Libro Final

Rodolfo Lopez Franco / Adalucy Álvarez Aldana / Daniel Arturo León Rodríguez / Viviana Milena Taylor Orozco /
Daniela Guiral Guiral / Stephanie Ríos Cifuentes / Érika Loranz Sánchez / Laura Katherine Pavas / Silvana Vergara Acevedo
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1
© LA INVESTIGACIÓN CON Streptomyces spp. COMO HERRAMIENTA PARA EL ESTUDIO DE LOS MICROORGANISMOS
DEL SUELO
Risaralda, Colombia, Pereira

Universidad Libre Pereira.
Sede Belmonte
www.unilibrepereira.edu.co
Tel: +57-6-3401043 ext: 6950
Centro de investigaciones Facultad de Ciencias de la Salud

Primera edición- Volumen 1: febrero de 2020
ISBN : 978-958-8859-62-0
ISBN Digital : 978-958-8859-61-3
Comité editorial:
© Rodolfo López Franco
© Adalucy Álvarez Aldana
© Daniel Arturo León Rodríguez
© Olga María Henao Trujillo
Derechos Reservados de Autor
Distribución: Universidad Libre Pereira

Hecho el depósito legal
Imagen de la portada:
Título: Streptomyces spp.
Técnica: Fotografía / Tomada por Rodolfo López Franco- Laboratorio Microbiología.
Programa de Microbiología- Facultad de Ciencias de la Salud.
Diagramación y diseño:
Martha Liliana Giraldo Gallego
Molano Londoño e Hijos S.A.S.
Editorial Zapata - Manizales
Impresión:
Molano Londoño e Hijos S.A.S.
Editorial Zapata - Manizales
Reservados todos los derechos. No se permite la reproducción total o parcial de esta obra, ni su incorporación a un sistema informático,
ni su transmisión en cualquier forma o por cualquier medio (electrónico, mecánico, fotocopia, grabación u otros) sin autorización previa
y por escrito de los titulares del copyright. La infracción de dichos derechos puede constituir un delito contra la propiedad intelectual.
2
UNIVERSIDAD LIBRE
PEREIRA
DIRECTIVOS NACIONALES
Jorge Orlando Alarcón Niño
Presidente Nacional
Jorge Gaviria Liévano

Vicepresidente
Fernando Enrique Dejanon Rodríguez

Rector Nacional
Floro Hermes de San José Gómez Pineda

Secretario General Nacional
Elizabeth Villarreal Correcha

Directora Nacional de Investigación
DIRECTIVOS SECCIONALES
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Presidente
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Rector
Carmen Helena Aragón Villa

Secretaria
Luis Alfonso Sandoval Perdomo

Director Seccional de Investigaciones
María Teresa Rodríguez Lugo

Decana Facultad de Ciencias de la Salud
Olga María Henao Trujillo

Directora Centro de Investigaciones
Facultad de Ciencias de la Salud
3
AUTORES
Rodolfo López Franco
Ingeniero agronómico, magister en biología vegetal. Profesor del programa de Microbiología de

la Facultad de Ciencias de la Salud. Universidad Libre Pereira.
Adalucy Álvarez Aldana
Bacterióloga y laboratorista clínica, magister en biología molecular y biotecnología, doctora en

Ciencias Biomédicas. Profesora de planta con dedicación a la investigación. Programa de Microbiología.
Facultad de Ciencias de la Salud. Universidad Libre Pereira.
Daniel Arturo León Rodríguez
Microbiólogo, magister en ciencias con énfasis en genética Humana, doctor en Biomédica.

Profesor del programa de Microbiología de la Facultad de Ciencias de la Salud. Universidad Libre
Pereira.
Viviana Milena Taylor Orozco
Bacterióloga y laboratorista clínica, magister en Ciencias Biomédicas, doctora en Biología. Líder

de investigación de la Facultad de Ciencias de la Salud. Fundación Universitaria María Cano.
Daniela Guiral Guiral
Microbióloga. Egresada del programa de Microbiología de la Facultad de Ciencias de la Salud.

Stephanie Ríos Cifuentes

Érika Loranz Sánchez

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Laura Katherine Pavas

Silvana Vergara Acevedo

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TABLA DE CONTENIDO
INTRODUCCIÓN 9
Capítulo 1.
Streptomyces spp.: su importancia en la actividad de los suelos agrícolas 11
Capítulo 2.
Aislamiento de Streptomyces spp., a partir de un nicho ecológico del campus Belmonte de la
Universidad Libre, seccional Pereira. 19
Capítulo 3.
Pruebas bioquímicas para la identificación de Streptomyces spp. De aislados del campus de la
Universidad Libre 31
Capítulo 4.
Evaluación del desempeño en diferentes condiciones de laboratorio de aislados de
Streptomyces spp. 41
Capítulo 5.
Marcadores moleculares para Streptomyces spp. 56
Capítulo 6.
Microorganismos circunstantes en el proceso del compostaje de subproductos de la caña
de azúcar 67
7
INTRODUCCIÓN
LA INVESTIGACIÓN CON Streptomyces spp. COMO HERRAMIENTA PARA EL ESTUDIO
DE LOS MICROORGANISMOS DEL SUELO
Son diversas las formas en las que los que se reporta su presencia en las distintas fases
microorganismos participan en la actividad de los procesos de compostaje.
de los suelos agrícolas; algunos grupos actúan En el documento que se entrega a
como microorganismos solubilizadores de continuación, se reporta la búsqueda de
fósforo, al igual que otros son capaces de información relacionada con Streptomyces
solubilizar el potasio, permitiendo que los spp., tanto por sus generalidades como por
minerales del suelo sean de fácil acceso para sus posibildades de aplicar metodologías
las raíces vegetales, donde su consumo de relacionadas con marcadores moleculares, que
energía se afecta positivamente, en la búsqueda ubiquen al lector en el entorno científico de los
de elementos nutricionales. Además, un buen microorganismos del suelo. También se registra
número de tales microorganismos pueden la experiencia investigativa de laboratorio,
aportar sustancias que fomentan la actividad realizada con el género Streptomyces spp., desde
antimicrobiana, contra microorganismos la selección de nichos biológicos potenciales
fitopatógenos de vida libre en el suelo, evitando para aislamiento de microorganismos del suelo,
su diseminación y daño a los vegetales, sumados pasando por sus diferentes posibilidades de
a las bacterias que se reportan como promotoras aislamiento in vitro, además de la confirmación
de crecimiento vegetal. Muchos otros de diferentes técnicas bioquímicas aplicadas,
microorganismos son capaces de actuar como luego de evaluar el desempeño de Streptomyces
elementos entomopatógenos, que de diversas spp. en diferentes condiciones de crecimiento
maneras desarrollan actividad favorable en el in vitro en el laboratorio, con propósitos de
control de insectos plaga, tanto de las plantas su manejo en procesos de biocompostaje
como de los animales y el mismo ser humano. de subproductos agrícolas. Por último, se
Existen hongos que se destacan por su realiza una evaluación de microorganismos
condición de simbiosis como micorrizógenos, circunstantes en el proceso de compostaje de
que ayudan en la rizosfera a la captura de subproductos de la industria azucarera, donde se
elementos nutricionales del suelo, que son registra la presencia de Bacillus spp. y Aspergillus
llevados hasta las células corticales vegetales, spp. que se reportan por diversos investigadores
pasando vía simplasto y apoplasto, hasta llegar como importantes en el compostaje de diversos
a los haces vasculares. Otros microorganismos materiales biológicos de origen vegetal.
trabajan como descomponedores de la materia Recoge los diferentes planteamientos,
orgánica del suelo; unos son ligninolíticos conceptos, teorías y experiencias, de
mientras que otros se desempeñan como varios autores, que nos ayudan al estudio
celulolíticos. En este último grupo, se ha y la comprensión de Streptomyces spp., en
demostrado la capacidad que exhiben los beneficio de su aplicación como elemento de
actinomicetos del género Streptomyces spp para la biotecnología, para posteriores procesos
la descomposición de materiales vegetales, de lo biofertilizantes.
9
La investigación con Streptomyces spp. como herramienta para el estudio de los microorganismos del suelo
El presente documento, puede convertirse

en herramienta de primera mano, cuando
se pretenda aislar microorganismos de
importancia en la ciencia del suelo, además de
sus posibilidades de crecimiento en condiciones
de laboratorio, como apoyo a diversos estudios
asociados a la agricultura orgánica, para el
enriquecimiento científico de estudiantes de las
ciencias biológicas.
Rodolfo López Franco

Ingeniero agronómico, magister en biología
vegetal.
Autor Principal
10
11
Introducción de las plantas; la relación micorrizógena

El sistema de raíces de los vegetales terrestres cumple función importante en la absorción
encuentra las condiciones nutritivas en el suelo y transferencia de fósforo, extrayéndolo de
donde crecen y se desarrollan; allí, los suelos soluciones más diluidas y/o utilizando fuentes
están constituidos por materia sólida (con cerca de P inaccesibles para las raíces; también se
del 45%); por el agua (con un 25%); por espacios ha reconocido que los hongos micorrizógenos
porosos (con un 25%); y por la materia orgánica benefician la asimilación de Zn, Mn, y Cu,
(cerca del 5%). La fase sólida la componen elementos bastante inmóviles en el suelo, al
partículas de arcilla, limo y arena, que según su permitir que la red de sus hifas (en las raíces
proporción pueden garantizar la calidad de un colonizadas) abarque una zona mayor, que la
suelo (1). cubierta por las mismas raíces (5).
Los nutrientes inorgánicos que toman Otros grupos importantes de
las plantas mediante su sistema radical, se microorganismos benéficos del suelo, se
encuentran presentes (como iones) en la relacionan con la solubilización de fósforo (P) y
solución del suelo; la mayoría de los metales de potasio (K). Las bacterias solubilizadoras de
forma iones cargados positivamente, como fósforo, encuentran P inorgánico de naturaleza
cationes de Ca++, K+, Mg+, y Na+. Las mineral, y P orgánico asociado con la materia
partículas de arcilla presentes en el suelo, se orgánica (6); mientras que K se puede encontrar
convierten en gran reserva de dichos cationes en diferentes formas: el mineral (K); también
para la planta, evitando que sean lavados por K no intercambiable; K intercambiable y K
lixiviación, al atraparlos con fuerza (2). disuelto o en solución (iones K+) (7).
Entendido el biocompostaje como la La comunidad microbiana es el componente
degradación de biocomponentes con la presencia activo de los procesos de biodegradación y
de microorganismos, mediante procesos de conversión de materiales biológicos en el suelo,
descomposición aeróbica, permite la obtención incluido el compost, y su optimización se
de materiales orgánicos que redundan en la relaciona de manera directa con la composición
calidad de la estructura del suelo, posterior a su y sucesión de tales comunidades microbianas,
aplicación (3). Los carbohidratos que participan por lo que se requieren herramientas que
en el compostaje no solo incluyen sacáridos permitan su monitoreo y su caracterización,
solubles, sino que también celulosa insoluble, además de su relación con la calidad del
siendo ésta difícil de degradar para muchos de compost (8).
los microorganismos (4). Además, la biotransformación de la
La materia orgánica presente en el suelo, se materia orgánica, durante las diferentes fases
compone de hojas y otras partes de las plantas, del proceso natural de compostaje, ocurre
junto con los restos de participantes biológicos mediante reacciones catalizadas por enzimas
en procesos de descomposición. Esa materia microbianas, donde los microorganismos la
orgánica se mezcla con las partículas inorgánicas utilizan como nutriente para su desarrollo,
del suelo, para beneficio de gran cantidad de contribuyendo con su mineralización hasta
microorganismos que participan en procesos moléculas orgánicas e inorgánicas más sencillas;
de descomposición, liberando los nutrientes seguido se da el proceso de humificación, donde
inorgánicos que son de nuevo utilizados por las se crean nuevas macromoléculas, a partir de las
plantas. moléculas sencillas (9).
La capacidad de absorción vegetal de los El compostaje de materiales orgánicos
nutrientes del suelo, aumenta de manera se entiende como un auto-calentamiento
considerable en presencia natural de hongos controlado, aeróbico biodegradativo de su
micorrizógenos asociados al sistema radical fase sólida, donde el proceso comprende las
13
fases mesófilas y termófilas que implican geográfico del Río Cauca, se superan las 24.000
numerosos microorganismos. En varias etapas t de compost mensuales, producto de las plantas
que se suceden, las comunidades microbianas de procesamiento de residuos de caña de azúcar
son capaces de degradar sustratos orgánicos (13).
a formas humificadas más estables, junto con El crecimiento microbiano en procesos de
productos inorgánicos, donde se genera calor compostaje se logra con humedades entre 50% y
como producto de desecho metabólico. Debido 70%, con excelente actividad biológica, mientras
a la complejidad de sustratos y productos que decrece cuando la humedad sea inferior
intermedios, la diversidad microbiana y la al 30%; pero con humedad superior al 70%,
sucesión de poblaciones es una condición que el agua desplaza al aire en los espacios libres,
puede garantizar la biodegradación completa. ocasionando una reducción en la capacidad
Como es un proceso dinámico, en tiempo y en de transferencia de oxígeno, generando
espacio (micro hábitats), se refleja de manera condiciones de anaerobiosis, convirtiéndose
constante en el cambio de pH, la humedad, la en otra causa de los malos olores, además de
temperatura, que dificulta detectar y/o aislar disminuir la velocidad del proceso (14,15).
todos los microorganismos implicados en el Para evaluar pH sobre el crecimiento de
proceso (10). microorganismos en procesos de compostaje,
Basanta et al. (11), analizaron la problemática con aireación pasiva y sin aireación, Castrillón
que se genera con los residuos de la industria et al. (16) analizaron muestras de compost
azucarera, así como las posibilidades de reciclaje (de ambos tratamientos) que se incubaron
de los mismos, en un contexto de desarrollo en medio de cultivo cuyo pH se ajustó, según
sostenible; proponen la necesidad de investigar tratamientos, para valores de: 5, 6, 7, 8, 9
sobre metodologías de su compostaje con mejor comparados con pH de campo; a las 24 horas
aprovechamiento de los residuos, teniendo se sembraron para realizar el recuento de
en cuenta que la incorporación de residuos bacterias, mohos, levaduras y se realizó el
orgánicos frescos causa daños a las plantas, conteo de microorganismos; confirmaron que
debido a que en el proceso de descomposición el pH indica diferencias significativas en el
se liberan fitotoxinas, con aumento de crecimiento de bacterias (pH 5 para ambos
temperatura y disminución de la concentración tratamientos), mientras que en el compost
de oxígeno, por lo que el reciclaje de los residuos aireado, los mohos (pH 8) y levaduras (pH 9)
de la agroindustria azucarera debe pasar por un mostraron los mejores registros.
proceso previo de compostaje para su uso como En trabajos de caracterización microbiológica
biofertilizante. y su función en los procesos de compostaje
Deberá tenerse en cuenta que la incorporación de subproductos de la industria azucarera, a
al suelo de los subproductos cachaza, bagazo y los 30, 60 y 90 días de iniciado el compost, se
vinaza, en condiciones frescas, puede generar evaluó la dinámica poblacional de diferentes
un impacto negativo sobre las plantas; por microorganismos; se cuantificó las bacterias
tanto, realizar compostaje con dichos residuos, celulolíticas por el método del número más
permite su mejor aprovechamiento al emplearse probable; para la cuantificación de bacterias
como biofertilizante (12). heterótrofas aerobias mesófilas y termófilas
La práctica de compostaje ha avanzado y hongos, aplicaron el método de recuento
en los últimos años, contando en diferentes en placas; se reportó que el pH cercano a la
regiones con plantas de tratamiento de neutralidad permite que las bacterias mesófilas
residuos, principalmente de origen agrícola, lideren la fase inicial y la fase de estabilización,
con variaciones en materias primas, según mientras que en la fase termófila son las
la zona y el cultivo; para la región del valle termófilas las que se encuentran en mayor
14
proporción que las mesófilas. En la medida que esporas (comúnmente llamadas conidias), con
avanza el proceso de compostaje, las bacterias frecuencia en cadenas, que pueden ser rectas o
celulolíticas descienden en su actividad, flexuosas, enruladas o espiraladas. La superficie
mientras que los hongos la incrementan al de la espora puede ser lisa, rugosa o espinosa,
final del proceso; sin embargo, se registra la formando pigmentos asociados con las esporas
dominancia de Aspergillus flavus en la fase (azules, verdes, grises, rojos, violetas, blandos
inicial, y A. fumigatus en la fase termófila (17). o amarrillos). A diferencia de Norcardia,
Streptomyces no reduce nitratos o nitritos.
Streptomyces spp. Suelos alcalinos y neutros son más favorables
Son diversos los trabajos de investigación para el desarrollo de Streptomyces que los suelos
que tienen como objetivo acortar el tiempo ácidos (21).
de maduración del proceso de compostaje; Streptomycetes son habitantes naturales del
Chen et al. (18) realizaron la reinoculación suelo, que conforman un grupo heterogéneo
de microorganismos termotolerantes aislados de microorganismos unicelulares; producen la
a partir del mismo compost, entre los que sustancia geosmin, responsable de la fragancia
registran el género Streptomyces como terrosa después de las lluvias; además, contienen
importante en dicha operación. También una amplia variedad de metabolitos secundarios
Jiménez (19) registró aceleración del proceso de que poseen antibacterianos, antifúngicos y
compostaje en las pilas que fueron inoculadas antivirales, entre otros: ellos juegan un papel
con Streptomyces spp. Además, Escudero y importante en la mineralización en los procesos
Arias (20) evaluaron el mejor comportamiento del suelo, además de descomponedores de restos
de las colonias de Streptomyces en condiciones vegetales, con la ayuda de una gran cantidad
de humedad superior al 72%, y que su ubicación de enzimas requeridas en las actividades de
en la superficie de las pilas les permitió un buen degradación (22).
desarrollo. Estudios realizados con comunidades de
El género Streptomyces forma parte del Streptomyces spp., a partir de los materiales
orden Actinomicetales. Son actinomicetos de nidos fecales de termitas (Coptotermes
aerobios y se han venido agrupando según formosanus) que fueron muestreados en diversos
criterios morfológicos, tales como la capacidad lugares, permitió registrar que todos los nidos
de formar filamentos ramificados y esporas. tienen alguna manera confiable de asociación
La identificación de estas bacterias sigue con Streptomyces spp., entendiéndose que los
siendo difícil, y su diagnóstico y clasificación contenidos del nido fecal de C. formosanus,
se basa en características morfológicas (macro proporciona condiciones nutricionales para
y microscópicas), en las quimiotaxonómicas Streptomyces spp., con beneficiosos para el
y en las bioquímicas. Los representantes ambiente del suelo (23).
del género Streptomyces son gram positivas, La importancia de Streptomyces spp. en
aerobias estrictas y catalasa positiva; que no el biocontrol de enfermedades existentes en
se colorean con la técnica de Ziehl-Neelsen ni el suelo que afectan a las plantas, se puede
de Kinyoun (decoloración por ácido sulfúrico entender por las interacciones entre especies
al 2%); producen filamentos (o micelios) mediadas por antibióticos, debido a que los
largos (de 0.5 a 1.0 µm de diámetro y una impactos de una especie sobre otra, generan
longitud indefinida), muy ramificados; exhiben cambios en la dinámica de ellos; así, la detección
filamentos aéreos que pueden ser rudimentarios de tales impactos requiere métodos eficaces
o extensos y pueden estar embellecidos por que permitan la cuantificación de poblaciones
espirales, enroscamientos o ramificaciones y se puedan identificar las relaciones de las
múltiples. Tales filamentos aéreos producen comunidades microbianas (24).
15
Para Tokala et al. (25), Streptomyces lydicus multiplicación masiva con propósitos de
es un actinomiceto capaz de colonizar raíces, aplicarse en el compostaje de subproductos de
que inicialmente se aisló para evaluar sus la caña de azúcar.
propiedades como agente de control biológico
antimicótico, mediante la colonización Referencias bibliográficas
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actuar como bacteria promotora de crecimiento Vegetal (Vol. 10). Universitat Jaume I.320 P.
vegetal. 3. Wei, Y., Wei, Z., Cao, Z., Zhao, Y., Zhao,
En trabajo realizado con residuos sólidos X., Lu, Q., … Zhang, X. (2016). A Regulating
orgánicos municipales, los autores reportan Method For The Distribution Of Phosphorus
que, en el proceso de compostaje, las Fractions Based On Environmental Parameters
poblaciones microbianas indicaron presencia Related To The Key Phosphate-Solubilizing
de actinomicetos (bacterias Gram-positivas), Bacteria During Composting. Bioresource
representados por Streptomyces, cuya actividad Technology, 211, 610–617. Http://Doi.
se registró con más frecuencia en todos los Org/10.1016/J.Biortech.2016.03.141
tratamientos evaluados (26). 4. Zhao, Y., Lu, Q., Wei, Y., Cui, H., Zhang,
En un trabajo realizado para la identificación X., Wang, X., … Wei, Z. (2016). Effect Of
de poblaciones microbianas presentes en Actinobacteria Agent Inoculation Methods On
compost a partir de residuos orgánicos de Cellulose Degradation During Composting
fincas cafeteras, tanto en los sustratos simples Based On Redundancy Analysis. Bioresource
como en los complejos evaluados, se indica que Technology, 219, 196–203. Http://Doi.
los microorganismos de mayor importancia Org/10.1016/J.Biortech.2016.07.117
se relacionan con actnomicetes del género 5. Sánchez De Prager, M., Posada, R.,
Streptomyces, además de bacterias del género Velásquez, D., & Narváez, M. (2010).
Bacillus y el hongo Aspergillus (27). Metodologías Básicas Para El Trabajo Con
Por tanto, el Grupo de Investigación Micorriza Arbuscular Y Hongos Formadores
MICROBIOTEC de la Universidad Libre Pereira, De Micorriza Arbuscular. Universidad Nacional
tiene especial interés por los microorganismos De Colombia, Palmira.
benéficos del suelo, con énfasis en el género 6. Cisneros, R. O. J. A. S., Carlos, A., Sánchez
Streptomyces, debido a su gran importancia en De P, M., Menjivar, F., & Carlos, J. (2016).
la participación de los procesos de compostaje Influencia De Microorganismos Solubilizadores
de materiales vegetales, entre otras razones. De Fósforo Del Suelo Y Su Absorción Por
Para su estudio, en el campus Belmonte se Plántulas De Café. Bioagro, 28(2), 95-106.
ha aislado una cepa del género Streptomyces; 7. Shanware, A. S., Kalkar, S. A., & Trivedi, M.
con dicho actinomiceto se han desarrollado M. (2014). Potassium Solublisers: Occurrence,
diferentes estudios, que han permitido la Mechanism And Their Role As Competent
elaboración del presente libro de investigación, Biofertilizers. Int J Curr Microbiol App Sci, 3(9),
donde se describen las diferentes fases, desde 622-9.
su aislamiento, pasando por diferentes pruebas 8. Peters, S., Koschinsky, S., Schwieger, F., &
bioquímicas de confirmación, además de evaluar Tebbe, C. C. (2000). Succession Of Microbial
aspectos de manejo del microorganismo, en Communities During Hot Composting As
condiciones de laboratorio, para su posterior Detected By Pcr–Single-Strand-Conformation
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18
19
Introducción con características endófitas, patógenas y otros

