Practica - 1 - Micros

LABORATORIO N° 1
OBSERVACION DE MICROORGANISMOS
Raúl Omar Gallegos y Marcia Quequezana
I. OBJETIVO
Conocer sus partes y su función, así como el cuidado, manejo y utilidad en el Laboratorio
de Bioprocesos.
II. FUNDAMENTO.
El microscopio es indispensable en el Laboratorio de Bioprocesos para el estudio de

la morfología y estructura de los microorganismos, así como su reacción a diferentes
colorantes, lo cual, junto con otros criterios, permitirá su identificación, por lo tanto,
es importante conocer su adecuado manejo.
Antonio van Leeuwenhoek, en 1676, gran apasionado en pulir lentes que utilizaba
para examinar gran variedad de materiales, fue el primero en observar bacterias y
protozoarios en agua de lluvia, en infusiones diversas y en su sarro dental. La
máxima amplificación que logró Leeuwenhoek en los diversos microscopios que
construyó fue de 300 diámetros.
La perfección del moderno microscopio compuesto facilita intensamente el
estudio de la morfología de microorganismos y por lo menos de algunas de las
grandes estructuras de la célula bacteriana.
A finales del siglo XIX surgieron avances importantes en Microscopía, período de
gran progreso en Microbiología.
CONCEPTOS BÁSICOS DE MICROSCOPIA
MICROSCOPIO OPTICO.
Se usa para aumentar el tamaño de la imagen aparente de los objetos, lo cual
permite observar los detalles estructurales de los microorganismos.
El microscopio óptico normal que se usa para observar bacterias y otros organismos
celulares es un microscopio compuesto, el cual está provisto de una fuente
luminosa, una lente condensadora de luz que la dirige hacia el objeto a observar y
dos juegos de lentes que ayudan a la amplificación de la imagen. A través de la
refracción o reflexión de los rayos luminosos mediante el sistema de lentes del
microscopio, se forma la imagen del objeto, que es más grande que el objeto mismo,
permitiendo el examen de sus estructuras en detalle.
AMPLIFICACION
La capacidad amplificadora de un microscopio compuesto es el producto del
aumento individual de los oculares y los lentes objetivos. Un microscopio típico que
se usa en la microbiología tiene objetivos con poder de resolución de 10X, 40X y
100X y oculares de 10X, por lo cual es capaz de amplificar la imagen de una muestra
100, 400 y 1000 veces.
En un aumento de 1000X, se pueden visualizar las bacterias y microorganismos
eucariotas, pero los virus y muchos de los detalles finos de las estructuras bacterianas
no se pueden ver.
PODER DE RESOLUCION
Es el espacio de máxima aproximación entre dos puntos, al que aún se pueden
observar claramente como dos entidades independientes.
El poder de resolución de un microscopio depende de la longitud de onda de la luz y
a la propiedad de las lentes conocidas como la apertura numérica (AN). El límite del
poder de resolución de un microscopio es aproximadamente igual a 0.61/AN que para
un microscopio óptico es de alrededor de 200 nm (nanómetros). A menor longitud de
onda de la luz y AN de las lentes, será mejor el poder de resolución del microscopio.
APERTURA NUMERICA
Esta expresión, que suele abreviarse AN, indica la cantidad de luz que entra en un
objetivo desde un punto del campo del microscopio, es muy importante en el Poder
de resolución de las lentes.
La AN de una lente depende del índice de refracción (N) del medio que llena el
espacio entre el objeto y la parte frontal del objetivo, y del ángulo (μ) de los rayos de
luz más oblicuos que puedan entrar al objetivo. La fórmula para calcular la AN es:
AN = N x sen μ/2
El aire tiene un índice de refracción de 1.0, que limita la resolución que se puede
obtener, pero se puede incrementar la AN poniendo aceite de inmersión entre el
espécimen y el objetivo, aumentando así el poder de resolución del microscopio. El
aceite de inmersión tiene un índice de refracción de 1.5, lo que aumenta AN y mejora
el poder de resolución del microscopio.
TIPOS DE MICROSCOPIO
Microscopios ópticos.
Simple. Contienen sólo una lente o lupa.
Compuesto. Tiene varias lentes combinadas, capaces de producir gran aumento.
Microscopio Electrónico
El poder de resolución del microscopio electrónico es mucho mayor que el del

