INFORME FINAL

DESCOMPOSICIÓN DEL PETROLEO EN SUELOS UTILIZANDO BACTERIAS

PRESENTADO POR:
CARLOS ANDRES TORRES MOLANO
COD. 20171153855

PRESENTADO A
ING. CARLOS FERNANDO VALDEZ RENTERIA

PRACTICA INVESTIGATIVA
UNIVERSIDAD SURCOLOMBIANA
FACULTAD DE INGENIERÍA
INGENIERÍA DE PETRÓLEOS
NEIVA-HUILA
2021-1
 PROBLEMA
Descomposición de petroleo en suelos

JUSTIFICACION (ESTADO DEL ARTE)

Los hidrocarburos son uno de los grupos de sustancias potencialmente contaminantes mas
importantes, por su abundancia, por su distribución espacial en entornos urbanos y por su
persistencia en distintos sectores ambientales [1]. La fracción de hidrocarburos alifáticos y los
hidrocarburos polares, conformados por asfáltenos altamente condensados y resinas, en donde
cada uno difiere significativamente respecto a su susceptibilidad frente a posibles procesos de
biodegradación [2, 3].

Para su mineralización, estos compuestos requieren la acción de más de una especie microbiana,
debió a que cada microorganismo tiene una capacidad limitada para degradar las diferentes
moléculas. Debido a la complejidad de la composición del petroleo, la biodegradación por parte de
las bacterias dependerá de las proporciones que tenga de cada una de sus fracciones [4, 5
Tabla 2 Géneros bacterianos asociados con la degradación de hidrocarburos
Existen diferentes tecnologías, siendo los métodos biológicos los que han demostrado ser
eficientes y adecuados debido a que causan menor impacto en el sitio del problema [6, 7].

TECNOLOGIAS DE BIODEGRADACION

Es importante comentar que la biodegradación cuenta con las siguientes técnicas de

implementación biológica, unas más efectivas en suelo, otras en agua dependiendo de sus
características físico- química:

Landfarming: es la preparación del suelo por medio de excavaciones donde se construyen celdas
especiales para exponer las bacterias que fueron entrenadas en laboratorio en la zona
contaminada, con el fin de que estas puedan actuar de manera natural en el subsuelo y puedan
seguir con su ciclo metabólico normal mientras degradan el petróleo. Para Jacome y Bravo [8],
esta técnica se destaca por el uso de bacterias nativas que realizan la descomposición del petróleo
de forma aeróbica para la descontaminación exclusiva de suelos. Este, es el método más utilizado
a través de los años, ya que es el que mejor resultados ha mostrado científicamente, pero a pesar
de que es un mecanismo que es útil en aplicaciones exsitu e insitu, en el que las
bacterias implementadas o cultivadas logran la oxidación biológica de los hidrocarburos
derramados es necesario estimular los grupos microbianos mediantes bioestimulación o
aumentación cuando son ecosistemas con características complejas.

Tapetes microbianos: Para Martínez y Gaju [9], este tipo de biodegradación se caracterizan por
contener y mantener microorganismos aerobios y anaerobios, lo que lo convierten en un
ecosistema artificial donde pueden adaptarse bacterias bastante complejas con gradientes de luz,
presencia de oxígeno, presencia de ácido sulfhídrico y potencial de oxidación- reducción, que ha
mostrado excelentes resultados en la degradación de hidrocarburos en todo tipo de agua
contaminada; eso sí con un limitante y es que dichos tapetes solo son aplicables en la superficie de
la capa agua afectada por lo cual actúan en profundidades de pocos milímetros.
Estos dos tipos de biodegradación anteriormente expuestos son las técnicas que nivel mundial y a
través de la historia han mostrado porcentajes de efectividad bastante altos, pero a pesar de que
son muy eficaces a veces es necesario el uso de métodos que ayuden a acelerar los procesos de
degradación de los hidrocarburos, ya que en varias ocasiones las características de los ecosistemas
a tratar son bastante complejas y no ayudan con la activación microbiana. Para Lors y Mamindy-
Pajandy95, las prácticas para estimular su crecimiento y adaptación son:

 Bioamuntación, es el proceso mediante el cual se ayuda a las bacterias con el ingreso de

bacterias comerciales o externas, que ya han sido adaptadas y aisladas para degradar
suelos o aguas contaminadas.