Actinomycetaceae es un grupo importante como simbiontes beneficiosos, con una amplia
de bacterias saprófitas y de crecimiento variedad en organismos superiores, incluyendo
filamentoso, capaces de producir una amplia insectos y plantas (11,12).
variedad de enzimas extracelulares y metabolitos En condiciones ambientales, los
secundarios de interés comercial e industrial componentes bioactivos son cruciales en la
(1), donde hacen parte Streptomyces spp. (2). vida de Streptomyces en el suelo, con relaciones
Se ha evaluado que producen compuestos asimbióticas, donde se cree que sus antibióticos
de uso biotecnológico como antibióticos y son armas antagonistas o que actúan como
enzimas industriales, como las hidrolíticas y de moléculas de señalización, que proporcionan
lignocelulosa, entre otras sustancias (3,4). ventajas en la competitividad por nutrientes,
Las actinobacterias pueden formar esporas por lo que Streptomyces es reconocido por
en condiciones de altas temperaturas, además ejercer un control en la salud del suelo, frente a
de resistir duros ambientes, por lo que su diversos patógenos (13).
inoculación en bioprocesos puede ser excelente Actinomicetos viven extensivamente en
herramienta, donde la celulosa se convierte de ambientes ricos en lignocelulosa, como es el
productos complejos a simples, sin requerir la caso del horizonte A del suelo, del compostaje
adición de enzimas (2,5). y otros. En una mezcla de poblaciones
Este grupo de bacterias tienen la habilidad de microbianas del compostaje, los actinomicetos
fijar nitrógeno atmosférico, elemento primordial son importantes por su capacidad para producir
en la formación de estructuras moleculares lacasa y descomponer la lignina, especialmente
como ácidos nucléicos, aminoazúcares y en condiciones de altas temperaturas generadas
aminoácidos, entre otros (6). Dentro de la en el proceso de compostaje (14).
gran variedad de microorganismos que han En trabajos realizados con compostaje de
sido descritos como Fijadores Biológicos de residuos orgánicos, se realizó el aislamiento
Nitrógeno (FBN) forman grupo importante las de diferentes morfotipos microbianos, para
bacterias del tipo Actinomicetos, que además evaluar su actividad enzimática en medios
desempeñan papel importante en la producción sólidos con xilano y celulosa. Seleccionaron
de metabolitos secundarios y la degradación de los mejores microorganismos para cada
material orgánico (7). actividad, encontrando 5 microorganismos con
Streptomycetes contienen una amplia potencial para degradar celulosa, de los cuales
variedad de metabolitos secundarios que pueden el actinomiceto Streptomyces sp. demostró su
actuar como antibacterianos, antifúngicos y capacidad para degradar celulosa (15).
antivirales, entre otros, siendo importantes en Se ha reportado la aceleración de las
la mineralización en los procesos del suelo, fases del proceso de compostaje de residuos
además de descomponedores de restos vegetales vegetales, cuando las pilas se inocularon con
(8). los microorganismos Aspergillus Niger (Hongo)
El género Streptomyces sp. agrupa más y/o Streptomyces (Actinomycetos), alcanzando
de 500 especies de bacterias gram positivas menor tiempo de maduración del compost (en
y filamentosas; hacen parte del Phylum 30 días), en comparación con las pilas que no
Actinobacteria, Orden Streptomycetales. Los fueron inoculadas (12).
representantes del género Streptomyces tienen En las primeras fases de aislamiento de
presencia en hábitats del suelo y en sedimentos microorganismos del suelo, en especial para el
acuáticos (9). Streptomyces es un grupo saprofito estudio de hongos, se reporta la utilización del
con rol destacado en el ciclado de nutrientes medio avena agar; en él, se pueden favorecer
(10); también se han encontrado representantes o generar las condiciones óptimas para el
21
desarrollo del microorganismo en estudio, ya Objetivo

sea modificando el pH o agregando antibióticos Teniendo en cuenta la importancia ambiental
para el control de los no deseados (17). de los actinomicetos en el desarrollo de los
El medio Ashby es un agar especial por estar suelos, y sabedores del posible potencial natural
libre de nitrógeno, lo que facilita la identificación de sus representantes que pueden estar presentes
de cepas potenciales en la fijación de nitrógeno. en el campus Belmonte de la Universidad Libre
Los microorganismos que crecen en este medio Seccional Pereira, se propuso como objetivo del
reemplazan la metabolización del nitrógeno por presente trabajo de investigación la evaluación
el nitrógeno atmosférico que se encierra en el preliminar para aislar actinobacterias del
microambiente de la caja de Petri (7). genero Streptomyces spp., presentes en un
El medio GYM contiene el extracto de nicho ecológico del campus Belmonte, con
levadura y la glucosa que influyen en el propósitos de posible aplicación en procesos de
crecimiento de actinobacterias (18,19). Además, biocompostaje.
el medio GYM streptomyces o ISP, a diferencia
del anterior, contiene extracto de malta y Materiales y métodos
carbonato de calcio (CaCO3) como fuente
de cationes esenciales para el crecimiento de Toma de la muestra de los suelos.
Streptomyces (20,21,22). Previamente se analizaron cuatro nichos
En un buen número de trabajos ecológicos presentes en el campus Belmonte
de investigación que se realizan en la de la Universidad Libre, Seccional Pereira:
micropropagación vegetal, el medio basal MS, Humedal, Matorral, Guadual y Bosque
propuesto por Murashige y Skoog (23), es el intervenido (Figura 1). Para la toma de las
medio de cultivo más utilizado para aplicarse en muestras de suelos se seleccionó la rizófora
las técnicas de cultivo de tejidos vegetales; medio del árbol pomarroso (Syzygium jambos) de
en el cual también se reporta con frecuencia la la familia Myrtaceae, presente en el nicho
aparición de microorganismos, especialmente ecológico Bosque intervenido.
bacterias (24,25).
Figura 1. Tipos de ecosistemas presentes en la Universidad Libre Seccional Belmonte (Fuente: Autores).
22
Se analizó un nicho ecológico (Figura la NTC 3656 que incluye fecha, hora, nombre de
2), basados en la metodología propuesta la persona que realiza el muestreo, profundidad,
por Korayem et al. (2015widely used in tipo de análisis, mapa o esquema de la zona
pharmaceutical, cosmetic and food industries. muestreada.
The current study aimed to isolate Streptomyces Para optimizar y homogenizar las muestras
species from Egyptian arid soil, efficient in se adoptó la metodología enunciada en el
biosurfactant production. Fifty isolates of Manual de Laboratorio de Análisis Químico de
Streptomyces were obtained from arid soil Suelos de la UTP (7).
in Egypt. Primary screening, using lipase, Las muestras fueron recolectadas en bolsas
drop collapse, parafilm M and haemolysis con cierre hermético (Ziploc®); desde su sitio
tests, showed 37 isolates (74%) (26) para el de recolección, las muestras se transportaron
aislamiento de Streptomyces spp. en suelos en nevera portátil hasta al laboratorio de
áridos, así como la metodología propuesta por Microbiología, donde se llevó a cabo el proceso.
Salazar y Ordóñez (7), para el aislamiento de El trabajo se realizó en el laboratorio de
actinomicetos en diferentes ecosistemas. El sitio Microbiología de la Universidad Libre Seccional
de recolección de la muestra de suelo se indica Pereira. El cuarteo de las muestras de suelo se
con su posicionamiento geográfico, haciendo realizó sobre superficies asépticas; retirando
uso de un equipo GPS que denota: 4°48’19.72”N raíces, piedras y otros residuos sólidos (figura
75°45’34.91” O Elevación 1246 m. Dicho suelo 3). Paso seguido, se formó un montón simétrico
indicó al tacto una textura franco limosa, propia el cual se dividió en cuatro partes iguales, dos
de un suelo de la Unidad Montenegro, presente de las cuales se desecharon y los dos restantes
en la región del Eje Cafetero. se mezclaron nuevamente hasta homogeneidad
(Figura 4). Estos pasos se repitieron hasta lograr
una cantidad de muestra cercana a 100 g (NTC
3656) (Figura 5).
Figura 3. Preparación de las muestras de 100 g.
Figura 2. Mapa del muestreo geográfico de la

Universidad Libre seccional Belmonte (Fuente: Google
Earth).
En la rizófora del árbol pomarroso

(Syzygium jambos), se tomaron 3 muestras con
la utilización de una pala previamente lavada,
en una capa de suelo no superior a los 20 cm
de profundidad en un hoyo en forma de V (7). Figura 4. Cuarteo de las muestras.
Cada muestra de suelo se rotuló como lo señala
23
Posteriormente se tomó una porción de

0,1 ml de cada suspensión (de las tres últimas
diluciones) para ser esparcido en superficie en el
medio de cultivo, por triplicado. Finalmente, las
siembras se incubaron a temperatura ambiente
(30 ± 3° C), durante 14 días. En los días 7 y 14
de la incubación se revisaron las poblaciones
microbianas presentes de cada suspensión (7).
Para el cultivo de las suspensiones de presunto
Figura 5. Representación de cuarteo de la muestra
Streptomyces, se empleó el medio Ashby (Tabla
Posteriormente, de una de las partes 2), propuesto por Salazar y Ordóñez (7).
resultantes del cuarteo, se procedió a tomar la Componentes y preparación:
muestra para efectuar las diluciones (Figura 6).
Tabla 2. Componentes del medio Ashby
Componentes g/L
Sacarosa 20
CaCl2 0.2
KH2PO4 1
MgSO4 0.2
FeSO4 0.005
NaCl 0.2
Agar-Agar 15
Figura 6. Preparación de las diluciones desde 10-1
hasta 10-7
Se agregaron los componentes al agua
Para efectuar el aislamiento de especies de destilada; seguido se calentó hasta ebullición
Streptomyces, se tomaron 10 g de la muestra; por 5 min y se llevó a condiciones de autoclave
luego se suspendieron en 90 ml de agua estéril, (15lb y 121°C), por 20 min. Por último, se sirvió
y se realizaron diluciones por duplicado desde en cajas de petri estériles.
10-1 hasta 10-7 en solución peptona (28). También se empleó el agar GYM, propuesto
Para la suspensión de las diluciones, se por Glazebrook et al. (18) y por Shima et al. (19),
empleó el medio Agar-Avena (Tabla 1), cuyos componentes (Tabla 3) y preparación se
propuesto por Curvelo y Rojas (19). indican:
Tabla 1. Componentes de agar avena. Tabla 3. Componentes del medio GYM
Componentes g/L Componentes g/L

