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    Crecimiento Celular

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    Lunnitha Carrillo
    La palabra crecimiento se define como un aumento en el número de células, en la mayoría de ellos el crecimiento se realiza por fisión binaria.

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    Crecimiento Celular

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    La palabra crecimiento se define como un aumento en el número de células, en la mayoría de ellos el crecimiento se realiza por fisión binaria.

    Título original

    Crecimiento celular

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    Crecimiento Celular

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    Crecimiento en procariotes

    En Procariotes, la palabra crecimiento se define como un aumento


    en el número de células, en la mayoría de ellos el crecimiento se
    realiza por fisión binaria.
    Crecimiento celular en procariotes

    En la mayoría de los
    procariotas el crecimiento
    ocurre por fisión
    binaria,aunque en pocos
    casos ocurre gemación y
    formación de
    conidias(Actinomicetos)
    Fisión binaria

    Durante el ciclo de
    crecimiento todos los
    componentes celulares
    aumentan. De modo que
    cada célula hija recibe un
    cromosoma completo y
    suficientes copias de
    macromoléculas, etc. para
    sobrevivir de manera
    independiente
    Proteínas Fts

    Durante la división celular intervienen varias


    proteínas que han sido llamadas: Fts,
    filamentous temperature sensitive
    Se encuentran ampliamente distribuidas en
    procariotas incluyendo Arqueas
    FtsZ tiene una estructura similar a la tubulina
    (división celular de eucariotas).
    Proteínas Fts
    Estas proteínas
    forman en la
    célula un aparato
    de división que se
    denomina
    divisoma, cuya
    formación
    comienza con la
    unión de las
    moléculas FtsZ
    formando un anillo
    alrededor del
    cilindro celular
    hacia el centro de
    la célula
    Anillo Ftz

    Durante la división celular una amplia cantidad de proteínas


    citoplasmáticas se reclutan en el ecuador bacteriano e inician su
    interacción lo que conduce a la formación de un anillo FtsZ. La
    imagen representa el orden de reclutamiento siendo FtsA y ZipA las
    primeras en reclutarse y AmiC la ultima
    FtsZ se encuentra en diferentes
    puntos del citoplasma y
    desaparece de éste en el
    momento de la división celular
    ubicándosele en el centro
    formando el anillo
    Anillo Ftz

    FtsZ tiene actividad enzimática y es capaz de


    hidrolizar GTT para liberar energía para
    polimerizar y despolimerizarse.
    Actualmente existen numerosas
    investigaciones sobre estas proteínas
    tendientes a desarrollar nuevos compuestos
    para inhibir su actividad.
    Cuando la célula se alarga se sintetiza la nueva pared celular. Este
    material se añade a la pared preexistente sin que se pierda la
    integridad celular.
    En la zona del anillo FtsZ se forman poros que son creados por
    autolisinas presentes en el divisoma. El nuevo material se
    añade a través de estas aberturas.
    A medida que progresa la elongación celular las dos copias del cromosoma
    se separan y cada uno termina en una célula hija. Cuando ocurre la
    constricción, el anillo FTsZ comienza a despolimerizarse y se dispara la
    síntesis de pared celular para sellar una región con la otra.
    La unión entre el
    peptidoglucano
    nuevo y antiguo
    forma un borde en
    las bacterias Gram
    positivas similar a
    una cicatriz
    Proteínas Min La replicación del DNA ocurre
    antes de que se forme el anillo
    FTsZ, el cese de esta síntesis
    parece ser la señal para la
    formación del anillo y esta
    estructura aparece precisamente
    en el espacio situado entre los
    dos nucleoides.
    La localización del punto medio
    real parece ser debida a una
    serie de proteínas llamadas Min,
    especialmente MinE
    A medida que progresa la
    elongación celular las dos copias
    del cromosoma se separan y
    cada uno termina en una célula
    hija.
    CITOESQUELETO EN PROCARIOTES

    De la misma manera que existen proteínas que dirigen la división


    celular, existen proteínas específicas que determinan la forma celular,
    dentro de ellas se encuentra las proteínas MreB y CreS
    MreB es una especie de actina que forma filamentos dinámicos y se
    localiza en la cara interna de la membrana celular.
    El sistema Mre BCD son proteínas que participan en la segregación del
    material genético celular durante el crecimiento
    CITOESQUELETO EN PROCARIOTES

    MreB forma polímeros


    sólo si se encuentra en
    presencia de ATP o GTP
    en forma similar a actina,
    se requieren 8000
    moléculas de MreB para
    ensamblar un polímero
    de 41 micrómetros de
    longitud.
    Crescentina

    Caulobacter crescentus
    Proteína ParM

    Particionan los plásmidos de DNA en la división bacteriana,


    en un mecanismo análogo al de los microtúbulos en la
    mitósis de eucariotes.
    Crecimiento celular en bacterias
    • Crecimiento es el aumento en el número de células
    microbianas de una población y puede medirse como un
    incremento de la masa celular.

