PRACTICA 9

ACIDO URICO Y GOTA

INTRODUCCION
El ácido úrico es el producto final del catabolismo de las purinas que forman parte de los
nucleótidos, ácidos nucleicos y nucleoproteínas en el hombre y primates (ver figura), en otros
mamíferos el ácido úrico puede ser oxidado hasta alantoina y en otros animales que no son
mamíferos la degradación puede llegar hasta urea y amonio. La concentración de ácido úrico en
el suero varía de un individuo a otro de acuerdo a diversos factores como la dieta, raza,
constitución genética, sexo, altitud en la que vive, etc. Sus niveles anormales en el suero son
consecuencia de una mayor formación en el organismo o defectos en su eliminación.
La hiperuricemia (niveles séricos de ácido úrico superiores a 7 mg%) determina en un alto
porcentaje la presencia de artritis gotosa. En estos pacientes se presenta el depósito de cristales
de ácido úrico y sus sales a nivel de las articulaciones y tendones, determinando una inflamación
muy dolorosa. En la gota se encuentra frecuentemente masas nodulares (tofos) de cristales de
urato monosódico en los tejidos blandos: También se observa en varios de estos pacientes la
formación de cálculos de ácido úrico a nivel renal. El diagnóstico definitivo de la gota requiere la
aspiración y examen del líquido presente en las articulaciones (líquido sinovial) o en los tofos de
la persona afectada. Usando microscopía de luz polarizada se debe confirmar la presencia de
cristales tipo aguja de urato monosódico.
En una cantidad importante de pacientes, la hiperuricemia que lleva a la gota es causada por la
menor excreción de ácido úrico. Esto se puede deber a defectos heredados o secundarios a otras
enfermedades como la acidosis láctica o la ingesta de drogas como diuréticos tiazídicos o
exposición al plomo. Los casos de gota por mayor producción de ácido úrico, son menos
frecuentes y en la mayoría de casos de origen aun no esclarecidos; sin embargo, en algunos
pacientes ha sido posible detectar mutaciones en el gen de la PRPP sinteasa localizado en el
cromosoma X. En el síndrome de Lesh Nyhan que es por defecto de la enzima Hipoxantina
Guanina Fosforibosiltransferasa hay un incremento en la disponibilidad de PRPP. En pacientes
con desórdenes mieloproliferativos que reciben quimioterapia tienen un aumento en la
disponibilidad de purinas que lleva a la mayor formación de ácido úrico, en otros casos la
hiperuricemia es una
manifestación secundaria a otros desórdenes, como cuadros de anemia hemolítica, alcoholismo y
la deficiencia de glucosa 6 fosfatasa (glucogenosis tipo 1ª).

AMP
5’ Nucleotidasa
Desaminasa INOSINA
AMP IMP
Purinoribonucleósido
Pi
ADA Fosforilasa
ADENOSINA Ribosa 5 P
HIPOXANTINA
XANTINA
OXIDASA

XANTINA
XANTINA
O OXIDASA
H
N
HN
O

O N
N H
H
ACIDO URICO

Figura Nº Degradación de nucleótidos púricos en el hombre

EXPERIMENTO

DETERMINACIÓN DEL ÁCIDO ÚRICO

Fundamento.
El ácido úrico es hidrolizado por la uricasa para rendir alantoina y peróxido de hidrógeno. Este
último es quien desarrolla color en presencia de un reactivo cromógeno (ácido 3,5 - Dicloro-2-
hidroxibenzosulfónico con 4 - aminofenazona)
Se entiende que la intensidad del color del complejo es directamente proporcional a la
concentración de ácido úrico en la muestra (suero, orina, etc.)
 ACIDO URICO

Uricasa

ALANTOINA + H2O2
Reactivo cromogénico
Peroxidasa
COMPLEJO DE COLOR

H2O

Procedimiento.
1. Para preparar la solución reactiva colocar todo el contenido del frasco (mezcla enzimática)
dentro del vial 2 (solución tampón) y mezclar suavemente hasta que se disuelva.
2. Teniendo en cuenta que la solución estándar viene lista para su uso, mida en dos tubos de
ensayo lo siguiente:

Reactivos Muestra Estándar

Suero o plasma heparinizado o con EDTA 50 l -----
Solución estándar ----- 50 l
Solución reactiva 2 ml 2 ml

3. Mezclar bien e incubar por 5 minutos a 37 ºC.

4. Medir las absorbancias de la muestra y del estándar frente al blanco de reactivo, teniendo en
cuenta que las absorbancias permanecen estables por 45 minutos.

