Enzimología Diagnóstica

[AFO007847] MF0371_3 Análisis Bioquímicos en Muestras Biológicas Humanas
[MOD007722] MF0371_3 Análisis Bioquímicos en Muestras Biológicas Humanas

[UDI040848] Enzimología diagnóstica
INTRODUCCIÓN
La enzimología clínica es la aplicación del conocimiento de las enzimas (proteínas especializadas en
la catálisis de reacciones orgánicas) al diagnóstico, tratamiento y pronóstico de la enfermedad.
Aunque son raras las enzimas exclusivas de un tejido, la alteración de la concentración sérica de un
enzima determinada orienta sobre los tejidos más probablemente afectados.
Además, muchas enzimas muestras distintas formas moleculares (isoenzimas) características de
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distintos tejidos. El análisis isoenzimático de la enzima cuya concentración sérica se encuentra
alterada a menudo aporta información adicional sobre las causas de dicha alteración.
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Muy frecuentemente la información deseada se obtiene examinando dos o más enzimas séricas.
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campusvirtual.esnecaformacion.com
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OBJETIVOS
Estudiar las características, fisiología y cinética enzimática.
Describir las enzimas analizadas en diagnóstico clínico.
Aplicar los métodos de estudio enzimático.
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MAPA CONCEPTUAL
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1. Estudio enzimático: características, fisiología y cinética

enzimática
Las enzimas son el grupo más variado y especializado de las proteínas, su función es actuar como
catalizadores, permitiendo que las reacciones que transcurren en los seres vivos puedan
desarrollarse a un ritmo adecuado.
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Catalizador:
Es un compuesto que con su sola presencia aumenta la velocidad de la reacción sin experimentar
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ninguna modificación.
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Las enzimas son capaces de acelerar las reacciones químicas específicas en un medio acuoso, y en
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condiciones en las que los catalizadores no biológicos, serían incapaces de realizar iguales
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funciones.
La capacidad catalizadora de la Enzima depende de su conformación, ya que la supresión de alguno
de sus niveles de estructuración causa la pérdida de funcionamiento. Sus propiedades catalizadores
dependen del alto grado de especialización que presentan respecto a las sustancias reaccionantes o
sustratos.
Las enzimas son de diferentes tamaños y características. Por ejemplo, alguna de ellas necesitan para
desarrollar su actividad solo su estructura aminoacídica y otras requieren un cofactor.
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El cofactor puede ser un ión inorgánico (Fe2+, Mg2+, Mn2+ o Zn2+) o una molécula orgánica más
o menos compleja, que si se encuentra unida covalentemente se denomina grupo prostético, y si
establece uniones de naturaleza débil y reversible se denomina coenzima.
Muchas vitaminas, o derivados de las mismas, funcionan como coenzimas. La enzima completa junto
a su cofactor se denomina holoenzima y su parte exclusivamente proteica apoenzima.
A. Características y fisiología
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Clasificación de las enzimas
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En el origen del estudio de las enzimas se utilizaron nombres referentes al órgano o tejido dónde se
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descubrieron, o bien al sustrato o a la actividad desarrollada por la enzima, añadiéndole el sufijo -
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asa para darle un nombre.
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Desde 1961, la Unión Internacional de Bioquímica, utiliza un sistema de clasificación y
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denominación, adoptado por convenio, que clasifica las enzimas en seis grandes grupos:
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Actividad enzimática
La acción de las enzimas es absolutamente necesaria para los sistemas vivos, ya que las reacciones
sin catalizar tienden a ser lentas y las posibilidades que tiene una molécula de cambiar en un
ambiente estable como es el medio biológico, son muy bajas, de ahí que las enzimas proporcionen el
medio adecuado para contrarrestar la lentitud en la realización del cambio.
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Las reacciones sean catalizadas o no, dependen para su desarrollo de las leyes termodinámicas. El
principal parámetro que desde el punto de vista termodinámico, permite deducir si una reacción se
desarrolla o no de forma espontánea, es el cambio en la energía libre de Gibbs, (ΔG) deducido de
la segunda ley de la termodinámica (una reacción es espontánea si la entropía global del universo
aumenta), que mide la capacidad de un sistema para desarrollar trabajo.
Para que se realice la transformación de una molécula, que denominamos sustrato (S), en otra que
denominamos producto (P), el cambio de energía libre de Gibbs ha de ser negativo, lo que implica
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que la energía libre del producto ha de ser menor que la del sustrato.
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Esquemáticamente, el desarrollo de una reacción enzimática sencilla consistiría en:

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En una reacción química la conversión de sustrato en producto requiere una situación energética
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intermedia que se denomina estado de transición, donde el nivel de energía es superior al del
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sustrato o del producto. La diferencia entre el nivel de energía basal y la correspondiente al estado
de transición se denomina energía de activación y cuanta más alta sea menor será la velocidad de
reacción. La presencia del catalizador provoca una disminución en la energía de activación
requerida, y de esta forma aumenta la velocidad con que se desarrolla la misma.
Un detalle importante a la hora de analizar la actividad enzimática, es que en las reacciones
catalizadas enzimáticamente, se incrementa la velocidad de la reacción; pero lo que no se modifica
es el equilibrio de la misma, que sigue las leyes termodinámicas independientemente de la presencia
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o ausencia del Catalizador.
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La forma que tiene la enzima de realizar su actividad catalítica será en primer lugar unirse con el
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sustrato, y en segundo lugar facilitar la modificación del mismo para su cambio a producto.
Unión de la enzima con el sustrato

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La molécula o moléculas a modificar se sitúan en una región concreta de la enzima denominada

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centro o sitio activo. Esta zona de la enzima es responsable de las dos propiedades básicas de la
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molécula: la especificidad y la acción catalizadora de la proteína.

