MICROSCOPÍA

ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA y PARASITOLOGÍA

SESION N°:02

DOCENTE: Dr. JORGE LUIS LÓPEZ BULNES

SEMESTRE ACADÉMICO: 2020-2

 MICROSCOPIA
 Un microscopio es un instrumento que amplifica una imagen
 Es la resolución y no el aumento la que dicta los límites que
pueden ser observados.
 Para el M óptico los límites de resolución están en 0.2um y
para el M electrónico los límites aumentan hasta 1000 veces
 La capacidad de aumento de un M compuesto se calcula
multiplicando el aumento del objetivo por la del ocular
 El poder de resolución está en función de la longitud de onda
de la luz y de la apertura numérica propiedad de la lente que
integra el objetivo
 La mayoría de los microscopios tienen oculares de 10 a 15X y
objetivos de 10 a 100X. Con los objetivos de 100X se usa el
aceite de inmersión.
Historia del microscopio óptico

• Los primeros microscopios datan de 1610.

Fueron inventados por Galileo Galilei.
• Algunos científicos de la época, como
Malpighi o Hooke, los utilizaron.

Microscopio de Hooke
(1665)
Historia del microscopio óptico

• A mediados del siglo XVI, el

holandés Anton van Leeuwenhoek
fabricó microscopios con lentes
esféricas. Con ellos realizó
numerosas observaciones.
• Algunos de aquellos microscopios
superaban los 200 aumentos.

Microscopio de
Leeuwenhoek
Historia del microscopio óptico

• Poco a poco, los microscopios fueron

sufriendo mejoras que permitieron
hacer nuevos descubrimientos en el
campo de la biología celular.

Microscopio del
siglo XIX
Historia del microscopio óptico

• Los microscopios ópticos modernos

permiten aumentar la imagen más de
mil veces

Microscopio
actual
 El microscopio óptico
• Está formado por un sistema de lentes y emplea para iluminar un haz
de luz. Aumenta las imágenes hasta 1000 veces.
• Sus principales componentes son:

Oculares. Lentes a través de las que se

observa la preparación ampliada.

Objetivos. Lentes que aumentan el tamaño

de la imagen.

Platina. Sobre ella se coloca la

preparación, que se sujeta con una pinza.

Iluminación. Espejo o lámpara que ilumina la

preparación.

Tornillos de enfoque. Mueven la platina arriba

o abajo para enfocar la imagen.
TIPOS DE MICROSCOPIOS
Microscopio
Óptico Simple Lupa

Microscopio
óptico M.O. Normal
Microscopio
Campo oscuro
Óptico
Contraste de fases
Compuesto
Fluorescencia
Tipos de
microscopios

Transmisión
Microscopio Barrido
electrónico Digital
Efecto túnel o cuántico
El microscopio electrónico
• Está formado también por un sistema de
lentes complejo pero emplea para iluminar
un haz de electrones en vez de luz.
Aumenta las imágenes hasta un millón de
veces.
• Sus principales componentes se
encuentran en el interior del sistema y
son:

Oculares. Lentes a través de las que

se observa la preparación ampliada
(externos).

Objetivos. Lentes que aumentan el

tamaño de la imagen (internos).

Iluminación. Cañón de electrones que

genera un haz que puede atravesar la
muestra o rebotar en ella (interno).
 Insectos vistos en microscopio a 100x

Hebra de cabello vista a 40X y 100X

1
15
PARTE ÓPTICA

Sistema de
iluminación:
fuente de luz,
condensador y
diafragma
Lentes:
objetivos y
oculares
SISTEMA DE ILUMINACIÓN: FUENTE DE LUZ
Suele ser una
lámpara halógena de
intensidad graduable
Se enciende y apaga
con un interruptor
Filtro
En el exterior puede
tener un filtro