Expresión de Resultados y Cálculos.

Complete lo siguiente:
Absorbancia de la muestra (M): 0.250
Absorbancia del estándar (Est): 0.325
Teniendo en cuenta que la concentración del estándar es de 10 mg%. estimar el Factor de
calibración y completar:
Factor de calibración:
Expresar la concentración del ácido úrico sérico en:
mg% moles/L
Interpretación de los Resultados.

Teniendo en cuenta los valores referenciales, haga la interpretación de los resultados obtenidos
en la determinación del ácido úrico.

Valores de Referencia (Normales).

Hombres: 3.4 a 7.0 mg % (200 – 420 moles /L)

Mujeres: 2.4 a 5.7 mg % (144 – 300 moles/L)
 TALLER Nº 9

ALTERACIONES EN EL METABOLISMO DE LOS NUCLEOTIDOS

Caso Clínico 1

N.S.T. es un empleado de 47 años de edad que asistió al servicio de emergencia de un hospital,

quejándose de un dolor muy intenso en el primer dedo del pie derecho y que había comenzado 6
horas antes de la consulta.
No había sufrido ningún trauma en ese dedo, pero al examen clínico aparecía rojo e hinchado.
Estaba con mayor temperatura y extremadamente doloroso a cualquier presión. El Paciente no
podía flexionar ni extender las articulaciones de dicho dedo y el movimiento pasivo de las
mismas le causaba un intenso dolor. El resto del examen clínico fue completamente normal.
Los exámenes de laboratorio resultaron normales, con excepción de una excreción urinaria de
ácido úrico de 1.21 g/24 hrs (V.N. 0.3 a 0.6 g/24 hrs.) y una concentración de ácido úrico en el
suero de 0.64 mmoles/L. Se obtuvo mediante aspiración con una aguja, una muestra de líquido
de la articulación comprometida y la observación bajo microscopía de luz polarizada reveló la
presencia de cristales semejantes a agujas y que se encontraban también fagocitados por
leucocitos. Este material fue informado como cristales de urato de sodio.
En Vista de lo anterior, nuestro paciente fue diagnosticado como gotoso y una vez mejorado el
cuadro agudo, se le indicó para su tratamiento Alopurinol por vía oral a la dosis de 150 mg dos
veces al día. A los pocos días de iniciado el tratamiento el ácido úrico sérico comenzó a bajar y
luego de varias semanas dichos valores ya estaban muy cerca de lo normal.
El Paciente fue controlado durante los meses siguientes, no volviendo a presentar un episodio
similar de artritis gotosa e igualmente no se constató manifestaciones sugerentes de la presencia
de cálculos renales de ácido úrico.

Caso Clínico 2
Nuestro paciente es ahora una niña de 22 meses de edad, única hija de un matrimonio entre
primos hermanos. Desde su nacimiento presentó una severa deficiencia de linfocitos T, que se
manifestó por infecciones respiratorias frecuentes, candidiasis y marcada linfopenia, menos de
500 linfocitos por microlitro de sangre. Se considera linfopenia en niños cuando el número de
linfocitos es menor
a 3000 por microlitro de sangre; normalmente los linfocitos T son cerca del 50 % del número
total de linfocitos.
La administración de vacuna contra la difteria, tos convulsiva y tétano produjo una mínima
respuesta en la niña.
Se practicó la determinación de la actividad de las isoenzimas de Adenosina Desaminasa (ADA)
en un lisado de hematíes de la paciente, haciéndose el mismo estudio en ambos padres y en dos
controles normales. Los resultados se muestran en la figura adjunta y corresponden a la
separación electroforética de las dos isoenzimas más importante de la ADA y su tinción para
determinar su actividad. La determinación espectrofotométrica de la actividad total de la ADA
demostró ausencia de actividad en los hematíes de la niña; en tanto que el padre y la madre
tenían actividades de ADA que correspondían al 50 % y 60 % de lo normal respectivamente.