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Dentro de todo el conjunto de enzimas algunas presentan una alta especificidad, aceptando tan sólo
un tipo de moléculas sobre las que realizar la catalización, y siendo capaces de discriminar incluso
entre moléculas isoméricas. Por otro lado, otras enzimas con un menor nivel de especificidad
catalizan reacciones utilizando como sustratos moléculas que presenten una cierta similitud.
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La interacción entre enzima y sustrato se realiza a través de enlaces de naturaleza débil entre la
molécula de sustrato y el centro activo. Cuanto mayor sea el número de estos enlaces, mayor será la
especificidad de la enzima, y mayor también su capacidad de discriminar entre dos sustratos
estructuralmente próximos.
La especificidad de las enzimas fue estudiada ya en 1890 por Fischer mediante el modelo de la llave
y la cerradura, según el cual centro activo y sustrato presentaban morfologías complementarias que
les hacían encajar como una llave y su cerradura.
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Actualmente, se conoce que al unirse el sustrato al centro activo, pueden desarrollarse interacciones
n.
entre ambos que producen cambios en la morfología tanto del sustrato como del centro activo,
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pasando a considerarse un segundo modelo (Koshland y Neet) que se denomina modelo del guante y
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la mano o teoría del ajuste inducido.
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A través de este segundo modelo se afirma que los enlaces no sólo servirían para enlazar sustrato y
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centro activo, sino para facilitar la transformación del sustrato en producto.
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Catálisis enzimática
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Las enzimas son catalizadores con una eficacia muy alta comparados con los catalizadores no
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biológicos, ya que pueden incrementar la velocidad 1020 veces. La forma de llevar a cabo esta
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aceleración se apoya en diversos mecanismos, de los cuales los mejor estudiados son:
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Disminución de la entropía
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Las colisiones de las moléculas en disolución pueden ser escasas, la existencia y acción de
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una molécula más grande con tendencia a unir y colocar correctamente los sustratos
facilita la transformación.
Facilitación del medio ambiente de la reacción
El centro activo de la enzima dispone de grupos funcionales que pueden modificar el

medio ambiente del sustrato, por ejemplo situándolo en un medio hidrofóbico que
produzca su desolvatación, y que este cambio en su entorno posibilite la reacción.
Introducción de tensión o distorsión sobre el sustrato
La complementariedad entre el centro activo y el sustrato provoca tensiones sobre la
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molécula de sustrato favoreciendo la aparición, o desaparición de enlaces que facilita su

transformación en producto.
Existencia de grupos catalíticos específicos
El centro activo puede disponer de grupos funcionales catalíticos que colaboren de forma
directa, en la formación o rotura de enlaces. Dentro de estos sistemas existen dos
variedades: grupos catalíticos ácido-básicos, que participan dando o aceptando protones y
permiten el desarrollo de la reacción hacia la formación del producto; y grupos catalíticos
covalentes, que mediante la creación de enlaces covalentes transitorios con el sustrato,
direccionan la reacción en el mismo sentido que los anteriores.
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B. Cinemática enzimática
n.
El estudio de la actividad enzimática implica el análisis de la velocidad de actuación de la enzima, lo
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cual se conoce con el nombre de cinética enzimática.
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La velocidad de catálisis de una enzima podría determinarse bien como velocidad a la que se forma
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el producto, o bien como velocidad a la que desaparece el sustrato.
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La concentración de sustrato afecta de manera muy importante a la velocidad de la enzima. Cuando

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se mantiene constante la concentración del enzima, se comprueba que al aumentar la concentración

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de sustrato la velocidad de la enzima crece linealmente, disminuyendo el incremento paulatinamente

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hasta alcanzar una meseta que corresponde a un valor de velocidad que es la velocidad máxima.
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Modelo de Michaelis-Menten
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L.Michaelis y M. Menten en 1913, diseñaron un modelo o teoría general de la acción enzimática que
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explica el comportamiento hiperbólico de la velocidad con respecto a la concentración de sustrato.

