Informe Espectrofotometría

QUÍMICA- PRÁCTICA
“Espectrofotometría”
OBJETIVOS
 Identificar las propiedades de la luz

 Conocer las aplicaciones en salud
FUNDAMENTO TEÓRICO
El estudio bioquímico de una molécula sirve para determinar composición cualitativa y
cuantitativa, para esto es necesario el uso de técnicas analíticas que nos permitan reconocer la
sustancia y sus características físicas, químicas y biológicas. Uno de los métodos más utilizados es
la espectroscopía ultravioleta-visible. El fundamento de la espectroscopía se debe a la capacidad
de las moléculas para absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV-
visible.
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite medir cuánta luz absorbe
una sustancia química, midiendo la intensidad de la luz cuando un haz luminoso pasa a través de
la solución muestra. Se basa en que las moléculas absorben las radiaciones electromagnéticas y a
su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentración. Para hacer
este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro, en el que se puede seleccionar la longitud
de onda de la luz que pasa por una solución y medir la cantidad de luz absorbida por la misma.
Esta técnica se emplea en muchas disciplinas como ingeniería, química y biología. Es utilizada
para cuantificar las propiedades de reflectancia y transmitancia de un material en términos de
longitudes de onda de luz a los que está expuesto el material.
Debemos tener en cuenta que hay diferentes clases de espectroscopia: campo visible, campo
ultravioleta, campo infra-rojo.
Espectrofotometría
La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la detección
específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a
moléculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas, etc) y estado de agregación
(sólido, líquido, gas).
Principios de la espectrofotometría.
¿Qué es la transmitancia y la absorbancia?

• La transmitancia (T) de una sustancia en solución es la relación entre la cantidad de luz
transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra, It, y la cantidad
de luz que incidió sobre ella, Io. % T = It/Io x 100
• La absorbancia (A) es un concepto más relacionado con la muestra puesto que nos indica
la cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el logaritmo de 1/T.
A = log 1/T = -log T = -log It/ Io
Instrumentación para la medición de absorbancias de la luz visible y ultravioleta:

espectrofotómetro UV-visible.
CUESTIONARIO
Uso de la espectrofotometría en la valoración o cuantificación de lípidos y otros
metabolitos presentes en suero sanguíneo
La sangre está formada por una solución acuosa que contiene moléculas de tamaño variable y
diversos tipos de elementos celulares. Los elementos formes de la sangre se encuentran en
suspensión en una solución acuosa denominada plasma. Aunque el plasma es el medio natural
de las células sanguíneas, la mayoría de las determinaciones químicas se hacen en el suero.
Mediante el análisis químico de la sangre se puede determinar la cantidad de lípidos, proteínas y
otros metabolitos, haciendo uso de instrumentos basados en la espectrofotometría.
Las proteínas del plasma pueden clasificarse en dos grupos las que son sintetizadas por el hígado
(albúmina) y las inmunoglobulinas (producidas por las células plasmáticas de la médula ósea). El
plasma humano tiene una concentración en proteínas de 60-80 g/L (frecuentemente se expresa
en g/dL; 6-8 g /dl. Casi la mitad de esta proteína plasmática es albúmina, cuyo rango de
concentración es 35-45 g/l.
La determinación de la concentración de proteínas por espectrofotometría puede ser llevado a
cabo por diferentes métodos. Dos de los métodos que más se utilizan son el Biuret y Bradford.
Los dos métodos tienen en común que la disolución de proteína se mezcla con algún reactivo que
determine que aparezca o intensifique un color (azul) que se cuantifica midiendo la absorbancia
a una determinada longitud de onda frente a un blanco de reactivo.
Los lípidos, que incluyen grupos tan diversos como los fosfolípidos, los triglicéridos o los esteres
de colesterol, están implicados en un amplio rango de funciones biológicas. Son clave desde el
punto de vista nutricional porque se afectan mucho por la dieta debido a que son un reflejo del
tipo de grasa que se consume. También son importantes desde un punto de vista clínico porque
funcionan como biomarcadores de muchas enfermedades, es decir, que su desregulación
metabólica sirve para alertar de posibles patologías.
Uso de la espectrofotometría en la valoración y cuantificación de los lípidos:
Se utiliza la espectrometría de masas de baja resolución que, aunque pierde resolución, permite
detectar a concentraciones más bajas y, por tanto, ver un mayor número de especies. Consiste
básicamente en la aplicación de energía a las moléculas, las cuales se rompen y liberan diferentes
fragmentos. Esta información se utiliza en el análisis de las muestras en las que la detección de
los diferentes fragmentos moleculares permite identificar de forma inequívoca los diferentes
lípidos.
¿Cómo funciona?
Las muestras lipídicas entran a través de la fuente de iones desde donde son conducidas al
analizador de masa. Este consiste en un fuerte campo electromagnético a lo largo del cual los
iones migran a diferentes velocidades según su relación de m/z, lo que determina que los iones
sean registrados por el detector a distintos tiempos. En la figura podemos ver esquemáticamente
el procedimiento. En parte inferior se muestra el resultado del análisis en el espectrómetro, un
espectro de masa. A medida que los iones van alcanzando el detector se va generando un gráfico
de barras, histograma, donde se muestra la abundancia de los iones, en la ordenada, versus la
relación de m/z en abscisas. La intensidad de cada pico indica la abundancia relativa para esa
determinada relación de masa/carga (m/z). El conjunto de picos representa lo que se denomina
espectro completo (full ms). El pasaje de compuestos por el analizador genera un espectro de
iones que han sido detectados a distintos tiempos y en base al cual el equipo construye un
cromatograma que se correlaciona de manera directa con dicho espectro. De esta manera se
puede, a partir de un pico del cromatograma, mapear o identificar en el espectro a qué ion/iones
corresponde dicho pico y viceversa, desde el espectro se puede seleccionar un pico
correspondiente a un ion y ver en el cromatograma en qué momento dejó la columna.
Fotómetro de reflexión automático: Determinación inmediata de los parámetros bioquímicos

