qualités, la création de nouveaux brevets ou tout
simplement l'actualisation du nom pour des raisons de marketing [Barnett, J.,
2007].
La caractérisation que nous avons faite est la base pour l'étude et le classement
de la collection des colorants de l'Institut Supérieur Industriel de Verviers. Le
protocole de mesure décrit ici pourra désormais servir de protocole de référence
an de continuer le recensement et la caractérisation des autres colorants de la
collection.
L'identication de ces colorants donne des informations de grande importan-
215
ce dans le champ de l'histoire industrielle moderne, l'archéométrie et l'évolution

chimique des colorants organiques synthétiques.
Actuellement on peut trouver des catalogues qui contiennent une grande quan-
tité d'information sur les produits colorants classés à partir de leur nom commer-
cialo ou leur colour index. Mais nous croyons que la recherche de l'information
référent aux colorants synthétiques doivent être approfondies avec leur caracté-
risation par des méthodes d'analyses chimiques qui indiqueraient la comosition
exacte du produit. Il s'agit ici de arriver au même niveau de connaissance et de
compétence que avec les colorants organiques naturels.
216
Capítulo 5
Identication of synthetic dyes in

early colour photographs using
capillary electrophoresis and
electrospray ionization mass
spectrometry
RESUMEN
En este capítulo se ha empleado electroforesis capilar acoplada a un detector de
diodos en línea (CE-PDA) y un detector de masas con ionización por electronebu-
lizador (CE-ESI-MS) para la separación e identicación de 23 colorantes orgánicos
sintéticos, los más empleados en autocromos, las primeras fotografías a color de
inicios del siglo XX. Tanto el grupo de los colorantes catiónicos como los aniónicos
han podido ser separados en 15 min usando una metodología simple por CE-PDA.
Esta fue empleada como paso previo para el desarrollo de una metodología por
CE-ESI-MS optimizando los parámetros más relevantes del detector y la interfase.
Los parámetros que más inuencia ejercieron sobre la sensibilidad de la detección
fueron la composición del líquido adicional, la presión del gas nebulizador, el ujo
del gas de secado y su temperatura. Estos fueron optimizados en modo positivo y
negativo para los colorantes catiónicos y aniónicos respectivamente, pudiendo rea-
217
lizar ambos de manera sucesiva sobre una única muestra para detectar la presencia
de colorantes de ambos grupos.
La aplicación del procedimiento analítico desarrollado por CE-ESI-MS se reali-
zó sobre una base de lmcolor, la última versión del autocromo. Los resultados
demostraron la presencia de cuatro colorantes catiónicos y tres aniónicos. Ade-
más se observaron las trazas de otros cuatro posibles colorantes sobre este mismo
lmcolor.
ABSTRACT
Capillary electrophoresis with photodiode array detection (CE-PDA) and with
electrospray ionisation-mass spectrometry (CE-ESI-MS) was used for the separa-
tion and the identication of 23 synthetic organic dyes, among those used in early
20th century colour photographs such as autochromes. Both cationic and anio-
nic dyes could be separated with in 15min using a single CE-PDA method. The
method was used as the basis to develop a CE-ESI-MS methodology through
the optimization of the relevant ESI and MS parameters. Sheath liquid compo-
sition, nebulising gas pressure, drying gas ow rate and drying gas temperature
were found to inuence the sensitivity of the detection. These parameters were
optimized in positive and negative ion modes for cationic dyes and anionic dyes,
respectively. The two analyses could be carried out successively on a single sample.
In view of the application to cultural heritage objects, the CE-ESI-MS analy-
tical procedure was applied to identify the dyes in a lmcolor artefact, late version
of the autochrome. The results complemented and enhanced current knowledge as
four cationic dyes and three anionic dyes were identied. Four additional dyes are
proposed as possibly present as traces.
RÉSUMÉ
L'électrophorèse capillaire d'une part en détection simple UV (barrette de dio-
des) (CE-PDA) et d'autre part en couplage à la spectrométrie de masse par élec-
tronébulisation (ESI-MS) ont été utilisées pour la séparation et l'identication de
23 colorants organiques synthétiques fréquemment employés dans la fabrication
d'autochromes, les premières photographies en couleurs du début du 20e siècle.
En CE-PDA une méthodologie unique a permis la séparation en 15 min des co-
lorants cationiques et anioniques. Cette technique a été utilisée pour préparer le
218
développement d'une méthodologie ultérieure par CE-ESI-MS où les paramètres

ESI et MS les plus pertinents ont été optimisés. Les paramètres de composition
du liquide additionnel, pression du gaz nébulisant, débit du gaz de séchant et sa
température ont montré la plus grande inuence sur la sensibilité de la méthode.
Les paramètres ont été optimisés en mode MS positif et négatif respectivement
pour les types de colorants cationiques et anioniques. Les deux analyses peuvent
être réalisées successivement sur un unique échantillon.
En vue de l'application aux objets culturels, le procédé analytique par CE-
ESI-MS a été eectué sur un lm `'lmcolor non exposé, version plus tardive de
l'autochrome. Les résultats ont permis d'incrémenter les connaissances actuelles
sur la composition en colorants synthétiques de ces objets par la détection de 4
colorants cationiques et de 3 colorants anioniques. En outre, la présence à l'état
de traces sur le même lmcolor de 4 autres colorants est proposée.
219
5.1. Introduction
For the past thirty years, the interest for the preservation of photographic
materials has intensied [VV.AA. 1982]. The knowledge of the structure and com-
position of these artefacts is essential to design appropriate approaches for their
preservation and conservation [Lavédrine and Gandolfo, 2009].
The autochrome is an early colour photography process based on additive co-

lour mixing theory. It is derived from an original idea from Louis Ducos du Hauron
who, in Colors in Photography (1869), described the principle of using a screen
made of three thin colour layers to produce a full colour slide. In 1894, John Joly
and, two years later, James McDonough, produced the rst photographic colour
process based on this principle [Lavédrine and Gandolfo 1993]. The autochrome
process was patented for the rst time in 1903 in France by the Lumière brot-
hers with further revisions in 1904. It was introduced commercially in 1907. The
autochrome Lumière was among the rst techniques of colour photography to be
industrially produced, which was easy to use and presented attractive results with
delicate colour rendering. In replacement of the heavy and brittle glass support of
autochrome plates, a lm based autochrome called lmcolor was launched in 1931
but was short-lived, as Kodak and Agfa began to produce multi-layer subtractive
colour lms. Until the 1930's autochromes were used by ordinary amateur pho-
tographers despite their relatively high price, low sensitivity to light and lack of
a quality method to secure the prints [Lavédrine and Gandolfo, 2009]. The pro-
cess encountered an enormous success among professionals and amateurs alike,
and thousands of autochromes are now preserved in art collections such as at the
National Geographic Society in Washington (USA) and the Albert Kahn museum
in Boulogne (France).
In replacement of the glass plate, a lm based photograph called Film color was
launched in 1931 albeit it was short-lived, as Kodak and Agfa began to produce
multi-layer subtractive colour lms.
An autochrome consists of a colour mosaic of microscopic granules (10 mm to

15mm in diameter) made of potato starch, coloured with the three primary colours
redorange, blueviolet and green using synthetic dyes, and mixed together. The
structure and composition of an autochrome is represented in Figure 5.1.
A glass plate was spread with a sticky varnish layer made of the resin portion
of dammar. It was then powdered with the dyed starch to create a colour mosaic.
220
Then, lampblack powder was applied to ll the void spaces. The starch grains
were attened by applying pressure (around 5000kgcm =2) to limit the light dif-
fusion and increase the transparency of the layer. A second varnish layer made of
dammar, castor oil and cellulose nitrate was applied to protect the colour mosaic
and nally, the plate was covered with a light- sensitive emulsion (panchromatic
silver bromide). A nal varnish layer was applied, which composition was a recipe
of each photographer [Lavédrine and Gandolfo, 2009]. The autochrome plate was
placed in to the camera with the glass side nearest the lens. When the photograph
was taken, the light came through the lens and the glass back in gof the plate,
and was ltered by the coloured starch mosaic before reaching the photographic
sensitive emulsion [Robert, 2007] [Lavédrine, Waldthausen and Gannin, 2005]. Af-
ter chemical processing, the image could be viewed directly in transmitted light
or projected like a slide. The lmcolor photograph studied in this chapter, which
was produced in 19501951, presents the same layer structure and composition.
Figura 5.1: Structure and composition of an autochrome plate.
Little information was published about the dyes used in autochromes at the
time of their production because the process remained proprietary. In 1939, Se-
yewetz, a chemist who worked with the Lumière brothers, revealed some of these
221
dyes [Sayewetz, 1939]. Recently, additional information was compiled by Lavédri-

ne and Gandolfo [Lavédrine and Gandolfo, 1993] based on their research of the
Lumière archives. All the colourants mentioned in these documents are synthetic
dyes.
Various analytical techniques have been developed for the characterization of

synthetic dyes, but capillary electrophoresis (CE) is perhaps the best alternative
due to the many advantages it oers over other separation techniques. CE provi-
des high separation eciency, selectivity and resolution power combined with short
analysis time, simple sample preparation (no derivatisation), little solvent consum-
ption and extraordinarily small sample volume. Indeed, a major requirement for
conservators, conservation scientists, archaeologists and art historians is sample
miniaturization in order to observe the physical integrity of the cultural heritage
artefacts under study. However, one should also mention the corollary disadvan-
tages, as for example the low sample load-ability (nL range) and the small UV
light path length of the detector cell in the case of the photo diode array (PDA),
the latter being sometimes circumvented with the use of special detection setups
such as bubble cells. Methods based on CE with various detection systems for the
identication of synthetic dyes have been proposed. Variable wavelength UV and
PDA are by far the most commonly used for food [Suzuki et al., 1994] [Liu et col.,
1995 [Masár et al., 1996] [Costa, Horton and Margolis, 20000 [Pérez-Urquiza y
Beltrán, 2000 y 2001] [Ryvolová et col., 2007] [Mejía et al., 2007], textiles [Farry et
al., 1997] [Sirén and Sulkava, 1995] and pen inks dyes [Zlotnick and Smith, 1998]
[Vogt et al., 1997]. A few accounts can be found on laser-induced uorescence
detection (LIF) for food dyes [Kuo, Huang and Hsieh, 1998], as well as electro
chemical detection (ED) [Peláez-Cid, Blasco-Sancho and Matysik, 2008] and mass
spectrometry (CE-MS) for textile dyes [Poger, Richardson and Baughman, 2000]
[Zhao et col., 2007]. The characterisation of dyes in early colour photographs has
rarely been studied to the exception of Lavédrine's work in 1992 [LAvédrine, 1992].
The aim of the present research was to develop a methodology primarily for the
identication of synthetic dyes used in early colour photographs, but that could
also be applicable to other cultural heritage materials such as textile, paper and
modern photographs, while minimizing sampling.
The methods proposed in this study allowed the separation and identication
of fourteen cationic dyes and nine anionic dyes, which can be found in early colour
photographic artefacts such as the autochrome Lumière and the lmcolor.
222
A single method was developed using CE-PDA as a screening technique in

order to appraise the separation and identication of the largest possible number
of cationic and anionic dyes among those used for autochromes. The optimisation
of the separathion conditions was used to develop a more dedicated methodology
using CE coupled with electrospray ionisation-mass spectrometry detection (CE-
ESI-MS). The hyphenation with MS allows for a much greater performance than
PDA as even when the peaks are not fully resolved on the total ion electrophero-
gram (TIE), the identication of the dyes can be made using the mass over charge
ratio (m/z) of the ions produced.
This research was made in the CRC (MNHN, CNRS in Paris (France) in colla-
boration and under the leadership of the researcher B. Lavédrine and A-L Dupont.
The discussion and the interpretation of the results was carry out with the help of
B. Desmazières from LAMBE-CNRS, Evry (Francia). Also it has been published:
A. López-Montes, A-L. Dupont, B. Desmazières, B. Lavédrine, Talanta 114 (2013)
217-226.
5.2. Experimental
5.2.1. Materials
The following chemicals were used: ethanol (absolute, >99 %, Merck), metha-
nol (HPLC grade, >99.99 %, Fischer), 2-propanol (99.5 %, Sigma-Aldrich), aceto-
nitrile (LiChrosolv, >99.9 %, Merck), sodium hydroxide (1N, Merck). Formic acid
(≥98 %), acetic acid (≥99.5 %), ammonium carbonate (≥30 % NH3) and ammo-
nium acetate (98 %) were from Sigma-Aldrich. Water was Milli-Q plus (Millipore,
Bedford, MA, USA).
Synthetic dyes can be cationic, anionic or non-ionic, but only those pertaining
to the two rst types were used as reference samples. They were chosen based
on existing information on autochromes dyes [3,6]. Whenever available, the dye
content is indicated in parenthesis. Their abbreviations, used on ward for con-
venience, as well as their natural charge are marked in parenthesis. They were:
Methylene Blue (MB, +) (C.I. 52015) and Crystal Violet (CV, +) (C.I.42555) from
R.A.L. (Martillac, France); Erythrosine B (ERB, =) (C.I.45430) from Certistain-
Merck (Darmstadt, Germany); Patent blue VF (PBVF, =) (C.I.42045), Eosin
Y (EY, =) (C.I.45380), Eosin B (∼95 %, EB, =) (C.I.45400), Brillant Green
223
(BG, +) (C.I.42040), Auramine O (∼80 %,AO, +) (C.I.41000), Chrysoidine G

(CG, +) (C.I.11270), Ethyl Violet (EV, +) (C.I.42600), Rhodamine B (RHB,
+) (C.I.45170), Rhodamine 6G (RH6G, +) (C.I.45160), Thioavin T (TT, +)
(C.I.49005), Chrysophenine (∼65 %,CH, =) (C.I.42895), Diiodouorescein (DII,
=) (C.I.45425:1) and Rose Bengal (RB, =) (C.I. 45440) from Aldrich (St.Quentin
Fallavier, France); Patent Blue V (calcium salt) (PBV, =) (C.I.42051) from Flu-
ka (St. Quentin Fallavier, France); Basonyl Blue (BB, +) (C.I.42563) and Flexo
Blue 810 (FB, +) (C. I. 42025) from BASF; Victoria Blue R (∼80 %, VBR, +)
(C.I.44040) and Erythrosine B:2 (ERB2, =) (C.I.45430:2) from Sigma (St.Quentin
Fallavier, France); AuramineG (AG, +) (C.I.41005) from Gurr Microscopy Mate-
rials (Poole,UK). Victoria Blue B (VBB, +) (C.I.44045) was provided from in-
house MNHN. Chemical structures can be found in Introduction, section 1.4.2.1.
5.2.2. Sample preparation

Work solutions of reference dyes were prepared by dissolving 0.5 mg of dye
powder in 10 mL of water, methanol or water: methanol (1:1).
Sampling on the lmcolor artifact was carried out as follows. Ten square mi-
llimeters of the surface containing the dyed starch layer and upper varnish layers
were scratched using a scalpel, and transferred in 3 mL ethyl acetate in order
to solubilise the varnish. After 10 min the mixture was ltered (PTFE, 0.45 mm
pores) using a membrane lter and lter holder. Once dry, the lter, which had
retained the dyes particles, was introduced in methanol:water (1:1) and heated
during 30 min at70 ºC in a heating block unit (Pierce). After removing the lter
the solution was centrifuged at 9000 rpm during 3min and evaporated to dryness.
The mass of dyes recovered after this purication step was estimated to 0.5 mg at
most. Finally, the dry residue was dissolved in 25 mL of water: methanol (1:1).
5.2.3. Analytical procedures

5.2.3.1. UVvisible spectroscopy
A Unicam UV/Visible spectrometer UV2 was used across the range 190700nm.The
system operation and data acquisition were performed using the software VISION
pro. The UVvis spectra allowed selecting the most appropriate solvent for each
224
dye and the specic detection wavelengths for the CE separation. The dye con-
centrations were adjusted to provide non-saturated absorption maxima.
5.2.3.2. CE
Electrophoretic separations were performed with a P/ACEMDQ (Beckman
Coulter) equipped with a PDA detector (200590 nm) (Beckman Coulter). The
software 32Karat (Beckman Coulter) version 5.0 was used for data acquisition and
processing.
Separations were carried out using a fused-silica capillary of 50 mm internal
diameter, which was cut to a length of 60cm (50cm eective length to the detector
window) for CE-PDA and 62cm for CE-ESI-MS. Between analyses, the capillary
was washed with NaOH 0.1M (3 min) and deionised water (1min), followed by the
electrolyte (3 min). After each analysis, the capillary was rinsed with deionised
water (2 min).
The electrolyte was changed between series of three runs. The electrolyte con-
sisted of 50 mM ammonium acetate with 15 % (v/v) acetonitrile, and was adjusted
to pH 9 with NaOH 1M. It was ltered through a 0.22 mm pores PTFE syringe
º
lter prior to use. The separation was performed at 20 C. The applied voltage was
20kV, resulting in a current of 63 mA. The injection was made in hydrodynamic
mode at 1 psi for 4s. Analysis time was 20min.
The detection wavelength of each dye was selected according to the UVvis
features. Peak identication was done using migration times (tM ) and UV spectra.
Brillant Green was injected at the beginning of each working day in order to check
for day-to-day variations. Triplicate samples were prepared and triplicate analyses
of each sample were carried out (relative standard deviations corresponding to
interday and intraday variationsRSDis calculated on n=9).
5.2.3.3. ESI-ITMS
A mass spectrometer with anion trap analyser (ITMS) equipped with an elec-
tro spray ionization (ESI) source (HCT-Ultra, Bruker Daltonics) was used. The
pumping system is composed of a rough pump and two turbomolecular pumps.
Fore vacuum was 4.14.2 mbars and high vacuum was 9x10 =6mbars. The detec-
tion mass range is m/z 50-3000 amu (standard mode). The mass calibration was
carried out once at the beginning of the work, both in positive and in negative
225
ion modes, over the entire mass range using seven standard compounds (ESI tu-
ne mix, Bruker). The software Compass 1.3 for Esquire/HCT was used for data
acquisition and analysis. CEMS coupling was carried out using a sheath liquid
coaxial ESI interface (Agilent Technologies).
The following MS parameters were used: a capillary voltage of 4000 V (capillary
exit voltage of 121 V), end plate oset of =500 V and skimmer voltage of 40 V.
The maximum accumulation time was 50.00 ms and the `smart target' (maximum
number of ions in the trap) was set to 5000. The optimal protruding length of
the CE capillary from the sprayer needle, which is reported to inuence the spray
performances [Mokkadem et al., 2008], was between 0.03 and 0.3 mm. The mass
spectra were acquired in ultra scan mode (scans peed 26000 m/z s
−1 , resolution
0.4 FWHM (Full-Wid that Half-Maximum) / m/z). Both positive and negative ion
modes were used successively upon two consecutive injections of the same sample
for cationic dyes and anionic dyes respectively. MS
2 was performed in positive ion
mode only.
Positive ion mode was used over the scan range from 200 m/z to 800 m/z
with a target mass set to m/z 400. The sheath liquid consisted of methanol/water
(1:1) with 0.5 % (v/v) of formic acid, and was dispensed with a syringe pump at a
ow-rate of 400 mL
−1 . The nebulising gas (N2 ) pressure was set to 5 psi. Drying
h
º
gas temperature was 300 C and ow-rate was 4 L min
−1 .
Negative ion mode was used over the scan range from 200 m/z to 1400 m/z
with a target mass set to m/z 800. The sheath liquid was 2-propanol/water (1:1)
and its ow-rate was 400 mL
−1 . The nebulising gas pressure was set to 7 psi.
h
º
Drying gas temperature was 300 C and ow-rate was 4 L min
−1 .
Signal intensity, peak area and height, signal to noise ratio (S/N') and resolu-
tion were observed as basis for the optimization of the sensitivity of the detection.
The optimisation was carried out with separate single injections of each dye. Pre-
cision was evaluated with the RSD calculated on tm.
5.3. Results and discussion

