LABORATORIO DE BIOLOGIA CELULAR

PRACTICA N° 3

MICROSCOPIA I
INTRODUCCIÓN

El desarrollo de la biología celular se produce en forma paralela a la invención de instrumentos

y técnicas biofísicas y bioquímicas que extienden los sentidos a nuevos límites para acrecentar
el conocimiento de la estructura y funcionamiento de la célula. El acceso a este tipo de
conocimiento resulta dificultoso por las células que son pequeñas y transparentes. El ojo
humano solo puede discriminar dos puntos separados por más de 0.1mm o 100um,
considerado su límite de resolución. La mayoría de las células son mucho más pequeñas y se
necesita del microscopio óptico para estructuras más pequeñas, que miden entre 0.4 y 200nm
se requiere del microscopio electrónico. Es importante que se reconozca que, el microscopio
es la principal herramienta de trabajo del que estudia la célula y los tejidos. De aquí que los
primero conocimientos teóricos prácticos de la biología celular deben estar dirigidos a conocer
y utilizar correctamente el microscopio óptico. El microscopio es un instrumento básico para el
estudio de la biología, ya que nos permite percibir detalles de organismos y de estructuras que
no podrían ser observados directamente, por simple inspección ocular. Para observar
elementos tan pequeños es necesario disponer de lentes de aumento. Estos elementos se
conocen desde el tiempo de Arquímedes, pero la óptica como microscopio no solo depende de
su capacidad de aumento sino, lo más importante es su capacidad para resolver detalles. Para
el estudio del material biológico se dispone de varios tipos de microscopio los cuales se
pueden clasificar básicamente de acuerdo al tipo de fuente luminosa que usan, siendo el
microscopio de campo claro, de uso común. Este es un microscopio compuesto que utiliza dos
sistemas de lentes; el primero produce una imagen amplificada del objeto, y el segundo
agranda la imagen formada por el primero. Para formar una imagen a partir de un corte
histológico usa luz visible, por esto la muestra debe ser lo bastante fina como para que los
haces de luz puedan atravesarla. También se usan métodos de tinción, según las necesidades,
con el fin de aumentar los detalles en la imagen. El campo del microscopio esta intensamente
iluminado, mientras que los objetos observados aparecen más detalles oscuros. En general
con este microscopio se pueden alcanzar los 1000 aumentos, pudiendo llegar con ciertas
modificaciones a 2000 -3000 aumentos. El ojo humano no logra distinguir objetos de menos de
50um de diámetro ni consigue resolver dos líneas separadas por menos de 100um (es decir, la
ve como una sola línea). Esta tecnología muy útil en el estudio de la célula ha tenido una
evolución en el tiempo mejorando su capacidad resolutiva.
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Curso de la luz en el microscopio:

El condensador proyecta un cono de luz sobre el espécimen que está siendo examinado en el
microscopio. Después de atravesar la muestra, ese haz luminoso en forma de cono, penetra en
el objetivo; esta lente proyecta una imagen aumentada en el plano focal del ocular, que
nuevamente la amplía. Por fin la imagen provista por el ocular puede ser percibida por la
retina del ojo como una imagen situada a 25cm de la lente ocular. La ampliación total dada por
un microscopio es igual al aumento del objetivo multiplicado por el aumento del ocular.

Sistema óptico: el lente que se encuentra más cercano al espécimen se denomina objetivo,
tiene una distancia focal corta y, forma una imagen real y aumentada que es el objeto del
segundo sistema de lentes denominado ocular. El condensador tiene la función de condensar
la luz sobre el espécimen. Se compone de un sistema óptico de observación y un sistema
óptico de iluminación; los cuales constan de:

Sistema óptico de observación:

Objetivo: está formado por un sistema de pequeños lentes ubicados muy cercanas una de la
otra la que se halla en el extremo distal del objetivo se denomina lente frontal. Los objetivos
pueden ser objetivos en seco (no hay ninguna sustancia interpuesta entre la lente frontal y el
preparado), u objetivos de inmersión (entre la lente frontal y el preparado se coloca una
sustancia cuyo índice de refracción es muy similar al del vidrio.
Ocular: es un tubo cilíndrico con diafragma fijo en el centro y una lente en cada extremo, la
superior se denomina lente ocular y la inferior lente colectora.

