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    Cromatografia y Colesterol

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    González Chávez Mariana
    El documento describe un experimento para separar fosfolípidos en yema de huevo usando cromatografía en capa fina y determinar el colesterol presente mediante un método colorimétrico. Los resultados muestran que los fosfolípidos se separaron con éxito y que había colesterol presente en las muestras, como se evidencia por la coloración verde de los tubos de ensayo. La cromatografía en capa fina es una técnica útil para separar y analizar componentes lipídicos no complejos como los present

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    Cromatografia y Colesterol

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    González Chávez Mariana
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    El documento describe un experimento para separar fosfolípidos en yema de huevo usando cromatografía en capa fina y determinar el colesterol presente mediante un método colorimétrico. Los resultados muestran que los fosfolípidos se separaron con éxito y que había colesterol presente en las muestras, como se evidencia por la coloración verde de los tubos de ensayo. La cromatografía en capa fina es una técnica útil para separar y analizar componentes lipídicos no complejos como los present

    Descripción original:

    PRÁCTICA BIOQUÍMICA

    Título original

    CROMATOGRAFIA Y COLESTEROL

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    El documento describe un experimento para separar fosfolípidos en yema de huevo usando cromatografía en capa fina y determinar el colesterol presente mediante un método colorimétrico. Los resultados muestran que los fosfolípidos se separaron con éxito y que había colesterol presente en las muestras, como se evidencia por la coloración verde de los tubos de ensayo. La cromatografía en capa fina es una técnica útil para separar y analizar componentes lipídicos no complejos como los present

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    ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS

    BIOLÓGICAS
    Grupo: 3FV01
    Sección:3

    SEPRACION DE DIACILFOSOFLÍPIDOS POR


    CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA Y
    DETERMINACION DEL COLESTEROL EN LA
    YEMA DE HUEVO
    ➢ Resultados colesterol
    ➢ Objetivos: Emplear el método de
    cromatografía en capa fina para separar los
    fosfolípidos presentes en la yema de huevo.
    Comparar el método usado con respecto a
    diferentes métodos de cromatografía para la
    separación de lípidos
    Determinar por un método colorimétrico la
    presencia de colesterol en la yema de
    huevo.

    ➢ Resultados capa fina


    Fosfolípidos Rf
    Molibdato 1)0.7407 2)0.7407
    Yodo 1)0.8593 2)09375 Tubo N° µg de colesterol Absorbancia
    Ninhidrina 1)0.625 2)0.7813 0 0
    Bismuto 1)0.4688 2)0.5469 1 20 0.091
    Molibdato 2 40 0.143
    4.5 4.5 3 60 0.196
    Rf1= =0.7407 Rf2= =0.7407 4 80 0.258
    6.4 6.4
    5 100 0.301
    Yodo µg de colesterol en 5
    µL
    5.5 6
    Rf1= =0.8593 Rf2= =0.9375 Pb1 3249.24 0.196
    6.4 6.4 Pb2 21882 0.132
    Ninhidrina Pb3 3547.68 0.214
    Pb4 4078.08 0.246
    4 5
    Rf1= =0.625 Rf2= =0.7813
    6.4 6.4
    Bismuto
    3 3.5
    Rf1= =0.4688 Rf2= =0.5469
    6.4 6.4

    Esquemas
    Cálculos necesario separar los fosfolípidos, para ello
    es menester saber que los lípidos no son
    0.196(0.0373)
    Pb1: =2.7077 solubles en agua pero si en disolventes
    0.0027 orgánicos. Por ello en la práctica se ocupó
    0.132(0.0373) una mezcla de cloroformo-metanol (2:1 v/v).
    Pb2: =1.8235 Como era de esperarse la fase acuosa de
    0.0027
    desecha, pues como se mencionó
    0.214(0.0373)
    Pb3: =2.9564 anteriormente, los fosfolípidos se disolvieron
    0.0027 en el disolvente orgánico. Para obtener una
    0.246(0.0373) prueba más clara se purificó con KCl, y es
    Pb4: =3.3984 importante mencionarlo, ya que
    0.0027
    posteriormente se realizó una cromatografía
    en capa fina, por lo que debemos de tener
    2.7077 µg de colesterol----5 µL una buena muestra para realizar la prueba.
    En la cromatografía en capa fina, la fase
    x---------------------------------3000 µL móvil compuesta por cloroformo-metanol ác.
    x=1624.62 *2 =3249.24 Acético- agua, logró eluir los distintos
    fosfolípidos y de esa manera conocer la
    polaridad de los fosfolípidos, ayudándose de
    1.8235 µg de colesterol----5 µL la estructura consultada, al analizar los Rf.

    x---------------------------------3000 µL En el caso de la práctica de determinación


    x=1094.1*2 =21882 de colesterol, a partir de la estructura del
    colesterol, podemos notar que posee un
    grupo hidroxilo en la parte inferior izquierda.
    El fundamento de la reacción Lieberman-
    2.9564 µg de colesterol----5 µL
    Burchard es el siguiente: Este grupo
    x---------------------------------3000 µL hidroxilo “libre” reacciona con los reactivos,
    formando un complejo que tiene coloración
    x=1773.84 *2 =3547.68
    que van del rosa violáceo hasta llegar al
    verde. Revelando la presencia de colesterol.
    3.3984 µg de colesterol----5 µL
    ➢ Conclusión:
    x---------------------------------3000 µL
    La ventaja de ocupar el método de
    x=2039.04*2 =4078.08 cromatografía en capa fina es que no se
    analiza un compuesto con grandes
    componentes, por lo que determinar la
    ➢ Discusión presencia de los fosfolípidos es
    Los fosfolípidos poseen una doble relativamente fácil, además si se conoce su
    naturaleza, por un lado una parte polar, que estructura, se pueden revelar con reactivos
    es donde se localiza el grupo fosfato y una como bismuto y ninhidrina. Al ser
    parte no polar, que es donde se localiza la componentes específicos y no muy
    parte hidrocarbonada. Teniendo en cuenta complejos, no es conveniente ocupar
    esta información, se puede entender mejor cromatografía en columna, por el tiempo que
    el procedimiento de la práctica. esto conlleva.
    Para la determinación de los fosfolípidos
    presentes en la yema de huevo, primero era
    Los tubos tuvieron una coloración verde, por
    lo que podemos concluir cualitativamente la
    presencia de colesterol en las muestras de
    los tubos.
    ➢ Estructura de los lípidos de capa fina

    *Fosatidilserina

    *Fosfatidil-etanol-amina

    *Fosfatidilcolina

    ➢ Comparar datos teóricos con prácticos


    Muestras
    Pata en 14ml de una yema =2.9564 µg de
    colesterol y 3547.68 µg de colesterol en 5
    µL igual a 3.54 mg

    Codorniz en 7.4 ml de cuatro yemas =


    1.8235 µg de colesterol y 21882 µg de
    colesterol en 5 µL igual a 21.88 mg

    El aproximado de colesterol en yema de


    aves por cada 100 gramos es; pato: 1227mg
    y de codorniz: 373mg

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