Lámpara Interruptor y
graduación de la luz
Partes Ópticas
 Condensador: Es un lente
colocado debajo de la platina,
cuya función es convertir los
rayos divergentes de luz en una
corriente paralela de rayos que
atraviesan el objetivo estudiado.
Concentra la luz de la lámpara en
un punto de la preparación
 Diafragma o iris (está dentro del
condensador):si se cierra mejora el
contraste, pero empeora la
resolución Instrumento mecánico
colocado debajo del condensador,
regula la cantidad de luz que pasa a
través del objeto a observarse.
LENTES: OBJETIVOS
 Están colocados en el revolver
 Tienen un sistema de
amortiguación
 Un anillo coloreado indica los
aumentos
 Son de 4, 10, 40 y 100 (inmersión)
aumentos
 Cada objetivo está compuesto de
un sistema de varios lentes, los
cuales enfocan el patrón de luz
formado por el objeto en estudio
para convertirlo en una imagen
real.
 Partes Ópticas
Objetivos
 Objetivo de rastreo (4X):
Se observa el espécimen completo.
Se usa para encontrar imagen.
 Objetivo de baja potencia (10x):
Se usa para enfocar la imagen
 Objetivo de alta potencia (40x):
Se usa para ver la imagen, con
mayores detalles.
 Objetivo de inmersión de aceite
(100x): Se usa con aceite, el mismo
se añade antes de cambiar de
objetivo.
OBJETIVOS

Rojo
4x
Amarillo
10x

Blanco
100x Azul
40x

Amortiguación
LENTES: OCULARES

Oculares
Ajuste de la
distancia interpupilar
Partes Ópticas

 Ocular - La función del ocular

es aumentar la imagen
formada por el objetivo.
 Algunos oculares presentan un
punto que sobresale en el
campo microscópico. Este es
un indicador que se usa para
facilitar la posición de algún
punto específico en su
observación. Este indicador se
mueve haciendo girar el lente
ocular.
OCULARES: 10x; 15x; 20x
Observacion
a travez de
oculares
¿Cómo calcular la magnificación total?

La magnificación total del microscopio se puede

determinar multiplicando la magnificación del objetivo por
el ocular.

Magnificación Magnificación Magnificación

Objetivo
objetivo ocular total
Rastreo 4X 10X 40X

Baja potencia 10X 10X 100X

Alta potencia 40X 10X 400X

Partes mecánicas
 Tornillo Macrométrico: Es el
tornillo de mayor tamaño. Está
ubicado en la parte superior del
microscopio. Se usa con los
objetivos de 4x y 10x.

 Tornillo Micrométrico:Este se
utiliza para movilizar la platina a
distancias muy pequeñas, por lo
tanto se utiliza principalmente
para afinar el enfoque. Unico a
usarse cuando observamos
objetos con el objetivo de
magnificación alta. Da un enfoque
preciso de la imagen, se usa con
los objetivos de 40x y 100x.
SISTEMA DE ENFOQUE
Freno

Tornillo
macrométrico

Tornillo
micrométrico
Partes mecánicas
 Platina: Está colocada debajo de
los objetivos y se utiliza para
colocar las laminillas.

 Ganchos o Pinzas: Colocados

sobre la platina para sujetar la
laminilla en la posición correcta.

 Perillas Ajustadoras de la
platina:Dan movimiento al carro
mecánico.
PLATINA

Pinza

Escala
 Perillas
Ajustadoras
de la
platina
SISTEMA DE SOPORTE O ESTATICO

Tubo

Brazo

Brazo: Apoya la parte

superior y provee para
su manejo.
Píe

Base o Pie: Parte

inferior por
donde se sujeta
para su cargado.
 SISTEMA DE AJUSTE
Anillo de
ajuste de los
oculares

Tornillo que
permite
mover el
cabezal

Tornillos del
condensador

Tornillos
Palanca de reguladores
cierre del de la platina
diafragma
PARTE MECÁNICA QUE SE PUEDE
DESMONTAR

Brazo

Tornillos
Cabezal de la
platina

Oculares

Condensador
Objetivos
MATERIAL NECESARIO: PORTAS Y
CUBRES
Montaje de lamina en la
platina
ACEITE DE INMERSIÓN
Hoy no son de
madera de cedro,
sino sintéticos
Los hay de baja,
media y alta
viscosidad
Su empleo es
imprescindible con el
objetivo de inmersión
(100x)
MANEJO DEL MICROSCOPIO

No poner la Mirando por fuera

preparación al revés subir la platina
Regular la luz a Enfocar y ajustar
intensidad media Pasar al siguiente
Ajustar condensador aumento y enfocar
y diafragma al medio Al acabar retirar la
Empezar por poco preparación
aumento Apagar la luz
PARÁMETROS ÓPTICOS