Sistema óptico de iluminación:

Condensador: concentra el haz de luz sobre el plano del espécimen que se encuentra en la
platina. Debajo de él se encuentra el diafragma que regula la cantidad de luz que llega al
condensador.
Fuente de luz: es una lámpara que está ubicada en la parte inferior del aparato, en caso de no
poseerla debe ubicarse una fuente luz externa (lámpara incandescente) común)
aproximadamente a 30cm.

Propiedad de los objetivos

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Escala de reproducción: relación lineal que existe entre el tamaño del objeto y su imagen, por
ejemplo, 4:1, 10:1, 40:1, 65:1 100:1.
Poder definidor: es la capacidad del objetivo de formar imágenes de contornos nítidos.
Límite de resolución: es la menor distancia que debe existir entre dos objetos para que
puedan visualizarse por separado.
Poder de resolución: es la capacidad de mostrar la imagen en detalles más finos. Esta en
relación inversa con el límite de resolución.
Comparación de límites de resolución entre microscopio óptico, electrónico y ojo humano:
las principales unidades de medidas usadas en biología celular son el micrómetro (10 -6 m) y el
nanómetro (10-9 m). Como se aprecia las principales unidades de medida que se emplean
correctamente en microscopia, no son las de uso cotidiano.
Sistema mecánico
Este sistema sostiene al sistema óptico y aloja los elementos necesarios para la iluminación y
enfoque del preparado.
Pie: brinda apoyo y estabilidad al aparato.
Vástago o brazo: soporta la platina, tubo y tornillos de ajuste macro y micro métrico.
Tornillo de ajuste macro y micrométrico: provocan el desplazamiento del tubo o la platina
(según el método de microscopio) en sentido vertical, lo que permite el enfoque.
Tubo: en sus extremo superior se halla el ocular, y en el inferior el objetivo. Se trata de un
cilindro metálico cuyo interior se encuentra pintado de negro. Lo que evita la reflexión de la
luz. Normalmente tiene una longitud de 170mm.
Platina: es una plataforma horizontal sobre la culpa se coloca y se sujeta el preparado a
observar, tiene un orificio central que permite paso de la luz en un vernier que posibilita la
relocalización de los detalles de interés.
Subplatina: sostiene el condensador y se ubica por debajo de la platina.

Principio físico aplicado al microscopio

Poder de penetración: es la propiedad de permitir la observación simultánea de varios planos
del preparado. Es inversamente proporcional a la escala de reproducción o aumento.
Distancia focal: es la distancia de la lente frontal al preparado colocada en la platina, cuando
está enfocado. Disminuye cuando aumenta la escala de reproducción del objetivo.
Aumento total: debemos notar que el ocular también tiene un aumento, por lo tanto el
aumento total de la imagen que observamos es el producto entre el aumento del objetivo y el
del ocular.
Apertura numérica: (AN) este valor corresponde a la capacidad de un lente objetivo de utilizar
más o menos rayos luminosos para formar la imagen este valor se encuentra gravada en la
manga del lente siendo de 0.25 para el objetivo de 10X, de 0.65 para el de 40X y 1.25 para el
de 100X.

AN = n x sen a
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Donde, n es el índice de refracción que atraviesa el haz y a es el ángulo de apertura.

Poder y límite de resolución: el poder de resolución (PR) es la capacidad de un instrumento

para producir imágenes distintas de puntos situados muy cerca al uno del otro en el objeto.
Depende la longitud de onda (λ) de la luz utilizada y de la (AN) del objetivo utilizado. El límite
de resolución (LR) es la distancia mínima que debe existir entre dos puntos para que puedan
ser discriminados como tales.
El PR está dado por:

En donde 0.61 es una constante, λ es la longitud de onda de la luz utilizada y AN es la apertura

numérica del objetivo en uso.
El límite de resolución es la inversa del poder de resolución, de manera que cuando mayor sea
el poder de resolución de un instrumento menor será el límite de resolución.