5.3.1. UVvis
The wavelengths selected for detection in CE-PDA were the absorption ma-
xima (lmax) of each dye, except for the group of blue-violet dyes as their lmax
226
was around 600700 nm, which is outside the PDA range. The second absorption
region, around 250 350 nm, was thus used. Table 5.1 shows the lmax of each dye.
The detection wavelength used is marked in bold.
Tabla 5.1: Dyes specication max (optimum wavelengths for the identication is
marked in bold) tm and RSD in CE-PDA (optimised conditions) of the synthetic
dyes (separate single injections). Capillary: 50 mm i.d., L= 60 cm; electrolyte: 50
mM ammonium acetate with 15 % (v/v) acetonitrile pH 9; temperature 20 ºC;
applied voltage 20 kV; analysis time 20 min, hydrodynamic injection at 1 psi for
4 s.
227
5.3.2. Optimisation of the CE-PDA method

To this date, CE methods proposed in the literature have been developed for
the identication of either cationic or anionic dyes. In a rst screening method
a simultaneous identication of a large number of both types of dyes seemed
an important goal to reach, mostly, as explained earlier, regarding the sampling
constraints related to the targeted application to cultural heritage objects.
The optimization was carried out with six cationic dyes (TT, CG, BG, CV,
RHB, RH6G) and eight anionic dyes (CH, RB, DII, EB, EY, ERB, ERB2, PBV)
dissolved in water:methanol (1:1). Each experimental and instrumental variable
were investigated separately and each dye was examined individually.
5.3.2.1. Electrolyte
The electrolyte was chosen among those compatible with an IT mass analyser,
in view of the use of CE-ESI-MS. Based on published work where a non-aqueous
electrolyte for the identication of synthetic dyes was used [Kuo, Huang and Hsieh,
1998], ammonium acetate dissolved in several organic solvents (methanol, aceto-
nitrile, ethanol, 2-propanol and acetonitrile:methanol) was tested at dierent con-
centrations (ranging from 10mM to 60mM). Also, the addition of acetic acid and
formic acid was tested up to 20 % (v/v). A good separation of the cationic dyes was
achieved with 55 mM ammonium acetate and 5 % (v/v) acetic acid in methanol,
but none of the conditions tested were suitable for the separation of the anionic
dyes. Another electrolyte had thus to be found.
Based on published results [Fakhari et col., 2006] [Zhao et al., 2007], ammonium
acetate in water was tested at pH 9 at 20, 50 and 70 mM. High ionic strength
leading to slower electroosmotic ow (EOF), 70 mM increased the analysis time
up to 13 min for the six dyes tested and additionally raised the current to 125
mA, which generates Joule heating. Moreover, as ESI is prone to analyte signal
suppression by high buer concentrations, the latter was avoided in view of the
future use of CE-ESI-MS [Hommerson et al., 2011]. Conversely, 20 mM led to
poor peaks shape and poor resolutions. The concentration of 50 mM provided the
best compromise between resolution and analysis time while a reasonable current
around 60 mA was achieved (Figure 5.2).
228
Figura 5.2: Electropherograms obtained with a mixture of two cationic dyes

(1) TT: Thioavin T and (2) CG: Chrysoidine G- and four anionic dyes (3)CH:
Chrysophenine, (4) RB: Rose Bengal, (5) DII: Diiodouorescein and (6) EB: Eosin
B - with dierent concentrations of the running buer.
The eect of pH was investigated in the range 711 in one unit steps and a pH
9 allowed a good compromise between resolution and analysis time for the cationic
and anionic dyes.
Methanol, ethanol and acetonitrile (5 %, 15 % and 30 %, v/v) were tested as
organic modiers in the electrolyte (Figure 5.3). The electrophoretic migration is
aected by the addition of solvent due to the change in viscosity, size of the dis-
solved analytes and protonation equilibria (pKa values), as well as the interaction
between analytes and background electrolyte additives [Scriba, 2007]. Acetonitrile
229
at 15 % (v/v) shortened the analysis time to 16 min for the fourteen cationic and
anionic dyes without loss in resolution compared to the other solvents tested in
equivalent percentages (for which analysis times were up to 23 min). Lower per-
centage of solvent, and no solvent at all, did not provide enough resolution, while
30 % solvent considerably lengthened the analysis. The optimized electrolyte was
thus composed of 50 mM ammonium acetate at pH 9 with 15 % (v/v) acetonitrile.
230
Figura 5.3: Optimisation of the running buer: nature of the organic solvent (a)
and acetonitrile concentration (b).
231
5.3.2.2. Instrumental parameters

º
The temperature variation in the range 1535 C showed that above 25 C re- º
solution worsened. The temperature selected was 20 ºC, mostly for energy saving
concerns.
The voltage which allowed obtaining shortest analysis time while maintaining
a good resolution was 20 kV (range tested 1030 kV). This resulted in a current
of 63 mA.
Hydrodynamic injection was used for better reproducibility of the sample plug
volumes since conductivity, which is the basis of the electrokinetic injection, varies
widely in samples from real historic artefacts targeted in this study. Injection
pressure and time were tested in the range 0.53 psi and 412 s. As expected,
peak area and peak height in creased but resolution decreased with increasing
injection pressure and time. A compromise was found with 1psi and 4s, which
allowed obtaining symmetrical peaks.
The electropherograms obtained for each dye under these optimized conditions
are presented in gure 5.4. Table 5.1 gathers the migration time (and RSD) of each
dye injected separately. All the dyes could be discriminated based on their tm and
UV absorption features. For instance, eventhough RB and ERB migrated consecu-
tively very closely and were both detected at 550 nm, they could be distinguished
using their full UV spectra: RB presents two lmax (259 nm and 550 nm) and ERB
has three lmax (261 nm, 351 nm and 550 nm). The separation was quite fast, with
tm of the cationic dyes ranging between 3.64 min (TT) and 5.56 min (CG), and
tm for the anionic dyes, ranging from 7.98 min (PBVF) to 15.24 min (EB).
232
Figura 5.4: Electropherograms of the dyes (separate single injections): Capillary:

50 mm i.d., L= 60 cm; electrolyte: 50 mM ammonium acetate with 15 % (v/v)
º
acetonitrile pH 9; temperature 20 C; applied voltage 20 kV; analysis time 20 min,
hydrodynamic injection at 1 psi for 4 s, PDA detection.
5.3.3. Optimisation of the CE-ESI-MS methodology

Positive ion mode detection is most often used in ESI-MS several factors make
negative ion ESI more challenging, one being the diculty to produce stable,
negative ions to carry the excess negative charge at low analyte concentrations
[Cech and Enke, 2001].
Anionic dyes did not yield are mark able signal in positive ion mode and
negative ion mode had to be used. Therefore both modes were used alternatively
on the same sample.
Comparing gure 5.5, it appears that the migration times are occasionally
233
dierent in CE-PDA and CE-ESI-MS. The small dierence in capillary length

can be one explanation, but the main reason reported in the literature to modify
migration time in CE-ESI-MS is the suction eect which, in the coaxial ESI con-
guration, stems from the nebulising gas and the drying gas, as well as from the
CE capillary protrusion length from the interface needle Mokkadem et col., 2008].
However suction eect would normally not aect the migration order as observed
on the gures for some of the cationic dyes (e.g. FB and AO). In that respect,
it has to be pointed out that this inversion in tm may be only apparent as with
migration times within tenth of seconds and considering the RSD, small variations
among repeat an alyses would explain an occasional variability on tm. Indeed su-
per imposed single electropherograms chosen among those obtained from several
injections are represented on the gures.
234
Figura 5.5: Superimposed EIEs of the cationic dyes (a) and the anionic dyes (b)
(single injections).
235
5.3.3.1. CE-ESI-MS(+) for cationic dyes
From the three organic solvents tested (methanol, ethanol and 2-propanol)
with water (1:1) as sheath liquid, methanol provided the best sensitivity (Figure
5.6). As for its proportion, signal intensity was best with MeOH:H2 O 1:1 (range
tested: 1:3, 1:1 and 3:1) (Figure 5.7).
Figura 5.6: Inuence of dierent organic solvents used in the composition of the
sheath liquid on the MS signal intensity.
236
Figura 5.7: Inuence of the concentration of MeOH in the sheath liquid on the MS
signal intensity.
Formic acid at 0.5 % (v/v) was preferred over acetic acid to improve ionization
(increased signal intensity) as the sensitivity resulted somewhat better (range tes-
ted: 0.25 to 1.25 %, v/v). As heath liquid ow rate of 400 mL −1 was sucient
h
to obtain a good spray, as table MS capillary current and considerable sensitivity
(range tested: 100 mL h
−1 to 600 mL h
−1 ).
The eect of the pressure of the nebulising gas was examined in the range of 5
psi to 11 psi. The increase of the pressure produced a reduction in the migration
times but a decrease in sensitivity. The lowest pressure of 5 psi was chosen.
The drying gas ow rate was tested between 2 L min
−1 and 8 L min−1 in steps
of 2 L min
−1 . It was observed that the inuence on the migration times and peak
intensity was not signicant. A ow rate 4 L min

−1 was selected as it falls in the
range recommended by the manufacturer for a good stability of the spray at the
sheath liquid ow rate chosen. Drying gas temperature was tested gradually from
50 ºC to 300 ºC. The best signal was obtained with a drying gas temperature of
300 ºC.
Under these conditions, these parathion and identication of the fourteen ca-
tionic dyes was achieved in 10 min. The extracted ion electropherograms (EIE)
obtained with the cationic dyes under the optimum conditions are shown in gure
5.5.
237
The MS and MS
2 spectra of each reference dye can be found in the annex
C.Table 5.2 lists the theoretical precursor ions for each dye (m/z th) and the
experimental ones (m/z exp) as well as minor peaks, which could not be assigned to
a specic compound. They likely indicate the presence of degradation by-products
or impurities as the dyes are not 100 % pure.
The MS
2 daughter ions for the cationic dyes with corresponding proposed
fragments or fragment losses, when attributed, are gathered in tables 5.3, 5.4 and
5.5. The precursor ions were always identied and most daughter ions could be
assigned to specic fragments. Fragment structures or fragment losses could be
proposed for all the MS
2 base peaks of the cationic dyes except in the case of FB
(m/z 226.7). While some of the fragmentations were straight forward (e.g. loss
of functional groups or fragments), others were more dicult to assign due to a
dierence of 1, and sometimes 2 amu with the possible obvious fragments. Transfers
of hydrogen atoms with competition between hydride and proton abstractions
would explain some of the fragments found, as tentatively proposed in tables 5.3,
5.4 y 5.5. In fact, hydride abstraction has been reported to occur with an ESI
interface in positive ion mode on related molecular structures (dihydropyridines
and pyrimidines) [Chai et al., 2011] [Orelli et al.., 2006]. An explanation for these
2
hydrogen transfers would be high collision energy for the MS , which could perhaps
be avoided by working at lower energies.
238
Tabla 5.2: Compound formula, migration time and RSD, precursor ions (Mp)
expected (m/z th), Mp found (m/z exp) (in bold) of the reference dyes. Unassigned
additional minor peaks from impurities, by-products or adducts are also listed
when present (italics + underlined when base peaks). Complete spectra can be
found in the annex C.
239
2
Tabla 5.3: I: MS: m/z precursor ion(s) (Mp). MS : daughter ions for the cationic
dyes with corresponding proposed fragments or fragment losses (minus sign), when
attributable (MS2 base peaks in bold, unattributed m/z and multiple possible
formulas in italics). Spectra for the complete dyes list can be found in the annex
C.
240
Tabla 5.4: II: MS: m/z precursor ion(s) (Mp). MS2: daughter ions for the cationic
formulas in italics). Spectra for the complete dyes list can be found in the annex
C.
241
2
Tabla 5.5: III: MS: m/z precursor ion(s) (Mp). MS : daughter ions for the cationic
formulas in italics). . Spectra for the complete dyes list can be found in the annex
C.
The precursor ion was actually sucient for the identication of the cationic
dyes, except for dierentiating between RH6G and RHB, which both had m/z
443.1, and additionally migrated at neighbouring tm (less than 1 min dierence).
Fragmentation in MS2 was thus necessary for their discrimination. For RH6G,
a daughter ion m/z 415.1 was obtained (no assignment found) and for RHB,
two daughter ions were detected at m/z 399.1 (no assignment found) and m/z
413.1 (possibly the loss of an ethyl group and addition on the fragment ion of
+
H ). Despite the fact that with CE separation before and MS
2 was not essential
for identication purposes, it was carried out nevertheless since in real sample
matrices, the complexity of the spectra can hinder the identication of peaks, in
242
which case fragments can be useful for conrmation.
5.3.3.2. CE-ESI-MS(=) for anionic dyes

The same stepwise procedure was performed to optimize the method in nega-
tive ion mode for the characterization of the anionic dyes. From methanol, ethanol
and 2-propanol in 1:1 mixture with water, 2-propanol allowed for the best sensiti-
vity, the best proportion indeed being 1:1 (tested range: 1:3, 1:1, 3:1). The addition
of acid did not improve the signal, the natural charge of the dyes was sucient for
a good ionization output. Changing the ow rate of the sheath liquid in the range
200 mL h
−1 to 400 mL h
−1 showed that 400 mL h
−1 provided the best peak area
and peak height, with a good spray stability. The optimal pressure for the nebu-
lising gas was 7 psi (tested range 59 psi). The drying gas ow rate chosen was 4
L min
−1 (range tested 2 L min−1 to 8 L min−1 ), and the drying gas temperature
was xed to 300 ºC. This method enabled the separation and identication of the
nine anionic dyes within 20 min.
In Fig.5.9 the EIE obtained for all the anionic dyes under the optimized con-
ditions are presented. Table 5.2 lists the precursor ions and other peaks on the
spectra assumed to be due to impurities or degradation byproducts which could
not be assigned. These were mostly minor, although, inexplicably, major in two
instances (m/z 800.7 for RB and m/z 662.8 for ERB and ERB2). Each dye sho-
wed a characteristic m/z, which was identied in all cases. For ERB, EY and EB,
two major peaks were found, corresponding to the loss of one and two sodium
atoms, respectively (MS spectra can be found in the annex C). In the case of DII
two major peaks were also present, the second peak corresponding to the sodium
adduct. The acquisition of the MS spectra resulted sucient for identication. At
any rate, the sensitivity obtained with the anionic dyes being one to two orders
of magnitude lower than with cationic dyes, MS2 could not be performed most of
the time [Cech and Enke, 2001].
243
5.3.4. Identication of the dyes in the lmcolor photograph
The sample taken from the lmcolor (Figure 5.8) was analysed using the CE-
ESI-MS methodology developed, with two consecutive injections in positive and
negative ion mode. The identication was carried out by comparing tm and spec-
2
tra (MS and MS ) with those of the reference dyes analysed earlier. MS and
2
MS spectra were very complex. A few representative spectra are shown in gure
5.9 , the other ones can be found in the annex C.
Figura 5.8: Original box of lmcolor.
244
Figura 5.9: MS and MS2 spectra of a few the dyes identied in the lmcolor sample.
As example: (a) FB (m/z 362.8, MS2: 226.8), (b) RH6G (m/z 443.2, MS2: m/z
415.1), (c) RB (m/z 992.5). Complete spectra can be found in the annex 2.
245
Four cationic dyes were identied with certainty in positive ion mode: FB (m/z
362.8, MS2: 226.8), BG (m/z 385.0, MS2: m/z 355.3 and m/z 341.1), RH6G (m/z
443.2, MS2: m/z 415.1), and MB (m/z 284.0, MS2: m/z 268.0). Additionally, two
more dyes can be proposed as possibly present as traces: CG (m/z 211.9, MS2:
m/z 104.9) and CV (m/z 372.2, MS2: m/z 356.0). Attribution remains cautious
for the latter because the intensity of the peak of the MS2 fragment ion was very
low for CG, and for CV the second MS2 fragment ion expected (m/z 250.9) was
absent. Note worthy is the presence of the minor unassigned peaks also observed
on the reference dyes MS
2 spectra at m/z 121.0 and m/z 141.0 for CG and at m/z
236.8 for CV.