Agar-Agar 15 Glucosa 4.0
Avena 30 Extracto de levadura 4.0
Agar 15
Para su preparación, se debió hervir la avena Agua destilada 1000
durante 1 hora en un litro de agua; luego se procedió
a colar y se agregó el agar, para seguidamente La solución con el medio se calentó hasta
aforar a 1.000 mL; luego se llevó a condiciones de ebullición por 5 min y se llevó a condiciones
autoclave a 121°C y 15 lbs de presión, por 20 min de autoclave (15lb y 121°C), por 20 min. Por
y servir en las cajas de petri (17). último, se sirvió en cajas de petri estériles.
24
Además, se probó el medio GYM Resultados y discusión

suplementando con extracto de malta y
carbonato de calcio al medio (Tabla 4) (20). Caracterización macroscópica
Para el aislamiento de Streptomyces spp.
Tabla 4. Componentes del medio GYM se utilizó el medio de cultivo Agar avena, en
Streptomyces el cual se realizó la siembra de la dilución 10-
7
. En la dilución 10-7 se encontró una supuesta
Componentes g/L colonia del grupo actinobacteria y supuesto
Glucosa 4.0 Streptomyces spp. (Figura 7).
Extracto de levadura 4.0
CaCO3 2.0
Extracto de malta 10.0
Agar 15
Agua destilada 1000
Seguido se ajustó el pH a 7.0 antes de agregar

el agar. Después se llevó a condiciones de
autoclave (15lb y 121°C), por 20 min.
El último medio de cultivo probado fue el
medio basal MS (Murashige y Skoog, 1962)
(23), compuesto por las siguientes sustancias
(Tabla 5). Figura 7. Dilución 10-7 en el agar avena. Presencia de
Luego de mezcladas las sales, se lleva la hongos y bacterias filamentosos.
solución a condiciones de autoclave (15 psi y
121 °C), por 20 minutos, previamente servido Transcurrido el tiempo de incubación, se
en frascos tipo compota, con 20 mL de medio revisaron las características macroscópicas de
de cultivo. las colonias crecidas en el agar (Agar Ashby,
Agar GYM y Basal MS); considerando: textura,
Tabla 5. Composición del medio basal MS color, forma, superficie y borde, donde los
aspectos a valorar fueron: posibilidad de
Nutriente MS mg/L
colonias con anillos segmentados, rugosas,
cerosas, polvorosas, con bordes irregulares,
1. NH4NO3 1650.0
colores blanco, gris y café claro.
2. KNO3 1900.0
En el medio Agar avena se registró
3. MgSO4 x 7 H2O 370.0
crecimiento de Actinobacterias, además de
4. KH2PO4 170.0 una gran diversidad de microorganismos,
5. CaCl2 x 2 H2O 440.0 tanto hongos como bacterias, por ser un medio
6. Na2EDTA x 2 H2O 37.4 enriquecido especial para microorganismos del
7. FeSO4 x 7 H2O 27.8 suelo (17).
8. H3BO3 6.2 A partir de la colonia seleccionada, se
9. MnSO4 x 4 H2O 22.3 realizaron repiques en los medios a probar (Agar
10. ZnSO4 x 7 H2O 8.6 Ashby, Agar GYM y Murashige & Skoog). En el
11. KI 0.83 medio Ashby, las colonias aparecieron entre los
12. Na2MoO4 x 2 H2O 0.25 5 a 7 días de incubación (Figura 8).
13. CuSO4 x 5 H2O 0.025
14. CoCl2 x 6 H2O 0.025
25
En medio basal MS, las colonias aparecen

entre 4 y 7 días de incubación (Figura 11).
Figura 8. Resultado del repique en medio Ashby.
En GYM, las colonias aparecieron luego de 4

a 7 días de incubación (Figura 9).
Figura 11. Resultado del repique en medio basal MS
Se evidenció que en el medio de cultivo

Ashby, se registra buen desarrollo de colonias
con características de Streptomyces spp.,
pero el mayor problema fue la incidencia de
contaminación por hongos (Figura 12).
Figura 9. Repique de colonias en Agar GYM.
En el agar suplementado (GYM streptomyces

medium), las colonias aparecieron de 5 a 8 días
(Figura 10).
Figura 12. Evidencia de los repiques contaminados en el

medio Ashby.
Para el medio basal MS, la incidencia de

contaminación fue especialmente de hongos,
aunque el aislamiento no fue tan productivo
(Figura 13).
Figura 10. Repique de colonias en agar GYM
Streptomyces
26
En Agar GYM, las colonias bacterianas

presentaron condiciones cerosas y polvorosas
con bordes irregulares y color blanquecino
(Figura 15); estas colonias pueden ser
comparadas con el registro fotográfico del
aislamiento, debido a que algunos ingredientes
utilizados en el GYM, concuerdan con los
ingredientes del medio utilizado por Sheetal y
Mondi (8).
Figura 13. Evidencia de los repiques contaminados en el

medio MS
Del previo aislamiento del presunto

Streptomyces spp., se escogieron las colonias
morfológicas más parecidas a lo descrito en la
literatura.
En el caso del agar Asbhy, se analizaron
colonias rugosas y polvorosas con bordes
irregulares; asimismo un color café grisáceo
(Figura 14). Estas colonias son parecidas a las
colonias registradas por Salazar y Ordóñez (7) y
Sheetal y Mondi (8).
Figura 15. A. colonias obtenidas del repique; B. colonias

en medio GYM; C. Streptomyces reportado por Sheetal y
Mondi (2012).
En el medio basal MS, se obtuvo colonias

polvorosas y bordes irregulares con un punto
negro en el centro, con el resto de color
blanquecino (Figura 16).
Figura 14. Evidencia macroscópica en el medio Ashby.

A y B colonias obtenidas del repique; C colonias
reportadas por Sheetal y Modi (2012).
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30
31
Resumen de carbono y energía, necesaria para llevar a cabo

El género Streptomyces spp. acoge un gran su ciclo de vida. Su hallazgo se puede realizar
número de bacterias filamentosas, miceliares, en diversos ambientes, debido a que están
Gram-positivas, aerobias, ciclo de vida considerablemente distribuidas en la naturaleza
complejo, capaces de utilizar compuestos siendo su habitad más frecuente el suelo (2).
orgánicos como fuente de carbono y energía. En Streptomyces spp. es un microorganismo que
el presente trabajo de investigación se procedió lleva a cabo su ciclo de vida de forma saprofítica
a la aplicación de pruebas bioquímicas que degradando restos orgánicos, principalmente
permitieran la identificación de Streptomyces vegetales y animales (3). El género Streptomyces
spp. de aislados del campus Belmonte; las posee gran semejanza con hongos, esto gracias
pruebas bioquímicas que se aplicaron fueron: a su capacidad polimórficas, la producción de
catalasa, oxidasa, rojo de metilo, vogues micelio vegetativo y micelio aéreo, con carencia
proskauer, hidrolisis de gelatina, degradación de mitocondrias, núcleo y cloroplastos (2).
de urea y citrato; también se realizó la El género Streptomyces comprende 611
evaluación de degradación de celulosa en agar especies con nombres publicados válidamente,
carboximetilcelulosa (CMC) acompañado de sin considerar homotípicos y sinónimos
identificación microscópica; los resultados heterotípicos (4) (19). “clasificándolo como el
obtenidos en la investigación con base a la género más grande del dominio Bacteria” (5)
literatura permitieron definir el reconocimiento (20).
bioquímicamente de Streptomyces spp. y su Durante el crecimiento, los estreptomicetos
actividad degradadora de celulosa. adoptan una morfología diferenciada,
Palabras clave: Pruebas bioquímicas, asimismo experimentan cambios evidentes
Streptomyces sp., caboximetilcelulosa. con el metabolismo celular; Streptomyces sp.
es capaz de tomar como fuente de nutrientes
Introducción sustratos secos como restos de materia orgánica,
Los representantes de la familia formando un andamio de hifas ramificadas
Streptomycetaceae son los microrganismos que dan lugar al micelio; esta competencia
más estudiados dentro del orden de los degradadora es posible gracias a la generación
Actinomycetales, siendo el género Streptomyces de una extensa gama de enzima hidrolíticas
el más conocido; este género agrupa un gran extracelulares; la proporción de nutrientes
número de bacterias miceliares, aerobia obtenidos a partir de biopolímeros insolubles
estrictas generalmente Gram positivas; sin como la lignina, celulosa, pectina, quitina,
embargo, cabe resaltar que se han estudiado hemicelulosa y condiciones ambientales,
especies que pueden crecer en anaerobiosis; convierte a diversas especies de Streptomyces
a nivel genético tienen un cromosoma lineal como microorganismos recicladores de
de gran tamaño superando las 8 Mb rico en carbono. La variabilidad metabólica de este
guanina y citosina; entre sus características género posee una propiedad interesante por su
principales encontramos su gran complejidad variada capacidad de sintetizar un gran número
en su ciclo de vida, lo cual conlleva a una de metabolitos secundarios con actividades
evidente diferenciación morfológica (1). biológicas modificadas donde se destacan
El género Streptomyces sp. corresponde las propiedades antitumorales, antibióticas,
a la familia Streptomycetaceae y al orden de herbicidas, inhibidores enzimáticos, pigmentos,
los Actinomicetales; comprendiendo así con aromas entre otros (1).
características morfológicas filamentosas, Los medios de cultivo son utilizados
micelares, tienen la capacidad de utilizar un gran generalmente para suministrar sustratos ideales
número de compuestos orgánicos como fuente para el crecimiento de los microorganismos; para
33
el género Streptomyces son utilizados medios de carbono es uno de los componentes del medio
cultivo como el Agar avena donde sus nutrientes que ayudan a una identificación precisa (8).
y las condiciones ambientales permiten ver Las pruebas bioquímicas se basan
las colonias con particularidades altamente específicamente en la identificación de
significativas; en la parte más baja de la colonia una enzima generada al interior de un
consiste de hifas de micelio vegetativo y sustrato microorganismo para lograr la degradación
ramificado que comprenden directamente el de un sustrato dado. Existen pruebas que
medio, en la superficie se encuentra cubierta de pueden generar resultados a corto plazo como
hifas aéreas que utilizan nutrientes primarios la evaluación de enzimas preformadas; otro
procedentes de la hidrolisis del micelio sustrato tipo de pruebas es la detección de metabolitos,
más viejo. El estado final del desarrollo es la o la determinación de sensibilidad a ciertas
conversión de micelio aéreo en esporas y esto sustancias adicionadas al medio de cultivo;
ocurre en la parte más alta del micelio aéreo, algunas pueden realizarse de forma rápida, tras
donde se forman septos; finalmente estas la incubación del microorganismo de 2 a 6 horas,
esporas pueden dispersarse y reestablecer su donde se llevan a cabo reacciones enzimáticas
cromógenas o pruebas convencionales
ciclo de vida (6).
modificadas (9).
En la presente investigación se realizó
Prueba de catalasa: La catalasa es una
la evaluación de pruebas bioquímicas para
enzima presente en todas las bacterias aerobias
Streptomyces spp., sobre las cepas obtenidas de
descrita fue por Loew (10). La catalasa utiliza
aislados del campus Belmonte de la Universidad
una molécula de peróxido de hidrógeno (H2O2)
Libre Seccional Pereira; el propósito consistió
que se forma como producto terminal oxidativo
en confirmar la presencia de microorganismos
de la descomposición aeróbica de los azucares;
como presuntos Streptomyces spp. según
el peróxido de hidrogeno es descompuesto en
sus características morfológicas in vitro.
agua y oxígeno, donde el O2 genera un burbujeo
Por tanto, la pregunta que encaminó la
indicando que la reacción es positiva (11).
investigación se relacionó con la capacidad
Prueba de oxidasa: La enzima citocromo-
de identificar, mediante pruebas bioquímicas,
c-oxidasa fue descrita por Mac Munn (10);
los microorganismos del género Streptomyces
la reacción de oxidasa se debe a la presencia
sp., de cultivos que estuvieron sometidos
de un sistema citocromooxidasa presente
a diferentes condiciones de laboratorio, de
en organismos aerobios, algunos anaerobios
aislados obtenidos en el Campus Belmonte de
facultativos y, excepcionalmente, en algún
la Universidad Libre.
microaerófilo, esta enzima se activa con la
oxidación del citocromo que es reducido por el
Pruebas bioquímicas para la identificacion
oxígeno molecular que produce agua o peróxido
de Streptomyces spp.
de hidrógeno según la especie bacteriana, el
Para la identificación de Streptomyces sp.
oxígeno actúa como aceptor final de electrones
es necesario adoptar rutas metabólicas para
en la cadena transportadora de electrones;
la escogencia del modelo, las más utilizadas
donde al estar en contacto con el reactivo de
la cual ha dado resultados satisfactorios son:
kovacs tiñe las colonias oxidasa positivas de
hidrolisis de almidón, hidrolisis de caseína,
color fucsia que vira gradualmente a púrpura
actividad catalasa, oxidasa, descomposición de
(12).
tirosina entre otras (1). Es necesario saber qué
Prueba rojo de metilo: Esta prueba se
tipo de medio líquido y solido es ideal para su
realiza para determinar la capacidad de un
crecimiento (7); así mismo se debe conocer cada
microorganismo de fermentar la glucosa con
uno de sus componentes, donde la fuente de
producción de ácido por la vía ácido mixta o
34
con producción de un producto final neutro fuente de carbono, siendo estos componentes
como la acetoína por la vía butanodiólica, necesarios para el desarrollo bacteriano; es un
donde la coloración roja, indica la presencia de medio de cultivo diferencial en base a que los
ácidos provenientes de la fermentación de la microorganismos capaces de utilizar citrato
glucosa que constituye un resultado positivo y como única fuente de carbono, usan sales de
una coloración amarilla constituye una reacción amonio como única fuente de nitrógeno, lo
negativa (13). cual permite una producción de alcalinidad. El
Prueba Vogues proskauer: La glucosa puede metabolismo del citrato se realiza, en aquellas
ser metabolizada por los microorganismos, a bacterias poseedoras de citrato permeasa
través de diversas vías metabólicas, según la obteniendo reacciones con viraje a color azul
vía utilizada se originarán productos finales (16)
ácidos o neutros, que podrán ser reconocida
por la adición de alfa naftol para evidenciar Degradación de celulosa
la presencia de productos finales neutros, El ecosistema del compostaje es un foco
donde una coloración rojiza que aparece en apropiado para la identificación de gran
los medios de cultivo con glucosa de ciertos diversidad de microorganismos y metabolitos
microorganismos, es dada por la oxidación del secundarios, asociados a la degradación de
acetilmetil carbinol a diacetilo el cual reacciona celulosa participando en una parte importante
con la peptona del medio (13). del ciclo biogeoquímico del carbono (17).
Licuefacción de gelatina: La prueba de La celulosa es uno de los compuestos de
licuefacción de gelatina se utiliza como medio mayor abundancia presente en la biomasa
de cultivo gelatina nutritiva, en esta prueba vegetal, generalmente es descompuesta por
se pretende determinar la capacidad de un microorganismos con acciones enzimáticas
microorganismo de producir enzimas de tipo asociadas en complejos, siendo comúnmente
proteolíticas como las gelatinasas que licuan denominadas en actinomicetos celulosomas; las
e hidrolizan la gelatina o muestran cambios actividades hidrolíticas de estas enzimas se ven
característicos debido a los productos de seriamente afectadas por una gran diversidad
degradación (14). de factores físicos y químicos, es por esto que el
Hidrolisis de urea: El medio de cultivo urea aislamiento de microorganismos que segregan
formulado por Rustigian y Stuart, contiene enzimas al medio extra celular con propiedades
extracto de levadura como única fuente de específicas que puedan soportar variables como
carbono, nitrógeno, vitaminas y cofactores, temperatura, pH, solventes orgánicos entre
y aporta los nutrientes esenciales para el otros, son de gran interés a nivel industrial (18).
desarrollo bacteriano. Las sales de fosfatos Streptomyces sp. es un microorganismo que
constituyen el sistema buffer, el rojo de fenol es contiene gran diversidad enzimática para la
el indicador de pH y la urea es el sustrato de degradación de celulosa, ya sea actividad de
la enzima ureasa, para aquellas bacterias que endocelulasa, exocelulasa, celobiosa, xilanasa,
poseen la enzima ureasa, pueden utilizar el pectinasa, ligninasa, peroxidasa y lacasa. Para
nitrógeno proveniente de la urea, la hidrolizan, lograr una identificación especifica de las
liberando amoníaco y dióxido de carbono, estos enzimas para la degradación de celulosa, se
productos metabólicos alcalinizan el medio, hace necesario usar métodos cualitativos y
haciendo virar el indicador a rojo fenol (15). semicuantitativos en medio de cultivo sólido;
Prueba de citrato: En este medio de cultivo, evaluándose comúnmente la actividad de
el fosfato monoamónico es la única fuente endocelulasa en medio de cultivo líquido (19).
de nitrógeno y el citrato de sodio es la única Este tipo de microrganismos que pertenecen
35
al orden Actinomycetales además de tener se realizó la lectura, donde se observó el viraje