 Bioestimulación, consiste en estimular las bacterias nativas que fueron extraídas de la

zona contaminada, que se puede activar por adición de oxígeno, agua y varios nutrientes
(fósforo y nitrógeno) conociendo las características químicas del suelo o el agua a tratar.

 Biovolatilización, este proceso de basa en la degradación de metales pesados,

especialmente el mercurio altamente toxico, como es de saber todo compuesto que
provenga de subsuelo (petróleo, agua y sedimentos) suele estar contaminado con este
tipo de metales lo cual complica aún más su tratamiento.

 Biorreactores, es un recipiente que introduce los materiales afectados junto con agua,
nutrientes y cultivos altamente densos de microorganismos, en donde se genera la
desintegración del petróleo gracias a las enzimas presentes. Estos recipientes son
generalmente implementados en laboratorio para lograr la adaptación de las bacterias
antes de exponerlas en el ambiente.

 La biofiltración, que se encarga de limpiar el aire contaminado por medio de reactores

biológicos donde actúa flora bacteriana que al igual que la biodegradación eliminan
contaminantes volátiles y los convierten en dióxido de carbono, agua o biomasa. Este tipo
de filtración se encuentra dentro de los biorreactores para atrapar y recolectar los
componentes degradados para exponer al ambiente los residuos mínimamente tóxicos.
  La bioaspersión, une el efecto de ventilación con el uso de microorganismos nativos,
donde el aire y los nutrientes se inyectan para mejorar la acción de las bacterias, esta
técnica es muy usada en suelo y aguas subterráneas contaminadas.

FORMAS DE APLICACIÓN DE LAS TECNOLOGÍAS

 Exsitu Este tratamiento consiste es realizar una excavación, degrado o procesos de

remoción de la zona a tratar que se efectuar con la ayuda de celdas land farming,
biorreactor, biosuspension, bioceldas o biopilas. Esta remoción se realiza antes de aplicar
el tratamiento que se puede llevar a cabo en la misma zona (onsite) o fuera de la zona (off
site). En la figura 1, se puede observar cómo es la preparación del terreno contaminado y
como son las instalaciones y equipos necesarios antes de implementar el tratamiento, en
la cual se cumplen los requisitos exigidos como el techo para la protección de las celdas, el
tractor que se encarga de realizar la aireación suelo constantemente, la arena para
drenaje que cumple la función de los acondicionadores, cuenta con una zona de
recolección de lixiviados y con una membrana impermeable para evitar la entrada de
aguas lluvia.

FIGURA 1. Diseño general estructural de tratamiento exsitu.

Fuente. ADAMS.S, Randy H; DOMÍNGUEZ.R, Verónica I y GARCÍA. H, Leonardo. Potencial de la

biorremediacion de suelo y agua impactados por petróleo en el trópico mexicano. En: Terra.
Marzo- junio, 1999. Vol. 17 no. 2, p. 166.

 Insitu Para Trujillo [11], este tipo de tratamiento se lleva a cabo sin necesidad de crear
una excavación en la zona contaminada y a diferencia del tratamiento exsitu solo se
puede ejecutar en el mismo lugar afectado (onsite). Normalmente, este tratamiento es el
más adecuado y efectivo para la recuperación de la zona contaminada puesto que no se
necesita modificar al terreno, siempre y cuando se haya realizado debidamente los
estudios de impacto ambiental se hayan tenido en cuento las industrias cercanas que
 puedan resultar afectadas, los costos de inversión, el difícil acceso a la zona y la velocidad
del proceso dependiendo de extensión que alcance el contaminante. En la figura 2, se
puede observar la estructura general y los equipos utilizados para el tratamiento insitu de
un acuífero contaminado, que cuenta con una tubería que comunica con la bomba de
inyección de aire para realizar la aireación necesaria del suelo y una zona de estimulación
para el crecimiento y mantenimiento adecuado de las bacterias.

