Laboratorio 03

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO
Facultad de Ingeniería de Procesos

Escuela Profesional de Ingeniería Química
BIOQUÍMICA
Docente De Teoría: Aura Natalia Cantero Loaiza

Docente De Practicas: Mercedes Nuñez Arispe
ALUMNAS:
- Mejia Curahua Luisa Jhuliana 183391
- Sullo Huari Roxana 164356
CUSCO – PERU
PRACTICA Nº03
DETERMINACIÓN EXPERIMENTAL DEL PUNTO ISOELÉCTRICO (pKA y pKB)
DE UN AMINOACIDO A TRAVÉS DE UNA CURVA DE TITULACIÓN.
1- OBJETIVOS
- Determinar los pKs correspondientes de un aminoácido
2- FUNDAMENTO TEORICO
Aminoácidos
La hidrólisis de cada polipéptido genera un conjunto de aminoácidos, que se conoce como
composición de aminoácidos de la molécula. En la Figura 5.2 se muestran las estructuras de
los 20 aminoácidos que se encuentran con regularidad en las proteínas
Como su nombre indica los aminoácidos son compuestos que poseen un grupo amino (-NH2)
y un grupo ácido (carboxílico -COOH) en su estructura. Los aminoácidos son los precursores
de los péptidos y las proteínas, y en ellos el grupo amino y el grupo carboxilo, se encuentran
unidos al mismo átomo de carbono, conocido como carbono-α (α-aminoácidos).
Se clasifican en :
Am inoacidos del Gru p o I I
.. ... ..... . ...
( p o la re s n o io n iz a b le s )
.. ... ... . ... . ... ..... ... .... . ... ... . ... ... ... . ... ... .................................
COOH COOH COOH

I
H,N••••C=-H HON — C—CH H HON — C—CH—CHP
I
H H H OH
GIicocola-Gly Serina-Ser Treonin a-Trp
COOH COOH
I
H 2N —C —CH SH HON — C—CHP OH
H Cisteina—Sys Tii osina-Tyr
COOH COOH
H.N — C—CH HON — C—CH H -C
EH
Asparragina-Asn Glutani ina-GIn
Aminoâcidos del Grupo III

Aminoâcidos del Grupo III
(polares ionizables âcidos)
(polares ionizables bâsicos)
COOH
COOH
I
i
H 2 N — C — CH COOH HON — i h
H
Asparti co— Asp Hi sti dina-Hi s
COOH COOH
I I
HON — C- CH CH COOH HO N— C- CH CH CHP NH— C—NH
II
H H NH
Gluta mi co-GIu Arginina-Arg
COOH
HON — C— CH CH CH2CH NH2

H
Li sina-Lys
Los métodos de valoración, también llamados métodos volumétricos, incluyen un gran
número de poderosos procedimientos cuantitativos que se basan en medir la cantidad de un
reactivo de concentración conocida que es consumido por un analito durante una reacción
química o electroquímica. Las valoraciones volumétricas involucran la medición del volumen
de una disolución de concentración conocida que es necesario para reaccionar completamente
con el analito, el “reactivo” es una corriente eléctrica de magnitud conocida que consume al
analito. Para este tipo de valoración, se mide el tiempo requerido (y, por lo tanto, la carga
total) necesario para completar la reacción electroquímica.
Las valoraciones son ampliamente utilizadas en química analítica para determinar ácidos,
bases, agentes oxidantes, agentes reductores, iones metálicos, proteínas y muchas otras
especies químicas. Las valoraciones se basan en la reacción que se da entre un analito y un
reactivo estándar conocido como titulante.
Dicha reacción tiene una estequiometría conocida y reproducible. En una valoración se
determina el volumen o la masa de titulante necesaria para reaccionar completamente con el
analito, y este dato se utiliza posteriormente para calcular la cantidad de analito.
Los métodos de valoración se basan en la determinación de la cantidad de un reactivo de
concentración conocida que se necesita para reaccionar completamente con el analito. Este
reactivo puede ser una disolución estándar de un compuesto químico o una corriente eléctrica
de magnitud conocida.
En las valoraciones volumétricas la cantidad que se mide es el volumen de un reactivo

estándar.
Una disolución estándar (o titulante
estándar) es un reactivo de
concentración conocida que se
utiliza para llevar a cabo una
valoración volumétrica. La
valoración se lleva a cabo añadiendo
lentamente la disolución estándar
desde una bureta o algún otro
aparato dispensador de líquidos
hacia una disolución que contiene al
analito; se sigue este proceso hasta
que se pueda juzgar que la reacción
entre los dos se ha completado. El
volumen o masa de reactivo
necesario para completar la
valoración se determina a partir de la
diferencia entre la lectura inicial y la
lectura final. El proceso de la
valoración volumétrica se muestra.
Ecuación de Henderson-Hasselbalch
La ecuación de Henderson-Hasselbalch es una expresión utilizada en química para calcular
el p H de una disolución reguladora, o tampón, a partir del pK o el pK (obtenidos de la
a b
constante de disociación del ácido o de la constante de disociación de la base) y de las
concentraciones de equilibrio del ácido o base y de sus correspondientes base o ácido
conjugado, respectivamente.
donde:
• A es la sal ó base conjugado
• HA es el ácido o especie ácida
Cuando se titulan potenciométricamente los aminoácidos de esta naturaleza con soluciones de