    • La velocidad de crecimiento: es el cambio en el número de


    células o masa celular por unidad de tiempo

    • Tiempo de generación: es el tiempo que tardan en formarse


    dos células a partir de una.
    El tiempo necesario para completar un ciclo de crecimiento
    celular depende tanto de factores nutricionales como
    genéticos. (E. coli 20 min. Mycobacterium 24.6 h).
    Crecimiento en procariotes

    • Temperatura

    Condiciones para • Requerimientos de


    el desarrollo de oxígeno
    los
    microorganismos • pH

    • Concentración de
    solutos (Nutrientes,iones
    etc.)
    Temperatura

    • Psicrófilos:
    Microrganismos cuya
    temperatura óptima
    de crecimiento es
    <15°C.

    • Psicrotolerantes:
    Microorganimos que
    crecen a 0°C pero
    cuya temperatura
    óptima de crecimiento
    es de 20-40°C.
    (Bacterias, algas ,
    hongos,
    protozoarios).
    Temperatura

    • Mesófilos
    Microorganismos
    cuya temperatura
    óptima es de 35°C. Se
    desarrollan en un
    intervalo de 9-45°C
    • Se encuentran en
    animales de sangre
    caliente acuáticos o
    terrestres.
    Temperatura

    • Termófilos
    Son microorganismos
    cuya temperatura
    óptima de crecimiento
    es > 45°C, se
    desarrollan en un
    intervalo de 45-80°C.
    Se encuentran en aguas
    termales.
    Temperatura

    • Hipertermófilos: son
    microorganismos
    cuya temperatura
    óptima de crecimiento
    es >80°C
    • Microorganismos que
    se encuentran en
    Geisers, chimeneas
    submarinas, etc.
    Temperatura
    Requerimientos de oxígeno

    Los microorganismos muestran una gran


    diversidad en cuanto a su capacidad para utilizar
    el oxígeno libre (O2) durante la respiración
    celular.
    Estas variaciones en cuanto a los requerimientos
    de oxígeno refleja las diferencias que presentan
    en cuanto a sus sistemas bioxidativos.
    • Aerobios (21% O2 o más)

    • Microaerofilicos (2-10 % O2)

    Requerimientos • Anaerobios facultativos


    de oxígeno
    • Anaerobios aerotolerantes

    • Anaerobios estrictos
    Microorganismos aerobios

    • Necesitan el oxígeno
    atmosférico para
    poder crecer.
    • Emplean el oxígeno
    como último aceptor
    de electrones durante
    la respiración
    • Ejemplos: Bacillus,
    Pseudomonas, etc
    Microorganismos microaerofílicos
    • Requieren poca cantidad
    de oxígeno para su
    desarrollo (2-10 % O2).
    • Un exceso de oxígeno
    bloquea la actividad de
    sus enzimas y provoca
    la muerte de los
    microorganismos.
    • Ejemplo:
    Campylobacter jejuni,
    Neisseria,
    Mycobacterium, etc
    Microorganismos anaerobios facultativos

    • Estos microorganismos
    crecen en tanto en
    presencia como en
    ausencia de oxígeno,
    empleándolo durante la
    respiración aerobia.
    • En ambientes carentes
    de oxígeno realizan
    respiración anaerobia
    utilizando NO3- y SO4 2-
    como aceptores finales
    de electrones.
    • Ejemplos: Las
    enterobacterias
    Microorganismos anaerobios
    aerotolerantes
    • Son microorganismos
    que crecen en presencia
    de oxígeno, pero no lo
    utilizan para su
    desarrollo. Emplean
    compuestos orgánicos
    como aceptores de
    electrones.
    • Fermentan los
    carbohidratos a ácido
    láctico
    • Ejemplo Lactobacillus,
    Streptococcus.
    Reducción del oxígeno

    Durante el metabolismo normalmente se producen


    especies reactivas de oxígeno
    Microorganismos aerobios y aerobios
    facultativos
    Superóxido
    2O2- + 2H+ H 2O 2 + O 2
    dismutasa

    Superóxido
    O2 1- +2H+ + Cit.c. red. H2O2 + Cit.c.ox.
    reductasa
    Microorganismos aerobios y aerobios
    facultativos
    Peroxidasa
    H2O2 + NADH + H+ 2H2O + NAD

    Catalasa
    2H2O2 2H2O + O2
    Los anaerobios carecen de estas enzimas por lo que
    cantidades pequeñas de oxígeno resultan letales para
    estos microorganismos ,Ejemplos: Clostridium.