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En el modelo postularon que la enzima (E) se combina en primer lugar con el sustrato (S), de forma
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reversible, formando el complejo enzima-sustrato (ES), que se descompone en un segundo paso
dando la enzima libre (E) y el producto (P). La velocidad de la última reacción es baja, y el modelo
supone que la probabilidad de que la enzima reaccione con el producto para volver a formar ES, es
tan ínfima que resulta despreciable, quedando simplificado este último paso en una reacción
prácticamente irreversible.
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La enzima puede existir en dos formas, en forma libre (E) o combinada como ES, cuando la S es baja
la mayoría de la enzima estará libre y se verá favorecida la formación de ES, cuando se va
incrementando la S la velocidad aumenta linealmente. La E libre será la diferencia entre la E total o
inicial y la ES o enzima combinado con el sustrato, y la velocidad máxima se alcanzará cuando toda
la enzima se encuentre en forma de ES, llegándose a la saturación de la enzima por su sustrato,
situación responsable de la meseta que aparece en la gráfica.
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Al disponer de una concentración de sustrato saturante, la reacción alcanza rápidamente un estado
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estacionario en el que la ES se mantiene prácticamente constante y la velocidad medida durante
n.
este estado es la velocidad analizada por el modelo de Michaelis-Menten que también se denomina
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modelo del estado estacionario.
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La expresión más habitual de la ecuación de Michaelis-Menten es:
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Cuando la velocidad es la mitad de la velocidad máxima (v=Vmáx/2), se obtiene una Equivalencia de

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la concentración de sustrato a la constante de Michaelis (S=Km), lo que representa una medida más
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sencilla de determinar que la relación de constantes de equilibrio, y permite expresar este

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parámetro cinético en unidades de concentración.

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La ecuación de Michaelis-Menten puede transformarse algebraicamente para obtener
representaciones rectilíneas en las que las medidas de Vmax y Km resulten más precisas. Una de las
transformaciones se denomina de “doble recíproco” o ecuación de Lineweaver-Burk, y sería:
Su representación gráfica será una línea recta.
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Otra linearización de la ecuación de Michaelis es la obtenida por el método de Eadie-Hofstee, donde

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en el eje de abscisas se representa v y en el de ordenadas v/S.

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Los parámetros Vmáxima y Km caracterizan cinéticamente a las enzimas denominadas michaelianas,

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(las enzimas no michaelianas son las denominadas reguladoras o alostéricas). La Km se relaciona

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con la afinidad de la enzima por el sustrato que será tanto más alta cuanto más baja sea la constante
s
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de Michaelis; sin embargo, para muchas enzimas el conocimiento de estos datos no proporciona
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mucha información respecto a los pasos de la reacción, la velocidad o el mecanismo de la misma.

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Unidades de medida de la actividad enzimática
La actividad catalítica de las enzimas se mide en condiciones estándares, con concentración
saturante, y temperatura de 37ºC. La unidad de actividad enzimática (U) se define como la cantidad
de enzima que cataliza la formación de 1 μM de producto por minuto. Las medidas de concentración
de enzima que en medios naturales son del orden de 10-8 a 10-12 M pueden también expresarse
como unidades enzimáticas por unidad de volumen (U/ml).
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La utilización del Sistema Internacional ha dado lugar a una unidad que se conoce con el nombre de
katal (kat) que es la cantidad de enzima que transforma un mol de sustrato por segundo, al ser una
unidad excesivamente grande no tiene una aplicación muy extendida.
En último término, y aunque no sea una unidad de medida directa, la actividad específica, se define
como el número de unidades de actividad enzimática que hay por miligramo de proteína (U)/ mg de
proteína, y sirve para cuantificar la pureza de una preparación enzimática.
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Isozimas
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Existen enzimas que catalizando la misma reacción presentan distintas cinéticas. Estas enzimas
n.
reciben el nombre de isozimas o isoenzimas (iso significa igual), y se caracterizan por presentar
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diferencias estructurales entre ellas que justifican su cinética variable.
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Estas variaciones en la conformación se traducen en modificaciones de funcionamiento, que hacen
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que cada isozima sea la más adecuada para la función de la célula a la que pertenece; así una misma
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enzima puede existir bajo formas de isoenzimas diferentes en el músculo, hígado, corazón o sistema
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nervioso, catalizando siempre la misma reacción.

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Un ejemplo lo constituye la lactato deshidrogenasa, enzima oligomérica formada por cuatro

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subunidades o cadenas peptídicas. Hay dos tipos de subunidades, la M (abundante en la enzima del
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músculo) y la H (abundante en la enzima cardíaca (heart, corazón en inglés)), que combinadas dan
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lugar a 5 variedades moleculares denominadas M4, M3H, M2H2, MH3 y H4. Estas variedades se
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distribuyen en diferentes tipos celulares, dependiendo de los requerimientos de velocidad para esta
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reacción que exista en dichas células, o incluso se reparten en distintos compartimentos celulares,
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existiendo una isozima en el citoplasma y otra en la mitocondria.