El máximo PR de un microscopio óptico es aproximadamente 0.15um, con la cual puede

deducirse que para aumentar el PR de instrumento o disminuir el LR, se puede disminuir λ y
aumentar la AN. Disponer de corpúsculos, que al imprimirles grande velocidades se comportan
como ondas, este es el caso de los electrones en los microscopios electrónicos.

OBJETIVOS:

1. Identificar las partes mecánicas y ópticas de un microscópico óptico.

2. Precisar la función de cada componente mecánico y óptico.
3. Manejar el microscopio óptico, observando una lamina de un tejido preparado
con la técnica histológica de rutina y coloreada con hematoxilina-eosina (H.E).
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MARCO TEÓRICO:

Microscopio óptico:

Un microscopio óptico es un microscopio basado en lentes ópticas. También se le conoce

como microscopio de luz, microscopio fotónico (que utiliza luz o "fotones") o microscopio de
campo claro. El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Antoni van
Leeuwenhoek. Los microscopios de Leeuwenhoek constaban de una única lente pequeña y
convexa, montada sobre una plancha, con un mecanismo para sujetar el material que se iba a
examinar (la muestra o espécimen). Este uso de una única lente convexa se conoce como
microscopio simple, en el que se incluye la lupa, entre otros aparatos ópticos. 22

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• Sistema óptico
 OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.
 OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.
 CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
 DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
 FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

• Sistema mecánico
 SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
 PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.
 CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular,
…..
 REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los
objetivos.
 TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que
consigue el enfoque correcto.

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Las células son las unidades básicas de los seres vivos. La mayoría de ellas son de pequeño
tamaño por lo que es indispensable el uso de instrumentos como los microscopios para su
visualización. La exigencia del estudio de las estructuras celulares a llevado a la invención y
mejoramiento practico de esta herramienta muy utilizada en las disciplinas de la biología y la
medicina incorporándose ahora en las ciencias exactas para la caracterización de muestras
químicas. En la tabla siguiente se muestra el rango de resolución comparados con otras
técnicas.

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Manejo y uso del microscopio óptico

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina
completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya
debería estar en esas condiciones.

2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.

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3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10

aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.
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4. Para realizar el enfoque:

a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo

macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del
ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación
pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.
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b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo

de la preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítido la
muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino.

5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar
de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el
objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a
muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de
percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y
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mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con
el objetivo de inmersión.

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6. Empleo del objetivo de inmersión:

a. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la
zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.

b. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y
el de x40.

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c. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz. Terminar de
girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.

d. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca
la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la
lente.

e. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo

de inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el
riesgo de accidente es muy grande.

f. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede

volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si
desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso
3.

g. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el

objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar
la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en
posición de observación.

h. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para

óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.

Mantenimiento y precauciones:
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición
de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del
borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
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2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su

funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma
prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del
polvo.

3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy
suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.

4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.

5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el
objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos
recomendable). En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y
con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que
limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este
tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las
lentes y su sujeción.

6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico,

platina, revólver y condensador).

7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la

preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de
objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a
través del ocular.

8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún
líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño
humedecido en xilol.

9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica

y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.

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Aplicaciones:
Un microscopio óptico es un microscopio basado en lentes ópticas. También se le conoce
como microscopio de luz, microscopio fotónico (que utiliza luz o "fotones") o microscopio de
campo claro. El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Antoni van
Leeuwenhoek. Los microscopios de Leeuwenhoek constaban de una única lente pequeña y
convexa, montada sobre una plancha, con un mecanismo para sujetar el material que se iba a
examinar (la muestra o espécimen). Este uso de una única lente convexa se conoce como
microscopio simple, en el que se incluye la lupa, entre otros aparatos ópticos.