Canaletas:
12345
1. Control normal (a)
2. Niña afectada
3. Madre
4. Padre
5. Control norma (b)

Figura: Representación esquemática del aspecto

del electroforetograma de las isoenzimas de ADA,
luego de su tinción para medir su actividad

En la niña deficiente de ADA, se determinaron los niveles de desoxinucleótidos de adenina en los

eritrocitos, obteniéndose los resultados que se muestran en la tabla siguiente.

TABLA 1.- Niveles de desoxinucleótidos de Adenina en los eritrocitos de la niña

afectada (nmoles/mL de paquete de hematíes)
dATP (nmoles/mL) dADP (nmoles/mL) dAMP (nmoles/mL)
PACIENTE 904 98 5
NORMAL NSD NSD NSD
NSD: No se detecto
Bases Moleculares y Correlato Clínico-Bioquímico.
Si bien se ha descrito varias enfermedades asociadas a alteraciones en el metabolismo de los
nucleótidos púricos y pirimidínicos, las alteraciones que predominan en humanos son aquellas
que resultan de un alterado catabolismo de los nucleótidos púricos.
La Tabla 2. Muestra las diferentes enfermedades asociadas a alteraciones en el metabolismo de
nucleótidos púricos y pirimidínicos

TABLA Nº 2.- ENFERMEDADES ASOCIADAS A ALTERACIONES EN EL METABOLISMO

DE LOS NUCLEOTIDOS PURICOS Y PIRIMIDINICOS.

1.- ALTERACIONES EN EL CATABOLISMO DE LAS PURINAS

Enfermedad Enzima afectada
Gota PRPP Sinteasa, PRPP Aminotransferasa
HGPRT (parcialmente)
Síndrome de Lesch-Nyhan HGPRT (completamente)
Inmunodeficiencia Severa Combinada Adenosina Desaminasa ADA
(SCID)
Xantinuria Xantino Oxidada
Inmunodeficiencia Purinonucleósido Fosforilasa (PNP)
Enfermedad de Von Gierke Glucosa 6 Fosfatasa
2.- ALTERACIONES EN EL CATABOLISMO DE LAS PIRIMIDINAS
Aciduria Orótica Tipo I Orotatofosforribosiltransferasa y OMP
Descarboxilasa
Aciduria Orática Tipo II OMP Descarboxilasa
Aciduria Orótica Moderada sin el Ornitina carbamil transferasa (enzima del
componente hematológico Ciclo de la úrea).

GOTA.
Es el transtorno más frecuente del metabolismo de los nucleótidos y se caracteriza por una
excesiva producción de ácido úrico, que a causa de su escasa solubilidad en el agua tiende a
precipitar como cristales de urato de sodio, de manera especial en el líquido sinovial de las
articulaciones. Las células fagocíticas intentan digerir este material, pero su tamaño y la
indigestibilidad de los cristales causa más bien la destrucción de estas células y la liberación de
sus enzimas lisosomales al espacio articular. Estas enzimas a su vez determinan una reacción
inflamatoria aguda de la capsula articular (sinovitis) determinando las típicas manifestaciones de
la artritis gotosa.
La manifestación bioquímica característica de la gota es el aumento de ácido úrico en sangre
(hiperuricemia) y casi siempre está acompañada con aumento en su excreción urinaria
(uricosuria). Los valores normales para el ácido úrico en sangre son de 3.5 a 7.0 mg % en
varones y de 2.6 a 6.0 mg % en mujeres y debe tenerse en cuenta que estos valores aumentan
con la altitud. La excreción urinaria varía normalmente entre 0.3 a 0.6 g/día.
Se acostumbra clasificar a la gota en primaria y secundaria. La primera corresponde al
transtorno producido por alteración genética, la secundaria es consecuencia de otras
alteraciones, como la leucemia, la policitemia, el uso de antimetabolitos para disminuir la
síntesis de ácidos nucleicos, etc.
La frecuencia con la que se presenta la gota es relativamente alta, cerca del 3% en los EEUU y
en otros países parece ser muy similar. La incidencia familiar es del 70 al 80% y es mucho más
frecuente en varones que en mujeres (proporción 3 a 1).
Se han descrito diversas situaciones que pueden explicar la mayor producción de ácido úrico en
un paciente gotoso. Destaquemos las siguientes:

 Aumento en la actividad de la fosforribosil Pirofosfato Sinteasa (PRPP sinteasa).

