Informe Lab

Universidad Industrial de Santander
Facultad de Salud
Escuela de Microbiología
Microbiología General
2022
Informe N°1
Tipos de siembra: en superficie y profundidad.
Recuento de microorganismos a partir de muestras de suelo y leche cruda.
Autores:
María José Díaz Ávila - 2200667 Ximena Granados Muñoz - 2211738
Ángela Sofía Castrillón Soto - 2211261 Santiago Carreño Gutiérrez - 2210971
Xiomara Sofía Díaz Arenas - 2211152 Paula Camila Casas Carvajal - 2210976
Grupo: M2
Docente: Giovanna Rincón
1. Objetivos
La presente práctica de laboratorio estuvo compuesta en total de dos partes; y los
conocimientos, así como habilidades adquiridas fueron de acuerdo a los siguientes
objetivos:
● Aprender técnicas de siembra en superficie y profundidad a partir de una muestra

de suelo y realizar su respectivo recuento.
● Clasificar medios de cultivo con base en qué clase de microorganismo se aísla
teniendo en cuenta sus características.
● Distinguir entre cantidad y diversidad de microorganismos hallados en una
muestra de suelo a partir de sus manifestaciones en el medio de cultivo.
● Emplear correctamente la fórmula para hallar las unidades formadoras de colonia.
2. Introducción
Los métodos de cuantificación microbiana facilitan el realizar un análisis del

comportamiento microbiano, obteniendo valores numéricos los cuales permiten hacer el
estudio e identificación del potencial perjudicial y benéfico de un microorganismo. En la
práctica número siete del laboratorio de microbiología general, correspondiente a los
tipos de siembra: en superficie y profundidad y el recuento de microorganismos a partir
de muestras de suelo y leche cruda, se emplearon una serie de procedimientos, que
consistieron en: técnicas para preparar diluciones seriadas, métodos de siembra y pasos
para realizar el recuento de bacterias, hongos y levaduras. Todo lo anterior fue con el fin
de comprobar la presencia y crecimiento de dichos microorganismos con base en sus
manifestaciones en medios de cultivo escogidos para esta práctica, los cuales fueron King
B, Agar recuento y Rosa de Bengala. El objetivo de dicho laboratorio se basó en la
cuantificación de los microbios ya mencionados en muestras preparadas por el mismo
equipo de trabajo y la realización de los cálculos para determinar las unidades formadoras
de colonias (U.F.C.).
1
3. Metodología: Diagramas de Flujo
2
4. Resultados
Imagen 1 y 2. Muestras de suelo en medios de cultivo King B, Agar recuento y Rosa de

Bengala. (Autores, 2022)
5. Discusión de resultados
De acuerdo a los resultados obtenidos en el conteo de microorganismos del medio King B, se

