Qué Es Un Hibridoma

1. ¿Qué es un Hibridoma?
Una hibridoma es una línea celular híbrida obtenida mediante la fusión de un linfocito B
productor del anticuerpo específico de interés, con una línea celular de mieloma que no
produce una inmunoglobulina propia.
2. ¿Qué es son los anticuerpos monoclonales?

es un anticuerpo producido por un solo clon de linfocitos B. Los anticuerpos monoclonales
son anticuerpos idénticos porque son producidos por un solo tipo de célula del sistema
inmune, es decir, todos los clones proceden de una misma célula madre.
Los anticuerpos monoclonales son proteínas artificiales que actúan como anticuerpos
humanos en el sistema inmunitario.
3. ¿Qué son los anticuerpos policlonales?

son anticuerpos derivados de diferentes líneas de células B, los linfocitos encargados de la
respuesta ante elementos ajenos mediante anticuerpos.
Los anticuerpos policlonales (pAbs) son una mezcla compleja de varios anticuerpos que
sean producidos generalmente por diversas copias del linfocito B de un animal. Estos
anticuerpos reconocen y atan a muchos diversos epítopos de un único antígeno y por lo
tanto pueden formar enrejados con los antígenos.
4. ¿En qué consiste el ensayo de inmunoadsorción ligado a enzima?

El ensayo por inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA) es un método de prueba basado
en anticuerpos, estos ensayos permiten analizar muestras de alimentos y piensos en un
plazo máximo de 30 minutos, incluida la preparación de muestras.
5. Describa la técnica de ELISA directa.

El ELISA directo es el ensayo ELISA más simple y rápido de todos, donde un anticuerpo
primario marcado con una enzima se unirá directamente al antígeno de interés
permitiendo la detección o cuantificación de este.
El procedimiento simplificado sería el siguiente:

 El antígeno se inmoviliza sobre una placa
 Se añade un anticuerpo primario marcado con una enzima que se unirá al
antígeno de interés
 Se añade el sustrato que al reaccionar con la enzima proporcionará una señal
visible que permitirá la detección o cuantificación del antígeno de interés.
6. Describa la técnica de ELISA indirecta.

Es un ensayo parecido al ELISA directo, pero en dos pasos, lo que permite amplificar la
señal obtenida. En este caso se utilizan dos anticuerpos, uno primario y otro secundario, y
es este último el que irá conjugado a una enzima.
 El antígeno se inmoviliza sobre una placa
 Se añade un anticuerpo primario sin marcar que se une al antígeno de interés
 Se añade un anticuerpo secundario marcado con una enzima que se unirá al
anticuerpo primario
visible que permitirá la detección y/o cuantificación del antígeno de interés.
7. Describa la técnica de ELISA competitiva.

El ELISA competitivo es una variante más compleja de la técnica ELISA, también conocido
como ELISA de inhibición debido al uso de un antígeno de referencia que competirá con el
antígeno de la muestra por unirse al anticuerpo primario.
Se utiliza generalmente para detectar o cuantificar antígenos presentes en muy bajas

cantidades.

 El antígeno de referencia se inmoviliza sobre la placa.
 Por otro lado, un exceso de anticuerpo primario sin marcar se incuba con la
muestra que contiene el antígeno de interés, dando lugar a la formación de
complejos antígeno-anticuerpo
 Se añade la mezcla antígeno-anticuerpo a la placa, donde el antígeno de
referencia competirá con el antígeno de la muestra por unirse al anticuerpo
 Se lava la placa eliminando los complejos antígeno-anticuerpo solubles
 Se añade a la placa un anticuerpo secundario marcado con una enzima que se
unirá al anticuerpo primario anclado al antígeno de referencia.
visible que será inversamente proporcional a la cantidad de antígeno de interés
presente en la muestra.
8. Describa la técnica de ELISA tipo Sándwich.

En el ELISA tipo sándwich el antígeno queda inmovilizado entre dos anticuerpos, uno de
captura y otro de detección también conocidos como pares de anticuerpos, que se unirán
a dos epítopos distintos de un mismo antígeno.

 El anticuerpo de captura se inmoviliza sobre la placa
 Se añade la muestra que contiene el antígeno de interés que se unirá al
anticuerpo de captura
 Se añade el anticuerpo de detección que se unirá al antígeno unido a su vez al
anticuerpo de captura.
 En caso de que el anticuerpo de detección vaya conjugado a una enzima,
procederemos directamente con el 5º paso. En caso contrario (que es lo más
habitual en los ELISA tipo sándwich), será necesario añadir un anticuerpo
secundario marcado con una enzima que se unirá al anticuerpo de detección.
visible que permitirá la detección y/o cuantificación del antígeno de interés.
9. Describa la técnica de In-cell ELISA.
In-Cell ELISA (también conocido como ELISA basado en células, in cell western o cytoblot)
es un método de inmunocitoquímica utilizado para cuantificar la proteína diana o
modificaciones postraduccionales de la proteína diana, en células cultivadas.
Método o técnica:
protocolo rápido
 Siembra de células adherentes
Siembre las células en una microplaca de 96 pocillos a la densidad deseada (para una
microplaca de 384 pocillos, siembre a ¼ de la densidad).
Deje que las células se adhieran.