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Además de esta distribución regional comentada, puede existir también una distribución temporal,
encontrándose por ejemplo, isozimas que funcionan durante el periodo fetal y otras durante la vida
adulta. En todos los casos, la presencia de una isozima determinada, garantiza su perfecta idoneidad
para una célula o tejido determinado, en un tiempo también concreto.
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2. Descripción de enzimas analizados en diagnóstico clínico
Como ya sabemos, los enzimas son catalizadores biológicos, es decir, aceleran las reacciones
saliendo inalteradas al final. Además, son necesarias para efectuar las reacciones bioquímicas en el
ser humano en forma y tiempo.
Hay que tener en cuenta, que una reacción no se puede llevar a cabo sin la presencia de una enzima,
es decir, todas las reacciones metabólicas ya sean catabólicas o anabólicas necesitan de la presencia
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de las enzimas, por tanto, cualquier alteración a nivel enzimático desencadenarían múltiples efectos
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en diversos ciclos y rutas metabólicas, que por lo tanto, provocaría una reacción a nivel fisiológico,
n.
una patología que el daño que ésta provoca depende de la enzima que sea afectada puesto que estas
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poseen especificidad con su sustrato.
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Además, las enzimas están presentes en cantidades específicas a lo largo del cuerpo, si hay una
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alteración de la cantidad de enzimas en una parte específica, podría ser causa de un daño o
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trastorno metabólico, es decir, las enzimas se emplean para diagnosticar con más certeza una
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multidiversidad de Enfermedades.
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Por tanto, las enzimas son empleadas en los laboratorios clínicos y en las investigaciones biomédicas
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como reactivos biológicos para la determinación de analitos. Además, la medición de sus niveles de
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actividad en el suero u otras muestras biológicas constituyen herramientas eficaces en el diagnóstico

u
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y pronóstico de una enfermedad.

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Generalmente, la enzimología se aplica en el laboratorio clínico en la medición de los niveles

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enzimáticos, de las concentraciones de sustrato en plasma y tejidos de los individuos enfermos.

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Existen diferentes tipos de enzimas en el plasma sanguíneo, definido como un receptáculo pasivo
que recibe las enzimas procedentes de los tejidos y de los elementos formes (células) de la sangre.
Los cambios de los niveles de enzimas plasmáticas reflejan cambios que han tenido lugar en un
tejido u órgano específico.
Con respecto a su clasificación fisiológica, Buecher realiza una clasificación en tres grupos:
Enzimas plasmoespecíficas: son las enzimas que realizan su acción en el plasma sanguíneo.
Estas enzimas se caracterizan por ser sintetizadas en algunos tejidos y vertidas a la sangre de
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forma activa. La sangre se considera que es su lugar de acción, ya que en ella, se encuentra el
sustrato y su coenzima. Estas enzimas son sintetizadas por el hepatocito y son muy activas en
el plasma (a diferencia de otras que si están aumentadas indican daño). Cuando se realiza el
análisis interesa conocer los valores inferiores, porque una disminución de su actividad implica
una alteración en la síntesis. Además, teniendo en cuenta que la mayoría se producen en el
hígado, indicaría una alteración en la funcionalidad hepática.
Enzimas secretadas o exocitoenzimas: son enzimas que son secretadas por glándulas o
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tejidos muy especializados, siendo su lugar de acción alejado. Generalmente, dichas enzimas
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están en baja actividad, aunque aumentaría sus niveles en patologías como pancreatitis o
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patologías crónicas, donde la glándula está hipofuncionante, por lo que su actividad estaría
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disminuida en su lugar de acción.
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Enzimas celulares o endocitoenzimas: son las enzimas que tienen su lugar de acción dentro
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de la misma célula que la sintetiza. Se dividen en dos grupos:
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Ubicuas: son las que intervienen en el metabolismo celular.
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Organoespecíficas: son enzimas específicas de determinados órganos o tejidos que

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actúan en procesos metabólicos de ciertos tejidos.

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A continuación, se expone una tabla con algunas de las enzimas de mayor importancia diagnóstico
clínico:
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3. Metodología del análisis de enzimas en fluidos biológicos
La concentración de enzimas en suero es muy baja, sin embargo, dada su eleva capacidad catalítica,
es posible determinar su actividad y presuponer que ésta es proporcional a su concentración. Por
tanto, el estudio de las enzimas en el laboratorio se basa en la demostración “in vitro” de la actividad
catalítica.
Se puede determinar la actividad enzimática analizando:
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co
La aparición de algún producto.
n.
La desaparición del sustrato.
io
La variación de un cofactor o de algún componente de la reacción.
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En definitiva, la actividad de una enzima se mide mediante la determinación de la cantidad de
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sustrato formado por unidad de tiempo, en condiciones exactamente definidas (pH, Tª…) y
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estrictamente controladas.
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La actividad enzimática se expresa en Unidades Internacionales (UI) por unidad de volumen (UI/ml,
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UI/L…), siendo una UI la cantidad de enzima que transforma un micromol de sustrato por minuto en
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condiciones estándar, previamente establecidas.