The following anionic dyes were identied with condence: RB (m/z 992.5),
DII (m/z 583.3 and m/z 605.9) and ERB (m/z 834.9 and m/z 856.4). PBVF
(m/z 543.5) and PBV (m/z 559.6) were in our opinion most likely present as
traces, and the very low intensity of the peaks required caution in their attribution.
As observed for the reference dyes, the range of intensity of the peaks for the
anionic dyes was at least one order of magnitude lower than for the cationic dyes.
Also noteworthy is the fact that tm varied slightly compared to tm for there
ference dyes. This was due to the fact that the latter were injected individually
or by groups of three, while the lmcolor sample seemingly contained at least
ten dyes. The variation in tm can also be attributed to sample matrix eect: in
the lmcolor sample organic compounds other than dyes could still be present
despite the ltration, thus complicating the separation and possibly modifying
the migration properties.
With these results, the following hypothesis can be presented regarding the
dyes composition of the lmcolor: RH6G, RB, DII and ERB (and possibly trace
amounts of CG) as red/orange dyes, FB, MB (and possibly trace amounts of CV,
PBVF, PBV) as blue/violet dyes, and BG as green dye.
Although it is dicult to do a fair comparison due to the fast evolution of the
techniques in a couple of decades, previous work on the very same lmcolor ar-
tifact using HPLC-PDA allowed identifying only ve dyes: RH6G and Tartrazine
(CI.19140) for the red/orange, PBV and CV for the blue/violet and BG for the
green [Lavédrine, 1992] [Lavédrine, Gandolfo and Susbielles, 1993]. Our results
thus partly conrmed and enhanced the knowledge of the dyes in the lmcolor
photograph, as six cationic and ve anionic dyes were identied, among which
246
seven fully ascertained. The list could even be extended considering that the array
of dyes available at the time of production of the lmcolor expanded beyond the
range of those used as references in this work. This diversity of dyes in a single ar-
tifact is remarkable. It is unlikely that a starch grain would be dyed with dierent
dyes of the same colour. A common explanation would be that mixtures of dyes
could have been used to achieve a subtle colour rendering. Another hypothesisis
that dierent batches of starch of the same colour, but dyed with colourants of
dierent chemical composition at dierent moments in time, could have been mi-
xed, simply for practical reasons. This would explain that some dyes were indeed
present in trace amounts in the sample, which would also explain some of the
minor peaks. Also, as mentioned earlier, many synthetic dyes are not 100 % pure
and by-products can be formed during the synthesis, which would also add to the
intricacy of the analyses.
Using the CE-PDA method on the lmcolor sample no peak emerged from the
background noise, probably because the sample was too dilute for PDA detection.
Reconcentration was anyhow not possible due to the very small initial sample
volume (25 ml). Hence, CE-ESI-MS proved far superior over CE-PDA for the
identication of synthetic dyes in a real artefact.
5.4. Conclusion
The CE-PDA method developed is, as far as we know, the rst method to
enable the analysis of such a large panel of dyes of opposite charge in a single,
simple and short analysis (15 min). The sensitivity was not sucient in the dicult
case of the lmcolor sample.
For challenging applications, the method can thus be proposed as a rst identi-
cation and screening method to quickly determine which types of dyes are present
in very dilute and complex mixtures before applying the more dedicated CE-ESI-
MS methodology.
The CE-ESI-MS methodology is straight forward, fast and, as the CE-PDA
method, involves no tedious sample pretreatment. The advantage of MS detec-
tion lies in the simultaneous determination of all the dyes as the value m/z of
the molecular or pseudo-molecular ions, as well as that of the MS2 ions, helped
indiscriminating and identifying compound seven when they showed very close
migration times. Furthermore, the CE-ESI-MS methodology has much greater
247
sensitivity than CE-PDA and permits a partial structure elucidation of the dyes.
Thanks to the miniaturized sampling, CE-ESI-MS can be applied to small samples
such as those originating from valuable cultural heritage artefacts. In this work, it
was successfully applied to the historic sample chosen. It has to be noted however
that, despite previous cleaning, the lmcolor sample remained complex and did
not allow as good a separation as the reference dyes. This was expected as it is a
recurrent challenging problem when analyzing the often complex sample matrices
originating from historic artefacts.
Further improvement of the separation conditions and MS parameters for the
detection of cationic and anionic dyes is envisaged to possibly help extend the iden-
tications in the case of complex mixtures and/or very dilute samples. Nevertheless
numerous dyes could be identied in the lmcolor, conrming the analyses carried
out by previous researchers, and adding new ones to the list, never identied be-
fore, thus enhancing knowledge of the composition of these early photographs. In
that respect, caution is advised for some of the identications proposed in the case
of the presence of dyes as traces. On the historic level, it appears likely from this
research that dyes could be mixed together to obtain subtle hues or that batches of
starch dyed with dierent dyes of the same colour could have been originally mixed
by the manufacturer, resulting in multi-compound mixtures, and thus complex dye
composition of the photographs, an element that went unnoticed so far.
Synthetic dyes are quickly replaced the natural dyes in the manufacture of
historical and artistic artefacts since 19th century. Therefore an identication of
this dyes will usually be required in the restoration intervention in order to improve
the conservation of our most recent cultural heritage.
248
Capítulo 6
Analysis of a royal 15th Century

illuminated parchment using a
portable XRF-XRD system and
micro-invasive techniques
RESUMEN
En este capítulo se ha empleado un equipo complementario no invasivo de di-
fracción de rayos X (XRD) y uorescencia (XRF) para la identicación in situ
de materiales inorgánicos en un valioso pergamino iluminado, actualmente con-
servado en el Archivo de la Real Chancillería en Granada (España), en el cual
el rey Enrique IV (1425-1474) conere el título de nobleza a Gil Fernandez y
Alonso Covo. Para el estudio por electroforesis capilar (CE) de los materiales or-
gánicos se recurrió a la toma de micromuestras, que también se emplearon para
el análisis por espectroscopía micro-Raman y microscopía electrónica de barrido
(SEM-EDX), que ayudaron a conrmar la naturaleza de los materiales que habían
sido identicados mediante XRD-XRF.
Se detectó oro y plata además de oxido de plomo y cinc en los amarillos, azurita
en el azul, bermellón y minio en los colores rojos y malaquita en los verdes. La
calcita fue aplicada en la totalidad de la supercie de las hojas mientras que el
yeso solo aparece en las áreas de texto. El texto del pergamino se realizó con tintas
249
con base de hierro.

Estos análisis ayudarán a situar este documento en su contexto histórico; ade-
más sirven como punto de partida para el estudio comparativo con otros docu-
mentos similares.
ABSTRACT
A system of complementary X-ray diraction (XRD) and uorescence (XRF)
was used for non-invasive in situ identication of inorganic materials in a highly
valuable illuminated parchment, now preserved at the Archive of the Royal Chan-
cellery in Granada (Spain), via which King Enrique IV (1425 - 1474) conferred
nobility on Gil Fernandez and Alonso Covo. The study of organic matter, by ca-
pillary electrophoresis (CE), could not be performed without taking microsamples
that had also been used to conrm - by micro-Raman spectroscopy and scanning
electron microscopy (SEM-EDX) the nature of inorganic materials that had been
identied by XRD-XRF.
Gold and silver were detected as well as lead tin oxide in yellow, azurite in
blue, vermilion and minium in reddish colours and malachite in green. Calcite was
applied to the entire sheets and gypsum to the text area. Iron-based ink was used
for the parchment text.
These analyses enable the document to be put into its historical context; they
serve as a starting point in a comparative study with other similar documents.
RÉSUMÉ
Nous avons employé un équipement non-invasif complémentaire de diraction
des rayons X (XRD) et uorescence (XRF) pour l'identication in situ des ma-
tériaux inorganiques présents sur un parchemin illuminé précieux, actuellement
conservé dans les archives de la Chancellerie Royale de Grenade (Espagne), par
lequel le Roi Enrique IV (1425-1474) confère un titre de noblesse à Gil Fernan-
dez et Alonso Covo. Pour l'étude des matériaux organiques par électrophorèse
capillaire (CE) le recours à la prise de microéchantillons a été nécessaire, lesquels
ont pu être également utilisés pour conrmer la nature des matériaux identiés
par XRD-XRF grâce à l'analyse en spectroscopie micro-Raman et en microscopie
électronique à balayage couplée à la spectrométrie des rayons X en dispersion des
énergies (SEM-EDX).
250
L'or et l'argent ont été détectés en plus d'un oxyde de plomb et de zinc dans
les jaunes, de l'azurite dans les bleus, du vermillon et du minium dans les rouges
et de la malachite dans les verts. La calcite a été appliquée sur la totalité de la
surface de la feuille alors que le gypse se retrouve uniquement dans les zones de
texte, ce dernier étant écrit avec une encre ferrogallique.
Ces analyses nous aident à situer le document dans son contexte historique et
constituent la base d'une étude comparative ultérieure avec d'autres documents
similaires.
251
6.1. Introducción
Parchments were for many centuries the vehicle of culture and information th-
roughout Europe at least until the end of the Middle Ages, when parchment was
progressively substituted by paper [Pangallo et al., 2010]. Parchments are made
from the skin of sheep, goat or calf, and are commonly employed for codex or
manuscripts, as a support for written documents and also for illustration purposes
and as cover material in book-binding [Dolgin et al., 2009] [Walczak et al., 2008].
Illuminations are coloured adornments such as initial capital letters, fringes of
text or miniature illustrations embellished with gold and/or silver. The illumina-
tion process was reserved for the most precious documents. The earliest surviving
illuminated artworks date from the 5th Century, though it was not until about the
12th Century that their production began to ourish in earnest. This `golden age'
of illumination lasted until the arrival of Gutenberg's printing press after 1450 [De
Hamel, 2001].
Royal solemn privileges are the most important and solemn documents dis-
pensed by the Royal Chancelleries in the Middle Ages in wich the King conferred
signicant privileges. In the Iberian Peninsula, these documents (known as privi-
legios rodados) were dispensed between the 12th and 16th Centuries.
Their importance lies not only in their beauty, but also in that they provide a
safe documentary basis for the reconstruction of the historical past. Their design,
materials and content organization were subjected to a strict process. Pigments
and dyes are the main components for producing the inks and paints. Due to their
generally organic origin, most dyes are photosensitive and undergo tone/hue alte-
ration over time. They are also altered by climate changes, and are very sensitive
to restoration treatments and conservation conditions [Matteini and Moles, 2001].
Binders of pigments and dyes are generally water-soluble; therefore, even the sim-
plest water-based cleaning methods might dissolve them. All these phenomena
make the identication of pigments and dyes a pre-requisite for any intervention
on a document.
Illuminated parchments are dicult to analyse; they are unique works of art,
made of extremely delicate materials, and, generally, institutions only permit their
study in situ in order to prevent any damage caused by changes in temperature
and humidity.
In addition, the value of these objects makes their transportation risky and ex-
252
pensive, hence the development of portable analytical instrumentation that can be

brought to conservation sites (museums, archives, libraries, etc.). Portable X-ray
uorescence (XRF) systems have been widely employed to ascertain the elemental
composition of materials on illuminated parchments and manuscripts [Aceto et
al., 2012] [Bruni et al., 2008] [Manso et al., 2013] [Miliani et al., 2012] [Van der
Snickt et al., 2008]. However, XRF is often not specic enough to identify these
materials with certainty. The materials in heritage objects are most often complex
mixtures including inorganic as well as organic materials. It is therefore necessary
to use various experimental techniques. Recently, spectroscopic techniques have
been extensively applied for the study of this type of artwork [Aceto et al., 2012]
[Manso et al., 2013] [Miliani et al., 2012] [Nastova et al., 2012] [Pessanha et al.,
2012]. For inorganic matter, X-ray diraction (XRD) is highly suitable for com-
plementing XRF, by performing XRD and XRF at the same point where X-rays
hit the artwork surface. Only a few portable XRD systems are available for phase
identication, and limitations in terms of angular resolution and measurement ti-
mes are often observed [Chiari, 2008] [Gatto Rotondo et al., 2010] [Gianoncelli et
al., 2008] [Sarrazin et al., 2008] [Uda et al., 2005]. A portable XRD/XRF equip-
ment has been designed and built at the laboratory of the Centre de Recherche
et de Restauration des Musées de France (C2RMF). This non-invasive analytical
system has been tested on a large number of ancient artworks, mostly paintings
and ceramics in various museums [Duran et al., 2010 and 2011a] [Eveno et al.,
2010] [Gianoncelli et al., 2008], but it has not been used on ancient illuminated
parchments.
Organic dye identication cannot be performed by XRF-XRD; therefore, other

analytical techniques have to be used. Capillary electrophoresis (CE) was selected
because the method of analysis of dyes must be highly selective and sensitive due
to the complexity of the matrices and the limited quantity of sample available.
Particularly in the case of graphic documents CE has proven to be a very po-
werful tool; it allows the combination of short analysis times and high separation
eciency although a microsample is required [López-Montes et al., 2007]. Taking
advantage of the few microsamples collected, Raman spectroscopy and SEM-EDX
(non-destructive techniques) were used to check the results from XRD/XRF and
examine the structure of inorganic and organic materials in the parchment.
This chapter describes the case of a remarkable 15th Century parchment stu-
died mainly with an XRD and XRF portable system. Understanding the materials
253
that constitute graphic works and archival materials facilitates dating, authenti-
cation, and comparison with similar documents for the reconstruction of its docu-
mental typology, while also helping to better undertake their conservation.
This research project was made in collaboration with the researcher Adrián
Durán, from Department of Chemistry and Soil Science (University of Navarra
Spain) and Jacques Castaing, from C2RMF Palais du Louvre (Paris France).
Also it has been published [Durán et al., 2014]: Durán, A., López-Montes, A.,
Castaing, J., Espejo, T. Analysis of a royal 15th Century illuminated parchment
using a portable XRF-XRD system and micro-invasive techniques. J. Archaeolo-
gical Science 45 (2014) 52-58.
6.2. Experimental methods

6.2.1. The privilegio rodado of the Archive of the Royal Chance-
llery
The document of this study is a privilegio rodado (royal solemn privilege).
The handwritten privilege, dated to 1459, in which the king Enrique IV of Castile
conferred nobility on Gil Fernandez and Alonso Covo (Figure 1) is one of the most
important objects preserved in the Archive of the Royal Chancellery from Southern
Spain. The Chancellery was constituted in 1494 shortly after the conquest of
Granada as the High Court of Justice by Isabel I of Castile and her husband
Fernando II of Aragon, the `Catholic Monarchs'. The document is issued in the
form of a quire composed of four sheets of parchment with dimensions 380 x 300
mm2. The sheets are written in Castilian with gothic letters on both sides. The
ink used for writing is now brownish. The initial capital letter is illuminated with
Renaissance themes in reddish pink, green, blue, yellow and black, and gold (Figure
1a). In the middle of the text on the second sheet, a small coat of arms containing
a brown tower is decorated with blue and gold (Figure 1b).
The main feature of the document is the presence of the royal seal framed by
a wheel (signum regis) placed in the recto of the last sheet and anked by a list of
witnesses (Figure 1c). It is this aspect that distinguishes the privileges delivered
by the Castilian Chancellery from others dispensed by European governments
[Floriano, 1946] [Soterraña, 1959]. According to the typology established for this
type of document [Soterraña, 1959], the signum regis matches with model II, which
254
consists of a central circle (with two concentric rings around it) inscribed in a
square. Within the central circle is the royal coat of arms of Castile and Lion
two golden castles and two brown lions and inside the rings are severely damaged
decorative letters, in gold on a blue background for the inner ring, and in silver
on red background for the external one (in which the royal butler and the second
lieutenant ratify the document). Finally, the spaces between the circle and the
square contain vegetal motifs in red or blue (Figure 1c). The state of conservation
of this document was acceptable and, as far as we know, it had not undergone any
previous restoration treatment. It was therefore considered suitable for a study
of the materials used for its fabrication and for the evaluation of their possible
alterations over time. Bringing the portable XRF-XRD heritage-dedicated system
[Gianoncelli et al., 2008] into the archives at Granada avoided the cost and the
risk of carrying the document to a laboratory for analysis.
Figure 6.1 shows the positions of the analysed zones thought to represent all
the materials present in the privilegio rodado. The study included areas of the
unpainted zone of the parchment, the gilding and silvering, the ink, and also the
yellow, blue, red, green, pink and black painted areas.
255
Figura 6.1: Areas analysed on the parchment: (1) zone without text; (2) text area;
(3) background of the small coat of arms; (4) castle in the rota of the signum regis
(gilding); (5) lion in the rota of the signum regis (gilding); (6) yellow colour in
the capital letter (gilding); (7) decorative letters surrounding the rota of the seal
within the signum regis (silvering); (8 and 9) yellow colour in two areas of the
capital letter; (10) yellow colour in the signum regis; (11) blue colour at the top
of the signum regis; (12) blue colour at the bottom of the signum regis; (13) blue
colour in the background of the small coat of arms; (14) reddish pink colour in the
capital letter; (15) red colour in the base of the castle in the signum regis; (16)
green colour in the capital letter; (17) black colour of the drawing in the capital
letter; (18) blue colour in the capital letter.
6.2.2. Analytical techniques

The portable XRD/XRF is described in various publications [Duran et al.,
2010] [Eveno et al., 2010] [Gianoncelli et al., 2008]. Briey, the X-ray source is
equipped with an air-cooled copper anode tube (I = 700 mA, V = 40 kV, Cu-Ka
line at E=8.04 keV) and a polycapillary semi-lens that provides a high intensity
parallel beam. The presence of second diraction peaks was avoided by inserting
a 15 mm Ni lter that strongly attenuates the Cu Kb line. The incidence angle
of the X-ray beam on the parchment was around 10 degrees. The irradiated area
on the sample was about 4 x 3mm2. This spot size for XRF-XRD analysis is
256
not a restriction for the parchment (Figure 6.1) because it presents large areas of
uniform colours.
XRF elemental analysis was performed with a Silicon Drift Detector, whose
resolution is 150 eV FWHM at 5.9 keV. The distance between the detector and the
parchment was about 1.7 cm, the detector being placed orthogonal to the X-ray
beam.
Light elements up to silicon were not detected due to the strong absorption
in air between the artwork surface and the detector (Gianoncelli et al., 2008).
XRF spectra were examined using ArtTAX and Pmca package programmes. A
2-dimensional detector (imaging plate with dimensions 15 x 30cm2) was used
to collect the XRD patterns. The imaging plate was read out in a scanner and
lastly the image of diraction rings was converted into a 2j-intensity diagram
adapted to phase identication with the help of EVA commercial software. The
time of acquisition was 300 seconds for XRF and 15 minutes for XRD. The depth
of analysis is related to the penetration of X-rays that depend on the chemical
composition of the object, its density, and the X-ray energies (between 2 and 25
keV); this depth is usually less than 20-30 mm [Eveno et al., 2010]. XRF and
XRD are performed at the same point on the artwork surface; they are fast and
non-invasive.
In spite of the value of the artwork, nine micro-samples (at a size of around 0.2
by 0.2mm) were collected from the parchment in areas where sampling induced no
visible damage, close to areas 5, 9, 12, 13, 14, 15, 17 and 18. Three samples were
studied by SEM-EDX and one sample by Raman in order to examine the colour
layer structure and composition. The main purpose was to identify the organic
matter by capillary electrophoresis (CE) on six samples that were subsequently
destroyed.
The organic dyes were identied with the Electrophoresis HP3D CE instru-
ment (Agilent Technologies) equipped with a diode-array detector (PDA, Agilent
Technologies), a thermostat column cartridge, a high voltage built-in power supply
and an auto-sampler. The software package HP ChemStation version A.0901 was
used for collect and subsequently process of electropherograms.
The separation of molecules was carried out in fused silica capillaries (64.5 cm
x 50 mm I.D.) with a capillary inlet-to-detector distance of 56 cm. For the analyses
the capillary was rinsed with 0.1 M NaOH (Panreac) for 5 minutes at 25 ºC, follo-
wed by a 3-minute ushing with deionized water to ensure good repeatability. The
257
capillary was equilibrated by the running buer compound with 40 mM sodium

tetraborate decahydrate (Panreac), having 9.25 pH, for 15 minutes before each
sample injection.
Samples were injected hydro-dynamically with a pressure mode (50 mbar) for
13 s. Electrophoretic separation was performed at 30 kV for 15 minutes, resulting
in a current of about 60 mA. The temperature of the capillary was constant at
25 ºC. After each analysis, the capillary was rinsed for 3 minutes with deionized
water. The buer was ltered through a 0.20 mm membrane lter. UV detection
was carried out monitoring at 232 nm.
The yellow samples analysed by CE-PDA were dissolved in sodium dodecyl
sulphate (SDS) (Panreac) 0.1 M and sonicated for 15 minutes. The solutions were
centrifuged at 2000 rpm for 5 minutes before the injection into the capillary. Blue
samples were dissolved in acetic acid (Panreac) 17.5 M in an ultrasound bath for
45 minutes. Next, the solution was evaporated to dryness with a nitrogen current
º
at 60 C, redissolved in 0.1 M SDS, and centrifuged at 2000 rpm for 5 minutes.
Before running the CE studies, the micro-samples were examined nondestruc-
tively.
For micro-Raman experiments, we used a Jobin-Yvon LabRam Innity Raman
spectrometer equipped with a microscope, red (785 nm) and green (532 nm) laser
sources and a CCD detector. The laser power ranged between values under 16 mW
to avoid any secondary processes or damage to the parchment material. Two scan-
ning electron microscopes (models HITACHI S-4800 and HITACHI S-510) were
used. The micro-samples were carbon coated in a CC7650 Polaron before perfor-
ming the study. The chemical elemental analyses were performed using an energy
dispersive X-ray analyser (model BRUKER XFlash Detector 4010) at an accele-
rating voltage of 20 kV. Samples used for SEM-EDX analyses were not employed
for CEPDA analysis.
6.3. Results and discussion