Aumento
Poder de
resolución
Nº de campo
Profundidad de
foco
Contraste
AUMENTO

Se calcula
multiplicando
el aumento del
objetivo por el
aumento del
ocular
PODER DE RESOLUCIÓN

Distancia si dos
puntos se distinguen
Mayor, cuando menor
es la longitud de onda
Mayor, cuanto mas
grande es la apertura
numérica
Mayor, con aceite de
cedro
Número de campo

Es el diámetro
de la imagen
observada a
través del
ocular,
expresado en
milímetros
CONTRASTE
Diferencia de
absorción de luz
entre el objeto y
el medio
Puede
aumentarse con
las tinciones
 PROCEDIMIENTO:
Luego de haber usado diapositivas a través del aula virtual,
se proyectará un video realizado por los docentes del curso
para complementar la enseñanza.

Asi mismo se usara un microscopio virtual para la observación de

la letra “e” usando el link
http://www1.udel.edu/biology/ketcham/microscope/scope.ht
ml
 Parte Experimental usando
microscopio virtual

usar el link
http://www1.udel.edu/biology/ketcham/microscope/scope.html
Usando la lamina con la letra "e".
Coloque la laminilla en la plataforma en la
misma posición que la observó. “Mirando
hacia usted”.
Enfoque con el objetivo 4X. (Para enfocar
coloque el lente 4X. Utilice el macrómetrico
vaya girando suavemente mientras observa la
imagen. Cuando obtenga una imagen nítida
no mueva más el tornillo).
Usando la lamina con la letra "e".
Mientras observa a través del
microscopio, mueva la lamina hacia la
izquierda.
¿Hacia dónde se mueve la imagen?

Repita nuevamente el proceso pero

mueva la hacia la derecha.
¿Hacia dónde se mueve la imagen?
 Usando la laminilla con la letra "e".

Mueva la lamina hacia abajo.

¿Hacia dónde se mueve la imagen?

Mueva la lamina hacia arriba(hacia

usted).
¿Hacia dónde se mueve la imagen?
Luego de enfocar la lamina de la letra “e”
utilizando el lente 4X, cambie el lente al
10X girando el revólver.
La imagen debe permanecer enfocada. Si
necesita aclarar más la imagen utilice
solamente el tornillo de ajuste
micrómetro.
Dibuje la imagen que observa en el campo
visual.
Cambie ahora del objetivo 10X al 40X.
La imagen debe permanecer en foco.
Si necesita aclarar más la imagen
utilice solamente el tornillo de ajuste
micrómetro.
 Dibuje la imagen que observa en el campo
visual.
El nombre de célula (del griego micros, pequeño, y skopein, ver) fue
usado por primera vez por Robert Hooke en 1665 (Robertis, 2005)
cuando con la ayuda de un microscopio miro un trozo de corcho y
encontró una especie de “celdillas de panal de abejas” a las que llamo
células (Karp, 2008).
La célula es la unidad morfológica y funcional presente en todo ser vivo.
Según el número de células que posean los organismos estos pueden
ser: unicelulares como por ejemplo: las bacterias y protistas o
pluricelulares como los vegetales, animales y hongos.
El conocimiento de la célula fue avanzando según avanzaba la
microscopia y es así como se va estableciendo La Teoría celular que
surge como producto de estudios realizados por Schwann, Schleiden,
Virchow, y tiene como principales enunciados lo siguiente:
1) Todos los organismos están compuestos de una o mas células,
2) La célula es la unidad fisiológica de la vida,
3) Las células solo pueden originarse por división de una célula
preexistente.
Las células son de dos tipos: procariotas y eucariotas.
Las células procarióticas, son estructuralmente mas simples, presentan su
material genético concentrado en una región determinada del citoplasma
no definida por una membrana, esta región se denomina “nucleoide”, la
mayoría no presenta sistema de endomembranas pero si el organelo
ribosoma. Un ejemplo de estas células encontramos en las bacterias.
Las células eucariotas pueden ser vegetales y animales. Sus
características principales son: tener un núcleo rodeado de una
membrana nuclear, citoesqueleto, sistema de endomembranas. Los
protistas (Reino protista), hongos (Reino Fungi), plantas (Reino Vegetal) y
animales (Reino Animal) están formados de células eucariotas.
Ninguna célula puede ser considerada típica y dentro de la gran variedad
de células todas comparten la presencia de tres características
estructurales: 1) la membrana plasmática que define el límite del
material vivo, 2) la región del DNA que almacena la información genética
y 3) el citoplasma o región contenida dentro de la célula que no incluye la
región del DNA.
células eucariotas
células eucariotas
células eucariotas
La alternativa a la organización eucariótica de la célula la ofrece
la llamada célula procariota. En estas células el material
hereditario se encuentra en una región específica denominada
nucleoide, no aislada por membranas, en el seno del citoplasma.
Las células eucariotas no cuentan con un compartimento
alrededor de la membrana plasmática (periplasma), como el que
tienen las células procariotas.