MATERIAL y METODOS:

Materiales:

 01 microscopio óptico compuesto.

 Muestra de glóbulos rojos.

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 Lamina Porta objetos

 Lamina Cubre objetos

 Gotero

Experimentación:

1. Identifique cada una de las partes de un microscopio óptico compuesto escribiendo el

nombre de cada una de las partes.
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1. Oculares
2. Revólver con los objetivos
3. Platina
4. Desplazamiento de platina
5. Macrométrico
6. Micrométrico
7. Abertura (condensador)
8. Condensador
9. Ajuste de altura (condensador)
10. Ajuste del condensador
11. Toma de corriente
12. Botón de Encendido
13. Regulador de luz
14. Regulador de luz
15. Regulador de luz

2. Con sumo cuidado realice las siguientes maniobras:

Observé un lente ocular y precise el número que muestra la superficie ocular, que es
de X15.
Seguidamente llenamos el siguiente cuadro de medidas de los objetivos
(lambda=0.5um)
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3. Cálculos del LR:

 Para el aumento medio seco:

Calculando el poder de resolución (PR):

Calculando el límite de resolución (LR):

 Para el aumento alto seco:

Calculando el poder de resolución:

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Calculando el límite de resolución:

 Para la inmersión:

Calculando el poder de resolución:

Calculando el límite de resolución (LR):

TIPO DE OBJETIVO AUMENTO AN LR

Aumento medio seco 10X 0.25 0.82
Aumento alto seco 40X 0.80 2.63
Inmersión 100X 1.25 4.17
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4. Al mover los tornillos macro y micrométrico observé el grado de desplazamiento de la

platina o del tubo ocular, el cual resulto notoriamente que se desplazaba mas cuando
hacia girar el macrométrico.
5. Mirando por el ocular, colocamos y quitamos el lente frontal cada vez que se cambiaba
el objetivo.

6. Seguidamente calcule el aumento total que puede lograr con cada uno de los objetivos
del microscopio.

OCULAR OBJETIVO AUMENTO TOTAL

15X 10X 150 aumentos
15X 40X 600 aumentos
15X 100X 1500 aumentos

Primer aumento total : 15x10=150 aumentos

Segundo aumento total : 15x40=600 aumentos
Tercer aumento total : 15x100= 1500 aumentos

4. En una lamina porta objeto colocamos una muestra de sangre y hacemos un

frotis. Luego lo observamos por el microscopio: (Dibujar o colocar fotografía)

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Neutrófilo en Cayado Eosinófilo

Neutrófilo segmentado

Linfocito
Basófilo

Monocito
Glóbulo Rojo

DISCUSIÓN: (Escribir un comentario)

En esta primera parte de la práctica del microscopio fue esencial ya que se aprendió conceptos
básicos sobre su sistema mecánico y óptico, principios físicos que se aplican, pautas que se
debe seguir para el uso adecuado y su cuidado correspondiente.
Además, aprender las funciones de cada parte que cuenta un microscopio es importante ya
que será un instrumento que estará muy relacionado a nuestra etapa estudiantil y profesional.
También diría que se tendrían que implementar más microscopios ya que hoy en día la
cantidad de alumnos es mayor a la de antes, y así mejoraría la experiencia académica en el
desarrollo de la práctica de laboratorio.

CONCLUSIÓN: (Escribir las conclusiones a las que llego)

 Se comprendió la importancia que tuvo el microscopio en el avance médico a lo largo
de la historia.
 Se identificó las partes mecánicas y ópticas de un microscopio óptico.
 Se obtuvo conocimiento de las funciones que cumplen las partes básicas y necesarias
para el uso del microscopio en un laboratorio.

BIBLIOGRAFÍA:
 (2001). Instrucciones de manejo. Axiostar plus. Microscopio de luz transmitida y Fl.
 https://medicoplus.com/ciencia/partes-microscopio
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