6.3.1. Unpainted zones and text area
The surface on both sides of each sheet of parchment was analysed. Figure 6.2
shows the XRD diagrams from areas where there is no text (a) and in the text area
(b) (zones 1 and 2 in Figure 6.1). The analysis revealed that calcite (CaCO3 ) had
258

been applied to the entire sheets while gypsum (CaSO4 2H2 O) was only present
in the text area. XRF spectra (Figure 6.3) registered on both zones showed that
there was enough sulphur in the text area to obtain a few small gypsum XRD
peaks (Figure 6.2b); outside the text area, gypsum was not detected by XRD
(Figure 6.2a). These results indicate that calcite is ubiquitous on the parchment
sheets.
The presence of calcite in XRD diractograms is interpreted as resulting from
the application of calcium hydroxide used in the liming processes to depilate the
skin of the animal; with time, calcium hydroxide is changed into calcite by reaction
with the atmospheric carbon dioxide. Gypsum detected in the text area is due to
the preparation layer applied to the parchment surface previously to the gilding
and to the application of text and illumination. Rubbing the parchment with a
piece of gypsum avoids the inks bleeding onto the surface and being absorbed. It
also adds a silky appearance [De Hamel, 2001]. Therefore, it was not unexpected to
nd calcite on the whole surface and on both sides of the parchment, and gypsum
only under the text and illuminations.
259
Figura 6.2: XRD diagrams corresponding to areas: (a) where there is no text (1
in Fig. 6.1), (b) on the text area (2 in Fig. 6.1) [C = calcite, Gy = gypsum].
260
Figura 6.3: XRF spectra collected on areas: (a) where there is no text, (b) on the
text area, corresponding to XRD's of Fig. 6.2 (Cu-Ka line at E = 8.04 keV is due
to the X-ray source).
6.3.2. Writing ink

High content in iron and the presence of cupper were detected in the XRF
spectra (Figure 6.3b) registered on text areas (zone 2 in Figure 6.1b) suggesting
an iron gall ink. Only calcite and gypsum were detected as crystalline phases in
the text areas by XRD, identical to Figure 6.2b. The presence of iron-based ink
was conrmed due to the well-known conversion to a brownish appearance caused
by the passing of time, an eect that we have observed in this parchment. XRF
spectra were similar in dierent points of ink, therefore the writing is homogeneous
and it is highly likely that only one ink was used in the making of this document.
6.3.3. Gold and silver

Gold was detected at the base of the drawing of the tower within the small coat
of arms (zone 3 in Figure 6.1b), in the castles and in the lions within the shield
261
(rota) of the signum regis (zones 4 and 5 in Figure 6.1c), and also in some parts
of the capital letter (zone 6 in Figure 6.1a). Silver was detected in the decorative
letters which surround the rota of the seal (zone 7 in Figure 6.1c).
Figure 6.4a shows the XRF spectrum from the castle, in which gold and also
mercury were clearly observed, the latter possibly due to the red area surrounding
the castle; gold, cinnabar (HgS) and calcite were detected by XRD (Figure 6.5a)
at the same point. Lead and gold were detected by XRF in the lion within the
signum regis (Figure 6.4b). Minium (Pb3 O4 ), gold and calcite (Figure 6.5b) were
the crystalline phases detected by XRD in this zone. Both XRF (Figure 6.4c) and
XRD (Figure 6.5c) analysis detected the presence of silver in zone 7. In addition,
calcite and gypsum were detected.
Figura 6.4: XRF spectra collected on gilded areas: (a) the castle in the rota of the
seal (4 in Fig. 6.1), (b) the lion in the rota of the seal (5 in Fig. 6.1); and silvery
zones: (c) letters surrounding the rota of the seal (7 in Fig. 6.1).
262
Figura 6.5: XRD diagrams corresponding to gilded areas: (a) the castle in the rota
of the seal (4 in Fig. 6.1), (b) the lion in the rota of the seal (5 in Fig. 6.1); and
silvery zones; (c) letters surrounding the rota of the seal (7 in Fig. 6.1) [Cin =
cinnabar (vermilion), Au = gold, C = calcite, M =minium, Gy = gypsum, Ag =
silver].
The use of gold and silver responds to the iconographic rules of this signum
regis and emphasizes the value of the privilegio rodado under study (Soterraña,
1959).
Illumination with gold traces back to antiquity but is especially common in
the late Middle Ages and the Renaissance.
Powder micro-samples were collected from the lion (Figure 6.1c) and studied
by micro-Raman and SEM-EDX. Two bands at 138 and 279cm
−1 were observed by
micro-Raman spectroscopy, which we attributed to the presence of PbO massicot

(orthorhombic) [Bouchard and Smith, 2003]. Only lead was detected by SEM-EDX
263
analyses.
It is important to highlight the fact that examples of the use of minium (Pb3O4)
for gilding have previously been described in the literature [Darque-Ceretti and
Aucouturier, 2012] [Merrield, 1849]. The darkening of lead-containing pigments
is a widespread phenomenon in artworks; due to the environmental conditions,
the byproducts of degradation are lead oxides/sulphides, for instance plattnerite
(PbO2) or galena (PbS) [Miguel et al., 2009]. When exposed to light and air,
minium is not a particularly stable pigment and it turns brown, especially when
it has been applied in a water colour or a tempera medium [Gettens and Stout,
1996] as usually employed in parchments.
In the case of the parchment, the detection of minium by XRD together with
the bands observed by micro-Raman seems to indicate that there was a partial
degradation or decomposition of the compounds initially applied, in this case mi-
nium. XRD analysed a large area where minium dominates, and micro-Raman
was performed on a tiny volume of degraded matter, hence the detection of some
type of lead oxide, massicot, as mentioned above.
6.3.4. Painted areas: yellow, blue, red, pink, green, white and
black
In the yellow area of the capital letter (zone 8 in Figure 6.1a) and of the signum
regis (zone 10 in Figure 6.1c), variable contents of lead and tin were detected by
XRF (Figure 6.6a).
264
Figura 6.6: XRF spectra collected on: (a) yellow colour of the signum regis (10 in
Fig. 6.1) and of the capital letter (8 in Fig. 6.1), (b) blue colour at the top and
the bottom of the signum regis (11 and 12 in Fig. 6.1), (c) red colour of the castle
in the rota of the seal (15 in Fig. 6.1).
The diraction peaks in yellows are weak, indicating a small amount of crysta-
lline matter; the XRD diagram corresponding to a yellow zone within the seal (10
in Figure 6.1c) showed the presence of lead tin yellow type I (Pb2SnO4) (Figure
6.7a).
265
Figura 6.7: XRD diagrams corresponding to: (a) yellow colour of the signum regis
(10 in Fig. 6.1), (b) blue colour in the top of the signum regis (11 in Fig.6.1), (c)
blue colour at the bottom of the signum regis (12 in Fig. 6.1), (d) red colour of
the castle in the rota of the seal (15 in Fig. 6.1), (e) green colour in the capital
letter (16 in Fig. 6.1) [LTY = lead tin yellow type I, Gy = gypsum, C = calcite,
Az = azurite, Hy = hydrocerussite (white lead), Cin = cinnabar (vermilion), Cer
= cerussite (white lead), Mch = malachite].
In addition to this compound, gamboge (gambogic acid) was also detected in

the similar area 9 by CE (Figure 6.8a). The identication was performed comparing
the migration time and the UV-Vis spectrum obtained from a standard sample
of gamboge, a gum resin obtained from the Garcinia hanburyi tree. Gamboge is
a lightly-covering colour compound usually used for translucent layers. The two
dierent colouring compounds could have been used in order to create an eect of
relief or simply to increase the colour range of the illumination.
266
Figura 6.8: Electropherograms of: (a) yellow area of the capital letter (9 in Fig.
6.1), showing the presence of gamboge (gambogic acid, GC), (b) blue areas of the
signum regis (12 in Fig. 6.1), showing the presence of indigo (indigotin, IND).
Dierences in colour hues were found between the two blue zones within the
signum regis (11 and 12 in Figure 6.1c). According to visual observation under a
magnifying glass, the blue layer from the top right-hand is thicker than that of the
bottom left-hand area. Azurite (Cu3(CO3)2(OH)2) and lead white (hydrocerussite,
Pb3(CO3)2(OH)2) were detected by XRD (Figure 6.7b) in the top right hand
area (11). In the bottom left-hand area (12), calcite and gypsum together with
azurite (Figure 6.7c) were detected. X-ray penetration was higher in the zone
comprising azurite (10-15 mm) even reaching the Ca-rich internal layers than
in the zone with lead white mixed with azurite where only supercial (1-2 mm
in depth) composition was detected. Azurite contains copper. The Cu-Ka line
(E=8.04 keV) always appears in XRF spectra because of the copper X-ray source
(Figures 6.3, 6.4 and 6.6). In these areas, the Cu-Kb line (E=8.91 keV) (Figure
267
6.6b) is clearly visible, showing the presence of copper [Duran et al., 2010, 2011a,
2011b] [Eveno et al., 2010] [Gianoncelli et al., 2008].
Figura 6.9: SEMeEDX analysis from the outer limits of the capital letter and the
vegetable themes in black (17 in Fig. 6.1).
Blue micro-powder samples taken from the blue base of the small coat of arms
with the tower (zone 13 in Figure 6.1b), the signum regis (zone 12 in Figure 6.1c)
and also from the capital letter (zone 18) were analysed by CE-PDA in order to
look for organic blue compounds. Indigo was identied in the vegetable themes
of the signum regis with the rota (Figure 6.8b). The identication of indigo was
performed comparing the migration time and the UV-Vis spectrum obtained from
a standard sample of indigo from Indigofera tinctoria [López-Montes et al., 2007].
In this case, indigo could be used to modify the blue hue and to bring out the leaves.
The results obtained from the analysis of the blue sample from the small coat of
arms with the tower by CE-PDA showed a weak signal of indigo. The same area
was analysed by XRF, XRD and SEMEDX, but no element attributed to blue
pigments was identied therefore indicating this is an organic blue compound,
probably indigo. In the capital letter, the signal obtained during the identication
268
was not intense enough. For these reasons, we could consider the possible presence
of indigo as a contamination compound from the brush or the palette used during
the making of the illumination.
Vermilion (red mercury sulphide, HgS, found in nature as the mineral cinnabar
or obtained synthetically, both varieties being undistinguishable via the analytical
methods used) was the compound responsible for the reddish colours in the capital
letter (zone 14 reddish pink in Figure 6.1a) and the castle within the signum
regis (zone 15 red in Figure 6.1c) as shown by XRF (mainly Hg and S Figure
6.7c-) and XRD (Figure 6.7d). No red organic dye was detected by CE-PDA.
Malachite (Cu2(CO3)2(OH)2) was detected in the green areas of the capital
letter (16 in Figure 6.1a) as shown by the presence of intense Cu-Kb peaks in the
XRF spectra, and by XRD (Figure 6.7e).
Lead white was found in some of the painted areas together with dierent
pigments, possibly used to whiten the hue or as an extender.
The limits of the capital letter and the enclosed vegetable themes enclosed are
outlined in black (17 in Figure 6.1a). These lines were analysed by XRD, XRF
and SEMEDX.
Calcium (that corresponds to the preparation of the parchment), carbon, sulp-
hur and iron were detected by using the aforementioned techniques (C only by
SEM-EDX).
Taking this approach, we can deduce that a mixed ink was used for these lines
because of the presence of iron with a high amount of carbon (Figure 6.9). This
mixing was usual because the carbon provides more resistance to alteration than
the iron-based ink and a darker black colour [Matteini and Moles, 2001]. The
dierence between the colour of the ink used for writing (brown) (section 6.3.2)
and the colour used for drawing (black in the signum regis and other zones) in
this parchment is considerable.
The pigments found in the coloured areas (Figure 6.1) are mostly crystalline
materials, and therefore are detected by XRD.
269
6.4. CONCLUSIONS
The use of a portable XRD and XRF system enabled the proper identication
of the colouring materials used on the illuminated parchment with the exception of
organic matter (gamboge and indigo) that was detected by CE-PDA. This analy-
tical methodology, based on a portable XRF-XRD, is appropriate for the study of
a wide variety of pigments in graphic documents, especially ancient parchments
where crystalline materials are dominant. These techniques were successfully ap-
plied to the identication of the materials present in a 15th Century privilegio
rodado on parchment.
However, XRF-XRD equipment with a ne X-ray beam (below 0.5 mm is
now available) is necessary for tiny illuminated works. The pigments found in the
privilegio rodado of Enrique IV of Castile are similar to those described in other
similar artworks, made in various places around Western Europe, such as: the
Portuguese manuscript the Charter of Vila Flor from 1512 [Moura et al., 2007], a
painted and drawn parchment from the late 15th Century (or the beginning of the
16th) partly attributed to Andrea Mantegna [Bruni et al., 2008]; an excerpt from
an illuminated 15th or 16th Century book of tides [Van der Snickt et al., 2008]; or
the foral charter parchment from 1514 in which Manuel I of Portugal attributed
the foral charter to the village of Sintra [Manso et al., 2013].
A number of unusual aspects in the paint layers are described in the article:
(i) the degradation of minium, producing massicot, could be associated to a more
general alteration of the parchment (calcium oxalate is suspected in places) that
requires further detailed study; (ii) the absence of lapis lazuli (ultramarine) blue,
considered to be a costly pigment and possibly expected in a royal document; (iii)
the presence of gamboge, the most unusual of the yellow colorants, was identied.
Also, small XRF peaks due to chlorine or barium were sometimes observed; (iv) the
study of the black colour conrmed that the text and decorations were produced by
two dierent hands, according to the tradition in the execution of such documents.
Looking at archival documents from an interdisciplinary point of view permits
an understanding that goes beyond the mere documental study, leading to a richer
description that takes into account the context of the document's production and
its custodial history.
270
Capítulo 7
Conclusion
Les études que nous avons eectuées pour cette thèse doctorale montrent que
l'art et la chimie sont fortement liés l'un à l'autre au prot de la conservation et
de la restauration des objets patrimoniaux.
Les analyses chimiques nous aident à identier les matériaux artistiques, à con-
naître leurs caractéristiques chimiques et physiques et à comprendre les processus
de vieillissement et de détérioration.
Il est important de souligner que la réalisation de ces analyses est conditionnée
à la quantité d'échantillon disponible, souvent très faible dans le cas des maté-
riaux qui composent les ÷uvres d'arts et les objets historiques, et que cela exige
d'adapter les techniques d'analyse chimique classiques.
La caractérisation et l'identication ne constituent pas uniquement un ensem-
ble de données et mesures de type quantitatif sans lien entre elles, sinon qu'elles
doivent aider à établir un référentiel pour réaliser des études comparatives perti-
nentes sur des ensembles d'objets. L'information obtenue facilite la contextualisa-
tion historique et la compréhension des procédés de fabrication aide à connaître
l'état de conservation des objets et à élaborer des protocoles de conservation-
restauration.
Cette thèse doctorale est centrée sur l'importance de l'identication des colo-
rants dans les documents graphiques, photographiques et textiles du patrimoine
culturel. An de parvenir à des résultats les plus complets possibles sur la couleur,
dans certains cas nous avons élargi les collaborations entre chercheurs.
Il faut en eet souligner l'importance de la collaboration interprofessionnelle
271
et multidisciplinaire au sein de la recherche sur le patrimoine culturel. Il est évi-

dent que l'apport d'autres chercheurs a été indispensable pour la caractérisation
des matériaux, le développement des nouvelles méthodologies et, surtout, pour
l'interprétation des résultats.
Plus précisément, nous avons d'abord fait une sélection de colorants employés
depuis l'origine de l'histoire de l'art (colorants organiques naturels) jusqu'à notre
époque (colorants synthétiques), ces derniers ayant fait l'objet principal de ce
travail.
Actuellement, il existe environ 5000 colorants pour le cuir, le papier, les textiles
et les aliments. Cela ne veut pas dire que notre ÷il soit capable de diérencier au-
tant de nuances de couleurs, mais l'existence de ces nombreux produits traduit une
évolution basée sur des considérations strictement techniques, si ce n'est purement
commerciales.
Au total 9 techniques ont été adaptées pour la caractérisation des colorants

et de leurs matériaux associés, présents dans les objets du patrimoine culturel.
L'application des nouvelles méthodologies développées dans chaque chapitre a été
faite sur des couches colorées de documents graphiques, d'objets photographiques
et de textiles.
Les résultats obtenus montrent les énormes possibilités que les techniques
d'analyse chimique orent pour l'étude des matériaux du patrimoine. Ainsi, nous
avons pu vérier qu'il est indispensable de bien connaître les processus de vieillis-
sement pour une identication exacte des matériaux anciens, et tout spécialement
des colorants, puisque les modications qu'ils ont pu subir pendant leur vieillisse-
ment peuvent changer leurs caractéristiques physiques et chimiques.
À propos des techniques d'analyse classiques utilisées, l'électrophorèse capi-

llaire avec un système de détection par barrette de diodes (CE-PDA) a permis
l'identication simultanée des colorants et du liant dans les couches colorées de
documents graphiques. La méthode proposée permet de réduire remarquablement
le nombre de prélèvements de matière puisqu'avec un unique échantillon nous
avons pu identier tous les composants de la couche picturale en une seule analy-
se. Les informations obtenues grâce à l'étude par cette technique de la collection
de parchemins conservés aux archives de la Chancellerie Royale de Grenade (Es-
pagne) facilitent la reconstruction historique et aident à mieux comprendre les
procédés d'élaboration des manuscrits enluminés. Nous avons pu déterminer par
exemple que la gomme arabique était habituellement employée comme liant pour
272
les enluminures des parchemins et comprendre certaines préférences des ateliers

sur les matières colorantes employées.
La même technique de CE, avec une détection PDA ou en couplage avec la