propiedades específicas para la degradación de amarillo a fucsia, cambio de consistencia del
de celulosa, poseen características que inhiben medio tras 2 horas de refrigeración y cambio de
el crecimiento de varios patógenos en la verde a azul respectivamente.
rizósfera, degradan compuestos nitrogenados Para la actividad catalasa, se adicionaron
como el hidrocarburo permitiendo mejorar 1,5 ml de H2O2 al 30% y consecutivamente
la disponibilidad de nutrientes, minerales, se observó la reacción; en la prueba oxidasa
aumentar la producción de metabolitos y se agregaron 2,0 ml de reactivo de Kovacs
promover los reguladores del crecimiento esperándose 5 min. para observar resultados; en
vegetal, obteniendo mejores rendimiento en la prueba rojo de metilo, se adicionaron 5 gotas
cultivos (20). del reactivo indicador, visualizando resultados a
La celulosa se ha convertido en un problema los 10 min. siguientes; para la prueba de Vogues
de interés mundial debido a la acumulación por Proskauer se agregaron 0,6 ml de alfanaftol al
desechos agrícolas, industriales y municipales, 5%; se agitó el tubo suavemente y se adicionaron
que representan riesgo ambiental (21,22); los 0,2 ml de KOH al 40%; transcurridos 15 min. se
microorganismos que habitan en el suelo han realizó la lectura.
logrado ciertas características que les permite Los ensayos se llevaron a cabo por duplicado,
la descomposición de materia orgánica, que para cada una de las pruebas realizadas al
es difícil de hidrolizar debido a su diversidad presuntivo Streptomyces sp., con aplicación de
y complejidad estructural (23); para obtener variables pH (7-9) y T (24°C - 37°C).
esta capacidad se requiere una combinación - Degradación de celulosa.
de enzimas para convertir la celulosa en La actividad degradadora de celulosa
monómeros de glucosa. fue evaluada en agar carboximetilcelulosa
(CMC), donde se aplicó cada una de las
Metodología variables de laboratorio, estimadas en las
- Aislamiento. pruebas bioquímicas. Se realizó un pozo
El presente trabajo de investigación se con un sacabocado y se inocularon 18.75µl
realizó en el Laboratorio de Microbiología de medio liquido CMC que contenía
de la Universidad Libre Pereira. Para presuntivo Streptomyces sp., según lo propuesto
desarrollarlo se realizaron repiques de colonias por Pedroza et al. (24). Pasados 14 días de
de Streptomyces spp. previamente aislados del la inoculación, se agregaron 3.0 ml de rojo
Campus Belmonte, en trabajos realizados por congo al 0.2%, dejando actuar por 15 min.;
el Grupo de Investigación MICROBIOTEC, del seguidamente se descartó el exceso y se
Programa de Microbiología (5). Se cultivaron adicionaron 2.0 ml de NaCl al 0.2M durante
según tratamientos que variaron el pH y la 15 min., descartándose nuevamente el exceso;
temperatura a la que permanecieron en medio posteriormente se llevaron los ensayos a
de cultivo sólido y líquido, en condiciones de temperatura de refrigeración por 24 horas.
laboratorio. - Evaluación estadística
- Implementación de pruebas bioquímicas. Se realizó un diseño experimental en el
Se prepararon medios de cultivo según las Software Statgraphics que facilitó la aplicación
indicaciones de la casa comercial, para llevar a de las variables pH y Temperatura.
cabo las pruebas bioquímicas: hidrolisis de urea,
licuefacción de gelatina y el desdoblamiento Resultados y discusión
de citrato; se inoculó el microorganismo y se Con respecto a los resultados obtenidos en
incubó durante 10 días; transcurrido este tiempo medio de cultivo GYM sólido, se identificaron
36
características morfológicas distintivas del que propusieron Waksman y Henrici para

genero Streptomyces: color de los micelios la formación del género Streptomyces (25);
aéreos; formación de las esporas; y tinción Gram Debido a que los actinomicetos están presentes
positiva (Fig. 1). Para la identificación mediante en todo tipo de suelos ricos en materia
pruebas bioquímicas, el microorganismo orgánica, pueden ser confundidos por algunas
manifestó resultados negativos para la características morfológicas; sin embargo los
licuefacción de la gelatina, descomposición de Streptomyces se pueden diferenciar porque
urea, el desdoblamiento del citrato, la actividad forman micelio ramificado y otros poseen hifas
oxidasa y la reacción de Vogues Proskauer; que pueden ser fragmentadas como es el caso
Por otro lado presentó actividad positiva del género Nocardia (26), aunque a veces sea
para catalasa y reacción de la prueba Rojo de posible clasificar una cepa con base en criterios
metilo (Tabla 1). Además, mostró actividad morfológicos completamente evidentes (27).
degradadora de celulosa en agar CMC.
Identificación bioquímica
La identificación confirmatoria del
género Streptomyces se basó en siete pruebas
bioquímicas; de ellas cinco muy importantes,
dado que han sido mayormente utilizadas para
la caracterización de los streptomicetos, donde
se tienen en cuenta los parámetros fisiológicos
del microorganismo en estudio. El género
Streptomyces es específico para la hidrolisis
de aminoácidos como la lisina y tirosina, y
proteínas como la caseína (28). Con respecto
Figura 1. Identificación microscópica de micelio aereo a los resultados obtenidos en este ensayo, en
de Streptomyces sp. en agar GYM. el caso de la actividad de catalasa en todos los
experimentos dio positiva como está reportado
Morfología en la literatura, gracias a que Streptomyces sp.,
La cepa de presunto Streptomyces sp. se fermenta azucares como glucosa e hidroliza
comportó de manera favorable frente a las el peróxido de hidrógeno en agua y oxigeno
diferentes condiciones a la que fue expuesto gaseoso, que es liberado en forma de burbujas.
en el laboratorio (pH y temperatura); sin Macedo y Vola describen claramente que en el
embargo, presentó mejor crecimiento en genoma de los microorganismos que tienen este
pH:7 y temperatura ambiente. Con relación mismo comportamiento frente a la fermentación
a las características morfológicas de la cepa de azucares, generalmente están compuestos
aislada, presentó algunos cambios según por 32 a 62 mol % de G + C; además son bacilos
el medio de cultivo empleado, de lo que se generalmente esporulados, que producen
puede deducir que el medio proporciona los antibióticos y enzimas de gran interés industrial,
nutrientes para que se logre un buen desarrollo como puede ser el caso de Bifidobacterium
del microorganismo, y genere el micelio bifidum que es un Actinomiceto utilizado en la
aéreo; además de la presencia de esporas, la industria alimentaria como probioticos (29). En
cepa mostró un color morado en la superficie microorganismos con un contenido de 51 a 68
del micelio vegetativo y en el micelio aéreo mol % de G + C, son bacilos pleomórficos, no
exhibió esporulación con pigmentos blancos, esporulados y no ácido-alcohol resistente, a los
mediante la técnica de tinción de Gram ser una cuales se les ha realizado estudio del 16s rARN
bacteria gram + (Fig. 1), que son características y se encuentran estrechamente relacionado con
37
Mycobacterium, Nocardia y Rhodococcus, los con la degradación de aminoácidos de

cuales poseen grandes características específicas manera individual (6). Generalmente los
con Streptomyces sp. incluyendo ser catalasa microorganismos pertenecientes al orden
positiva (30). Actinomycetales, específicamente Streptomyces
Se conoce como prueba estándar de oxidasa sp. en su metabolismo generan enzimas
la descrita por Kovacs; de este modo se llevó a hidrolíticas como la gelatinasa (32). Sin
cabo este ensayo con presuntivo Streptomyces embargo, Streptomyces spp. en este ensayo no
sp. La reacción de oxidasa es una prueba mostró actividad enzimática de gelatinasas; esto
básica para la identificación de bacterias Gram puede relacionarse con la variabilidad, siendo
negativas; Enterobacteriaceae, Acinetobacter esta prueba confirmatoria para especies que
y algunos aerobios obligados no producen licuan la gelatina de forma rápida y completa
oxidasa. En este caso Streptomyces sp. manifestó en aproximadamente una semana, debido a que
ser negativo para esta prueba, resultado que Streptomyces spp. tiene la capacidad de generar
tiene relación con lo expuesto por Lanyi (31), enzimas proteolíticas (33).
teniendo en cuenta que Streptomyces sp. es una
bacteria Gram positiva y aerobia estricta. Tabla 1. Resultados obtenidos en la
La prueba rojo de metilo según Cercenado, caracterización bioquímica de Streptomyces
se basa en un indicador de pH, que permite spp., con sus respectivas variables.
comprobar la capacidad de un microorganismo
para producir y mantener estables los productos Ensayos realizados
ácidos finales de fermentación de la glucosa por Pruebas T 24°
la vía de fermentación ácido-mixta, teniendo en bioquímicas T 24°C T 37° T37° C
C
pH 7 C pH 7 pH 9
cuenta que en todos los experimentos realizados pH 9
en el laboratorio esta prueba indicó ser positiva, Catalasa + + + + + + + +
se puede establecer una correlación con respecto Úrea - - - - - - - -
a otras pruebas ejecutadas donde se describe
Gelatina - - - - - - - -
la capacidad que tiene el microorganismo
Vogue
de fermentar la glucosa; rojo de metilo es - - - - - - - -
Proskauer
comúnmente utilizada para la identificación de
Rojo de
los bacilos entéricos gramnegativos. Sin embargo + + - - + + + +
metilo
cabe resaltar que en el metabolismo complejo
Citrato - - - - - - - -
de Streptomyces spp. se ven involucradas varias
vías de fermentación cuando se ve expuesto a
condiciones bajas de O2. De igual manera se En cuanto a la hidrólisis de urea, los
realizó un análisis para la prueba bioquímica resultados generados en el presente trabajo
Vogues Proskauer donde Streptomyces sp. de investigación, tienen relación con estudios
mostró una reacción negativa, lo que permite reportados que demuestran la efectividad
señalar que el microorganismo no puede de actinomicetos (Nocardia asteroides, N.
fermentar la glucosa por la vía butanodiólica, o brasiliensis y N. otitidiscaviarum) para degradar
finalmente obtener un producto neutro. la urea (18). En investigaciones realizadas para
La licuefacción de la gelatina se realiza aislamiento e identificación de Streptomyces
para verificar si el microorganismo tiene la spp., se reporta que al tener en cuenta datos
capacidad de producir enzimas denominadas como coloración de micelio, utilización de
gelatinasas, donde su catabolismo comprende celulosa, urea y diferentes carbohidratos,
dos fases, la primera da lugar a la formación los resultados son bastante diferentes y no
de polipéptidos y la segunda está relacionada siempre se encuentra una similitud entre las
38
muestras analizadas; y resaltan la biodiversidad como el rojo congo debido a los clivajes
encontrada en un mismo hábitat (34). intramoleculares que la enzima realiza (36,37).
La prueba se basa en la capacidad que El análisis estadístico de los resultados
tienen las Enterobacterias para utilizar citrato obtenidos indica que las condiciones óptimas
de sodio como única fuente de carbono para para que Strepromyces spp. pueda alcanzar la
su crecimiento y fosfato de amonio como máxima degradación de la celulosa, suceden
única fuente de nitrógeno (16). En el ensayo con pH 9 y T 24°C (Figura 2); cabe resaltar
realizado con Streptomyces spp. se logró que el pH no es una variable que afecte de
evidenciar que esta bacteria no es utiliza citrato manera considerable la degradación, puesto
de sodio como única fuente de carbono, lo que que el crecimiento del microorganismo no
permite diferenciarlo de otros Actinomycetos se ve afectado por este factor; con respecto a
que poseen características morfológicas la temperatura se percibe que es una variable
parecidas como Actinomyces timonensis (35). importante y el desarrollo del microorganismo
Sin embargo, existe la posibilidad de utilizar el en agar CMC puede llegar a inhibirse en
medio si se agregan suplementos adicionales temperatura de incubación, debido a que el
como la glucosa, extracto de levadura y extracto medio en estas condiciones pierde humedad
de carne (31). que requiere el microorganismo para llevar
En este ensayo se llevó a cabo la evaluación a cabo todas las fases de su crecimiento (37).
de la actividad enzimática de celulasas, En el experimento 2, con pH 7 y temperatura
específicamente las endoglucanasas que actúan ambiente, se observó un halo uniforme
sobre los enlaces B-1,4 glucosídicos esta acción de degradación por acción enzimática del
se ve reflejada sobre el sustrato celulósico, en microorganismo, alrededor de las colonias en
este caso en el medio CMC y se caracteriza agar CMC de aproximadamente 1,9 cm (Figura
por la disminución de la viscosidad del medio 2).
y se detecta mucho más fácil con indicadores
Figura 2. Modelo de superficie de respuesta para la degradación de celulosa por

Streptomyces sp. con variables pH 7 y temperatura 24°C.
39
De acuerdo con los parámetros anteriormente 2. L. T. Elsa Pimienta Rodríguez,

evaluados como la morfología microscópica, “Evaluación De Streptomyces Lividans Como
macroscópica, la temperatura y pH óptimo Hospedero Para La Expresión De Interferón
de crecimiento, propiedades bioquímicas y Alfa 2b Y Estreptoquinasa,” Rev. Cenic Ciencias
degradación de celulosa, se puede deducir Biológicas, Vol. 40, No. 3, 2009.
que el microorganismo aislado del campus 3. R. Kilian, H.-J. Frasch, A. Kulik, W.
universitario, posee similitud con Strepromyces Wohlleben, And E. Stegmann, “The Vanrs
cellulolyticus (35)¸ dado a que es una bacteria Homologous Two-Component System Vnlrsab
gram positiva, con micelio aéreo ramificado y Of The Glycopeptide Producer Amycolatopsis
con presencia de esporas; que en agar avena se Balhimycina Activates Transcription Of The
observa el micelio aéreo con pigmentos blancos Vanhaxsc Genes In Streptomyces Coelicolor,
But Not In A. Balhimycina.,” Microb. Drug
y en la producción enzimática tienen actividad
Resist., Vol. 22, No. 6, Pp. 499–509, Sep. 2016.
positiva para catalasa, negativa para oxidasa y no
4. Wink Joachim, “Dsmz: Compendio De
degrada la gelatina, características propuestas Actinobacteria,” 2016. .
por Goodfellow y colaboradores (35). 5. K. Biswas, J. D. Choudhury, R.
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Botanical Garden Of Pereira Technological
University,” Sci. Tech. Año Xix, Vol. 19, No. 2,
2014.
Figura 3. Degradación de celulosa revelado con Rojo
7. Lemus Ja, López R. Multiplicación
Congo (pH7 – T24°C) Halo de 1,9 cm. En Medio Liquido De Microorganismos Del
Genero Streptomyces Aislados De Un Nicho
Conclusiones Ecológico Del Campus Belmonte De La
Para identificar Streptomyces sp. mediante Universidad Libre Seccional Pereira &Quot;”
pruebas bioquímicas, la actividad de catalasa 8. M. Eleonora And B. Pineda, “La
Solubilización De Fosfatos Como Estrategia
es la más adecuada para su caracterización
Microbiana Para Promover El Crecimiento
metabólica.
Vegetal Phosphate Solubilization As A Microbial
La prueba de degradación de Strategy For Promoting Plant Growth,” Corpoica
carboximetilcelulosa se evidenció para Cienc. Tecnol. Agropecu, Vol. 15, No. 1, Pp. 101–
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Generados En Un Cultivo De Crisantemo
(Dendranthema Grandiflora).”
42
43
Resumen se consideran patógenas para los humanos; estas

Strepomyces sp. se ha caracterizado por su son S. somaliensis, S. griseus y S. paraguayensis
capacidad para la degradación de compuestos (2). Gran parte de estos microorganismos son
orgánicos, por lo que se considera un elemento encontrados en el suelo, aunque muchos de
importante en la realización de biocompostaje; ellos también habitan en ambientes acuáticos,
en la presente investigación se evaluó el figuran entre los actinomicetos aerobios,
desempeño de presunto Strepomyces sp., en también se les atribuye el olor característico de
diferentes condiciones de pH, temperatura la tierra debido a la producción de geosminas
y actividad de agua (aw), teniendo en cuenta (aroma de la tierra) (3).
su morfología y fisiología, tanto en forma El pH de crecimiento óptimo de este
macroscópica al observar las características Streptomyces se encuentra en un rango de 6.5
de la colonia en medio de cultivo, como a 8.0, lo que ocasiona que algunos organismos
microscópica con análisis de tinción de Gram; cercanos a este género presenten la capacidad de
para ello se realizaron modificaciones al medio crecer tanto en medios ácidos como en medios
GYM en condición sólida, llevando a cabo alcalinos que presentan pH 9 o superiores (4).
pruebas espectrofotométricas por medio la Con respecto a la función que cumple
escala de Mc Farland, con su respectiva curva de la temperatura sobre el crecimiento de
calibración; mediante el modelo experimental y Streptomyces spp. se encuentra que, al ser un
su análisis estadístico, se pudo establecer que género ampliamente distribuido en el ambiente,
las condiciones de pH 7.9 actividad acuosa llegan a crecer en rangos de temperatura entre
de 0,99608 y temperatura de 28 °C fueron 25°C y 30°C o conservarse a temperaturas
las mejores para Streptomyces sp., mientras bajas (5); por otra parte, la aw es dependiente
que las condiciones mínimas de crecimiento de la temperatura y la cantidad de solutos que
se registran con pH 5.0, actividad acuosa de tenga el medio; de este modo se logra medir la
0.99608 y temperatura de 6 °C. cantidad de agua disponible para el crecimiento
Palabras Clave: Streptomyces sp., del microorganismo (6).
Actinomicetos, actividad acuosa (aw), pH, Dentro de las funciones que cumple
Temperatura. Streptomyces, se encuentran las diversas
posibilidades metabólicas, pudiendo producir
Introducción sustancias como los antibióticos, o en la
El género Streptomyces comparte agricultura como protectores de las plantas y
características con los hongos por ser participando en procesos de compostaje (7).
pleomórficos y producir micelios tanto Por otra parte, tienen la capacidad de producir
vegetativos como aéreos, siendo clasificado una amplia gama de enzimas catabólicas para
dentro de la familia Streptomycetaceae, donde degradar polímeros biológicos complejos
se ubican bacterias filamentosas, miceliares, entre los que se incluyen los recalcitrantes de
Gram positivas, aerobias, saprofitas, capaces de celulosa y la quitina, siendo este un instrumento
utilizar gran número de compuestos orgánicos importante para ser utilizado en la degradación
como su fuente de energía y carbono (1); entre de los desechos de la caña de azúcar (8).
los organismos más relacionados se encuentran El ciclo de vida de Streptomyces implica
cuatro géneros Actinomyces, Nocardia, procesos de diferenciación morfológica y
Streptomyces y Micromonospora (2). fisiológica, teniendo estas la capacidad de
Streptomyces es un género descrito por colonizar sustratos secos con restos de materia
Waksman y Henrichi en 1943 perteneciente al orgánica, formando una red de hifas tabicadas
orden de los actinomicetos, a pesar de que este ramificadas dando lugar al micelio sustrato
género tenga numerosas especies, solamente tres (4). Las cadenas seguidas de esporas son una
45
característica de identificación morfológica Microbiología de la Universidad Libre, Seccional