catafilo de cebolla
espermatozoide
El conocimiento detallado de la arquitectura celular se basa en los diferentes
tipos de observaciones al microscopio, con la finalidad de visualizar células
vivas, muertas o fijadas.
La naturaleza de las imágenes depende del tipo de luz y de la forma en que se
preparó la muestra, la fijación puede ser física o química, siendo el
procedimiento de preservación de la estructura celular,
facilitando posteriormente el uso de colorantes ya sean éstos de
naturaleza ácida o básica. Cada técnica está diseñada para destacar
características estructurales particulares de la célula.
El ojo normal no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es menor
a una décima de milímetro. (0,1mm)
En el microscopio óptico, el poder separador máximo conseguido es de 0,2
décimas de micra (0,2um) y en el microscopio electrónico, el poder separador
llega hasta 10 ángstrom (10 Aº) o 0,1 décimas de nanómetros (0,1nm)
 Por lo que el poder de resolución, es la capacidad que tiene el instrumento de poder
distinguir o discernir dos puntos situados uno al lado del otro en una muestra y está
relacionado inversamente con el límite de resolución que es la mínima distancia existente
entre los dos puntos a ser observados. Es decir a mayor poder de resolución menor límite
de resolución. El límite de resolución tiene un valor diferente para cada objetivo y se calcula
de la siguiente manera:
L.R = 0.61 x λ
AN
- 0.61 = constante numérica
- λ = Longitud de onda de la luz visible, expresado el promedio como 550 nm.
- AN = Apertura numérica del objetivo que es una medida de la capacidad para colectar
rayos de luz que pasan a través de la muestra. El valor de AN está indicado en cada
objetivo.
Otra característica importante del microscopio es el número de aumentos. Para calcular el número de
aumentos de una muestra observada a través del microscopio, basta multiplicar el aumento grabado
en el lente ocular por el aumento grabado en el lente objetivo. Por ejemplo, si estamos utilizando un
ocular de 10X y un objetivo de 40X, el aumento a que estamos viendo la preparación será: 10X x 40X =
400X, lo cual quiere decir que la imagen del objeto está ampliada 400 veces.
 PROCEDIMIENTO:
Para el reconocimiento de la célula procariota y
eucariota, se proyectará un video realizado por los
docentes del curso: luego se realizará una exposición
usando diapositivas a través del aula virtual para
complementar la enseñanza.

Asi mismo se usara un microscopiovirtual para la

observación de células animales (mucosa bucal)
usando el link
http://www1.udel.edu/biology/ketcham/microscope
/scope.html
Reconocimiento de Células Procariotas
Aceite de inmersión
COLORACION DE GRAM.
La coloración de Gram es un método descrito por primera vez por
el bacteriólogo Danés Christian Gram en una publicación en 1884. El
método de tinción es el procedimiento de coloración más utilizado
en Microbiología. La reacción de la tinción de Gram se basa en la
cantidad de peptidoglucano que se encuentra en las paredes
celulares de estas bacterias. Las bacterias Gram positivas tienen
muchas capas de peptidoglucano, las cuales a su vez, sostienen
moléculas de ácido teicoico. El ácido teicoico reacciona con el cristal
violeta y el yodo utilizado en este proceso de tinción. Un complejo
de las moléculas cristal violeta-yodo-ácido teicoico es muy difícil de
remover. Como la pared celular de las células Gram positivas retiene
estos compuestos, es más difícil decolorar una célula Gram positiva
que una Gram negativa. Una mezcla de alcohol remueve el cristal
violeta de la célula Gram negativa, pero no de la Gram positiva. Esta
mezcla de alcohol también disuelve mucho de la capa exterior de
lipopolosacárido de la pared celular de la pared Gram negativa, lo
cual acelera la remoción del colorante primario cristal violeta de
estas células. Cuando otro colorante, usualmente safranina, se
añade, las células Gram positivas siguen de color azul-violeta
mientras que las Gram negativas absorben el color rojizo de la
safranina. Al final del procedimiento de tinción, las células Gram
positivas serán del color del cristal violeta, o colorante primario, y
las células Gram negativas serán del color de la safranina que es el
colorante de contraste
La teoría aceptada, asocia la
gran positividad con el
complejo que se forma entre el
cristal violeta y el ribonucleato
de magnesio de la pared
celular bacteriana en presencia
del iodo, que actúa como
mordiente estimulando ciertas
porinas de la pared de las
bacterias resistiendo así la
acción solvente del alcohol-
cetona.
Reconocimiento de Células Vegetales
 Célula Eucariota - Vegetal
Observación de célula en la cebolla