más frecuentes de forma rápida, fácil y fiable. Gracias a la tecnología de la química seca es
posible realizar estas determinaciones.
 Con sangre capilar
 En sólo 3 min.
 Con gran fiabilidad
Procedimiento para la toma de una muestra

CONCLUSIONES
La espectrofotometría es un método de análisis utilizado que permite determinar la
concentración de una sustancia y a la vez poder identificarla. Distintos tipos de
espectrofotómetros son de utilidad en el análisis químico de lípidos, proteínas y otros
metabolitos; medir su cantidad presente en el plasma es de importancia porque puede avisarnos
de patologías que se están desarrollando o futuras complicaciones que se pueden prevenir,
como es el caso de la aterosclerosis. En el análisis de proteínas existen dos métodos comunes de
usar que son los de Biuret y Bradford; y para el análisis de lípidos se utiliza la espectrometría de
masas de baja resolución, un nuevo método que permite identificar distintos tipos de lípidos a
través de una muestra de sangre.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
 Abril Díaz N, Bárcena Ruiz J, Fernández Reyes E, Galván Cejudo A, Meléndez Valdés F,
Túnez Fiñana I, et al. Espectrofotometría: Espectros de absorción y cuantificación
colorimétrica de biomoléculas [Internet]. UCO. 2009 [citado 7 agosto 2020]. Disponible
en: https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf
 Técnicas biofísicas para el estudio de lípidos y membranas [Internet]. ResearchGate. 2018
[citado 7 agosto 2020]. Disponible en: https://www.researchgate.net/figure/Figura-108-
Analisis-de-lipidos-por-espectrometria-de-masa-Las-muestras-lipidicas-entran_fig6_315112024
 Análisis de lípidos por espectrometría de masas: mediadores inflamatorios y procesos de
señalización [Internet]. http://balsinde.org/. 2016 [citado 7 agosto 2020]. Disponible en:
http://balsinde.org/publists/meet16vad2.pdf

Informe Espectrofotometría

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Informe Espectrofotometría

Cargado por

Información del documento

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Informe Espectrofotometría

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

QUÍMICA- PRÁCTICA

 Identificar las propiedades de la luz

¿Qué es la transmitancia y la absorbancia?

Instrumentación para la medición de absorbancias de la luz visible y ultravioleta:

Fotómetro de reflexión automático: Determinación inmediata de los parámetros bioquímicos

 Con sangre capilar

 Con gran fiabilidad

Procedimiento para la toma de una muestra

También podría gustarte