y taxonómica muy importante, ya que, Pereira, el Grupo de investigación Microbiotec
dependiendo de la especie, las formas de las se ha propuesto el estudio y evaluación de
cadenas, pueden ser rectas, ramificadas, en cepas de presuntos Streptomyces sp. de aislados
forma de espiral o flexuosas. La producción y del campus Belmonte, que permita evaluar su
secreción de metabolitos secundarios coincide desempeño en condiciones de laboratorio,
por lo general con el inicio de la diferenciación para posteriores multiplicaciones masivas, con
morfológica, una vez terminado el desarrollo propósitos de biocompostaje.
vegetativo (9). El problema que el presente trabajo de
Streptomyces es uno de los géneros que se investigación se propuso resolver, apuntó a
encuentra en mayor cantidad en la naturaleza, la capacidad de evaluar en condiciones de
siendo encontradas más comúnmente en el laboratorio (pH, temperatura y actividad de
suelo, ayudando a la formación de humus, el agua (aw), el comportamiento de una cepa
cual participa en la construcción del suelo y de Streptomyces sp., de aislados del campus
absorción de nutrientes; los microorganismos Belmonte, de la Universidad Libre.
presentes en el suelo representan la biomasa
microbiana que contribuye a la reserva de Metodología
nutrientes; en el proceso de compost participan Mediante repique, técnica que permite hacer
estos microorganismos mediante una fase crecer el microorganismo en un medio de
aeróbica, con el fin de transformar la materia cultivo previamente definido, para un propósito
orgánica al humus y de esta forma se aumentan dado, se inoculó Streptomyces spp., de cepas
los niveles de nutrientes y se mejoran las purificadas a partir de aislados del campus
propiedades del suelo (10). Belmonte de la Universidad Libre Seccional
Una vez Streptomyces tiene presencia en el Pereira, de suelo asociado a la rizósfera de la
proceso de compostaje, se llevan a cabo dos planta Syzygium malaccense (Myrtaceae); se
etapas; en la primera de ellas, las zonas más realizó en medio sólido y liquido GYM (descrito
alejadas de la fuente de nutrientes empiezan en el capítulo anterior); esta técnica permite
por ende a retener sustancias de reserva como transferir cultivos microbianos de medio sólido
lípidos, glucógeno, etc. para posteriormente a sólido, de medio solido a líquido, de líquido a
entrar a modo de ahorro y reserva, hasta que sólido y finalmente de líquido a líquido.
debido a la carencia de nutrientes, se recibe
una serie de señales implicados en la formación Evaluación de pH
de un micelio aéreo en el que se produce el Para determinar el crecimiento óptimo
desarrollo de hifas que emergen del “micelio y multiplicación masiva de Streptomyces en
sustrato”, y posteriormente en la segunda etapa medio GYM, en condición sólida, se realizaron
sufren un proceso de curvatura, enrollamiento, ensayos modificando el pH del medio (pH 5,
formación de septos y engrosamiento de la pH 7 y pH 9), mediante la adición de HCl y
pared celular para dar lugar a una cadena de NaOH; luego de los pHs respectivos, según los
esporas unicelulares, que se liberan al medio y tratamientos, se llevó a condiciones de autoclave
que con las condiciones adecuadas, germinaran (121°C y 15 lb/20 min); finalmente, en cabina
y desarrollaran un nuevo micelio sustrato (4). de flujo laminar se sirvió el medio y se inoculo
Streptomyces spp. representa gran Streptomyces, haciendo el trabajo por duplicado;
importancia como microorganismo quimio- transcurridos cada 24, 36, 48 y 72 horas se
heterótrofo especializado, de especial realizaron observaciones para determinar qué
comportamiento sobre sustratos orgánicos en condición de pH indicó mejor crecimiento de
los procesos de compostaje. En el Programa de Streptomyces.
46
Evaluación de temperatura Gram, la cual se realizó fijando la muestra a

Para evaluar el efecto de la temperatura un portaobjetos mediante solución salina y
sobre Streptomyces, se utilizó nuevamente el calor; después se añadió violeta de genciana o
medio GYM, en condición sólida; teniendo en comúnmente llamado cristal violeta sobre la
cuenta el ajuste de cada pH se tomaron dos cajas muestra y se dejó actuar por 1 min; transcurrido
previamente ajustadas e inoculadas de cada dicho tiempo se eliminó el exceso del reactivo,
experimento y se llevaron dos a condiciones para seguidamente añadir lugol a la muestra
de refrigeración, dos a temperatura ambiente dejándola actuar por 1 min; finalizado el tiempo
y dos en incubadora (6°C, 28°C y 37°C se lavó el exceso con agua y a continuación se le
respectivamente); durante 24, 36, 48 y 72 horas añadió acetona, por 40 seg; de nuevo se lavó con
siguientes, se examinó la morfología y fisiología las mismas recomendaciones para finamente
del actino según temperatura utilizada por agregar 3 gotas de fucsina que se dejó actuar
tratamiento. por 1 min; se lavó el exceso; seguidamente se
llevaron al microscopio para determinar sus
Evaluación de controles características Gram Positivas (coloración
Para verificar el buen manejo de los morada) o Gram Negativa (coloración Fucsia),
equipos, de las áreas del laboratorio y de además para confirmar presencia de cocos o
los elementos de bioseguridad se realizaron bacilos.
controles de ambiente, cabina de flujo laminar,
autoclave y control de cada medio. Los medios Diseño experimental
elegidos fueron Plate Count Agar (PCA) y Mediante el programa Statgraphics Centurión
Potato Dextrose Agar (PDA); el primero es XV, se diseñó un modelo experimental, el cual
recomendado para la identificación de aerobios tenía la función de combinar todos los factores
mesófilos y el segundo para la identificación de para evaluar cuál es la mejor condición de
levaduras y mohos respectivamente. laboratorio para el crecimiento de Streptomyces
sp. en condición sólida en medio de cultivo
Actividad Acuosa GYM; a través de la escala de Mc Farland se
La actividad de agua (aw) es una expresión pudo medir el crecimiento microbiano en
que se indica para determinar la cantidad de cada tratamiento aplicado; para determinar
agua disponible en un sustrato dado; para el crecimiento, se realizó un promedio de las
ajustar una actividad acuosa (aw) muy baja, en tres lecturas de cada experimento mediante la
escala de Mc Farland; posteriormente se obtuvo
la preparación normal del medio, en vez de la
el promedio de las lecturas de los duplicados,
adiciona de los 4 g de glucosa, se añadieron 20
realizando así un promedio del dato final
g; para ajustar una actividad acuosa (aw) baja, se
de cada tratamiento y su correspondiente
tuvieron en cuenta las cantidades normales de la
duplicado, para finalmente obtener el resultado
preparación del medio y finalmente para ajustar
de crecimiento; teniendo en cuenta su duplicado
una actividad acuosa (aw) alta, en la preparación
se aplicó la fórmula: Y=MX+b
del medio normal se omitió la adición de los 4
Donde se considera que, Y es el promedio
g de glucosa.
de las absorbancias, M es la pendiente, X es
la incógnita o también denominado como los
Evaluación morfológica y fisiológica conteos realizados y b es el intercepto sacado
Para la evaluación morfológica de de la regresión lineal del patrón construido a
Streptomyces, se observó el color, la textura, través de Mc Farland, por tal razón la variable
el tamaño y otras variables macroscópicas en Y será la absorbancia obtenida y X el conteo
(descritas en el capítulo anterior); para realizado. Finalmente, el modelo que arrojo
lo fisiológico se llevó a cabo la tinción de Excel fue el siguiente:
47
Tabla 1. Diseño experimental arrojado por Excel, mezclando los factores experimentales utilizados
a lo largo del proceso
Numero de Actividad acuosa Temperatura

Ph Crecimiento
experimentos (aw) (°C)
1 2 2 2 253333333,17
2 2 2 2 724444444,28
3 1 2 1 232499999,84
4 2 2 2 657222222,06
5 3 2 1 230555555,39
6 1 1 2 400555555,39
7 2 1 1 235277777,62
8 3 3 2 239166666,51
9 2 3 1 242499999,84
10 3 1 2 262777777,62
11 1 2 3 574444444,28
12 2 3 3 270833333,17
13 1 3 2 687222222,06
14 2 1 3 425277777,62
15 3 2 3 294166666,51
Donde en actividad acuosa (aw): Viabilidad, crecimiento y desempeño del

 1 representa: 0,99608 aw (Muy baja) actino
 2 representa: 0.99768 aw (Baja) Para tener resultados confiables, se realizó el
 3 representa: 0.99908 aw (Alta) control de la curva normal de la Escala de Mc
Teniendo en cuenta que, según la preparación Farland; consiste en una serie de patrones de
normal del medio, este utiliza una actividad turbidez que se calibran previamente; se realizó
acuosa de 0.99768 es decir baja. en tubos de vidrio herméticos cerrados, que
contenían de 0.1 mL a 1 mL de BaCl2 al 1% y de
Donde en pH: 9.9 mL a 9.0 mL de H2SO4 al 1% respectivamente,
 1 representa: pH 5 para un total de 10 tubos. Para realizar la
 2 representa: pH 7 escala con las muestras de los experimentos
 3 representa: pH 9 se marcó en cada caja de Petri 3 cuadritos de
Teniendo en cuenta que, según la teoría 0.5 cm c/u, teniendo en cuenta los duplicados;
Streptomyces sp. presenta optimo crecimiento
posteriormente se prepararon 90 tubos cada
desde pH 6.5 a pH 8, sin embargo, varias
uno con 3 mm de agua destilada, rotulados
especies de este género se pueden adaptar a pH
según tratamiento; finalmente, mediante asa
ácidos o pH bases.
de punta redondeada, se censó en una parte del
Donde en temperatura (°C): medio donde no haya muestra microbiana; a
 1 representa: 6 °C (Nevera) continuación se extrajo la muestra del cuadro y
 2 representa: 28 °C (Temperatura se depositó en el tubo con los 3 mL; luego el asa
Ambiente) se sacó y se metió en repetidas ocasiones, para
 3 representa: 37 °C (Incubación) que el tubo recibiera toda la carga microbiana;
48
seguidamente se depositó en una celda una conocer las combinaciones adecuadas para
pequeña cantidad del líquido obtenido y se leyó cada tipo de experimento.
mediante un espectrofotómetro.
Resultados y discusion
Evaluación estadística
La evaluación estadística se llevó a cabo Activación de la cepa
mediante el programa Statgraphics centurión Se realizó la activación de la cepa mediante la
XV; se pudo combinar un buen número técnica de repique, en medio sólido y líquido; se
de procedimientos analíticos y factores realizó siembra por estría en condición sólida,
determinantes; se pudieron generar gráficos cuyo crecimiento se hizo evidente a las 48 horas
interactivos que proporcionaron un modelo después de la inoculación, en donde en las
fácil y rápido de analizar; para esto mediante primeras 24 horas se notaba una línea tenue, con
los resultados de la escala de Mc farland, la colonias habanas o amarillentas; transcurrido
temperatura, el pH y la actividad acuosa; se aquel tiempo, las colonias presentaron un color
evaluó la combinación de los factores, para morado oscuro y finalmente se tornaron de color
determinar los mejores y/o peores rendimientos gris con olor característico a tierra húmeda; esto
en el crecimiento de Streptomyces spp. En medio teniendo en cuenta que el microorganismo en
GYM en estado sólido, el programa realizo un la etapa final presentaba micelios aéreos (Figura
análisis de varianza (ANOVA), que permitió 1).
Figura 1: Activación de la cepa Streptomyces sp. Mediante repique en medio GYM líquido y sólido.
A temperatura ambiente (28°C) después Se puedo evidenciar que a 6 °C, en los 3 pH

de 24 horas de cultivo, el medio se torna de evaluados, Streptomyces sp. exhibió crecimiento
color habano translucido; pero a las 48 horas, extremadamente lento, durante las primeras
el medio pasó a color morado oscuro, que nos 96 horas de cultivo; pasado este tiempo, se
indicó crecimiento del microorganismo. llevaron a temperatura ambiente (28 °C), donde
al cabo de 48 horas se evidenció crecimiento,
Evaluación de pH y temperatura confirmando que Streptomyces sp. supera la
La cepa seleccionada de presunta fase de latencia al reactivarse con temperatura
Streptomyces sp. se evaluó con pH 5, pH 7 y ambiente.
pH 9, con diferentes temperaturas (6 °C, 28 Cuando el cultivo de la cepa se mantuvo a
°C, 37 °C); se observó tiempo de crecimiento, 28 °C y pH 5, Streptomyces sp. exhibió buen
características morfológicas y características crecimiento, donde el medio se tornó de color
físicas del medio; cada prueba tuvo duplicado y morado claro y las colonias presentaron color
su respectivo control. morado oscuro, con características físicas y
49
morfológicas similares al crecimiento normal,

reportado por Lemus y López (2017) (12); en
condiciones de pH 7 se pudo observar mayor
crecimiento del microorganismo, con líneas de
crecimiento marcadas y definidas; el medio se
torna de un color café claro translucido y las
colonias presentan color café o marrón intenso; Figura 2: Foto microscopio en aumento 100X de Bacilos
de la misma manera, las características físicas Gram positivos, (A, B, C); (Streptomyces sp.) mediante
y morfológicas seguían siendo muy similares Tincion de Gram.
al crecimiento normal; mientras que con pH
9 se pudo evidenciar un crecimiento lento; sus En uno de los estudios realizados en el cual
colonias se tornaron de color habano claro y habla sobre el aislamiento y la identificacion de
amarillento, además el medio no sufrió muchos Streptomyces morfologica y bioquimicamente
cambios en su aspecto y color por lo que su fase (11), se presentan resultados similares a los del
exponencial o logarítmica fue mucho más lenta presente estudio, con colonias de crecimiento
a diferencia de los otros pH (Figura 5; Figura 6) lento, con caracterisitcas morfologicas
(13). similares, siendo esta aerobia, con olor
Finalmente, a temperatura de 37 °C para los caracteristico a tierra humeda; se pudieron
3 pH, se presentó un crecimiento exponencial apreciar las disitintas fases del crecimiento del
lento; con colonias de color habano y marrones, microorganismo con su respectivo micelio
su crecimiento era lento pero constante conforme aereo; además, la tincion de Gram permitió
pasó el tiempo, el color del medio variaba entre confirmar que este microorganismo pertenecen
los colores, café translucido y habano opaco, se al genero Streptomyces, acompaño por otro tipo
observaba cada día disminución de la cantidad de pruebas que les permitio comprobar que era
del medio de la caja, esto se debe a la temperatura el microorganismo propuesto.
a la que estaba sometida el medio. (Figura 7). A 6 °C, se pudo notar la ausencia de
crecimiento del actino, lo que produjo que no
Evaluación morfológica y fisiológica se observara morfología alguna en las cajas
La morfología y fisiología de sus colonias, que estaban sometidas a este ambiente como se
son parte importante en la identificacion puede ver en la Figura 3.
de Streptomyces sp.; se realizó tincion
diferencial por coloracion de Gram. En la
literatura reportada acerca de la morfologia
de Streptomyces sp., mediante la coloracion
de Gram, se pudo confirmar que presentan
caracterisiticas similares, morfologicas y
fisiologicas, apreciándose su condición de
bacterias filamentosas, según la fase en la que
se encuentre; se consideran bacterias Gram
positivas por lo que en la tincion de Gram
presentaba un color morado y ademas por el
desarrollo del micelio tanto vegetativo como Figura 3. Experimentos 3, 5, 7 y 9 con sus respectivos
duplicados, los cuales se encontraban en una
aereo, el cual permitio ser diferenciado e temperatura de 6 °C, regulada por nevera.
identifico macroscopicamente (Figura 2) (8).
50
A temperatura ambiente (28 °C) Streptomyces

sp. registró cambios en el medio de cultivo,
tornándose de color morado intenso, con
características morfológicas típicas de micelio
filamentoso no septado, acompañado de micelio
aéreo; microscópicamente se observaron
cadenas de conidias (Figura 4) (9).
Figura 5. Comportamiento de Streptomyces sp. a 37°C.