spectrométrie de masse par électronébulisation (ESI-MS), nous a permis d'élaborer
des méthodes sensibles et ecaces pour la séparation et l'identication des colo-
rants organiques synthétiques utilisés dans les autochromes Lumière, premières
photographies couleurs du début du 20ème siècle. L'application analytique a été
faite sur un lmcolor, dernière version commerciale de l'autochrome. En eet, peu
d'informations ont été publiées sur la nature des colorants employés pour la fa-
brication de ces objets photographiques et l'analyse chimique a été indispensable
pour renseigner plus précisément les colorants présents et la complexité matérielle
de ces objets.
Le travail sur les colorants synthétiques utilisés pour la teinture textile nous
a montré qu'un même colorant, de composition chimique bien connue, peut être
transformé an d'améliorer ses qualités tinctoriales et faciliter son application à
diérents types de textiles.
De plus, comme nous avons pu le constater lors de nos recherches bibliograp-

hiques, les colorants organiques synthétiques sont rarement mentionnés dans la
littérature en conservation-restauration, ce qui donne la fausse impression que ces
colorants ont été peu employés, alors qu'ils sont une des principales sources de
teinture industrielle. L'identication de ces colorants et des additifs associés don-
ne des informations de grande importance dans le champ de l'histoire industrielle
moderne, l'archéométrie et l'évolution de la formulation par l'industrie. La recher-
che sur la collection de colorants de l'école de Verviers, nous a permis de proposer
un protocole pour leur classement et leur caractérisation à partir de méthodes
d'analyses spectrométriques et séparatives.
Finalement, toutes les connaissances acquises et la possibilité de collaborations

internationales ont permis la caractérisation complète d'un important document en
parchemin illuminé du XVe siècle. Pour ce faire nous avons exploité les possibilités
techniques d'un équipement non-invasif de diraction des rayons X (XRD) et uo-
rescence X (XRF) couplées pour l'identication in situ des matériaux inorganiques
de ce document graphique. Cette technique permet d'éviter le transport de l'objet
et le prélèvement. Le respect de l'intégrité physique de l'÷uvre est donc maximal.
Cependant, pour l'étude complète des matériaux colorants, et plus spécialement
celle des colorants organiques, il a fallu recourir à d'autres techniques an de com-
273
pléter l'information, et dans ce cas le prélèvement de matière sous la forme d'un

micro-échantillon s'est avéré indispensable. Pour caractériser ce micro-échantillon
nous avons utilisé l'électrophorèse capillaire, la spectroscopie micro-Raman et la
microscopie électronique à balayage (MEB).
En résumé, bien qu'elles aient été eectuées sur des objets individuels, ces
analyses seront la base d'une étude comparative future avec d'autres documents
historiques similaires, ce qui permettra une reconstruction des processus d'élaboration
et une meilleure détermination des conditions de conservation et des techniques
de restauration.
274
Perspectivas
Los métodos de análisis se han adaptado a las condiciones particulares en cada

caso. Durante el proceso se ha empezado a dibujar nuevas líneas de investigación
que arrancan de las cuestiones que los investigadores nos hemos ido planteando
durante las discusiones de los resultados.
Para comenzar, y siguiendo con el espíritu de conocer en profundidad el com-

portamiento de los colorantes, se pretende continuar programando más experimen-
tos que arrojen luz sobre las transformaciones químicas y físicas que se producen
en ellos. Además este trabajo se ampliará con el estudio de la posible interac-
ción entre los materiales originales y los materiales empleados en tratamientos de
conservación-restauración.
Para evaluar las posibles alteraciones sufridas por los colorantes se podrá em-
plear la misma metodología analítica desarrollada en los trabajos de investigación
expuestos ya que se ha demostrado su ecacia.
Por otra parte, al tratar con matrices complejas debido a la gran cantidad
de aditivos y contaminantes que las capas de color contienen debido al modo de
trabajo de un artista o un artesano, hay que asegurar que las identicaciones sean
correctas. Se debe comenzar deniendo cómo hacer un muestreo signicativo y
proponer tratamientos de muestras cuyo proceso no interera en la interpretación
de los resultados, debido a la especial sensibilidad de los colorantes, como se ha
presentado en el capítulo 2.
275
Por último, consiguiendo una gran base de datos de los materiales empleados
en colecciones, se podría hacer un mapa por zonas o talleres con los procesos y
materiales más empleados. Podría darse el caso de llegar a saber qué taller elaboró
un cierto documento, si había intercambio de información entre zonas cercanas, y
qué inuencias propiciaron los cambios de elaboración o el retroceso a técnicas más
tradicionales, consiguiendo, de este modo, la ubicación geográca y cronológica de
objetos carentes de data.
276
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1994 , Rubrique littéraire par anniversaire, Liege (1994).
Walczak, M., Oujja, M., Crespo-Arcá, L., García, A., Méndez, C., Moreno,
P., Domingo, C., Castillejo, M. Evaluation of femtosecond laser pulse irra-
diation of ancient parchment. Appl. Surf. Sci. 255 (2008) 3179-3183.
Wallert, A. Verzino, R. Colours in 15th Century Italian Manuscripts, Res-

tauro 92, 3 (1986) 52-70.
Wouters, J., Verhecken, A., The coccid insect dyes: HPLC and computerized
Diode-Array análisis of dyed yarns. Studies in Conservation 34 (1989) 189-
200.
Zhao, X., Lu, Y., Phillips, D.R., Hwang, H.-M., Hardin, I.R. Study of biode-
gradation products from azo dyes in fungal degradation by capillary electrop-
horesis/electrospray mass spectrometry. J. Chromatography A 1159 (2007)
217224.
Zlotnick, J.A., Smith, F.P. Separation of some black rollerball pen inks by
capillary electrophoresis: preliminary data Forensic Science International 92
(1998) 269280.
291
292
Apéndice A
Fichas descriptivas de los

pergaminos seleccionados de la
colección del Archivo de la Real
Chancillería de Granada.
Información facilitada por el Archivo de la Real Chancillería de Granada, a

través de su director D. David Torres Ibáñez, a quien se le está muy agradecido.
Publicación:
María José Mártir Alario: Colección de pergaminos del Archivo de la Real

Chancillería de Granada. Colección Archivos. Instrumentos de descripción n º 43,
Junta de Andalucía, Consejería de Cultura, Granada 2009.
Edita: JUNTA DE ANDALUCIA.
Consejería de Cultura
Produce: Empresa Pública de Gestión de Programas Culturales
Descripciones ISAD (G) e índices: María José Mártir Alario
Descripción ISDIAH: David Torres Ibáñez
Transcripciones: María Dolores Guerrero Lafuente (documentos n º 30, 32, 34,

35, 36, 57, 76, 79 y 112) y David Torres Ibáñez (documento n º 129)
293
Coordinación: David Torres Ibáñez

© De la edición: JUNTA DE ANDALUCÍA. Consejería de Cultura
© De los textos y transcripciones: sus autores
© De las imágenes: Archivo de la Real Chancillería de Granada (archivo in-
formático)
D.L.:GR 3068-2009
294
1.1 [Código de referencia]: ES 18087.ARCH/060CDMA.Colección de do-

cumentos manuscritos.
7.2. [Reglas o Convenciones] La descripción a nivel de colección se ha

adaptado a la ISAD (G) Norma Internacional General de Descripción Archivísti-
ca, adoptado por el Comité de Normas de Descripción. Consejo Internacional de
Archivos. Estocolmo, Suecia 19-22 de septiembre de 1999. Ministerio de Cultura,
Madrid 2000, 2 ª edición. Para la catalogación de los pergaminos ponticios se ha
seguido la clasicación de THOMAS FRENZ: I documenti pontici nel Medioevo e
nell'Età Moderna. Ed. italiana de Sergio Pagano. Escuela Vaticana de Paleografía,
Diplomática y Archivística, Ciudad del Vaticano 1998 (2ª ed.) (Littera Antiqua 6,
Subsidia Studiorum 1).
295
1.4 [Nivel de descripción: item]

1.1 [Código de referencia] ES.18087.ARCHGR/060CDMA//Pergamino n º 1.
1.2 [Título] Real Provisión Ejecutoria de Hidalguía de los Reyes Católicos de
la sentencia en el pleito sobre la hidalguía de Luis Pérez con el concejo de Fuente
de Cantos (Badajoz).
1.3 [Fecha (s)] 1499, marzo, 19. Ciudad Real.
1.5 [Volumen y soporte de la unidad de descripción (cantidad, tamaño o di-
mensiones)] Pergamino. Cuaderno de 10 hojas. 325 x 215 mm.
4.3 [Lengua/escritura (s) de los documentos] Castellano.
3.1 [Alcance y contenido]
3.4 [Organización] 01.RACH.060. Colección de documentos manuscritos.
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Gótica textual. Sepia. Nombres
del rey y la reina en tinta roja. Hilos de seda en amarillo, rojo y verde. Estado de
conservación bueno.
5.2 [Existencia y localización de copias] Copia digital. ES.18087.ARCHGR
/01RACH /058. Serie Registro del Sello de Chancillería.
5.3 [Unidades de descripción relacionadas]
5.4 [Notas de publicaciones]
6.1 [Notas]
296

1.2 [Título] Real Provisión Ejecutoria de Hidalguía de Juana de Castilla de la
sentencia en el pleito sobre la hidalguía de Gonzalo de Zarzuela con el concejo de
Valdeganga (Cuenca).
1.3 [Fecha (s)] 1514, mayo, 5. Granada.
3.1 [Alcance y contenido] Contiene: 1515, febrero, 22. Valdeganga (Cuenca).
Fórmula de obedecimiento. 1593, abril, 29. La Parra (Murcia). Fórmula de obe-
decimiento. 1602, abril, 20. Albadalejo (Murcia). Fórmula de obedecimiento.
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Gótica textual. Negra. Inicial
orlada en tinta roja y violeta. Estado de conservación regular.
5.2 [Existencia y localización de copias] Copia digital. ES.18071. ARCHGR /
01RACH / 058. Serie Registro del Sello de Chancillería.
5.3 [Unidades de descripción relacionadas] ES.18087.ARCHGR / 057CPCH //
4844 -7; ES.18087. ARCHGR / 057CPCH // 4701-1; ES.18087.ARCHGR /057
CPCH //4541-18.
6.1 [Notas]
297

1.2 [Título] Real Provisión Ejecutoria de Hidalguía de Juan II de la sentencia
en el pleito sobre hidalguía de Fernán Sánchez Abarca con el concejo de Navalón
(Cuenca).
1.3 [Fecha (s)] 1431, enero, 30. Valladolid.

mensiones)] Pergamino. Cuaderno de 10 hojas, las n º 7, 8 y 9 incompletas. 290 x
210 mm.
3.1 [Alcance y contenido] Contenido: 1480, marzo, 16. Cuenca. Fórmula de

obedecimiento. 1520, noviembre, 28. Torralba (Cuenca). Fórmula de obedecimien-
to.
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Gótica textual. Sepia. Inicial

orlada en tinta roja y violeta. Hilos de seda en azul, blanco, rojo y verde. Estado
de conservación malo. Restaurado.

6.1 [Notas]

1.2 [Título] Real Provisión Ejecutoria de Hidalguía de Juana de Castilla de
la sentencia en el pleito sobre hidalguía de Pedro de Buedo con el concejo de
Torrejoncillo (Cáceres).
1.3 [Fecha (s)] 1515, enero, 23. Granada.

mensiones)] Pergamino. Cuaderno de 7 hojas. Incompleto. 300 x 220 mm.
298
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Gótica textual. Negra. Iniciales

en azul y rojo. Estado de conservación bueno.
6.1 [Notas]
299

1.2 [Título] Real Provisión Ejecutoria de Hidalguía de los Reyes Católicos de
la sentencia en el pleito sobre hidalguía de Francisco de Manzanedo, vecino de
Villanueva de la Serena (Badajoz). Información de testigos.
1.3 [Fecha (s)] 1537, (sm; sm; sd; sl)
mensiones)] Pergamino. 4 hojas. Incompleto. 320 x 220 mm
3.1 [Alcance y contenido] Contiene: 1481, octubre, 10. Burgos. Petición.
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Gótica textual. Negra. Capi-
tales orladas en rojo, azul, oro y blanco. Estado de conservación bueno.
5.3 [Unidades de descripción relacionadas] ES.18087. ARCHGR /0 57CPCH
// 5091-374.
6.1 [Notas]
300

1.2 [Título] Carta de Constitución de Mayorazgo de Simón Ruiz de Valera,
alcalde y escribano público de Pedroche (Córdoba), e Inés Gutiérrez, su mujer, del
tercio y quinto de sus bienes a favor de Francisca de Valera, su hija.
1.3 [Fecha (s)] 1513, junio, 11. Pedroche.
mensiones)] Pergamino. Cuaderno de 16 folios, 3 en blanco. 280 x 210 mm.
3.1 [Alcance y contenido] Contiene: 1520, junio, 13. Pedroche. Escritura de
aceptación.
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Gótica textual. Sepia. Letra
inicial orlada en tinta roja y negra. Hilos de seda en rojo y verde. Estado de
conservación regular.
5.2 [Existencia y localización de copias] Copia digital.
6.1 [Notas]
301

1.2 [Título] Traslado de Carta de Privilegio y Conrmación de los Reyes Ca-
tólicos a petición de Fray Pedro de Oña, prior del monasterio de la Santísima
Trinidad de Burgos, por la que se concedían a la Orden Trinitaria mercedes para
recoger limosnas, mantener hospitales y redimir cautivos. Conrma otras Enrique
IV, Juan II, Enrique III, Juan I, Enrique II, Alfonso XI y Fernando IV.
1.3 [Fecha (s)] 1506, mayo, 11. Burgos.
3.1 [Alcance y contenido] Contiene: Cuadro P35 1304, abril 6. Burgos. Privile-
gio y conrmación de Fernando IV. Doc 1 1315, octubre, 27. Burgos. Privilegio y
conrmación de Alfonso XI. Doc 2 1324, abril, 16. Segovia. Privilegio y conrma-
ción de Alfonso XI. Doc 3 1367, febrero, 5. Burgos. Privilegio y conrmación de
Enrique II. Doc 4 1370, febrero, 26. Sevilla. Privilegio y conrmación de Enrique
II. Doc 5 1371, marzo, 23. Valladolid. Privilegio y conrmación de Enrique II.
Doc 6 1379, agosto, 13. Burgos. Privilegio y conrmación de Juan I. Doc 7 1379,
agosto, 13. Burgos. Privilegio y conrmación de Juan I. Doc 8 1394, enero, 29.
Illescas. Privilegio y conrmación de Enrique III. Doc 11 1421, agosto, 1. Vallado-
lid. Privilegio y conrmación de Enrique III. Doc 12 (sf ) Privilegio y conrmación
de Juan II. Doc 13 1455, agosto, 15. Écija. Privilegio y conrmación de Enrique
IV. Doc 14 1498, mayo, 7. Toledo. Privilegio y conrmación los Reyes Católicos.
Doc 15
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Gótica textual. Sepia. Inicial
orlada en tinta roja. Estado de conservación regular.
5.2 [Existencia y localización de copias] Copia digital. ES.18071.ARCHGR/
01RACH/ 058. Serie Registro del Sello de Chancillería.
5.4 [Notas de publicaciones] GUERRERO LAFUENTE, M ª D.: Documen-
tos reales del Archivo de la Real Chancillería de Granada (1304- 1554). Historia
Medieval I. Actas del II Congreso de Historia de Andalucía. Córdoba, 1991, pp.
171-184.
6.1 [Notas] Transcripción.Doc. completo 35
302

1.2 [Título] Carta de Privilegio y Conrmación de Juana de Castilla concedien-
do a los beneciados y sacristanes de la Iglesia de Santa María de la Alhambra
de Granada los bienes de habices. Conrma albalá y real provisión, señalamiento
de bienes de habices, de Granada y su término y otros documentos. Así mismo
ordena la concesión anual de 49.000 maravedíes, procedentes de los bienes habices
reales por juro de heredad.
1.3 [Fecha (s)] 1509, septiembre, 26. Valladolid.
3.1 [Alcance y contenido] Contiene: 1508, octubre, 13. Córdoba. Real provisión.
Doc 1 1509, septiembre, 14. Valladolid. Albalá. Doc 2
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Gótica textual. Sepia. Hilo de
seda en amarillo, azul y rojo. Estado de conservación bueno.
171-184.
6.1 [Notas] Transcripción.Doc completo 36
303

1.2 [Título] Real Provisión Ejecutoria de Hidalguía de Juan II de la sentencia
en el pleito sobre la hidalguía de Alfonso Sánchez Ferrezuelo y Juan Alfonso y
Diego Alfonso, sus hermanos, con el concejo de Casas de Reina (Badajoz).
1.3 [Fecha (s)] 1426, octubre, 16. Tudela de Duero.
mensiones)] Pergamino. Cuaderno de 10 hojas. Guardas en pergamino. 340 x 260
mm.
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Minúscula diplomática. Sepia.
Inicial iluminada en oro y rojo. Hilos de seda en amarillo, azul, blanco, crema y
rojo. Estado de conservación malo.
6.1 [Notas]
304

1.2 [Título] Certicaciones de Hidalguía expedidas por el Cabildo de Murcia
a petición de Francisco Fernández de Bastida y Alarcón y Juan, Pedro y Ginés
Fernández de Bastida y Alarcón, sus hermanos, vecinos de Librilla.
1.3 [Fecha (s)] 1579, junio, 27. Murcia.
mensiones)] Pergamino. 11 folios. 310 x 230 mm.
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Gótica textual. Negra. Capita-
les iluminadas. Tres escudos de armas iluminados. Estado de conservación bueno.
Restaurado.
4639-8.
6.1 [Notas]
305

1.2 [Título] Real Provisión Ejecutoria de Hidalguía de Carlos I de la senten-
cia en el pleito sobre la hidalguía de Pablo Guillén con el concejo de Ampudia
(Palencia).
1.3 [Fecha (s)] 1542, abril, 3. Valladolid.
1.5 [Volumen y soporte de la unidad de descripción (cantidad, tamaño o dimen-
siones)] Pergamino. Cuaderno de 20 hojas. Guardas en pergamino. 1h en blanco.
330 x 240 mm.
3.1 [Alcance y contenido] Contiene: 1542, abril, 22. Ampudia. Fórmula de obe-
decimiento.
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Gótica textual. Sepia. Capitales
iluminadas en rojo y oro. Intitulación: capital iluminada con el escudo de armas
familiar y orla con decoración renancentista. Hilos de seda en verde. Estado de
conservación malo.
4534-14.
6.1 [Notas]
306

