Info Bilirrubina
Info Bilirrubina
Info Bilirrubina
SECCIONAL: BARRANQUILLA
PROGRAMA: Medicina
ASIGNATURA: Bioquímica
SEMESTRE: Segundo
LABORATORIO No 8.
1. INTRODUCCIÓN
81
Cuando aumentan los niveles séricos de bilirrubina en sangre, este pigmento
empieza a depositarse en la esclerótica y en la piel dando origen a la ictericia.
Existen diferentes tipos de ictericia: prehepática, hepáticay post-hepática.
2. MARCO TEORICO
La bilirrubina es un producto de desecho generado del catabolismo de la hemoglobina.
La bilirrubina es una sustancia amarillenta que es formada durante el proceso de
descomposición de los glóbulos rojos por el cuerpo. La bilirrubina se encuentra en la
bilis, un líquido segregado por el hígado que ayuda a digerir los alimentos. Este, elimina
la mayoría de la bilirrubina del cuerpo cuando funciona de la manera correcta. Si el
hígado está dañado, la bilirrubina puede salirse del hígado y pasar a la sangre.
• Diferenciar las bilirrubinas de acuerdo con la manera que reaccionan con los
reactivos diazoados.
Equipos y Reactiv
Materiales os
Espect micro Reactivos: Para bilirrubina total se utiliza el
r
ofotóm pipetas reactivo AT (ácido sulfanílico, ácido clorhídrico y
e
tro de cetrimida) y el reactivo BT (Nitrito sódico).Para
Baño 1000µm bilirrubina directa se utiliza el reactivo AD (ácido
L
María , sulfanílico y ácido clorhídrico)y el reactivo BD
Centrif 10µL,20 (Nítrito sódico).
u µ
gadora L y 50µL Preparación del reactivo: Vaciar el contenido de
Tubo Beaker. un vial de reactivo BT en un frasco de reactivo AT
de
ensayo para la determinación de bilirrubina total, o el
15x16 contenido de un vial de reactivo BD en un
0 frasco
mm
-1 de reactivo AD para la
determinación
Gradill debilirrubina directa. Si se desea preparar en otro
a
. volumen: mezclar 1 mL de reactivo BT + 4 mL de
reactivo AT o 1 mL de reactivo BD + 4 mL de
reactivo AD.
Solución patrón de bilirrubina: Albúmina bovina.
La concentración viene indicada en la etiqueta
del vial. Muestra: Suero recogido mediante
procedimientos estándar. La bilirrubina en suero
es estable 2 días a 2-8ºC si se protege de la luz.
5. METODOLOGÍA
DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINA EN SUERO
Fundamento:
La bilirrubina directa presente en la muestra reacciona con el ácido sulfanílico
diazoado, originando un complejo coloreado que se determina por
espectrofotometría. La cetrimida solubiliza la bilirrubina indirecta permitiendo su
reacción junto con la fracción directa. Los términos “directa” y “total” se refieren a las
características de reacción en presencia o ausencia de solubilizantes (aceleradores).
La bilirrubina “directa” e “indirecta” equivale sólo de forma aproximada a las
fracciones conjugada y no conjugada.
Procedimiento para determinar bilirrubina total
a. Tome 4tubos de ensayo limpios y rotule así: 1. Blanco, 2. Patrón, 3. Muestra.
En cada tubo adicionará:
1. Blanco reactivo: 1 mL de reactivo de trabajo+ 100μL de agua destilada
2. Blanco muestra: 1 mL de reactivo AT + 100 μL de muestra
3. Muestra: 1 mL de reactivo de trabajo+ 100μL de muestra.
4. Patrón: 1 mL de reactivo + 100μL de solución patrón.
b. Agitar bien y dejar durante 2 minutos a temperatura ambiente.
c. Medición en el equipo:
• Siga las instrucciones de manejo del equipo.
• Al seleccionar concentración, en la pantalla aparecerán los parámetros a evaluar.
Seleccionar bilirrubina total.
• Leer la absorbancia de los blancos de muestra frente a agua destilada.
• Leer la absorbancia de las muestras y del patrón frente al blanco de reactivo.
Procedimiento para determinar bilirrubina directa
a. Tome 4 tubos de ensayo limpios y rotule así: 1. Blanco, 2. Patrón, 3. Muestra.
En cada tubo adicionará:
1. Blanco reactivo: 1 mL de reactivo de trabajo + 100 μL de agua destilada
2. Blanco muestra: 1 mL de reactivo AD + 100 μL de muestra.
3. Muestra: 1 mL de reactivo de trabajo+ 100 μL de muestra.
4. Patrón: 1 mL de reactivo + 100 μL de solución patrón.
b. Agitar bien y dejar durante 2 minutos a temperatura ambiente.
c. Medición en el equipo:
• Siga las instrucciones de manejo del equipo.
• Al seleccionar concentración, en la pantalla aparecerán los parámetros a evaluar.
Seleccionar bilirrubina directa.
• Leer la absorbancia de los blancos de muestra frente a agua destilada.
• Leer la absorbancia de las muestras frente al blanco de reactivo.