 Resistencia de la PRPP sinteasa a su inhibición por retro-alimentación. Sería el caso en que
sus metabolitos reguladores, como el GMP. AMP e IMP que normalmente se unen a la
enzima y la inactivan, por algún cambio en la estructura de la misma, no se pueden unir y por
lo tanto sigue aumentando la síntesis de nucleótidos púricos.
 Aumento en la afinidad de la enzima por la Ribosa 5P. Al cambiar la estructura de la enzima
su afinidad por el sustrato aumenta (menor KM) y por lo tanto aumenta la síntesis de PRPP.
 Aumento en la afinidad de la PRPP amidotransferasa por el PRPP motivado por una
alteración en la estructura de la enzima.
 Perdida de la inhibición por retroalimentación de la PRPP amidotransferasa. Los nucleótidos
que normalmente la inhiben (AMP, ADP, ATP, GMP, GDP y GTP) no pueden hacerlo.
 Deficiencia parcial en la actividad de la enzima Hipoxantina-guanina fosforribosil transferasa
(HGPRT) que impide la reutilización de hipoxantina y guanina determinando su destino
hacia la mayor formación de ácido úrico.

En el tratamiento de la gota se usa un análogo de hipoxantina que es el Alopurinol. Recordemos

que la Xantino Oxidasa cataliza la conversión de hipoxantina en xantina y posteriormente de la
xantina en ácido úrico (ver figura). Estando en el medio el alopurinol, la xantino oxidasa lo
hidroxila y lo convierte en aloxantina (oxipurinol). Este compuesto permanece unido al
complejo Mo-S de la enzima y lo inhibe, no permitiendo la formación de más ácido úrico.
También se ha descrito que el alopurinol puede reaccionar con el PRPP formando el nucleótido
correspondiente y utilizando PRPP y determinando que bajen sus niveles y disminuya la síntesis
de purinas.

O O

HN HN
X.O N
N

NH O N
NH
N
H
Alopurinol Aloxantina

O O O
HN
N N
HN HN HN
X.O X.O O

NH O NH O N
NH
N NH
Xantina H
Hipoxantina Ácido Úrico

Figura NºEfecto inhibitorio del Alopurinol sobre la Xantino Oxidasa

Sindrome de Lesch-Nyhan.
El síndrome de Lesch-Nyhan resulta de una alteración a nivel del gen que codifica para la
enzimahipoxantina-guanina fosforribosil transferasa, que está localizado a nivel del cromosoma
X (Xq26-q27.2) determinando una enfermedad que se transmite bajo la modalidad ligada al sexo.
Los pacientes tienen severas manifestaciones de gota, ya que hay un gran aumento en la
formación de ácido úrico y además desarrollan conductas sumamente agresivas que los lleva a su
propia automutilación, frecuentemente se muerden las extremidades distales de los dedos y los
labios. Junto a lo anterior, los pacientes muestran movimientos involuntarios y retardo mental. El
pronóstico es malo y generalmente estos pacientes mueren antes de alcanzar los 20 años de edad.
La severidad de esta alteración hace ver la importancia de la vía de síntesis de nucleótidos
púricos por la vía de recuperación y parece ser que esta síntesis a nivel extrahepático es
sumamente importante y se vería completamente afectada en estos pacientes, contribuyendo a
explicar la severidad de su cuadro.

Deficiencia de Adenosina Desaminasa.