1.2 [Título] Real Provisión Ejecutoria de Hidalguía de Carlos I de la sentencia
en el pleito sobre la hidalguía de Antonio de Vera con el concejo de Albacete.
1.3 [Fecha (s)] 1537, mayo, 31. Granada.
mensiones)] Pergamino. 26 hojas. Incompleto. 310 x 220 mm.
tales iluminadas en azul, oro y rojo. Estado de conservación bueno.
5.3 [Unidades de descripción relacionadas] ES.18087.ARCHGR/057CPCH //
4504-10; ES.18087.ARCHGR/057CPCH // 4692-250.
5.4 [Notas de publicaciones] REAL CHANCILLERÍA DE GRANADA. V CEN-
TENARIO. 1505-2005. AA.VV. Edición: Javier Moya Morales, Eduardo Quesada
Dorador y David Torres Ibáñez. Junta de Andalucía. Consejería de Cultura. 2006.
pp. 186-187.
6.1 [Notas] La capital del inicio del fallo de la sentencia iluminada con el dibujo
de los tres oidores.
307

en el pleito sobre la hidalguía de Andrés González con el concejo de Valdeolivas
(Cuenca).
1.3 [Fecha (s)] 1539, febrero, 13. Granada.
3.1 [Alcance y contenido] Contiene: 1475, agosto, 18. Valladolid. Carta de pri-
vilegio. 1539, marzo, 2. Valdeolivas. Fórmula de obedecimiento.
les iluminadas en azul, oro, rojo y verde. Intitulación: capital iluminada con retrato
de Carlos V y orla decorada con escudo de armas familiar y motivos renacentistas.
Hilos de seda en amarillo, rojo y verdes. Estado de conservación bueno.
4505-25.
pp. 112-113.
6.1 [Notas]
308

en el pleito sobre la hidalguía de Antón Ruiz y Gonzalo Ruiz, su hermano, con el
concejo de Socuéllamos (Ciudad Real).
1.3 [Fecha (s)] 1535, septiembre, 7. Granada.
mensiones)] Pergamino. Cuadernos de 24 hojas. 2 hojas en blanco. 350 x 220 mm.
tales iluminadas en azul, blanco y rojo. Intitulación: capital iluminada con un
dibujo de la Virgen con el Niño y orla decorada con escudo de armas familiar y
motivos renacentistas. Hilos de seda en amarillo, blanco, rojo y verde. Estado de
conservación bueno. Restaurado.
4502-39; ES.18087.ARCHGR / 057CPCH // 4508-51.
6.1 [Notas]
309

1.2 [Título] Real Provisión Ejecutoria de Hidalguía de Felipe III de la sentencia
en el pleito sobre la hidalguía de Juan Sayago de Bolaños con el concejo de Fuente
de Maestre (Badajoz).
1.3 [Fecha (s)] 1608, diciembre, 15. Madrid.
mensiones)] Pergamino. Tapas de cuero con dorados. 101 hojas, 3h en blanco. 310
x 220 mm.
3.1 [Alcance y contenido] Contiene: 1514, mayo, 3. Madrid. Carta de privilegio.
1514, octubre, 8. Ventosilla. Sobrecarta. 1574, mayo, 24. Granada. Ejecutoria.
1514, agosto, 8. Granada. Autos. 1609, junio, 29. Fuente del Maestre. Fórmula de
Obedecimiento.
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Gótica textual. Negra. Ilustra-
ciones: Hoja primera: iluminada con la Virgen y los ángeles y debajo retrato de
caballero y mujer. Hoja segunda: escudo de armas familiar. Hoja tercera: intitula-
ción con capital iluminada y orla decorada, las tres con cubiertas de seda verde.
Capitales del expositivo y del inicio del fallo y traslados de documentación real
iluminadas en azul, oro, rojo y verde. Hilos de seda en amarillo, azul, rojo y verde.
Estado de conservación bueno.
/01RACH/ 058. Serie Registro del Sello de Chancillería.
4621-4.
pp. 178-181.
6.1 [Notas]
310

1.2 [Título] Carta de privilegio al concejo de Cózar otorgándole título de villa
y jurisdicción propia, eximiéndola de la de Montiel (Ciudad Real), de la Orden de
Santiago.
1.3 [Fecha (s)] 1554, abril, 19. Valladolid.
mensiones)] Pergamino. 6 hojas. 320 x 220 mm.
3.1 [Alcance y contenido] Contiene: 1552, mayo, 18. Argentina. Carta de po-
der.Doc 1
les iluminadas en rojo y oro. Primera hoja orla coloreada con decoración renacen-
tista y capital inicial iluminada con escudo real. Estado de conservación bueno.
171-184.
REAL CHANCILLERÍA DE GRANADA. V CENTENARIO. 1505-2005. AA.
VV. Edición: Javier Moya Morales, Eduardo Quesada Dorador y David Torres
Ibáñez. Junta de Andalucía. Consejería de Cultura. 2006. pp. 114-115.
6.1 [Notas] Transcripción.
Doc completo El lugar de Argentina corresponde a alguna localidad de Europa
central.
311

1.2 [Título] Testimonios de Privilegios de Hidalguía e Infanzonía otorgados a
Hernán Pérez de Tudela, vecino de Lorca (Murcia). Incluye petición y probanza.
1.3 [Fecha (s)] 1564, enero, 29.
mensiones)] Pergamino. Cuaderno de 14 hojas. Guardas en pergamino. 320 x 220
mm.
3.1 [Alcance y contenido] Contiene: 1462, julio, 3. Calatayud. Privilegio de
Hidalguía.
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Gótica textual y humanística.
Sepia. Capitales iluminadas en rojo y azul e inicial orlada en la intitulación del
traslado. Estado de conservación bueno.
5120-9.
6.1 [Notas]
312

1.2 [Título] Real Provisión Ejecutoria de Hidalguía de Juana de Castilla de
la sentencia en el pleito sobre la hidalguía de Gaspar Mogollón con el concejo de
Alanje (Badajoz).
1.3 [Fecha (s)] 1515, marzo, 17. Granada.
mensiones)] Pergamino. Cuaderno de 19 hojas. 320 x 220 mm
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Gótica textual. Sepia. Intitu-
lación en rojo con escudo de armas familiar. Hilos de seda en colores en amarillo,
blanco, rojo y verde. Estado de conservación bueno.
6.1 [Notas]
313

1.2 [Título] Título de Bachiller en Derecho Canónico concedido por la Univer-
sidad de Salamanca a Juan Ocón de Trillo, natural de Antequera (Málaga).
1.3 [Fecha (s)] 1564, abril, 21.
mensiones)] Pergamino. 1 hoja. 310 x 460 mm.
4.3 [Lengua/escritura (s) de los documentos] Latín.
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Gótca textual y cortesana.
Negra y roja. Estado de conservación malo.
6.1 [Notas]
314

1.2 [Título] Certicado de Rey de Armas. Diego de Urbina, rey de armas,
certica el linaje y armas de los linajes Díaz y Palencia, a petición de Alonso Díaz
de Palencia, escribano del número y vecino de Granada.
1.3 [Fecha (s)] 1587, septiembre, 24. Madrid.
3.1 [Alcance y contenido] Contiene: 1587, septiembre, 30. Madrid. Certicado
notarial.
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Humanística. Sepia. Escudo de
armas iluminado en colores. Estado de conservación bueno. Restaurado.
5155-15.
6.1 [Notas]
315

1.2 [Título] Carta de Privilegio de Claudio Aquaviva, General de la Compañía
de Jesús, a favor de Francisca de Córdoba y Beatriz de Monsalve y Córdoba,
hermanas, por un patronato fundado en un colegio de Écija (Sevilla).
1.3 [Fecha (s)] 1598, noviembre, 26. Roma.
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Humanística. Sepia. Orla de
colores decorada con motivos renacentistas. Estado de conservación malo.
6.1 [Notas] Roto.
316

1.2 [Título] Carta Real de Jacobo II de Inglaterra reconociendo la hidalguía
de Nicolás Aylivard, natural de Hibernia, Irlanda, ahora en España.
1.3 [Fecha (s)] 1700, septiembre, 1. Saint Germain.
mensiones)] Vitela. 1 hoja. 290 x 360 mm.
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Humanística. Negra. Sello.
Estado de conservación bueno.
6.1 [Notas]
317

1.2 [Título] Real Provisión Ejecutoria de Carlos I de la sentencia en el pleito
entre los concejos de Mazarulleque y Salceda Trasierra de la Jurisidicción de Huete
(Cuenca) sobre el uso común del poblado de Villanueva la Seca.
1.3 [Fecha (s)] 1524, octubre, 15. Granada.
mensiones)] Pergamino. Cuaderno de 12 hojas. Incompleta. 330 x 240 mm.
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Gótica textual. Sepia. Letras
capitales iluminadas de colores. Estado de conservación bueno. Restaurado.
5.2 [Existencia y localización de copias] Copia digital. ES.18071.ARCHGR/
01RACH /058. Serie Registro del Sello de Chancillería.
6.1 [Notas]
318

1.2 [Título] Certicado de Rey de Armas de las armas del linaje de Alfon-
so Martínez Merlín, a petición del licenciado Molina, pintado por Diosdado de
Olivares, vecino de Burgos.
1.3 [Fecha (s)] (sa), febrero, 14. Burgos.
mensiones)] Pergamino. 1 hoja. Incompleto. 300 x 210 mm.
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Gótica textual. Negra. Dibu-
jo de caballero con escudo de armas a colores. Estado de conservación bueno.
Restaurado.
6.1 [Notas]
319

1.2 [Título] Hoja de libro de coro con cantos relativos a la Natividad.
1.3 [Fecha (s)] (sf; sl)
tales iluminadas en azul, rojo y negro. Estado de conservación malo.
6.1 [Notas] Hoja de libro de coro empleada como guarda.
320

1.2 [Título] Carta de Privilegio del Cabildo Lateranense sobre el patronato y
ermita de la Cruz en el Cerro del Infante en Antequera (Málaga) que fundó María
Ruiz de la Rubiana, vecina de Antequera.
1.3 [Fecha (s)] 1513, octubre, (probable; sd). Roma.
4.4 [Características físicas y requisitos técnicos] Gótica textual. Sepia. Intitu-
lación destacada e iluminada. Estado de conservación malo.
12261-1.
6.1 [Notas] Relacionado con los pergaminos 152 y 189.
321
322
Apéndice B
Fiche de description de la
sélection des colorants de la
collection de l'Institut Supérieur
Industriel Textile de Verviers
323
FICHE DE DESCRIPTION
Référence de l’échantillon : B6 – P12

Couleur : Rouge
Nom : Terasil Scharlach G R
Fabricant : Ciba - Geigy
C.I. : Disperse rouge 169
Emballage : Pot de plastique
Bouchon : Plastique
Etat de conservation d’emballage : Bon
Etat de conservation de l’échantillon : Bon
Max. Spectre vis (nm) : 504 ; 552
Min. dérivée (nm) : 658
Max. Spectre Uv-vis : 285 ; 483
Eléments Spectre de fluorescence X :
No. Element Line Energy/keV Cycl. Net Backgr. Sigma Chi Conc./%
1 S K12 2,309 16 875 198 36 1,1 0
2 Cl K12 2,622 16 1668 207 46 1,01 0
3 K K12 3,314 16 776 122 32 1,15 0
Coordonnées colorimétriques :
a* b* L* C* Ld Pe x y X Y Z u v
22,25 3,55 23,41 22,54 494 -36,77 0,414 0,294 5,52 3,92 3,88 0,291 0,465
324
Spectre d’absorption par réflexion diffuse et dérivée première : B6 – P12

0,4
100
% Ab.
spectre lissé B6 P12 0,2
80 nm
0
350 450 550 650 750
60
-0,2
40 -0,4
-0,6
20
-0,8
0
350 450 550 650 750 nm -1
Spectre Uv-vis par spectrophotométrie : B6 – P12
AU
3
2.5
1.5
0.5
200 300 400 500 600 700 800 900

nm
Spectre de fluorescence X : B6 – P12

B6P12A
300
250
200
cps
150 B6P12A
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
min
325
Référence de l’échantillon : B8-P3

Couleur : Rouge
Nom : Ecarlate Drimarene K-B
Fabricant : Sandoz
C.I. : Réactif rouge 86
Bouchon : Plastique
Max. Spectre vis (nm) : 477
Max. Spectre Uv-vis : 315 ; 407 ; 511
1 S K12 2,309 16 795 208 35 1,44 0
2 Cl K12 2,622 16 3286 210 61 1,44 0
3 Fe K12 6,405 16 253 167 24 1,27 0
19,55 7,23 25,14 20,84 622 28,37 0,42 0,315 5,94 4,46 3,75 0,282 0,477
326
Spectre d’absorption par réflexion diffuse et dérivée première: B8-P3
100 0,6
% Ab.
0,4
80
0,2
60 nm
0
350 450 550 650 750
40
-0,2
20 -0,4
-0,6
0
350 450 550 650 750 nm -0,8
Spectre Uv-vis par spectrophotométrie : B8-P3
1.6
1.4
1.2
Absorbance (AU)
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)
Spectre de fluorescence X : B8P3

B8P3
350
300
250
200
cps
150 B8P3
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
-50
min
327

Couleur : Rouge
Nom : Ecarlate Drimarene K 2G
Fabricant : Sandoz
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 619 219 33 2,55 0
2 Cl K12 2,622 16 3143 221 60 2,92 0
21,83 11,76 20,54 24,8 609 45,07 0,469 0,327 4,49 3,13 1,95 0,314 0,491
328
Spectre d’absorption par réflexion diffuse et dérivée première : B8-P4
100 0,2
% Ab.
0,1
80 nm
0
350 450 550 650 750
60 -0,1
-0,2
40
-0,3
20
-0,4
-0,5
0
350 450 550 650 750 nm
-0,6
2.5
2
Absorbance (AU)
1.5
0.5
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)
Spectre de fluorescence X : B8-P4

B8P4
300
250
200
150
cps
B8P4
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
-50
min
329

Couleur : Rouge
Nom : Rouge brillant Drimarene R 4 BL
Fabricant : Sandoz
Bouchon : Plastique
Etat de conservation de l’échantillon : bon
Max. Spectre Uv-vis : 216 ; 287 ; 288 ; 330 ; 517 ; 540
1 S K12 2,309 16 1004 195 37 0,68 0
2 Cl K12 2,622 16 1519 199 44 2,39 0
21,83 11,76 20,54 24,8 609 45,07 0,469 0,327 4,49 3,13 1,95 0,314 0,491
330
100 0,2
% Ab.
0,1
80 nm
0
350 450 550 650 750
60 -0,1
-0,2
40
-0,3
20
-0,4
0 -0,5
350 450 550 650 750 nm
-0,6
1.6
1.4
Absorbance (AU)
1.2
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B8P9
250
200
150
cps
100 B8P9
50
0
0 5 10 15 20 25 30
-50
min
331

Couleur : rouge
Nom : rouge brillant drimarene RBG
Fabricant : Sandoz
C.I. : Réactif ?
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 1170 303 42 1,68 0
2 Cl K12 2,622 16 2095 341 53 1,35 0
3 K K12 3,314 16 6869 221 86 5,91 0
4 Br K12 11,924 16 677 976 51 1,2 0
5 Br L1 1,481 16 27 170 19 1,65 0
29,05 12,46 25,67 31,61 620 44,36 0,479 0,314 7,07 4,64 3,04 0,33 0,487
332
100 0,4
% Ab. spectre lissé B8 P12
0,2
80
nm
0
60 350 450 550 650 750
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0 -0,8
350 450 550 650 750 nm
-1
1.6
1.4
1.2
Absorbance (AU)
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B8P12
600
500
400
300
spc
B8P12
200
100
0
0 5 10 15 20 25 30
-100
min
333

Couleur : Rouge
Nom : Erio floxine 2B conc.
Fabricant : J.R. Geigy S.A. Bale
C.I. : Acide / floxine 2B
Emballage : Flacon de verre
Bouchon : Verre
Max. Spectre Uv-vis : 239 ; 250 ; 313 ; 532
1 S K12 2,309 16 1150 178 39 1,99 0
2 Cl K12 2,622 16 699 175 32 1,21 0
26,7 14,9 24,78 30,58 610 49,61 0,487 0,327 6,46 4,35 2,47 0,327 0,495
334

0,4
100
% Ab. 0,2
80 nm
0
350 450 550 650 750
60 -0,2
-0,4
40
-0,6
20 -0,8
-1
0
350 450 550 650 750 nm
-1,2
1.75
1.5
Absorbance (AU)
1.25
0.75
0.5
0.25
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B17P23
250
200
150
spc
100 B17P23
50
0
0 5 10 15 20 25 30
-50
min
335

Couleur : Rouge
Nom : Rouge Xylene solide 3 BP
Fabricant : Sandoz
C.I. : Acide rouge 3 BP
Bouchon : Verre
Max. Spectre vis (nm) : 443 ; 489 ; 556 ; épaulement à 745
1 S K12 2,309 16 1245 234 41 0,92 0
2 Cl K12 2,622 16 1213 232 41 0,87 0
3 Ca K12 3,692 16 268 73 20 1,46 0
4 Fe K12 6,405 16 495 260 32 1,7 0
5 Pb L1 10,551 16 1666 952 60 1,81 0
6 Pb M1 2,342 16 11 236 22 1,18 0
29,49 18,85 33,54 35 605 50,39 0,481 0,335 11,17 7,79 4,28 0,317 0,498
336
0,4
100
% Ab.
0,2
80 nm
0
350 450 550 650 750
60 -0,2
-0,4
40
-0,6
20
-0,8
0 -1
350 450 550 650 750 nm
3.5
3
Absorbance (AU)
2.5
1.5
0.5
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B18P30
300
250
200
150
spc
B18P30
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
-50
min
337

Couleur : Rouge
Nom : Ecarlate brillant Cibalane RL
Fabricant : Ciba
C.I. : Acide rouge 253
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 786 186 34 1,25 0
2 Cl K12 2,622 16 1549 187 44 1,46 0

3 Fe K12 6,405 16 405 324 32 1,2 0
32,71 16,76 29,63 36,75 613 51,04 0,496 0,322 9,4 6,09 3,45 0,338 0,493
338
0,4
100
% Ab.
0,3
0,2
80
0,1
nm
60 0
350 450 550 650 750
-0,1
40 -0,2
-0,3
20
-0,4
-0,5
0
350 450 550 650 750 nm
-0,6
2.5
Absorbance (AU)
1.5
0.5
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B26P1
350
300
250
200
spc
B26P1
150
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
339

Couleur : Rouge
Nom : Rouge Erionyl RS 140%
Fabricant : Ciba-Geiy
Bouchon : Plastique
Max. Spectre vis (nm) : 465 ; 546 ; épaulement à 661
Min. dérivée (nm) : 626 ; 704
1 S K12 2,309 16 1169 204 40 0,65 0
2 Cl K12 2,622 16 1367 213 42 0,37 0
3 K K12 3,314 16 527 121 28 0,99 0
4 Fe K12 6,405 16 463 247 31 0,82 0
24,84 15,32 23,66 29,18 606 51,55 0,486 0,333 5,84 4 2,17 0,323 0,498
340
0,4
100
% Ab.
0,3
80 0,2
0,1
60 nm
0
350 450 550 650 750
40 -0,1
-0,2
20
-0,3
-0,4
0
350 450 550 650 750 -0,5
nm
2.25
1.75
Absorbance (AU)
1.5
1.25
0.75
0.5
0.25
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B26P16
300
250
200
spc
150 B26P16
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
341