microscopio óptico pudiéndose incluso observar estructuras moleculares como
proteínas y ácidos nucleicos, pero debido a que los haces electrónicos poseen bajo poder
de penetración, es necesario emplear técnicas especiales para la obtención de cortes
ultra finos que permitan la observación de las muestras.
Hay dos tipos básicos de microscopios electrónicos: El microscopio electrónico de
transmisión (MET) y el microscopio electrónico con barrido (MEB).
Para el estudio de las estructuras internas de las células es esencial un microscopio MET.
En el MET se utilizan electrones en lugar de rayos de luz, y la función de las lentes la
realizan electromagnetos, operándose en todo momento con alto vacío.
Cuando sólo se pretende estudiar las estructuras externas de una muestra, no son
necesarios cortes ultrafinos, pudiéndose realizar la observación directa en MET, después
de aplicar una tinción negativa. También se puede usar el MEB.
Todos los microscopios electrónicos tienen cámaras incorporadas que permiten
Fotografiar las muestras denominándose microfotografías electrónicas.
METODOS DE MICROSCOPIA
Examen de organismos vivos.
La forma más simple de examinar las bacterias y otros microorganismos vivos es
suspenderlos en agua u otro líquido, colocar una gota de esta suspensión en un portaobjetos
ordinario y encima un cubreobjetos. Existen otros métodos como son el de gota pendiente y
el microcultivo.
Examen de Microrganismos teñidos.
Examen de bacterias teñidas.
La forma y estructura de las bacterias se revelan con más claridad cuando son desecadas sobre
un portaobjetos y son coloreadas o examinadas contra un fondo teñido. Existen diversas
técnicas de tinción.
PARTES DEL MICROSCOPIO Y SU FUNCION.
Base, soporte y brazo.

Sirven para mantener en posición las partes ópticas esenciales. La base y el brazo son
fuertes, para disminuir la vibración.
Tubo intercambiable.
Su función es ajustar la longitud mecánica del tubo, es decir, la distancia entre la lente del
ocular que está arriba y la unión del objetivo al revólver, que está abajo.
Tornillos macrométrico y micrométrico.

Sirven para enfocar, logrando que la muestra se vea nítida y clara, ya que
permiten subir y bajar todo el cuerpo del tubo junto con sus lentes y en
microscopios modernos, junto con la platina. El tornillo micrométrico permite
subir o bajar muy ligeramente.
Platina.
Parte del microscopio donde se coloca la muestra que va a ser examinada.
Pinzas de la Platina.
Estas sirven para sujetar la muestra a examinar.
Tornillos para desplazar la Platina.

Estos sirven para mover la muestra que está sobre la platina, hacia arriba, abajo,
derecha ó izquierda, hasta enfocar el campo adecuado.
Fuente de Luz.
Se encuentra colocada debajo del objeto; ésta emite la luz que pasa por el
condensador, para después iluminar la preparación.
Condensador.
Antes de que la luz alcance la muestra en la platina, se condensa y enfoca a través
de una gran lente condensadora que se halla bajo la platina.
Diafragma.
Sirve para controlar la luz a través del condensador.
Lentes objetivo.
Pueden ser: secos o de inmersión.
Öbjetivo de pequeño aumento ó "Seco débil" (10X).
Útil para observar microorganismos grandes, p. ej. Protozoarios. Este objetivo
está marcado con “3” ó “2/3”, que significa 2/3 de pulgada ó 16 mm. Tiene una
lente más grande que el de los otros objetivos.
Öbjetivo de gran aumento ó "Seco fuerte" (40X).
Está marcado con “6” ó “1/6” que significa 1/6 de pulgada ó 4 mm.
Öbjetivo de inmersión en aceite.
Este objetivo es indispensable para el examen de frotis teñidos de bacterias.
Este objetivo está marcado “oil inmer” o “homoginmer” que significa
inmersión homogénea. También está marcado “1/12” (1/12 de pulgada, 1.9
mm o 1.8 mm). Las letras “N.A.” indican la apertura numérica. Con mayor
valor N.A, mayor será el detalle que revela el objetivo. Las cifras 16 mm, etc.,
se refieren a la distancia focal equivalente, o sea, nos da una idea de la
distancia que deberá haber entre el extremo del objetivo y la muestra al
enfocarse.
Lentes oculares.
Son tubos cortos, cada uno con dos lentes, cuya función es amplificar la imagen. Están
marcados “5X”, “10X”, etc. indicando que amplían la imagen del objetivo 5 veces, 10
veces, etc.
III. PROCEDIMIENTO
Observar los siguientes videos:
a) El microscopio y sus partes