Cálculos:
La concentración de bilirrubina en la muestra se calcula a partir de la siguiente
fórmula general:
mg mg
0.115 −0.042
dL dL mg
×20 =0.52mg/dL
Apatron dL
mg
0.115 −0.042mg/dL
dL mg
×20 = A patron
0.52mg /dL dL
A patron:2.807 mg/dL
Paciente 2
El valor de absorbancia de la muestra del segundo paciente es de: 0.029 mg/dL
El valor de absorbancia del blanco de la muestra es de:0.115 mg/dL
El valor de concentración de patrón es de:20 mg/dL
El valor de concentración de la muestra es de: 0.38 mg/dL
Valor de la absorbancia del patrón: ???
mg mg
0.11 5 −0.029
dL dL mg
×20 =0.38 mg/dL
Apatron dL
mg
0.11 5 −0.029 mg/ dL
dL mg
×20 =A patron
0.38 mg/dL dL
La ictericia hepática se debe a problemas con el árbol biliar dentro del hígado que
puede ser por destrucción de los hepatocitos, así como alteraciones del flujo por
estos conductos. Algunos ejemplos son la cirrosis hepática, la hepatitis viral aguda, la
hepatitis crónica, la enfermedad de Wilson y enfermedad de Gilbert.
La ictericia posthepática se debe a la obstrucción del colédoco, lo que provoca una
disminución de la velocidad de tránsito de la billirubina (colestasis) en cualquier punto
del árbol biliar, ya sea por un cálculo a nivel de la vesícula biliar o incluso por la
compresión originada por un cáncer de cabeza de páncreas. Algunos ejemplos son
la coledocolitiasis y el cáncer de cabeza de páncreas.
Diagnóstico
3.2 Materiales
Material Cantid
es ad
1 Gradilla 5
2 Tubos de ensayos 20
3 micro pipetas de 1000µmL , 5
10µmL,20µmL y 50µmL
4 Beaker 1
3.3 Reactivos
5 CANTIDAD N° DE TOTAL
REACTIVO POR GRUP
GRUPO DE OS
TRABAJO DE
TRAB
AJ O
1 Reactivos: Para bilirrubina total se
1ml A 5 5
utiliza el reactivo AT (ácido sulfanílico,
y4 m
ácido clorhídrico y cetrimida) y el ml B l
reactivo BT (Nitrito sódico).Para
bilirrubina directa se utiliza el reactivo
AD (ácido sulfanílico y ácido
clorhídrico)y el reactivo BD (Nítrito
sódico).
Preparación del reactivo: Vaciar el
contenido de un vial de reactivo BT en
un frasco de reactivo AT para la
determinación de bilirrubina total, o el
contenido de un vial de reactivo BD en
un frasco de reactivo AD para la
determinación debilirrubina directa. Si
se desea preparar en otro volumen:
mezclar 1 mL de reactivo BT + 4 mL de
reactivo AT o 1 mL de reactivo BD +
4
mL de reactivo AD.
2 Solución patrón de bilirrubina: Albúmina 100 5 100 µL
µL
bovina. La concentración viene indicada
en la etiqueta del vial.
3 Muestra: Suero recogido 100 5 500 µL
mediante procedimientos µL
estándar. La bilirrubina
en suero es estable 2 días a 2-8ºC si se
protege de la luz.
Observaciones: Para el trabajo experimental de la asignatura de bioquímica en el
programa de Medicina se organiza las secciones por grupo 5 de 4 integrantes
máximo.
GUIA ÚNICA DE LABORATORIO
90
GUIA ÚNICA DE LABORATORIO
92
CRONOGRAMA COMPETENCIA O LOGRO ACCION
ES
de bioseguridad, protocolos de emergencia y Pro, por parte del docente del
buenas prácticas de laboratorio que laboratorio para evaluar en el
garanticen la protección del analista y de la parcial del corte respectivo.
comunidad en
general.
Seman Lípidos Trabajar en laboratorios cumpliendo las Entrega del informe de laboratorio.
a7 normas de bioseguridad, protocolos de
emergencia y buenas prácticas de laboratorio Elaboración de preguntas tipo
que garanticen la protección del analista y de saber Pro, por parte del docente
la comunidad en general. del laboratorio para evaluar en el
Aplicar diferentes métodos para estimar la parcial del corte respectivo.
concentración de una muestra.
Seman Pruebas de función Comprender que los problemas y soluciones Entrega del informe de laboratorio.
a renal: creatinina, involucran distintas dimensiones y
13 ácido úrico, urea y reconocer relaciones entre estas. Elaboración de preguntas tipo saber
Bun
CRONOGRAMA COMPETENCIA O LOGRO ACCION
ES
Trabajar en laboratorios cumpliendo las Pro, por parte del docente del
normas de bioseguridad, protocolos de laboratorio para evaluar en el
emergencia y buenas prácticas de laboratorio parcial del corte respectivo.
que garanticen la protección del analista y de
la comunidad en general
Seman Bilirrubina Comprender que los problemas y soluciones Entrega del informe de laboratorio
a involucran distintas dimensiones y reconocer
16 relaciones entre estas. Elaboración de preguntas tipo
saber Pro, por parte del docente del
Trabajar en laboratorios cumpliendo las laboratorio para evaluar en el
normas de bioseguridad, protocolos de parcial del corte respectivo.
emergencia y buenas prácticas de laboratorio
que garanticen la protección del analista y de
la comunidad en general.
Seman Evaluación final Elaboración de preguntas tipo saber Pro, por Elaboración de preguntas tipo
a parte del docente del laboratorio para evaluar saber Pro, por parte del docente del
17 en el parcial del corte respectivo. laboratorio para evaluar en el
parcial del corte respectivo.
CRONOGRAMA COMPETENCIA O LOGRO ACCION
ES