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    Determinacion de Lipidos en El Laboratorio.

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    Montserrat Herrera
    Este documento describe los procedimientos para determinar los lípidos (colesterol total, HDL, triglicéridos) en el laboratorio. Se explican las reacciones enzimáticas utilizadas para cuantificar cada lípido y los cálculos para determinar las concentraciones. La práctica ayuda a comprender cómo un perfil lipídico puede indicar el riesgo de enfermedades cardíacas al medir los niveles de lípidos en la sangre.

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    Montserrat Herrera
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    Este documento describe los procedimientos para determinar los lípidos (colesterol total, HDL, triglicéridos) en el laboratorio. Se explican las reacciones enzimáticas utilizadas para cuantificar cada lípido y los cálculos para determinar las concentraciones. La práctica ayuda a comprender cómo un perfil lipídico puede indicar el riesgo de enfermedades cardíacas al medir los niveles de lípidos en la sangre.

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    Determinacion de lipidos en el laboratorio.

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    Determinacion de Lipidos en El Laboratorio.

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    Montserrat Herrera
    Este documento describe los procedimientos para determinar los lípidos (colesterol total, HDL, triglicéridos) en el laboratorio. Se explican las reacciones enzimáticas utilizadas para cuantificar cada lípido y los cálculos para determinar las concentraciones. La práctica ayuda a comprender cómo un perfil lipídico puede indicar el riesgo de enfermedades cardíacas al medir los niveles de lípidos en la sangre.

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    Centro de Bachillerato Tecnológico, Industrial y de Servicio No.

    127

    Determinación de lípidos en
    el laboratorio
    Desarrollo de practica en el laboratorio.

    Alumna: Herrera Cazares Gabriella Montserrat


    Maestra: Q.F.B Norma Gloria Rodríguez Moreno
    Asignatura: Introducción a la Bioquimica
    Grado y grupo: 6B TLC
    21 de abril de 2021
    Introducción
    Un perfil lipídico, también conocido como "panel de lípidos", mide las
    concentraciones de distintos tipos de grasas en la sangre.

    • El colesterol total es la suma de los distintos tipos de colesterol. El


    colesterol es una sustancia grasa que el cuerpo necesita en cierta
    medida. Pero un exceso de colesterol puede causar problemas.
    • La lipoproteína de alta densidad, o colesterol HDL, se suele llamar
    colesterol "bueno". El colesterol HDL ayuda al cuerpo a librarse del
    colesterol que le sobra.
    • La lipoproteína de baja densidad o colesterol LDL, se suele llamar
    colesterol "malo". El colesterol LDL que se acumula en el torrente
    sanguíneo pueden obstruir vasos sanguíneos e incrementar el riesgo de
    padecer enfermedades cardíacas.
    • Los triglicéridos almacenan energía hasta que el organismo la necesita. Si
    el cuerpo acumula demasiados triglicéridos, se pueden obstruir vasos
    sanguíneos, lo que puede provocar problemas de salud.

    ¿Por qué se hace esta prueba?


    El perfil lipídico permite indicar el riesgo de una persona a desarrollar
    enfermedades cardíacas o aterosclerosis (el endurecimiento, estrechamiento u
    obstrucción de las arterias). Normalizar las concentraciones de lípidos lo antes
    posible puede reducir el riesgo de padecer enfermedades cardíacas y
    aterosclerosis más adelante.
    1. Determinación de colesterol tota.
    Para la determinación de colesterol total se utilizan reactivos comerciales
    que incluyen las enzimas y sustratos necesarios para la cuantificación de
    todas las formas de colesterol presentes en el suero. Las reacciones que
    tienen lugar son:
    • Un colesterol estearasa (CHE) hidroliza los esteres de colesterol a
    colesterol más ácidos grasos libres.
    • A continuación, un colesterol oxidasa (CHOD) oxida todo el
    colesterol a colestenona y peróxido de hidrogeno.
    • El peróxido de hidrogeno es sustrato de una peroxidasa (POD) que
    junto con 4-aminofenazona (4-AP) da lugar a la formación de una
    quinona roja.
    La quinona formada es proporcional a la concentración de
    colesterol en la muestra.
    2. Determinación de HDL-Colesterol.
    Para la determinación del colesterol presente en las principales
    lipoproteínas que lo contienen como HDL y LDL es necesario:
    • Primero, la separación selectiva de la lipoproteína
    correspondiente con agentes precipitantes.
    • Segundo, las cuantificaciones del colesterol presente en dicha
    lipoproteína como se indicó anteriormente.
    Entre estos reactivos precipitantes están el ácido fofotungstico y
    magnesio que precipitan a las LDL y VLDL mientras que las HDL
    permanecen en solución.
    3. Determinación de triglicéridos.
    Para la determinación de triglicéridos en suero se utilizan reactivos
    comerciales que incluyen las enzimas y sustratos necesarios para la
    cuantificación por espectrofotometría visible. Las reacciones tienen lugar
    son:
    • Una lipasa hidrolizada los triglicéridos dando glicerol más ácidos
    grasos libres.
    • El glicerol formado es sustrato de un glicerol quinasa que en
    presencia de ATP lo fosforila a glicerol 3P.
    • El glicerol 3P es oxidado a dihidroxiacetona por un glicerol
    fosfato oxidasa dando también peróxido de hidrogeno.
    • El peróxido de hidrogeno con los cromógenos-p-clorofenol y 4-
    AP son sustrato de una peroxidasa para formar una quinona roja
    cuantificable a 505nm.
    Material Necesario
    • Tubos de ensayo
    • Pipetas automáticas
    • Espectrofotómetro
    • Suero
    • Estándar de colesterol – 200mg/dl
    • Reactivo de trabajo para el colesterol
    • Reactivo precipitante
    • Estándar de triglicéridos – 200mg/dl
    • Reactivo de trabajo para triglicéridos

