Cromatografía de Gases

En la cromatografía de gases un soluto gaseoso (o el vapor de un líquido volátil) es transportado por

una fase móvil gaseosa. L a fase estacionaria puede ser un líquido no volátil (GL C) o un soporte sólido de grano
fino (GSC) adsorbente. El esquema de un cromatógrafo de gases se muestra en la figura 1 0 .

Figura 1 0 . Esquema de un cromatógrafo de gases.

En el cromatógrafo de gases una muestra de líquido volátil se inyecta a través de un septum de goma
a un horno de inyección caliente, donde la muestra se vaporiza. El volumen típico de muestra es de 0 .1 -1 0 µL

. Si la muestra es gaseosa, 0 .5 a 1 0 ml de gas son suficientes.

 L a muestra es arrastrada hacia la columna por un gas portador inerte (He, N2, H2) que actúa como fase

móvil. Después de eluír por la columna que contiene la fase estacionaria, los solutos separados pasan por un

detector, cuya respuesta se visualiza en un graficador o en una computadora.

No es necesario que la temperatura de la columna sea mayor que el punto de ebullición de todos los

solutos, pero debe ser lo suficientemente alta para garantizar una presión vapor suficiente para evitar que la

elución tome demasiado tiempo. A continuación explicaremos brevemente las características de cada una de
las partes que componen al cromatógrafo de gases.

L a columna

Es la parte del cromatógrafo donde se realiza la separación de los componentes de la mezcla.

Normalmente se encuentran dentro de un horno termostatizado a temperatura constante, y tienen forma de

espiral para aprovechar al máximo el espacio. Se dividen en dos tipos: columnas empacadas y columnas

tubulares abiertas.

• Columnas empacadas Son de acero inoxidable o vidrio, su diámetro es de 3 -6 mm y miden de 1 a 5 m de

largo. Se empacan con un soporte sólido de grano fino recubierto con un solvente no volátil como fase

estacionaria (GL C) o bien el sólido mismo es la fase estacionaria (GSC). Entre sus ventajas está el poder

manejar cantidades relativamente grandes de muestra y el ser baratas. Sin embargo, la caída de presión a

través de ellas es grande, ya que el gas tiene que pasar a través de las partículas empacadas del sólido.

Debido a su longitud, el poder de separación es menor que en otro tipo de columnas.

• Columnas tubulares abiertas También conocidas como columnas capilares, son más estrechas y largas (1

0 -1 0 0 m es una longitud típica) que las columnas empacadas. Se fabrican generalmente de sílice fundida.

Tienen mayor resolución y menor tiempo de análisis que las empacadas, pero son más caras y tienen menor

capacidad de muestra. L a caída de presión también es menor. L as columnas capilares pueden ser de tres

tipos: de pared recubierta, de soporte recubierto y de capa porosa (para GSC), tal como se muestra en la

figura 1 1 .
 Figura 1 1 . Tipos de columnas empleadas en cromatografía de gases.

El soporte sólido

Debe ser un material relativamente inerte, con partículas pequeñas de forma constante y gran área

superficial. Se emplean mucho las tierras diatomáceas (diatomita), sílice, alúmina y polímeros como el teflón.

L a fase estacionaria

Es el líquido no volátil que recubre al soporte sólido. Existen muchos tipos disponibles en el comercio

(hidrocarburos, siliconas, alcoholes de cadena larga, etc.) y deben escogerse adecuadamente dependiendo del

tipo de muestra que se desea separar. Se sugiere consultar la bibliografía especializada.

El detector

El detector indica la presencia de cada constituyente de la muestra y mide en qué cantidad está

presente. L os tres tipos de detectores más comunes en cromatografía de gases son: el detector de

conductividad térmica, el detector de ionización de flama y el detector de captura de electrones.

• El detector de conductividad térmica ( T CD) mide la diferencia que existe entre la conductividad térmica

del gas que entra a la columna (eluyente) y la de la mezcla gaseosa que sale (eluato). L a diferencia de
conductividades térmicas hace que la resistencia de un alambre de platino cambie, y esta señal se mide y
 se grafica. Este detector es útil para compuestos orgánicos e inorgánicos, pero es sensible a cambios de

temperatura y flujo del gas.

• El detector de ionización de flama ( FID) funciona de un modo distinto. El eluato de la columna se mezcla
con hidrógeno y aire, y después se quema en una flama dentro del detector. L os componentes orgánicos

producen iones CHO+ al quemarse:

CH + O → CHO+ + e− L os iones son recogidos por un electrodo de platino, y esto origina una

corriente eléctrica. Este detector es útil para compuestos orgánicos (menos sensible si contienen grupos

carbonilo) y no es sensible a gases como CO2, O2, NH3 y agua. Es más sensible y más estable que el detector
de conductividad térmica, pero es destructivo con la muestra.

INV ESTIGAR

Detector de captura de electrones, detector fotométrico de flama, detector de álcalis de flama.