Couleur : Rouge
Nom : Rouge Erionyl RS 140%
Fabricant : Ciba-Geigy
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 1108 212 39 0,72 0
2 Cl K12 2,622 16 1465 214 44 2,35 0
3 K K12 3,314 16 484 101 26 0,94 0
24,27 13,53 21,68 27,79 609 49,23 0,484 0,327 5,06 3,43 1,98 0,325 0,494
342
0,4
100 0,3
% Ab.
0,2
80
0,1
nm
60 0
350 450 550 650 750
-0,1
40
-0,2
-0,3
20
-0,4
0
-0,5
350 450 550 650 750 nm
-0,6
2.5
Absorbance (AU)
1.5
0.5
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B26P18
300
250
200
spc
150 B26P18
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
343

Couleur : Rouge
Nom : Rouge Xylene sol P
Fabricant : Sandoz
Emballage : Pot de métal
Bouchon : Métal
1 S K12 2,309 16 934 162 35 1,95 0
2 Cl K12 2,622 16 229 168 24 1,33 0
3 Ca K12 3,692 16 164 88 18 0,8 0
4 Fe K12 6,405 16 1153 399 44 0,64 0
25,85 12,69 28,2 28,8 612 41,4 0,46 0,323 7,88 5,53 3,72 0,309 0,488
344

0,4
100
% Ab. spectre lissé B27 P24
0,2
80
nm
0
60 350 450 550 650 750
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0
350 450 550 650 750 nm
-0,8
2.5
2
Absorbance (AU)
1.5
0.5
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B27P24
350
300
250
200
spc
B27P24
150
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
345

Couleur : Rouge
Nom : Drimarene reactif rouge 2B
Fabricant : Sandoz
Bouchon : Plastique
Max. Spectre vis (nm) : 438 ; 505 ; 553
1 S K12 2,309 16 1232 160 39 1,58 0
2 Cl K12 2,622 16 1289 171 40 3,18 0
3 Ca K12 3,692 16 96 63 15 1,12 0
4 Fe K12 6,405 16 251 242 27 2,2 0
5 Cu K12 8,046 16 206 506 35 1,93 0
6 Zn K12 8,637 16 216 636 39 1,33 0
36,63 15,17 28,45 39,65 626 50,17 0,507 0,308 9,25 5,63 3,37 0,357 0,488
346
100 0,4
% Ab.
0,2
80 nm
0
350 450 550 650 750
60 -0,2
-0,4
40
-0,6
-0,8
20
-1
0 -1,2
350 450 550 650 750 nm
-1,4
1.4
1.2
Absorbance (AU)
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B34P4
250
200
150
spc
B34P4
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
347

Couleur : Rouge
Nom : Rouge Drimarene F 2 GL
Fabricant : Sandoz
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 835 241 36 0,86 0
2 Cl K12 2,622 16 2079 235 50 3,11 0
3 Ca K12 3,692 16 107 52 15 1,39 0
4 Fe K12 6,405 16 171 287 27 1,58 0
39,72 30,15 33,78 49,87 606 70,56 0,551 0,341 12,8 7,9 2,51 0,369 0,512
348
100 0,4
% Ab.
80 0,2
nm
0
60
350 450 550 650 750
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0
350 450 550 650 750 nm -0,8
2.5
2
Absorbance (AU)
1.5
0.5
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)
B34P5
300
250
200
spc
150 B34P5
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
349

Couleur : Rouge
Nom : Ecarlate Drimarene R 3G
Fabricant : Sandoz
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 618 216 32 1,63 0
2 Cl K12 2,622 16 2912 219 58 4,84 0
3 K K12 3,314 16 184 73 18 1,52 0
25,62 8,78 39,01 27,09 626 26,63 0,415 0,313 14,11 10,66 9,25 0,28 0,476
350
0,4
100
% Ab.
0,2
nm
80 0
350 450 550 650 750
60 -0,2
-0,4
40
-0,6
20
-0,8
0
350 450 550 650 750 nm -1
1.2
1
Absorbance (AU)
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B35P9
300
250
200
spc
150 B35P9
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
351

Couleur : Rouge
Nom : Ecarlate Drimarene R 3G
Fabricant : Sandoz
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 482 188 29 1,32 0
2 Cl K12 2,622 16 3379 200 61 4,42 0
3 K K12 3,314 16 134 93 18 1,03 0
23,65 7,39 37,18 24,78 633 24,08 0,407 0,312 12,59 9,64 8,7 0,275 0,473
352
0,4
100
% Ab.
0,2
80
nm
0
60 350 450 550 650 750
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0
350 450 550 650 750 nm
-0,8
1.8
1.6
1.4
Absorbance (AU)
1.2
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B35P10
350
300
250
200
spc
B35P10
150
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
353

Couleur : Rouge
Nom : Rouge brillant Drimarene K BL
Fabricant : Sandoz
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 1094 190 38 0,96 0
2 Cl K12 2,622 16 1688 189 45 2,35 0
3 Fe K12 6,405 16 131 289 27 1,45 0
4 Br K12 11,924 16 571 1244 55 3,56 0
5 Br L1 1,481 16 26 133 17 2,03 0
27,17 5,32 28,49 27,68 493 -42,15 0,428 0,296 8,17 5,64 5,28 0,301 0,467
354
0,4
100
% Ab. 0,2
nm
80 0
350 450 550 650 750
-0,2
60
-0,4
40 -0,6
-0,8
20
-1
-1,2
0
350 450 550 650 750 nm -1,4
3.5
3
Absorbance (AU)
2.5
1.5
0.5
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B35P11
300
250
200
spc
150 B35P11
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
355

Couleur : Rouge
Nom : Rouge brillant Drimarene K 4 BL
Fabricant : Sandoz
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 945 181 36 1,72 0
2 Cl K12 2,622 16 1918 183 48 3,27 0
24,11 7,34 20,64 25,2 649 34,26 0,453 0,304 4,7 3,15 2,53 0,315 0,476
356

0,4
100
% Ab.
0,2
80
nm
0
350 450 550 650 750
60
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0 -0,8
350 450 550 650 750
nm
2.5
Absorbance (AU)
1.5
0.5
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B35P12
200
180
160
140
120
spc
100 B35P12
80
60
40
20
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
357

Couleur : Rouge
Nom : Rouge Drimarene R 4 BL et K BL
Fabricant : Sandoz
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 726 176 33 2,81 0
2 Cl K12 2,622 16 2572 186 54 5,71 0
23,4 10,87 22,04 25,8 615 41,65 0,464 0,32 5,12 3,53 2,38 0,314 0,487
358
0,4
100
% Ab.
0,2
80
nm
0
350 450 550 650 750
60
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0
-0,8
350 450 550 650 750 nm
1.75
1.5
Absorbance (AU)
1.25
0.75
0.5
0.25
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)
B35P13
300
250
200
spc
150 B35P13
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
359

Couleur : Rouge
Nom : Rouge brillant Drimarene R 2 GL
Fabricant : Sandoz
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 1088 202 39 1,24 0
2 Cl K12 2,622 16 1809 214 47 1,97 0

3 Ca K12 3,692 16 580 79 27 1,27 0
38,51 16,3 25,86 41,82 629 55,54 0,53 0,305 8,17 4,7 2,53 0,379 0,49
360
0,4
100
% Ab.
0,2
80
nm
0
350 450 550 650 750
60
-0,2
40 -0,4
-0,6
20
-0,8
0
350 450 550 650 750 nm -1
2.5
Absorbance (AU)
1.5
0.5
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B35P15
250
200
150
spc
B35P15
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
361

Couleur : Rouge
Nom : Rouge Nylosane E BL
Fabricant : Sandoz
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 1476 145 42 1,34 0
2 Cl K12 2,622 16 190 138 22 1,04 0
3 Fe K12 6,405 16 534 236 32 6,27 0
26,15 7,46 23,59 27,2 677 33,13 0,45 0,302 5,93 3,98 3,26 0,315 0,475
362
0,4
100 0,3
% Ab.
0,2
80
0,1
nm
0
60 350 450 550 650 750
-0,1
40 -0,2
-0,3
20 -0,4
-0,5
0
-0,6
350 450 550 650 750 nm
2.5
Absorbance (AU)
1.5
0.5
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B35P26
300
250
200
spc
150 B35P26
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
363

Couleur : Rouge
Nom : Rouge Nylosane E BL
Fabricant : Sandoz
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 1603 147 44 1,65 0
2 Cl K12 2,622 16 188 146 22 3,21 0
3 Fe K12 6,405 16 320 283 30 3,67 0
24,85 6,93 24,5 25,8 678 30,57 0,44 0,303 6,17 4,25 3,61 0,305 0,474
364
0,4
100 0,3
% Ab.
0,2
80
0,1
nm
0
60 350 450 550 650 750
-0,1
40 -0,2
-0,3
20 -0,4
-0,5
0
-0,6
350 450 550 650 750 nm
2.5
2
Absorbance (AU)
1.5
0.5
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B35P27
300
250
200
spc
150 B35P27
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
365

Couleur : Rouge
Nom : Rouge Nylosane F RS 140%
Fabricant : Sandoz
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 1247 208 41 1,82 0
2 Cl K12 2,622 16 1510 219 44 1,08 0
3 K K12 3,314 16 617 132 30 0,73 0
4 Fe K12 6,405 16 219 263 27 1,23 0
5 Cu K12 8,046 16 203 526 35 2,01 0
23,45 12,98 23,29 26,81 609 45,56 0,471 0,328 5,58 3,89 2,38 0,314 0,492
366
0,4
100
% Ab.
0,2
80
nm
0
60 350 450 550 650 750
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0
350 450 550 650 750 nm
-0,8
2.5
Absorbance (AU)
1.5
0.5
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)
B35P28
300
250
200
150 B35P28
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
367

Couleur : Rouge
Nom : Rouge Nylosane F RS 140%
Fabricant : Sandoz
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 1040 196 38 1,81 0
2 Cl K12 2,622 16 1550 211 44 3,04 0
3 K K12 3,314 16 1537 130 42 2,68 0
26,41 13,11 24,65 29,48 613 45,78 0,477 0,322 6,38 4,3 2,69 0,323 0,49
368

0,4
100
% Ab.
0,2
80
nm
0
60 350 450 550 650 750
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0
350 450 550 650 750
nm -0,8
1.75
1.5
Absorbance (AU)
1.25
0.75
0.5
0.25
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B36P22
250
200
150
spc
B36P22
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
369

Couleur : Rouge
Nom : Rouge Nylosane E-BL
Fabricant : Sandoz
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 1495 132 42 1,11 0
2 Cl K12 2,622 16 148 136 21 1,61 0
3 Fe K12 6,405 16 377 223 29 2,26 0
22,65 5,89 20,02 23,4 493 -46,59 0,44 0,301 4,38 2,99 2,58 0,307 0,472
370

0,4
100
0,3
% Ab.
0,2
80
0,1
nm
60 0
350 450 550 650 750
-0,1
40
-0,2
20 -0,3
-0,4
0
350 450 550 650 750 -0,5
nm
0.8
Absorbance (AU)
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B36P27
300
250
200
spc
150 B36P27
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
371

Couleur : Rouge
Nom : Rouge Tectilon 2B KWL
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 873 113 33 1,27 0
2 Ca K12 3,692 16 135 65 16 1,71 0
3 Fe K12 6,405 16 600 318 35 1,12 0
4 Pb L1 10,551 16 673 1186 55 1,71 0
5 Pb M1 2,342 16 66 113 17 1,33 0
21,02 4,67 18,32 21,53 493 -43,56 0,432 0,298 3,75 2,59 2,35 0,302 0,469
372
0,4
100
% Ab. 0,3
80 0,2
0,1
nm
60 0
350 450 550 650 750
-0,1
40
-0,2
-0,3
20
-0,4
-0,5
0
350 450 550 650 750 nm -0,6
1.4
1.2
1
Absorbance (AU)
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B36P31
300
250
200
spc
150 B36P31
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
373

Couleur : Rouge
Nom : Lanasol rouge G
Bouchon : Plastique
Max. Spectre vis (nm) : 501 ; épaulement à 698
1 S K12 2,309 16 627 775 47 0,72 0
2 Cl K12 2,622 16 1361 782 54 2,32 0
3 Br K12 11,924 16 498591 4719 713 351,43 0
4 Br L1 1,481 16 59 831 41 1,1 0
26,54 7,14 21,13 27,48 493 -53,44 0,459 0,298 5,06 3,28 2,67 0,325 0,474
374

0,4
100
% Ab.
0,2
80
nm
0
350 450 550 650 750
60
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0 -0,8
350 450 550 650 750
nm
1.2
1
Absorbance (AU)
0.8
0.6
0.4 B36P32
0.2
1000
0
900 200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)
800
700
600
spc
500 B36P32
400
300
200
100
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
375

Couleur : Rouge
Nom : Ecarlate Leonyl G
Fabricant : Ciba
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 1104 197 39 1,26 0
2 Cl K12 2,622 16 1698 210 46 5,17 0
3 K K12 3,314 16 396 94 24 1,67 0
4 Zn K12 8,637 16 842 565 44 2,02 0
37,54 21,14 29,89 43,08 613 60,08 0,529 0,323 10,15 6,19 2,83 0,364 0,5
376

0,4
100
% Ab.
0,2
80 nm
0
350 450 550 650 750
60
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0
350 450 550 650 750 nm -0,8
1.2
1
Absorbance (AU)
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)
B37P7
250
200
150
spc
B37P7
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
377

Couleur : Rouge
Nom : Rouge brillant Cibacrone
Fabricant : Ciba
Bouchon : Plastique
Max. Spectre Uv-vis : 240 ; 295 ; 332 ; 277 ; 513
1 S K12 2,309 16 1145 231 40 2,76 0
2 Cl K12 2,622 16 1785 226 47 3,44 0
36,9 17,21 30,81 40,71 619 51,87 0,507 0,315 10,58 6,57 3,72 0,352 0,492
378
100 0,4
% Ab. 0,2
nm
80 0
350 450 550 650 750
-0,2
60 -0,4
-0,6
40
-0,8
-1
20
-1,2
-1,4
0
350 450 550 650 750 -1,6
nm
1.2
1
Absorbance (AU)
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B37P8
250
200
150
spc
B37P8
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
379

Couleur : Rouge
Nom : Rouge brillant Cibacrone B-D
Fabricant : Ciba
Bouchon : Plastique
Max. Spectre Uv-vis : 243 ; 289 ; 372 ; 519 ; 539
1 S K12 2,309 16 1125 219 40 2,52 0
2 Cl K12 2,622 16 1925 209 48 3,39 0
28,07 10,54 19,77 29,99 632 45,28 0,492 0,306 4,71 2,93 1,94 0,346 0,484
380
0,4
100
% Ab.
spectre lissé 0,2
80 nm
0
350 450 550 650 750
60
-0,2
40 -0,4
-0,6
20
-0,8
0
350 450 550 650 750
nm -1
1.75
1.5
Absorbance (AU)
1.25
0.75
0.5
0.25
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B37P9
300
250
200
spc
150 B37P9
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
381

Couleur : Rouge
Nom : Rouge Tectilon 3B
Fabricant : ciba
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 1489 133 42 0,94 0
2 Cl K12 2,622 16 179 129 21 0,97 0
3 Ca K12 3,692 16 101 61 15 1,83 0
4 Fe K12 6,405 16 868 257 37 1,22 0
5 Zn K12 8,637 16 537 672 43 0,92 0
32,06 12,13 28,81 34,28 628 42,02 0,476 0,309 8,89 5,76 4,01 0,331 0,483
382

0,4
%
100
0,2
80
0
60 350 450 550 650 750
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0
350 450 550 650 750 nm
-0,8 nm
1.2
1
Absorbance (AU)
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B37P10
250
200
150
spc
B37P10
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
383

Couleur : Rouge
Nom : Ecarlate Lanasol 2G
Fabricant : Ciba
Pays du fabricant :
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 606 577 42 0,59 0
2 Cl K12 2,622 16 1049 560 47 1,54 0
3 Fe K12 6,405 16 207 636 38 2,2 0
4 Br K12 11,924 16 307443 3175 560 74,21 0
5 Br L1 1,481 16 12 596 35 1,74 0
30,77 18,31 27,23 35,81 609 55,73 0,507 0,329 7,96 5,17 2,58 0,341 0,499
384
100 0,4
%
0,3
80 0,2
0,1
60
0
350 450 550 650 750
-0,1
40
-0,2
-0,3
20
-0,4
-0,5
0
350 450 550 650 750 nm -0,6 nm
0.8
Absorbance (AU)
0.6
0.4
0.2
0
B37P11
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)
1000
900
800
700
600
spc
500 B37P11
400
300
200
100
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
385

Couleur : Rouge
Nom : Rouge Lanasol G
Fabricant : Ciba
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 557 743 45 0,89 0
2 Cl K12 2,622 16 1623 764 56 3,17 0
3 Br K12 11,924 16 454147 4070 680 107,89 0
4 Br L1 1,481 16 18 746 39 0,37 0
26,12 6,57 20,51 26,93 493 -52,51 0,457 0,296 4,81 3,12 2,6 0,324 0,473
386
100 0,4
%
80 0,2
nm
0
60
350 450 550 650 750
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0
350 450 550 650 750 nm
-0,8
1.4
1.2
1
Absorbance (AU)
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B37P12
1000
900
800
700
600
spc
500 B37P12
400
300
200
100
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
387

Couleur : Rouge
Nom : Rouge brillant Cibacrone 2B-E
Fabricant : Ciba
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 703 179 33 1,28 0
2 Cl K12 2,622 16 3432 197 62 2,06 0
3 Cu K12 8,046 16 185 419 32 1,78 0
4 Br K12 11,924 16 1335 1015 58 1,34 0
5 Br L1 1,481 16 14 136 17 1,46 0
26,41 7,08 20,43 27,34 493 -54,15 0,461 0,297 4,8 3,1 2,51 0,327 0,474
388
0,4
100
%
0,2
80
nm
0
60 350 450 550 650 750
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0
350 450 550 650 750 nm
-0,8
1.4
1.2
Absorbance (AU)
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B37P17
400
350
300
250
spc
200 B37P17
150
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
389

Couleur : Rouge
Nom : Ecarlate Cibacrone 2G-E
Fabricant : Ciba
Bouchon : Plastique
1 S K12 2,309 16 1036 198 38 1,42 0

2 Cl K12 2,622 16 1687 213 46 1,81 0
3 Fe K12 6,405 16 136 270 26 0,55 0
18,84 9,53 19,7 21,11 610 38,47 0,447 0,325 4,01 2,92 2,04 0,298 0,487
390
0,4
100
%
0,3
80
0,2
0,1
60
nm
0
40 350 450 550 650 750
-0,1
20 -0,2
-0,3
0
350 450 550 650 750 nm
-0,4
1.6
1.4
Absorbance (AU)
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B37P18
300
250
200
spc
150 B37P18
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
391