Nótese la ausencia de color morado característico.
Variabilidad, crecimiento y desempeño

del actino
Aplicando la Escala de McFarland,
acompañada con observaciones mediante
espectrofotómetro, se pudo observar el
crecimiento del actino con cada combinación
de condiciones de laboratorio propuestas.
El análisis de varianza de crecimiento
reporta significancia estadística de cada efecto
comparado con los datos obtenidos de su
cuadrado medio contra un margen de error
experimental del 0.5% debido a que el Valor-P
describe 0 efectos en este caso se considera menor
al 0.05, lo que indica que son significativamente
diferentes de 0 con un nivel de confianza del
95.0%. Por otro lado, el estadístico R- cuadrada
indica que el modelo, es capaz de interpretar
Figura 4. Cambios de coloración (morado
el 66,272% de la variabilidad en Crecimiento,
característico) y presencia de micelio (28 °C)
mientras que el error estándar estimado muestra
que la desviación estándar de los residuos es de
51,80492E8. El error medio absoluto (MAE) de
En condiciones de 37 °C, el crecimiento de 7,46681E7 es el valor promedio de los residuos.
las colonias de Streptomyces sp. fue mayor que (Tabla 2).
en 6°C, pero mucho menor que a los 28°C
(Figura 5).
51
Tabla 2: Análisis de Varianza para Crecimiento
Suma de Cuadrado
Fuente Gl Razón-F Valor-P
Cuadrados Medio
A:aw 8,27751E16 1 8,27751E16 2,54 0,1718
B:pH 3,08092E15 1 3,08092E15 0,09 0,7708
C:Temperatura 5,17581E16 1 5,17581E16 1,59 0,2631
AA 1,38443E16 1 1,38443E16 0,42 0,5432
AB 2,62894E16 1 2,62894E16 0,81 0,4102
AC 2,35211E16 1 2,35211E16 0,72 0,4343
BB 3,2566E16 1 3,2566E16 1,00 0,3633
BC 4,19129E15 1 4,19129E15 0,13 0,7345
CC 7,71785E16 1 7,71785E16 2,37 0,1844
Error total 1,62887E17 5 3,25775E16
Total (corr.) 4,82944E17 14
R-cuadrada = 66,272 porciento R-cuadrada (ajustada por g.l.) = 5,56154 porciento

Error estándar del est. = 1,80492E8 Error absoluto medio = 7,46681E7
Estadístico Durbin-Watson = 2,21332 (P=0,7350) Autocorrelación residual de Lag 1 = -0,37855
Según el diagrama de Pareto arrojado por crecimiento; sin embargo, ninguna tuvo una
el programa Statgraphics centurión XV, hay influencia o un efecto significativo mayor que
diferencias para pH, temperatura y actividad las otras, ya que aunque variaran el cambio no
acuosa; en cuanto a su afectación en crecimiento, era muy notorio, en el grafico se puede notar
la actividad acuosa presenta en este caso el que los resultados obtenidos, no estuvieron
factor con mayor afectación a crecimiento, es cerca para considerar un efecto significativo de
decir, fue la variable en donde más se presentó relevancia. (Figura 6).
Figura 6: Combinaciones de las distintas variables experimentales frente a un crecimiento

significativo de Streptomyces sp.
52
Evaluación estadística 6 °C, lo que coincide según con los resultados

Teniendo en cuenta los tres factores observados a la misma temperatura (Tabla 3);
experimentales: pH, temperatura y aw con además, el óptimo crecimiento en condición
respecto al crecimiento, según Escala de solida de medio de cultivo GYM, se puede
McFarland, se encontró que en condición solida obtener con una actividad acuosa del 0.99608,
con el medio de cultivo GYM, para minimizar el un pH de 7.9; mientras que a 28 °C se obtiene la
crecimiento debe presentar una actividad acuosa mejor respuesta de Streptomyces sp., (Tabla 4)
del 0.99608, un pH de 5.0 y una temperatura de
Tabla 3: Optimizar Respuesta, teniendo como meta minimizar el Crecimiento
Valor óptimo = 5,24798E7
Factor Bajo Alto Óptimo

aw 0,99608 0,99908 0,99608
pH 5,0 9,0 5,00408
Temperat. 6,0 37,0 6,0
Tabla 4: Optimizar Respuesta, teniendo como meta maximizar el Crecimiento
Valor óptimo = 6,44768E8
Factor Bajo Alto Óptimo

aw 0,99608 0,99908 0,99608
pH 5,0 9,0 7,90997
Temperatura 6,0 37,0 28,8699

Se puede interpretar que tanto la aw como en pH 5, 6 y 7; con respecto a la aw entre más
el pH tienen efecto en el crecimiento de baja sea la actividad de agua, más se estima el
Streptomyces sp.; se observa que en pH 9 no crecimiento rápido del microorganismo, debido
presenta crecimiento, diferente a lo mostrado a su disponibilidad (Figura 7).
Figura 7: Efecto de la aw y el pH frente al crecimiento de Streptomyces sp.
53
Se puede interpretar crecimiento tanto en respecto a la temperatura; temperaturas muy

el factor experimental aw en donde se observó bajas o muy altas no indican crecimiento para
un notable crecimiento hacia el lado izquierdo Streptomyces sp (Figura 8).
en donde es más baja la actividad de agua, con
Figura 8: Efecto de la aw y la temperatura frente al crecimiento de Streptomyces sp. A nivel estadístico.
Según el pH, puede existir mayor crecimiento bajo crecimiento, aún con 28°C; con respecto
con pH 7; con respecto a la temperatura el al pH 9, se interpreta muy bajo crecimiento
crecimiento es mayor a una temperatura (Figura 17).
alrededor de 28°C; con pH 5 se puede interpretar
Figura 17: Efecto del pH y la temperatura frente al crecimiento de Streptomyces sp. A nivel estadístico.
Conclusiones experimentales; sin embargo, se registró mayor

Se presentó un notable crecimiento de crecimiento en la variable de pH 7.9, actividad
Streptomyces spp. en las distintas variables acuosa de 0,99608 y temperatura de 28 °C;
54
mientras que el menor crecimiento se exhibió 4. Muñoz, A. (2013). Regulación Del

en las condiciones de pH 5.0, actividad acuosa Metabolismo En Streptomyces Spp: Control Por
de 0.99608 y temperatura de 6 °C. Argr, 255.
Cuando la temperatura es de 6 °C, por 5. Arslan, E. I., Öbek, E., Ğ, S. K., Pek, U.
un tiempo inferior a 96 horas, Streptomyces I., & Topal, M. (2008). Determination Of The
sp. entra en una fase de latencia donde su Effect Of Compost On Soil Microorganisms.
crecimiento presenta un rendimiento mínimo, International Journal Of Science & Technology,
pudiéndose reactivar sus colonias, cuando 3(2), 151–159.
adquieren temperatura ambiente. 6. Equinlab. (2009). Medición De La
El pH influye notoriamente en el Actividad Del Agua, 1–5. Retrieved From Http://
comportamiento y en la velocidad de Www.Equinlab.Com/Pdf_/La Importancia De
crecimiento de Streptomyces sp. siendo su La Actividad De Agua (Aw).Pdf
óptimo pH 7 y valores cerca a la neutralidad, 7. Yashchuk, O., & Miyazaki, S. S. (2007).
mientras que en pH alcalinos no se presentaba Propiedades Morfológicas De Los Esporóforos
un buen crecimiento y su morfología era muy Y Esporas De Streptomyces Sp. Revista Argentina
diversa. De Microbiologia, 39(1), 20.
8. Bott, R. (2014). Los Actinomicetos: Una
Recomendaciones Visión Como Promotores De Crecimiento
Se considera que dada la alta complejidad Vegetal. Igarss 2014, (1), 1–5. Https://Doi.
y similitud que presenta Streptomyces sp. con Org/10.1007/S13398-014-0173-7.2
otros géneros de microorganismos del suelo, 9. Hidrin, N.; Goodfellow, M.; Boiron,
que presentan gran cantidad de características P.; Moreno, M. Y Serrano, J. A. (2001). Los
morfológicas similares, se recomienda realizar Estreptomices. Actualización Y Revisión
estudios de tipificación molecular de la cepa del Didáctica. Scielo. Retrieved From Http://Www.
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Nacional De Entre Ríos Facultad De Ciencias
Agropecuarias Cátedra De Microbiología,
(C), 6.
56
57
Introducción más de 20 clústeres genéticos que codifican

El género Streptomyces corresponde a un para diferentes compuestos de interés, de los
grupo de bacterias Gram positivas aerobias que cuales, muchos todavía no han podido ser
pertenecen al orden Actinomycetales, dentro expresados en condiciones experimentales en
del filum Actinobacteria (1). Estas bacterias los laboratorios (8). Por lo tanto, Streptomyces
juegan un papel importante en la ecología de se convierte en un género de amplio interés
suelos, siendo productores importantes de para su estudio, y posible utilización en
diferentes metabolitos bioactivos de interés aplicaciones biotecnológicas. Es por esto, que
(2–4). Se calcula que este género apareció hace el aislamiento y la correcta identificación de
unos 400 millones de años, periodo en el cual Streptomyces a partir de muestras ambientales
empezó la colonización terrestre por las plantas, se convierte en una necesidad para la academia
siendo parte en procesos importantes de la y la industria biotecnológica. A continuación,
solubilización de compuestos esenciales para se hará una revisión de marcadores moleculares
las mismas, y generando un proceso primitivo útiles y como se ha aplicado en diferentes
de compostaje (5). Este género durante los investigaciones.
primeros años de estudio, fue considerado
un hongo, debido a que su morfología en Características genéticas-moleculares de
medios de cultivo se asemejaba a un micelio en Streptomyces
crecimiento, no obstante, años más tarde, luego En la actualidad, la gran mayoría de
del análisis de los componentes de su pared antibióticos y otros productos biotecnológicos
celular, encontraron peptidoglicanos y ácidos de interés son producidos por alguna
teicoicos, en lugar de encontrarse quitina o especie del género en mención (5). Desde
celulosa (6). el descubrimiento del primer antibiótico
En términos genéticos moleculares, producido por Streptomyces, se ha hecho un
Streptomyces posee cromosomas grandes extenso trabajo para el aislamiento de nuevos
lineales, de más de 8 Mb, además de abundantes productos metabólicos, llevando a una “sobre-
plásmidos descritos en diferentes especies (7), clasificación” del género (1). Esto hizo que
característica única y particular si se compara investigadores, productores, entre otros,
con otros géneros bacterianos (8). Se estima describieran y patentaran diferentes especies,
que tienen un contenido de 67 al 78% G+C en aumentando su número de unas 40 a más de
su ADN total (1), siendo éste considerado alto 3000. A partir de este fenómeno, hubo una
(1,7). El primer mapa genético en el género fue necesidad de crear un patrón estándar para
descrito para la especie Streptomyces coeliolor la identificación y tipificación de cepas para
cepa A3, en el año 1950 (7). Dicho mapa contenía prevenir este problema. Acorde a esto, en 1964
la descripción de solo seis loci distribuidos en se creó el proyecto internacional de Streptomyces
dos grupos de ligamiento, pero posteriormente, (ISP por sus siglas en inglés) (1), que buscaba
este número fue aumentando hasta alcanzar crear criterios únicos para la determinación de
un total de 39 loci, junto con la descripción de especies y reducir el número de descripciones
mapas genéticos en otras especies tales como S. erróneas de especies sinónimas. Aunque
clavulgerus, S. ambofaciens, S. chrysomallus, S. al principio, solo se usaban criterios tales
glaucescens, S. griseus, S. lividans y S. venezuelae como morfología de las cadenas de esporas,
(7). Finalmente, para 1996, se habían descrito ornamentación de la superficie de las mismas,
alrededor de 170 loci. color, sustrato de medio y pigmentos solubles,
Cabe destacar que Streptomyces contiene se pudo redescribir unas 450 especies (1),
el doble de genes frente a bacilos como y luego, para 1989 el número de especies se
Escherichia coli o Bacillus subtilis, y posee redujo solo a 142. Actualmente existen otros
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criterios que se utilizan para su nomenclatura, a plantear a los autores que se necesitan análisis
los cuales incluyen métodos moleculares tales más a profundidad que expliquen las causas y
como hibridación ADN-ADN y tipificación de las consecuencias de dichas tasas, y permitan
ARN ribosomal 16s y 23s (9,10). entender mejor la filogenia y taxonomía de este
Entre los avances más recientes, encontramos género (13). Otro estudio por su parte, encontró
metodología de última generación para los altas tasas de recombinación e intercambio
estudios genómicos. Como muchas otras, estas genético inter-especie, y puso en evidencia la
metodologías se han ido optimizando en la posible evolución reticular en este género, lo que
relación costo-beneficio (5). Esto ha permitido puede suponer un reto particular para el estudio
tener acceso a genomas completos de diferentes de las diferentes especies del género (14). Esto
especies de Streptomyces, aunque como lo también puede explicar la enorme variedad
advierten algunos autores, la calidad de las de metabolitos producidos por Streptomyces,
mismas puede variar entre diferentes estudios y como esa recombinación, y sus mecanismos
(11). En un análisis de estos genomas, se propios, pueden ser aprovechados para la
encontraron disparidades tales como genomas producción de cepas de interés biotecnológico.
con alrededor de 8 Mb hasta genomas de otras Una característica única en Streptomyces es
especies que alcanzaban una15 Mb. Incluso, en su aparato de transferencia de ADN conjugativo
algunos casos genomas reportados en la base de (15). De manera similar a otros géneros
datos de GeneBank como genomas completos, bacterianos, la transferencia de material
aparentemente tenían datos perdidos de acuerdo genético depende de la presencia de plásmidos
a herramientas bioinformáticas de análisis (11). conjugativos. Sin embargo, este sistema difiere
Es por esto por lo que, a pesar de los avances de otros ya que puede transferir de una bacteria
más recientes, la identificación molecular de a otra ADN de doble cadena (16), además es
Streptomyces debe ir acompañada de técnicas mucho más eficiente. Como elemento central,
de microbiología tradicional, como son medios la transferencia en Streptomyces depende de una
de cultivo diferenciales, pruebas bioquímicas, proteína en particular, la proteína TraB (15,16).
entre otras. Una característica que llama la atención es que en
No obstante, cabe destacar que para este género, los plásmidos de tamaño reducido,
Streptomyces, los análisis genómicos y pan- de menos de 10 kb, pueden ser transferidos,
genómicos de diferentes cepas han encontrado lo que demuestra que existe un mecanismo
una variedad en los contenidos de las mismas, único (15). A simple vista se ha observado un
viéndose que las cepas varían su contenido de fenómeno similar a grietas en el micelio, con
secuencias codificantes de ADN (CDS por su lo cual se concluido que hay una inhibición de
sigla en inglés). Por ejemplo, un estudio arrojó crecimiento debido a la toxicidad producida
resultados que iban desde unas 5900 hasta por las mismas proteínas contenidas en los
poco más de 10000 (12), y además, evidenció plásmidos, y que esto permite una transferencia
que los genomas de Streptomyces son flexibles rápida a través del micelio en formación. Este
en cuanto a su contenido, lo que explica su proceso de traslocación depende de una proteína
gran variedad de metabolitos secundarios producida por el gen traB, ya que al hacer una
(12). Otra investigación analizó como se supresión en condiciones experimentales,
comportaba la transferencia horizontal de impide llevar a cabo este proceso (16). Una
genes entre diferentes especies de este género, vez producida esta proteína, se forma un
utilizando los datos de cepas diferentes de S. complejo compuesto por diferentes proteínas
flavogriseus, y datos almacenados de 53 especies (traB y diferentes proteínas de tipo spd), el cual
(GeneBank) (13); se encontró una alta tasa de se localiza en las membranas, facilitando el
recombinación intra e inter especie, lo que lleva paso del material genético a través del micelio
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formado por Streptomyces de una manera antes aclarar que también se deben seguir
rápida y eficiente (15,16)| Específicamente, metodologías clásicas como medios de cultivo
cuando una bacteria donante se encuentra con diferenciales, pruebas bioquímicas entre otros.
una bacteria receptora, traB forma un complejo Un estudio realizado por Huddleston y
hexamérico de proteínas, creando un poro en colaboradores en el año 1997 en Brasil, siguió
la membrana y la pared bacteriana, y éste a su una estrategia que les permitió la identificación
vez recluta a las otras proteínas facilitando la de diferentes especies de Streptomyces de interés
conexión entre diferentes unidades celulares biológico, es decir, productoras de antibióticos
(17). Una vez está establecida dicha conexión, el (18). Para este trabajo, se tomaron muestras
complejo protéico, por medio de una hidrólisis de la rizosfera de cultivos de soya, y evaluaron
de ATP, transfiere el plásmido desde la célula no solo la presencia de bacterias del género,
donante a la célula receptora, donde finalmente sino que también evaluaron la producción de
se replicará y dará inicio a un nuevo proceso una estreptomicina. Una vez tomadas las muestras
vez tenga contacto con otra célula aceptora (17). procedieron a cultivar, y secuenciar cuatro
Esta alta eficiencia de intercambio de material genes específicos, strA, strB1, ARNr 16s y trpBA
genético convierte a este género en el mayor (18). Entre los resultados más destacables de
reservorio genético, con genes codificantes este estudio, está el hallazgo de varias cepas
de diferentes sustancias de interés, tales como que no coincidieron con los datos alojados en
antibióticos. las bases de datos, lo que podría evidenciar
nuevos hallazgos, como la detección de
Trabajos y aproximaciones en la nuevos marcadores genéticos en otros géneros
identificación y caracterización de bacterias bacterianos, que corresponden a la producción
del género Streptomyces de estreptomicina, lo que indica que este gen se
Una característica clara respecto al género estaría transfiriendo en el suelo.
Streptomyces, es su variedad de metabolitos de Otro trabajo realizado con muestras de
interés que pueden usarse desde la medicina rizosfera de un terreno de artemisa en Estados
hasta la industria agrícola. Es por esto, que la Unidos encontró cepas de Streptomyces con
identificación y caracterización de las bacterias actividad antifúngica (19). En este caso, muestras
de este género representa un gran interés de suelo fueron separadas y sometidas a un
para diferentes profesionales, tales como, los tratamiento con fenol, en donde crecieron unas
microbiólogos, biólogos, agrónomos, etc. colonias resistentes que posteriormente fueron
Desde su aparición, las metodologías de analizadas. De esas colonias, se encontraron
identificación microbiana por técnicas basadas un total de 15 cepas con actividad antifúngica
en biología molecular se han ido convirtiendo al menos contra una de las seis especies de
de a poco en el estándar, siendo este hecho hongos y levaduras analizadas (19). A estas
reportado por ejemplo en revisiones que datan cepas se les hizo identificación con el ARNr 16s,
del año 1991 (10). En dichos reportes de revisión, encontrando diferentes especies bacteriana,
se enlistan lo que para la época se evidenciaba De las cepas, las bacterias relacionadas con
como metodologías moleculares que ayudaban Streptomyces violaceusniger presentaban
a la identificación de géneros bacterianos, siempre una fuerte actividad antifúnigica,
incluyendo Streptomyces: hibridación ADN- siendo capaces de inhibir el crecimiento de casi
ADN, hibridación ADN-ARNr, análisis de todos los hongos y levaduras analizadas en este
secuencia de ARNr 5s, 16s y 23s, entre otros estudio (19). Este procedimiento mostró ser
(10). Si bien la información creciente de las útil para el aislamiento de este tipo de cepas,
bases de datos permite crear estrategias para la las cuales pueden tener una amplia aplicación,
identificación, es importante como se mencionó para el control de hongos fitopatógenos como
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Pythium ultimum, que pueden afectar la cinco aislamientos de Streptomyces con actividad
producción agraria u hongos que afectan la antimicrobiana (2). Para esa identificación, se
salud humana tales como Candida albicans. amplificó con primers específicos las regiones
En el año 2013, una investigación pudo espaciadoras ubicadas entre los genes de ARNr
determinar y caracterizar nuevas cepas del 16s y 23s. Al igual que otros estudios, esta
género (20). En esta investigación, muestras de metodología fue útil para la toma de muestras
suelo de regiones localizadas en el noroccidente y el correcto aislamiento de Streptomyces, lo que
de Irán fueron aisladas para su análisis en el indica el potencial de las pruebas moleculares
laboratorio. En primer lugar, por medio de para la identificación de éstas.
cultivo específicos se determinó su actividad Finalmente, en el trabajo publicado por
inhibitoria. De estos procedimientos, se Azimi y colaboradores en 2017, utilizando
seleccionaron 12 aislamientos con una alta identificación molecular y teniendo como base
actividad inhibitoria. Luego, a esos aislamientos el ARNr 16s, se pudo caracterizar una cepa de
se les secuenció el ARNr 16s, junto con un Streptomyces ramulosus con un pigmento con
análisis por RAPD-PCR, permitiendo una actividad antimicrobiana (22).
mejor caracterización de dichos aislados (20). Si bien, es claro que los estudios presentados
En conclusión, y acorde a otros estudios, los muestran la utilidad de las pruebas basada
autores proponen que esta metodología puede en biología molecular para la identificación
ayudar a identificar y caracterizar nuevas cepas, de las bacterias del género en diferentes
y que estos hallazgos son de vital importancia, aislamientos, es importante destacar que esas
ya que el suelo es un importante reservorio para pruebas moleculares también pueden ayudar
bacterias del género Streptomyces con actividad a la identificación de cepas con utilidad
antimicrobiana de alto interés en medicina y biotecnológica.
otros campos de estudio.
En Egipto, un grupo de investigadores Identificación de actividades biológicas
realizaron un análisis de aislamientos de suelo útiles en Streptomyces
(21). De un total de 75 aislamientos de bacterias Una de las características más importantes
del grupo Actinomycetes, encontraron 35 de este género es la gran cantidad de productos
correspondientes a Streptomyces. Al igual que metabólicos de aplicación variada. Como se ha
en otros estudios, este trabajo comenzó con mencionado en diferentes ocasiones, uno de los
una caracterización por métodos tales como intereses de su aislamiento y caracterización
siembra en medios de cultivo, caracterización es la posibilidad de obtener estos metabolitos
morfológica de colonias y evaluación de actividad para su aplicación en el día a día. Con el
antimicrobiana. Luego a los aislamientos con avance de la tecnología de secuenciación de
mejor actividad antimicrobiana se les secuenció siguiente generación (NGS por su silga en
el ARNr 16s, encontrando una similitud entre inglés), se ha establecido una metodología
el 99 y 100% en secuencia con otros miembros conocida como minería genómica (23). Dicha
del género Streptomyces (21). Esto muestra que, metodología incluye un análisis computacional
junto con las pruebas clásicas, la metodología de las secuencias obtenidas por medio de estos
molecular basado en secuencia puede ser útil nuevos protocolos de secuenciación, lo que
no solo para la identificación de Streptomyces, permite predecir o encontrar vías genéticas
sino que también puede caracterizar nuevas metabólicas de diferentes productos naturales
cepas con gran potencial. de interés, sin casi necesidad de comprobaciones
Un estudio realizado en muestras de suelo experimentales (23). Es por esto, que se ha
en cultivos de alma en Arabia Saudita, encontró pasado de caracterizar e identificar cepas de
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Streptomyces, a encontrar nuevos productos bacterias Gram positivas y diferentes especies