    Determinación de colesterol total

    • Disponer de tubos de ensayo rotulados como blanco, estándar y


    muestra. La muestra se refiere al suero a valorar y se colocan tantos tubos
    muestras como sueros se quieran valorar.
    • Pipetear los componentes indicados en la tabla, añadiendo en ultimo
    lugar el reactivo de trabajo de colesterol.

    Blanco Estándar Muestra


    Estándar de - 20ul -
    colesterol
    Suero - - 20ul

    Reactivo de 2ml 2ml 2ml


    trabajo

    • Mezclar e incubar 5 min a 37°C (o 10 min a temperatura ambiente)


    • Leer la absorbancia a 505nm.

    Calcular la concentración de colesterol total de cada una de las muestras de


    suero del siguiente modo:

    𝐴 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
    𝑚𝑔⁄𝑑𝑙 = 𝑥 𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝐸𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟𝑑
    𝐴 𝑒𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟𝑑
    Determinación de HDL – colesterol

    • Mezclar 1ml del suero con 0,1ml dl reactivo precipitante. Incubar 10 min a
    temperatura ambiente y centrifugar durante 200 min a 400 rpm (o 2min a
    12,000 rpm)
    • La determinación de HDL – colesterol se realiza con 40 ul del
    sobrenadante como se indica en la tabla II y utilizando el reactivo
    indicando en la determinación del colesterol total.
    • Pipetear los componentes indicados en la tabla, añadiendo en ultimo
    lugar el reactivo de trabajo de colesterol.

    Blanco Estándar Muestra


    Estándar - 20ul -
    Sobrenadante - - 40ul
    H₂O 40ul 20ul -
    Reactivo de 2ml 2ml 2ml
    trabajo

    • Mezclar e incubar 5 min a 37°C (o 10 min a temperatura ambiente).


    • Leer la absorbancia a 505 nm.
    Calcula la concentración de colesterol de las HDL del siguiente modo:
    𝐴𝑏𝑠. 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑥 320 = 𝑚𝑔⁄𝑑𝑙 𝐻𝐷𝐿 − 𝑐𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 (505𝑛𝑚)
    Determinación de triglicéridos

    • Disponer de tubos de ensayo rotulados como blanco, estándar y muestra.


    La muestra se refiere al suero a valorar y se colocan tantos tubos muestras
    como sueros se quieran valor.
    • Pipetear los componentes indicados en la tabla, añadiendo en ultimo
    lugar el reactivo de trabajo de triglicéridos.

    Blanco Estándar Muestra


    Estándar - 20ul -
    Muestra - - 20ul
    Reactivo de 2ml 2ml 2ml
    trabajo

    • Mezclar e incubar a 37°C 4min (o 10 min a temperatura ambiente)


    • Leer la absorbancia a 505 nm

    Calcular:

    𝐴 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
    𝑚𝑔⁄𝑑𝑙 = 𝑥 𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝐸𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟𝑑
    𝐴 𝑒𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟𝑑
    Conclusión
    El perfil lipídico cuando esta elevado aumenta el riesgo de sufrir un infarto
    cerebral de causa atemorosa, lo que hace que sea independiente a su
    asociación a otros factores de riesgo como la hipertensión arterial y la
    enfermedad crónica. En base a la práctica y la investigación, podemos
    concluir que la naturaleza apolar de los lípidos se debe a la presencia de
    residuos de ácidos grasos que contienen largas cadenas hidrocarbonadas
    alifáticas, estos se disolverán solo con similar naturaleza.

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