Couleur : Rouge
Nom : Ecarlate Direct BS
Fabricant : Ciba
C.I. : Direct rouge 37
Bouchon : Métal
1 S K12 2,309 16 1034 164 37 0,94 0
2 Cl K12 2,622 16 403 163 27 1,14 0
3 K K12 3,314 16 97 102 17 1,53 0
4 Ca K12 3,692 16 169 94 19 2,02 0
5 Fe K12 6,405 16 951 310 40 0,68 0
6 Cu K12 8,046 16 185 419 32 1,78 0
7 Pb L1 10,551 16 379 1071 50 2,33 0
8 Pb M1 2,342 16 17 164 19 0,94 0
32,74 18,69 28,98 37,7 610 55,47 0,508 0,327 9,06 5,83 2,96 0,344 0,498
392
100 0,4
%
0,2
80
nm
0
350 450 550 650 750
60
-0,2
40 -0,4
-0,6
20
-0,8
0
350 450 550 650 750 nm
-1
1.6
1.4
1.2
Absorbance (AU)
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)
B37P20
250
200
150
spc
B37P20
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
393
Couleur : Rouge
Nom : Ecarlate Direct 3 BS
Fabricant : Ciba
Bouchon : Métal
1 S K12 2,309 16 1034 164 37 0,94 0
2 Cl K12 2,622 16 403 163 27 1,14 0
3 K K12 3,314 16 97 102 17 1,53 0
4 Ca K12 3,692 16 169 94 19 2,02 0
5 Fe K12 6,405 16 951 310 40 0,68 0
6 Zn K12 8,637 16 669 749 47 1,27 0
7 Br K12 11,924 16 142 1316 53 1,33 0
8 Br L1 1,481 16 10 115 15 0,95 0
9 Pb L1 10,551 16 379 1071 50 2,33 0
10 Pb M1 2,342 16 17 164 19 0,94 0
22,8 14,8 25,64 27,18 604 47,3 0,468 0,336 6,44 4,63 2,69 0,307 0,496
394
0,4
100
%
0,2
80
nm
0
60 350 450 550 650 750
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0
350 450 550 650 750 nm
-0,8

1.4
1.2
1
Absorbance (AU)
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B37P21
300
250
200
spc
150 B37P21
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
395

Couleur : Rouge
Fabricant : Ciba
Bouchon : Métal
1 S K12 2,309 16 1271 183 40 1,67 0
2 Cl K12 2,622 16 655 191 32 0,95 0
3 K K12 3,314 16 185 113 20 0,69 0
4 Ca K12 3,692 16 219 107 21 0,84 0
5 Fe K12 6,405 16 6462 346 85 4,64 0
6 Zn K12 8,637 16 290 756 42 2,29 0
7 Br K12 11,924 16 150 1402 54 1,51 0
8 Br L1 1,481 16 8 128 16 2,65 0
9 Pb L1 10,551 16 273 1180 51 1,26 0
10 Pb M1 2,342 16 7 185 19 2,01 0
22,1 12,77 24,22 25,52 607 43,59 0,461 0,331 5,81 4,17 2,63 0,305 0,492
396

0,4
100
%
0,2
80
nm
0
60 350 450 550 650 750
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0
350 450 550 650 750 nm
-0,8
1.6
1.4
Absorbance (AU)
1.2
0.8
0.6
0.4
0.2
0
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B37P22
300
250
200
spc
150 B37P22
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
397

Couleur : Rouge
Fabricant : Ciba
Bouchon : Métal
1 S K12 2,309 16 1136 179 39 0,89 0
2 Cl K12 2,622 16 604 176 31 1,98 0
3 K K12 3,314 16 162 76 18 0,81 0
4 Ca K12 3,692 16 282 88 21 2,29 0
5 Fe K12 6,405 16 1088 310 41 3,83 0
6 Zn K12 8,637 16 1621 857 58 4,57 0
7 Br K12 11,924 16 546 1405 58 1,68 0
8 Br L1 1,481 16 10 125 16 2,39 0
9 Pb L1 10,551 16 384 1228 53 2,99 0
10 Pb M1 2,342 16 20 180 20 0,89 0
23,99 13,14 23,61 27,35 609 46 0,472 0,327 5,75 3,98 2,44 0,316 0,492
398
0,4
100
%
0,2
80
nm
0
60 350 450 550 650 750
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0
350 450 550 650 750 nm -0,8
1.4
1.2
1
Absorbance (AU)
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B37P23
300
250
200
spc
150 B37P23
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
399

Couleur : Rouge
Fabricant : Ciba
Bouchon : Métal
1 S K12 2,309 16 919 148 35 2,72 0
2 Cl K12 2,622 16 461 152 28 0,9 0
3 K K12 3,314 16 140 93 18 0,65 0
4 Ca K12 3,692 16 175 85 19 0,59 0
5 Fe K12 6,405 16 2672 265 57 3,69 0
6 Zn K12 8,637 16 318 647 40 1,81 0
7 Br K12 8,046 16 114 522 34 1,28 0
8 Br L1 1,481 16 10 125 16 2,39 0
9 Pb L1 10,551 16 303 1048 49 2,35 0
10 Pb M1 2,342 16 0 149 17 2,12 0
21,94 12,26 24,32 25,13 607 42,55 0,457 0,329 5,84 4,2 2,73 0,303 0,491
400
0,4
100
%
0,2
80
nm
0
60
350 450 550 650 750
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0
350 450 550 650 750 nm
-0,8
1.4
1.2
1
Absorbance (AU)
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B37P24
300
250
200
spc
150 B37P24
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
401

Couleur : Rouge
Fabricant : Ciba
Bouchon : Métal
1 S K12 2,309 16 928 156 35 1,02 0
2 Cl K12 2,622 16 359 152 26 0,72 0
3 K K12 3,314 16 96 83 16 0,84 0
4 Ca K12 3,692 16 274 82 21 0,3 0
5 Fe K12 6,405 16 1020 261 39 2,44 0
6 Zn K12 8,637 16 1400 731 54 2,46 0
7 Br K12 8,046 16 143 551 35 1,43 0
8 Br L1 1,481 16 10 125 16 2,39 0
9 Pb L1 10,551 16 325 971 48 1,56 0
10 Pb M1 2,342 16 20 156 18 1,01 0
402
22,1 12,77 24,22 25,52 607 43,59 0,461 0,331 5,81 4,17 2,63 0,305 0,492
0,4
100
%
0,2
80
nm
0
60 350 450 550 650 750
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0
350 450 550 650 750 nm -0,8
1.2
1
Absorbance (AU)
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B37P25
250
200
150
spc
B37P25
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
403

Couleur : Rouge
Fabricant : Ciba
Bouchon : Métal
1 S K12 2,309 16 1111 168 38 1,39 0
2 Cl K12 2,622 16 535 173 30 2,02 0
3 K K12 3,314 16 179 98 19 2,67 0
4 Ca K12 3,692 16 306 89 22 1,07 0
5 Fe K12 6,405 16 1327 318 44 1,31 0
6 Zn K12 8,637 16 1286 808 54 2,47 0
7 Br K12 8,046 16 165 638 38 0,64 0
8 Br L1 1,481 16 10 125 16 2,39 0
9 Pb L1 10,551 16 397 1090 51 3,66 0
10 Pb M1 2,342 16 0 170 18 0,87 0
404
22,1 12,77 24,22 25,52 607 43,59 0,461 0,331 5,81 4,17 2,63 0,305 0,492

0,4
100
% 0,2
80 nm
0
350 450 550 650 750
60
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0
350 450 550 650 750 nm
-0,8
1.4
1.2
1
Absorbance (AU)
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B37P26
300
250
200
spc
150 B37P26
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
405

Couleur : Rouge
Fabricant : Ciba
Bouchon : Métal
1 S K12 2,309 16 1082 143 37 1,15 0
2 Cl K12 2,622 16 532 151 29 1,94 0
3 K K12 3,314 16 148 87 18 1,23 0
4 Ca K12 3,692 16 139 83 17 0,81 0
5 Fe K12 6,405 16 2572 293 56 2,08 0
6 Zn K12 8,637 16 145 752 41 0,46 0
7 Br K12 8,046 16 54 583 35 1,01 0
8 Br L1 1,481 16 10 125 16 2,39 0
9 Pb L1 10,551 16 356 1107 51 2,82 0
10 Pb M1 2,342 16 26 145 18 1,15 0
406
22,11 11,52 23,47 24,93 610 41,34 0,457 0,326 5,53 3,94 2,62 0,305 0,489
0,4
100
%
0,2
80
nm
0
60 350 450 550 650 750
-0,2
40
-0,4
20
-0,6
0
350 450 550 650 750 nm -0,8
1.75
Absorbance (AU)
1.5
1.25
1
0.75
0.5
0.25
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)
B37P27
300
250
200
spc
150 B37P27
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
407

Couleur : Rouge
Fabricant : Ciba
Bouchon : Métal
1 S K12 2,309 16 1008 159 36 1,67 0
2 Cl K12 2,622 16 579 165 30 0,51 0
3 K K12 3,314 16 103 111 18 0,98 0
4 Ca K12 3,692 16 168 106 20 1,42 0
5 Fe K12 6,405 16 1069 269 40 1,73 0
6 Zn K12 8,637 16 701 792 48 0,81 0
7 Br K12 8,046 16 289 606 39 1,44 0
8 Br L1 1,481 16 10 125 16 2,39 0
9 Pb L1 10,551 16 293 1125 50 1,83 0
10 Pb M1 2,342 16 29 161 19 1,72 0
408
21,76 14,82 29,52 26,33 602 43,36 0,452 0,339 8,06 6,04 3,75 0,293 0,495

0,4
100
%
0,2
80
nm
0
350 450 550 650 750
60
-0,2
40
-0,4
20 -0,6
0 -0,8
350 450 550 650 750 nm
-1
1.4
1.2
Absorbance (AU)
0.8
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B37P28
250
200
150
spc
B37P28
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
409

Couleur : Rouge
Fabricant : Ciba
Bouchon : Métal
1 S K12 2,309 16 1062 168 37 0,65 0
2 Cl K12 2,622 16 542 170 30 3 0
3 K K12 3,314 16 84 113 18 0,81 0
4 Ca K12 3,692 16 149 109 19 0,98 0
5 Fe K12 6,405 16 951 286 39 1,92 0
6 Zn K12 8,637 16 722 759 47 1,7 0
7 Br K12 8,046 16 141 564 36 1,64 0
8 Br L1 1,481 16 10 125 16 2,39 0
9 Pb L1 10,551 16 216 1066 48 2,59 0
10 Pb M1 2,342 16 1 169 18 0,59 0
410
23,75 14,8 27,66 27,98 605 45,6 0,464 0,334 7,41 5,33 3,21 0,305 0,495
0,4
100
%
0,2
80 nm
0
350 450 550 650 750
60
-0,2
40 -0,4
-0,6
20
-0,8
0
350 450 550 650 750 nm -1
0.8
Absorbance (AU)
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)

B37P29
300
250
200
spc
150 B37P29
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV 411

Couleur : Rouge
Nom : Rouge aquamine B SL
Fabricant : Sandoz
Bouchon : Verre
1 S K12 2,309 16 1453 187 43 1,82 0
2 Cl K12 2,622 16 406 176 28 1,41 0
3 Fe K12 6,405 16 1100 259 40 2,34 0
4 Cu K12 8,046 16 342 453 35 2,65 0
5 Br K12 11,924 16 105 1339 53 1,35 0
6 Br L1 1,481 16 16 137 17 1,5 0
7 Pb L1 10,551 16 683 1087 53 1,98 0
8 Pb M1 2,342 16 50 187 21 1,96 0
412
32,08 13,27 26,19 34,72 624 46,76 0,492 0,311 7,62 4,81 3,05 0,343 0,487
100
0,4
%
80 0,2
nm
0
60 350 450 550 650 750
-0,2
40
-0,4
20 -0,6
-0,8
0
350 450 550 650 750 nm -1
0.8
Absorbance (AU)
0.6
0.4
0.2
200 300 400 500 600 700 800 900 Wavelength (nm)
B37P42
300
250
200
spc
150 B37P42
100
50
0
0 5 10 15 20 25 30
keV
413
Tesis doctoral A. López Montes Capítulo B.
414
Apéndice C
MS and MS2 spectra of synthetic

dyes in colour photographs
2
MS and MS spectra of the cationic and anionic synthetic dyes. Abreviations
can be found in the text (section 1.4.2.1). Charge is marked in parenthesis.
415
416
417
418
419
420
421
422
423
424
425
426
Nomenclatura
AG Auramina G - Auramine G
AO Auramina O - Auramine O
BB Azul Basonyl - Basonyl Blue
BG verde brillante - Brillant green
C.I. Colour Index
CE Electroforesis capilar
CG Crisoidina G - Chrysoidine G
CGE Electroforesis capilar en gel
CH Crisofenina - Chrysophenine
CICN Colour Index Constitution Number
CIEF Isoelectroenfoque capilar
CIGN Colour Index Generic Name
CITP Isotacoforesis capilar
CV Viioleta cristal - Crystal violet
CZE Electroforesis capilar en zona
DII diidouoresceina - Diiodouorescein
427
EB Eosina B - Eosin B
EDX Energía dispersiva de rayos X
ERB Eritrosina B - Erythrosine B
ERB2 Eritrosina B:2 - Erythrosine B:2
ESI-MS Detector de masas con ionización electrospray
ESI-MS Detector de masas con ionización por electronebulizador
EV Violeta de etilo - Ethyl violet
EY Eosina Y - Eosin Y
FB Azul 819 Flexo - Flexo Blue 810
FEO Flujo electroosmótico
FRX Fluorescencia de rayos X
FTIR espectrometría infrarroja por transformada de Fourier
HPLC Cromatografía líquida de alta resolución
IR Espectrometría infrarroja
MB Azul de methyleno - Methylene blue
PBV Azul patente V - Patent Blue V
PBVF Azul patente VF - PatentBblue VF
PDA detector de diodos en línea
RB Rojo Bengal - Rose Bengal
RH6G Rodamina 6G - Rhodamine 6G
RHB Rodamina B - Rhodamine B
SEM Microscopía electrónica de barrido
428
TLC Cromatografía en capa na
TT Tioavina T - Thioavin T
UV Ultravioleta
VBB Azul Victoria B - Victoria Blue B
VBR Azul Victoria R - Victoria blue R
XRD Difracción de rayos X
429

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Optimización de técnicas

espectrométricas y separativas para la

Memoria presentada para optar al Grado de

Ana Mª López Montes

Directores de Tesis Doctoral:

Dra. María del Rosario Blanc García

Dra. Teresa Espejo Arias

Dra. Anne-Laurence Dupont

Dña. Mª Rosario Blanc García, Profesora Titular del Departamento

Y para que conste, expido y rmo el presente certicado en Granada el 3 de

Debo comenzar agradeciendo a mis directoras, las doctoras Rosario Blanc,

Gracias también al director del Archivo de la Real Chancillería de Granada,

Gracias también a toda mi familia, que me ha apoyado de manera directa e

A la memoria de mi padre, quien se convirtió de nuevo en polvo de estrellas en

A quienes me roban y me dan mis mejores sueños: León y Simón

I El material colorante y las técnicas de análisis 43

1.4.2. Colorants sintéticos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 72

II Identicación y caracterización de materiales 115

2.2.4.3. Cromatografía líquida de alta ecacia . . . . . . . 125

2.3. Resultados y discusión . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 126

2.3.1. Rojo de Rubia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 126

2.3.2. Amarillo de azafrán . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 129

2.3.3. Azul de índigo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 131

2.3.4. Rojo de carmín . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 135

2.3.5. Amarillo de goma guta . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 138

2.4. Conclusiones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 141

3. Identicación simultánea de colorantes rojos naturales y goma

3.2. Materiales y métodos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 151

3.2.1. Materiales, reactivos y disolventes . . . . . . . . . . . . . . 151

3.2.2. Instrumentación y programas informáticos . . . . . . . . . 152

3.2.3. Preparación de las muestras . . . . . . . . . . . . . . . . . . 153

3.2.3.1. Sustancias de referencia . . . . . . . . . . . . . . 153

3.2.3.2. Muestra de laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . 153

3.2.3.3. Toma y tratamiento de las muestras de pergaminos 154

3.3. Metodología analítica empleada . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 154

3.3.1. Espectrofotometría UV-vis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 154

3.3.2. Electroforesis capilar . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 155

3.4. Resultados y discusión . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 155

3.4.1. Espectrofotometría UV-vis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 155

3.4.2. Optimización del método electroforético . . . . . . . . . . . 156

3.4.2.1. Optimización de las variables experimentales . . . 157

3.4.2.2. Optimización de las variables instrumentales . . . 164

3.4.3. Aplicación del método . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 169

3.4.3.1. Muestra de laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . 170

3.4.3.2. Muestra de la colección de pergaminos . . . . . . 170

3.5. Conclusiones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 177

4. Les colorants rouges (XIXe et XXe) de la collection provenant

4.3.3. Constitution chimique . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 212

5. Identication of synthetic dyes in early colour photographs using

5.2.3.3. ESI-ITMS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 225

5.3. Results and discussion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 226

5.3.1. UVvis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 226

5.3.2. Optimisation of the CE-PDA method . . . . . . . . . . . . 228

5.3.2.1. Electrolyte . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 228

5.3.2.2. Instrumental parameters . . . . . . . . . . . . . . 232

5.3.3. Optimisation of the CE-ESI-MS methodology . . . . . . . 233

5.3.3.1. CE-ESI-MS(+) for cationic dyes . . . . . . . . . . 236

5.3.3.2. CE-ESI-MS( =) for anionic dyes . . . . . . . . . . 243

5.3.4. Identication of the dyes in the lmcolor photograph . . . 244

Y para que conste, expido y rmo el presente certicado en Granada el 3 de

II Identicación y caracterización de materiales 115

2.2.4.3. Cromatografía líquida de alta ecacia . . . . . . . 125

3. Identicación simultánea de colorantes rojos naturales y goma

5. Identication of synthetic dyes in early colour photographs using

5.3.1. UVvis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 226

5.3.4. Identication of the dyes in the lmcolor photograph . . . 244

1.23. Representación gráca del espacio Lab*. . . . . . . . . . . . . . . 85

1.26. Esquema básico de un equipo de absorción por reexión difusa. . . 90

1.27. Ejemplo de representación gráca de un espectro de absorción por

1.29. Esquema descriptivo de la fuente de espectrometría de uorescencia

1.30. Espectro de uorescencia de rayos X. . . . . . . . . . . . . . . . . 94

1.31. Esquema del proceso de elución cromatográca. . . . . . . . . . . . 97

1.32. Esquema básico de un equipo de cromatografía líquida de alta ecacia. 97

nm. Identicación de los picos: (1) ácido glucurónico; (2) Ramnosa;

3.6. Electroferogramas de mezcla patrón para el estudio del modicador

nm. Identicación de los picos: (1) ácido glucurónico; (2) ramnosa;

4.15. Spectres d'absorption par réexion diuse des colorants du groupe

5.2. Electropherograms obtained with a mixture of two cationic dyes

5.3. Optimisation of the running buer: nature of the organic solvent