Preparación del medio F/2 modificado Guillard Para ello se empleó el medio F/2

modificado Guillard (Guillard, 1975); que tiene una composición de

macronutrientes, micronutrientes y vitaminas (ver composición en ANEXO 2.

ANEXO2Preparación del medioF/2 modificado (Guillard 1975) para microalgas marinas

Macronutrientes g/L
KNO3 75.00
NaH2PO4. 2 H2O 5.65
Micronutrientes g/L
EDTA Na2 4.360
FeCl3. 6 H2O 3.150
CuSO4. 5 H2O 0.010
ZnSO4. 7 H2O 0.022
CoCl2. 6 H2O 0.010
MnCl2. 4 H2O 0.180
Na2MoO4 0.006
Vitaminas g/L
Cyanocobalamina 0.002
Tamina HCl 0.100
Biotina 0.001
Reactivo 4 mL/L
Na2SiO3. 5 H2O 10.00
H3ClO4 5.00
Ajustar a pH 8.0 con 1 M Na OH or HCl
Preparación del medio En 1 Litro
Reactivo 1 1.00 mL
Reactivo 2 1.00 mL
Reactivo 3 1.00 mL
Fuente: (Guuillard, 1975)

http://www.fao.org/3/ab473s/AB473S02.htm
 TABLA 9. MEDIO CHU 10 (MODIFICADO POR GERLOFF) (0. UMEBAYASHI, 1975)

(Recomendado para aislamiento de microalgas de hábitats oligotróficos y eutróficos)

Ca(NO3) 2 0.04%

K2HPO4 0.01%

Na2CO3 0.02%
MgSO4.7H2O 0.025%

Na2SiO3 0.025%
Citrato de Fierro Amoniacal 0.005%

NOTA: Puede usarse para medio solidificado Agar-Agar 1.0%

TABLA 10. MEDIO ENRIQUECIDO MEDIO MIGUEL (ALLEN-NELSON, 1910)

Solución A: KNO3 20. 2 g

H2O 100 ml

Solución B: Na2HPO412H2O 4 g

CaCl26H2O 4 g

HCl conc. 2 ml

FeCl3 2 ml

H2O 80 ml

Agregar 2 ml de la Solución A y 1 ml de la Solución B a un litro de agua de mar natural, y calentar a

70°C por 20 minutos.

MEDIO ERD-SAHREIBER ENRIQUECIDO (FOYN, 1934a,b)

NaNO3 10 mg

Na2HPO4 12H2O 2 mg

Extracto de suelo 5 ml

Agua de mar 100 ml

MEDIO ERD-SCHREIBER

*Agua de mar 1 litro

Extracto de suelo 50 ml

NaNO3 0.2 g
Na2HPO4 .12H2O 0.03 g

* Se recomienda usar el agua filtrada y pasteurizada,y adicionar los ingredientes.

TABLA 11. MEDIO DE YASHIMA (SISFFAA, 1964a)

(Para cultivo masivo de cloroficeas marinas)

Sulfato de Amonio (para la agricultura 21%) 100 g/t

Superfosfato de Calcio (para la agricultura 21%) 15 g/t

Urea (para la agricultura 21%) 15 g/t

Clewat 32 30–50 g/t

Componentes de Clewat 32:

FeCl2 (como fuente de Fe) 0.385%

ZnCl2 (como fuente de Zn) 0.166%

MnCl2 (como fuente de Mn) 0.775%

CoCl2 (como fuente de Co) 0.017%

CuSO4 (como fuente de Cu) 0.007%

(NH4)6Mo7O24 (como fuente de Mo) 0.632%

H3 BO3 (como fuente de B) 2.470%

EDTA 0.005%

MEDIO DE YASHIMA MODIFICADO (HIRATA, 1975)

Medio de Yashima (en la misma concentración)

Peptona 50 g/t

Peptidasa 0.005%

Diaminasa 0.005%

(recomendado para cultivos axénicos)

TABLA 12. YANASE & IMAI (1968) PARA Monochrysis lutheri, Platymonas sp., Nitzschia closterium,
Chaetoceros calcitrans

NaCl 18 mg Metal Mix* 30 ml

KC1 600 mg Fe (as Cl-) 100 μg

NaNO3 500 mg Tris 1g

MgSO4 . 7H2O 5 g Vit.B12 3μg

Ca (as Cl-) 100 mg Na2 SiO3 80 mg

K2HPO4 30 mg Vitamin Mix† 1 ml

H2O 1L

* Mezcla de metales 100 ml, contenido: Na 2 EDTA, 100 mg; Fe, 1 mg; Zn, 0.5 mg; Mn, 4 mg;Co,
0.01 mg; Cu, 0.004 mg; B, 20 mg.