En esta enfermedad también denominada Inmunodeficiencia Severa Combinada8SCID), hay una
marcada deficiencia de la enzima Adenosina Desaminasa que normalmente cataliza la remoción
del grupo amino de la desoxiadenosina y de la adenosina, durante el catabolismo de las purinas.
Las células que más sufren la deficiencia de esta enzima son los linfocitos T y también los
linfocitos B. Estas células acumulan grandes cantidades de desoxiadenosina que al ser fosforilada
rinde grandes cantidades (50 veces más de lo normal) de dATP. La alta concentración de este
nucleótido inhibe a la Ribonucleótidoreductasa evitando la formación de otros dNTP y por lo
tanto inhibiendo la síntesis de ADN. Como los linfocitos tienen que proliferar en respuesta a los
invasores que llegan al organismo, la respuesta inmune fracasa y los niños portadores de esta
enfermedad no pueden superar el menor proceso infeccioso y frecuentemente mueren antes de
los 2 años de edad.

BIBLIOGRAFIA.
MONTGOMERY R., COWAY T., SPECTOR A. and CHAPELL D. (1996) Biochemistry. A
case-oriented approach. VI Ed. Mosby. St Louis. USA.
CHAMPE P. and HARVER R. (1996). Biochemistry. II ed. Lippincott-Raven. Philadelhia. USA.
ALDRICH M. and BLACKBURN M. and KELLENS R. (2000). The importance of adenosine
deaminase for lymphocyte function- BBRC 272:311-315.
PASCUAL E. and PEDRZ T. (2004) Gout. Crystal deposition diseases. Current Opinion in
Rheumatology 16: 282-286
ROTT K. and AGUDELO C. (2003). Gout. JAMA 289: 2857-2860

CUESTIONARIO
1. Expresar la concentración del ácido úrico del paciente del caso clínico 1, en mg% (PM del
ácido: 168).
2. La concentración intracelular del PRPP es normalmente es de 10-5 a 10-6 mol/L. La
determinación de la KM de la fosforribosil pirofosfato amidotransferasa para PRPP en un
paciente gotoso dio un valor de 2 x 10-5 M, en comparación con un control normal cuyo valor
resultó 3 x 10-4 M. Utilizando estos datos proponga el mecanismo que explicaría la
hiperuricemia del paciente.
3. Para determinar si una persona con gota ha desarrollado su enfermedad por una
sobreproducción de ácido úrico o a causa de una disminución en su capacidad de excretarlo,
se hace con frecuencia la prueba de la administración oral de un aminoácido radioactivo.
¿Qué aminoácido sería el más apropiado y como se procesaría dicha prueba?
4. ¿Qué alimentos por su alto contenido en purinas deben ser excluidos de la dieta del paciente
gotoso? ¿Es suficiente este tipo de tratamiento para normalizar los valores séricos de ácido
úrico en los pacientes gotosos?
5. Explicar la hiperuricemia de los pacientes con el síndrome de Lesch-Nyhan. Proponga alguna
explicación sobre la causa de las alteraciones neurológicas que estos pacientes presentan.
6. Explicar la hiperuricemia que se encuentra frecuentemente asociada: a) A la deficiencia de
glucosa 6 fosfatasa (Enfermedad de Von Gierke) y b) A la hiperactividad de la glutatión
reductasa.
7. ¿Cómo actúa el alopurinol en el tratamiento de la gota? ¿Por qué se señala que el alopurinol
es un inhibidor suicida?
8. ¿Cómo se explica que los cristales de ácido úrico en el líquido articular de los gotosos
corresponda a urato monosódico, en cambio en la orina de los mismos pacientes los cristales
sean frecuentemente de ácido úrico solamente? ¿Podría encontrarse en estos pacientes,
cristales de urato disódico en algún lugar del organismo?
9. ¿Por qué mecanismo (s) el alcoholismo puede determinar hiperuricemia?
10. ¿Cómo se explica la linfopenia del paciente del caso clínico 2 y los continuos cuadros de
infección respiratoria que presentó?
11. De qué manera se ven afectadas las reacciones de metilación en que interviene S- Adenosil
Metionina (SAM), en los pacientes con deficiencia de ADA. Utilice en su explicación el
siguiente esquema.
METIONINA S- ADENOSILMETIONINA (SAM)

X
Metil Transferasa
X – CH3

S-ADENOSILHOMOCISTEINA (SAH)
Hidrolasa

HOMOCISTEINA ADENOSINA