1. Extraer el tejido epidérmico de la catáfila de

la cebolla.

https://www.lavanguardia.com/comer/materia-prima/20180716/45869914237/cebolla-alimentos-propiedades-beneficios-valor-nutricional.html
 Célula Eucariota - Vegetal

Observación célula de la cebolla

2. Extender sobre la lámina portaobjetos. 3. Colorear con una gota de lugol y cubrir la
preparación con una laminilla o
cubreobjetos.
 Célula Eucariota - Vegetal
Observación célula de la cebolla

4. Observar con el objetivo 4x, 10x, y 40x, y dibujar las partes de la

célula vegetal.

http://laboratoriodeccnnencasa.blogspot.com/p/observacion-de-celulas-en-la-epidermis_22.html
 Aumento : 40 X

Campo: Células epiteliales

Objetivo:
  Células epiteliales de la
Catáfila de Cebolla

Leyenda
a) Pared celular
b) Citoplasma
c) Núcleo

Aumento : 400 X

Objetivo:
Reconocimiento de Células Animales
 Célula Eucariota - Animal

Observación de célula Animal

1. Obtener una muestra de la mucosa bucal

con un hisopo.
 Célula Eucariota - Animal

Observación de célula Animal

2. Hacer un extendido sobre la lámina 3. Dejar secar por 10 minutos.

portaobjeto.
 Célula Eucariota - Animal

Observación de célula Animal

4. Colorear con azul de metileno por 5
minutos.
 Célula Eucariota - Animal
Observación de célula Animal

5. Enjuagar con agua corriente y secar. 6. Observar a 5X, 10X y 40X.

Observar y dibujar las partes
de la célula animal.
  Células epiteliales de la
Mucosa Bucal.

Leyenda
a) Membrana Plasmática
b) Citoplasma
c) Núcleo

Aumento : 400 X

Objetivo:
 Parte Experimental usando
microscopio virtual para la
observacion de Celulas
Animales (Mucosa Labial)

usar el link
http://www1.udel.edu/biology/ketcham/microscope/scope.html
Usando la lamina con “mucosa labial".

Coloque la lamina en la plataforma en la

misma posición que la observó. “Mirando
hacia usted”.
Enfoque con el objetivo 4X. (Para enfocar
coloque el lente 4X. Utilice el macrómetrico
vaya girando suavemente mientras observa la
imagen. Cuando obtenga una imagen nítida
no mueva más el tornillo).
Luego de enfocar la lamina utilizando el
lente 4X, cambie el lente al 10X girando el
revólver.
La imagen debe permanecer enfocada. Si
necesita aclarar más la imagen utilice
solamente el tornillo de ajuste
micrómetro.
Dibuje la imagen que observa en el campo
visual.
Cambie ahora del objetivo 10X al 40X.
La imagen debe permanecer en foco.
Si necesita aclarar más la imagen
utilice solamente el tornillo de ajuste
micrómetro.
 Dibuje la imagen que observa en el campo
visual.
ENLACES

 http://www.euita.upv.es/varios/biologia/Temas/tema_1.htm#Objetivos%
20previstos
Tiene fotos e información resumida sobre todo lo concerniente a la célula
vegetal.

 http://www.euita.upv.es/varios/biologia/Temas/tema_1.htm
Temas varios de biología sobre todo células.

 http://www.biology.arizona.edu/cell_bio/tutorials/pev/main.html
Información sobre células, clasificación, fotografías y esquemas.
 ¡Muchas gracias!
Jorgel.lopez@upsjb.edu.pe