† Mezcla de vitaminas 50 ml, contenido: B12, 10 μg; biotina, 50 μg; B1, 5 mg

TABLA 13. MEDIO DE GUILLARD & RHYTER (PARSONS & STRICKLAND, 1961)

A. SOLUCIONES NUTRIENTES

1. Disolver 0.08 gr de clorhidrato de Cobalto CoCl 2.6H2O y 0.8 gr de Sulfato de Cobre CuSO4.5H2O;
en 100 ml de H2O destilada.

2. Añadir 1 ml de solución A.1. a aproximadamente 800 ml de H 2O destilada, que previamente se

le ha adicionado:

0.2 gr de Tricloruro Férrico FeCl3.6H2O

0.06 gr de Sulfato de Zinc ZnSo4.7H2O

0.12 gr de Sulfato de Manganeso MnSO4.H2O

0.03 gr de Molibdato de Sodio Na2MoO4.2H2O

3. Añadir 1.2 gr de Etilenodiaminotetracetato Disódico (EDTA) diluído a cerca de 900 ml de H2O

destilada.

4. Ajustar el pH de la solución con Hidróxido de Sodio IN-Na(OH), hasta 7.5.

5. Evitar la formación de precipitado, el cual puede elevar la adición de mucho alcali.

6. Añadir 10 gr de Nitrato Potásico KNO3 y 1.4 gr de Fosfato Dihidratado de Potasio KH 2PO4.

7. Diluir la solución a 1 litro y en autoclave a menos de 15 libras de presión por 15 minutos.

8. Guardar la solución en botellas de vidrio en la obscuridad.

B. SILICATO DE SODIO

1. Disolver 10.5 gr de Metasilicato Pentahidratado de Sodio Na2SiO3.5H2O ó 14 gr de

Na2SiO3.9H2O en 1 litro de agua destilada.

2. Esterilizar la solución por filtración a través de un filtro de vidrio.

3. Guardarla en un envase de polipropileno esterilizado.

C. ACIDO HIDROCLORHIDRICO
1. Preparar una solución 0.1N-HCL.

2. Determinar por titulación la cantidad de esta solución necesaria para neutralizar 10 ml de la

solución B.2-Si × ml de 0.IN-HCL han sido utilizadas para neutralizar 10 ml de solución B.2,
multiplicar por 100 y esta cantidad llevarla a 1 litro de H2O destilada.

3. Esterilizar la solución ácida por filtración a través de un filtro de vidrio.

4. Guardarlo en una botella de polipropileno esterilizado.

D. SOLUCION DE VITAMINA

1. Disolver 10 mg de Tiamina hidroclórica y 10 mg de Biotina en 100 ml de H2O destilada.

2. Diluir 10 ml de solución D.1 en 100 ml de H2O destilada.

3. Esterilizar solución D.2 pasándola a través de un filtro de vidrio.

4. Guardarla en porciones de 10 ml en tubos estériles de tapa enroscada a menos de 20°C.

TABLA 14. MEDIO DE GUILLAR “F/2” (J. STEIN, 1979)

Nutrientes Mayores Solución Primaria

NaNo3 7.5 % w/v

NaH2PO4.H2O 0.5 % w/v

NH4Cl 2.65 % w/v

Na2SIO3.9N2O 3 % w/v (calentar para disolver)

Usar un mililitro de estas soluciones por litro de agua de mar, para preparar el medio “F/2”.
Sugerencia: Preparar el NaNO3 junto con NaH2PO . H2O en 100 mililitros.