de interés biológico a partir de muestras de hongos patogénicos. Al hacerse un perfil
ambientales, con cepas antes no caracterizadas. de metabolitos por medio de espectrometría
Yingging Mao y colaboradores hicieron un de masas acoplada a cromatografía líquida se
trabajo de caracterización molecular en una encontraron diferentes metabolitos de interés
especie de Streptomyces (24). Estos investigadores que podían participar en dichas actividades
trabajaron con una cepa de Streptomyces antimicrobianas. Además, a esta cepa se le
lavendulae en donde pudieron dilucidar la hizo un análisis genómico, encontrando
vía genética metabólica de la mitomicina C, características tales como un genoma de más
un potente antibiótico antitumoral. Aunque de 8 millones de pares de bases, donde se pudo
este compuesto ya había sido descrito con identificar un total de 36 clústeres genéticos
anterioridad, no se conocía bien la vía de biosíntesis (BGCs por su sigla en inglés) de
metabólica implicada en su síntesis (24). Un metabolitos secundarios (26), cuyos productos
elemento importante de este estudio es que su podían ser analizados en comparación con
análisis permitió conocer los componentes de otras especies previamente descritas. Este
la vía metabólica para sus síntesis, lo que puede estudio es uno de varios, donde los marcadores
ayudar a obtener otras fuentes para su síntesis y moleculares en la secuencia sirven no solo
aplicación en productos para la terapia contra para identificar la especie, sino también vías
el cáncer. genéticas metabólicas que pueden ser utilizadas
Otro trabajo se enfocó sobre especies de para la identificación de cepas que producen
Streptomyces aislados de insectos devoradores de diversos metabolitos de interés.
madera en amplios terrenos de Estados Unidos Un elemento que se debe tener en cuenta es
y Canadá (25). El interés que movió al grupo de que bacterias pertenecientes al género también
investigación en este caso era la capacidad de se pueden aislar en otro tipo de ambientes.
degradar la celulosa como forma de obtención Tal es el caso del trabajo de Undabarrena
de compuestos energéticos. De los aislamientos y colaboradores en el 2017 (27), en donde
realizados, se encontraron dos cepas específicas se analizaron aislamientos provenientes de
que tenían un gran poder de degradación de la sedimentos marinos de los fiordos ubicados
celulosa, que fueron las cepas SACTE y SDPB6. en Chile. Dichos aislamientos contenían 26
En este estudio, que incluyó análisis proteómicos clústeres genéticos de biosíntesis, entre los
y transcriptómico de genoma completo, que se podía destacar la presencia de genes de
encontrando datos interesantes como el grado resistencia a metales pesados, estrés oxidativo
de conservación de ciertos genes involucrados y antibióticos (27). Este hallazgo muestra la
en vías metabólicas que expresaban enzimas gran utilidad de los análisis genómicos, y que
específicas para el catabolismo de carbohidratos diferentes aislamientos pueden ser una fuente
(25). Este tipo de análisis permitió, además de potencial de microorganismos productores de
identificar las cepas, caracterizar los genes de metabolitos de interés, como en este caso, para
las vías metabólicas y su potencial uso, por el control de la contaminación en entornos con
ejemplo, en este caso para la degradación de metales pesados.
biomasa de origen vegetal, potenciando su uso En línea con el estudio anterior, otra
en agronomía y recuperación ambiental. investigación del mismo año también examinó
En un estudio realizado en el 2018, se aislamientos marinos de los fiordos en Noruega
aislaron cepas de 13 hábitats en Etiopía (26). (28). Dichos aislamientos fueron analizados a
De estas muestras, hubo una cepa particular nivel genómico-metabolómico, encontrando
de Streptomyces sp. (Go-475) que exhibió una diferentes productos con actividad biológica,
importante actividad antimicrobiana contra entre los que se pueden destacar antibióticos. Este
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hallazgo muestra que no solo los actinomicetes permitan obtener cepas que puedan presentar
terrestres, sino que los actinomicetes aislados funciones metabólicas interesantes. Luego, se
de ambientes marinos, pueden ser fuente de puede hacer identificación de las especies ya
una gran cantidad de compuestos de interés. sea usando métodos moleculares más sencillos,
Similares resultados se encontraron en un pero menos robustos, como amplificación
trabajo donde fueron evaluados los aislamientos y secuenciación sencilla de ARNr 16s. Pero
provenientes de muestras de manglares en en la medida de lo posible, se debe recurrir
Macao (29). De los aislamientos, se pudieron a tecnologías basadas en secuenciación de
analizar diferentes vías genéticas, entre las siguiente generación. Este tipo de tecnologías
cuales se pueden destacar, la producción de permiten obtener una gran cantidad de datos,
metabolitos secundarios de interés como que, con el poder computacional adecuado,
terpenos, indoles, sideróforos, bacteriocinas, permitirá analizar de manera más efectiva, vías
entre otros. metabólicas potenciales para los productos
Otros estudios se vienen realizando, y derivados de cepas presentes en los aislamientos.
cada vez más, se encuentran nuevas especies Es de gran importancia ver cómo estas
de Streptomyces que producen diferentes bacterias tienen, además, un mecanismo
productos de interés. Con el avance de la único de transferencia genética. Esto abre un
tecnología en campos como la secuenciación y abanico de oportunidades únicas para conocer
la bioinformática, cada vez se hallan más cepas, diferentes procesos genéticos-metabólicos.
y más compuestos de interés, lo que hace de este Con todo esto, los marcadores moleculares del
tipo de trabajo una fuente inagotable de nuevos género Streptomyces siguen y seguirán siendo un
descubrimientos que serán de gran utilidad en fascinante campo de estudio en microbiología y
biotecnológica, haciendo de Streptomyces un biotecnología.
género de importancia no solo biológica, sino
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aislarse de diferentes entornos, y que eso permite S0570178316300197
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Streptomyces spp. From Ethiopia Producing
Antimicrobial Compounds: Characterization
66
67
Resumen ambiental desfavorable que presentan. Una de

En el presente trabajo de investigación las alternativas es el compostaje, forma práctica,
se procedió a analizar los microorganismos conveniente y ecológica de transformar los
circunstantes en el proceso de compostaje de residuos orgánicos en un recurso importante
subproductos de la caña de azúcar; se hicieron como mejorador del suelo; además que
varios análisis a partir del momento cero de contribuye a reducir la cantidad elevada de
la instalación del proceso de compostaje; se residuos sólidos que son depositados en los
tomaron muestras en diferentes puntos según vertederos (2).
el tratamiento y se llevaron en bolsa ziploc y El compostaje es un proceso bioxidativo
nevera al laboratorio de Microbiología de la que da lugar a un producto orgánico altamente
Universidad Libre; se tomaron las muestras a estable. Se puede definir como la mineralización
los 7, 21,35 y 50 días de iniciado el compost; y humificación parcial de las sustancias
cada una de las muestras se homogenizó y se orgánicas (restos de cosechas, excrementos
procedió a tomar 10 g de muestra por 90 mL de de animales y residuos urbanos) mediante
agua triptona, para luego realizar diluciones de reacciones microbianas (3).
10-1 hasta 10-8; de las últimas tres diluciones se Estas reacciones se hacen bajo unas
procedió a la siembra en superficie en medios de condiciones y periodo determinado
cultivo, Agar Papa Dextrosa y Agar Extracto de relativamente corto. Los microorganismos se
Levadura. De los resultados obtenidos se puede encargan de transformar la materia orgánica
concluir que existe un buen grupo de bacterias mediante una oxidación aerobia, de tal
y hongos acompañantes, de los que destacan manera que la relación superficie/volumen
Pseudomonas y Aspergillus respectivamente. de las partículas y la relación aire/agua en
el espacio entre partículas, tienen influencia
Introducción directa en el proceso; ocurren diferentes fases
Entre las industrias generadoras de residuos de compostaje, con intervalos de temperatura
sólidos, la azucarera es una de las que genera mesófila y termófila. Aunque se considera que
mayores volúmenes. Estos residuos son una los microorganismos mesófilos son mucho más
fuente de contaminación de agua, aire y suelo, eficaces para descomponer la materia orgánica,
cuando no se realiza un manejo adecuado. La se busca que las temperaturas sean altas ya
cachaza y el bagazo de caña de azúcar, son los que favorecen la eliminación de potenciales
principales residuos que genera esta industria. patógenos vegetales y animales; también la
La cachaza es un residuo que se obtiene durante muerte de malas hierbas que podrían ser
la clarificación del jugo de la caña de azúcar e perjudiciales cuando ya se vaya a usar el
incluye materias terrosas e impurezas orgánicas; producto final de la composta (3).
por cada tonelada del procesamiento de la caña Cuando al suelo se le agrega compost, una
se obtienen 30-50kg de este residuo. El bagazo diversidad de microorganismos implicados en
se obtiene en grandes cantidades después de el ciclo de diferentes nutrientes y en procesos
extraer el jugo de la caña, cuya producción de biocontol de fitopatógenos se introduce
puede estar entre 250 a 400 kg por cada tonelada también. Por tanto, uno de los roles que cumple
de tallos molederos que ingresan a la fábrica (1). el agregado de compost al suelo, se representa
Se buscan y analizan diferentes alternativas en la reinoculación de microorganismos a
de tratamiento para los residuos orgánicos, suelos que han sido afectados por determinados
que proponen la recuperación, reutilización compuestos fitosanitarios (4).
y transformación de los mismos, a fin de Describir la cantidad y diversidad de
convertirlos en insumos útiles para sectores microorganismos que intervienen en el
productivos, disminuyendo así el impacto proceso de compostaje es complejo, debido a
69
que las poblaciones y las comunidades varían En trabajos relacionados con la aceleración
continuamente en función de la evolución del proceso de compostaje de subproductos
de la temperatura, de la disponibilidad de de cosecha de café, aislaron un consorcio
nutrientes, de la concentración de oxígeno, del de microorganismos afines a la pulpa de
contenido de agua, del pH, y de la acumulación café, participantes de la biodegradación de
de compuestos antibióticos, entre otros; uno de dichos residuos orgánicos, entre los que
los indicadores de la actividad microbiana y de destacan: Pseudomonas aeruginosa, Bacillus
la tasa de actividad actual es la Temperatura. El spp., Pseudomonas spp., donde se reporta una
ecosistema del compostaje se limita a sí mismo relación C/N final entre 9.5 y 10, que indica
cuando la acumulación de calor es excesiva. A estabilidad y madurez, con menores tiempos de
medida que se va elevando la temperatura, las compostaje (7).
poblaciones microbianas son reemplazadas Luego de la caracterización química del
por otras mejor adaptadas, y cada una de ellas compost obtenido de subproductos de la caña
posee una duración limitada. En el caso de de azúcar, se pudo establecer que el aumento
realizarse una correcta y continua aireación, la en la cantidad de bagazo condicionó mayor
porcentaje de humedad en el medio, con
fase termófila continúa hasta que la producción
menores temperaturas durante el proceso; se
de calor es inferior a la disipación del mismo,
indicó que la fase termófila del compost no
debido al agotamiento de los compuestos
tuvo consistencia, en la medida que la pérdida
fácilmente metabolizables (3).
de calor superó la ganancia térmica, explicable
Una amplia diversidad de microorganismos
por el tamaño pequeño de las pilas establecidas,
conforma las poblaciones mixtas del proceso siendo estable la temperatura a los 113 días
de compostaje. Las más importantes son de iniciado el compostaje. Se explica que las
bacterias, Actinomycetes y hongos filamentosos. variables indicadoras de madurez del compost,
El proceso de compostaje de residuos se asocian con: la producción de NH4 durante
sólidos orgánicos, involucra condiciones de la fase termófila; la disminución de temperatura
sanitización, con menores índices de presencia (pasada la fase termófila); y mayores niveles de
de microorganismos patógenos; y estabilización, NO3 en la fase mesófila, acompañados de mayor
promoviendo materiales maduros, libres de CIC en la síntesis de sustancias húmicas (8).
putrefacción, sin olores contaminantes; además Cuando se realiza proceso de compostaje que
de las condiciones químicas, físicas y biológicas contiene cachaza y bagazo de caña de azúcar, se
que aportan beneficio al suelo agrícola (5). pueden alcanzan niveles más altos nitrógeno
Los microorganismos que actúan de y de materia orgánica, que cuando el compost
diferentes formas en los procesos de compostaje, no suma dichos materiales; para las demás
son exigentes en carbono y nitrógeno (en menor variables evaluadas no se indican diferencias
proporción), para desarrollar sus actividades atribuibles a la cachaza y al bagazo de caña (9).
biológicas; la relación inicial proporcionada de
C/N (entre 25 y 35), permite una multiplicación Bacterias
eficiente de los microorganismos, que conduce a Las bacterias en el proceso de compostaje
una descomposición acelerada de los materiales constituyen entre el 80% y el 90% de la
orgánicos en compost; pero si la relación C/N es población microbiana. Las bacterias utilizan
superior, la descomposición se hará más lenta; un amplio rango de enzimas que degradan
mientras que con relaciones C/N inferiores a 20, una gran cantidad de compuestos orgánicos,
aumenta la producción de amoníaco gaseoso, gracias a su diversidad metabólica. Hay diversos
bastante contaminante para el ambiente, grupos de bacterias que se destacan, dentro de
disminuyendo la calidad del compost (6). este tipo de microorganismos, como es el caso
70
de las Pseudomonas fluorescentes, constituido proceso de compostaje, estos son típicamente