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En una reacción enzimática podemos diferenciar tres fases: fase de retardo, fase lineal y fase de
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agotamiento de sustrato.
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Fase de retardo
Es la fase que tiene lugar inmediatamente después de mezclar los reactivos con la muestra
biológica. Se considera una fase de encuentro y acoplamiento de sustrato y enzima. Esta
fase tiene una duración variable (segundos a minutos).
Fase lineal
Es junto después de la fase de retardo, justo cuando la formación del producto permanece
constante, siendo la concentración de enzima de la muestra el único factor limitante.
Fase de agotamiento del sustrato
m
Se produce cuando a medida que va transcurriendo la reacción, llega el momento en que
co
el sustrato o el reactivo se va agotando y la velocidad de reacción disminuye hasta
n.
anularse.
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Para que una determinación enzimática sea válida es necesario realizarla en la fase lineal donde el
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único factor limitante es la concentración de la propia enzima y las condiciones de reacción son las
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óptimas (exceso de sustrato y otros reactivos…). Para ello se suele trabajar con una concentración
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de sustrato superior a la Km. Así, en un ensayo enzimático, el límite de linealidad es la actividad

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enzimática más alta que se puede medir con exactitud. Por encima de ese valor habrá que diluir el
sn
suero con solución salina y multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución.
.e
Valor numérico de la actividad enzimática

u al
Generalmente la actividad enzimática se evalúa mediante ensayos espectrofotométricos, por tanto

rt
necesitamos seguir la evolución de alguno de los elementos que participan en la reacción y que, por
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supuesto, deben absorber luz a una determinada longitud de onda así:

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Si el producto absorbe luz a una longitud de onda determinada podemos evaluar la aparición
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del producto analizando el incremento de absorbancia a dicha longitud de onda.
Si el sustrato absorbe luz a una longitud de onda determinada podemos evaluar la desaparición
del sustrato analizando la disminución de absorbancia a dicha longitud de onda.
De igual modo podemos analizar la variación de un cofactor o de algún componente de la
reacción.
De cualquiera de estas maneras se puede:
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Analizar cómo evoluciona la absorbancia, es decir la reacción, a lo largo del tiempo.
Obtener un valor de X/min.
En ocasiones, ninguno de los elementos que participan directamente en la reacción absorben luz, en
cuyo caso es necesario acoplar una segunda reacción en la que alguno de los reactivos o productos
presenten un máximo de absorción. Analizando esta segunda reacción podremos evaluar la actividad
enzimática de la primera.
m
Métodos analíticos
co
n.
Los métodos analíticos para determinar la actividad enzimática y por tanto el X/min pueden ser:
io
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Métodos a punto final
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En este método se ponen en contacto los reactivos (que aportan el sustrato) y la muestra biológica
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(que aporta el enzima) y tras un periodo de incubación que supere el periodo de retardo se mide la
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absorbancia.
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Al cabo de un tiempo establecido se detiene la reacción y se vuelve a medir la absorbancia. No es

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frecuente este tipo de técnica al presentar los inconvenientes de suponer que la reacción es lineal y
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la cinética de orden cero, para que la velocidad no dependa de la concentración de sustrato, lo que
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no ocurre siempre.
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Métodos cinéticos
Este método consiste en medir la absorbancia varías veces con intervalo de minutos. Permite
comprobar que realmente estás en la zona lineal de la curva, zona ideal para la determinación. Si se
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detectan desvíos de la linealidad se puede despreciar alguna de las medidas finales de la
absorbancia. En los protocolos comerciales se indican los pasos a seguir en cada determinación para
que el resultado sea fiable..
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Paso final
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En general, ya se debe conocer la fase que con la que debemos trabajar, el parámetro que
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obtenemos experimentalmente y como lo obtenemos, pero a continuación, es necesario realizar una
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conversión de X/min a UI/L.

sn
Para obtener el valor definitivo de la actividad enzimática, es necesario aplicar la siguiente formula:
.e
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Dónde:
pu
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e es el coeficiente de extinción molar de aquel compuesto cuya absorbancia estamos siguiendo

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en el espectrofotómetro.
b es el espesor de la cubeta.
VF es el volumen total de reacción.
VI es el volumen de muestra en el ensayo.
Teniendo en cuenta los parámetros constantes de la fórmula, como resultado final quedaría:
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4. Patrones de alteración enzimática
Las alteraciones por problemas enzimáticos son patologías o enfermedades humanas producto de
mutaciones naturales espontáneas a nivel de un gen o varios generes, lo que conlleva a un
inadecuado funcionamiento enzimático. Como resultado, se producen diferentes trastornos
irreversibles y graves en el ser humano.
Por tanto, se pueden considerar enfermedades hereditarias o error innato del Metabolismo. Son
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enfermedades hereditarias debidas a la ausencia, insuficiencia o alteración de una enzima o un
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grupo de estás.
n.
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A continuación, se describen algunos de los más conocidos, y que se producen con más frecuencia.
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Favismo
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El favismo es la deficiencia de la glucosa-6-fosfato de hidrogenasa. Se considera la deficiencia
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enzimática más común. Se caracteriza por la disminución de la actividad de la enzima glucosa-6-

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fosfato deshidrogenasa en los eritrocitos.

sn
Esta enfermedad es una enfermedad hereditaria ligada al gen X.

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No existe ningún tipo de tratamiento, aunque se recomienda evitar consumo de alimentos concretos.
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Si se controla la alimentación no afecta a la calidad de vida.

rt
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La G6PD cataliza la primera reacción en la vida de la pentosa fosfato, que en nuestro caso interesa
s
pu
al eritrocito para producir NAPDH, importante agente reductor.