pudo evidenciar que hubo gran diferencia en cuanto al número de colonias de las cajas que
3
contenían las diluciones 10-2 y 10-3, pues en esta última se obtuvo un número más reducido de
colonias del que se esperaba en comparación con la primera dilución; esto pudo deberse a
diferentes causas como un mal manejo de la micropipeta, en donde se tomó una cantidad de
muestra inferior a la requerida, equivocaciones al momento de realizar las siembras con técnicas
inapropiadas de rastrillado o falta de la calibración de la micropipeta. A partir de la dilución 10-4
hasta 10-7 se pudo observar que no hubo una gran variación, confirmando con esto los resultados
obtenidos en los cálculos del factor de dilución. También se evidenció presencia de colonias
inhibidas, lo cual se esperaba, puesto que con el medio de cultivo King B se buscaba identificar,
aislar y diferenciar especies de Pseudomonas, gracias a la presencia de sulfato de magnesio en
dicho agar, el cual permite la producción de fluoresceína (que fue observado en la cámara UV).
Además de ello, también está compuesto por tripteína y peptona de carne, las cuales aportan los
nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano; la glicerina favorece la producción de
pigmentos y la concentración de fosfato dipotásico inhibe la producción de piocianina, la cual
tiene como objetivo matar algunos microorganismos que compiten con la pseudomona y
piorrubina [1]. En el medio de cultivo se observaron algunas ramificaciones indicando la
presencia muy probablemente de bacilos, los cuales son microorganismos que se pueden
encontrar con normalidad en la tierra. La última dilución en la que se pudo observar presencia de
una colonia pequeña fue la de 10-5, después de dicha dilución no se identificaron
microorganismos pues a medida que el factor de conversión de las diluciones aumentaba, la
concentración de colonias era menor. Para el caso del Agar recuento, se observó una gran
presencia de microorganismos en comparación con los otros dos medios pues este permite
reproducir y determinar la cantidad total de gérmenes presentes en la muestra [2], lo que se
evidencia en el resultado de las U.F.C, el cual fue de 27,2 x 105 u.f.c/ml, valor mayor a 11,7 x
104 u.f.c/ml (King B), y 3,8 x 103 u.f.c/ml (Rosa de Bengala). Allí se observaron algunas
morfologías de colonias como lo fueron de forma radiada, puntiformes y tipo medusa. Se pudo
observar que en las cajas de Petri con la dilución 10-4 creció una colonia diferente a las demás, lo
que se tradujo en contaminación. Eso pudo ocurrir debido a que en el momento de realizar la
siembra muy probablemente la muestra o algún instrumento utilizado se contaminó con el medio
ambiente. Otras de las observaciones a destacar fue el olor característico que tenía el medio, el
cual probablemente era producido por algunas sustancias tóxicas o aminoácidos que segregan
algunas bacterias. Por último, en las primeras diluciones se observó la presencia de una cantidad
pequeña de lo que posiblemente eran levaduras por su apariencia cremosa. Finalmente, en el
cultivo de rosa de Bengala, se esperaba que existieran levaduras y hongos; esto debido a que en
su composición tiene elementos como carbono, nitrógeno, y también cuenta con otros
sustratos/minerales que aportan energía a los microorganismos que están en crecimiento [3]. Por
otra parte, la inhibición de crecimiento masivo de hongos y levaduras está a cargo del color de
rosa de bengala, el cual no solo cumple esta función sino también de teñir cada una de estas
colonias para facilitar el conteo. Respecto a lo observado se infiere que existían numerosas
colonias de levaduras y hongos (tanto miceliales como levaduriformes) los cuales se distinguían
por su tamaño, forma y color. Allí se destacaron las levaduras por ser colonias puntiformes,
blancas y con contextura cremosa; los hongos filamentosos de diferentes colores, los cuales
contaban con un tamaño considerable. Uno de ellos incluso se encontraba aislado de los demás,
probablemente porque producía alguna sustancia o toxina que impedía el crecimiento de los
demás microorganismos a su alrededor. Normalmente este tipo de cultivos debe dejarse de 2 a 3
4
días en un lugar aislado y oscuro, pero en este caso se guardó por mucho más tiempo del
establecido, ocasionando que los hongos alcanzaran un tamaño fuera de lo esperado.
6. Conclusiones
De manera general, se puede decir que la presente práctica fue de mucha importancia, ya que la
apropiación de las técnicas de siembras y el recuento de microorganismos viables en las mismas
es de mucha utilidad a la hora de evaluar y garantizar la calidad, seguridad sanitaria e inocuidad
de todas las prácticas laborales que se realicen. En el presente laboratorio hubo muchos errores al
momento de hacer las diluciones seriadas, ya que, al ver los cultivos, en algunos se apreciaban
algunas incongruencias con respecto al factor de dilución; lo cual pudo deberse a malos manejos
de las micropipetas, que no se agitó en vórtex al pasar a otra caja, técnicas incorrectas al hacer la
siembra (rastrillado), etc. A pesar de ello, pudieron crecer tanto bacterias como hongos y
levaduras en los respectivos agares, y fue posible hacer la cuantificación de estos
microorganismos. Con respecto al King B, el problema presente de los factores de dilución 10-2 y
10-3 se atribuyen a una falta de homogeneidad en la dilución 10-3, ya que en esta se presentaba un
valor muy bajo, llegando a ser similar al de la muestra 10-4; al igual que se pudo evidenciar la
aparición de Pseudomonas, dado que es un bacilo Gram negativo que comúnmente se encuentra
en el ambiente como el agua, llegando así a ser evidenciado su crecimiento en la muestra de
suelo estudiada. En relación al Agar recuento, aquí se pudieron apreciar mayor variedad de
microorganismos, ya que no se inhibía el crecimiento de ninguno. Y, con respecto al rosa de
Bengala, es posible decir que se identificaron una serie de hongos miceliales y levaduriformes
muy característicos. Algunos medios de cultivo con un valor por debajo de los necesarios para el
conteo fueron clasificados como “No entra dentro del rango”. Y una de las posibles razones de
esto es un defecto en la inoculación, que incluyen cosas como: pipetas descalibradas,
homogeneidad de la muestra, muestra concentrada en un solo punto etc. También se constató que
la falta de práctica al realizar el pipeteo, dilución y servido de la muestra en el medio pudo
ocasionar las grandes variaciones entre una dilución y otra las cuales se observan al momento de
realizar el conteo de U.F.C.
7. Bibliografía
[1] Britania Lab. (2021). Pseudomonas Agar F. Recuperado el 01 de febrero de 2022 de:
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_60707c42b028f.pdf
[2] DÖHLER. (s.f.). Plate Count Agar (agar de recuento en placa). Recuperado el 01 de febrero
de 2022 de: https://www.doehler.com/es/nuestro-portafolio/soluciones-integrales/soluciones-en-
servicios/medios-de-cultivo-para-la-deteccion-de-microbios/portafolio-de-productos-dmdr/agar-
de-recuento-de-bacterias.html#:%7E:text=Plate%20Count%20Agar%20(agar%20de
%20recuento%20en%20placa)&text=El%20agar%20de%20recuento%20en,industria%20de
%20alimentos%20y%20bebidas
5
[3] Novachem del Ecuador. (2022). Agar Rosa de Bengala. Recuperado el 01 de febrero de 2022
de: https://www.novachem.com.ec/producto/agar-rosa-de-bengala/

Informe Lab

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Informe Lab

Cargado por

Información del documento

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Informe Lab

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Universidad Industrial de Santander

● Aprender técnicas de siembra en superficie y profundidad a partir de una muestra

Los métodos de cuantificación microbiana facilitan el realizar un análisis del

Imagen 1 y 2. Muestras de suelo en medios de cultivo King B, Agar recuento y Rosa de

De acuerdo a los resultados obtenidos en el conteo de microorganismos del medio King B, se

También podría gustarte