Figura 2. Diseño general del tratamiento insitu.

Fuente. ADAMS.S, Randy H; DOMÍNGUEZ.R, Verónica I y GARCÍA. H, Leonardo. Potencial de la

biorremediacion de suelo y agua impactados por petróleo en el trópico mexicano. En: Terra.
Marzo- junio, 1999. Vol. 17 no. 2, p. 166.

En la Tabla 3, se presenta de forma más específica las diferencias más relevantes que presentan
los dos tratamientos, como en qué zonas es mejor realizar la aplicación, los procesos que se llevan
a cabo en cada uno, limitaciones, observaciones, ventajas y desventajas.

Tabla 3. Comparación de tipos de aplicación de biodegradación

Fuente. ADAMS.S, Randy H; DOMÍNGUEZ.R, Verónica I y GARCÍA. H, Leonardo. Potencial de la
biorremediacion de suelo y agua impactados por petróleo en el trópico mexicano. En: Terra.
Marzo- junio, 1999. Vol. 17 no. 2, p. 165

HIPOTESIS

Biorremediación usando bacterias

Es posible descomponer el crudo (alcanos C5-C16) a partir de Pseudomonas a partir de las

condiciones dadas de suelo, pH, temperatura

Identificación de los elementos de la hipótesis

 Tipo de petroleo.
 Tipo de suelo.
  Tipo de bacteria.
 Tipo de fracción o compuesto.
 Condiciones de vida de la bacteria (sustrato, PH, temperatura, metabolismo).

Unidades de analisis

 Bacterias (Consumo de alcanos).

 Crudo (Contenido de alcanos y tipo de crudos).
 Propiedades del suelo.
 Actividades antropogénicas.
 Daño a ecosistemas.

Clasificación del tipo de hipótesis

Hipótesis descriptiva

La principal característica es la fracción de alcanos que contiene el crudo.

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

Identificar el proceso de biodegradación para el tratamiento de derrames de petroleo en suelo

mediante el uso de Pseudomonas.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

1. Identificar cuáles son las consecuencias de un derrame de petroleo en suelo.

2. Describir el método de biodegradación microbiológica mediante el uso Pseudomonas en
las diferentes tecnologías implementadas.
3. Identificar el proceso de descomposición de alcanos (C5-C16) a partir de una familia
especifica de bacterias.
4. Aplicaciones de las Pseudomonas bajo condiciones especifica de pH, Temperatura y demás
parámetros para descomposición de alcanos.

METODOLOGIA

1) Para poder Identificar las consecuencias de un derrame de petroleo primero se debe saber
que tipo de suelo es (propiedades del suelo) y que tipo de petroleo fue el que se derramo,
en el caso del petroleo su información esta disponible en cualquier momento por parte de
la empresa que lo produce pero en el caso del suelo se necesita recolectar varias muestras
y submuestras del area afectadas a una profundidad de oscila entre los 30 cm de
profundidad hasta 1 metro si se trata de arenas, posteriormente las muestras deben ser
llevadas a un laboratorio se suelos para determinar:
 a) el nitrógeno total (método Kjekdahl),
b) el fosforo (método colorimétrico azul de molibdeno)
c) la absorbancia (espectrómetro)
d) el potasio
e) el pH (método del potenciométrico)
f) conductividad eléctrica (conductimetría)
g) textura (método del tacto)
h) contenido de hidrocarburos totales (HTP, gravimetría Standard Methods 5420-E)

2) Los recuentos de microorganismos en los suelos contaminado se realizan en un

laboratorio de microbiología, por medio de métodos de aislamiento y cultivo, una vez
terminada la cuantificación e identificación, se evalúa el potencial de biodegradación de
las especies encontradas para seleccionar las especies de mayor capacidad.