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La deficiencia de este enzima reducir su producto, el NADPH, por tanto, el eritrocito pierde poder
antioxidante.
La hemoglobina se oxida y desnaturaliza, produciendo la destrucción de los eritrocitos y, por tanto,
se produce anemia hemolítica.
Su nombre se debe a que alimentos con compuestos altamente oxidantes como las habas, pueden
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desencadenar una crisis hemolítica. También puede activarse por fiebre, o medicamentos con
capacidad oxidante como la aspirina. Incluso, se puede dar con un ejercicio intenso y excesivo.
Los eritrocitos, carentes de maquinaria para crear poder reductor, se lisan. Además, se forman
cuerpos de Heinz, pequeñas inclusiones en la periferia de las células formados por globina
desnaturalizada al destruirse la hemoglobina.
Se considera que es muy abundante, porque la alta destrucción en el bazo de los eritrocitos
m
afectados, ofrece una resistencia real contra la malaria, como otras anemias.
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Gota
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La gota puede tener un origen poligénico. Se define como la acumulación de ácido úrico (sales de
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urato) en distintas partes del cuerpo.
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Constituye el 5% de los casos de artritis y la sufren entre el 1-2% de la población mundial.
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Se conoce como su principal causa la hiperuricemia y elevación de los niveles de ácido úrico en
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sangre. Los fallos metabólicos conducen a una sobreproducción de nucleótidos de purina por la vía
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de síntesis de novo. Como consecuencia, se depositan cristales insolubles de urato sólido en las
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articulaciones y túbulos renales.

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Lo que se produce es una superactividad de un enzima., la fosforribosilpirofostato sintetasa, PRPS,

rt
cataliza la síntesis de 5-fosforribosil-1-pirofostato, PRPP.

s vi
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Este enzima está formado por la unión de subunidades catalíticas y de proteínas asociadas a ella.
Mutaciones en la regulación causan que haya una hiperactivación del enzima, aumentando la
síntesis de PRPP y produciendo que se acelere la síntesis de purinas de novo. Además de gota y
nefropatías, los casos más graves pueden presentar añadidos síntomas neurológicos.
Galactosemia
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Es una enfermedad hereditaria causada por una deficiencia enzimática. Se produce cuando la
persona tiene una incapacidad para utilizar la galactosa, lo que provoca que se acumule en el
organismo.
Esta enfermedad produce lesiones en el hígado y en el sistema nervioso central.
La principal fuente de galactosa, es la lactosa, que normalmente es llevada al hígado para su
conversión en glucosa. El proceso se realiza en tres pasos, llamados ruta de Leloir, el fallo en
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cualquiera de los tres enzimas, es la causa de la galactosemia.
co
La galactosemia se divide en tres enfermedades diferentes correspondiendo a cada tipo de enzima.
n.
Tanto los síntomas como el tratamiento son diferentes en las tres.
io
ac
Galactosemia clásica: el enzima que produce fallos es la galactosa 1-fosfato uridiltransferasa.
El gen alterado es el gen GALT, en el comosoma 9.

m
or
af
Los síntomas que se producen son letargo, rechazo al alimento, manifestaciones

ec
tóxicas generales debido a la acumulación de galactosa, galactitol y galactosa 1-

sn
fostato en los tejidos. Además, puede producir el aumento de galactosa y galactitol

.e
en plasma.
al
El tratamiento se basa en eliminar toda la galactosa de la dieta, de por vida, e incluso

u
antes de confirmar el tratamiento. Es una enfermedad que es mortal sin tratamiento.

rt
vi
Déficit de galactoquinasa: el enzima afecta a la galactoquinasa, El gen afectado es el GALK1,

s
en los cromosomas 15 y 17.

pu
Los síntomas son el aumento de galactosa y galactitol en plasma y la acumulación de

m
ca
galactinol en cristalino (cataratas).
El tratamiento consiste en la eliminación de la leche, otras fuentes menores de
galactosa pueden ser soportables. En un diagnóstico tardío puede que provoque que
sea necesario operar las cataratas.
Déficit de UCP-galactosa 4-epimerasa: como su nombre indica la enzima que causa la
enfermedad es la UCP-galactosa 4-epimerasa. El gen responsable es el GALE, en el cromosoma
1.
23 / 29
Los síntomas son aumento de galactosa 1-fosfato y UCP-galactosa, sino resulta
asintomática los efectos son los mismos que la galactosemia clásica.
Generalmente no requiere tratamiento, solo un cierto control de la dieta. La dieta
restrictiva en galactosa solo es necesario en casos más graves.
Hiperlipoproteinemia
m
Esta enfermedad se produce cuando hay una presencia elevada de lipoproteínas en sangre.
co
La enfermedad más corriente es la hiperlipoproteinemia tipo 1, conocida como deficiencia de
n.
lipoproteinlipasa. El fallo, es que en dicha enzima, que cataliza la degradación de triglicéridos en
io
ac
lipoproteínas a dos ácidos grasos y una molécula de glicerol.
m
El problema es que no pueden metabolizar correctamente los lípidos, produciendo cantidades
or
anormales en sangre, sobre todo de quilomicrones. Dicho problema está relacionado con la
af
hipercolesterolemia.
ec
sn
Los síntomas son dolor abdominal debido a la pancreatitis, xantomas (acumulación de grasa bajo la
.e
piel), hepatoesplenomegalia (bazo e hígado).