por algunas especies de bacterias asociadas a saprobios, también pueden ser agentes de
procesos de biocontrol de patógenos de plantas control biológico y para plantas y/o animales
y a procesos de estimulación del desarrollo ser patógenos. En el proceso de compostaje,
radicular. La utilización de un compost maduro puede haber diversas poblaciones fúngicas,
con una alta población de Pseudomonas Diferentes géneros han sido descritos, pero esto
fluorescentes, podría actuar como un difiere de los diferentes sustratos y métodos que
“estimulador” del desarrollo de las raíces y un se utilicen en el transcurso de la composta. A
“protector” frente a diferentes fitopatógenos (3) demás los hongos pueden favorecer la fertilidad
del suelo, y por ende estimular el crecimiento
Actinomycetes de las plantas. Estos cuentan con su una alta
Los Actinomycetes tienen una participación capacidad metabólica y son de degradar
relevante durante el proceso de modificación de polímeros complejos, como plásticos, petróleos
la materia orgánica del compostaje, gracias a su entre otros y es por esto que se utilizan para la
capacidad enzimática para degradar compuestos recuperación de ambientes contaminado (11).
orgánicos complejos como la celulosa, lignina, El objetivo del presente trabajo de
entre otros. Otra de las cualidades de los investigación, se encaminó a determinar la
Actinomycetes es que muchas de las especies que dinámica de los microorganismos circunstantes
participan en este proceso son tolerantes a las en la evolución del proceso de compostaje de
temperaturas que alcanza el compost durante subproductos de la caña de azúcar, en la Planta
el proceso de degradación aeróbica. Por esto de Compostaje, del Ingenio Risaralda S.A.
son un grupo de microorganismos, abundante
y es importante conocer su evolución durante Materiales y metodos
el proceso de compostaje. Asimismo, los
Actinomycetes poseen la capacidad de regular la Área de estudio
microbiota rizosférica a través de la producción La presente investigación se llevó a cabo en
de antibióticos y otros compuestos (10). la Planta de Compostaje, del Ingenio Risaralda,
ubicado en el Km 2 vía La Virginia - Balboa,
Hongos Risaralda, Colombia.
Los hongos filamentosos son uno de los
grupos de microorganismos presentes en el
Figura 1. Localización de la zona de estudio el el municipio de la Virginia (Colombia)
71
Generalidades del compostaje del Ingenio icopor para ser transportada hasta el laboratorio
Risaralda de la Universidad Libre Seccional Pereira.
En el Ingenio Risaralda se obtienen
subproductos resultantes de la fabricación de Fase de laboratorio
azúcar y etanol. Entre estos se encuentran el
bagazo, cachaza, ceniza de bagazo, hoja de caña Preparación de las muestras
y vinaza que son los utilizados en el proceso Se prepararon los medios de cultivo Agar
para la producción de compost. Papa Dextrosa para hongos y Agar Extracto
A los residuos sólidos (cachaza, ceniza, hoja) de Levadura para Bacterias y otros hongos
se les realiza un pre-tratamiento para eliminar el Filamentosos, los cuales se realizaron en el
exceso de humedad. Después de esto se procede laboratorio de Investigación de la Universidad
a la conformación de una pila (unidad de Libre Seccional Pereira.
tratamiento), verificando a través de un balance Posteriormente a la homogenización de cada
de masa su relación C/N, C/S y humedades de muestra, se tomaron 10 g de cada muestra y
ingreso. Las pilas tienen aproximadamente 120 les adicionó 90 mL de agua triptona; luego se
metros de largo, Una vez armada la se procede realizó una dilución de las muestras hasta 10-8
a mezclar y airear con el equipo BACKHUS en la cabina de flujo laminar.
creando las condiciones necesarias para el
Luego con una micropipeta se inocularon100
crecimiento de microorganismos los cuales
microlitros en cada caja de Petri desde la
descomponen los residuos hasta transformarlos
dilución 10-6 hasta la 10-8, en siembra de superficie
en compostaje. Dependiendo de la humedad
en placa por tripliclado cada muestra.
de la pila se adiciona otro subproducto en
forma líquida llamado vinaza, el cual se va
incorporando en las pilas por medio de volteos Identificación de microorganismos.
diarios, en donde se controla la temperatura Para la identificación de las bacterias y
y la humedad hasta alcanzar la proporción de hongos del proceso de compostaje se incubo a
vinaza requerida para la producción de compost temperatura ambiente (24 °C) durante siete días
de excelente calidad. según lo propuesto por Rincón (12); luego se
Posterior a la aplicación de vinaza, la pila aplicaron técnicas de microscopia y macroscopia,
continua los procesos de secado natural, en el Laboratorio de Microbiología de la
maduración y estabilización (Comunicación Universidad Libre Seccional Pereira, teniendo
verbal). en cuenta la Norma Técnica Colombiana (NTC
4491-2) sobre procedimientos microbiológicos
Toma de las muestras (13).
Se realizó un muestreo aleatorio en una pila
de compostaje 4 veces durante todo su ciclo de Bacterias
compost, tomando 5 muestras por visita al área
de compostaje del Ingenio Risaralda. Macroscopía
Primero se seleccionó la pila que Se hizo la caracterización macroscópica,
sería evaluada durante todo su proceso; con base en los siguientes criterios: superficie;
aleatoriamente se seleccionaron los puntos Crecimiento (abundante, moderado, escaso);
para tomar la muestra y con un tubo de pvc color; forma (regulares, redondas, ovaladas,
se tomaban aproximadamente 150 gramos irregulares, filamentosas, rizoides); elevación
del material de la composta y se guardaban en de las colonias (plana, elevada, convexa
una bolsa de cierre hermético, se rotulaba y monticular); bordes (entero, ondulado,
posteriormente se guardaban en una nevera de aserrado, filamentoso y rizado); tamaño de las
72
colonias (puntiforme, pequeñas, medianas, separado de la colonia. La tira de cinta con la

grandes); muestra, se colocó sobre una gota de azul de
lactofenol, con un portaobjeto y se prosiguió,
Microscopia con las observaciones a 40X.
Se realizó la tinción de Gram (14), para la
visualización de bacterias y se observó A 100X Actinomicetos
con aceite de inmersión. Para identificar los actinomicetos, se tuvo
en cuenta, las características macroscópicas,
Hongos microscópicas y los reportes encontrados, en la
Para la identificación del género de los literatura.
hongos, se tuvo en cuenta las características
microscópicas y macroscópicas, y así fue como Macroscopía
se analizaron los aislamientos de cada una de las En este paso, se utilizaron las mismas pautas
cepas y se compararon con la literatura. de lectura y descripción de colonias bacterianas
y fúngicas.
Macroscopía
En se analizaron de igual manera que las Microscopía
colonias bacterianas. Para la identificación se se hico coloración
de Gram y se tuvo en cuenta las características
Microscopía microscópicas, como fragmentación del micelio
Para la observación microscópica, se utilizó en formas cocoides, bacilares o artroconidiales,
la técnica de cinta pegante. Esta es una de las más presencia de espirales y bucles, formación de
usadas, debido a que conserva la yuxtaposición esporangios, presencia de esporas terminales,
original de las esporas y segmentos de hifas en pares o grupos, en el micelio (16).
(15). Para su realización, se dobló una tira de
cinta y de los extremos se tomó con el dedo Resultados
pulgar y medio a cada extremo, con el lado En el Ingenio Risaralda el proceso de
adhesivo hacia afuera, este lado se presionó compostaje dura aproximadamente 78 dias y
contra la superficie de la colonia del hongo, que las muestras se tomaron como se muestra en la
se iba a analizar. El micelio aéreo, se une a la tabla 1.
superficie adhesiva, por lo cual, es fácilmente
Tabla 1. Días en el que se tomó la muestra durante el proceso de compostaje
Muestra Día de toma de muestra

1 7
2 21
3 35
4 50
El proceso de compostaje se divide en tres termófila, dura 30 días y alcanza valores de

fases según la temperatura. La fase mesófila que 60 a 70º C. La fase de enfriamiento, que dura
dura entre una y dos semanas, y la temperatura aproximadamente 40 y la temperatura desciende
está comprendida entre 10ºC y 40ºC. La fase (2).
73
Se encontraron diversos microorganismos lo que se lograron identificar 7 especies (Tabla

en las diferentes muestras del compostaje, para 2).
Tabla 2. Microorganismos identificados, durante el proceso de compostaje
Microorganismo Especie Género

Gluconacetobacter Gluconacetobacter sp.
BACTERIA Pseudomonas Pseudomonas sp.
Bacillus Bacillus sp.
ACTINOMICETOS Nocardia Nocardia sp.
Cladosporium Cladosporium sp.
HONGOS Aspergillus Aspergillus spp.
Penicillium Penicillium sp.
Se aislaron 2 géneros del grupo de Bacterias Éstas se identificaron por sus características
Gram Negativas (Gluconacetobacter y morfológicas, macroscópicas y microscópicas
Pseudomonas). También se aisló un género (Figura 2).
del grupo Bacterias Gram Positivas (Bacillus).
74
Figura 2. Bacterias identificadas, durante el proceso de compostaje, Macroscopicamente, desde el Estereoscopio, y en el

microscopio a 100X. A. Glucanocetobacter, B. Pseudomonas C. Bacillus
Blanc et al. (17) aislaron representantes del Glucanocetobacter es una bacteria fijadora de
género Bacillus del compost. Las especies del nitrógeno, capaz de oxidar etanol, que tuvo su
género Bacillus son capaces de vivir en el proceso presencia en la primera fase del compostaje; ésta
de compostaje, gracias a su adaptabilidad a la se ha reportado en plantas de caña de azúcar,
temperatura mesófila. Pseudomonas son capaces por lo que se puede confirmar su presencia en el
de degradar muchos compuestos orgánicos proceso de compostaje (19).
sintéticos y naturales ya que metabólicamente Los actinomicetos son un importante grupo
son muy versátiles, pero solo crecieron en la de organismos procariotas, que se caracterizan
primer toma por lo tanto se deduce que las por su actividad antimicrobiana y ayudan a
afecto la fase termófila (18). la fertilidad de los suelos. Estos se presentan
75
en el compost ya que es rico en nutrimentos Nocardia sp.

y estos se desarrollan en respuesta a diferente El acatinomiceto Nocardia se observa en la
temperatura, pH y humedad (20). Figura 3.
Figura 3. Actinomiceto, durante el proceso de compostaje: A. Macroscopía; B.Estereoscopio; C. Microscopía (40X).
Nocardia sp. son Actinomicetos positivos mecánica en elementos no móviles cocoides a

para la catalasa, inmóviles, gram-positivos en forma de varillas (21).
para la tinción de Gram. Rudimentario para Los hongos identificados (Figura 4)
ampliar hifas de sustrato ramificadas, que se fueron del genero Aspergillus, Penicillium y
pueden fragmentan in situ o en una disrupción Cladosporium.
76
Figura 4. Hongos, durante el proceso de compostaje, Macroscopicamente, desde el Estereoscopio, y en el microscopio a

40X. A. Aspergillus spp. B. Penicillium spp. C. Cladosporium spp.
Se registraron 3 géneros (Aspergillus, son los géneros Aspergillus, Penicillium,

Penicillium, Cladosporium); los más frecuentes Fusarium y Trichoderma. Aunque, la celulosa y
encontrados son Aspergillus y Penicillium. hemicelulosa, son degradados, más lentamente
Aspergillus fue el hongo predominante que los azúcares, almidón y residuo orgánico
aislado del compost en las últimas semanas. La más resistente y normalmente, el último
presencia de Aspergillus podría haberse visto producto que se degrada de la cadena alimenticia
favorecida por su capacidad de adaptación a la la lignina.
temperatura moderadamente alta del compost
(25-30ºC) (22). Conclusiones
Al respecto, Atlas & Bartha (23) afirman El género Aspergillus para hongos y el género
que, las especies que encuentran comúnmente Bacillus para bacterias, se encuentran durante
en compostajes de hongos celuloliticos que todos los periodos del compostaje, gracias a
77
la capacidad de adaptación a los cambios de el compostaje de residuos sólidos. terra

temperatura del compostaje; sin embargo, a latinoamericana, 32(4), 291-300.
pesar que la literatura reporta mayor cantidad 7. Vásquez, M. C., López, A., Fuentes,
de bacterias en el compost, en el presente trabajo B., & cote, e. (2010). composting process
se encontró mayor presencia de hongos. acceleration of post-harvest product (cherry)
coffee with the implementation of native
Recomendaciones microorganisms. revista cenic. ciencias
Puede entenderse que la dinámica entre
biológicas.
Aspergillus y Pseudomonas se podría estudiar
8. Pérez, m a, Sánchez r, Palma, d j, &
y evaluar en futuros trabajos relacionados con
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79

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Rodolfo Lopez Franco / Adalucy Álvarez Aldana / Daniel Arturo León Rodríguez / Viviana Milena Taylor Orozco /

Risaralda, Colombia, Pereira

Centro de investigaciones Facultad de Ciencias de la Salud

Derechos Reservados de Autor

Distribución: Universidad Libre Pereira

Jorge Gaviria Liévano

Fernando Enrique Dejanon Rodríguez

Floro Hermes de San José Gómez Pineda

Elizabeth Villarreal Correcha

Fernando Uribe de Los Ríos

Carmen Helena Aragón Villa

Luis Alfonso Sandoval Perdomo

María Teresa Rodríguez Lugo

Olga María Henao Trujillo

Rodolfo López Franco

Ingeniero agronómico, magister en biología vegetal. Profesor del programa de Microbiología de

Adalucy Álvarez Aldana

Bacterióloga y laboratorista clínica, magister en biología molecular y biotecnología, doctora en

Daniel Arturo León Rodríguez

Microbiólogo, magister en ciencias con énfasis en genética Humana, doctor en Biomédica.

Viviana Milena Taylor Orozco

Bacterióloga y laboratorista clínica, magister en Ciencias Biomédicas, doctora en Biología. Líder

Daniela Guiral Guiral

Microbióloga. Egresada del programa de Microbiología de la Facultad de Ciencias de la Salud.

Stephanie Ríos Cifuentes

Microbióloga. Egresada del programa de Microbiología de la Facultad de Ciencias de la Salud.

Érika Loranz Sánchez

Microbióloga. Egresada del programa de Microbiología de la Facultad de Ciencias de la Salud.

Microbióloga. Egresada del programa de Microbiología de la Facultad de Ciencias de la Salud.

Silvana Vergara Acevedo

Microbióloga. Egresada del programa de Microbiología de la Facultad de Ciencias de la Salud.

El presente documento, puede convertirse

Rodolfo López Franco

Introducción de las plantas; la relación micorrizógena

Polymorphism-Based Genetic Profiles Of 16. Castrillón O, Bedoya O, Montoya Dv.

& Morra, M. J. (2002). Novel Plant-Microbe

Introducción con características endófitas, patógenas y otros

desarrollo del microorganismo en estudio, ya Objetivo

Figura 3. Preparación de las muestras de 100 g.

Figura 2. Mapa del muestreo geográfico de la

En la rizófora del árbol pomarroso

Posteriormente se tomó una porción de

Tabla 1. Componentes de agar avena. Tabla 3. Componentes del medio GYM

Componentes g/L Componentes g/L

Además, se probó el medio GYM Resultados y discusión

Seguido se ajustó el pH a 7.0 antes de agregar

En medio basal MS, las colonias aparecen

Figura 8. Resultado del repique en medio Ashby.

En GYM, las colonias aparecieron luego de 4

Figura 11. Resultado del repique en medio basal MS

Se evidenció que en el medio de cultivo

Figura 9. Repique de colonias en Agar GYM.

En el agar suplementado (GYM streptomyces

Figura 12. Evidencia de los repiques contaminados en el

Para el medio basal MS, la incidencia de

En Agar GYM, las colonias bacterianas

Figura 13. Evidencia de los repiques contaminados en el

Del previo aislamiento del presunto

Figura 15. A. colonias obtenidas del repique; B. colonias

En el medio basal MS, se obtuvo colonias