Trate las células como desee en un volumen total de 100 µl de medio para una microplaca
de 96 pocillos (o ¼ del volumen de una microplaca de 384 pocillos).
 Fije las células a la microplaca.
Agregue un volumen igual (100 µL) de solución de paraformaldehído al 8% para fijar y

reticular las células a la microplaca.
Incubar durante 15 minutos.
Lave los pocillos con PBS (la microplaca puede almacenarse a 4 ° C en este punto).
 Permeabilizar las células
Agregue 200 µL de solución de permeabilización 1X a los pocillos durante 30 min.

Agregue 200 µL de solución de bloqueo 2X a cada pocillo. Incubar durante 2 h.
Lávese bien.
 Incubación con anticuerpo primario
Diluya el stock de anticuerpo primario a la concentración de ELISA en la célula especificada

en tampón de incubación 1X y agregue 100 μL a los pocillos apropiados.
Cubra e incube durante la noche a 4 ° C.
Lávese bien.
 Incubación con anticuerpo secundario

Diluya el stock de anticuerpo secundario a la concentración requerida (como se define en
el protocolo del kit o según lo determine el usuario) en tampón de incubación 1X y
agregue 100 μL de anticuerpo secundario diluido a los pocillos apropiados.
Incubar durante 2 horas a temperatura ambiente.
Lávese bien.
 Medir la señal
Obtenga imágenes de la microplaca con un escáner de infrarrojos o revele la microplaca

etiquetada con HRP y lea con un espectrofotómetro según corresponda. Exportar datos.
 Tinción de células enteras con Janus Green (opcional)
Si lo desea, tiñe con Janus Green y mida la densidad relativa de siembra de células en un
generador de imágenes de infrarrojos o en un espectrofotómetro de microplacas. Exportar
datos.
Determine la señal con corrección de fondo y luego proporcione la señal a Janus Green si
lo desea.
Materiales
Anticuerpo primario caracterizado por ELISA en la célula
Anticuerpo secundario marcado con IRDye ® o HRP apropiado
Para la detección de HRP, solución de sustrato de HRP
20% de paraformaldehído
Agua destilada o desionizada
Solución salina tamponada con fosfato (PBS) 10X (Na 2 HPO 4 80 mM , KH 2 PO 4 14 mM ,
NaCl 1,4 M, KCl 27 mM, ajustar el pH a 7,4 con NaOH)
100X Triton X-100 (solución al 10% en H 2 O)
400X Tween-20 (solución al 20% en H 2 O)
Búfer de bloqueo 10X
Solución al 0,3% Janus Green Stain (ab111622) en agua
0,5 M de HCl
10. Describa la técnica de Western Blot.
Western blot es una técnica de laboratorio utilizado para detectar una proteína específica en una
muestra de sangre o tejido.
 El método implica el uso de electroforesis en gel para separar las proteínas de la muestra.
 Las proteínas separadas se transfieren del gel a la superficie de una membrana.
 La membrana se expone a un anticuerpo específico contra la proteína en estudio.
 La unión del anticuerpo se detecta usando un marcador radiactivo o químico.
Un Western Blot se utiliza a veces para diagnosticar enfermedades.

Qué Es Un Hibridoma

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Qué Es Un Hibridoma

Cargado por

Información del documento

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Qué Es Un Hibridoma

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

1. ¿Qué es un Hibridoma?

2. ¿Qué es son los anticuerpos monoclonales?

3. ¿Qué son los anticuerpos policlonales?

4. ¿En qué consiste el ensayo de inmunoadsorción ligado a enzima?

5. Describa la técnica de ELISA directa.

El procedimiento simplificado sería el siguiente:

6. Describa la técnica de ELISA indirecta.

7. Describa la técnica de ELISA competitiva.

Se utiliza generalmente para detectar o cuantificar antígenos presentes en muy bajas

El procedimiento simplificado sería el siguiente:

8. Describa la técnica de ELISA tipo Sándwich.

El procedimiento simplificado sería el siguiente:

 Siembra de células adherentes

Deje que las células se adhieran.

 Fije las células a la microplaca.

Agregue un volumen igual (100 µL) de solución de paraformaldehído al 8% para fijar y

 Permeabilizar las células

Agregue 200 µL de solución de permeabilización 1X a los pocillos durante 30 min.

 Incubación con anticuerpo primario

Diluya el stock de anticuerpo primario a la concentración de ELISA en la célula especificada

 Incubación con anticuerpo secundario

Obtenga imágenes de la microplaca con un escáner de infrarrojos o revele la microplaca

 Tinción de células enteras con Janus Green (opcional)

10. Describa la técnica de Western Blot.

Un Western Blot se utiliza a veces para diagnosticar enfermedades.

También podría gustarte