al
Aunque el problema puede deberse a carencias del enzima, en este caso, puede haber dos causas
u
rt
adicionales:
s vi
Deficiencia de la apolipoproteína C-II, un cofactor requerido por el enzima para su

pu
actividad. La apolipoproteína C-II, es una proteína secretada al plasma donde forma parte de
m
las VLDL y los quilomicrones. Activa a la lipoproteinlipasa en capilares. Los fallos pueden
ca
deberse tanto a su carencia total (el habitual) o parcial en la VLDL, como mutada de tal forma
que no cumpla correctamente su función. Las manifestaciones clínicas son iguales a las de la
carencia de lipoproteinlipasa (LpL) pero de menor gravedad. Se trata con restricción de grasas
alimentarias e infusión de Apo C-OO en plasma congelado.
Presencia en el plasma de un inhibidor de la actividad enzimática. La apolipoproteína C-
III es un inhibidor de la LpL. Curiosamente, no solo no compiten ambos Apo por el enzima, sino
que Apo-II aumenta afinidad de ApoC-III por la LpL. Se conocen casos de personas con
24 / 29
hipertrigliceridemia con una LpL normal, pero con activdad inhibitoria en el plasma. La
ANGPTL3 muestra una inhibición potente de la actividad de la LpL. En presencia de células, la
ANGPTL3 promueve la escisión de LpL por parte de proproteínas convertasas (PCs), resultado
en su inactiación. La ANGPTL3 promueve que las PCs actúen contra la LpL, haciendo que
pueda ser internalizada por la célula por endocitosis o separa de la membrana.
m
co
n.
io
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af
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sn
.e
u al
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s vi
pu
m
ca
25 / 29
Glosario
Enzima: Catalizador de origen biológico y naturaleza proteica globular, que interviene en las
reacciones acelerando su velocidad y favoreciendo las transformaciones bioquímicas.
Catalizador: 1. Sustancia que hace más rápida o más lenta la velocidad de una reacción
química sin participar en ella 2. Persona o cosa que aviva y da empuje a algo, o que atrae y
m
agrupa fuerzas, ideas o sentimientos.
co
n.
Equivalencia: Relación de igualdad en el valor de dos cosas o entidades.
io
ac
m
Enfermedades: Sickness, illness, disease, infirmity;control de ___ -es contagiosas → ;.
or
af
Metabolismo: Proceso bioquímico y biológico que se produce continuamente en las células de

ec
los seres vivos.

sn
.e
u al
rt
s vi
pu
m
ca
26 / 29
Recuerda
Las enzimas son el grupo más variado y especializado de las proteínas, su función es actuar
como catalizadores, permitiendo que las reacciones que transcurren en los seres vivos puedan
desarrollarse a un ritmo adecuado.
Un catalizador es un compuesto que con su sola presencia aumenta la velocidad de la
reacción sin experimentar ninguna modificación.
m
Las enzimas plasmoespecíficas son las enzimas que realizan su acción en el plasma
co
sanguíneo. Estas enzimas se caracterizan por ser sintetizadas en algunos tejidos y vertidas a la
n.
sangre de forma activa.
io
Las enzimas secretadas o exocitoenzimas son enzimas que son secretadas por glándulas o
ac
tejidos muy especializados, siendo su lugar de acción alejado.
m
Las enzimas celulares o endocitoenzimas son las enzimas que tienen su lugar de acción
or
dentro de la misma célula que la sintetiza.
af
En una reacción enzimática podemos diferenciar tres fases: fase de retardo, fase lineal y fase
ec
de agotamiento de sustrato.
sn
El favismo es la deficiencia de la glucosa-6-fosfato de hidrogenasa. Se considera la deficiencia

.e
enzimática más común. Se caracteriza por la disminución de la actividad de la enzima

al
glucosa-6-fosfato deshidrogenasa en los eritrocitos.

u
rt
La gota puede tener un origen poligénico. Se define como la acumulación de ácido úrico (sales
vi
de urato) en distintas partes del cuerpo. Constituye el 5% de los casos de artritis y la sufren
s
entre el 1-2% de la población mundial.

pu
La galactosemia es una enfermedad hereditaria causada por una deficiencia enzimática. Se

m
produce cuando la persona tiene una incapacidad para utilizar la galactosa, lo que provoca que
ca
se acumule en el organismo.
La hiperlipoproteinemia se produce cuando hay una presencia elevada de lipoproteínas en
sangre.
27 / 29
Autoevaluación
1. ¿Qué clase de enzimas produce una rotura de encales covalentes por adición o
eliminación de grupos?
Liasas.
m
Hidrolasas.
co
n.
Isomerasas.
io
ac
m
2. La molécula o moléculas a modificar se sitúan en una región concreta de la
or
enzima denominada:
af
ec
Sustrato.
sn
.e
Centro activo.
u al
rt
Producto.
s vi
pu
3. La deshidrogenasa se considera una enzima:

m
ca
Específica del plasma.
Celular.
De secreción.
28 / 29
4. ¿Qué fase del análisis de enzimas tiene lugar inmediatamente después de

mezclar los reactivos con la muestra biológica?
Fase de retardo.
Fase lineal.
m
Fase de agotamiento del sustrato.
co
n.
io
5. Completa el espacio en blanco del siguiente enunciado: “_____________: es una
enfermedad hereditaria causada por una deficiencia enzimática.”
ac
m
or
Gota.
af
ec
Galactosemia.
sn
.e
Hiperlipoproteinemia.
u al
rt
s vi
pu
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ca
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Enzimología Diagnóstica