    Clostridium Clostridium Clostridium


    cadaveris sporogenes bifermentans
    Requerimientos de oxígeno

    a.Aerobios estrictos

    b. Anaerobios

    c. Aerobios facultativos

    d.Microaerofílicos

    e.Anaerobios aerotolerantes
    Requerimientos de oxígeno

    Para el cultivo de anaerobios estrictos se utilizan cámaras


    saturadas de CO2 ó N2 .
    Efecto del pH
    • Acidófilos (3-6.5)

    pH
    • Neutrófilos (7-7.5)
    Óptimo de
    crecimiento
    • Alcalófilos (7.6 –10)

    Acidófilos: Acidithiobacillus, Thermoplasma y Ferroplasma

    Neutrófilos: La mayoría de las bacterias

    Alcalófilos: La mayoría pertenecen a Archea y algunas


    especies de Bacillus
    Casi no existen microorganismos que crezcan a pH < 2 ó >10
    pH

    Spirullina platensis
    Efecto de la presión osmótica

    • Halófilos discretos S. aureus


    Concentración de (1-7.5 % NaCl)
    solutos (NaCl) • Halófilos moderados ( 6-15%
    NaCl)
    • Halófilos extremos (Mayor
    15% NaCl)

    Dunaniella salina
    Efecto de la presión osmótica

    Halófilos: Organismos cuyo aw óptimo es parecido


    al del agua de mar (0.98).Requieren NaCl para
    crecer.
    Halotolerantes: Soportan alguna reducción de su
    aw óptimo, no requieren NaCl para crecer pero lo
    pueden hacer en su presencia

    Osmófilos: Organismos capaces de crecer a altas


    concentraciones de azúcares
    Saccharomyces
    boulardii

    Xerófilos: Organismos capaces de crecer en


    ambientes muy secos (aw 0.7 )
    Efecto de la disponibilidad de agua

    Actividad de agua (aw): Disponibilidad del agua

    Presión de vapor del aire en


    equilibrio con una sustancia

    Actividad de agua =
    aw Presión de vapor del agua pura a la
    misma temperatura
    Xeromyces bisporus
    Crecimiento celular en procariotes

    Condiciones para el desarrollo de


    los microorganismos
    Medidas de crecimiento microbiano

    Recuento de células totales Recuento de células


    (Directos) viables (Indirectos)

    • Conteo microscopico • Recuento en placa


    • Método de Breed • Extensión superficial
    • Cámara de Petroff Hausser • Vertido en placa
    • Nefelométrico (Turbidimétrico) • Miles-Misra
    • Contadores electrónicos • Número más probable(NMP)
    • Biomasa
    • Filtración
    Conteo microscópico
    Método nefelométrico
    Extensión superficial
    Vertido en placa
    Vertido en placa
    Desventajas:
    •Poca cantidad de
    bacterias en la
    muestra.
    •Diluciones mal
    hechas.
    •Medio muy
    caliente.
    •Mala
    homogenización.
    •Error al contar.
    •Error en los
    cálculos.
    Cuentacolonias
    Es necesario tener
    entre 30 y 300
    colonias para que el
    conteo sea confiable,
    la cuadrícula del
    aparato nos hace
    más fácil y
    sistemática la
    cuenta.
    En este ejemplo, no
    se tiene éste número
    de colonias, por lo
    que se reporta
    incontables y se
    realizan diluciones
    de la muestra.
    En este ejemplo, no se realizó una distribución homogénea de la
    muestra, se tiene el crecimiento sobra las orillas de la caja y en películas
    que no permiten el conteo de UFC, se debe repetir el ensayo.
    En este ejemplo,
    no se realizó una
    distribución
    homogénea de la
    muestra, se tiene el
    crecimiento en el
    centro, en una
    película que no
    permite el conteo
    de UFCs, se debe
    repetir el ensayo.
    Conteo de UFC

