Medio de Cultivo Luria Bertani
Medio de Cultivo Luria Bertani
Medio de Cultivo Luria Bertani
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Medio recomendado para mantener y cultivar cepas recombinantes de E. coli.
Información práctica
Aplicaciones Categorias
Preparación y recuperación de células competentes Escherichia coli
Industria: Biología molecular
Principios y usos
Agar Luria (Agar LB de Miller) se basa en el medio LB, según la descripción de Miller, para el crecimiento y mantenimiento de las cepas recombinantes
de E. coli utilizadas en procedimientos de microbiología molecular.
Estas cepas generalmente derivan de E. coli K12, que no pueden producir vitamina B, por lo que este medio está formulado para promover el
crecimiento de microorganismos nutricionalmente exigentes. Esta cepa de E. coli se ha modificado aún más a través de una mutación específica para
crear una cepa auxotrófica que no es capaz de crecer en medios nutricionalmente deficientes.
La triptona proporciona nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el crecimiento. El extracto de levadura es fuente de vitaminas,
particularmente del grupo B El cloruro de sodio suministra electrolitos esenciales para el transporte y el equilibrio osmótico. El agar bacteriológico es el
agente solidificante.
Si se desea, agregar asépticamente 10 ml de solución estéril al 20% de glucosa y mezclar bien para un mejor crecimiento. Las bacterias que contienen
plásmidos tienden a crecer mejor en caldos que contienen entre 5 y 10 g de sal. También pueden agregarse cofactores al caldo cuando se trabaja con
ciertos tipos de bacteriófagos. Por ejemplo, el bacteriófago labmda requiere un exceso de magnesio en el caldo para infectar bacterias de forma
adecuada.
El Agar Luria (Agar LB de Miller) tiene un nivel de cloruro de sodio distinto al de otros medios como el Agar LB (Lennox) (Cat. 1083) o el Agar Luria
(Modificación de Miller) (Cat. 1308). Esto permite seleccionar la concentración de sal óptima del medio para una cepa específica.
Fórmula en g/L
Agar bacteriológico 15 Cloruro sódico 10
Triptona 10 Extracto de levadura 5
Preparación
Suspender 40 gramos de medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y disolver calentando con agitación frecuente. Hervir durante un minuto
hasta disolver por completo. Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar a 45-50 ºC, mezclar bien y dispensar en placas.
Instrucciones de uso
- Llevar a cabo el procedimiento experimental de acuerdo con el uso o propósito apropiado.
- Inocular e incubar a una temperatura de 35±2 ºC durante 18-24 horas.
Control de calidad
Solubilidad Apariencia Color del medio deshidratado Color del medio preparado Final pH (25ºC)
Sin restos Polvo fino Beige Ámbar, ligeramente opalescente 7,0±0,2
Test microbiológico
Condiciones de incubación: (35±2 ºC / 18-24 h).
Almacenamiento
Temp. Min.:2 ºC
Temp. Max.:25 ºC
Bibliografía
Atlas, R.M., L.C.Parks (1993) Handbook of Microbiological Media. CRC Press, Inc. London.
The condensed protocols from molecular cloning: a laboratory manual/ Joseph Sambrook, David W. Russell.