Metales Traza Solución Primaria

CuSO4.5H2O 0.98 % w/v

ZnSO4.7H2O 2.2 % w/v

ZnCl2 1.05 % w/v

CoCl2.6H2O 1.0 % w/v

MnCl2.4H2O 18 % w/v

Na2MnO4.2H2O 0.63 % w/v

Es conveniente hacer las soluciones primarias en forma individual.

y con una concentración menor de 106 más concentrada que en el medio “F/2”. Solución Primaria
de Metales Traza.
 A. Con “Secuestrante Férrico” (Cloruro Férrico):

Disolver 5 gr del Secuestrante Férrico en 900 ml de agua destilada y añadir 1 ml de cada una de las
soluciones primarias de metales

traza preparados anteriormente; aforar a un litro y asegurar que el pH quede cerca de 4.5. Use 1
ml de esta solución por cada litro

de agua de mar para hacer el medio de cultivo. Agua de mar filtrada (5μ, 10μ, etc.) y de ser posible
irradiada con UV.

B. Con EDTA y Cloruro Férrico (FeCl.6H2O)

Disuelva 3.15 g de FeCl.6H2O ó 4.36 de EDTA (Na2) en 900 ml de agua destilada, agregue 1 ml de
cada una de las soluciones

stock primarias de metales traza y afore a 1 litro, asegure un pH de 2.0.

Use 1 ml de esta solución por litro de agua de mar para preparar el medio “f/2”.

Solución Primaria de Vitaminas

Solución Primaria de Biotina: Se prepara a partir de cristales de Bl, disolver 10 mg de biotina en 96

ml de agua destilada.

Haga esta solución ligeramente ácida para ser autoclavada y manténgase en un congelador.

Solución de Bitamina B12: A partir de Cyanocobalamina U.S. de 1000 mg/ ml solución inyectable.
Tomar 1 ml y aforarlo en 100

ml de agua destilada. La solución se acidifica para ser autoclavada y se congela.

Solución Primaria de Vitaminas

Tomar 1 m de la solución primaria de Biotina y 0.1 ml de la solución stock primaria de B12, aforar a
100 ml con agua destilada

y añadir 20 mg de Tiamina HCl.

Se pueden preparar ampolletas de 2, 5 ó 10 ml y almacenarlas estériles (acidificas) en el

congelador.

Use ½ ml de esta solución por cada litro de agua de mar para preparar el medio “f/2”.

Preparación del Buffer “Tris”

Tome 50 g de “Tris” y disuélvase en 200 ml de agua destilada y ajuste el pH a 7.2 en HCL. Use de 1
a 5 ml por litro de medio antes

de la autoclave, ajustando el pH a 7.4 (recomendado usar 1 ml por litro cuando el pH del medio es
7.9–8.2).
TABLA 15. MEDIO DE CULTIVO (AGUA DULCE) (Guillard, In: Stein, 1979) Guillard (comunicación
personal a J. Steinn, 1973. Handbook of phycological methods, Culture Methods and Growth
Measurements. Cambridge at the University Press: 448 pp.

a. Macronutrientes:
CaCl2.2H2O 36.76 g/l
MgSO4.7H2O 36.97 g/l
NaHCO3 12.60 g/l
K2HPO4 8.71 g/l
NaNO3 85.01 g/l
Na2SiO3.9H2O 28.42 g/l
De esta solución rotulada como a se obtiene 1 ml y se
le adiciona a 1 litro de agua esterilizada.
b. Micronutrientes:
Na2EDTA 4.36 g/l
FeCl3.6H2O 3.15 g/l
CuSO4.5H2O 0.01 g/l
ZnSO4.7H2O 0.022 g/l
CoCl2.6H2O 0.01 g/l
MnCl24H2O 0.18 g/l
Na2MoO4.2H2O 0.006 g/l
De esta solución rotulada como b, se obtiene 1 ml y se le adiciona a 1 litro de agua
esterilizada.
c. Vitaminas:
Thiamine. HCl 0.1 mg/l
Biotin 0.5 g/l
Cyanocobalamina 0.5 g/l
De esta solución rotulada como c, se obtiene 1 ml y se le adiciona a 1 litro de agua
esterilizada.
d. Tris:
Tris (Hydroxymethyl)- 50.g/200 ml H2O
Aminomethano dest
(Cuando el cultivo se encuentra axénico el tris puede reemplazarse por
Glycylaglycine). De esta solución rotulada como d, obtener 2 ml y adicionar al litro
de agua esterilizada que se está preparando el cultivo. Una vez preparado el
medio de cultivo, se debe hacer ajuste de pH a 7.2 con HCl cuidadósamente para
no obtener el pH ácido.