    10-5
    10-4

    En este ejemplo, el
    ensayo se realizó
    correctamente, la caja
    que se elige es la de la
    dilución 10 -5, se
    reporta: 87x105
    UFC/ml. 10-6
    Método de Miles y Misra

    Se vierten gotas de la suspensión en una caja Petri dividida


    en cuadrantes, se cuentan UFC

    • Gran cantidad de
    microorganiamos en
    la muestra.
    Ventaja
    • Duplicado o triplicado
    en la misma caja.
    • Muestras líquidas y
    sólidas.
    Muestras líquidas
    Filtración
    Sin sólidos
    Baja cantidad de
    microorganismos
    12 UFC/100 ml
    NÚMERO MÁS PROBABLE NMP

    En esta técnica a través de un modelo estadístico


    de probabilidad, se realiza la determinación del
    número más probable de microorganismos viables
    en una muestra. Se aplica al análisis de muestras
    de agua, hielo y otros alimento donde se considera
    que la carga microbiana es muy baja.
    NÚMERO MÁS PROBABLE NMP
    NMP

    El resultado de tubos positivos del ensayo descrito se


    interpola en la siguiente tabla para dar el resultado final:
    Otras medidas de crecimiento
    microbiano
    •Determinación de peso húmedo
    •Determinación de peso seco
    •Determinación de nitrógeno total
    •Determinación química de un ácido nucleico
    •Incorporación de precursores radiactivos
    Curva de crecimiento

    Cuando se grafica el logaritmo base 10 de la velocidad de


    crecimiento de un cultivo contra el tiempo, se obtiene la curva ce
    crecimiento del cultivo, en la que se observan sus diferentes fases.
    Fases del crecimiento
    • Latencia: Puede ser breve o larga depende de las
    condiciones de crecimiento y de tipo de célula. Durante
    esta fase existe un aumento en el metabolismo.

    • Exponencial: ocurre la división celular (duplicación) esta


    influenciada por factores ambientales (temperatura,
    composición del medio, etc.

    • Estacionaria: No hay aumento ni descenso de la población


    celular. En ocasiones puede haber un lento crecimiento
    celular y muerte celular (equilibrio). Disminuye el nutriente
    esencial y hay acumulación de productos.

    • Muerte: Puede ir acompañada de lisis celular


    (a) Datos de una población que se duplica cada media hora (g=30 min).
    (b) Datos representados en una escala aritmética (curva verde, ordenada de la izquierda) y en
    una escala semilogarítmica (curva roja, ordenada de la derecha). Es más cómodo usar la
    escala semilogarítmica..
    # de # de
    log2N log10N
    generaciones bacterias
    0 1 or 20 0 0
    1 2 or 21 1 .301
    2 4 or 22 2 .602
    3 8 or 23 3 .903
    4 16 or 24 4 ...
    5 32 or 25 5 ...
    n 2n n .301n

    n= 9-3 = 19.93
    0.301

    n = Número de generaciones
    Nf = Concentración final de células (ejem. 109/ml)
    No = Concentración inicial de celulas (ejem. 103/ml)

    0.301 es el factor de conversión de log2 a log10


    Cultivo cerrado

    • El cultivo cerrado se realiza en


    sistemas con medio de cultivo en
    volumen fijo no renovado.
    Es decir el crecimiento ocurre hasta
    que el medio de cultivo modificado
    por los microorganismos ya no
    permite su desarrollo.

    • En cultivos cerrados la concentración


    de nutrientes afecta la velocidad de
    crecimiento
    Cultivos continuos:Quimiostato

    • Para el cultivo continuo se utiliza un


    sistema abierto con volumen constante al
    que se adiciona medio de cultivo fresco
    para renovar el que ha sido usado por los
    microorganismos.

    • En éste tipo de cultivo se trata de conservar


    la población en constante crecimiento ,es
    decir en fase logarítmica.

    • El quimiostato es el aparato que se utiliza


    para obtener un cultivo continuo, controla la
    densidad celular y la velocidad de
    crecimiento.
    Cultivos continuos: Quimiostato

    a) La velocidad de dilución

    Factores a b) La concentración del


    considerar nutriente que actúa como
    factor limitante (Fuente de C
    ó N).
    Cultivos continuos: Quimiostato

    Ventajas :
    •Permite mantener al
    cultivo en fase exponencial
    durante días e incluso
    semanas.
    •Pueden aislarse
    microorganismos.

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