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[AFO007847] MF0371_3 Análisis Bioquímicos en Muestras Biológicas Humanas

[MOD007722] MF0371_3 Análisis Bioquímicos en Muestras Biológicas Humanas

La enzimología clínica es la aplicación del conocimiento de las enzimas (proteínas especializadas en

la catálisis de reacciones orgánicas) al diagnóstico, tratamiento y pronóstico de la enfermedad.

enzima determinada orienta sobre los tejidos más probablemente afectados.

Además, muchas enzimas muestras distintas formas moleculares (isoenzimas) características de

Estudiar las características, fisiología y cinética enzimática.

Describir las enzimas analizadas en diagnóstico clínico.

Aplicar los métodos de estudio enzimático.

1. Estudio enzimático: características, fisiología y cinética

desarrollarse a un ritmo adecuado.

La capacidad catalizadora de la Enzima depende de su conformación, ya que la supresión de alguno

de sus niveles de estructuración causa la pérdida de funcionamiento. Sus propiedades catalizadores

desarrollar su actividad solo su estructura aminoacídica y otras requieren un cofactor.

o menos compleja, que si se encuentra unida covalentemente se denomina grupo prostético, y si

establece uniones de naturaleza débil y reversible se denomina coenzima.

a su cofactor se denomina holoenzima y su parte exclusivamente proteica apoenzima.

medio adecuado para contrarrestar la lentitud en la realización del cambio.

desarrolla o no de forma espontánea, es el cambio en la energía libre de Gibbs, (ΔG) deducido de

aumenta), que mide la capacidad de un sistema para desarrollar trabajo.

Esquemáticamente, el desarrollo de una reacción enzimática sencilla consistiría en:

reacción. La presencia del catalizador provoca una disminución en la energía de activación

requerida, y de esta forma aumenta la velocidad con que se desarrolla la misma.

Un detalle importante a la hora de analizar la actividad enzimática, es que en las reacciones

catalizadas enzimáticamente, se incrementa la velocidad de la reacción; pero lo que no se modifica

es el equilibrio de la misma, que sigue las leyes termodinámicas independientemente de la presencia

o ausencia del Catalizador.

Unión de la enzima con el sustrato

La molécula o moléculas a modificar se sitúan en una región concreta de la enzima denominada

molécula: la especificidad y la acción catalizadora de la proteína.

especificidad de la enzima, y mayor también su capacidad de discriminar entre dos sustratos

les hacían encajar como una llave y su cerradura.

Facilitación del medio ambiente de la reacción

El centro activo de la enzima dispone de grupos funcionales que pueden modificar el

Introducción de tensión o distorsión sobre el sustrato

La complementariedad entre el centro activo y el sustrato provoca tensiones sobre la

molécula de sustrato favoreciendo la aparición, o desaparición de enlaces que facilita su

Existencia de grupos catalíticos específicos

La concentración de sustrato afecta de manera muy importante a la velocidad de la enzima. Cuando

se mantiene constante la concentración del enzima, se comprueba que al aumentar la concentración

de sustrato la velocidad de la enzima crece linealmente, disminuyendo el incremento paulatinamente

explica el comportamiento hiperbólico de la velocidad con respecto a la concentración de sustrato.

reversible, formando el complejo enzima-sustrato (ES), que se descompone en un segundo paso

la mayoría de la enzima estará libre y se verá favorecida la formación de ES, cuando se va

incrementando la S la velocidad aumenta linealmente. La E libre será la diferencia entre la E total o

la enzima se encuentre en forma de ES, llegándose a la saturación de la enzima por su sustrato,

situación responsable de la meseta que aparece en la gráfica.

Cuando la velocidad es la mitad de la velocidad máxima (v=Vmáx/2), se obtiene una Equivalencia de

sencilla de determinar que la relación de constantes de equilibrio, y permite expresar este

parámetro cinético en unidades de concentración.

La ecuación de Michaelis-Menten puede transformarse algebraicamente para obtener

transformaciones se denomina de “doble recíproco” o ecuación de Lineweaver-Burk, y sería:

Su representación gráfica será una línea recta.

Otra linearización de la ecuación de Michaelis es la obtenida por el método de Eadie-Hofstee, donde

en el eje de abscisas se representa v y en el de ordenadas v/S.

Los parámetros Vmáxima y Km caracterizan cinéticamente a las enzimas denominadas michaelianas,

(las enzimas no michaelianas son las denominadas reguladoras o alostéricas). La Km se relaciona

mucha información respecto a los pasos de la reacción, la velocidad o el mecanismo de la misma.