hidróxido de sodio y ácido clorhídrico de concentración conocida, se forman curvas de
titulación expresados en términos de pH versus meq de ácido o base, y en el punto de esta
curva el aminoácido se comporta como una sal neutra para este pH, la carga neta sobre el
aminoácido es nulo o cero. El punto isoeléctrico (pI) vendría a ser igual a:
pI = ½(pKa + pKb)
Dónde:
Ka y Kb representa respectivamente las constantes de disociación del grupocarboxilo

y del grupo amino.
3- MATERIALES
- Vasos precipitados - Pipetas
- Buretas - pH-metro
4- REACTIVOS
- Solución de aminoácido 0.10 M
- NaOH 0.1 N
- HCl 0.1N
5- PROCEDIMIENTO
 Se calibra el pHmetro
 En un vaso de precipitados se mide 5mL de la solución del aminoacido y se mide el
pH incial
 Cargamos la bureta con NaOH 0.1 N y se titula la solución del aminoácido dejando
caer de 0.1 a 0.2 mL de NaOH, se mide el ph después de cada adicion de base
hasta que pH sea mayor a 11
Volumen (ml) pH
0.2 1.75
5 1.91
10 2.20
15 2.85
16 3.30
17 10.55
18 11.05
 Se encuentra el pKb correspondiendte al grupo amino
𝑏𝑎𝑠
𝑝𝑘𝑏 = 𝑝𝐻 − log ( 𝑒 )
𝑎𝑐𝑖𝑑
𝑜
Trabajamos con el ultimo pH y las concentración 0.1 del aminoácido y 0.1 del NaOH
0.1
𝑝𝑘𝑏 = 11.05 − log ()
0.1
𝑝𝑘𝑏 = 11.05
 Proceder de la misma manera para el grupo carboxilo titulando con una solución
de HCl 0.1 N hasta pH de 1.5.
Volumen (ml) pH
0.01 1.00
0.01 1.50
 Se encuentra el pKa correspondiendte al grupo carboxilo
𝑏𝑎𝑠𝑒
𝑝𝑘𝑎 = 𝑝𝐻 − log (𝑎𝑐𝑖𝑑𝑜)
Trabajamos con el ultimo pH y las concentración 0.1 del aminoácido y 0.1 del HCl
0.1
𝑝𝑘𝑎 = 1.5 − log ()
0.1
𝑝𝑘𝑎 = 1.5
6- CUESTIONARIO
1.- Cual es el significado biológico que le puedas dar al pKa y pKb.
La importancia del pH para equilibrar el organismo
El estrés, la falta de ejercicio y los malos hábitos alimentarios hacen bajar el pH

de la sangre y pueden dar lugar a enfermedades. Mantener un pH por encima de
7 o alcalino es la mejor garantía de salud
El químico Linus Pauling, ganador de dos premios Nobel, afirmaba que mantener
el cuerpo con un pH alcalino es clave para disfrutar de una buena salud.
Las células del cuerpo necesitan un pH ligeramente alcalino (entre 7 y 7,4) para
funcionar adecuadamente.
De hecho, un pH bajo o ácido es una de las causas más importantes de muchas

enfermedades, como el cáncer, por ejemplo, ya que se ha detectado que el 85%
de los pacientes con cáncer tienen los niveles de pH entre 5 y 6.
2.- Que pasaría si se agrega de 5mL en 5mL de acido o de base
Si titulamos un aminoácido con acido el pH aumentaría acorde a esta adición hasta llegar
al punto de equivalencia y seguir variando hasta un pH acido, el caso seria el mismo si
tituláramos con una base el pH varia al principio hasta el punto de equivalencia y luego
seria muy cercano a una base.
3. Realiza el cálculo del pI de la alanina indicando las estructuras posibles que presente
para cada ionización.
4. Realiza el cálculo del pI del acido aspártico indicando las estructuras posibles
que presente para cada ionización.
pI=2.97
5. De acuerdo a los datos experimentales en la tabla grafique las curva de titulación del
aminoácido y halle el pka y pKb experimental.
pH pKa pH pKb
6 6 6 6
5 5 8 8
4 4 9 9
3 3 9.6 9.6
2.5 2.5 9.05 9.05
2.4 2.4 9.7 9.7
2.35 2.35 9 9
2.3 2.3 8 8
2.1 2.1 8.54375
2 2
pI= 5.854375
3.165
6
5
4
pKa2 = 3
3
2.5
2.4
2.3
5
2.3
2.1 pKa1 = 2.1
H+
9.7
pKb2 = 9.7
9.6
9.05
pKb1 = 6
6
7- BIBLIOGRAFIA
- Chang R. (2007). ‘’Quimica’’. Ed. 9na

- F. James Holler , Stanley R. Crouch (2014). ‘’Fundamentos de Quimica Analitica’’.
9na Edicion

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- Sullo Huari Roxana 164356

COOH COOH COOH

Aminoâcidos del Grupo III

HON — C— CH CH CH2CH NH2

En las valoraciones volumétricas la cantidad que se mide es el volumen de un reactivo

Cuando se titulan potenciométricamente los aminoácidos de esta naturaleza con soluciones de

Ka y Kb representa respectivamente las constantes de disociación del grupocarboxilo

- Vasos precipitados - Pipetas

 Se encuentra el pKb correspondiendte al grupo amino

 Se encuentra el pKa correspondiendte al grupo carboxilo

1.- Cual es el significado biológico que le puedas dar al pKa y pKb.

La importancia del pH para equilibrar el organismo

El estrés, la falta de ejercicio y los malos hábitos alimentarios hacen bajar el pH

De hecho, un pH bajo o ácido es una de las causas más importantes de muchas

2.- Que pasaría si se agrega de 5mL en 5mL de acido o de base

- Chang R. (2007). ‘’Quimica’’. Ed. 9na

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