Cromatografía de Líquidos

En la cromatografía de líquidos, los componentes de una mezcla se separan debido a que existen

equilibrios líquido-líquido (equilibrios de reparto) para cada soluto. L a fase móvil es un líquido, mientras que la

fase estacionaria es un líquido fijado sobre un soporte sólido. Se acostumbra distinguir dos tipos de

cromatografía líquido-líquido:

• Cromatografía de fase normal Fase móvil orgánica (no polar), fase estacionaria acuosa (polar)

• Cromatografía de fase inversa Fase móvil acuosa (polar), fase estacionaria orgánica. Es la más empleada.

Cromatografía de líquidos clásica

En esta técnica el analito y el eluyente se alimentan a la parte superior de una columna que funciona

por gravedad. L a columna es simplemente un tubo de vidrio de 1 0 -3 0 cm de longitud y 1 cm o más de

diámetro, empacado con la fase estacionaria. Un tapón de lana de vidrio evita que el empaque caiga, mientras

que una llave regula el flujo de eluyente. Generalmente los solutos se recogen en forma manual al salir de la
columna, o por medio de un colector automático de fracciones. L a cantidad de soluto en cada fracción se

determina por titulación, espectrofotometría o algún método de análisis. L a técnica es apropiada para separar

grandes cantidades de muestra (mg o g) y es muy importante porque permite separar compuestos que no son

volátiles (no podría usarse GC) o que se destruyen fácilmente con el calor.

Cromatografía de líquidos de alta resolución ( HPL C)

Es la técnica cromatografía más empleada actualmente en la que la fase móvil es un líquido. L as

siglas en inglés provienen de high performance liquid chromatography. En HPL C, el eluyente se hace pasar a

gran velocidad a través de una columna empacada utilizando una bomba. L a figura 1 2 es un diagrama

esquemático de las partes que componen a un cromatógrafo de líquidos de alta resolución.

Fig ura 1 2 . Esquema de un aparato de HPL C.

La bomba

L a calidad de las bombas empleadas en HPL C es muy importante para garantizar la estabilidad en el

flujo de eluyente. Generalmente se utilizan bombas de pistón, que producen un flujo constante y presiones
muy elevadas, de hasta 4 0 0 atm. Es común trabajar con dos bombas reciprocantes, lo que mejora la estabilidad

del flujo.
El inyector

L a muestra debe inyectarse con una jeringa dentro de una válvula que resista las altas presiones sin

derramar líquido. Antes de entrar a la columna, la muestra pasa por un filtro muy fino para remover el polvo y
las partículas que podrían contaminar a la columna o dañar la bomba.

L as válvulas de inyección generalmente se diseñan de modo que entreguen un volumen constante de

muestra (2 0 -5 0 µL ) independientemente de la cantidad inyectada. L a válvula tiene un bucle o lazo de volumen

conocido, que al llenarse de muestra proporciona la cantidad deseada al cromatógrafo.

L a columna

Debe estar construida en acero inoxidable para resistir la presión. L a columna es un tubo de acero de

1 0 a 3 0 cm de largo y 2 a 5 mm de diámetro interior, empacada con la fase estacionaria. Algunos cromatógrafos

tienen la columna en posición vertical, otros horizontal, y generalmente se encuentra en el exterior del aparato,

a temperatura ambiente.

L a fase estacionaria y el soporte sólido

En la cromatografía líquido-líquido, la fase estacionaria es un líquido que se encuentra inmovilizado

sobre un soporte sólido. Un soporte muy utilizado es la sílice en forma de partículas microporosas irregulares o

esféricas. L as partículas deben ser muy finas (5 -1 0 µm de díametro) ya que la resolución del equipo mejora al

disminuir el tamaño de partícula. También pueden usarse partículas de un material inerte (vidrio o plástico)
recubiertas con material adsorbente. Estas últimas son llamadas partículas peliculares, ver figura 1 3 .
 Figura 1 3 . Tipos de partículas empleadas en HPL C como soporte sólido.

Existen muchas combinaciones posibles entre la fase móvil y la fase estacionaria. Para ayudarnos a

elegir qué tipo de líquidos debemos utilizar, se sugiere consultar la bibliografía especializada.

El detector

L os detectores para HPL C normalmente se basan en alguna de las propiedades físicas del líquido
eluyente (densidad, índice de refracción, etc.) o en alguna de las propiedades del analito (absorción de luz UV ,

detector electroquímico, etc.).

El detector más comúnmente empleado es el detector de UV . L a solución que sale de la columna pasa
por una celda en forma de Z, donde un rayo de luz ultravioleta atraviesa 1 cm de solución (figura 1 4 ). Muchos

compuestos orgánicos y algunos inorgánicos, así como todos los aromáticos, absorben la radiación UV . L a
absorbancia del soluto se convierte en una señal eléctrica que después se grafica. Este tipo de detector es muy

sensible.

Fig ura 1 4 . Un detector UV típico para HPL C.

Otros tipos de detectores empleados en cromatografía líquido-líquido son:

• Detector de índice de refracción: poco sensible, pero puede emplearse para compuestos que no absorben

luz UV .

• Detector electroquímico: muy sensible, solo puede emplearse para solutos que se pueden oxidar o reducir,
por lo que es muy selectivo. El solvente debe ser polar y contener electrolitos disueltos.