https://www.youtube.com/watch?v=caTTL5zxwH0
b) Uso del microscopio

https://www.youtube.com/watch?v=H75_-bgcavY
c) Bacterias del yogurt. Observación real al microscopio
https://www.youtube.com/watch?v=IfeqdObn2H4
https://www.youtube.com/watch?v=RLClwfyeYeA
d) Microscopio electrónico
https://www.youtube.com/watch?v=zRSXyKW7-i8
e) Microscopio electrónico de Barrido del ITM

https://www.youtube.com/watch?v=Xx0PJtRTIYQ
IV. CUESTIONARIO
1. Hacer un esquema del recorrido de la luz a través de un microscopio óptico compuesto.
2. Define en tus propias palabras:

a.-Microscopía electrónica
b.- Microscopía en campo oscuro
3. Mencionar tres ejemplos de cómo puedes utilizar las técnicas de microscopia antes
mencionada. Señalar cuál de las técnicas se está describiendo.
4. Mencione las diferencias entre los lentes oculares y lentes objetivos de un

microscopio óptico compuesto.
5. ¿Por qué razón las muestras que se observan en el microscopio compuesto deben ser
delgadas y utilizar un medio de montaje?
6. Cuando se usa el microscopio óptico: ¿las imágenes se observan derechas o invertidas?,

¿Por qué?
7. ¿Qué microorganismos se pueden observar con el lente objetivo de 100X?
8. ¿Qué se puede observar con un microscopio electrónico?
9. ¿Qué diferencias hay entre las observaciones con microscopio electrónico de transmisión
(MET) y microscopio electrónico de barrido (MEB)?
10. En el video de observación de bacterias de yogurt, ¿cómo se diferencia cuáles son los
estreptococos?
V. BIBLIOGRAFIA
• De Erice, E. 2012. Biología la ciencia de la vida. Mc Graw Hill.

• Gama, MA. 2010. Biología, competencias, aprendizaje, vida.2. Pearson. México.
• Ocampo.MP. 2011.Biología 1 .ST. México.

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El microscopio es indispensable en el Laboratorio de Bioprocesos para el estudio de

CONCEPTOS BÁSICOS DE MICROSCOPIA

Compuesto. Tiene varias lentes combinadas, capaces de producir gran aumento.

El poder de resolución del microscopio electrónico es mucho mayor que el del

PARTES DEL MICROSCOPIO Y SU FUNCION.

Base, soporte y brazo.

Tornillos macrométrico y micrométrico.

Tornillos para desplazar la Platina.

a) El microscopio y sus partes

b) Uso del microscopio

e) Microscopio electrónico de Barrido del ITM

2. Define en tus propias palabras:

4. Mencione las diferencias entre los lentes oculares y lentes objetivos de un

6. Cuando se usa el microscopio óptico: ¿las imágenes se observan derechas o invertidas?,

7. ¿Qué microorganismos se pueden observar con el lente objetivo de 100X?

8. ¿Qué se puede observar con un microscopio electrónico?

• De Erice, E. 2012. Biología la ciencia de la vida. Mc Graw Hill.

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