Luego se procede a extraer las especies fúngicas por medio de la técnica de flotación en
aceite mineral modificada, las cuales fueron inoculadas en medios de cultivos de
Sabouraud Agar, para su posterior crecimiento en colonias (14 días aproximadamente),
cuando se obtiene la especie pura se procede a la identificación microscópica a través del
método de Riddel para micro cultivos, después se evalúa el efecto de la concentración de
los hidrocarburos en la velocidad de crecimiento de los hongos, en un medio que contenía
un 2% m/m de HTP, se observó que las Acinetobacter sp., Pseudomonas sp. y
Mycobacterium sp. las cuales degradan alcanos, mono-aromáticos y poli-aromáticos
respectivamente.

3) Se observo que la especie Aspergillus Niger, es la cepa que presenta el mayor aumento en
el diámetro a lo largo del tiempo, en virtud de lo anterior, se establece que esta especie
degrada los hidrocarburos (C5 – C16) con mayor rapidez que las otras.

4) A temperaturas bajar el petroleo aumenta su viscosidad, se reduce la volatilidad de los

compuestos de bajo peso molecular y se eleva la solubilidad lo cual aumenta la toxicidad
en microorganismos; conforme se eleva la temperatura se incrementa la actividad
microbiana, encontrado se mayor actividad enzimática de bacterias mesofílicas y
termofílicas.

RESULTADOS

Los resultados muestran la alta capacidad que poseen los hongos del género Aspergillus para ser
un activo degradador del petroleo ya que se logró remover más del 85% del contenido de HPT
presente en las muestras.

BIBLIOGRAFIA

[1] Marc Viñas Canals. Biorremediación de suelos contaminados por hidrocarburos:

caracterización microbiológica, química y eco toxicológica. Universitat de Barcelona, 2005.
[2] Colwell, Rita R and Walker, John D y Cooney, Joseph J. Ecological aspects of microbial
degradation of petroleum in the marine environmet. Critial Reviews in Microbiology, 5 (4):423-
445, 1977.

[3] Ronald M Atlas. Microbial degradation of petroleum hydrocarbons: an environmental

perspective. Microbiological reviews, 45(1):180, 1981.

[4] Adri´an Acu˜na, Graciela Pucci, Mar´ıa Jos´e Morales, and Oscar Pucci. Biodegradaci´on de petr
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derivados por la comunidad bacteriana en un suelo de la patagonia argentina. Revista de la
Sociedad Venezolana de Microbiolog´ıa, 30(1):29–36, 2011.

[5] James G Speight. The chemistry and technology of petroleum. CRC press, 2014.

[6] Anders R Johnsen, Lukas Y Wick, and Hauke Harms. Principles of microbial pah-degradation in
soil. Environmental Pollution, 133(1):71–84, 2005.

[7] Mphekgo P Maila and Thomas E Cloete. Bioremediation of petroleum hydrocarbons through
landfarming: Are simplicity and cost-e_ectiveness the only advantages? Reviews in Environmental
science and bio/Technology, 3(4):349–360, 2004.

[8] ARBOLEDA JACOME, Viviana Gabriela y BRAVO BASANTES, Verónica Mercedes.

Biorremediación del suelo contaminado con hidrocarburos de la central hidroeléctrica del
campamento Secoya mediante landfarming. Trabajo de grado Ingeniería en biotecnología
ambiental. Riohamba, Ecuador: Escuela superior politécnica de Chimborazo, facultad de ciencias.
Escuela de ciencias químicas. 2008. p. 32

[9] MARTÍNEZ, Alonso y GAJU, N. Op.cit., p. 83- 84.

[10] LORS, Christine y MAMINDY- PAJANDY, Yannick. Bioremediation of heavy metals in sediments.
En: VELÁZQUEZ FERNÁNDEZ, Jesús Bernardino y MUÑIZ HERNÁNDEZ. Bioremediation: processes,
challenges and future prospects. New York, 2014 p. 11. ISBN: 978-1-62948-515-7 (Ebook)

[11] TRUJILLO. Op.cit., p.41